Estudio patológico de los solénidos comerciales en Galicia

TESIS DOCTORAL MODALIDAD DE COMPENDIO DE ARTÍCULOS ESTUDIO PATOLÓGICO DE LOS SOLÉNIDOS COMERCIALES EN GALICIA Maite Ruiz Pérez DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CIBUS-FACULTAD DE BIOLOGÍA SANTIAGO DE COMPOSTELA 2017 Las doctoras Carmen López Gómez, investigadora del Centro de Investigacións Mariñas de Corón, dependiente de la Consellería do Mar (Xunta de Galicia) y Susana Darriba Couñago, jefa de la unidad de patología del Instituto Tecnolóxico para o Control do Medio Mariño de Galicia, dependiente de la Consellería do Mar (Xunta de Galicia) Certifican: Que la presente Tesis Doctoral titulada “Estudio patológico de los solénidos comerciales en Galicia”, que presenta Dña. Maite Ruiz Pérez para optar al grado de Doctora por la Universidad de Santiago de Compostela, ha sido realizada en el Centro de Investigacións Mariñas bajo su dirección y que es idónea para su presentación, de acuerdo con el artículo 41 del Reglamento de Estudios de Doctorado, por la modalidad de compendio de ARTÍCULOS, en los que la doctoranda realizó una importante contribución tanto en las etapas de investigación como de redacción de dichos trabajos. Hallándose concluida, autorizan su presentación a fin de que pueda ser juzgada por el tribunal correspondiente. Los coautores de dichos artículos conocen la inclusión de los mismos en esta tesis doctoral y ninguno de los artículos reunidos en esta tesis será presentado por estos autores en otra tesis doctoral, lo que firmamos bajo nuestra responsabilidad. Y para que así conste, firman la presente en Vilanova de Arousa, a 18 de mayo de 2017. Fdo. Dra. Carmen López Gómez Directora de la tesis Fdo. Dra. Susana Darriba Couñago Codirectora de la tesis D. Jesús Ángel López Romalde, Catedrático de la Universidad de Santiago de Compostela, Informa: Que la presente Memoria titulada “Estudio patológico de los solénidos comerciales en Galicia”, que presenta Dña. Maite Ruiz Pérez para optar al grado de Doctora por la Universidad de Santiago de Compostela, ha sido realizada bajo su tutela y que, hallándose concluida, autoriza su presentación a fin de que pueda ser juzgada por el tribunal correspondiente. Y para que así conste, firma la presente en Santiago de Compostela, a 18 de mayo de 2017. Fdo.: Jesús Ángel López Romalde Tutor de la tesis Este trabajo ha sido desarrollado en el Centro de Investigacións Mariñas (CIMA), perteneciente a la Consellería do Mar (Xunta de Galicia), dentro del departamento de Patología. Maite Ruiz Pérez disfrutó de una beca para la realización de la tesis de doctoral en temas de investigación marina, concedida por la Consellería do Mar (Xunta de Galicia), entre mayo de 2008 y mayo de 2010, así como de un contrato en prácticas como titulada superior por la Consellería do Mar (Xunta de Galicia) entre mayo de 2010 y mayo de 2012. Esta tesis se ha desarrollado dentro del programa de doctorado “Avances en Biología Microbiana y Parasitaria” de la Universidad de Santiago de Compostela. Como resultado del trabajo de investigación llevado a cabo en esta tesis doctoral se han publicado los siguientes artículos: •Histological survey of symbionts and other conditions in razor clam Ensis arcuatus (Jeffreys, 1865) (Pharidae) of the coast of Galicia (NW Spain). Darriba, S., Iglesias, D., Ruiz, M., Rodríguez, R., López, C. 2010. Journal of Invertebrate Pathology. 104(1):23-30. Índice de impacto: 1,153; Q1 en Agricultural and Biological Sciences. •Viral basophilic inclusions in the digestive gland of razor clams Ensis arcuatus (Pharidae) in Galicia (NW Spain). Ruiz, M., Darriba, S., Rodríguez, R., Iglesias, D., Lee, R-S, López, C. 2011. Diseases of Aquatic Organisms. 94(3):239-241. Índice de impacto: 0,964; Q2 en Aquatic Science. •Epidemiological survey of digenean trematodes affecting razor clams, Ensis arcuatus, from Galicia (NW Spain). Ruiz, M., Iglesias, D., Darriba, S., Rodríguez, R., López, C. 2012. Bulletin of the European Association of Fish Pathologists. 32(1):3-13. Índice de impacto: 0,262; Q4 en Aquatic Science. •Histological survey of symbionts and other conditions of pod razor clam Ensis siliqua (Linnaeus, 1758) in Galicia (NW Spain). Ruiz, M., Darriba, S., Rodríguez, R., López, C. 2013. Journal of Invertebrate Pathology. 112(1):74-82. Índice de impacto: 1,153; Q1 en Agricultural and Biological Sciences. •Marteilia sp. and other parasites and pathological conditions in Solen marginatus populations along the Galician coast (NW Spain). Ruiz, M., Darriba, S., Rodríguez, R., López, C. 2015. Diseases of Aquatic Organisms. 112(3):177-184. Índice de impacto: 0,964; Q2 en Aquatic Science. •A novel paramyxean parasite, Marteilia octospora n. sp. (Cercozoa) infecting the Grooved Razor Shell clam Solen marginatus from Galicia (NW Spain). Ruiz, M., López, C., Lee, R-S, Rodríguez, R., Darriba, S. 2016. Journal of Invertebrate Pathology. 135 (Marzo 2016):34-42. Índice de impacto: 1,153; Q1 en Agricultural and Biological Sciences. Agradecimientos En primer lugar, quiero agradecer de manera muy especial a Carmen López Gómez y Susana Darriba Couñago, codirectoras de esta tesis, por su paciencia y total dedicación a lo largo de todos estos años. Su apoyo y confianza, así como todos los conocimientos que me han transmitido me han servido, no sólo en el desarrollo de esta tesis, sino también en mi formación como investigadora. Para mi sois todo un ejemplo y siempre os estaré agradecida. A Rosana Rodríguez, coautora de varios artículos de esta tesis, por su colaboración y por compartir conmigo parte de sus muestras histológicas. A Ren-Shiang Lee por acogerme en el laboratorio del Consello Regulador da Denominación de Orixe Protexida do Mexillón de Galicia y por abrirme las puertas a un mundo tan apasionante como el de la biología molecular. Gracias por tu paciencia y por tus sabios consejos. A David Iglesias por su asesoramiento científico en algunos de los artículos presentados en esta tesis y por estar siempre disponible para cualquier duda o consulta con la mejor de las sonrisas. Por supuesto agradecer