BÚSQUEDA DE SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS
EN EL GEN DGAT1 (DIACILGLICEROL O-ACILTRANSFERA-
SA 1) VINCULADO A LA INFILTRACIÓN GRASA:
R
RE
ES
SU
UL
LT
TA
AD
DO
OS
S P
PR
RE
EL
LI
IM
MI
IN
NA
AR
RE
ES
S E
EN
N R
RA
AZ
ZA
AS
S B
BO
OV
VI
IN
NA
AS
S A
AU
UT
TÓ
ÓC
CT
TO
ON
NA
AS
S
A ilés C.1, Azo P.J.1, Memb illo A.1, Do ado G.2, Ál a ez F.3,
Fe nández I.3, Pé ez J.A.3y Molina, A.1
1G upo MERAGEM. Depa amen o de Gené ica. Facul ad de Ve e ina ia.
Uni e sidad de Có doba. España. [email p o ec ed]
2Depa amen o de Bioquímica y Biología Molecula . Uni e sidad de Có doba.
España.
3Asociación Nacional de C iado es de Ganado Vacuno Selec o de Raza Re in a.
España.
I
IN
NT
TR
RO
OD
DU
UC
CC
CI
IÓ
ÓN
N
La ecien e come cialización de ki s pa a la de e minación de ma cado es
gené icos asociados a ca ac e es cuan i a i os como la can idad de g asa
in amuscula in il ada o la e neza de la ca ne ha e olucionado el mundo
de la p oducción de ca ne de acuno. Es os ma cado es es án asociados úni-
camen e a uno de los genes implicados en p ocesos como la madu ación de
la ca ne o el ni el de e eado in amuscula , mo i o po el cual no deben se
usados como único c i e io pa a selecciona a un animal pe o sí pueden
emplea se como he amien a de selección complemen ando a o as o a la
ho a de decidi en una alo ación conjun a de a ios ca ac e es (Quaas
e
al.
, 2006).
Es a nue a ecnología se conside a un ins umen o con un g an po encial
pa a mejo a la espues a a la selección, especialmen e cuando se a a de
ca ac e es di íciles de mejo a a pa i de p ác icas con encionales po su
baja he edabilidad o po que los mé odos pa a cuan i ica su exp esión son
1
12
29
9
ca os, des uc i os, poco p ecoces en la ida del animal o di íciles de lle a
a cabo.
El obje i o de es e abajo ha sido lle a a cabo un es udio p elimina
pa a ca ac e iza a las azas bo inas de omen o ligadas a la dehesa pa a el
gen que codi ica al enzima diacilglice ol O-acil ans e asa 1, enzima incula-
do al ca ác e in il ación de g asa in amuscula , uno de los p incipales a i-
bu os de la calidad de la ca ne pa a el consumido .
Palab as cla e: Diacilglice ol O-acil ans e asa 1, calidad de la ca ne,
acuno de ca ne.
M
MA
AT
TE
ER
RI
IA
AL
L Y
Y M
MÉ
ÉT
TO
OD
DO
OS
S
Toma de mues as y ex acción de ADN. Pa a la ob ención de ADN
genómico se oma on mues as de ma e ial biológico (sang e o músculo) de
indi iduos de las azas Re in a (15),
A ileña Neg a Ibé ica
(5) y
Mo ucha
(5).
La ex acción del ADN genómico se lle ó a cabo po la écnica de
sal ing ou
(Mille
e al.,
1998) o a pa i de un ki come cial de ex acción de Qiagen®
en unción del ipo de mues a.
Ampli icación y secuenciación del gen DGAT1 bo ino. Una ez
ob enido el ADN se ampli icó un agmen o de ADN pe enecien e al gen
DGAT1 (
GenBank Accession AJ318490
). La egión ampli icada del gen
DGAT1 (BTA14) p esen a una longi ud de 727 pb., con eniendo los exones
7, 8, 9 y 10 del gen con sus co espondien es in ones in e medios. Las
ampli icaciones se lle a on a cabo median e eacción en cadena de la poli-
me asa (PCR) en un e mociclado Eppendo (
Eppendo AG
®, Hambu g,
Ge many). Los cebado es empleados en la PCR se diseña on con la aplica-
ción in o má ica
P ime 3
®. Los amplicones se pu i ica on y comp oba on en
un gel de aga osa al 2 % con b omu o de e idio. La eacción de secuencia-
ción se ealizó en un secuenciado au omá ico ABI 3130 (
Applied
Biosys ems
®).
