FÁTIMA VEGA GARCÍA GASCÓN
Bio ecnología emb iona ia:
T ans e encia de emb iones en
ganado acuno
Bio ecnología emb iona ia:
T ans e encia de emb iones en
ganado acuno
Bio ecnología emb iona ia:
T ans e encia de emb iones en
ganado acuno
Facul ad de Ve e ina ia
G ado en Ve e ina ia
Año 2021
Modalidad del T abajo: Re isión Bibliog á ica
T abajo de
Fin de G ado
T abajo de
Fin de G ado
T abajo de
Fin de G ado
T abajo de
Fin de G ado
Figu a 3: Imagen ecog á ica de un o a io de
aca supe o ulado donde podemos obse a
múl iples olículos. Fuen e: Fuen es,
2015.T abajo de
2
Licencia
Excep o donde se haga cons a explíci amen e, es a ob a pe enece a Fá ima Vega Ga cía
Gascón y es á bajo una licencia de “C ea i e Commons Reconocimien o 4.0 In e nacional”.
3
Resumen
La ep oducción es el sos én de la p oducción animal po ello, se han desa ollado y
pe eccionado di e sas écnicas de ep oducción asis ida como la ans e encia de emb iones.
G acias a es a bio ecnología es posible inc emen a el endimien o económico de las
explo aciones al pe mi i ob ene un g an núme o de c ías de animales gené icamen e
supe io es. Asimismo, mo e emb iones pa ece se , desde el pun o de is a sani a io, la o ma
más segu a de anspo a ma e ial gené ico.
El obje i o de los p og amas de ans e encia emb iona ia es ecupe a el mayo núme o de
emb iones posibles en un solo ciclo es al, po ello se ealiza la es imulación o á ica de la
hemb a donan e con el in de p oduci la o ulación de a ios o oci os, en luga de la o ulación
simple ca ac e ís ica de la especie bo ina.
Los emb iones ecolec ados pueden se ans e idos a la ecep o a de o ma inmedia a o
conse a se du an e un pe iodo p olongado a bajas empe a u as. Si se ans ie en de o ma
inminen e y, con el obje i o de maximiza la supe i encia de los mismos, es necesa io ealiza
la sinc onización a i icial de los ciclos es ales en e la hemb a donan e y ecep o a. Pa a ello,
se u ilizan dis in os p o ocolos ho monales con p os aglandinas y sus análogos, o con
disposi i os in a aginales de libe ación len a de p oges e ona.
Pa a el almacenamien o de emb iones du an e pe iodos p olongados, se ecu e a la
c iop ese ación, p oceso median e el cual las células o ejidos se conse an a bajas
empe a u as, pa alizando su ac i idad me abólica. A pesa de a a se de un mé odo muy
u ilizado, es un p ocedimien o complejo y po ello, es á siendo eemplazado po o a écnica
mucho más sencilla y e ec i a, la i i icación. Con ella, se consigue deshid a a al emb ión a
a és de un medio muy concen ado log ándose una g an iscosidad y e i ándose así la
o mación de c is ales de hielo in acelula es. Sin emba go, las asas de ges ación siguen siendo
in e io es a las ob enidas al ans e i emb iones escos, pa a a a de sol en a es e p oblema,
se es án desa ollando nue as écnicas como la blas ocen esis.
Palab as cla e: bo ino, ep oducción, MOET, hemb a donan e, hemb a ecep o a,
supe o ulación, sinc onización, c iop ese ación
4
Resumo
A ep odución é o alice ce da p odución animal, polo an o, desen ol é onse e pe eccioná onse
a ias écnicas de ep odución asis ida como a ans e encia de emb ións. G azas a es a
bio ecnoloxia é posible aumen a o endemen o económico das explo acións ao pe mi i ob e
un g an núme o de descenden es xene icamen e supe io es. Do mesmo xei o, o mo emen o de
emb ións pa ece se , desde o pun o de is a da saúde, o xei o máis segu o de anspo a
ma e ial xené ico.
O obxec i o dos p og amas de ans e encia de emb ións é ecupe a o maio núme o de
emb ións posibles nun só ciclo es al, po es e mo i o ealízase a es imulación o á ica da emia
doado a co in de p oduci a o ulación de a ios o oci os, en luga da o ulación simple
ca ac e ís ica da especie bo ina.
Os emb ións ecollidos pódense ans e i ao des ina a io inmedia amen e ou almacenalos
du an e un longo pe íodo a baixas empe a u as. Se son ans e idos de xei o inminen e e, pa a
maximiza a súa supe i encia, é necesa io sinc oniza a i icialmen e os ciclos es ais en e a
emia doado a e a ecep o a. Pa a iso, úsanse di e en es p o ocolos ho monais con
p os aglandinas e os seus análogos ou con disposi i os in a axinal de libe ación len a de
p oxes e ona.
Pa a o almacenamen o de emb ións du an e pe íodos p olongados úsase a c ioconse ación,
p oceso polo cal as células ou ecidos se man eñen a baixas empe a u as, pa alizando os seus
p ocesos me abólicos. A pesa de se un mé odo moi u ilizado, é un p ocedemen o complexo e,
polo an o, es á a se subs i uído po ou a écnica moi o máis sinxela e e icaz, a i i icación.
Con el, o emb ión deshid á ase a a és dun medio al amen e concen ado, log ando unha al a
iscosidade e e i ando así a o mación de c is ais de xeo in acelula es. Non obs an e, as axas
de xes ación son aínda máis baixas que as ob idas ao ans e i emb ións escos, pa a a a de
esol e es e p oblema es anse a desen ol e no as écnicas como a blas ocen esis.
Palab as cla e: bo ina, ep odución, MOET, emia doan e, emia ecep o a, supe o ulación,
sinc onización, c ioconse ación
5
Abs ac
Rep oduc ion is he mains ay o animal p oduc ion, he e o e, a ious assis ed ep oduc ion
echniques such as emb yo ans e ha e been de eloped and pe ec ed. This bio echnology
makes i possible o inc ease he economic pe o mance o a ms by allowing a la ge numbe o
gene ically supe io o sp ing o be ob ained. Likewise, mo ing emb yos seems o be, om a
heal h poin o iew, he sa es way o anspo gene ic ma e ial.
The objec i e o emb yo ans e p og ams is o eco e as many emb yos as possible in a single
es ous cycle, o his eason o a ian s imula ion o he dono emale is pe o med in o de o
p oduce o ula ion o se e al oocy es, ins ead o he simple o ula ion cha ac e is ic o he bo ine
species.
The collec ed emb yos can be ans e ed o he ecipien immedia ely o s o ed o a long
pe iod a low empe a u es. I hey a e ans e ed immedia ely, in o de o maximize hei
su i al, i is necessa y o a i icially synch onize he es ous cycles be ween he dono and
ecipien emale. Fo his, di e en ho monal p o ocols a e used wi h p os aglandins and hei
analogues, o wi h in a aginal slow- elease p oges e one de ices.
Fo he s o age o emb yos o p olonged pe iods, c yop ese a ion is used, a p ocess by which
cells o issues a e kep a low empe a u es, pa alyzing hei me abolic p ocesses. Despi e being
a widely used me hod, i is a complex p ocedu e and he e o e i is being eplaced by ano he
much simple and mo e e ec i e echnique: i i ica ion. Wi h i , he emb yo is dehyd a ed
h ough a highly concen a ed medium, achie ing a high iscosi y and hus a oiding he
o ma ion o in acellula ice c ys als. Howe e , ges a ion a es a e s ill lowe han hose
ob ained when ans e ing esh emb yos, o y o sol e his p oblem, new echniques such as
blas ocen esis a e being de eloped.
