El perfil transcriptómico de la célula tumoral circulante (CTD) del mieloma múltiple: un nuevo modelo para comprender la diseminación de la enfermedad

LXI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Hematología y Hemoterapia, Valencia, España, 24-26 de octubre, 2019 CO-010 EL PERFIL TRANSCRIPTÓMICO DE LA CÉLULA TUMORAL CIRCULANTE (CTC) DEL MIELOMA MÚLTIPLE: UN NUEVO MODELO PARA COMPRENDER LA DISEMINACIÓN DE LA ENFERMEDAD Garcés JJ1, Simicek M2, Growkova K2, Calasanz M-J1, Rios R, Martinez-Lopez J4, Millacoy P5, Palomera L6, Del Orbe R7, Perez-Montaña A8, Garate S1, Blanco L1, Maiso P1, Flores-Montero J9, Sanoja-Flores L9, Jelinek T2, Orfao A9, Hajek R2, San Miguel JF1, Paiva B1 1Clínica Universidad de Navarra - CIMA; 2University Hospital of Ostrava; 3Hospital Universitario Virgen de las Nieves;4Hospital Universitario 12 de Octubre; 5Complejo Hospitalario de Navarra;6Hospital Lozano Blesa;7Biocruces Health Research Institute; 8Hospital Son Espases; 9Centro de Investigación del Cáncer, Salamanca Introducción: El número de células tumorales circulantes (CTCs) predice el riesgo de transformación en mieloma múltiple (MM) asintomático, así como la supervivencia en MM activo. Datos recientes sugieren que, conforme el tumor progresa y el microambiente se vuelve más hipóxico, las células plasmáticas (CP) clonales pasan a la circulación sistémica favoreciendo la constante invasión de nuevas regiones en la médula ósea (MO). Habría que señalar que la frecuencia de las CTCs es típicamente baja, por lo que sería concebible que dicha diseminación del MM dependiera de unas pocas células con unas características únicas que inducirían su salida de la médula y la extensión de la enfermedad a través de la sangre periférica (SP). Esta hipótesis no ha sido demostrada hasta ahora debido a que el perfil transcriptómico de la CTC en el MM no ha sido investigado. Objetivos: Determinar funciones moleculares específicas en las CTCs que permitan identificar eventos responsables de la diseminación del MM a través del flujo sanguíneo. Figura 1. Figura 2. Métodos: Usamos separación celular mediante FACS para aislar CTCs y CP clonales de muestras pareadas de MO y SP de un total de 32 pacientes: 23 MM de nuevo diagnóstico, 9 recaídas y 1 gammapatía monoclonal de significado incierto. El perfil transcriptómico se determinó tanto a nivel single-cell (n = 3) como bulk (n = 29), y fueron analizados mediante Seurat y SCORPIUS, y limma y GSEA, respectivamente. La función de genes específicos se determinó mediante noqueo a través de shRNA. Finalmente, el valor pronóstico de los genes desregulados se determinó mediante un modelo de regresión Cox usando datos del estudio CoMMpass (n = 553, versión IA11). Resultados: El perfil transcriptómico de las muestras pareadas de CTCs y CP clonales de MO mostraron una gran correlación en la expresión génica a ambos niveles de single-cell y bulk (r=0.94, P=10-16), con solo 55 genes diferencialmente expresados entre CTCs y su contrapartida en MO. Genes sobre-expresados en las CTCs estaban implicados en la inflamación, la hipoxia o la transición epitelio-mesenquimal, mientras que aquellos infra-expresados estaban relacionados con la proliferación celular. El marcador de células madre cancerígenas CD44 se encontraba sobre-expresado en la CTC, y su silenciamiento reducía significativamente la capacidad de migración de células mielomatosas así como su adhesión a fibronectina. Aproximadamente la mitad (29/55) de estos genes diferencialmente expresados en las CTCs tuvieron valor pronóstico en pacientes de nuevo diagnóstico (CoMMpass). En un análisis multivariable incluyendo el ISS revisado, la sobre-expresión de CENPF y LGALS1 se asoció significativamente con una supervivencia inferior. Conclusiones: Estos resultados ayudan a entender la presencia de CTCs en SP y sugieren que los nichos medulares hipóxicos, junto con Hematología y Hemoterapia | 2019 | 13 Oral Presentation un ambiente pro-inflamatorio, inducirían una detención en la proliferación celular, forzando a estas células tumorales a circular en la SP y migrar a otros nichos de la MO donde puedan continuar creciendo. Figura 3. CO-011 LA PRESENCIA DE POLIMORFISMOS