Composiciones y preparaciones combinadas de sunitinib y L-Carnitina

ES 2 392 879 B1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 21 Número de publicación: 2 392 879 Número de solicitud: 201130900 51 Int. CI.: A61K 31/404 (2006.01) A61K 31/205 (2006.01) 12 PATENTE DE INVENCIÓN B1 54 Título: COMPOSICIONES Y PREPARACIONES COMBINADAS DE SUNITINIB Y L-CARNITINA 73 Titular/es: SERVICIO ANDALUZ DE SALUD (50.0%) Avda. de la Constitución, 18 41071 Sevilla (Sevilla) ES y UNIVERSIDAD DE SEVILLA (50.0%) 72 Inventor/es: ARAMBURU BODAS, Óscar; RUIZ ARMENTA, Maria Victoria; BLANCA LOBATO, Antonio Jesús; ZAMBRANO SEVILLA, Sonia; MIGUEL CARRASCO, José Luis; MONSERRAT GARCIA, María Teresa; ARIAS JIMÉNEZ, José Luis; MATE BARRERO, Alfonso y VÁZQUEZ CUETO, Carmen María 74 Agente/Representante: ILLESCAS TABOADA, Manuel 22 Fecha de presentación: 31.05.2011 43 Fecha de publicación de la solicitud: 14.12.2012 Fecha de la concesión: 22.10.2013 45 Fecha de publicación de la concesión: 04.11.2013 57 Resumen: Composición farmacéutica y preparacion combinada que comprende Sunitinib y L-carnitina, para su uso en la elaboración de un medicamento útil en el tratamiento de carcinoma de células renales, de tumores del estroma gastrointestinal, y de tumores sólidos, en particular canceres de seno, pulmón y colorectales. Se puede realizar consulta prevista por el art. 37.3.8 LP. Aviso: 2 DESCRIPCIÓN Composiciones y preparaciones combinadas de Sunitinib y L-carnitina. La presente invención se encuentra dentro del campo de la Medicina y la Farmacia, y se refiere a una composición que comprende Sunitinib y L-carnitina, y a una preparación combinada de Sunitinib y L-carnitina, para evitar los efectos laterales negativos derivados de la administración de Sunitinib. 5 ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR El Sunitinib es un fármaco inhibidor de la tirosina kinasa administrado por vía oral, cuya indicación actual comprende el tratamiento del carcinoma renal avanzado (Motzer et al., 2006. JAMA 295: 2516-2524), y de los tumores gastrointestinales estromales (GIST) como alternativa al Imatinib (Demetri et al., 2006. Lancet 368:1329-1338). Las tirosinas kinasas (TKs) regulan diferentes procesos celulares, entre ellos la proliferación celular, de forma que la 10 sobreexpresión de las mismas, de sus receptores o mutaciones que produzcan una activación permanente, pueden provocar el desarrollo de neoplasias (Yvonne et al., 2008. Toxicol Sci 106(1):153-161). Publicaciones recientes han mostrado que el uso de Sunitinib se asocia con descensos en la fracción de eyección del ventrículo izquierdo (LVEF) (entre el 10 y el 21% de los pacientes), y dentro de éstos, del 3 al 15% desarrollan insuficiencia cardiaca congestiva (ICC) (Motzer et al., 2007. N Engl J Med. 11;356(2):115-24). Por otro lado, el 15 tratamiento con inhibidores de la tirosina kinasa, y a través de mecanismos fisiopatológicos que no se conocen en profundidad, se relaciona claramente con la aparición o descompensación de hipertensión arterial (HTA) en la totalidad de los pacientes tratados, lo que nos lleva a sugerir que este factor podría tener un peso importante en el desarrollo de insuficiencia cardiaca (IC) (Faivre et al., 2006. J Clin Oncol 24:25-35). Se han propuesto diferentes mecanismos para explicar la cardiotoxicidad del Sunitinib, entre los que se encuentran 20 la toxicidad mitocondrial y el consecuente daño sobre el tejido cardiaco, pero en la actualidad hay pocos datos al respecto (Yvonne et al., 2008. Toxicol Sci 106(1):153-161). Estudios experimentales con ratas tratadas con Sunitinib han mostrado lesiones estructurales en los miocardiocitos, con alteración de la función mitocondrial y aumento de apoptosis (Tammy et al., 2007. Lancet 370:2011-2019). Aunque inicialmente se creyó que esta IC tenía un carácter reversible al abandonar el tratamiento, estudios de cohortes con seguimientos más prolongados han demostrado 25 que no siempre esto es así. La IC supone en la actualidad un gran problema de salud para la población, que además presenta una tendencia a ir