Keywo ds: ep oduc ion, ca le, MOET, dono cow, ecipien cow, supe o ula ion,
synch oniza ion, c yop ese a ion
6
Índice
Resumen .......................................................................................................................................3
Resumo .........................................................................................................................................4
Abs ac ........................................................................................................................................5
Ab e ia u as ............................................................................................................................................9
In oducción y obje i os .......................................................................................................................10
Ma e ial y mé odos ................................................................................................................................13
Exposición del ema ...............................................................................................................................14
His o ia y pe spec i as ............................................................................................................14
Aplicaciones ........................................................................................................................................16
E apas ...................................................................................................................................................22
1. ELECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA HEMBRA DONANTE ............................................22
2. ELECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA HEMBRA RECEPTORA ....................................24
3. SUPEROVULACIÓN, DETECCIÓN DEL CELO E INSEMINACIÓN DE LA DONANTE
26
4. RECOGIDA, EVALUACIÓN Y CLASIFICACIÓN DE LOS EMBRIONES ........................31
5. SINCRONIZACIÓN DE RECEPTORAS ..........................................................................37
6. CONSERVACIÓN DE EMBRIONES ........................................................................................39
7. TRANSFERENCIA DE LOS EMBRIONES A LA HEMBRA RECEPTORA........................41
Conclusiones ............................................................................................................................................43
Bibliog a ía ..............................................................................................................................................44
7
Índice de igu as
Figu a 1: P o ocolo de supe es imulación desa ollado po Bo e al., (1995) en la Uni e sidad
de Saska chewan, Canadá…………………………………………………………………….....28
Figu a 2: Se obse a un o a io de aca supe o ulado (día 8) con múl iples cue pos lú eos......30
Figu a 3: Imagen ecog á ica de un o a io de aca supe o ulado donde podemos obse a
múl iples olículos........................................................................................................................30
Figu a 4: Sonda Foley empleada pa a el la ado de la luz u e ina y ecogida de los
emb iones.....................................................................................................................................33
Figu a 5: Emb iones con código de calidad 1. (a) En e apa de desa ollo 4: mó ula; (b) En e apa
de desa ollo 5: blas ocis o emp ano; (c) En e apa de desa ollo 6: blas ocis o..........................35
Figu a 6: Emb iones con código de calidad 2. (a) En e apa de desa ollo 4: mó ula; (b) En e apa
de desa ollo 5: blas ocis o emp ano; (c) En e apa de desa ollo 7: blas ocis o expandido........36
Figu a 7: Emb iones con código de calidad 3. (a), (b) y (c) En es apa de desa ollo 4:
mó ula...........................................................................................................................................36
Figu a 8: Emb iones con código de calidad 4. (a) En e apa de desa ollo 1: sin e iliza ; (b) En
e apa de desa ollo 1: sin e iliza y degene ado (c) En e apa de desa ollo 2: emb ión de 2 a 12
células degene ado........................................................................................................................36
Figu a 9: Rep esen ación esquemá ica de una pajuela con un emb ión conse ado en
congelación pa a su pos e io ans e encia a una ecep o a........................................................40
Figu a 10: T ans e encia del emb ión a la hemb a ecep o a. Se ealiza la deposición del mismo
en el cue no u e ino ipsila e al al CL...........................................................................................42
8
Índice de ablas
Tabla 1: Es adíos de desa ollo emb iona io. Las mayo es asas de ges ación se ob iene con
mó ulas compac as y blas ocis os jó enes, es deci , cuando han anscu ido 6-7 días después
del es o (somb eado) ……………………………………………..........……………................34
9
Ab e ia u as
AETE: Asociación de T ans e encia de Emb iones en Eu opa
ADN: Ácido desoxi ibonucleico
AHM: Homona An iMülle iana
BCS: Índice de Condición Co po al
BVDV: Vi us de la Dia ea Ví ica Bo ina
CIDR: nomb e come cial del disposi i o in a aginal con p oges e ona de P ize
CL: Cue po Lú eo
E2: Es adiol
eCG o PMSG: Gonado opina Co iónica Equina
FAO: O ganización de las Naciones Unidas de la Alimen ación y la Ag icul u a
F : F ench (unidad de medida)
FSH: Ho mona Folículo Es imulan e
GnRH: Ho mona Libe ado a de Gonado opinas
HASAR: Comi é Aseso de Salud y Segu idad
hMG: Gonado opina Menopausica Humana
IA: Inseminación A i icial
IBR: Rino aqueí is In ecciosa Bo ina
IETS: Sociedad In e nacional de T ans e encia de Emb iones
LH: Ho mona Lu einizan e
MAPA: Minis e io de Ag icul u a, Pesca y Alimen ación de España
MOET: Múl iple O ulación y T ans e encia de Emb iones
OIE: O ganización Mundial de Sanidad Animal
oFSH: Ho mona Folículo Es imulan e O ina
P4: P oges e ona
PBS: Bu e Fos a o Salino
pFSH: Ho mona Folículo Es imulan e Po cina
PGF2α: P os aglandina F2α
PIMX: Plan In eg al de Mejo a Gené ica
TE: T ans e encia de Emb iones
UTE Bos: Unidad de T ans e encia Emb iona ia de Bos
ZP: Zona Pelúcida
16
Aplicaciones
El obje i o de cualquie explo ación ganade a es inc emen a su p oducción de mane a
e icien e, aumen ando la p oduc i idad pe cápi a sin que es o a ec e de o ma d ás ica a los
cos es (Monaco, 2020). En consecuencia, a lo la go de los años, se han ido desa ollando
di e en es ecnologías ep oduc i as con es e in, como es el caso de la ans e encia de
emb iones, la cual ha supues o un éxi o come cial debido a sus nume osas aplicaciones:
- Mejo a gené ica:
Como se ha mencionado an e io men e, uno de los p incipales obje i os de la TE es a a de
supe a el limi ado p og eso gené ico de la especie bo ina debido p incipalmen e a dos
ci cus ancias. Po un lado, la baja asa ep oduc i a lo que se aduce en un escaso núme o de
descendien es al inal de su ida ep oduc i a, y po o o lado, el la go in e alo
in e gene acional ya que desde el nacimien o has a que iene luga el p ime pa o suelen
anscu i una media de 24 meses (Seidel y Moo e, 2005). Po ello, g acias a los p og amas
MOET es posible aumen a la in ensidad de selección, educiendo el in e alo in e gene acional
y aumen ado en consecuencia, el p og eso gené ico (Me lo, 2007).
En es e sen ido, el éxi o de los p og amas MOET ha lle ado a u iliza es a bio ecnología pa a la
selección de o os des inados a la p oducción de semen (Maple o , 2013; Meb a u e al., 2020).
Con es e in, se seleccionan hemb as a las cuales se supe o ula e insemina con semen de o os
que a su ez es án al amen e seleccionados. La descendencia masculina pe manece á en espe a,
mien as que la descendencia emenina en a en p oducción. Pos e io men e, se p ueba a los
o os u ilizando los da os p oduc i os de sus he manas, es o pe mi e ob ene alo es
ep oduc i os azonablemen e iables a una edad más emp ana (FAO, 2010). En la p ác ica,
es o signi ica que es posible p oba gené icamen e un o o a los es años y medio, en
compa ación con los esquemas adicionales de p uebas de p ogenie que equie en espe a cinco
años y medio pa a pode selecciona a los machos (Me lo, 2007). Consecuen emen e, ealiza la
“p ueba de he manas” educe la p ecisión de selección, sin emba go, es e hecho se e
compensado po los in e alos gene acionales más co os (FAO, 2010), p oduciéndose
ganancias gené icas que se ace can al doble de las log adas con los es de p ogenie
adicionales (Maple o , 2013; Meb a u e al., 2020). Po an o, la indus ia ganade a come cial
se ha is o bene iciada po el uso de o os “p oducidos” median e p og amas MOET bien
diseñados (Maple o , 2013; Meb a u e al., 2020).
17
Además, la aplicación de los p og amas MOET pe mi e ob ene un ele ado núme o de
descendien es po unidad de iempo a pa i de hemb as con un mayo po encial gené ico
(Ga cía e al., 2017; Faizah e al., 2018), con ibuyendo así en el p oceso de selección de la
especie, no an o como sucede en caso del macho, pe o mucho más que si se u ilizan como
ep oduc o as. De hecho, se ha es imado que la ob ención de seis descendien es po aca
donan e pod ía duplica la in ensidad y la asa de espues a a la selección gené ica pa a asgos
como el c ecimien o, que se pueden de e mina en ambos sexos (Colazo y Maple o , 2007;
Meb a u e al., 2020). Po odo ello, el análisis genómico se ha uel o esencial y, cada ez se
es án u ilizando nue as ecnologías de secuenciación y geno ipado del ADN que pe mi en
selecciona a las hemb as donan es de emb iones (Maple o , 2013; Meb a u e al., 2020).
