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Ap oximación mo ológica y molecula al conocimien o
de las o iu as (Echinode ma a: Ophiu oidea) en
el Pa que Nacional Ma ino Las Baulas (Pací ico No e, Cos a Rica)
And ea Va ela-Sánchez1, José Templado1* & Annie Macho dom1
1. Museo Nacional de Ciencias Na u ales (MNCN-CSIC). José Gu ié ez Abascal, 2. 28006 Mad id, España;
[email p o ec ed], [email p o ec ed], [email p o ec ed]
* Co espondencia
Recibido 11-X-2019. Co egido 18-III-2020. Acep ado 23-V-2020.
ABSTRACT: Mo phological and molecula app oaches o he s udy o ophiu oids (Echinode ma a:
Ophiu oidea) a Las Baulas Ma ine Na ional Pa k (No h Paci ic, Cos a Rica). In oduc ion: In o ma ion
on he class Ophiu oidea is e y sca ce, despi e i consis ing o he highes numbe o species wi hin he phy-
lum Echinode ma a, wi h up o 2 100 species. In pa icula , he e a e ha dly any s udy ocused speci ically o
ophiu oids ound along he Paci ic coas o Cos a Rica. Objec i e: Mo phological and gene ic cha ac e iza ion
o ophiu oids o he shallow in e idal and subli o al a eas o Las Baulas Ma ine Na ional Pa k (Paci ic coas o
Cos a Rica). Me hods: Sampling was conduc ed be ween Janua y and Ap il o 2018 a se en loca ions: Pun a
del Mo o, Playa Ca bón, Playa Ven anas, Playa G ande, Playa Tama indo Ciudad, Playa Tama indo and Playa
Langos a. A o al o 214 ophiu oids we e cha ac e ized using axonomic keys and o iginal desc ip ions and a
molecula analysis o he mi ochond ial Cy och ome oxidase I (COI) gene. Resul s: An analysis o mo phologi-
cal and gene ic cha ac e s indica es ha 11 species a e p esen in he s udy si e. Fou may ep esen new species,
nine cons i u e new eco ds o he a ea and one (Ophioph agmus a . s ella us) is eco ded in Cos a Rica o he
i s ime. Addi ionally, ju enile indi iduals o di e en species we e iden i ied, and wo c yp ic species we e
de ec ed. Conclusions: Acco ding o he molecula analysis, COI is use ul o delimi ophiu oid species and o
es ablish phylogene ic ela ionships a lowe (gene a and species) bu no highe axonomic le els. This s udy
also p o ides images and mo phological ema ks o u u e compa a i e s udies.
Key wo ds: Echinode ma a; ba code; ophiu oids; molecula iden i ica ion; Eas e n T opical Paci ic.
Cos a Rica es econocida po su imp e-
sionan e iqueza biológica (Obando-Acuña,
2002; MINAE – SINAC - CANAGEBIO –
FONAFIFO, 2018). Sin emba go, mien as
la biodi e sidad e es e ha sido po lo gene-
al bien documen ada, el conocimien o de la
con apa e ma ina es incomple o, habiéndose
cen ado mayo i a iamen e en el es udio de las
o ugas ma inas (Al a ado, He e a, Co ales,
Asch, & Paaby, 2011; San id ián-Tomillo e al.,
2017). Una ecopilación de oda la in o mación
exis en e has a la echa sob e la biodi e sidad
ma ina del país se ecoge en la monog a ía de
Weh mann y Co és (2009), la cual cons i uye
una impo an e base de pa ida pa a cualquie
in es igación que se desa olle en es e ámbi o.
Los equinode mos son uno de los p in-
cipales componen es de la mac o auna. En
Va ela-Sánchez, A., Templado, J., & Macho dom, A. (2020). Ap oximación mo ológica y
molecula al conocimien o de las o iu as (Echinode ma a: Ophiu oidea) en el Pa que
Nacional Ma ino Las Baulas (Pací ico No e, Cos a Rica). Re is a de Biología T opical,
68(3), 803-817.
ISSN Imp eso: 0034-7744 ISSN elec ónico: 2215-2075
804
Re . Biol. T op. (In . J. T op. Biol.) • Vol. 68(3): 803-817, Sep embe 2020
la mayo pa e de los ecosis emas ben ónicos
o man pa e impo an e de las cadenas ó icas
del océano y ocupan los más di e sos oles
uncionales (Hughes, B unne , Cook, Kelly,
& Wilson, 2012). A pesa de ello, su conoci-
mien o es oda ía muy incipien e en la Región
Panámica (Al a ado, Solís-Ma ín, & Ahea n,
2010; Al a ado, Ba aza, & Sancho-Mejías,
2013) y pa icula men e de icien e en el caso
de las o iu as. Igualmen e, son muy pocas las
publicaciones dedicadas a los equinode mos de
la e ien e pací ica de Cos a Rica (Al a ado
& Fe nández, 2005; Al a ado & Chi iboga,
2008; Al a ado & Co és, 2009; Azo ei a e al.,
2017), ninguna e e ida especí icamen e a los
Ophiu oidea (Al a ado & Fe nández, 2005).