incrementándose a lo largo de los años. Es una enfermedad grave, con deterioro de la calidad de vida, frecuentes hospitalizaciones y alta mortalidad. Una de las etiologías de IC es la miocardiopatía por fármacos, cuyo mayor exponente es el grupo de las antraciclinas, y donde se incluyen los inhibidores de las TKs, que emergen como nuevo 30 grupo de fármacos cardiotóxicos. Sin embargo, y a diferencia de lo que sucede con las antraciclinas, la IC causada por Sunitinib suele aparecer precozmente tras el inicio del tratamiento, lo que sugiere que los mecanismos fisiopatológicos son distintos (Aarif et al., 2008. Cancer 112: 2500-2508). La L-carnitina (LC) es un nutriente, derivado aminoácido (amina cuaternaria) que actúa como cofactor esencial en el metabolismo de los ácidos grasos. Interviene en el transporte de los ácidos grasos de cadena larga al interior de la 35 mitocondria, donde tiene lugar el catabolismo de los mismos mediante la beta-oxidación, para la producción de energía metabólica (Yucel et al., 1998. Clin Chem 44: 148-154). La mayor parte de la LC existente en el organismo se encuentra en el músculo esquelético y miocardio, en forma libre o esterificada (acilcarnitina), desempeñando un papel muy importante como fuente de energía metabólica para el miocardio y la musculatura esquelética (Hulsmann & Dubelaar ML. In: L-carnitine and its role in medicine: from function to therapy. Ferrari R, Dimauro S, Sherwood G, 40 eds. London NW1 7DX: Academic Press Limited, 1992: 345-358). Por tanto, una deficiencia de LC en estos tejidos puede alterar su funcionalidad (Arsenian 1997. Prog Cardiovasc Dis 40: 265-286; Martin et al., 2000. Biochim Biophys Acta 15: 330-336). Estudios previos de nuestro grupo de investigación han demostrado el efecto antihipertensivo, antioxidante, antiinflamatorio y cardioprotector de la LC en la HTA (Miguel-Carrasco et al., 2008. Am J Hypertens 21:12311237; Mate et al., 2010. Drug Discovery Today 11: 484-492). 45 Ya que el Sunitinib no solo es uno de los fármacos más importantes para el tratamiento del carcinoma de células renales y tumores del estroma gastrointestinal resistentes al imatinib, sino que además está siendo evaluado actualmente para una amplia variedad de tumores sólidos, incluyendo cánceres de seno, pulmón y colorectales, resulta esencial encontrar un medio de impedir o paliar en gran medida sus efectos secundarios. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN 50 La presente invención proporciona una composición y una terapia combinada que disminuye los efectos secundarios del Sunitinib. Los autores de la presente invención demuestran en esta memoria que la LC podría actuar paliando o evitando la cardiotoxicidad del Sunitinib, mejorando las cifras de tensión arterial (TA) y los parámetros de estrés oxidativo ejerciendo, a su vez, un carácter cardioprotector que previene el desarrollo de insuficiencia cardiaca.  ES 2 392 879 B1 3 Así pues, un primer aspecto de la invención se refiere a una composición, en adelante composición de la invención, que comprende Sunitinib y L-carnitina. En una realización preferida de este aspecto, la composición es una composición farmacéutica. En otra realización más preferida, la composición comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización preferida, la composición además comprende otro principio activo. En esta memoria se entiende por Sunitinib, un compuesto de fórmula (I): 5 (I) o cualquiera de sus sales, profármacos, derivados o análogos, o cualquiera de sus combinaciones. La L-carnitina (L-3-hidroxi-4-N,N,N-trimetilaminobutirato) (LC) es un derivado aminoacídico presente en la mayoría 10 de las especies animales y en muchos microorganismos y plantas. Se encuentra ampliamente distribuido por todo el organismo, aunque se presenta en mayores cantidades en el corazón y en el músculo esquelético (Rebouche 1992. J. FASEB 6: 3379-3386). La función principal de este derivado aminoacídico consiste en actuar como cofactor en el transporte de ácidos grasos al interior de la mitocondria, donde se produce la β-oxidación de los