- Resca e gené ico de indi iduos aliosos:
G acias a la TE, es posible, aunque las asas de éxi o son bajas, ob ene descendencia de acas
gené icamen e aliosas que a causa de un auma ismo, en e medad o en ejecimien o se han
uel o in é iles (Seidel y Moo e, 2005; Faizah e al., 2018; Meb a u e al., 2020). En es os
casos, la elección del p ocedimien o de supe o ulación y de ecupe ación a ía según el ipo de
in e ilidad (po ejemplo, en casos de pióme a pe sis en e en los que se acumulan g andes
olúmenes de exudados y de i os den o de la luz u e ina, esul a e icaz enjuaga el ú e o con
NaCl al 0.9% has a que el líquido ecupe ado sea anspa en e y luego adminis a una
p os aglandina (PGF2α)) (Seidel y Moo e, 2005)
También, es posible ecupe a o oci os de acas de al o alo gené ico que se encuen an en
e apa e minal o en ma ade o, e iliza los in i o, cul i a los has a la e apa inicial de
blas ocis o y as e i los a una hemb a ecep o a (Seidel y Moo e, 2005; Meb a u e al., 2020).
- Con ola la ansmisión de en e medades:
Es impo an e señala , que la TE implica el mismo iesgo de ansmisión de en e medades
gené icas que el in oluc ado en la IA o en la mon a na u al (Meb a u e al., 2020), sin emba go,
esul a de u ilidad en lo que espec a al con ol de las mismas. Po ejemplo, en el caso de la
sindac ilia, es posible su con ol median e la biopsia y el ca io ipado de los emb iones cuyos
pad es p esen an ca io ipos indeseables (ca ac e ís icas mendelianas ecesi as), y solo los
“no males” debe ían se u ilizados pa a la ans e encia.
18
En lo que concie ne a la asmisión de en e medades in ecciosas, la O ganización Mundial de
Sanidad Animal (OIE) a i ma que “la ans e encia de emb iones ecolec ados in i o es un
mé odo de in e cambio de ma e ial gené ico que en aña muy poco iesgo”, siemp e que los
emb iones hayan sido ob enidos, p ocesados y almacenados po un equipo au o izado y se sigan
es ic amen e los p o ocolos sani a ios ecomendados po la IETS (Fuen es, 2015). Se ha
demos ado que cuando las ecomendaciones de manejo de emb iones son seguidas de o ma
adecuada, el iesgo de ansmisión de en e medades in ecciosas es inexis en e (Colazo y
Maple o , 2007; Maple o , 2013). A es e e ec o, en el Manual de IETS, S ing ellow (2004, pp
221-222) de alla los ac o es de esis encia que pe mi en que el emb ión sea un obje i o poco
alcanzable pa a muchos agen es pa ógenos:
Es o es g acias a ac o es de esis encia p ima ios como la zona pelúcida (ZP) y el
o ec ode mo y, ac o es de esis encia secunda ios como es adios emp anos de
desa ollo, pequeño amaño, y mo ilidad limi ada que si en pa a educi la exposición
po encial del emb ión. Asimismo, las bac e ias y los i us no sob e i en bien en los
medios de cul i o emb iona ios y además, debido a su amaño, muchos son incapaces
de pene a la zona pelúcida, po lo que se educe la posibilidad de ansmisión de un
agen e in eccioso ía ans e encia emb iona ia.
No obs an e, la IETS ha ca ego izado los agen es pa ógenos basándose en el iesgo de
ansmisión po un emb ión bo ino (Escoba , 2018; Zan osso, 2019) :
La ca ego ía 1 incluye agen es pa ógenos pa a los que exis en p uebas su icien es de
que el iesgo de ansmisión de la en e medad es insigni ican e, siemp e que los
emb iones se manipulen adecuadamen e en e la ecolección y la as e encia de
acue do con el Manual de la IETS. Las en e medades o pa ógenos incluidos en es e
g upo son la leucosis bo ina enzoó ica, la ieb e a osa, la lengua azul, B ucella
abo us, ino aqueí is in ecciosa bo ina (IBR), Haemophils somnus,
campilobac e iosis geni al bo ina, icomoniasis, lep ospi a, clamidia, in ección geni al
po micoplasma y la ence alopa ía espongio o me bo ina.
Las en e medades de la ca ego ía 2 son aquellas pa a las que se han acumulado
p uebas sus anciales que demues an que el iesgo de ansmisión es insigni ican e
simp e que los emb iones se manipulen adecuadamen e en e ecolección y
ans e encia de acue do con el Manual IETS, pe o pa a los cuales se equie en
ans e encias adicionales pa a e i ica los da os exis en es. En es a ca ego ía no se
incluyen pa ógenos bo inos.
19
Las en e medades o agen es pa ógenos de la ca ego ía 3 son aquellos pa a los que
exis en p uebas inicales que demues an que el iesgo de ansmisión es insigni ican e
siemp e que los emb iones se manipulen adecuadamen e en e la ecolección y
ans e encia de acue do con el Manual IETS, pe o pa a los que se equie e
in o mación expe imen al adicional an o in i o como in i o pa a co obo a los
hallazgos iniciales. Las en e medades o pa ógenos incluidos en es e g upo son el i us
de la dia ea í ica bo ina, i us de la pes e bo ina, Mycobac e ium pa a ube culosis.
Las en e medades o agen es pa ógenos de la ca ego ía 4 son aquellos pa a los que no
se han ealizado es udios o es án en cu so, y es os indican que aún no se pueden saca
conclusiones con espec o al ni el de iesgo de ansmisión o el iesgo de ansmisión a
a és de la ans e encia pod ía no se insigni ican e incluso si los emb iones son
debidamen e manipulados de acue do con el Manual de la IETS. Las en e medades o
pa ógenos incluidos en es e g upo son la anaplasmosis bo ina, ieb e Q, Chlamydia
psi aci, Mycobac e ium bo is, T ichomonas oe us.
Cabe señala que las cua o ca ego ías mencionadas solo conside an emb iones p oducidos in
i o y no aquellos p oducidos in i o (Escoba , 2018). De hecho, ninguna de las en e medades
in ecciosas mencionadas ha sido ansmi ida po emb iones in i o (Maple o , 2013). En un
es udio ealizado po B ock e al., (Escoba , 2018) se demos ó que los emb iones in i o de
acas in ec adas pe sis en emen e po el i us de la dia ea í ica bo ina (BVDV) se pueden
la a e icazmen e pa a libe a los del i us (la in eg idad de la ZP debe con i ma se an es y
después del la ado) y ans e i los de o ma segu a a las hemb as ecep o as sin se ocon e sión.
Sin emba go, es impo an e pun ualiza que la si uación di ie e cuando se a a de emb iones
p oducidos in i o, pues exis en e idencias p elimina es que indican que las ecomendaciones
de la IETS pa a el manejo de emb iones p oducidos in i o, no son e icaces pa a elimina los
pa ógenos de la ZP de aquellos p oducidos in i o (Escoba , 2018), siendo más p obable que
es os pe manezcan adhe idos después del la ado (Maple o , 2013). En de ini i a, se ha
suge ido que la ans e encia con emb iones p oducidos in i o puede u iliza se pa a
sal agua da la gené ica an e un b o e, lo que pod ía se una al e na i a ú il pa a es ablece
ebaños lib es de en e medades (Maple o , 2013; Meb a u e al., 2020).
20
- Expansión ápida del pa imonio gené ico y ácil anspo e del genoma
La capacidad de u iliza emb iones pa a p e eni la ansmisión de en e medades in ecciosas los
hace ideales pa a el mo imien o in e nacional de ge moplasma animal. Asimismo, la TE
p esen a o os bene icios adicionales al pe mi i que la gené ica o iginal pe manezca den o del
país expo ado , e i a la necesidad de un pe iodo de cua en ena y a o ece la aclima ación de las
azas al nue o ambien e (Maple o , 2013).