a las técnicos Ana Gónzalez, Maribel Meléndez, Elena Penas, Paula Rodríguez Tamargo y Miriam de Castro, por su inestimable ayuda en el procesado de las muestras histológicas y por su cariño, sin vuestro trabajo esta tesis no habría salido adelante. Así como al resto de compañeros del Departamento de Patología, Susi Carballal, Jaime Montes, Antonio Villalba, Asun, Bea y Sonia, han sido tantas las personas que han pasado por el Departamento a lo largo de estos años que espero no olvidarme de nadie. A mis compañeros de tesis Sergio Fernández, Seila Díaz, Curro, Laura Martín, Andrea Ramilo, Nuria y Eva. Os deseo lo mejor. other one comprised prokaryotic organisms. It was remarkable the detection of a type of gonadal neoplasia (germinoma), previously reported in E. magnus from Galicia. Even though germinoma displays low prevalence and intensity it is worth monitoring this disease to ensure the optimum health status of this marine resource. In the grooved razor shell, S. marginatus, the histopathological survey comprised all the symbionts and pathological conditions found in this species, although it was more focused on the protozoan Marteilia. Species belonging to the Marteilia genus have caused massive mortality episodes in different bivalve species around the world. Therefore, a monitoring in 17 sea beds throughout the Galician coast was carried out to ascertain the spatial distribution of this protozoan. The parasite was just detected in 6 out of 17 beds, 5 of them located in Ría de Arousa. Finally, the last work of this dissertation includes the characterization and identification of the new species of Marteilia. This new species showed the higher number of spores (8) per sporangium reported in this genus, for that reason was named as Marteilia octospora. The characterization of this species was based on the study of its ultrastructure and also on the molecular profile of the intergenic spacer of the rDNA (IGS) and internal transcribed spacer (ITS-1), both markers showed differences with the sequences available for other Marteilia spp. Key words: Solenoidea, Histopathological survey, Ultrastructure, rDNA SSU, Marteilia ÍNDICE INTRODUCCIÓN……………………………………………………………………………………………………………..1 Sistemática, distribución geográfica y hábitat de los solénidos comerciales……………….1 Producción de solénidos en Galicia…………………………………………………………………………….3 Interés de los estudios patológicos de moluscos bivalvos……………………………………….....5 Principales patologías de los moluscos bivalvos……………………………………………………......7 JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS……………………………………………………………………………………… 21 DESARROLLO DE LA TESIS…………………………………………………………………………………………….23 CAPÍTULO 1. Estudio histopatológico de poblaciones de navaja, Ensis magnus (=Ensis arcuatus), de Galicia…………………………………………………………………………………………………27 ARTÍCULO 1. Histological survey of symbionts and other conditions in razor clam Ensis arcuatus (Jeffreys, 1865) (Pharidae) of the coast of Galicia (NW Spain)……….29 ARTÍCULO 2. Viral basophilic inclusions in the digestive gland of razor clams Ensis arcuatus (Pharidae) in Galicia (NW Spain)…………………………………………………………….31 ARTÍCULO 3. Epidemiological survey of digenean trematodes affecting razor clams, Ensis arcuatus, from Galicia (NW Spain)……………………………………………………………....33 CAPÍTULO 2. Estudio histopatológico de poblaciones de longueirón (Ensis siliqua) de Galicia……………………………………………………………………………………………………………………..37 ARTÍCULO 4. Histological survey of symbionts and other conditions of pod razor clam Ensis siliqua (Linnaeus, 1758) in Galicia (NW Spain)……………………………………………..39 CAPÍTULO 3. Estudio histopatológico de las poblaciones de longueirón vello (Solen marginatus) de Galicia y caracterización molecular de la nueva especie Marteilia octospora n. sp……………………………………………………………………………43 ARTÍCULO 5. Marteilia sp. and other parasites and pathological conditions in Solen marginatus populations along the Galician coast (NW Spain) ............................... 45 ARTÍCULO 6. A novel paramyxean parasite, Marteilia octospora n. sp. (Cercozoa) infecting the Grooved Razor Shell clam Solen marginatus from Galicia (NW Spain)… ................................................................................................................................. 47 DISCUSIÓN GENERAL………………………………………………………………………………………………….51 CONCLUSIONES GENERALES ........................................................................................... 57 BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................. 61 INTRODUCCIÓN Introducción 1 Sistemática, distribución geográfica y hábitat de los solénidos comerciales Los solénidos son un grupo de moluscos bivalvos infaunales que, viven en fondos blandos y se caracterizan por tener una concha alargada, equivalva e inequilateral, y un pie grande adaptado para la excavación, que les permite penetrar en el sedimento. Figura 1. Especies de solénidos comerciales en Galicia. En lo que se refiere a la sistemática actual del grupo, la base de datos World Register of Marine Species (WoRMS), incluye a los solénidos en la clase Bivalvia, subclase Heterodonta, superfamilia Solenoidea, y, dentro de esta, en dos familias diferentes: la familia Solenidae (que incluye entre otros al género Solen) y la familia Pharidae (que incluye al género Ensis) (Fig. 2). Figura 2. Jerarquía taxonómica de los solénidos. Reino Sub r eino Bilateria Infra r r eino Protostomia Super f ilo Lophozoa F ilo Mollusca Clase Bivalvia Linnaeus, 1758 Subclase Heterodonta Neumayr, 1884 Orden Veneroida H. Adams and A. Adams, 1856 Superfamil ia Solenoidea Lamarck, 1809 T axones hi jos : Famil i a H. Adams and A. Adams, 1858 Familia Lamarck, 1809 Pharidae Solenidae Animalia 2 MAITE RUIZ PÉREZ En cuanto a la distribución geográfica, las especies del género Ensis se encuentran geográficamente muy dispersas, aunque el centro de distribución parece estar en las costas europeas, expandiéndose hasta la zona tropical del Oeste de África y a las dos costas de América del Norte (Fig. 3). En España, las especies del género Ensis se encuentran en la zona sublitoral de la costa