Los da os apo ados sob e es e g upo po
Al a ado e al. (2017) p oceden de la exhaus-
i a e isión de los ejempla es deposi ados en
dis in os museos y en di e sas bases de da os.
So p enden emen e, a pesa de su impo -
ancia ecológica como educ o es de la eu o i-
zación (Gi aldi e al., 2017) y bioindicado es de
la calidad del agua (Hughes, 1998) en e o os,
y de cons i ui la clase de equinode mos más
di e sa, el núme o de publicaciones sob e es e
g upo es muy in e io con espec o a las clases
As e oidea (es ellas de ma ) o Echinoidea (e i-
zos). Lo mismo sucede espec o a la in o ma-
ción sob e secuencias nucleo ídicas disponible
en GenBank. Sin duda, ello se debe a la di i-
cul ad en la iden i icación de las especies. De
hecho, la axonomía a ni el especí ico de los
Ophiu oidea sigue siendo en la ac ualidad muy
de icien e e ines able. Po lo gene al, la des-
c ipción de nue as especies en el pasado se ha
basado en escasos ca ac e es, p incipalmen e
de las es uc u as esquelé icas ex e nas, aunque
en los úl imos años se ha abo dado una ede i-
nición de los dis in os ca ac e es mo ológicos
y discu ido su u ilidad axonómica (Ma yno ,
2010; Thuy & S öh , 2016). Po o o lado, la
mayo pa e de las diagnosis de las especies se
basa en las ases adul as, mien as que las ases
ju eniles solo se han desc i o en apenas medio
cen ena de especies, a pesa de que los ca ac e-
es de los ju eniles di ie en conside ablemen e
de los de los adul os (S öh , 2005).
La clase Ophiu oidea comp ende al ededo
de 2 100 especies econocidas como álidas
(S öh , O’Ha a, & Thuy, 2012) epa idas en 33
amilias ac uales de acue do con la ecien e cla-
si icación p opues a po O’Ha a, S öh , Hugall,
Thuy y Ma yno (2018), aunque se conside-
a que oda ía quedan po desc ibi algunos
cen ena es de ellas. En cualquie caso, es a
clasi icación se encuen a ac ualmen e en ase
de o al ees uc u ación (Thuy & S öh , 2016;
O’Ha a, Hugall, Thuy, S öh , & Ma yno ,
2017; O´Ha a e al., 2018). Son muy pocos los
es udios molecula es ealizados cen ados en
ni eles axonómicos in e io es, algunos de los
cuales mues an la exis encia de conjun os de
especies c íp icas (e.g. O’Ha a, By ne, & Cis-
e nas, 2004; S öh , Boissin, & Chenuil, 2009;
Naugh on, O’Ha a, Apple on, & Cis e nas,
2014; Boissin, Egea, Fé al, & Chenuil, 2015)
que equie en de una adecuada di e enciación
y desc ipción mo ológica.
El p esen e es udio se ha cen ado en los
Ophiu oidea del li o al del Pa que Nacional
Ma ino las Baulas (PNMLB). La ca ac e iza-
ción ecológica de su sec o ma ino apo ada po
el p oyec o BIOMARCC-SINAC-GIZ (2015)
de apoyo al Sis ema Nacional de Á eas de
Conse ación (SINAC), cons i uye la única
apo ación al conocimien o de la biodi e sidad
ma ina de es e Pa que. En es e p oyec o se des-
aca la al a di e sidad de equinode mos y, en e
ellos, se mencionan dos especies de o iu as:
Ophiocoma ae hiops y Ophiocoma alexand i,
aho a conside ada como Ophiocomella alexan-
d i (O’Ha a e al. 2018). Asimismo, Al a ado
y Fe nández (2005) señala on que las o iu as
e an el g upo de equinode mos más abundan e
en el Pa que Nacional Ma ino Ballena (Pací i-
co, Cos a Rica) y señala on que es as dos úl i-
mas especies e an las más ecuen es.
Los obje i os conc e os que se pe siguen
con es e es udio son: i) ca ac e iza mo ológi-
ca y gené icamen e las especies de o iu as de
la anja in e ma eal del PNMLB, ii) es ablece
la posición ilogené ica de las especies eco-
lec adas median e las secuencias del ma cado
mi ocond ial ci oc omo c oxidasa subunidad I
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(COI) y iii) es a la u ilidad de dicho ma cado
a ni el de géne o y especie.