Además, el anspo e in e con inen al de emb iones congelados es mucho más en able
económicamen e que el anspo e de animales i os (se pueden anspo a g andes can idades
de emb iones en un educido olumen). Po an o, la impo ación-expo ación de emb iones
cons i uye hoy en día una de las o mas más económicas y segu as de mo e ma e ial gené ico
po odo el mundo (Zan osso, 2019).
- Mayo núme o de c ías po ges ación:
Los pa os gemela es en la p oducción de acuno de ca ne pod ían o ece g andes en ajas
económicas cuando la nu ición no es un ac o limi an e (Meb a u e al., 2020). Sin emba go,
po el momen o, ans e i dos emb iones a una misma hemb a ecep o a esul a complejo y
cos oso y en consecuencia, no es en able económicamen e. Una emp esa de es e ipo end ía
que depende de g andes olúmenes de p oducción de emb iones y de la p es ación de se icios
de TE a muy bajo cos e, po ejemplo, median e sis emas simila es a los p og amas de
inseminación a i icial (Seidel y Moo e, 2005).
- La TE como pa e de o as bio ecnologías:
La ans e encia de emb iones esul a e icaz en la de ección de acas y o os po ado es de
asgos mendelianos ecesi os indeseables (Seidel y Moo e, 2005). Pa a cie os asgos como la
sindac ilia o el enanismo, hay un escaso núme o de hemb as homocigó icas é iles que pod ían
usa se pa a el c uce con o os po ado es sospechosos (Meb a u e al., 2020). En es e sen ido, la
TE pe mi e ampli ica la p oducción de emb iones de ales hemb as, de modo que los o os
puedan se e aluados pa a de e mina el es ado de “po ado es”. Y, además, ambién
p opo ciona un mé odo de p ueba de las hijas de dichos o os pa a de e mina qué mi ad no
p esen an el alelo dele é o (Seidel y Moo e, 2005; Meb a u e al., 2020). Tal y como Seidel y
Moo e (2005) a i man:
21
Pa a de e mina si un animal es po ado o no (con un 99% de segu idad) se equie e
que al menos 7 gene aciones esul en “nega i as al de ec o”, es o no malmen e oma ía
más iempo que el p omedio de ida ep oduc i a de una hemb a bo ina. Además,
odos los e ne os p oducidos du an e la p ueba se ían po ado es debido al uso de
semen de un o o doble ecesi o. Con la supe o ulación y la TE, uno o dos ciclos son
su icien es pa a p opo ciona los emb iones necesa ios pa a p oba a la mayo ía de las
hemb as y, además, si los e os po an algún de ec o es e pod ía se diagnos icado a los
dos meses de ges ación. Po lo an o, con la TE es posible una espues a ápida a un
p oblema que de o o modo se ía in a able.
También, es posible combina la TE con o as bio ecnologías como la ecundación in i o,
bisección de emb iones, p oducción de animales ansgénicos, sexado o clonación. El
hecho de pode combina la TE con semen sexado a a acili a la ob ención de indi iduos
del sexo deseado pa a la selección con una e icacia del 90% (Ga cía e al., 2017).
Como se puede ap ecia , la TE posee nume osas i udes, sin emba go, es impo an e
señala que ambién iene cie as limi aciones:
La p incipal limi ación es el educido núme o de emb iones ans e ibles po ecogida, el
cual pe manece es abilizado en un ango de seis a sie e con lige as di e encias en e las
hemb as de ap i ud cá nica (6,8 emb iones/ ecogida) y las de ap i ud lác ea (6,128
emb iones/ ecogida) (Ga cía e al., 2017).
La segunda g an limi ación es su p ecio. Los cos es de mano de ob a y alimen ación
p omediados sob e el núme o de e ne os p oducidos son ele ados (Meb a u e al., 2020).
A es o se suman el hecho de que se a a de un p oceso len o que equie e dedicación y
iempo. En consecuencia, el uso u ina io de la TE en las explo aciones no esul a en able
y, po an o, es una he amien a menos po en e pa a el p og eso gené ico que los p og amas
de inseminación a i icial, mucho más económicos (Seidel y Moo e, 2005). Además, es
impo an e ene en cuen a, que la TE en sí misma no mejo a la calidad gené ica po ello, de
base, las hemb as donan es deben posee una calidad gené ica supe io .
Po úl imo, la TE conduce a una educción de la a iabilidad gené ica debido a la ei e ada
u ilización de los mismos geno ipos.
22
E apas
La TE es un p oceso que depende de una se ie de ases o ques adas secuencialmen e po lo que
un e o en cualquie a de ellas a a in lui nega i amen e en los esul ados de la écnica
(Monaco, 2020).
1. ELECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA HEMBRA DONANTE
La hemb a donan e pa a pode se supe o ulada es necesa io que cumpla las disposiciones
es ablecidas en la Di ec i a 89/556/CEE y el Real Dec e o 855/1992, po el que se ijan las
condiciones de policía sani a ia aplicables a los in e cambios in acomuni a ios y a las
impo aciones p oceden es de e ce os países de emb iones de animales domés icos de la
especie bo ina. Ambas no mas hacen e e encia a la sanidad de las explo aciones, donan es y
emb iones (Fuen es, 2015). Asimismo, iene que cumpli una se ie de equisi os gene ales
desc i os en el Manual de la IETS, como p ocede o es a en explo aciones ce i icadas lib es de
ube culosis, b ucelosis, leucosis enzoó ica bo ina, pe ineumonía o cualquie o a en e medad
ansmisible de los umian es, no habiéndose p oducido ningún caso de dichas en e medades en
un adio de 5 km (Albe io, 2004). Du an e los 60 días p e ios a la colec a, la donan e debe
pe manece en un mismo lo e y ningún animal p od á inco po a se al mismo. Además, no
exibi á e idencias clínicas de ningún p oceso in eccioso en el momen o de la ecolección
(Albe io, 2004).
Como no ma gene al, un mes an es del inicio de la supe o ulación, las donan es no pod án se
acunadas, no p esen a án ningún p oceso pa ológico y no debe án ecibi ningún cambio en el
manejo, pues cualquie modi icación en su “ u ina” puede supone un e aso en el inicio de la
supe o ulacion y a ec a en los esul ados inales de la écnica (Fuen es, 2015).
Sin emba go, no hay ninguna no ma i a al espec o de los c i e ios en los que basa se pa a
selecciona hemb as donan es. Las únicas limi aciones ienen de e minadas po las exigencias
impues as po las asociaciones de algunas azas o po los in e eses del ganade o (Selk, 2002).
En p ime luga , es impo an e desca a aquellos animales con en e medades de asmisión
gené ica (Fuen es, 2015). No obs an e, la mayo ía de los p og amas de ans e encia de
emb iones se basan en dos c i e ios gene ales pa a selecciona hemb as donan es (Meb a u e
al., 2020):
23
El p ime c i e io es en base a su mé i o gené ico (Siquei a e al., 2017) que con ibuye
a o ablemen e en el p og ama de selección de la aza (Meb a u e al., 2020). Los índices
gené icos nos indican lo que una aca asmi e a su descendencia y, se e ie en an o a ca ac e es
p oduc i os (p oducción de leche, % de g asa, % de p o eína), ep oduc i os ( asa de emba azo
de las hijas), como a ca ac e es mo ológicos (condición co po al (BCS), apa iencia gene al,
elocidad de c ecimien o, sis ema mama io, e c.) (Fuen es, 2015; Siquei a e al., 2017). Es po
ello, que los p oduc o es pueden di e i en su opinión espec o a los c i e ios pa a selecciona
una aca gené icamen e sob esalien e (Selk, 2002).
Con es e obje i o, cada ez más, se es án u ilizando ecnologías de secuenciación y geno ipado
del ADN que nos pe mi en conoce las a ian es a lo la go del genoma, las cuales son
esponsables de que unos animales sean más p oduc i os que o os, enga mejo con o mación o
más esis encia a cie as en e medades (González, Jiménez-Mon e o y Alenda, 2010; Fuen es,
2015). La inalidad es sabe iden i ica cuales de es as a ian es es án asociadas a cada uno de
los ca ac e es y cuál es su e ec o sob e ellos (González, Jiménez-Mon e o y Alenda, 2010;
Fuen es, 2015).