atlántica, principalmente en la costa de Galicia. Las especies del género Solen, en cambio, son predominantemente tropicales y subtropicales, distribuyéndose mayoritariamente en la región Indo- Pacífica (Fig. 4), aunque existen datos de Solen spp. a lo largo de las costas atlánticas europeas, en el Este y Oeste del Pacífico, en las costas norteamericanas y en regiones del Océano Índico, entre otras (Darriba y Fernández-Tajes, 2011). En el litoral español la especie más común dentro de este género es Solen marginatus (Pennánt, 1777), siendo además la única autóctona, apareciendo tanto en el litoral atlántico como en el Mediterráneo, generalmente, en la región intermareal y submareal de zonas protegidas. Figura 3. Mapa de distribución global del género Ensis (mapa extraído de Global Biodiversity Information Facility (GBIF) http://www.gbif.org/species). Introducción 3 Figura 4. Mapa de distribución global del género Solen (mapa extraído de Global Biodiversity Information Facility (GBIF) http://www.gbif.org/species). Producción de solénidos en Galicia España es el mayor importador de solénidos procedentes de países europeos (Irlanda, Escocia, Italia, etc.) y de Sudamérica (Argentina, Chile y Perú) (Guerra, 2013). La producción nacional procede prácticamente en su totalidad de las costas gallegas y está orientada al mercado de consumo fresco, mientras que la importada se destina a la industria conservera, de la cual España es el principal exportador europeo (Guerra, 2013). Las especies de solénidos más importantes a nivel comercial en Galicia son la navaja, Ensis magnus (= E. arcuatus) (Schumacher, 1817), el longueirón, Ensis siliqua (Linnaeus, 1758) y el longueirón vello, Solen marginatus (Pulteney, 1799). La captura de estas especies está sujeta a planes generales elaborados por las entidades asociativas del sector, las cuales participan activamente en la gestión de los recursos marisqueros mediante la presentación de planes de explotación para las zonas de explotación autorizadas y para las zonas de libre marisqueo. Estos planes de explotación, posteriormente, son evaluados por la administración para su aprobación (D.O.G nº 248 del 30de diciembre de 2015). En el año 2016, 36 cofradías gallegas han explotado este recurso con un total de 25 planes de explotación en vigor, 317 embarcaciones y 576 personas autorizadas para su explotación, siendo el arte más empleado para su recolección el buceo en apnea y/o con suministro de aire desde superficie, mientras que la extracción a pie es minoritaria (datos extraídos de la Plataforma Tecnolóxica da Pesca - Consellería do Mar). La talla mínima de captura para las especies del género Ensis es 100 mm, mientras que en S. marginatus es de 80 mm (D.O.G nº 226 del 27 de noviembre del 2012, Orde 4 MAITE RUIZ PÉREZ do 27 de xullo de 2012 pola que se regulan os tamaños mínimos de diversos productos pesqueiros na Comunidade Autónoma de Galicia). La producción media de solénidos en Galicia en los 5 últimos años (2011-2015) fue de en torno a 370 t anuales, alcanzando una facturación media anual de primera venta de más de 3 millones de euros (Plataforma Tecnolóxica da Pesca - Consellería do Mar). Las capturas de navaja, la especie económicamente más rentable dentro de los solénidos, han presentado un incremento paulatino en los últimos 7 años, pasando de una producción de aproximadamente 194 t en 2008 a 459 t en el 2015 (Fig. 5) y representando en 2015 el 88% de la producción total de solénidos en Galicia. La producción de longueirón y longueirón vello fueron menores, oscilando según los años (Fig. 5). El longueirón vello es una especie menos apreciada a nivel comercial, siendo su consumo más local. Los factores que intervienen en la cuantía de las capturas de estos y otros bivalvos no están relacionados únicamente con la riqueza de los bancos marisqueros, sino que dependen también de la demanda del mercado y de la escasez de las especies de bivalvos que son objeto de explotación prioritaria por los mariscadores. Así pues, la escasez de berberecho en las Rías Bajas, tras las mortalidades iniciadas en 2012, puede haber favorecido que, en algunas zonas, las capturas se deriven a especies económicamente menos rentables, como el longueirón vello. Figura 5. Evolución de las capturas (t) de las tres especies de solénidos explotables en Galicia entre los años 1997 y 2015. 0 100 200 300 400 500 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 Capturas (t) Evolución de las capturas de solénidos Navaja Longueirón Longueirón vello Introducción 5 Interés de los estudios patológicos de moluscos bivalvos En el año 2013 la producción mundial de moluscos de acuicultura fue de 15,5 mll t. La contribución de la Unión Europea a esta producción fue del 3,7%, 573.366 t que equivalen a unos 1.123 mll €. El principal país productor de moluscos de la UE es España, sustentado en el cultivo de mejillón, seguido de Francia e Italia (Fig. 6) (Fuente: www.observatorio-acuicultura.es). Figura 6. Producción anual de moluscos en los países miembros de la UE en el año 2013 (FAO). La acuicultura de mejillón de la UE supuso 440.775 t en 2013, representando aproximadamente un 77% de la producción total de moluscos. Le sigue el ostión japonés (89.327 t, 15,6%) y la almeja japonesa (31.933 t, 5,6%). Otras especies importantes en cuanto a producción son la almeja fina, la ostra europea y el berberecho. Especies como vieiras, navajas, escupiñas, etc. se obtuvieron en cantidades inferiores (www.observatorio-acuicultura.es). A nivel nacional, Galicia es el principal productor de mejillón, ostra plana y ostra japonesa, entre otras especies. La extracción de moluscos representa por tanto un sector estratégico desde el punto económico y social para la comunidad gallega. Entre las principales amenazas, para el sector productor de moluscos en Galicia, se encuentran enfermedades de tipo infeccioso, como por ejemplo la marteiliosis en el berberecho, la perkinsosis en las almejas y la bonamiosis en la ostra plana; así mismo la sobrepesca, factores de tipo ambiental o la disminución de la calidad ambiental del agua. Desde el año 1992 en Galicia se vienen desarrollando Planes Anuales de Explotación Marisquera para las principales especies de moluscos comerciales, basados en el conocimiento científico-técnico previo; permitiendo una explotación más racional de estos recursos. MAITE RUIZ PÉREZ 12 parásito de tipo Mikrocytos infectando el tejido conectivo de diferentes órganos en la almeja japonesa Ruditapes philippinarum asociado con un episodio de mortalidad, aunque la presencia de anillo marrón en dichos ejemplares sugiere que dichas microcélulas no serían por si solas las responsables de dichas mortalidades (Ramilo et al., 2014). 