MATERIALES Y MÉTODOS
Á ea de es udio: El mues eo se ealizó en
el PNMLB, ubicado en la p o incia de Guana-
cas e, en el Pací ico No e de Cos a Rica. Es e
Pa que se ex iende ap oximadamen e 22 km
sob e el li o al ma ino has a una co a ba imé-
ica de 40 m, aba cando las playas Pun a del
Mo o, Ca bón, Ven anas, G ande, Tama indo
y Langos a, con mangla es en Tama indo y
Ven anas. Incluye bosques, playas, algunos
acan ilados, zonas in e ma eales ocosas, es e-
os y mangla es. La o alidad del pa que cub e
una supe icie de 26 788 ha, de la cual el 97 %
(26 056.58 ha) es á ea ma ina (BIOMARCC-
SINAC-GIZ 2015). La conse ación de es e
pa que nacional ma ino es impo an e, dado
que igu a como un luga de anidamien o de la
o uga baula o laúd (De mochelys co iacea),
especialmen e en Playa G ande (No dmoe e
al., 2004; BIOMARCC-SINAC-GIZ, 2015).
La zona in e ma eal donde se desa olló el
mues eo en es e abajo es á in luenciada po
ma eas semidiu nas con un ango de ampli ud
de has a unos es me os (Lizano, 2006) y se
di ide en dos subsis emas: la zona in e ma eal
ocosa y la zona in e ma eal a enosa (BIO-
MARCC-SINAC-GIZ, 2015).
Toma de mues as: El pe iodo de ecolec-
a se ex endió en e ene o y ab il de 2018 en la
zona in e ma eal. El mues eo se lle ó a cabo
du an e la ma ea baja, aba cando los di e en es
hábi a s p esen es (sus a o ocoso, a enoso y
a eci e mue o). Se ealizó una iden i icación
p elimina de los ejempla es obse ados y se
es ablecie on 12 mo oespecies, e ique adas
como Opae, OpA, OpB, OpC, OpD, OpE,
OpF, OpG, OpH, OpI, OpJ y OpK, según se
iban encon ando. Se ex aje on agmen os
de b azo de cada o iu a, así como indi iduos
comple os de cada mo o ipo conside ado. El
agmen o de b azo co ado no ue mayo de la
mi ad de és e, asegu ando así la supe i encia
de los ejempla es de es udio. Se ecolec a on
inalmen e mues as de 214 ejempla es en o al
(Apéndice 1), de los cuales 15 ue on indi i-
duos comple os. Empezando po el á ea más
sep en ional del pa que, en Pun a del Mo o
se oma on 17 mues as, en Playa Ca bón y
Playa G ande, 33, en Playa Ven anas, 33. En
Playa Tama indo se hizo una dis inción en e
dos zonas pa a la ecolec a, debido a que una
de ellas iene g an aglome ación de u is as
po encon a se en á ea ho ele a (denomina-
da en es e es udio Playa Tama indo Ciudad).
En es a playa se ecolec a on mues as de
37 ejempla es, y en la zona más alejada, sin
aglome ación (denominada en es e es udio
simplemen e como Playa Tama indo), 26. Po
úl imo, en Playa Langos a, ubicada más al su
del PNMLB, se ob u ie on 35 mues as. Así,
el mues eo se desa olló en sie e pun os del
pa que, pa a aba ca oda su línea de cos a. De
cada o iu a se omó una o og a ía, an o do sal
como en al, an es de su libe ación al ma
o de ija los indi iduos comple os, omando
además las coo denadas de cada pun o de
colec a (Apéndice 2). Las mues as se ija on
al momen o en e anol absolu o. Todos los da os
de la ecolec a se almacena on en la base de
da os EPICOLLECT. Las mues as se deposi-
a on en el Museo Nacional de Ciencias Na u-
ales de Mad id (MNCN-CSIC) y se conse an
en e anol absolu o a 5 ºC.
Iden i icación mo ológica: Pa a las
iden i icaciones mo ológicas de los indi i-
duos se u ilizó un mic oscopio es e eoscópico
LEICA MZ16 A, con oma de o og a ías de los
p incipales ca ac e es diagnós icos, y las cla es
axonómicas y desc ipciones exis en es (p inci-
palmen e de Cla k, 1948; Booloo ian & Leigh-
on, 1966; B usca, 1980; G anja-Fe nández e
al., 2014; Hendle , 1996; McClendon, 1909;
Nielsen, 1932 y Ziesenhenne, 1940, en e
o os). Se a endió a los ca ac e es diagnós icos
adicionales ( e Hendle , 1996) ede inidos y
ac ualizados po S öh e al. (2012): disco do -
sal, escudos adiales, placas p ima ias, placas
do sales, placas acceso ias y placas la e ales
de los b azos, espinas del b azo, disco en-
al, hendidu as bu sá iles, mandíbulas, papilas
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o ales, dien es, escudo o al, escudos ado ales,
placas en ales de los b azos y escamas en-
acula es. Pa a la nomencla u a especí ica se
han seguido los c i e ios de S öh , S., O’Ha a,
T., & Thuy, B. (2020) y pa a su clasi icación
la p opues a ecien e de O’Ha a e al. (2018).