mismos, para la obtención de energía metabólica (Bremer J. Physiol Rev 1983; 63: 1420-1480), desempeñando un papel crucial en 15 el metabolismo de los ácidos grasos. El 75% de la cantidad de LC requerida por el organismo proviene de la dieta. El resto se sintetiza endógenamente en el hígado, riñón y cerebro, a partir de los aminoácidos lisina y metionina (Tanphaichitr et al., 1973. J Biol Chem 248: 2176-2181). En el contexto de la presente invención, se entiende como L-carnitina, un compuesto de fórmula (II): 20 (I) o cualquiera de sus sales, profármacos, derivados o análogos, o cualquiera de sus combinaciones. Tal como aquí se utiliza, el término “derivado” incluye tanto a compuestos farmacéuticamente aceptables, es decir, derivados del compuesto de fórmula (I) o fórmula (II) que pueden ser utilizados en la elaboración de una composición farmacéutica o de un medicamento, como derivados farmacéuticamente no aceptables, ya que éstos 25 pueden ser útiles en la preparación de derivados farmacéuticamente aceptables. Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los profármacos de los compuestos de fórmula (I) y/o de fórmula (II). El término “profármaco” tal como aquí se utiliza incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (I) y/o fórmula (II), por ejemplo, ésteres, incluyendo ésteres de ácidos carboxílicos, ésteres de aminoácidos, ésteres de fosfato, ésteres de sulfonato de sales metálicas, etc., carbamatos, amidas, etc., que, 30 cuando se administra a un individuo es capaz de proporcionar, directa o indirectamente, dicho compuesto de fórmula (I) y/o (II) en dicho individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (I) y/o (II) cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del compuesto de fórmula (I) y/o (II) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (I) y/o (II) en un compartimento 35 biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia. Otro aspecto de la invención se refiere a la composición de la invención para su uso como medicamento, o alternativamente, al uso de la composición de la invención para la elaboración de un medicamento. Otro aspecto se refiere a la composición de la invención para el tratamiento de carcinoma de células renales, o 40 alternativamente al uso de la composición de la invención en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de carcinoma de células renales.  ES 2 392 879 B1 4 Otro aspecto se refiere a la composición de la invención para el tratamiento de tumores del estroma gastrointestinal, o alternativamente al uso de la composición de la invención en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores del estroma gastrointestinal. Otro aspecto se refiere a la composición de la invención para el tratamiento de tumores sólidos, o alternativamente al uso de la composición de la invención en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores 5 sólidos. En una realización preferida de este aspecto de la invención, los tumores sólidos se seleccionan de la lista que comprende: cánceres de seno, pulmón y colorectales. Otro aspecto de la invención se refiere a una preparación combinada que comprende Sunitinib y L-carnitina. Debe enfatizarse que el término “preparación combinada” o también denominada “yuxtaposición”, en esta memoria, significa que los componentes de la preparación combinada no necesitan encontrarse presentes como unión, por 10 ejemplo en una composición, para poder encontrarse disponibles para su aplicación separada o secuencial. De esta manera, la expresión “yuxtapuesta” implica que no resulta necesariamente una combinación verdadera, a la vista de la separación física de los componentes. La L-carnitina, o sus sales, profármacos, derivados o análogos, pueden administrarse en una forma substancialmente pura a un mamífero, y preferiblemente un humano, o puede administrarse como parte de una 15 composición más compleja. Cuando se administra formando parte de una composición, la cantidad de L-carnitina, o sus sales, profármacos, derivados o análogos, es tal que alcanza el efecto deseado, siendo por tanto una cantidad