El segundo c i e io de selección es á di ec amen e elacionado con el endimien o de la écnica y
se basa en la p obabilidad de p oduci un ele ado núme o de emb iones ans e ibles (Monaco,
2020). Una ez elegidas las hemb as gené icamen e supe io es se ha de alo a su his o ial
ep oduc i o (Fuen es, 2015). Pa a ello, se analizan los an eceden es de e ilidad y ecundidad,
es ado sani a io (sana y lib e de pa ologías) y la exis encia de ciclos es ales no males y
egula es. Asimismo, la hemb a donan e debe á encon a se, al menos, en el día 60 pos pa o
(Monaco, 2020).
En es e sen ido, se ía in e esan e ealiza una explo ación exhaus i a de las donan es median e
explo ación ec al y/o ecog a ía pa a alo a su es ado ginecológico, con i ma la p esencia de
un cue po lú eo uncional y desca a posibles p oblemas ep oduc i os (Fuen es, 2015).
Además, debe ía desca a se la p esencia de adhe encias o de lesiones palpables en el ú e o y los
o a ios. También, es impo an e examina con egula idad el canal ce ical con un dila ado
pa a e i ica el paso del ca é e , y e i a así posibles complicaciones a la ho a de la ecolección
de emb iones.
Finalmen e, es undamen al man ene a las donan es en un ni el de nu ición ap opiado pa a su
amaño y p oducción, eniendo en cuen a que los indi iduos excesi amen e eng asados o
delgados p esen a án la e ilidad educida (Selk, 2002; Seidel y Moo e, 2005). Es po ello, que
desde la década de 1990, se han in oducido elemen os nu icionales como p o eínas, ácidos
g asos, i aminas o mine ales pa a in en a mejo a la espues a supe o ula o ia de la donan e.
24
Sin emba go, la e idencia disponible indica que las es a egias de suplemen ación nu icional
p obadas no son un en oque e icaz pa a mejo a el esul ado de supe o ulación (Velazquez,
2011).
Las hemb as donan es pueden encon ase en un cen o de ans e encia de emb iones bajo
condiciones de manejo in ensi o o en una g anja de p oducción. Es a úl ima al e na i a esul a
menos cos osa, sin emba go, los esul ados son lige amen e in e io es (Meb a u e al., 2020).
2. ELECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA HEMBRA RECEPTORA.
Se debe ene en cuen a que pa a ga an iza el éxi o de un p og ama de TE, an impo an e es
una adecuada selección y p epa ación de la donan e como de la ecep o a.
Se án seleccionadas aquellas acas ep oduc i amen e sanas, con no malidad ana ómica y
uncional en su ac o geni al, que exhiben acilidad de pa o y que ienen una buena capacidad
de o deño y ma e nidad. Además, deben p esen a una condición co po al sa is ac o ia y
encon a se en un sólido es ado sani a io (Meb a u e al., 2020). Asimismo, abaja con
ecep o as dóciles y habi uadas al manejo es una conside ación impo an e a ene en cuen a
pa a pode educi al mínimo el es és gene ado du an e el a amien o de sinc onización y en el
momen o de la ans e encia (Fuen es, 2015).
Un ema con o e ido a conside a es la edad de la ecep o a. Algunos au o es sos ienen que los
mejo es esul ados se ob ienen cuando se u ilizan no illas nulípa as (que hayan alcanzado un
adecuado desa ollo) debido a que dan asas de p eñez más al as que las acas (Ma ínez, 2008).
Sin emba go, hay ene en cuen a que los p oblemas de manejo du an e la ans e encia, la
ges ación, el pa o y la lac ancia pueden p oduci esul ados inales in e io es. Po o o lado, se
encuen an los au o es que conside an que las acas mul ípa as son las ecep o as óp imas
(Palma, 2001; Albe io, 2004; B i o, 2012; Ge achew, Lemma y Fesseha, 2020) pues o que
cuen an con his o ial ep oduc i o conocido lo que ga an iza en cie a mane a su
compo amien o u u o. Además, a es o se suma el hecho de que los p oblemas de pa o son
meno es y la p oducción de leche es mejo (Ge achew, Lemma y Fesseha, 2020). En es e úl imo
caso, es impo an e que la aca adul a haya enido siemp e buena e ilidad.
Asimismo, la ecep o a debe ene un amaño adecuado pa a no p esen a p oblemas al pa o
(B i o, 2012) el cual a a depende del ipo de emb ión que se a a ans e i . Tal y como, Palma
(2001) a i ma:
25
Uno de los e o es más comunes es elaciona el amaño de la ecep o a con el amaño
al nacimien o del emb ión ans e ido, sin emba go, el peso de la c ía es á de e minado
gené icamen e y en p incipio, se e poco a ec ado po el ambien e u e ino de la
ecep o a.
A pesa de es a a i mación, en su lib o Bio ecnología de la ep oducción, ela a que en algunos
es udios ealizados con animales de labo a o io y en obse aciones empí icas p o enien es de
abajos en bo inos, se ha podido demos a que la in e acción del ambien e u e ino de la
ecep o a con el geno ipo del e o es mayo que la supues a (Palma, 2001). Cie amen e, el
concep o más impo an e a ene en cuen a es no ans e i emb iones que da án nacimien o a
e ne os de g an amaño en acas que son demasiado pequeñas (Palma, 2001; Albe io, 2004).
Po o o lado, es i al pa a el éxi o de la TE, el p og ama de alimen ación de la ecep o a pues
a a ges a y amaman a a c ías de al o alo gené ico (Ge achew, Lemma y Fesseha, 2020).
An e es a conside ación, la ecep o a ges an e no ha de se a ada como cualquie o a aca de
c ía (Palma, 2001 ; Albe io, 2004). Debe e i a se que engo de demasiado ya que es o puede
de i a en as o nos de la p esen ación del ciclo es al y po an o, en la sinc onización de celos,
a es o se suma, el inc emen o del iesgo de su i en e medades pe ipa ales (como ce osis,
hipocalcemia...) y complicaciones du an e el pa o (dis ocias) (B i o, 2012).
Po el con a io, la aza no es un ac o impo an e a ene en cuen a, de hecho, es ecuen e
u iliza azas au óc onas o c uces, ya que gene almen e se acep a que ienen mayo e ilidad y
el alo gené ico de es as hemb as ca ece de impo ancia (B i o, 2012).
Uno de los pun os c í icos es dónde consegui acas ecep o as. Lo más aconsejable es
ob ene las de la p opia explo ación pues an a p esen a inmunidad a los pa ógenos locales que
ans e i án a sus c ías, además del consiguien e conocimien o de su his o ia ep oduc i a
(Albe io, 2004; U ibe, 2018). Asimismo, el es és se e á educido al habe sido c iadas en el
luga . Si es a si uación no es posible, la al e na i a es comp a ecep o as, lo cual exige cie as
p ecauciones. Sin duda, la endencia gene al es adqui i acas secas, po ello una buena opción
es la comp a de acas leche as de desca e po baja p oducción (Albe io, 2004).
Una ez seleccionada la hemb a ecep o a debe ía se some ida a un exhaus i o examen clínico,
an o gene al como ginecológico. Se oma án mues as de sang e pa a de e mina en e medades
endémicas en la egión de comp a y se ha án las acunaciones y despa asi aciones pe inen es.
También, se debe á p ocede a la de ección del celo al menos dos eces al día y, si la aca no
uese is a en celo en 25 días debe ía se nue amen e explo ada y se p ocede ía de acue do al
diagnós ico (Albe io, 2004).
32
econocimien o y unión del espe ma ozoide, la inducción de la eacción ac osómica, el bloqueo
a la polispe mia y la p o ección del emb ión p eimplan ado (Mo os, 2015). El diáme o del
emb ión oscila en e 150 y 190 µm incluyendo el espeso de la ZP de 12 a 15 μm (Bó y
Maple o , 2013; Monaco, 2020).
