Relationship between respiration and Electron Transfer System (ETS) in zooplankton

Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T anspo Sys em (ETS) in zooplank on Alumna Amelia Iguani a López López Cu so 2014/2015 Tu o San iago He nández León T abajo de Fin de G ado pa a ob ene el í ulo de G aduada en Ciencias del Ma Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 1 Facul ad de Ciencias del Ma T abajo de Fin de Tí ulo G ado en Ciencias del Ma Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on Es e abajo se p esen a po la alumna Amelia Iguani a López López pa a la ob ención del í ulo de G aduada en Ciencias del Ma po la Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia, y es di igido po el D D. San iago He nández León del Ins i u o de Oceanog a ía y Cambio Global (IOCAG). Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia En Las Palmas a 30 de No iemb e de 2015 La alumna Fdo.: Amelia Iguani a López López El Di ec o Fdo.: Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 2 Index Abs ac 3 In oduc ion 4 Ma e ial and Me hods 5 Resul s 7 Discussion 8 Conclusions 10 Acknowledgmen s 10 Re e ences 11 Pe sonal assessmen s 22 Tables Index I: A e age o alues o espi a ion, ETS, R/ETS, and GF. 14 II: Expe imen al condi ions, including da e, densi y o ood, empe a u e o acclima ion and incuba ion. 15 III: The espi a ion a es ob ained by o he au ho s and ou ange o espi a ion a es es ima ed in his s udy o compa ison. 16 IV: A e age alues o espi a ion a es and GF o expe imen s pe o med wi h copepods. 17 Figu es Index 1: Time-cou se o gu luo escence (ng pigmen s·ind-1) and s anda d e o o he di e en expe imen s. 18 2: Time-cou se o espi a ion a es (µlO2·ind-1·h-1) and ETS ac i i y (µlO2·ind-1·h-1) o each expe imen . 19 3: Time-cou se o he espi a ion/ETS a io and s anda d e o o he di e en expe imen s. 20 4: Oxygen consump ion and gu luo escence o copepods in he 100-200 µm (A and C) and 500-1000 µm (B and D) size ac ions 21 Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 3 Abs ac Respi a ion o zooplank onic o ganisms is an signi ican ac ion o he global ca bon cycle. Howe e , i es ima ion in o de o ob ain he da a equi ed in oceanog aphy is s ill a p oblem. In his wo k, we s udied espi a ion a es in labo a o y and ield expe imen s. Labo a o y expe imen s using Daphnia spp. showed a signi ican dec ease o espi a ion a es du ing s a a ion. In addi ion, we measu ed he gu luo escence and enzyma ic ac i i y (elec on ans e sys em, ETS). The o me did no show he expec ed dec ease p obably due o he olume o he incuba o s. The ela ionship be ween espi a ion and ETS p esen ed he classical a iabili y anging be ween 0.5 and 1 as obse ed in p e ious wo ks. Copepod espi a ion a es we e measu ed du ing RAPROCAN 1504 c uise a ound he Cana y Islands. These o ganisms showed a high a iabili y in oxygen consump ion du ing incuba ion. Ou s udy sugges s ha du a ion expe imen s o calib a e enzyme ac i i ies o ob ain physiological a es should be conside ed. We sugges he use o expe imen s co e ing he me abolic scope o o ganisms unde s udy. Taking his in o conside a ion, ou alues o he ela ionship be ween espi a ion and ETS ac i i y is close o a alue o 1. Lowe a ios could unde es ima e espi a ion in he ocean. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 4 In oduc ion The ocean plays an impo an ole in he global ca bon cycle. A mosphe ic ca bon dioxide en e s in o he na u al cycle o oceans and emains he e o a a iable pe iod o ime. The pho osyn he ic o ganisms s a he biological pump cap u ing he ca bon dioxide and p oducing o ganic ma e and oxygen. This mechanism anspo ca bon dioxide om he ocean su ace o he deep laye s. He e o ophic o ganisms, o consume s, ake he o ganic ma e om o he o ganisms and use i as uel o hei me abolism. These o ganisms espi e he me abolized ca bon and e u n ca bon dioxide o he en i onmen . Unde s anding he mechanisms linked o espi a ion in he ocean a e a undamen al s ep o s udy he ca bon lux h ough he di e en communi ies. The e o e, he knowledge o oxygen consump ion is essen ial o he s udy o he in ol ed p ocesses in p oduc ion and ene gy ans e in he ocean due o he di e en componen s o ma ine ecosys ems. The me hods used o es ima e espi a ion in he e o ophic o ganisms, specially in zooplank onic o ganisms, a e based on he measu emen o oxygen consump ion. The balance me hod (Omo i and Ikeda, 1984) is no mally used and consis in he incuba ion o zooplank onic o ganisms in glass bo les illed wi h il e ed seawa e o se e al hou s. Du ing incuba ion, dissol ed oxygen in expe imen al bo les (wi h o ganisms) dec eases espec o con ol bo les (wi hou o ganisms). The di e ence be ween bo h is he o ganisms espi a ion. This echnique needs an in ensi e wo k on boa d oceanog aphic essels and consume ime, limi ing he numbe o es ima ions. Because o his, Cu l and Sandbe g (1961) and Packa d (1969) p oposed he measu emen o he enzyma ic ac i i ies esponsible o cellula espi a ion as an index o be used in oceanog aphy. The measu emen o he elec on ans e sys em ac i i y (ETS) was de eloped by Packa d (1975) and i is also ou inely used in oceanog aphy. The ETS is he las enzyma ic complex which akes pa in he p oduc ion o ATP and uses he oxygen as he las elec on accep o . Howe e , he ela ionship be ween espi a ion and ETS p esen s an impo an a iabili y. He nández-León and Gómez (1996) obse ed ha he Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 5 ela ionship be ween espi a ion and ETS ac i i y p esen ed he classic a iabili y be ween 0.5 and 1 ela ed o he p e ious eeding his o y. These au ho s also ound ha du ing he win e bloom ( ela i ely high p ima y p oduc ion) he R/ETS a io was a ound 1, while ou o he bloom, in a mo e oligo ophic si ua ion, he alues we e nea 0.5. Besides, his a iabili y could also be explained because o he me hology used o assess espi a ion a es using he classical balance me hod and he enzyma ic esponse a di e en ime in e als. Long o sho incuba ions could modi y his a io as ETS ac i i y is mo e conse a i e han espi a ion. In he p esen wo k, we s udied espi a ion in he cladoce an Daphnia spp. and copepods, i s ela ionship wi h he gu luo escence (GF) and he enzyma ic ac i i y o he ETS. The main goal was o s udy he a iabili y in espi a ion a e and he enzyme ac i i y in expe imen s o sho du a ion (8 hou s). Speci ically, we ocused in he ela ionship be ween high espi a ion a es du ing he i s hou s o incuba ion and i s enzyma ic esponse. Ma e ial and me hods Labo a o y expe imen s The cladoce ans used o expe imen s we e incuba ed o 12 hou s in a beake o 2 li e s a a empe a u e o 17.8ºC ± 0.1 in sa u a ion o ood wi h he algae Ankis odesmus. I s densi y was coun ed wi h a Thoma de ice in an in e ed mic oscope, aking an aliquo o 10 µl o he same cul u e (Table I). A e he eeding pe iod, 15 o ganisms we e ozen in liquid ni ogen in o de o ob ain he ime ze o in each expe imen o enzyme ac i i y. To measu e espi a ion, he o ganisms p e iously incuba ed in ood sa u a ion we e incuba ed in il e ed wa e (0.2 µm) in ials o 5 ml equipped wi h op odes. Incuba ions we e ca ied ou in iplica e o each incuba ion ime, in he da k, and a 18ºC. The incuba ion las ed o app oxima ely 8 hou s. A di e en in e als, samples we e ozen in liquid ni ogen o la e analysis o ETS and gu luo escence (GF). To ob ain he alues o espi a ion we designed an applica ion using he s a is ical so wa e R. The alues o he i s hal an hou we e disca ded as i is he ime equi ed o s abiliza ion o oxygen inside he incuba o s. Then, he slopes o expe imen and con ol bo les we e sub ac ed in o de o ob ain espi a ion e e y 0.5 h. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 6 ETS analyses we e ca ied ou ollowing he me hod p oposed by Packa d (1971). The homogena e was cen i uged a 4000 pm and 0ºC du ing 10 minu es. An aliquo o he homogena e was used o he incuba ion a 18ºC, in da kness, in he p esence o NADH, NADPH, succina e (SS) and INT as an a i icial elec on accep o . A e 20 minu es, he incuba ion was s opped by a quench solu ion. The ETS ac i i y was es ima ed spec opho ome ically a 490 nm wi h a u bidi y base-line o 750 nm. Biomass o each size ac ion was de e mined as p o ein con en using he me hod o Low y e al. (1951) o he me hod o Pe e son (1983) o samples wi h e y low p o ein con en and using bo ine se um albumine (BSA) as s anda ds. Fo he measu emen o luo escence, we used he me hod p oposed by Nemo o (1968) and Mack and Boh e (1976). An aliquo o he homogena e used o ETS measu emen was in oduced in a es ube wi h 10 ml o 90% ace one and kep a -20ºC du ing 24 hou s. Pigmen s we e measu ed using a Tu ne Design luo ome e , p e iously calib a ed wi h pu e chlo ophyll (Yen sch and Menzel, 1963), be o e and a e acidi ica ion wi h 10% HCl. Pigmen s we e calcula ed using he equa ions gi en by S ickland and Pa son (1972) sligh ly modi ied o: Chlo ophyll a = k· (F0-Fa) · Indi idual-1 Pheopigmen s = k· (R· Fa-F0) · Indi idual-1 whe e k is he ins umen calib a ion cons an , F0 and Fa a e he luo escence eadings be o e and a e acidi ica ion and R is he acidi ica ion coe icien . The o e all concen a ion o pigmen s e e s o chlo ophyll a and pheopigmen s exp essed as ng pigmen s·ind-1. Field expe imen s Copepods we e collec ed in six oceanog aphic s a ions on boa d he esea ch essel “Ángeles Al a iño” a ound he Cana y Islands om 6 h o 16 h Ap il, 2015. Cap u e o o ganisms was ca ied ou using a double WP-2 ne equipped wi h a 100 µm mesh ne , om 200 m dep h o he su ace a abou 40 m·minu e-1. Th ee expe imen s we e ca ied ou wi h o ganisms o sizes be ween 100 and 200 µm and h ee o he wi h copepods be ween 500 and 1000 µm. The o ganisms we e picked up wi h a Pas eu pipe e and Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 7 we e incuba ed o iplica e in he da k a 18ºC o a o al o 4 hou s on seawa e il e ed h ough 0.2 µm. To measu e espi a ion, was used a p ecision pola og aphic oxygen elec ode (VWR DO210). Once expe imen s we e comple ed he di e ence be ween he oxygen con en in he con ol and expe imen al bo les was measu ed in o de o ob ain he espi a ion a e. These da a we e s anda dized o he p o ein weigh o incuba ed o ganisms. Simila o he expe imen s ca ied ou in he labo a o y we g aphed he esul s using he s a is ical p og am STATISTICA 7. Resul s Labo a o y expe imen s Pigmen con en in he di e en expe imen s dec eased du ing incuba ion (Fig. 1). Howe e , his dec ease was weak and a iable (see Fig. 1b and d), and, in gene al, we did no obse e a clea dec ease as expec ed (Fig. 1 ). By opposi e, espi a ion a es showed a signi ican dec ease du ing he i s ou hou s o he expe imen . The ini ial oxygen consump ion anged be ween 0.9 and 1.4 µlO2·ind-1·h-1 dec easing in all expe imen s eaching alues o 0.27±0.01, µlO2·ind-1·h-1 a e 3-4 h (Table II, Fig. 2). The e o e, he ini ial espi a ion was be ween 3 and 5 imes he s anda d a es ob ained a e ou hou s. The elec on ans e sys em ac i i y (ETS) did no show high alues a he beginning o he expe imen s as obse ed o espi a ion (Fig. 2). This ac i i y showed alues in he ange 0.2-0.5 µl·O2·ind-1·h-1, being he a e age in he o de o 0.36±0.04 (see Table II) As expec ed om espi a ion alues, he a io R/ETS showed a clea decline om he beginning o incuba ion s abilizing a e he i s ou hou s (Fig. 3). The alues o he a io dec eased o an a e age alue o 0.29±0.05 (see able II) a e he i s ou hou s o incuba ion. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 8 Field expe imen s Small o ganisms (100-200 µm) showed ela i ely high alues o gu pigmen con en (mean alue o 197.2±106.2 ng pigmen s/mg p o ein, able III, Fig. 4a), while la ge copepods (500-1000 µm) showed lowe a e age alues (93.9±38.1 ng pigmen s/mg o p o ein, able III, Fig. 4b). Small o ganisms showed a high a iabili y in he gu con en du ing incuba ion. Howe e , he 500-1000 µm o ganisms showed an unexpec ed inc ease. (Fig. 4). Respi a ion in bo h size classes showed a dec easing espi a ion du ing incuba ion as expec ed. A e age alues o he 100-200 µm ac ion was 0.58±0.28 µlO2·mg p o ein·h-1 ( able III, Fig. 4C), while o he la ge animals (500-1000 µm) was lowe as also expec ed (0.31±0.06 µlO2·mg p o ein·h-1, able III, Fig. 4d). Discussion Respi a ion a es in ou expe imen s wi h cladoce ans dec eased du ing incuba ion simila o o he s udies (Ni al e al., 1974; Mayzaud, 1976; Skjoldal e al., 1984; Blažka e al., 1982; Abou, 1984; Ikeda, 1977; Tsuda, 1994; Tho , 2003). In he ield expe imen s, copepods did no show his p onounced dec ease p obably due o he ac ha hey we e no p e iously acclima ed in ood sa u a ion. The esul s in cladoce ans is in ag eemen wi h au ho s who a gue ha he dec ease in me abolic a es a e he s a o incuba ion is due o ood sho age a he han s ess p oduced by he handling o o ganisms (Ikeda, 1977; Ikeda and Skjoldal 1980). Ou a e age espi a ion o all expe imen s wi h Daphnia o e 8 hou s (0.32 ± 0.39 µlO2·ind-1·h-1) ma ched he alues ound by Valenciano (2010). In he expe imen s, s anda d me abolic a e was eached a e 3.5 hou s (mean alue 0-3.5 h: 0.41 ± 0.07 µlO2·ind-1·h-1). In ou s udy, his a e age alue was qui e simila (0.40 ± 0.10 µlO2·ind- 1·h-1). A e ou hou s un il he end o he expe imen s, espi a ion a e was 0.27 ± 0.01 µlO2·ind-1·h-1 ( able I), while Valenciano (2010) ob ained a a e o 0.29 ± 0.11 µlO2·ind-1·h-1. Fo copepods, we obse ed a high a iabili y in he espi a ion a es o he six expe imen s (a e age o al alue o 0.44 ± 0.23 µlO2·mg p o ein-1·h-1). Valenciano (2010) also ound a dec ease in espi a ion a es du ing one hou , al hough he numbe o expe imen s pe o med by his au ho was qui e sho . Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 15 Table II. Expe imen al condi ions, including da e, densi y o ood (cell/ml), empe a u e o acclima ion and incuba ion. To al Resp To al ETS To al R/ETS To al GF Exp Da e ª cells/ml ª inc. 0-8 h 0-8 h 0-8 h 0-8 h 1 19/03/15 17.9 1.5·106 18 0.26 ± 0.35 0.31 ± 0.09 0.71 ± 0.71 120.61 ± 45.99 2 20/03/15 17.9 1.5·106 18 0.38 ± 0.46 0.33 ± 0.12 0.95 ± 1.22 131.54 ± 47.08 3 23/03/15 17.8 1.5·106 18 0.31 ± 0.36 0.34 ± 0.13 1.26 ± 2.17 5.97 ± 6.58 4 24/03/15 17.8 5·105 18 0.35 ± 0.44 0.37 ± 0.09 0.87 ± 1.17 254.54 ± 98.43 5 25/03/15 17.9 5·105 18 0.28 ± 0.34 0.41 ± 0.10 0.58 ± 0.72 104.41 ± 32.36 TOTAL EXPERIMENTS 0.32 ± 0.39 0.35 ± 0.04 0.87 ± 0.26 123.41 ± 88.63 Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 16 Table III. Compa ison o espi a ion a es (µlO2·ind-1·h-1) ob ained by di e en au ho s in ela ion o esul s ob ained in his s udy. Re e ences O ganisms Respi a ion a es Uni s Tempe a u e Acclima ion ime Ikeda (1976) Sub opical copepods 0.46-2.12 µlO2 ind-1 h-1 22ºC 36 hou s Ikeda (1977b) Aca ia onsa 0.089-0.181 µlO2 ind-1 h-1 22ºC None Schmoke and He nández-León (2003) Cladoce an (D. Magna) 0.5-4 µlO2 ind-1 h-1 19ºC 24 hou s Li e al. (2004) Zooplank on 0.64-0.84 µlO2 ind-1 h-1 18-27ºC None P esen s udy D. magna 0.2-1.3 µlO2 ind-1 h-1 17-18ºC 12 hou s Copepods 0.27-0.78 µlO2 mg p o ein h-1 17-18ºC None Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 17 Table IV. A e age alues o espi a ion a es (µlO2·ind-1·h-1) and gu luo escence (ng pigmen s·ind-1) o expe imen s pe o med wi h copepods COPEPODS EXPERIMENTS Respi a ion GF 0-3 h 0-3 h 100 µm 1 0.69 ± 0.94 303.22 ± 386.74 2 0.26 ± 0.29 197.45 ± 105.29 3 0.78 ± 0.39 90.87 ± 109.99 TOTAL 100 µm 0.58 ± 0.28 197.18 ± 106.18 500 µm 4 0.27 ± 0.32 115.16 ± 150.94 5 0.38 ± 0.32 49.85 ± 61.26 6 0.27 ± 0.25 116.59 ± 108.91 TOTAL 500 µm 0.31 ± 0.06 93.87 ± 38.13 TOTAL EXPERIMENTS 0.44 ± 0.23 145.5 ± 91.1 Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 18 Figu e 1. Time-cou se o gu luo escence (ng pigmen s·ind-1) and s anda d e o o he di e en expe imen s. Figu e 1A co esponds o expe imen 1, B o expe imen 4, C o he numbe 2, D o 5, E o 3, and F o 6. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 19 Figu e 2. . Time-cou se o espi a ion a es (µlO2·ind-1·h-1) and ETS ac i i y (µlO2·ind-1·h-1) o each expe imen . Figu e 2A co esponds o expe imen 1, B o expe imen 4, C o he numbe 2, D o 5, E o 3, and F o 6. Ve ical lines a e s anda d e o Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 20 Figu e 3. Time-cou se o he espi a ion/ETS a io and s anda d e o o he di e en expe imen s. Figu e 3A co esponds o expe imen 1, B o expe imen 4, C o he numbe 2, D o 5, E o 3, and F o 6. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 21 Figu e 4. Oxygen consump ion and gu luo escence o copepods in he 100-200 µm (A and C) and 500-1000 µm (B and D) size ac ions Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 22 VALORACIÓN PERSONAL (PERSONAL ASSESSMENTS)  Desc ipción de allada de las ac i idades desa olladas du an e la ealización del TFT Pa a pode aba ca sob e es e pun o, es necesa io des aca que el TFT se ealizó con odos los da os que se ob u ie on de las dis in as p ác icas ealizadas an o en el labo a o io como a bo do del buque oceanog á ico, BIO Ángeles Al a iño. Es os da os ue on a ados de al o ma que son los esul ados de los que en es e es udio hablamos. Po an o, se a a de un es udio expe imen al en el que hemos unido la ealización de las p ác icas con el T abajo de in de í ulo. Du an e la ealización del TFT, se ealiza on búsquedas de a ículos cien í icos, los cuales ue on leídos pa a pode encon a co elación con nues o es udio y pa a sabe qué di e encia apo aban nues os expe imen os a los ya ealizados an e io men e. Además, como ya se ha mencionado an e io men e, se es udia on casos de espi ación an o en el labo a o io como en el ba co. Comenzando con los expe imen os que se ealiza on en el labo a o io, es impo an e señala que e a necesa io deja a los o ganismos en sa u ación de alimen o, du an e un pe iodo de 12 ho as, has a el día siguien e que e a cuando se ealizaban las medidas del consumo de oxígeno. Además, mien as los indi iduos pe manecían incubados, se ealizaba el con aje del núme o de células po milili o que se le suminis aba. Una ez acabados los expe imen os, se limpiaba odo el ma e ial y se o denaba el luga de abajo. Pa a inaliza , hablamos de los ensayos ealizados a bo do del ba co. En es os ensayos medíamos el consumo de oxígeno con un oxíme o di e en e, pues o que és e nos daba medidas pun uales. El núme o de bo ellas donde se incubaban e a meno a las de los es udios en labo a o io, pe o de un olumen más g ande (250 ml). Además, los o ganismos e an ecién omados de su medio na u al y pasados a las bo ellas de incubación, po an o, no conocemos con segu idad si enían de es a en sa u aciones de alimen o o no. Aunque es e da o pod íamos conoce lo debido a las condiciones oceanog á icas, ya que las pescas pa a es os es udios ue on lanzadas en á eas más oligo ó icas, lejanas al a lo amien o. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 23  Fo mación ecibida (cu sos, p og amas in o má icos, e c.) En es e apa ado podemos des aca que si bien p e iamen e se enía conocimien o de cómo abaja en un labo a o io en cuan o a o den, pulc i ud y es imen a, u e allos que poco a poco ui co igiendo. Así mismo, en cuan o a cómo a a algunos da os, se p opo cionó ambién bas an e in o mación nue a. En cuan o al abajo en el labo a o io, an es de ealiza cualquie ipo de análisis, se me explicaba con de alle cómo uncionaban los ins umen os que se iban a u iliza en cada momen o. Además, en el caso de la u ilización del oxíme o con el que ob u e los alo es de espi