5.5. Gregarinas y Coccidios: Las gregarinas y los coccidios, ambos pertenecientes al grupo de los Apicomplexa, son párasitos habituales de moluscos bivalvos marinos, sin embargo sus ciclos de vida todavía no están muy estudiados. Dentro de las gregarinas, el género Nematopsis ha sido descrito por utilizar a los moluscos bivalvos como hospedadores intermediarios. Estados de gimnospora y ooquiste (esporas de gregarina que contienen uno o más esporozoítos uninucleados vermiformes), o esporozoítos desnudos aparecen generalmente en el interior de hemocitos, lo que les permite ser transportados alcanzando la mayoría de órganos, aunque aparecen con mayor frecuencia en las branquias (Bower y McGladdery, 2009). Este género ha sido reportado en diversas especies de moluscos bivalvos comerciales en Galicia, como la almeja rubia (P. rhomboides), la almeja fina (Ruditapes decussatus), la almeja japonesa (R. philippinarum), el longueirón vello (Solen marginatus), el mejillón (M. galloprovincialis), el berberecho (C. edule) y la tellina (Garis depressa), en ocasiones asociado con infiltraciones hemocitarias locales, pero generalmente sin causar daños significativos en el hospedador(Carballal et al., 2001; Soto et al., 1996; Villalba et al., 1999). Además, en el caso de la almeja rubia y del berberecho se ha descrito una supuesta gregarina en el epitelio del intestino y tejido conjuntivo circundante (Carballal et al., 2001; Villalba et al., 1999). Un protozoo similar es identificado, sin embargo, como supuesto coccidio por Navas (2008). Se han descrito pocas especies de coccidios en moluscos bivalvos, y éstos generalmente suelen aparecer en los túbulos renales, aunque también se han detectado en gónada, intestino, glándula digestiva, branquias, aurícula y músculo (Desser y Bower, 1997; Kristmundsson et al., 2011a; Kristmundsson et al., 2011b; Lauckner, 1983; Nakayama et al., 1998). Los coccidios observados en bivalvos marinos se han asignado generalmente a los géneros Pseudoklossia (familia Aggregatidae) y Margolisiella (familia Eimeriidae). En Galicia, se han descrito coccidios de tipo Pseudoklossia en los túbulos renales del berberecho (Carballal et al., 2001), de la almeja rubia (Villalba et al., 1999) y del mejillón (Figueras et al., 1991; Robledo et al., 1994b; Villalba et al., 1997). Las infecciones intensas por coccidios pueden llegar a causar la oclusión de túbulos renales afectados (Carballal et al., 2001; Cremonte et al., 2005; Leibovitz et al., 1984; Morado et al., 1984). No obstante, la presencia de mortalidad asociada parece estar restringida únicamente a condiciones de cultivo (Bower, 2007). Introducción 13 5.6. Ciliados: Los ciliados aparecen frecuentemente en la cavidad paleal de un rango amplio de moluscos bivalvos, con una distribución geográfica ubicua y por lo general no generan respuesta defensiva importante por parte del hospedador, considerándolos como comensales. No obstante, se han descrito casos de prevalencias y/o intensidades elevadas (Bower et al., 1994a; Bower et al., 1994b; Bower y McGladdery, 2001). Entre los ciliados descritos en moluscos bivalvos en Galicia destacan los ciliados de la especie Ancistrum mytili (orden Thigmotrichida) identificados en el epitelio y en los tubos del agua de la branquia del mejillón M. galloprovincialis (Figueras et al., 1991; Robledo et al., 1994b; Villalba et al., 1997); los ciliados intracelulares de tipo Rynchodida descritos en el epitelio de los túbulos del digestivo del mejillón (Mytilus galloprovincialis) (Figueras et al., 1991; Robledo et al., 1994b; Villalba et al., 1997), así como adheridos a los filamentos branquiales del berberecho (C. edule) (Carballal et al., 2001); ciliados del género Trichodina sp. (orden Mobilida) en las branquias del berberecho (Carballal et al., 2001); así como otros ciliados no identificados en branquia y lumen de los túbulos del digestivo de la almeja rubia Polititapes (=Venerupis) rhomboides (Villalba et al., 1999). 6. Metazoos 6.1. Turbelarios: Los turbelarios (filo Platelmintos) que se han descrito asociados a moluscos bivalvos son rhabdocoelos pertenecientes a las familias Urastomidae y Graffillidae localizados en la cavidad paleal y en el lumen de la glándula digestiva, respectivamente (Cremonte, 2011). En la familia Graffillidae destaca el género Paravortex, turbelarios de la especie Paravortex cardii han sido descritos en el lumen del estómago del berberecho (C. edule) en Galicia (Carballal et al., 2001; Carballal et al., 2005), así como otros turbelarios de tipo Paravortex no identificados en el lumen de la glándula digestiva de diferentes especies de almeja, como R. decussata, Venerupis corrugata, R. philippinarum, Polititapes aureus, P. virgineus (López et al., 2012) y en lumen del intestino del mejillón M. galloprovincialis (Villalba et al., 1997). En muchos casos, los turbelarios han sido consideradas más como comensales que como auténticos parásitos (Lauckner, 1983). Sin embargo, Robledo et al. (1994a) observaron desorganización de los filamentos branquiales, infiltración hemocitaria intensa y necrosis del tejido branquial circundante asociada a la presencia de Urastoma cyprinidae (Urastomidae) en mejillón (M. galloprovincialis) en las costas gallegas, sugiriendo que la presencia de turbelarios podría reducir la capacidad de alimentación del hospedador en casos de intensidad de infección elevada. MAITE RUIZ PÉREZ 14 6.2. Clase Cestoda: Los cestodos se caracterizan por presentar