Como se ha mencionado p e iamen e, años a ás, an o la ecupe ación de emb iones como la
pos e io ans e encia a la hemb a ecep o a se ealizaba de o ma qui ú gica, haciendo in iable
la aplicación de es a écnica de o ma u ina ia. Hoy en día, odas las ecolecciones come ciales
de emb iones de acuno son p ocedimien os no qui ú gicos que equie en el ca e e ismo
ansce ical de los cue nos u e inos (Ponce, 2015). Po su lado, la ecogida no qui ú gica
o ece g andes en ajas al a a se de un mé odo ba a o, sencillo y muy asequible a ni el de
campo, sin emba go, su p incipal incon enien e es que da luga a un 10% menos de emb iones
ecupe ados (Fe nández, 2014).
Los emb iones bo inos descienden al ú e o el día 4 después del inicio del es o (conside ado
como día 0) y pie den la zona pelúcida en e el 8 y el 10 (Monaco, 2020). El momen o idóneo
pa a su ecupe ación es el día 6-8 después del comienzo del es o (Monaco, 2020; Meb a u e
al., 2020). La ecogida emp ana, a los 4-6 días, da luga a bajas asas de ecupe ación. Si po el
con a io, la ecogida se ealiza de o ma a día, es deci , en e los días 9-14 se a a p oduci la
eclosión lo que a a di icul a su iden i icación y aislamen o, al mismo iempo que se án más
suscep ibles a la in ección (Meb a u e al., 2020). Además, los p ocedimien os de
c iop ese ación y bisección se han op imizado pa a los emb iones de los días 6-7, o a azón
pa a elegi es e momen o (Meb a u e al., 2020).
En lo que espec a al p ocedimien o a segui pa a la ecogida de los emb iones (Uni e sidad de
Concepción, 2019; Monaco, 2020):
1. Se p epa a el ma e ial. Se a a emplea una sonda Foley de 2 o 3 ías con balón in lable
y un es ile e de ace o inoxidable es é il inse ado a lo la go de oda la longi ud de la
sonda pa a hace la lo su icien emen e ígida y pe mi i su in oducción en el ú e o
median e manipulación ans ec al. En caso de se necesa io, se puede u iliza un
dila ado y unas pinzas ce icales pa a ensancha y i a del canal ce ical.
Es undamen al lle a un con ol de cada solución y del equipo que a a en a en
con ac o con los emb iones, po ello se ecomienda el uso de p oduc os come ciales.
2. Pa a ene una idea ap oximada de la espues a a la supe o ulación de la donan e y
pode es ima el núme o de emb iones a ecoge , se suele ealiza una explo ación ec al
y/o ecog a ía ans ec al.
33
3. Se e ec ua una anes esia epidu al baja con 4-6 mL de lidocaína al 2% pa a p e eni la
de ecación y los empujes ec ales.
4. Se e ec ua una limpieza y desin ección de la zona pe ianal y ul a .
5. Colec a. El calib e de la sonda Foley depende á de la alla y edad de la donan e: 14
F ench (F ) pa a no illas, 16 F pa a acas y 18 o 20 F pa a acas de g an amaño
(Uni e sidad de Concepción, 2019). Se accede po ía ansce ical con la sonda Foley
(Figu a 4) que se ancla, in lando el balón, al cue po u e ino o a la mi ad de cada uno de
los cue nos en caso de la a los po sepa ado. Cuando el ca é e es á en su luga , se e i a
el es ile e.
6. Se conec a la sonda a un ubo en Y con conexión Foley, po el cual se in oduci á el
medio de la ado. La po ción es an e de la unión en Y es á unida a una ube ía que
conec a con un il o (Monaco, 2020). Los emb iones al se más g andes que los po os
(160 μm) pe manecen en el il o con una can idad modes a de líquido pa a e i a su
desecación.
7. Se p ocede al la ado de la luz u e ina con un medio especí ico, bu e os a o salino
(PBS). Se a a de una solución acuosa y salina amponada a la que se inco po a glucosa
y pi u a o como uen es de ene gía pa a el c ecimien o emb iona io y la es abilización
de la memb ana (Monaco, 2020). A medida que se a in oduciendo la solución, se
ealiza un lige o masaje de los cue nos u e inos pa a que aquellos emb iones que se
encuen en en los pliegues sean a as ados po el medio hacia el ex e io (Uni e sidad
de Concepción, 2019).
Figu a 4: Sonda Foley empleada pa a el la ado de la luz u e ina y ecogida de los emb iones. 1. Je inga
sin silicona 2. Tubo con balón dila able; 3. Recolec o ; 4. Balón dila able; 5. Ca é e ; 6. O a io
supe o ulado (Monaco, 2020, p.7).
34
Una ez ob enidos los emb iones se debe p ocede a ealiza su e aluación y clasi icación según
las especi icaciones del Manual de la IETS pa a su ans e encia en esco o c iop ese ación
(Na anjo, 2019). La de e minación de su calidad pe mi e ca ac e iza , en é minos cuan i a i os,
su posibilidad de desa ollo y nacimien o (Fe nández, 2014). Pa a ello, se ealiza una e aluación
de las ca ac e ís icas mo ológicas con un mic oscopio es e eoscópico con el emb ión colocado
en un ecipien e pequeño (Bó y Maple o , 2013).
Los c i e ios más impo an es a ene en cuen a a la ho a de e alua y clasi ica los emb iones
son: la o ma, el amaño, el colo , el es adío de desa ollo espe ado y la ZP (Monaco, 2020).
Pe o sin duda, el mejo indicado de la iabilidad de un emb ión, es su es adío de desa ollo en
elación al día en el que se encuen a después de la ecundación (Tabla 1) (Bó y Maple o ,
2013; Uni e sidad de Concepción, 2019).
Tabla 1: Es adíos de desa ollo emb iona io. Las mayo es asas de ges ación se ob ienen con mó ulas compac as y
blas ocis os jó enes, es deci , cuando han anscu ido 6-7 días después del es o (somb eado) (Elabo ación p opia).
Secuencia de desa ollo
Ho as desde el inicio del es o
Días desde el inicio del es o
Imágen
Es o
0
0
O ulación
30-32
1
Fecundación
33
2 células
46-56
2
4 células
50-66
3
8 células
60-90
4
16-32 células
90-125
5
Mó ula (30-64 células)
120-145
6
Blas ocis o jo en
140-175
7
Blas ocis o expandido
170-210
8-9
Blas ocis o eclosionado
10
35
El código de la e apa de desa ollo es numé ico, en un ango de 1 al 9 (1: o oci o sin e iliza o
emb ión de 1 célula; 2: emb ión de 2 a 12 células; 3: mó ula emp ana; 4: mó ula; 5: blas ocis o
emp ano; 6: blas ocis o; 7: blas ocis o expandido; 8: blas ocis o eclosionado; 9: blas ocis o
expandido-eclosionado). Po o o lado, se encuen a el código de calidad del emb ión, ambién
numé ico y basado en su in eg idad mo ológica. El código de calidad oscila en e 1 y 4
(Fe nández, 2014):
- Código 1: Excelen e o bueno (Figu a 5). Masa emb iona ia simé ica y es é ica. Los
blas óme os son uni o mes en amaño, colo y densidad. El emb ión concue da con el
es adío de desa ollo espe ado. Las i egula idades deben se mínimas, y al menos 85%
del ma e ial celula debe se una masa emb iona ia in ac a y iable (es e c i e io debe
basa se en el po cen aje de células emb iona ias ep esen adas po el ma e ial ex uído
en el espacio pe i i elino). La zona pelúcida debe se lisa, sin supe icies cónca as o
planas, ni i egula idades (Fe nández, 2014; Monaco, 2020). Sob e i en bien al
p ocedimien o de congelación/descongelación. Po lo gene al, a menos que se acue de
lo con a io, solo los emb iones del Código 1 deben u iliza se en el come cio
in e nacional (Bó y Maple o , 2013).
Figu a 5: Emb iones con código de calidad 1. (a) En e apa de desa ollo 4: mó ula; (b) En e apa de
desa ollo 5: blas ocis o emp ano; (c) En e apa de desa ollo 6: blas ocis o (Uni e sidad de Concepción,
2019, p.34).
o Código 2: Acep able (Figu a 6). I egula idades mode adas en la o ma o al de la
masa emb iona ia o en el amaño, colo y densidad de las células indi iduales. Al
menos el 50% del ma e ial celula debe se una masa emb iona ia in ac a y iable
(Fe nández, 2014; Monaco, 2020). Deben ans e i se escos a ecipien es adecuados
(Bó y Maple o , 2013).