OBESOGÉNICOS IDENTIFICADOS POR GWAS NO INFLUYE SOBRE EL RIESGO A DESARROLLAR MIELOMA MÚLTIPLE Sánchez Maldonado JM1, Ríos Tamayo R1, Garrido P2, Clavero E2, Ruiz Maldonado V1, Pérez Rojo B1, Badiola González J2, González Sierra P2, Romero A2, López Fernández E2, Moratalla Molina L2, Ter Horst R3, Jérez A4, Hemminki K5, Neta MG3, Li Y3, Försti A5, Martínez López J6, Sainz J1 1GENYO y Hospital Universitario Virgen de las Nieves; 2Hospital Virgen de las Nieves;3Radboud University Nijmegen Medical Center;4Hospital Morales Meseguer;5German Cancer Research Center (DKFZ);6Hospital 12 de Octubre El mieloma múltiple (MM) es una neoplasia incurable caracterizada por la presencia de células plasmáticas malignas en la médula ósea que secretan inmunoglobulinas monoclonales específicas al torrente sanguíneo produciendo un amplio rango de alteraciones entre las que destacan anemia, trombocitopenia, leucopenia, hipercalcemia y fracturas óseas . Aunque se han hecho grandes progresos en la identificación de los mecanismos moleculares que subyacen al MM, hasta la fecha solo se conocen unos pocos factores de riesgo asociados con el desarrollo de esta enfermedad. Entre los factores de riesgo modificables, la obesidad ha atraido mucho interés ya que se ha asociado al desarrollo de múltiples tumores sólidos y hematológicos. Teniendo presente la posible importancia de la obesidad en MM, decidimos evaluar si las 32 variantes genéticas asociadas con obesidad en estudios GWAS influían sobre el riesgo a desarrollar MM. Para ello utilizamos una población de 263 MM y 1087 controles sanos donde genotipamos con sondas KASPar (LGC) las variantes genéticas de interés. La asociación entre los polimorfismos genéticos y el riesgo de MM se realizó por regresión logistica asumiendo un modelo de herencia aditivo. La consistencia de las asociaciones en población española se validaron con datos de un GWAS desarrollo en una población de 4189 alemanes (2121 casos de MM y 2068 controles sanos). Funcionalmente, evaluamos si alguna de las variantes genéticas correlacionaba significativamente con niveles de 7 hormonas esteroideas (androstendiona, cortisol, 11-deoxi-cortisol, 17-hidroxi progesterona, progesterona, testosterona and 25 hidroxi vitamina D3) y con niveles de 6 citoquinas (IFNg, IL1b, IL6, TNFa, IL17, and IL22) tras la activación de sangre completa, células mononucleares de sangre periférica y macrófagos de 408 individuos sanos con LPS, PHA, Pam3Cys y cpG (cohorte HFGP). La correlación entre los SNPs y los niveles hormonales y de citoquinas se evaluó por regresión lineal que se ajustó por edad y sexo. Los resultados del meta-análisis de ambas poblaciones mostró que ninguna de las variantes obesogénicas identificadas por GWAS tenía un impacto significativo sobre el riesgo a desarrollar MM (Tabla 1). Solo observamos un efecto protector muy débil del polimorfismo MTCH2rs3817334 sobre el riesgo a desarrollar MM (OR=0.90, 95%IC 0.83-0.97, P=0.015). Aunque no encontramos ningún vínculo entre las variantes genéticas asociadas con obesidad y el riesgo a desarrollar MM, nuestros estudios funcionales mostrarón una fuerte correlación entre el polimorfismo MAFrs1424233 y los nievels de TNF e IL6 tras la estimulación de macrófagos con cpG, un ligando de TLR9 (P=7.09·10-5 y 4.35·10-4; Figura 1). En resumen, este trabajo nos permitió descartar el vínculo entre los polimorfismos obesogénicos y el riesgo a desarrollar MM pero nos mostró que el vínculo que ya conocemos entre la obesidad y la respuesta inmune mediada por TLR9 podría estar mediado por polimorfismos en el gen MAF. Este proyecto se financió con fondos internos del centro GENYO. Tabla 1. CO-012 MUERTE PRECOZ EN MIELOMA MÚLTIPLE. ANÁLISIS DE PACIENTES TRATADOS EN VIDA REAL Lakhwani Lakhwani S1, Hernández García MT1, Lorenzo Barreto P2, Cabrera Brito D1, Fernández González M1, Díaz Gómez M1, Raya Sánchez JM1 1Hospital Universitario de Canarias;2Hospital Ramón y Cajal Introducción: Durante los últimos años, la supervivencia de los pacientes con mieloma múltiple (MM) ha mejorado debido principalmente a la introducción de nuevos fármacos. A pesar de ello, hay pacientes que 14 | Hematología y Hemoterapia| 2019