Análisis molecula es: A pa i de seg-
men os de los b azos se ob u o el ejido pa a la
ex acción del ADN median e el ki de ex ac-
ción BioSp in 15 DNA Blood Ki (Qiagen) de
acue do con su p o ocolo, con una ex ensión
del iempo de homogeneización con p o ei-
nasa K de al ededo de 18 ho as y u ilización
de ARNasa. Se ampli ica on agmen os del
gen mi ocond ial ci oc omo c oxidasa subuni-
dad I (COI). Los cebado es u ilizados ue on
CO1a-H (5’-TGT ATA RGC GTC TGG RTA
GTC-3’), CO1 -L (5’- CCT GCA GGA GGR
GGA GAY CC-3’) modi icados de Palumbi e
al. (2002) y COI-O -Rin (5’-TGA ATA ACG
ACG TGG CAT TC-3’) diseñado en es e es u-
dio. La pa eja de cebado es CO1 -L /CO1a-H
gene a secuencias de 649 pa es de bases (pb),
mien as que la pa eja CO1 -L /COI-O -Rin
gene a secuencias de 629 pb, en ambos casos
as elimina la egión de los cebado es. Cada
ampli icación se lle ó a cabo en un olumen
de 50 µl con 1 o 2 µl de ADN diluido de 20 a
50 eces, con 5 µl de ampón 10x con MgCl2,
1 µl de dNTPs 40 mM, 1 µl de cada cebado 10
µM y 0.3 µl de Taq polime asa de 5 U/µl. Las
condiciones de las PCR ue on las siguien es:
2 min a 94 ºC, seguido po un ciclo de desna-
u alización de 45 s a 94 ºC, anillamien o de
45 s a 45 ºC, elongación de 1 min a 72 ºC y
un pos -ciclo de 10 min a 72 ºC. Los ciclos de
desna u alización, anillamien o y elongación se
epi ie on 40 eces. Los agmen os de ADN
ampli icados se pu i ica on co ando y il an-
do las egiones de las bandas ampli icadas as
su mig ación en un gel de aga osa al 1.5 % en
TA (TRIS-acé ico, pH = 8) y se en ia on pa a
su secuenciación a Secugen S. L. (Mad id).
Median e el p og ama Sequenche 4.1.4 se edi-
a on las secuencias ob enidas.
Análisis ilogené icos: En p ime
luga , pa a comp oba que el gen COI es
ilogené icamen e in o ma i o pa a es e g upo,
se ealizó un es de sa u ación a pa i de los
da os de di e gencia (% en e cada pa de indi-
iduos y las ansiciones y ans e siones en
cada posición del codón ob enidos con PAUP*
(Swo o d, 2001). Se c eó una abla en Excel
con esos da os y se gene a on los g á icos pa a
los cambios de cada posición del codón a in
de comp oba si exis e sa u ación del ma cado .
Pa a los análisis ilogené icos se añadie on
115 secuencias ob enidas en GenBank (Apén-
dice 3) a las 209 gene adas en es e abajo,
ob eniendo así una ma iz de 324 secuencias.
Se ija on como g upo ex e no los as e oideos
Achan as e planci y Pa i ia minia a. Las ela-
ciones ue on deducidas po in e encia baye-
siana u ilizando M Bayes 3.2.1 (Ronquis
& Huelsenbeck, 2003). Se analiza on cua o
cadenas de Ma ko -Mon e Ca lo (MCMC)
pa a es ima las p obabilidades pos e io es en
dos ca e as en pa alelo du an e 150 millones
de gene aciones con un comienzo alea o io y
eniendo en cuen a las es posiciones de los
codones. Se ex aje on los pa áme os y á boles
cada 15 000 gene aciones pa a ob ene el á bol
consenso (MCC, “maximum clade c edibili-
y”) que se edi ó en FigT ee (Rambau , 2016)
(Apéndice 4). Po úl imo, con el so wa e
MEGA X se calcula on las dis ancias gené icas
in a e in e especí icas.
Delimi ación de especies: Se gene a on
seis ma ices, ag upando en cada ma iz indi-
iduos del mismo géne o o géne os p óximos,
siemp e o mando un g upo mono ilé ico. Con
jModel es se ob u ie on los modelos e olu i-
os que mejo se ajus a on a los da os.