36
Figu a 6: Emb iones con código de calidad 2. (a) En e apa de desa ollo 4: mó ula; (b) En e apa de
desa ollo 5: blas ocis o emp ano; (c) En e apa de desa ollo 7: blas ocis o expandido (Uni e sidad de
Concepción, 2019, p.35).
o Código 3: Malo (Figu a 7). I egula idades impo an es en la o ma o al de la masa
emb iona ia o en el amaño, colo y densidad de las células indi iduales. Al menos el
25% del ma e ial celula debe se una masa emb iona ia in ac a y iable (Fe nández,
2014; Monaco, 2020).
Figu a 7: Emb iones con código de calidad 3. (a), (b) y (c) En e apa de desa ollo 4: mó ula (Uni e sidad
de Concepción, 2019, p.35).
o Código 4: Mue o o de e io ado (Figu a 5). O oci os sin ecunda , emb iones en
e apas de segmen ación p e ias a la de mó ula, emb iones mue os o degene ados. No
son iables, se desca an (Fe nández, 2014; Monaco, 2020).
Figu a 8: Emb iones con código de calidad 4. (a) En e apa de desa ollo 1: sin e iliza ; (b) En e apa de
desa ollo 1: sin e iliza y degene ado (c) En e apa de desa ollo 2: emb ión de 2 a 12 células degene ado
(Uni e sidad de Concepción, 2019, p.36).
37
Los emb iones de excelen e y buena calidad, en las e apas de desa ollo de mó ula compac a a
blas ocis o, p oducen las asas de p eñez más al as (Bó y Maple o , 2013; Uni e sidad de
Concepción, 2019).
Po lo an o, la decisión sob e si un emb ión es digno de se ans e ido, congelado o si es
elegible pa a la expo ación depende á de los conocimien os y la expe iencia de la pe sona que
los e alúa. El Manual de IETS, acla a que la e aluación isual de los emb iones es una
alo ación subje i a de un sis ema biológico y, en consecuencia, no es una ciencia exac a. Es o
implica que las asas de ges ación pueden se más bajas de lo espe ado, debido ambién a o os
ac o es como las condiciones ambien ales, la calidad de la ecep o a y la habilidad del écnico
enca gado de la manipulación (Bó y Maple o , 2013).
5. SINCRONIZACIÓN DE RECEPTORAS
Las hemb as donan es supe o uladas p opo cionan de media en e 6 y 7 emb iones
ans e ibles. Es o implica que hay que p epa a al menos a sie e hemb as ecep o as. En
consecuencia, hay que palpa a un núme o su icien e has a iden i ica sie e con CL ac i os. Si
exis en dudas, debe con i ma se la p esencia de CL median e ecog a ía (Monaco, 2020).
El obje i o es maximiza la supe i encia del emb ión, pa a ello esul a necesa io que el
ambien e u e ino de la ecep o a sea muy simila al de la donan e (Fuen es, 2015). Si la
disponibilidad de es as es muy al a, es p obable que los animales en celo en un día de e minado
sean su icien es pa a los emb iones p oducidos en ese momen o. Es o no es lo más ecuen e.
Po ello, es necesa io con ola la e apa del ciclo es al pa a log a una sínc onía acep able en e
donan es y ecep o as (Lamb, Fon es, y Oos huizen, 2019). El desa ollo de p o ocolos de
sinc onización de celos ha pe mi ido que se es ablezca es a sinc onía, educiéndose la can idad
de ecep o as eque idas y acili ando la inco po ación de la TE en las explo aciones de ganado
(Lamb, Fon es, y Oos huizen, 2019). El éxi o de es e ipo de p og amas depende de la
coo dinación de es á eas gene ales: la isiología del ciclo es al, la aplicación de agen es
a macológicos y el manejo del ebaño (Maple o y Bó, 2016). La sinc onización implica en
p ime luga que las hemb as sean cíclicas y, en segundo luga , que sólo un 70% esponde á al
a amien o (Albe io, 2004). Idealmen e, las asas de ges ación se án al as siemp e que el inicio
del es o en la ecep o a se p oduzca den o de las 24 ho as pos e io es al sinc onismo con la
donan e (Maple o y Bó, 2016; Ge achew, Lemma y Fesseha, 2020).
En es e sen ido, los ciclos de es o se pueden sinc oniza con p os aglandinas y sus análogos, o
con disposi i os in a aginales de libe ación len a de p oges e ona (Faizah e al., 2018; Monaco,
38
2020). La selección del p o ocolo más ap opiado debe ealiza se en base a las capacidades de
manejo y el g ado de sinc onización deseado (Islam, 2011).
Las p os aglandinas se han con e ido en el a amien o más an iguo pa a la sinc onización del
es o en el ganado (Bu le e al., 2011; G aa y G ima d, 2018). Sin emba go, solo esul an
e icaces si se adminis an en e los días 8 y 17 del ciclo es al, cuando exis e un cue po lú eo
uncional en uno de los o a ios (Islam, 2011). Las ecep o as sinc onizadas con PGF2α deben se
a adas 12-24 ho as an es que la donan e. Es o es po que el es o inducido po PGF2α ocu i á
en las ecep o as 60-72 ho as después de la inyección y en las donan es supe o uladas en 36-48
ho as (Maple o y Bó, 2016, He nandez, 2019). En és as úl imas, la p esen ación del celo es
más emp ana y la o ulación se puede ex ende du an e un pe íodo que puede supe a las 12 h
(Albe io, 2004). En un es udio ealizado pa a e alua la asa de p eñez en las ecep o as con
es o na u al o inducido po PGF2α, se obse ó que es as ue on más al as en las ecep o as
sinc onizadas con PGF2α p obablemen e debido a una mejo de ección del celo (Maple o y Bó,
2016). Es impo an e ene en cuen a que las PGF2α solo egulan la du ación de la ac i idad del
CL, po lo an o, cuando la lu eólisis es e icazmen e inducida, el es o esul an e se dis ibuye
du an e un pe íodo de 7 días y es necesa io de ec a lo (Gi aldo, 2008). También, se puede op a
po un p o ocolo de doble PGF2α con un in e alo de 10-11 días en e a amien os (Islam,
2011). En elación con es e hecho, se ha in o mado que ala ga el in e alo has a 14 días
aumen a la asa de concepción, p obablemen e po que hay más posibilidades de que haya un
olículo dominan e en c ecimien o. Teó icamen e, odos los animales debe ían ene un CL
sensible a las p o aglandinas en el momen o del segundo a amien o (Maple o y Bó, 2016).
O o posible a amien o que ha enido un g an éxi o pa a la sinc onización del es o son los
p oges ágenos, en especial, los disposi i os in a aginales libe ado es de p oges e ona (S oud y
Hasle , 2006). La p oges e ona al e a la unción de los o a ios al sup imi el es o y p e eni la
o ulación. También, anula el c ecimien o de los olículos dependien es de LH al sup imi , a su
ez, la ecuencia de pulsos de es a ho mona. Sin emba go, las ondas olicula es con inúan
eme giendo en p esencia de CL uncional pues o que la sec eción de FSH no se e in e umpida
(Maple o y Bó, 2016). En gene al, la p oges e ona adminis ada du an e más iempo que el
ciclo de ida del CL da como esul ado una mayo asa de sinc onización, pe o la e ilidad es
baja en los animales sinc onizados (Islam, 2011; Maple o y Bó, 2016 ).