ciclos de vida complejos con distintas fases larvarias (denominadas comúnmente metacestodos) que utilizan a los moluscos bivalvos como hospedadores intermediarios y a los peces elasmobranquios como hospedadores definitivos en su fase de adultos (Lauckner, 1983). La identificación, a nivel de especie, de estadios larvarios de cestodos en base a su morfología es complicada, aunque se han desarrollado métodos de cultivo in vitro y técnicas moleculares que han permitido la descripción de nuevas especies de cestodos (revisado por Cremonte, 2011; López et al., 2012). Fundamentalmente existen cuatro órdenes diferentes de cestodos que parasitan a bivalvos marinos: Tetraphyllidea, Trypanorhyncha, Lecanicephalidea y Diphyllidea (Cremonte, 2011). La presencia de larvas de cestodos en lumen del tubo digestivo de almejas de distintos bancos gallegos queda patente en los informes anuales del programa de monitoreo realizado por la Unidad de Patología del Intecmar (Darriba, 2016). 6.3. Clase Trematoda: Se han descrito fases larvarias de trematodos digeneos en multitud de especies de bivalvos marinos, siendo considerados los principales metazoos parásitos de este grupo (Lauckner, 1983). Los trematodos de la subclase Digenea presentan ciclos de vida complejos que alternan fases de reproducción sexual y asexual. Los estadios larvarios parasitan un mínimo de dos hospedadores, de los cuales uno de ellos suele ser un molusco. Los moluscos suelen actuar tanto de hospedadores primarios, conteniendo esporocistes con estadios larvarios de cercaria en su interior, como de hospedadores secundarios presentando estadios de metacercaria, o bien ambos al mismo tiempo. No obstante, también se han observado moluscos actuando como hospedadores definitivos de trematodos. Entre las principales familias de trematodos digeneos que emplean a moluscos bivalvos como hospedadores primarios se encuentran Bucephalidae, Sanguinicolidae, Monorchiidae, Fellodistomidae cuyos hospedadores definitivos son generalmente peces y Gymnophallidae cuyos hospedadores definitivos son aves (Cremonte, 2011; Lauckner, 1983). Los esporocistes (fase larvaria), que contienen cercarias en desarrollo en su interior, se encuentran generalmente en la gónada del hospedador donde se dividen rápidamente, por reproducción asexual, pudiendo causar la castración total del animal y en casos avanzados, la infección se puede extender al resto de los órganos (Boehs et al., 2010; Calvo-Ugarteburu y Mc Quaid, 1998; Coustau et al., 1993; Cheng, 1967; Heasman et al., 1996; Lasiak, 1991, 1993; Lauckner, 1983). Además, se ha observado interferencia en el sistema circulatorio y deplección de las reservas energéticas, lo que conllevaría al debilitamiento e incluso la muerte del animal (Jonsson y Andre, 1992; Lauckner, 1983; Thieltges, 2006a). Otras alteraciones patológicas que se han reportado en infestaciones por esporocistes de trematodos, son disminución de la habilidad de enterramiento (haciéndolos más susceptibles a los predadores) y gigantismo (Cremonte et al., 2001; Lauckner, 1983). La Introducción 15 importancia de la infestación de los bivalvos a nivel poblacional depende de su prevalencia, esta varía en gran medida con las especies involucradas, el hábitat, la estación del año, la presencia de hospedadores definitivos, la edad, etc. (Cremonte, 2011). En Galicia, se han descrito esporocistes y cercarias del trematodo Protoectes maculatus (Fellodistomidae) mayoritariamente en manto, pero también en glándula digestiva, pie, riñón y branquias del mejillón (M. galloprovincialis) (Villalba et al., 1997), así como esporocistes de Labratrema minimus (Bucephalidae) en la gónada del berberecho (C. edule) (Iglesias, 2006). Además, se han descrito trematodos digeneos no identificados en berberecho, almeja rubia y en longueirón vello (Carballal et al., 2001; Rodríguez et al., 2009; Villalba et al., 1999). Entre las familias de trematodos que emplean a moluscos bivalvos como hospedadores secundarios se encuentran la Monorchiidae, Lepocreadiidae, Zoogonidae y Fellodistomidae, cuyos hospedadores definitivos son peces y los Gymnophallidae, Echinostomatidae, Psilostomatidae y Renicolidae, cuyos hospedadores definitivos son aves (Cremonte, 2011; Lauckner, 1983). La fase larvaria que albergan los bivalvos cuando actúan como hospedadores secundarios es la de metacercaria, estas frecuentemente aparecen enquistadas en diferentes tejidos, aunque también pueden aparecer sin enquistar en la cavidad paleal. Se han descrito diferentes patologías asociadas a la parasitación por metacercarias: reducción del crecimiento y la supervivencia (Desclaux et al., 2002; Lauckner, 1987; Thieltges, 2006b; Wegeberg y Jensen, 2003), hipertrofia o atrofia, debilitamiento, deformidad de las valvas, formación de crestas y ampollas, alteraciones del comportamiento favoreciendo la predación por parte de los hospedadores definitivos e incremento de la actividad metabólica (Lauckner, 1983). Asimismo, algunas de las metacercarias pertenecientes a las familias Echinostomatidae y Gymnophallidae pueden presentar importancia desde el punto de vista sanitario por ser parásitos potenciales para el hombre (Lauckner, 1983; Lee et al., 1993; Lee et al., 1996). En el caso de Galicia, se han descrito metacercarias Curtuteria sp. (Familia Echinostomatidae) enquistadas en la glándula pericárdica del longueirón vello en Galicia, con prevalencia e intensidad elevada (Rodríguez et al., 2009), así como metacercarias pertenecientes a Meiogymnophallus minutus (Gymnophallidae), Meiogymnophallus fossarum (Gymnophallidae) e Himasthla sp. (Echinostomatidae) en el manto y el pie, respectivamente, del berberecho C. edule (Iglesias, 2006). Además, en esta misma especie se describieron otras metacercarias no identificadas (Carballal et al., 2001; Iglesias, 2006). 