Búsqueda de polimo ismos y a amien o es adís ico. Las
secuencias ue on examinadas y alineadas con el p og ama
Sequenche
.4.6
(®Gene Codes Co po a ion, 1991-2006). Una ez alineadas y compa-
adas con las secuencias publicadas en di e sos a ículos (Thalle
e al
.,
2003) y en el
GenBank
se de ec a on los si ios polimó icos y se de e mina-
on los co espondien es geno ipos. La es imación de las ecuencias ue
ealizada po simple con eo dado el ca ác e codominan e de los ma cado-
es SNPs.
El es udio de asociación en e los dos SNPs y las azas se basó en un es
de máxima e osimili ud u ilizando las ecuencias de los di e en es geno i-
pos pa a cada aza. Las azas secuenciadas y las p oceden es de la biblio-
Conseje ía de Ag icul u a y Pesca
1
13
30
0
Inno ación ecnológica en el ámbi o de la p oducción animal
g a ía (Thalle
e al.
, 2003; Casas
e al.
, 2005) se ag upa on po su ap i ud
en azas ma e nales mejo adas ( azas de la dehesa), azas especia-
lizadas con inen ales y azas especializadas leche as.
R
RE
ES
SU
UL
LT
TA
AD
DO
OS
S Y
Y D
DI
IS
SC
CU
US
SI
IÓ
ÓN
N
Polimo ismos de ec ados
Se han de ec ado dos mu aciones (SNP) en los dos si ios ya desc i os po
o os au o es (Thalle
e al.
, 2003; Casas
e al.
, 2005).
Tabla 1. Desc ipción de los SNPs encon ados en el gen DGAT1 en las azas
bo inas de omen o de la dehesa.
1
13
31
1
Locus DGAT1
Posición 10433 10434
Cambio nucleo ídico G/A C/A
En la igu a 1 se puede obse a el elec o e og ama de es animales, a
pa i de él podemos de e mina los alelos que apa ecen en cada animal. Así,
los animales RET131 y RET128 con homocigo os pa a el alelo A en ambos
si ios (10433 y 10434) mien as que los animales iden i icados como
MOR002 y AVI003 son homocigo os G en el si io 10433 y homocigo os C en
el si io 10434.
Figu a 1. Elec o e og ama en el que se mues an los dos SNPs de ec ados
en el exón 8 del gen DGAT1 en cua o animales analizados.
En la abla 2 se mues an las ecuencias alélicas de apa ición pa a los
dos si ios del gen DGAT1 en las azas au óc onas analizadas.
Tabla 2. Relación de las ecuencias alélicas pa a los si ios p e iamen e des-
c i os en el gen DGAT1 en las azas bo inas de omen o ligadas a la dehesa.
Conseje ía de Ag icul u a y Pesca
1
13
32
2
Gen Posición Alelos RETINTA MORUCHA AVILEÑA N-1 To ales
10433 G 0,20 0,88 0,50 0,41
A 0,80 0,13 0,50 0,59
DGAT1 10434 C 0,20 0,88 0,50 0,41
A 0,80 0,13 0,50 0,59
Tes M-L Chi2=11,64; p=0,003**
En el caso de los dis in os alelos SNP de ec ados en el gen DGAT1, obse -
amos que las ecuencias de p esen ación son muy he e ogéneas en e
azas debido en pa e al pequeño amaño de la población en es udio. Las
di e encias en e azas son signi ica i as al 99%.
También se pone de mani ies o el desequilib io de ligamien o exis en e
en e los si ios 10433 y 10434 a la is a de las ecuencias de p esen ación
alélica en ambas posiciones es o es debido a su p oximidad den o del
mismo gen.
Compa ación de las di e en es azas y ipos p oduc i os
En úl imo luga se ha ealizado una compa ación a pa i de las ecuen-
cias alélicas de cada uno de los dos si ios analizados de las di e en es azas
( an o las secuenciadas en es e es udio como las ob enidas desde los aba-
jos de o os au o es). Pa a ello se han ag upado las azas siguiendo di e-
en es c i e ios. Así se han compa ado las azas de
ap i ud cá nica (Re in a,
Mo ucha, A ileña N-I y Cha olais) o leche a (Hols ein)
pudiéndose obse a
( abla 3) que exis en di e encias signi ica i as en e ambos colec i os.
Tabla 3. Compa ación de ecuencias de los alelos analizados del gen DGAT1
en e las azas de ap i ud cá nica y las de ap i ud leche a.