Pa a la delimi ación de las especies se u i-
lizó el mé odo bGMYC (“Gene alized Mixed
Yule Coalescen ”) en un ma co bayesiano. Pa a
lle a lo a cabo se necesi a un á bol ul amé ico,
que aquí ue ob enido con el p og ama BEAST
(D ummond & Rambau , 2007), u ilizando
un eloj molecula elajado (“unco elec ed
elaxed clock”) con un p oceso de especiación
de mues eo incomple o (“specia ion: bi h-
dea h incomple e sampling”), comenzando con
un á bol alea o io e incluyendo el modelo
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ob enido con jModel es . El análisis pa a cada
ma iz se co ió un núme o de éplicas su icien-
e pa a que las dos cadenas de análisis hubie an
con e gido. En odos los casos ue de 100
millones de gene aciones, sal o pa a Ophione-
eis, donde el núme o de éplicas de 50 millo-
nes ue su icien e. También se comp obó la
es abilidad de los pa áme os ob enidos y si su
mues eo ue su icien e median e el p og ama
T ace (Rambau , Sucha d, Xie, & D ummond,
2014). Se ob u o el á bol MCC con T eeAn-
no a o (D ummond & Rambau , 2007). Final-
men e, la delimi ación de especies median e
bGMYC se lle ó a cabo en R (Reid & Ca s ens,
2012). Pa a e i a la sob e- y subes imación de
especies, se conside ó una p obabilidad de co-
especi icidad de 0.5, la cual ep esen a la media
pos e io del análisis (Reid & Ca s ens, 2012).
Los pa áme os u ilizados pa a cada ma iz,
asa de cambio en la coalescencia (ph1 y ph2),
asa de cambio en la especiación (pc1 y pc2),
el núme o de especies po enciales ( 1 y 2), los
pun os de comienzo (s a ) y la escala (scale) se
especi ican en la Tabla 1.
RESULTADOS
Análisis ilogené icos: En el a amien o
bayesiano la des iación en e las dos ca e as
ue meno de 0.01 y con T ace se comp obó
que los alo es de ESS (“e ec i e simple
size”) ue an mayo es de 200, po lo que se
pudo con i ma la con e gencia de ambas
ca e as del análisis y un mues eo su icien e
de los dis in os pa áme os.
En el ilog ama ob enido po M Bayes
(colapsado en la Fig. 1 y de allado en el Apén-
dice 4) se obse a que en un clado con apoyo
de 1 de p obabilidad pos e io (PP) se si ua on
OpH y OpJ, con amas muy co as en e sí,
jun o con indi iduos del géne o Ophiode ma.
Los indi iduos OpF se elaciona on con los
dos ejempla es de Ophiocomella alexand i
con un apoyo de PP ambién máximo. Los
denominados como Opae y OpC se posicio-
na on jun o a Ophiocoma ae hiops den o del
mismo clado con una PP de 0.93. Los e ique-
ados como OpD, OpA_039 y OpB o ma on
un g upo mono ilé ico de al o apoyo (PP= 1)
como g upo he mano de Ophione eis e icu-
la a y Ophione eis annula a (PP= 0.97). Las
mues as OpA y OpE se ag upa on mono ilé i-
camen e con la máxima p obabilidad asociados
como g upo he mano con dos indi iduos del
géne o Ophioph agmus, sal o OpA_193, más
alejado de los an e io es y o mando una poli-
omía con el g upo an e io , Mic ophiopholis
g acillima y Amphipholis linopneus i. En es e
pequeño clado, OpA_004 se posicionó como
g upo he mano del es o (OpA_008, OpA_124,
OpA_156 y OpE_040). Los indi iduos OpK
o ma on un g upo mono ilé ico (PP = 1)
con especies del géne o Ophiac is, dos con
O. simplex, una con O. ub opoda y o a sin
TABLA 1
Pa áme os u ilizados pa a cada g upo en bGMYC (“Gene alized Mixed Yule Coalescen ”)
TABLE 1
Pa ame e s used o each g oup in bGMYC (“Gene alized Mixed Yule Coalescen ”)
G upo ph1 ph2 pc1 pc2 1 2 s a scale
Ophione eis 0 5 0 4 1 8 (2,2,6) (1,1,0.3)
Ophio h ix 0 1 0 1 1 25 (1,1,13) (1,1,0.3)
Ophiocoma 0 5 0 1.5 1 10 (3,0.6,5) (3,5,0.3)
Amphiu idae 0 5 0 4 1 8 (2,2,6) (1,1,0.3)
Ophiode ma 0 6 0 20 1 10 (2,2,5) (1,1,0.3)
Ophiac is 0 2 0 2.5 1 20 (1,1,16) (1,1,0.3)
ph1, ph2: asa de cambio en la coalescencia. pc1, pc2: asa de cambio en la especiación. S a : pun os de comienzo. Scale:
escala.
ph1, ph2: coalescen a e. pc1, pc2: specia on a e. S a : s a poin s, Scale.