efectiva. Ejemplos de mezclas que pueden contener estos compuestos son, pero sin limitarse, extractos desecados de plantas, polvo de cacao, comida deshidratada, etc. Una persona que necesite L-carnitina, o sus sales, profármacos, derivados o análogos, puede consumirlos, por tanto, como un compuesto farmacéutico, o como parte 20 de una composición que contiene alguno de estos compuestos, o sus combinaciones, por ejemplo como un suplemento dietético, o como una matriz alimentaria en el que alguno de estos compuestos o sus mezclas se añaden en una cantidad efectiva. Ejemplos de matrices alimentarias son, pero sin limitarse: leche, yogurt, queso, leche fermentada, leche de soja, cereales precocinados, galletas, pan, bollos, mantequilla, margarina, salchichas, aceites de freír, aceites vegetales, aceite de oliva, aceite de palma, aceite de soja, aceite de girasol, condimentos, 25 zumos de frutas, siropes, helados, productos congelado, gomas de mascar, y alimentos intermedios. Otro aspecto de la invención se refiere a la preparación combinada de la invención para su uso por separado, simultáneo o secuencial como medicamento, o al uso por separado, simultáneo o secuencial de la preparación combinada de la invención, que comprende Sunitinib y L-carnitina, en la elaboración de un medicamento. Otro aspecto de la invención se refiere a la preparación combinada de la invención para su uso por separado, 30 simultáneo o secuencial en el tratamiento de carcinoma de células renales, o alternativamente, al uso por separado, simultáneo o secuencial de la preparación combinada de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de carcinoma de células renales Otro aspecto de la invención se refiere a la preparación combinada de la invención para su uso por separado, simultáneo ó secuencial en el tratamiento de tumores del estroma gastrointestinal, o alternativamente, al uso por 35 separado, simultáneo 0 secuencial de la preparación combinada de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de tumores del estroma gastrointestinal. Otro aspecto de la invención se refiere a la preparación combinada de la invención para su uso por separado, simultáneo o secuencial en el tratamiento de tumores para el tratamiento de tumores sólidos, o alternativamente, al uso por separado, simultáneo o secuencial de la preparación combinada de la invención para la elaboración de un 40 medicamento para el tratamiento de tumores sólidos. En una realización preferida de este aspecto de la invención, los tumores sólidos se seleccionan de la lista que consiste en: cánceres de seno, pulmón y colorectales. Como se emplea aquí, el término “principio activo”, “substancia activa”, “substancia farmacéuticamente activa”, “ingrediente activo” ó “ingrediente farmacéuticamente activo” significa cualquier componente que potencialmente 45 proporcione una actividad farmacológica u otro efecto diferente en el diagnóstico, cura, mitigación, tratamiento, o prevención de una enfermedad, o que afecta a la estructura o función del cuerpo del hombre u otros animales. El término incluye aquellos componentes que promueven un cambio químico en la elaboración del fármaco y están presentes en el mismo de una forma modificada prevista que proporciona la actividad específica o el efecto. Tanto las composiciones de la presente invención, así como la preparación combinada de la invención pueden 50 formularse para su administración a un animal, y más preferiblemente a un mamífero, incluyendo al hombre, en una variedad de formas conocidas en el estado de la técnica. Así, pueden estar, sin limitarse, en disolución acuosa estéril o en fluidos biológicos, tal como suero. Las disoluciones acuosas pueden estar tamponadas o no tamponadas y tienen componentes activos o inactivos adicionales. Los componentes adicionales incluyen sales para modular la fuerza iónica, conservantes incluyendo, pero sin limitarse a, agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelantes, y 55 similares, y nutrientes incluyendo glucosa, dextrosa, vitaminas y minerales. Alternativamente, las composiciones pueden prepararse para su administración en forma sólida. Las composiciones pueden combinarse con varios  ES 2 392 879 B1 5 vehículos o excipientes inertes, incluyendo pero sin limitarse a; aglutinantes tales como celulosa microcristalina, goma tragacanto, o gelatina; excipientes tales como almidón o lactosa; agentes dispersantes tales como ácido algínico o almidón de maíz; lubricantes tales como estearato de magnesio, deslizantes tales como dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes tales como sacarosa o sacarina; o agentes aromatizantes tales como menta o salicilato de metilo. 