6.4. Copépodos Los copépodos son los artrópodos parásitos más habitualmente reportados en moluscos bivalvos (Lauckner, 1983). Se han descrito una gran cantidad de especies de copépodos parasitando bivalvos, la mayor parte pertenecientes al orden Cyclopoida y MAITE RUIZ PÉREZ 16 en menor medida al orden Harpacticoida (Cremonte, 2011). Los copépodos generalmente se localizan adheridos a las branquias o en el lumen del intestino, y generalmente son inocuos para el hospedador, debido a la baja prevalencia e intensidad con la que aparecen (Bower, 2002). En Galicia, se han descrito copépodos Mytilicola intestinalis en el lumen del digestivo del mejillón M. galloprovincialis (Figueras et al., 1991; Villalba et al., 1997), copépodos de tipo Mytilicola en el lumen del intestino del berberecho (C. edule) (Carballal et al., 2001), así como otros copépodos no identificados en lumen del digestivo y branquias de la almeja rubia (P. virgineus) y en branquias y cavidad paleal del berberecho (Carballal et al., 2001; Villalba et al., 1999). 7. Neoplasmas Los neoplasmas se definen como masas anormales de tejido causado por una proliferación celular incontrolada y progresiva que continúa tras la desaparición del estímulo original (Sparks, 1985). En moluscos bivalvos, se han descrito fundamentalmente dos tipos de neoplasmas: la neoplasia diseminada y un tipo de neoplasia gonadal denominado germinoma. Ambos tipos se ajustan a la definición de tumor maligno, presentando células pleomórficas sin diferenciar, con un crecimiento rápido e invasivo, presencia de abundantes figuras mitóticas, metástasis y un crecimiento progresivo que resulta en la muerte del hospedador (Sparks, 1985). Tanto la neoplasia diseminada como el germinoma han sido observados en niveles epizoóticos en diferentes especies de bivalvos causando, en ocasiones, pérdidas económicas importantes por lo que se ha dedicado un gran esfuerzo investigador a esta patología existiendo varias revisiones bibliográficas sobre este tema (Barber, 2004; Carballal et al., 2015; Elston et al., 1992; Pauley, 1969; Peters, 1988; Peters et al., 1994; Ruiz y López, 2012; Sindermann, 1990). 7.1. Germinoma Existen tres histotipos de neoplasma gonadal en moluscos bivalvos: el germinoma, el neoplasma de origen estromal y el gonadoblastoma que sería un histotipo intermedio entre los dos anteriores (Barber, 2004; Peters et al., 1994). El germinoma es el histotipo más frecuente y se caracteriza por la sustitución del epitelio germinal normal por células poliédricas no diferenciadas que proliferan en lugar de madurar. Estas células presentan un citoplasma rosado núcleos vesiculares que suelen presentar cromatina marginal y un prominente nucleolo acidófilo (Hesselman et al., 1988), siendo frecuente la presencia de figuras mitóticas. El germinoma inicialmente aparece como pequeños focos en uno o más folículos gonadales, y posteriormente llena una gran parte, incluso la totalidad de los folículos, pudiendo invadir el tejido conectivo interfolicular, la pared del cuerpo, la cámara epibranquial y los conductos genitales en los casos más severos, destruyendo la arquitectura normal de la gónada (Hesselman et al., 1988; Peters et al., 1994) pudiendo llegar a interferir en la gametogénesis normal, Introducción 17 provocando una reducción de la fecundidad así como la muerte de los individuos afectados. En Galicia, esta patología se ha detectado en Mytilus galloprovincialis en la Ría de Vigo (Alonso et al., 2001; Ruiz et al., 2011; Ruiz et al., 2013), en la especie invasora de mejillón Xenotrobus securis (Pascual et al., 2010), así como en la navaja Ensis magnus (=E. arcuatus) (Darriba et al., 2006). En cuanto a la etiología del germinoma, se han propuesto diferentes teorías a lo largo de los años, aunque ninguna de ellas explicaría el total de los casos descritos, por lo que este tema sigue siendo objeto de controversia. Varios autores han investigado la posible asociación entre la neoplasia gonadal y la presencia de elevados niveles de diferentes contaminantes, como fuel oil (Barry y Yevich, 1975; Brown et al., 1977; Harshbarger et al., 1979; Yevich y Barszcz, 1976, 1977), herbicidas (Gardner et al., 1991), hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAHs) y bifenilos policlorados (PCBs) (Ruiz et al., 2011; Ruiz et al., 2013). En el caso de Ruiz et al. (2011; 2013) se ha observado una correlación entre la prevalencia del germinoma y los niveles de PAHs y PCBs en los tejidos de M. galloprovincialis, lo cual supone una evidencia clara de la relación entre el germinoma y compuestos carcinogénicos ambientales (Carballal et al., 2015). Además, en ensayos de laboratorio, se ha observado que la exposición a sustancias como dioxinas o benzopireno puede provocar rotura de las hebras de ADN así como alterar la expresión de genes implicados en la regulación del ciclo celular en bivalvos (Di et al., 2011; Van Beneden et al., 1997). Sin embargo, el hecho de que no se haya podido inducir la enfermedad de forma experimental, que esta no aparece en todas las poblaciones expuestas a contaminación y que se han observado casos de germinoma en zonas libres de contaminación, arroja dudas acerca del rol de los contaminantes ambientales en el desarrollo de esta enfermedad. 7.2. Neoplasia diseminada Esta enfermedad se caracteriza por la presencia de células de gran tamaño, con forma redondeada u ovalada, anaplásicas, con una relación núcleo citoplasma alta, núcleos hipercromáticos a menudo polimórficos, conteniendo uno o más nucleolos prominentes, en ocasiones con presencia de figuras mitóticas y localizadas en el tejido conjuntivo de varios órganos, vasos y senos de la hemolinfa (Elston et al., 1992; Peters, 1988). La sustitución de las células normales por células neoplásicas provoca la pérdida de la arquitectura normal de órganos y tejidos, y con la progresión de la enfermedad finalmente la muerte del organismo; aunque se han observados casos de remisión de la enfermedad, al menos de forma temporal (Brousseau y Baglivo, 1991; Elston et al., 1988). Se han descrito casos de neoplasia diseminada en al menos 23 especies diferentes de bivalvos marinos y parece que la enfermedad presenta una distribución geográfica ubicua (Barber, 2004; Carballal et al., 2015; Elston et al., 1992). En las costas gallegas, en ocasiones esta patología ha sido asociada a episodios de mortalidad: en