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de ini a ni el de especie. Po úl imo, an o los
OpG como OpI se si ua on jun o a indi iduos
del géne o Ophio h ix, los p ime os jun o a
Ophio h ix spicula a (PP = 1) y el segundo
jun o a Ophio h ix linea a (PP = 0.96).
Como isión gene al, es a ilogenia no
esul ó aco de con las ca ego ías axonómicas
supe io es, mos ó un g an núme o de poli o-
mías a a ios ni eles y p esen ó muchas amas
con alo es de p obabilidad muy bajos. Los
es s de sa u ación indica on una cie a sa u a-
ción en di e gencias supe io es al 15 - 20 %.
Los al os alo es de di e gencia encon a-
dos en e in eg an es del mismo géne o y en e
las dis in as amilias pudie on se los esponsa-
bles de escasa de inición en las elaciones basa-
les del g upo. De hecho, la di e gencia media
in aespecí ica ue de 1.5 %, y la media in e es-
pecí ica den o del mismo géne o de 20.5 %. La
di e gencia en e amilias osciló en un ango
que ue del 19 al 28 %. OpJ y OpH di e gie on
en un 0.31 %. En el linaje de Ophiode ma lon-
gicauda la mayo dis ancia ue de 7.51 %. La
asociación de OpB y OpD_112 p esen ó una
dis ancia en e ellas de 0.46 %, más alejadas
con el es o de las OpD, con una di e gencia de
OpD_083 de 5.4 % y 8.6 %, espec i amen e.
Ophione eis annula a se dis anció de las OpD
con al ededo del 10 % de di e gencia. En el
g upo de OpA (sal o OpA_193) y OpE, esul ó
una dis ancia mayo en e OpA_004 y el es o:
de media se encon ó a una dis ancia de las
demás de 1.9 % y el es o en e sí de 1.1 %.
Po úl imo, la di e gencia den o del linaje del
géne o Ophiac is osciló en e 0.86 y 1.72 %.
Delimi ación de especies: En el géne o
Ophiode ma, OpH_139 y OpJ_194 esul a-
on ag upadas como una misma especie y
sin asociación con ninguna de las ob enidas
del GenBank. Las es secuencias de Ophio-
de ma longicauda ob enidas de GenBank se
di e encia on en dos g upos, sepa ando O.
longicauda (KU895218) de las o as dos. En
el g upo en el que había ep esen an es de
Ophiocoma ae hiops, se añadie on las mues-
as designadas como Opae y OpC como
una misma especie, como ocu ió pa a los
dos indi iduos de Ophiocomella alexand i y
las OpF. Todas las OpD jun o con OpA_039
o ma on un g upo, excep o OpD_112, que
o mó o o jun o con OpB. Todas las OpA se
ag upa on en una misma especie con OpE,
excep uando a OpA_193. Los dos indi iduos
de Ophiac is simplex, Ophiac is sp., Ophiac is
ub opoda, OpK_209, OpK_210 y OpK_210
se conside a on como una misma especie. La
p obabilidad de que O. ub opoda ue a una
especie di e en e a las an e io es ue de un 2 %.
Ophio h ix spicula a se asoció a las OpG. Po
úl imo, OpI con o mó un linaje p opio. Así, el
mé odo bGMYC de delimi ación de especies,
p e ia a la iden i icación mo ológica, dio
como esul ado 10 especies en el PNMLB:
OpH + OpJ = Ophiode ma sp., Opae + OpC
= Ophiocoma ae hiops, OpF = Ophiocomella
alexand i, OpD + OpA_039 = Ophione eis
sp.1, OpD_112 + OpB = Ophione eis sp.2,
OpA + OpE = Amphiu idae inde 1, OpA_193
= Amphiu idae inde 2, OpK = Ophiac is sp.,
OpG = Ophio h ix spicula a, OpI = Ophio h ix
udis.
Iden i icación mo ológica de las espe-
cies: La in o mación apo ada po los análisis
ilogené icos ob enidos y la delimi ación de
especies, dis inguen 10 especies. Añadiendo
la iden i icación mo ológica se llega a que
las 12 mo oespecies iden i icadas p elimi-
na men e du an e la ecolec a ep esen an 11
axones de ango especí ico epa idos en dos
ó denes (Ophiacan hida y Amphilepidida), seis
amilias (Ophiocomidae, Ophiode ma idae,
Ophione eididae, Ophio ichidae, Amphiu i-
dae y Ophiac idae) y ocho géne os (Ophioco-
ma, Ophiocomella, Ophiode ma, Ophione eis,
Ophio ix, Mic ophiopholis, Ophioph agmus y
Ophiac is) ep esen ados en la Tabla 2.
