Fluorescenza in situ esperimenti di ibridazione su fibre di DNA estese
Giorgio Kraus
Dr.sc.hum. Fluorescenza in situ esperimenti di ibridazione su fibre di DNA estese Nato il 21 febbraio 1968 ad Aschaffenburg Prova di maturità il 26 giugno 1987 ad Aschaffenburg Studi della facoltà di biologia dal WS 1987 al WS 1993 Diplomasso il 12 marzo 1990 all'Università di Würzburg Diplomasso il 18 novembre 1993 all'Università di Würzburg Diplomasso il 18 novembre 1993:
Combinazione molecolare
la tecnologia FISH di alta risoluzione ha consentito una riproducibilità
Elongamento e orientamento parallelo delle molecole di DNA cosmid clonate e linearizzate su
L'orientamento delle molecole e la loro completezza hanno permesso
per due colori
in situ
Ibridazione di DNA vettoriale e di DNA cosmidico complesso
Un sistema di modello per un'ibridazione genomica comparativa ad alta risoluzione su fibre di DNA compatte è stato stabilito.In due serie di esperimenti sono state eseguite ibridazioni con DNA cosmid di marcatura hapten-diverse in vari rapporti di quantità sulle fibre cosmid compatte identiche.
Si è rilevato una correlazione nettamente lineare tra il rapporto di tocco utilizzato e
Il tasso di fluorescenza misurato, basato sull'elaborazione di un totale di 651
L'amplificazione di MYCN nella cellula neuroblastoma Kelly nel cosmide MYCN non è stata possibile a causa della bassa rappresentanza di MYCN nel DNA di riferimento.
Per aumentare la rappresentazione delle sequenze di copia singola, sono stati utilizzati sistemi di supporto PCR.
Affinità cromatografia sequenze ripetitive di DNA genomico o PAC
Tensione a distanza. Fluorescenza
in situ
Ibridazioni su cromosomi metafase hanno permesso di
L'obiettivo è quello di ridurre il numero di persone che si trovano in una clinica o in una clinica.
La realizzazione di esperimenti quantitativi di pesca senza condizioni di soppressione ha permesso di
L'analisi CGH di una cellula neuroblastoma con doppio
DNA tumorale e di riferimento di sequenza ripetuta che non sono stati utilizzati senza Cot-1
Il DNA è stato ibridato, consentendo il rilevamento di un terzo degli squilibri che sono stati trovati con DNA neuroblastomico non depletato in condizioni di soppressione. La possibilità di utilizzare DNA PAC depletato come DNA obiettivo in un esperimento matrix-CGH è stata dimostrata dalla rilevazione di una nota amplificazione di circa 20 volte c-myc nella cellula promileotica HL-60. Un aumento del coefficiente di fluorescenza rispetto all'esperimento con DNA non depletato come DNA obiettivo non è stato raggiunto.
Per la determinazione dell'amplificazione MYCN nella cellula neuroblastoma Kelly
Sono stati presentati due cosmidi con marcatura di aceto diversa [pNb101(testcosmid) /
cAW7(referenza cosmide)] contemporaneamente su genomiche tradizionalmente preparate
L'ADN di neuroblastoma o di riferimento genomico è ibrido.
La misurazione della lunghezza delle catene di segnale di ibridazione ha determinato l'amplificazione a 101 volte. Questo risultato è in buona corrispondenza con l'amplificazione autoradiografica stimata a 100 volte.
I metodi CGH ad alta risoluzione (Fibre-CGH/Matrix-CGH) presentano due vantaggi:
che consentiranno di utilizzare in futuro il metodo di ibridazione genomica comparativa
una routine applicazione nella tumorogenetica e nella diagnosi clinica
- di accedere all'automazione della procedura;
L'obiettivo è quello di eliminare le carotipizzazioni che richiedono lavoro.
Il DNA del campione può essere riprodotto attraverso l'ibridazione.
a cavallo di cavallo
DNA del test genomico in aggiunta al
La dimensione delle delezioni e delle amplificazioni nell'area kb è fisicamente mappata e
L'amplificazione può essere determinata con un'amplificatrice ad alta risoluzione adeguata.
Il sistema di analisi genomica è disponibile, la cui sensibilità aumenta con l'aumento della
I protocolli di deplezione saranno ulteriormente aumentati.
La maggior parte delle aberrazioni numeriche e strutturali sono catturate con la tecnica FISH
In questo modo, in combinazione con le linee di espressione e di
I sistemi di analisi di sequenza contribuiscono essenzialmente allo studio della biologia del genoma.