5 Tales composiciones o preparaciones combinadas y/o sus formulaciones pueden administrarse a un animal, incluyendo un mamífero y, por tanto, al hombre, en una variedad de formas, incluyendo, pero sin limitarse a, intraperitoneal, intravenoso, intramuscular, subcutáneo, intracecal, intraventricular, oral, enteral, parenteral, intranasal o dérmico. La dosificación para obtener una cantidad terapéuticamente efectiva depende de una variedad de factores, como por 10 ejemplo, la edad, peso, sexo, tolerancia,… del mamífero. En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de Sunitinib y L-carnitina, profármacos, derivados o análogos del Sunitinib y de la L-carnitina que produzcan el efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de dichos profármacos, derivados o análogos y el efecto terapéutico a conseguir. Los “adyuvantes” y “vehículos farmacéuticamente aceptables” que pueden ser utilizados en dichas 15 composiciones son los vehículos conocidos por los técnicos en la materia. A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la 20 presente invención. EJEMPLOS A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que ponen de manifiesto la especificidad y efectividad de la L-carnitina para paliar los efectos secundarios no deseados de Sunitinib. 25 La invención se llevó a cabo diseñando un estudio de tipo experimental prospectivo, en el que se utilizaron ratas de la cepa Wistar, asignadas aleatoriamente a los siguientes grupos: 1.- Grupo control (que representaremos como WISTAR). 2.-Tratadas con Sunitinib a dosis de 25 mg/Kg de peso corporal y día disuelto en el agua de bebida (grupo WSU). 3Tratadas con L-carnitina (LC) a dosis de 400 mg/Kg de peso corporal y día disuelta en el agua de bebida (grupo 30 WLC). 4.-Tratadas con Sunitinib + LC a las mismas dosis antes descritas (grupo WSULC). El efecto cardioprotector de la LC en el tratamiento con Sunitinib se estudió durante 10 semanas. La LC se administró desde el primer día. Por el contrario, el Sunitinib se administró en las últimas 8 semanas. Durante todo el periodo experimental se ha realizado un seguimiento semanal de las cifras de presión arterial y frecuencia cardiaca. 35 Esta medida se ha llevado a cabo mediante el método indirecto de oclusión en la cola. Para ello se utiliza un medidor de presión acoplado a un sistema de recogida de datos con soporte informático. Al finalizar el tratamiento, se procede a la obtención del peso del animal y a su sacrificio con una dosis letal de pentobarbital. Se extrae la sangre mediante punción cardiaca directa y se recoge en tubos con heparina. Esta sangre se usa para la determinación de hemoglobina y actividad de las enzimas antioxidantes, que se expresan en 40 unidades/gramos de hemoglobina (U/g). Posteriormente, se extirpa el corazón, se limpia con suero fisiológico frio y se pesa. Las muestras se congelan por inmersión en nitrógeno líquido y se mantienen a -80º C hasta el momento de su uso.Posteriormente, los órganos se homogeneizan para el estudio de la determinación de las actividades enzimáticas y de la peroxidación lipídica, expresándose los resultados por gramos o miligramos de proteína, respectivamente. 45 En la tabla I se muestran los valores finales del peso corporal de los animales, la ganancia/pérdida de peso observada como consecuencia del tratamiento, así como el peso del corazón en valor absoluto y referido al peso del animal, en los cuatro grupos experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0084 para el peso corporal final. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones: 50 • WISTAR-WSU: p<0.05 Analizando la ganancia/pérdida de peso de los animales obtenemos mediante el test de ANOVA una p<0.0001, y aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones:  ES 2 392 879 B1 6 • WISTAR-WSU: p<0.001 • WISTAR-WSULC: p<0.001 • WSU-WSULC: p<0.001 En cuanto al peso del corazón, expresado en valor absoluto y en valor relativo, y una vez realizado el test de ANOVA, se obtuvo una p<0.0001 para los dos parámetros analizados. Aplicando el análisis por test de Tukey se 5 obtuvieron las siguientes significaciones para el peso del corazón expresado en valor absoluto: • WISTAR-WSU: p<0.001 • WSU-WSULC: p<0.001 Para la expresión en valor relativo: • WISTAR-WSU: p<0.001 10 • WSU-WSULC: p<0.001 En la tabla II se muestran las presiones arteriales diastólicas y sistólicas, así como la frecuencia cardiaca al finalizar el tratamiento en los cuatro grupos experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0001 para los tres parámetros analizados. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones para la presión sistólica final: 15 • WISTAR-WSU: p<0.001 • WSU-WSULC: p< 0.001 Para la presión diastólica final: • WISTAR-WSU: p<0.001 • WSU-WSULC: p< 0.001 20 Para la frecuencia cardiaca final: • WISTAR-WSU: p<0.001 • WISTAR-WSULC: p<0.05 • WSU-WSULC: p<0.001 En la tabla III se muestra la actividad de la enzima superóxido dismutasa (SOD) en eritrocitos de los cuatro grupos 25 experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0001. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones para la SOD: • WISTAR-WSU: p<0.001 • WISTAR-WSULC: p<0.05 30 • WSU-WSULC: p<0.001 En la tabla IV se muestra la actividad de la enzima glutatión peroxidasa (GPx) en eritrocitos de los cuatro grupos experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0001. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones para la GPx: 35 • WISTAR-WSU: p<0.001 • WSU-WSULC: p< 0.001 En la tabla V se muestra la actividad de la enzima glutatión reductasa (GR) en eritrocitos de los cuatro grupos experimentales de animales.  ES 2 392 879 B1 7 Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0001. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones para la GR: • WISTAR-WSU: p<0.001 • WSU-WSULC: p<0.001 En la tabla VI se muestra la actividad de la enzima superóxido dismutasa (SOD) en el corazón de los cuatro grupos 5 experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0001. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones para la SOD: • WISTAR-WSU: p<0.001 • WISTAR-WSULC: p<0.01 10 • WSU-WSULC: p<0.001 En la tabla VII se muestra la actividad de la enzima glutatión peroxidasa (GPx) en el corazón de los cuatro grupos experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.009. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones para la GPx: 15 • WISTAR-WSU: p<0.05 • WSU-WSULC: p< 0.05 En la tabla VIII se muestra la actividad de la enzima glutatión reductasa (GR) en el corazón de los cuatro grupos experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p= 0.4469, indicando que no existían diferencias significativas 20 entre los cuatro grupos experimentales de animales. En la tabla IX se muestra los valores de peroxidación lipídica observados en el corazón de los cuatro grupos experimentales de animales. Una vez realizado el test de ANOVA se obtuvo una p<0.0001. Aplicando el análisis por test de Tukey se obtuvieron las siguientes significaciones: 25 • WISTAR-WSU: p<0.001 • WSU-WSULC: p< 0.001 Estos resultados muestran que: 1. El peso corporal de los animales tratados con Sunitinib desciende significativamente, reducción que se aminora con el tratamiento simultáneo de LC. No se observaron diferencias significativas entre las ratas controles y las 30 tratadas con LC. 2. El peso del corazón aumenta de forma significativa tras el tratamiento con Sunitinib, lo que demuestra la presencia de un corazón hipertrofiado en estas ratas. Esta hipertrofia cardiaca desaparece tras el tratamiento simultáneo