En el Apéndice 5 pa a cada especie se
apo an o og a ías del disco y de los b azos
(po sus ca as o al y abo al), las sinonimias
(en su caso), obse aciones pe inen es sob e
los ejempla es e isados, da os de dis ibución
geog á ica y ci as en Cos a Rica, así como
los da os disponibles sob e hábi a s. En lo
e e en e al “ma e ial es udiado” se indica
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Re . Biol. T op. (In . J. T op. Biol.) • Vol. 68(3): 803-817, Sep embe 2020
Fig. 1. Á bol colapsado esul an e de la in e encia bayesiana basado en el gen COI. En la leyenda se indican los dis in os
ó denes y amilias ep esen ados (el á bol de allado se mues a en el Apéndice 4).
Fig. 1. Collapsed ee esul ing om bayesian in e ence based on he COI gen. The di e en o de s and amilies a e
indica ed in he legend ( he de ailed ee is shown in Appendix 4).
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el ejempla comple o que se u ilizó pa a la
desc ipción mo ológica.
Ap oximación a la iqueza y dis ibu-
ción en PNMLB: En el Apéndice 6 se especi-
ica el núme o de ejempla es ecolec ados de
cada especie en cada localidad. En esumen, la
di e sidad de especies encon adas de o iu as
a ió según la localidad. Las playas con mayo
di e sidad ue on Playa Tama indo Ciudad,
con sie e especies, y Playa Langos a, con seis.
Le siguen en di e sidad Playa Ven anas y Playa
G ande con cinco especies, y Playa Ca bón y
Playa Tama indo, con cua o. El meno núme o
de especies obse ado ue en Pun a del Mo o
con es. La especie más abundan e en el Pa -
que esul ó se Ophiocoma ae hiops, seguida
de Ophiocomella alexand i, Ophione eis a .
annula a 1 y Ophio h ix spicula a. El es o de
las especies se encon a on muy poco ep esen-
adas. La mayo abundancia de O. ae hiops se
obse ó en Playa Langos a, donde los indi i-
duos o maban aglome aciones masi as.
En cuan o a los hábi a s, O. ae hiops y
Ophioph agmus a . s ella us ue on las únicas
especies encon adas en los es sus a os dis-
ponibles. En gene al, el sus a o p edominan e
ue el ocoso (47.20 %), seguido del a enoso
(39.72 %) y el a eci e mue o (13.08 %). En
el Apéndice 7 se mues an los po cen ajes de
indi iduos ecolec ados en cada sus a o.
DISCUSIÓN
Se apo a el egis o de o iu as obse a-
das en el Pa que Nacional Ma ino las Baulas
y se asignan los ejempla es encon ados a
once especies, de las que nue e cons i uyen
nue os apo es pa a el Pa que: Ophione eis
a . annula a 1, Ophione eis a . annula a
2, Mic ophiopholis pla ydisca, Mic ophiopho-
lis pun a enae, Ophioph agmus a . s ella-
us, Ophio h ix (Ophio h ix) udis, Ophio h ix
(Ophio h ix) spicula a, Ophiode ma a . pana-
mensis y Ophiac is simplex, y dos, Ophiocoma
ae hiops y Ophiocomella alexand i, que ya
se habían documen ado p e iamen e (BIO-
MARCC-SINAC-GIZ, 2015). Asimismo, se
apo an 209 nue as secuencias del ma ca-
do COI pa a que puedan se de u ilidad en
u u as in es igaciones.
Debido a que el obje i o del es udio e a
p incipalmen e cuali a i o, los da os de dis-
ibución y abundancias deben oma se como
una ap oximación. La disponibilidad de los
TABLA 2
Especies iden i icadas en el PNMLB y su clasi icación axonómica según las e idencias mo ológicas
y molecula es (se indica ambién las cla es de mo oespecie co espondien es a cada una)
TABLE 2
Iden i ied species in he PNMLB and hei axonomic classi ica ion acco ding o mo phological
and molecula e idence (mo phospecies keys a e also indica ed)
O den Familia Géne o Especie E ique as
Amphilepidida Amphiu idae Mic ophiopholis pun a enae OpA_193
pla ydisca OpA_004
Ophioph agmus a . s ella us OpA, OpE
Ophiac idae Ophiac is simplex OpK
Ophione eididae Ophione eis a . annula a 1 OpD, OpA_039
a . annula a 2 OpD_112, OpB
Ophio ichidae Ophio h ix spicula a OpG
udis OpI
Ophiacan hida Ophiocomidae Ophiocoma ae hiops Opae, OpC
Ophiocomella alexand i OpF
Ophiode ma idae Ophiode ma a . panamensis OpH, OpJ
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di e en es sus a os no es equilib ada en las dis-
in as localidades. Además, el meno núme o de
especies p esen e en a eci e mue o (13.08 %)
puede esponde a la di icul ad de mues eo en
ese sus a o, ca ac e izado po p esen a mul i-
ud de ca idades y úneles in e nos cuyo único
acceso se ía la des ucción del p opio hábi a .