Gen Posición Alelos Ap i ud cá nica Ap i ud leche a
10433 G 22,1% 44,6%
A 77,9% 55,4%
DGAT1 10434 C 22,1% 44,6%
A 77,9% 55,4%
Tes M-L Chi2=7,97; p=0,004**
Inno ación ecnológica en el ámbi o de la p oducción animal
La
compa ación de las azas au óc onas de omen o ligadas a la dehesa
con los animales de una aza con inen al eu opea especializada
en c eci-
mien o mag o (Cha olais) de e mina un mayo ni el de con enido lipídico en
las azas ma e nales, pues o que según los abajos de Thalle
e al
. (2003),
el
alelo A
en ambos si ios es á inculado a unos meno es ni eles de deposi-
ción g asa en di e en es ejidos (en con aposición a la combinación de ale-
los GC en las posiciones 10433 y 10434), siendo además las di e encias es a-
dís icamen e muy signi ica i as en es e caso ( abla 4). A la combinación de
alelos GC en dichas posiciones se la conoce como
alelo K
dado siemp e
siguen el mismo pa ón a la ho a de he eda se. Es a a iabilidad en el g ado
de in il ación g asa se debe a que el
alelo A
codi ica el aminoácido alanina
mien as que el
alelo K
de e mina una lisina. Es o pod ía explica en pa e,
la meno jugosidad a ibuida a las azas con inen ales cuando se explo an
en pu eza ( ambién la en aja del c uzamien o indus ial con las azas
ma e nales españolas).
Tabla 4. Compa ación de ecuencias de los alelos analizados del gen DGAT1
en e las azas ma e nales selec as españolas y las azas con inen ales eu o-
peas especializadas.
1
13
33
3
Gen Posición Alelos Ma e nales españolas Especializadas
con inen ales
10433 G 40,6% 11,1%
A 59,4% 88,9%
DGAT1 10434 C 40,6% 11,1%
A 59,4% 88,9%
Tes M-L Chi2=9,93; p=0,001***
C
CO
ON
NC
CL
LU
US
SI
IO
ON
NE
ES
S
Aún es p on o pa a de e mina en qué si uación se encuen an las 3 azas
ma e nales en lo que a ecuencias alélicas de es e gen se e ie e ya que el
análisis compa a i o de los dos si ios p e iamen e desc i os, e ela la nece-
sidad de amplia el amaño mues al.
De cualquie modo se ía ecomendable, en el caso de que las ecuencias
pe sis ie an, inclui al alelo K como obje i o de selección en los p og amas
de mejo a de cada una de las azas au óc onas analizadas ya que se incu-
la a unos mayo es ni eles de deposición y g asa y a una mayo jugosidad
po an o. Lo que sí pa ece e iden e es la exis encia de un desequilib io de
ligamien o en e los dos si ios aunque dada a la p oximidad ísica exis en e
en e ambos e a lo que cabía espe a .

Todos es os es udios pod ían i encaminados a p oba en un u u o la e i-
cacia de las p uebas pa a la de e minación de ma cado es gené icos asocia-
dos a ca ac e es cuan i a i os inculados a la calida de la ca ne en nues as
azas. Finalmen e, una ez de e minado el polimo ismo pa a ambos si ios
de es e gen, se ecomienda un análisis más de allado y con una ampliación
del amaño de mues a y del núme o de azas en es udio pa a pode hace
una ca ac e ización más iable y comple a de las azas au óc onas de omen-
o.
R
RE
EF
FE
ER
RE
EN
NC
CI
IA
AS
S B
BI
IB
BL
LI
IO
OG
GR
RÁ
ÁF
FI
IC
CA
AS
S
Casas, E., S. N. Whi e, D. G. Riley, T. P. L. Smi h, R. A. B enneman, T. A.
Olson, D. D. Johnson, S. W. Coleman, G. L. Benne , and C. C. Chase, J .
(2005). Assessmen o single nucleo ide polymo phisms in genes esiding
on ch omosomes 14 and 29 o associa ion wi h ca cass composi ion ai s
in Bos indicus ca le. J. Anim. Sci. 83: 13 - 19.
Mille , S. A., Dykes, D. D. and Polesky, H. F. (1988). A simple sal ing ou p o-
cedu e o ex ac ing DNA om human nuclea ed cells. Nucleic Acids Res.
16: 1215.
Thalle , G., Kühn, C., Win e , A., Ewald, G., Bellmann, O., Wegne , J., H.
Zühlke and F ies, R. (2003). DGAT1, a new posi ional and unc ional can-
dida e gene o in amuscula a deposi ion in ca le. Animal Gene ics, 34:
354 - 357.
Quaas R.L., J. Li1, R.M. Thallman, A.L. Van Eenennaam, R.L. Fe nando and
C. Gill (2006). Valida ion o comme cial DNA es s o quan i a i e bee
ai s. 8 h Wo ld Cong ess on Gene ics Applied o Li es ock P oduc ion.
Belo Ho izon e, MG, B asil.
Conseje ía de Ag icul u a y Pesca
1
13
34
4