39
6. CONSERVACIÓN DE EMBRIONES
La conse ación de los emb iones ecupe ados cons i uye una e apa esencial den o de la
écnica. Exis en cua o posibles mé odos ( empe a u a ambien e, e ige ación, congelación o
i i icación), los cuales se p esen an a con inuación:
Si los emb iones an a se ans e idos el mismo día de la ecolección, se pueden conse a en
solución PBS ecién p epa ada y es é il donde pod án pe mance iables a empe a u a
ambien e du an e a ias ho as (nunca supe a las 12 ho as) (Fe nandez, 2014). Pa a un pe iodo
de iempo más p olongado, es necesa io ecu i a empe a u as de e ige ación en e 0 y 4ºC,
sin emba go, las soluciones de almacenamien o u ilizadas has a el momen o solo man enían la
iabilidad del emb ión du an e 24-48 h (Cab e a y Fe nández, 2006; Ide a e al., 2015). En es e
sen ido, in es igaciones ecien es han demos ado que los emb iones pueden man ene se, sin
que pie dan la iabilidad, du an e 10 días a 4ºC median e el p ecalen amien o con olado a
37ºC en un medio que con iene 10 mg/ml de p o eína an icongelan e aislada de Zoa ces
elonga us (Ide a e al., 2015; Mikkola, 2017), siendo posible así ealiza análisis genómicos
p e ios a la conse ación (Mikkola, 2017). Es impo an e ene en cuen a que con ambos
mé odos, cuan o más iempo anscu a desde la ecolección a a in lui de o ma nega i a en la
asa de ges ación, que se e á disminuida p og esi amen e.
Si, po el con a io, se quie e almacena los emb iones a la go plazo, es esencial ecu i a
empe a u as de congelación pa a conse a los. La c iop ese ación o congelación es el
p oceso median e el cual las células o ejidos se conse an a bajas empe a u as, gene almen e
en e -80 y -196°C, pa alizando su ac i idad me abólica (Có do a e al., 2015). Du an e el
p oceso de congelación de emb iones, se deben segui los p incipios de la c iobiología. Los
mo imien os y los cambios de ase del agua in acelula , así como la elocidad de en iamien o,
juegan un papel impo an e en la supe i encia del emb ión. En la congelación ápida, la célula
se encuen a poco deshid a ada y el agua in acelula o ma g andes c is ales que o iginan
lesiones i e e sibles en las memb anas y es uc u as in acelula es (Espinosa, 2017). Po el
con a io, si la congelación se ealiza len amen e, la célula iene endencia a deshid a a se, lo
que limi a la o mación de c is ales y a o ece una buena supe i encia pos -c iop ese ación
(Espinosa, 2017). Hay que ene especial cuidado con la p olongación excesi a de la
congelación len a, pues si la célula se deshid a a demasiado, se a a p oduci un g an
inc emen o in acelula de la concen ación de elec oli os y mue e (Espinosa, 2017). La mejo
opción es una congelación len a a elocidad de 0,3-1ºC/min has a los -34ºC, empe a u a a la
que pe manecen du an e 10 minu os. Seguidamen e, se sume gen de o ma ápida en ni ógeno
40
líquido a -196ºC (Youngs, Leibo y Godke, 2010). De es e modo, se consigue la o mación de un
escaso núme o de pequeños c is ales, compa ible con la supe i encia celula .
También, pa a p e eni que du an e la congelación se o men c is ales se u ilizan compues os
c iop o ec o es, es deci , sus ancias que p o egen a la célula cuando es some ida a bajas
empe a u as. Po ello, esul an necesa ios en las soluciones de congelación pa a e i a el daño
celula . Es os, se di iden en dos ca ego ías: pene an es (glice ol, e ilenglicol, p opilenglicol) y
no pene an es (saca osa, albúmina, dex anos, ácido hialu ónico, poli inilpi olidona) (Có do a
e al., 2015). Los no pene an es son impe meables al emb ión, se a a de compues os de al o
peso molecula , gene almen e azúca es y p o eínas, que man ienen una al a p esión osmó ica en
el medio ex acelula du an e la emoción del c iop o ec o lo que p e iene el shock osmó ico
(Có do a e al., 2015). En es e sen ido, esul a de i al impo ancia hace una buena selección
del c iop o ec o pues de lo con a io puede p oduci se un e ec o noci o pa a el emb ión.
Du an e muchos años, el glice ol ha sido el c iop o ec o más u ilizado. Sin emba go, su len a
capacidad de pene ación celula sumado a que iene que se eliminado paula inamen e as la
descongelación, ha p o ocado que con el iempo se haya is o eemplazado po o os
c iop o ec o es con mayo pene ación, como po ejemplo, el e ilenglicol. Es e c iop o ec o
pe mi e descongela a los emb iones y ans e i los di ec amen e a la ecep o a g acias a su
capacidad pa a abandona de o ma sencilla las células emb iona ias en el in e io del ú e o sin
p o oca es és osmó ico (Ga cía e al., 2017). Ese hecho, ha a o ecido la ealización de la TE
en condiciones de campo
Figu a 9: Rep esen ación esquemá ica de una pajuela con un emb ión conse ado en congelación pa a su
pos e io ans e encia a una ecep o a. El llenado se ealiza con la aspi ación de un pequeño olumen de
medio de man enimien o, seguido de la aspi ación de una bu buja de ai e, epi iéndose es e mismo p oceso
an es de aspi a al emb ión. Se aspi a al emb ión. Se epi e el p ime paso (medio de man enimien o- ai e-
medio de man enimien o-ai e). Sellado de la pajuela (Elabo ación p opia).
Sin emba go, el mé odo de congelación/descongelación es un p oceso que equie e emplea
bas an e iempo y además, obliga a la u ilización de congelado es biológicos. Po ello, se ha
desa ollado una écnica mucho más sencilla: la i i icación. Es a ecnología consis e en
deshid a a al emb ión a empe a u a ambien e a a és de un medio muy concen ado con
dis in as mezclas de c iop o ec o es, seguido de un en iamien o ul a ápido pa a log a que
aumen e la iscosidad de la solución has a asemeja se al id io (es ado “ í eo”). Con es a
41
écnica se e i a la o mación de c is ales de hielo in acelula es (Fe nández, 2014). Las
soluciones de i i icación man ienen la dis ibución iónica y molecula de un líquido pe o en
un es ado sob een iado y ex emadamen e iscoso (Có do a e al., 2015), g acias a ello, oman
la o ma de las células y pe mi en man ene in ac a su es uc u a (Ga cía e al., 2017). La
p obabilidad de que una solución i i ique aumen a a medida que el olumen se educe, lo que
ha conducido a desa olla di e sos sopo es en los que deposi a los emb iones du an e el
p oceso (A a , 2014; Ga cía e al., 2017). La i i icación es una écnica sencilla, de ácil
ejecución, cos o-e icien e y con asas de ges ación acep ables, po lo que se ha con e ido en
una ecnología muy in e esan e, capaz de eemplaza a la congelación con encional,
especialmen e cuando se in en an conse a emb iones sensibles a la c iop ese ación como los
p oducidos in i o (Zá a e-Gue a a, 2018).
Con odo, las asas de ges ación ob enidas con emb iones c iop ese ados son del 56,1%,
lige amen e in e io es a las ob enidas al ans e i emb iones escos (68,3%) (Faizah e al.,
2018). Po ello, se es án in es igando al e na i as que pe mi an inc emen a las asas de
ges ación de emb iones c iop ese ados. Una écnica no edosa que pa ece soluciona es e
p oblema es la blas ocen esis. El día 7, el emb ión bo ino (blas ocis o), iene una ca idad
cen al llena de luido llamada blas ocele. Es a écnica consis e en educi de mane a a i icial el
olumen de es a ca idad median e mic omanipulado es, mic oagujas, mic opipe a y un
mic oscopio in e ido. Al a a se de un p ocedimien o muy no edoso, no hay in o mación de
su u ilización en emb iones bo inos p e io a su c iop ese ación (Zá a e-Gue a a, 2018).
7. TRANSFERENCIA DE LOS EMBRIONES A LA HEMBRA
RECEPTORA
En lo que espec a a la écnica de ans e encia, los emb iones son ans e idos di ec amen e a
a és del cuello u e ino de mane a simila a la IA (Monaco, 2020):
1. En p ime luga , se ex aen las heces del ec o y se explo a pa a de e mina en qué
o a io se encuen a el CL.
2. Es aconsejable ealiza anes esia epidu al pa a p e eni que el animal empuje y de eque.
3. Se la a y desin ec a la zona pe ianal y ul a . Es muy impo an e educi la
con aminación del ú e o ya que du an e la ase lu eínica es mucho más suscep ible a las
in ecciones.
48
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