Po el con a io, el a eci e mue o pa ece
o ece un g an núme o de nichos y supe icie
que ocupa . Asimismo, la mayo abundancia de
indi iduos ecolec ados en el sus a o ocoso
puede debe se a la acilidad de localiza los en
ese medio le an ando las ocas suel as.
Según los esul ados ob enidos, el PNMLB
puede conside a se con una al a di e sidad de
o iu as si se compa a con o as localidades del
Pací ico de Cos a Rica donde se han ealizado
es udios simila es sob e los equinode mos.
Al a ado & Fe nández (2005) ci a on seis
especies de o iu as en el Pa que Nacional
Ma ino Ballena, Al a ado & Chi iboga (2008)
encon a on seis especies en la Isla del Coco,
y Azo ei a-Solano e al. (2017) ci an dos espe-
cies en el sis ema es ua ino de Té aba-Sie pe.
Además, hay que ene en cuen a que en es e
es udio solo se han ob enido ejempla es del
in e ma eal, sin habe se mues eado es ua ios,
mangla es, ni mayo es p o undidades, po lo
que el núme o de especies p esen es se consi-
de a subes imado.
Los esul ados ob enidos sugie en cie a
cau ela en su in e p e ación, ya que se han
obse ado algunas di e encias en e las iden-
i icaciones de i adas de los mé odos mole-
cula es y las mo ológicas. De no se po el
uso adicional de he amien as molecula es, la
mo ología de los ejempla es ju eniles hubie a
podido induci a e o es y conside a se como
especies dis in as. Es el caso de OpJ (Apéndice
5, Fig. A.5.12), que g acias a la delimi ación
molecula se ha esuel o como un ju enil de
OpH (Apéndice 5, Fig. A.5.11), con una dis-
ancia gené ica de 0.31 %, ya que los ca ac e es
mo ológicos, como escudos o ales y placas
de los b azos sin desa olla , y la colo ación
son muy di e en es a los que p esen a el adul-
o. Ambos se de e mina on como Ophiode -
ma a . panamensis, pues las ca ac e ís icas
mo ológicas del ejempla es udiado no se
ajus an comple amen e a la desc ipción de es a
especie (p esen ando es e indi iduo los escudos
adiales cubie os po g anulación, ca en e en
los de O. panamensis). Po es e mo i o, pod ía
a a se de una nue a especie, pe o es necesa io
dispone de indi iduos de O. panamensis pa a
amplia los análisis an o mo ológicos como
molecula es. O os casos de indi iduos ju eni-
les que se han podido empa eja con sus adul-
os son OpC: ju eniles de Ophiocoma ae hiops
(Opae), OpA_039: ju enil de Ophione eis a .
annula a 1 (OpD) y OpB_009: ju enil de
Ophione eis a . annula a 2 (OpD_112).
Po o o lado, la delimi ación molecu-
la , al con a io que en los an e io es casos,
sepa a como di e en es especies indi iduos
mo ológicamen e simila es y que se habían
iden i icado p e iamen e como la misma. Po
ejemplo, el ejempla OpD_112 esul ó con una
di e gencia del 8.6 % con espec o al es o
de OpD y OpA_039 sí se ag upó con el es o
de las OpD. Asimismo, al ejempla OpB se
di e enció de los OpD po p esen a un amaño
ela i o muy pequeño y con di e encias en la
colo ación, aunque los ca ac e es mo ológi-
cos son simila es. Es e ejempla p esen ó una
di e gencia con espec o al es o del 5.4 %.
Sin emba go, OpD_112 y OpB solo di e gen
el 0.46 % la una de la o a, cons i uyendo así,
una misma especie, siendo OpB un ju enil. De
es e modo, el linaje o mado po las OpD y
OpA_039 y el o mado po OpD_112 y OpB
pod ían cons i ui nue as especies y un caso de
especies c íp icas (Ophione eis a . annula a 1
y Ophione eis a . annula a 2, espec i amen-
e). En ambos casos se dejó como a inis ya
que los análisis ilogené icos y de delimi ación
de especies nos dicen que no pe enecen a la
misma especie que la secuencia de Ophione-
eis annula a disponible en GenBank (con una
di e gencia del 10 % ap oximadamen e) y los
ca ac e es mo ológicos son simila es a la des-
c ipción de O. annula a sal o que los indi iduos
de es e es udio no p esen an una placa p ima ia
cen al e iden e. El abajo del que se ex ajo
esa secuencia de O. annula a (Hugall, O’Ha a,
Hunjan, Nilsen, & Moussalli, 2015) no apo a