con LC. No se apreciaron diferencias significativas entre los valores obtenidos en las ratas controles y las tratadas con LC. 35 3. La presión sistólica, diastólica y la frecuencia cardiaca aumentan significativamente tras el tratamiento con Sunitinib. La administración simultánea con LC llega a normalizar los valores de presiones sanguíneas y aminorar los de la frecuencia cardiaca. No existen diferencias significativas en estos parámetros entre las ratas controles y las tratadas con LC. 4. Las actividades de las enzimas antioxidantes en sangre, SOD, GPx y GR, disminuyen de forma significativa tras 40 el tratamiento con Sunitinib, llegando estos valores a normalizarse, en caso de las dos últimas enzimas, con el tratamiento simultáneo con LC. No se observaron diferencias significativas entre los valores encontrados en las ratas controles y tratadas con LC. 5. Las actividades cardiacas de las enzimas antioxidantes, SOD y GPx, disminuyen de forma significativa tras el tratamiento con Sunitinib, aumentando estas actividades con el tratamiento simultáneo con LC. La actividad GR 45 no se ve modificada en el corazón de los cuatro grupos experimentales de animales. No se observaron diferencias significativas entre los valores encontrados en las ratas controles y tratadas con LC.  ES 2 392 879 B1 8 6. La peroxidación lipídica aumenta en las ratas tratadas con Sunitinib, normalizándose los valores en el grupo sometido a tratamiento simultáneo con LC. No se observaron diferencias significativas entre los valores encontrados en las ratas controles y tratadas con LC. Tabla I.- Determinación del peso corporal final, ganancia/pérdida del mismo y peso del corazón WISTAR WLC WSU WSULC Peso final (g) 336 3.0 336.0 4.6 311 7.0 324 5.4 Ganancia/pérdida de peso corporal 24.7 ± 2.1 23.2 ± 1.3 -16.5 ± 1.1 -4.8 ± 0.8 Peso corazón (g) 1.08± 0.02 1.02 ± 0.03 1.27 ± 0.03 1.04 ± 0.01 Peso corazón/peso corporal (%) 0.30 ± 0.06 0.30 ± 0.09 0.37 ± 0.09 0.31 ± 0.09 Tabla II.- Valores finales de presión arterial sistólica (PS) y diastólica (PD) y valores finales de la frecuencia 5 cardiaca (FC) (mm Hg) WISTAR WLC WSU WSULC PS 119 0.2 119 1.0 150 0.70 120 1.2 PD 97.3 1.2 99.5 0.43 124 1.7 101.8 0.6 FC 373 6.9 374.5 8.9 527 6.8 411 13 Tabla III.- Actividad de la enzima superóxido dismutasa (SOD) en eritrocitos (U/g Hb) WISTAR WLC WSU WSULC SOD 3941 259.07 4384 130.98 1947 156.75 3159 180.79 Tabla IV.- Actividad de la enzima glutatión peroxidasa (GPx) en eritrocitos (U/g Hb) 10 WISTAR WLC WSU WSULC GPx 234.80 18.70 265.80 15.41 107 5.59 257 19.17 Tabla V.- Actividad de la enzima glutatión reductasa (GR) en eritrocitos (U/g Hb) WISTAR WLC WSU WSULC GR 406 33 370 17 236 10 423 29 Tabla VI.- Actividad de la enzima superóxido dismutasa (SOD) en corazón (U/g proteína) WISTAR WLC WSU WSULC SOD 3458 108 3573 128 2244 43 2942 104  ES 2 392 879 B1 9 Tabla VII.- Actividad de la enzima glutatión peroxidasa (GPx) en corazón (U/g proteína) WISTAR WLC WSU WSULC GPx 166 13 174 ± 16 119 3.3 170 9.3 Tabla VIII.- Actividad de la enzima glutatión reductasa (GR) en corazón (U/g proteína) WISTAR WLC WSU WSULC GR 3032 94 3183 140 3297 93 3127 127 Tabla IX.- Medida de la peroxidación lipídica (PL) en corazón (pmol malondialdehido,MDA/45 min/ mg 5 proteína) WISTAR WLC WSU WSULC PL 167 6 165 4 265 11 193 5 En conclusión, el tratamiento con Sunitinib produce una disminución en el peso corporal junto con una hipertrofia cardiaca y un aumento en las medidas de la presión arterial sistólica y diastólica y en los valores de frecuencia cardiaca, factores todos estos que se atenúan con la administración simultánea de LC. Esta terapia combinada 10 permite reducir la pérdida de peso corporal, la hipertrofia cardiaca, así como los valores de presión arterial asociados a la ingesta de Sunitinib. Por otro lado, el tratamiento simultáneo con Sunitinib y LC ha mejorado el estrés oxidativo sistémico y cardiaco producido por el primero, lo que implica al estrés oxidativo como uno de los mecanismos fisiopatológicos implicados en el daño cardiaco tóxico del Sunitinib.  ES 2 392 879 B1