Ostrea edulis (Alderman et al., 1977; da Silva et al., 2011), en almeja bicuda Polititapes aureus (= Venerupis aurea) (Iglesias et al., 2007) y en berberecho Cerastoderma edule MAITE RUIZ PÉREZ 18 (Ordás y Figueras, 2005; Villalba et al., 2001). Un estudio llevado a cabo por Díaz et al. (2016) en bancos de berberecho, a lo largo de siete años, concluye que la neoplasia diseminada es hiperendémica en Galicia y que está presente a lo largo de todo el año con valores mínimos de prevalencia en primavera debido a la mortandad de los individuos más afectados durante la época de madurez y puesta. Estudios recientes han puesto de manifiesto, en algunos bivalvos, que las células neoplásicas tienen un genotipo diferente al de las células sanas de sus hospedadores y que además de transmitirse de ejemplares enfermos a ejemplares sanos pueden incluso transmitirse entre especies (Metzger et al., 2015; Metzger et al., 2016). JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS Justificación y Objetivos 21 Los solénidos cobraron relevancia como recurso emergente a lo largo de los años 90, cuando estaba teniendo lugar la reorganización y la profesionalización del sector marisquero. Se perfilaban como un recurso con gran potencial que permitía la diversificación del marisqueo hacia especies distintas de las tradicionales y como un nuevo nicho de ocupación laboral para las poblaciones costeras con bancos de estas especies, tanto intermareales como submareales. En el Centro de Investigacións Mariñas, dependiente de la Consellería de Pesca, Marisqueo e Acuicultura, se pusieron en marcha estudios que pretendían la evaluación del impacto de las artes y técnicas empleadas para su extracción, el conocimiento de los ciclos reproductivos para contar con criterios biológicos en el establecimiento de las vedas y también estudios orientados a valorar las posibilidades de cultivo. En 1998, los solénidos entraron a formar parte del grupo de los denominados “recursos específicos”, donde se engloban aquellas especies marisqueras que por sus características biológicas, su técnica de extracción o las especificidades de su comercialización requieren un sistema de gestión que atienda a estas particularidades. Una vez cubiertas las primeras necesidades de conocimiento surgió la necesidad de profundizar en el conocimiento de las patologías que les afectaban y que podían influir en la sostenibilidad de los principales bancos en los que se extraían estos recursos marisqueros. Tras los primeros resultados obtenidos a partir de los estudios histológicos para conocer los ciclos reproductivos y tras la detección de una especie de Marteilia infectando al longueirón vello (Solen marginatus) se consideró necesario estudiar a fondo las tres especies con los siguientes objetivos: 1. Caracterización a nivel histopatológico de los organismos simbiontes y alteraciones patológicas que afectan a cada una de las tres especies comerciales de solénidos de Galicia en los bancos más importantes y en distintas épocas del año. 2. Avanzar en la identificación de aquellos simbiontes y alteraciones patológicas de mayor importancia. 3. Evaluar si alguno de los agentes patógenos o alteraciones detectadas supone una amenaza para la continuidad de los bancos marisqueros. 4. Establecer una serie de recomendaciones, desde el punto de vista de la patología, cara a la sostenibilidad y mejor gestión de estos recursos. MAITE RUIZ PÉREZ 28 Además, debido a su potencial patogénico, en el artículo 3 de este capítulo se realizó la caracterización ultraestructural de los esporocistes de trematodos digeneos. Para ello, se aislaron algunas cercarias in vivo y se procesaron por microscopía electrónica de barrido para describir su estructura superficial. Adicionalmente, se realizó un estudio epidemiológico entre los años 2008 a 2010 en diferentes bancos naturales de navaja situados en las Rías de Pontevedra y Vigo con el objetivo de determinar los niveles de infección actuales de los esporocistes de trematodos. Para ello se calculó la prevalencia de los esporocistes y se comparó estadísticamente con datos de años previos. Capítulo 1. Artículo 1 29 ARTÍCULO 1. Histological survey of symbionts and other conditions in razor clam Ensis arcuatus (Jeffreys, 1865) (Pharidae) of the coast of Galicia (NW Spain) http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022201109002778 Capítulo 1. Artículo 2 31 ARTÍCULO 2. Viral basophilic inclusions in the digestive gland of razor clams Ensis arcuatus (Pharidae) in Galicia (NW Spain) http://www.int-res.com/abstracts/dao/v94/n3/p239-241/ Capítulo 1. Artículo 3 33 ARTÍCULO 3. Epidemiological survey of digenean trematodes affecting razor clams, Ensis arcuatus, from Galicia (NW Spain) https://eafp.org/download/2012-volume32/issue_1/3%20Lopez.pdf CAPÍTULO 2. Estudio histopatológico de poblaciones de longueirón (Ensis siliqua) de Galicia Este capítulo ha sido publicado en la revista: Journal of Invertebrate Pathology 112(1):74-82. 2013 Autores: Ruiz M, Darriba S, Rodríguez R, López C Capítulo 2. Introducción 37 INTRODUCCIÓN El longueirón, Ensis siliqua, es un molusco bivalvo infaunal que vive enterrado en la arena en el intermareal bajo e infralitoral. Al igual que con la navaja (Ensis magnus) se han llevado a cabo, en Galicia, diferentes estudios para mejorar la gestión de la extracción, tanto en lo relacionado con el impacto de las artes de pesca (Catoira y Traba, 1997; Sebe y Guerra, 1997), con el ciclo reproductivo (Darriba et al., 2005b; Martínez-Patiño, 2002) y con las posibilidades de cultivo (da Costa et al., 2010). Los estudios de patología de esta especie son escasos. Ceschia et al. (2001) cita la presencia de procariotas tipo rickettsia, gregarinas Nematopsis sp. y trematodos en esta misma especie. En este capítulo se ha realizado un estudio histopatológico en dos bancos de longueirón, Ensis siliqua, uno ubicado en Fisterra (Ría de Corcubión), y otro en Barra (Ría de Vigo). Para ello, se recogieron muestras mensualmente desde enero del 2003 hasta junio del 2004 en Fisterra, siendo este uno de los principales bancos de producción