ación pa a las Daphnia spp., se me acili ó un disco du o desde el que pude desca ga me el so wa e del p og ama que necesi aba dicho ins umen o. Po o a pa e, los da os que p opo cionaba el oxíme o señalado an e io men e, ue on a ados con el p og ama Excel, con el que ya había abajado. Sin emba go, an es de ob ene ningún da o de mis expe imen os, mi u o me p opo cionó o os da os con los que u e que maneja en el p og ama es adís ico R. Es o me ayudó a amilia iza me con es a he amien a que más adelan e u iliza ía con mis p opios da os. Cabe des aca la o mación que ecibí con o os p og amas es adís icos, como el STATISTICA, con el cual ob u e los g á icos ep esen ados en el abajo.  Ni el de in eg ación e implicación den o del depa amen o y elaciones con el pe sonal. La in eg ación en el depa amen o se puede conside a o almen e sa is ac o ia, pues o que desde el p incipio los écnicos del labo a o io se mos a on a en os an e cualquie duda que se me pudie a ocu i en cuan o a la u ilización de ma e ial, al la ado o simplemen e a la colocación del mismo en el labo a o io. Además de ayuda me al aslado de ma e iales desde los labo a o ios de la Facul ad has a los labo a o ios de Talia e, conc e amen e al IOCAG (Ins i u o de Oceanog a ía y Cambio Global). Además, ob u e el apoyo del equipo de in es igación que abaja den o de es a ins i ución como p o eso es, es udian es de doc o ado, pe sonal de abajo del ins i u o en gene al, desde el se icio de limpieza po suminis a me las lla es pa a accede a los labo a o ios has a el se icio de segu idad po ab i me las pue as del pa king y deja me accede los días que no se abajaba en el ins i u o pe o que yo enía que i pa a pode ealiza los expe imen os. Rela ionship be ween Respi a ion and Elec on T ans e Sys em (ETS) in zooplank on 24 Conside o que he es ado o almen e implicada en odas las a eas que he hecho a lo la go del es udio, ya que se me ha explicado cómo hace las y si bien en muchas ocasiones he allado, a las siguien es lo he co egido y eso me ha hecho gana conocimien o. En cuan o a las elaciones con el pe sonal puedo deci que he ap endido de odos y cada uno de los que me han ayudado de una o ma u o a en cada momen o.  Aspec os posi i os y nega i os más signi ica i os elacionados con el desa ollo del TFT En es e apa ado se debe se más obje i o si cabe, ya que, es una o ma de mejo a y así ayuda a los u u os es udian es de TFT. En p ime luga , sob e los aspec os nega i os du an e el desa ollo del T abajo de Fin de Tí ulo, al igual que se expuso en la memo ia de p ác icas ex e nas, podemos deci que lo más des acado de es e pun o es el hecho de acudi du an e días no lec i os has a los labo a o ios de la acul ad o de Talia e, pa a da comienzo al expe imen o. Sin emba go, de es e asgo nega i o he concluido en muchas cosas posi i as. En cuan o al ap endizaje posi i o du an e el desa ollo de es e abajo, cabe des aca sin ninguna duda que el hecho de ealiza un abajo expe imen al con iene muchos aspec os posi i os, pues o que además de gana en conocimien o, he ap endido a se pacien e, ya que pa a llega a ob ene unos buenos esul ados, ealicé muchos ensayos an e io es.  Valo ación pe sonal del ap endizaje conseguido a lo la go del TFT. Como alo ación pe sonal puedo deci con ce eza que la ealización del T abajo de Fin de Tí ulo, jun o con las demás asigna u as de la ca e a, me ha hecho c ece como pe sona. No sólo me he en iquecido académicamen e después de an a búsqueda de bibliog a ía, lec u as, p ác icas, abajos, e c, sino que además en lo pe sonal me ha hecho c ece mucho, implan ando un poco en mí una g an i ud de la que ca ecía, la paciencia. Pa a mí el TFT no sólo ha sido una asigna u a más de la ca e a, ha sido una e apa de mi ida, en donde he i ido momen os buenos y momen os malos. Pues o que lo he pasado mal cuando las cosas que he hecho no me han salido bien, en la que he