Développement et évaluation d'une méthode de détection directe de l'hélicobacte pylori provenant d'échantillons de selles à l'aide de la réaction en chaîne polymérase (PCR)

Udo Kronberg

Dr. med. Développement et évaluation d'une méthode de détection directe de l'hélicobacter pylori à partir d'échantillons de selles à l'aide de la réaction en chaîne de polymérase (PCR) né le 24 octobre 1970 au stade de maturation le 9 mai 1990 à Ettlingen cours de la faculté de médecine du WS 1991/92 au SS 1998 Physique du 30 août 1993 étude clinique à Heidelberg

Ce traitement doit être effectué avec une réaction en chaîne à la polymérase provenant d' échantillons de selles de patients infectés.

Après avoir sélectionné des paires de primaires sensibles (le protocole final utilise des primaires destinés au gène 16S-rRNA d'Helicobacter pylori), il a été difficile de trouver une méthode appropriée pour préparer et purifier l'ADN bactérien de la suspension de la chaise de manière à éliminer suffisamment les inhibiteurs du PCR abondants dans la suspension de la chaise.

Après de nombreuses tentatives de modification de la méthode avec d'autres

Les procédures de nettoyage ont révélé le protocole final.

Pré-purification de la suspension de chaise par centrifugation à basse vitesse pour éliminer les

Les matières solvantes qui suivent l'enrichissement des bactéries à l'interphase de la

Deux phases de centrifugation permettant aux germes de bien se séparer du reste de la suspension de la chaise

la préparation de l'ADN à l'aide d'un ensemble de colonnes spinaux commerciaux (QIAamp)

"Blood Kit", Fa. QIAGEN, Hilden) avec ensuite le nettoyage de l'ADN avec CTAB. Cette méthode permet, dans le cas le plus avantageux, de détecter 10 bactéries dans 100 mg de tissu, ce qui est considéré comme satisfaisant. Plus loin, la nouvelle méthode a été évaluée par rapport à d'autres méthodes de diagnostic telles que l'examen des biopsies gastriques avec culture et PCR, ainsi que l'examen serologique du patient sur les anticorps de l'hélicobacte pylori. Des échantillons de 41 patients ont été examinés, dont 17 ont été positifs à l'hélicobacte pylori.