Über die Bindung an Heteroduplex-Desoxyribonucleic Acid durch zwei transkriptionelle Repressorproteine, das Krüppel-associated box (KRAB) Zinkfinger-Protein Kid-1 und das Wilms-Tumor-Protein WT-1

Bernd Elser

Dr.med. Über die Bindung an Heteroduplex-Desoxyribonukleinsäure durch zwei transkriptionelle Repressorproteine, das Krüppel-assoziierte Box (KRAB) -Zinkfingerprotein Kid-1 und das Wilms-Tumor-Protein WT-1 geboren am 22.10.1971 in Ludwigshafen Reifeprüfung am 29.5.1991 in Neustadt Studiengang der Fakultät für Humanmedizin von SS 1992 bis SS 1998 Physikalische Anatomie am 12.4.1994 an der Universität Heidelberg Klinische Studie in Heidelberg Praxisjahr in Heidelberg Examen am 4.11.1998 an der Universität Heidelberg Promotion: DNA-Proteomie und Zellbiologie Hundertjährige Doktor: Prof. Dr. W.

Ich habe nun die Bindung des Zinkfinger-Proteins Kid-1 zu einem Nieren-spezifischen

Transkriptionsfaktor mit KRAB-Domain, um die Struktur eines Heteroduplexes darzustellen.

PCR-Amplifikations- und Gelelektrophorese-gestützte Methode, die separat für Einzelstränge verwendet wird

und doppelte Oligonukleotide durchgeführt wurden, ergab keine Bindungsstelle für Kid-1. Kid-1 erkannte jedoch Heteroduplikate, die aus freiwilligen ausgewählten Oligonukleotiden bestehen, bei denen die 5 und 3 Enden komplementär sind, während die Nukleotide in der Mitte nicht komplementär sind. Kid-1 erkannte Heteroduplikate mit größeren nicht-komplementären Anteilen besser als Heteroduplikate mit kleineren nicht-komplementären Anteilen.

Da eine der Heteroduplex-ähnliche Struktur bei der Transkription von DNA auftritt, wenn die beiden DNA-Streifen geschmolzen werden, könnte ein potenzieller Repressionsmechanismus von Kid-1 und anderen Zinkfingerproteinen mit KRAB-Domänen wie folgt aussehen: Nach der Erkennung eines Heteroduplexes rekrutiert Kid-1 mit Hilfe von KRIP-1, einem KRAB-interagierenden Protein, einem nicht-histonischen Chromosomalprotein, das durch Bildung kondensierter Heterochromstrukturen zu einer Transkription-Repression führt. Es ist jedoch fraglich, ob Kid-1 in vivo eine solche Transkription-Blase von DNA erkennt, da durch den Initiationskomplex des RNA-Polymers II die Größe der zugänglichen und geschmolzenen Heteroplazen von Kid-1 eingeschränkt wird und nur kleinere Heteroplazen an Kid-1 gebunden werden.

Obwohl das POU-Domain-Protein Oct-6 und das ETS-Domain-Protein Ets-1 nicht

Eine starke Verknüpfung mit heteroduplexem DNA konnte sowohl für WT-1-KTS als auch für WT-1+KTS

WT-1-KTS bindet an Heteroduplex mit

Nach der Beobachtung der beiden WT-1-Isoformen werden die beiden WT-1-Isoformen mit einer Stärke ähnlich wie die Egr-1-Konsenssequenz verwendet.

Es gibt bereits mehrere Sequenz-abhängige Bindungsplätze, die hier charakterisiert wurden.

Zusätzlich wird die Sequenzunabhängige Bindung an die Struktur eines Heteroduplexes dargestellt

Da die WT-1-Isoformen eine Kolokalisierung mit Transkriptionsfaktoren und fragwürdig

Eine interessante Hypothese ist sicherlich, daß WT-1 nach

Es ist jedoch offensichtlich, ob die beim Transkription geschmolzenen DNA groß und zugänglich genug ist und ob es nicht nur eine räumliche Kolokalisierung von WT-1 mit Transkription- und eventuell auch Splicingfaktoren gibt, sondern auch eine funktionelle Interaktion.

Damit konnte die Struktur eines Heteroduplexs als neues Motiv für DNA-Bindungen

Die Struktur eines Heteroduplexes ist jedoch nicht nur der erste DNA-Bindungsort für Zinkfingerproteine mit KRAB-Domänen, sondern auch ein Bindungsmotiv, das von anderen Zinkfingerproteinen erkannt wird.