de esta especie en Galicia, y de abril del 2009 a junio del 2010 en Barra. Las técnicas empleadas para este estudio fueron la técnica de histología clásica para el microscopio óptico y la técnica de microscopía electrónica de transmisión, para el análisis ultraestructural de dos tipos de inclusiones basófilas no identificadas, ambas halladas en la glándula digestiva. Capítulo 3. Artículo 5 45 ARTÍCULO 5. Marteilia sp. and other parasites and pathological conditions in Solen marginatus populations along the Galician coast (NW Spain) http://www.int-res.com/abstracts/dao/v112/n3/p177-184/ Capítulo 3. Artículo 6 47 ARTÍCULO 6. A novel paramyxean parasite, Marteilia octospora n. sp. (Cercozoa) infecting the Grooved Razor Shell clam Solen marginatus from Galicia (NW Spain) http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S002220111630012X DISCUSIÓN GENERAL Discusión General 51 El estudio histopatológico llevado a cabo en las distintas especies de solénidos de interés comercial en Galicia –Ensis magnus (=Ensis arcuatus), Ensis siliqua y Solen marginatus-, mostró la presencia de diferentes simbiontes, así como de condiciones anormales o alteraciones patológicas, no encontrándose ninguno de los agentes patógenos incluidos en la lista de enfermedades de declaración obligatoria de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE), ni los recogidos por la legislación europea (Directiva 2006/88). La presencia de organismos simbiontes en bivalvos, no tiene por qué afectar negativamente al hospedador, de hecho muchos de estos organismos simbiontes se consideran generalmente meros comensales, como es el caso de ciliados y turbelarios, salvo cuando su intensidad es muy alta. De los simbiontes detectados en esta tesis destacaron como potencialmente patogénicos las fases larvarias de trematodos digeneos en las 3 especies estudiadas y la Marteilia octospora en S. marginatus. Se podrían también considerar como riesgo patogénico los quistes de organismos procariotas detectados en la branquia de S. marginatus debido a las altas prevalencias detectadas en algunos bancos y la reacción hemocitaria generada en el hospedador. Con respecto a las fases larvarias de trematodos digeneos, lo más destacable fueron los esporoquistes de la familia Bucephalidae (suborden Gasterostomata) invadiendo la gónada y otros órganos en E. magnus y E. siliqua. En Galicia, se han descrito esporocistes y cercarias de Labratrema minimus (Bucephalidae) en diferentes bancos de berberecho Cerastoderma edule (Iglesias et al., 2003), algunos próximos a zonas de explotación de navaja. En cuanto a los daños provocados en la navaja, se observó la ruptura de los tejidos invadidos, así como la castración de los ejemplares que presentaban alta intensidad de parasitación, esta es una consecuencia común en las infecciones causadas por esporoquistes en moluscos bivalvos (Boehs et al., 2010; Calvo- Ugarteburu y Mc Quaid, 1998; Coustau et al., 1993; Cheng, 1967; Heasman et al., 1996; Lasiak, 1991, 1993; Lauckner, 1983). A nivel poblacional, las prevalencias estimadas durante este trabajo fueron muy bajas, y la comparación estadística con datos previos indica que no parece que haya un incremento temporal en la prevalencia de los esporocistes de trematodos en las poblaciones de E. magnus analizadas. Otra fase larvaria de trematodos detectada en Solénidos fue la de metacercaria, destacando por su prevalencia las metacercarias enquistada en la glándula MAITE RUIZ PÉREZ 52 pericárdica de S. marginatus. Altas cargas de metacercarias se han reportado en diferentes especies de moluscos bivalvos y entre los efectos provocados se describieron: alteración de las tasas de crecimiento, reducción de la habilidad de enterramiento y un incremento de la mortalidad (Bower, 2010b; Desclaux et al., 2002; Thieltges, 2006b). Metacercarias de las especies Renicola roscovita e Himasthla spp. se han identificado en la navaja americana Ensis americanus (= directus) en la región del Mar Muerto (Krakau et al., 2006), así como quistes de Curtuteria spp. en la glándula pericárdica de S. marginatus en Galicia (Rodríguez et al., 2009). La presencia de Marteilia, en diferentes bancos de S. marginatus a lo largo de la costa gallega, mostró que la distribución de este protozoo está principalmente focalizada en la Ría Arousa, donde fue detectada en varios bancos, registrándose casos aislados en la Ría de Ortigueira. Marteilia sp. en S. marginatus en Galicia fue detectada por López y Darriba (2006), poniendo en evidencia que podía ser una nueva especie. Posteriormente, Marteilia refringens fue descrita en S. marginatus en Andalucía (López-Flores et al., 2008). M. refringens fue también reportada en España con anterioridad en mejillón (Mytilus galloprovincialis), y más tarde en otras especies de bivalvos (revisado por Carrasco et al., 2015). Recientemente una nueva especie del género Marteilia (M. conchillia) fue descrita en el berberecho C. edule en Cataluña y Galicia, asociado en este caso con episodios de mortalidad que acarrearon importantes pérdidas económicas (Carrasco et al., 2011; Carrasco et al., 2013; Villalba et al., 2014). En esta tesis se confirma la presencia de una nueva especie del género Marteilia en S. marginatus en Galicia. La característica morfológica más relevante de esta nueva especie es el número de esporas por esporangio (8), siendo el número más alto de los reportados en este género, por lo que fue nombrada como Marteilia octospora. Los análisis filogenéticos del estudio molecular mostraron mayor similitud con M. conchillia que con M. refringens. M. octospora parece mostrar una alta especificidad por el hospedador S. marginatus ya que el parásito ha sido detectado por primera vez en la Ría de Arousa en el año 2003 y desde este momento no ha sido detectado en otras especies de bivalvos que cohabitan en esa misma área de producción. Durante este estudio no se observó ningún patrón temporal de esta enfermedad, del mismo modo que en el caso de las poblaciones de mejillón de Galicia afectadas por M. refringens (Villalba et al., 1993c). Discusión General 53 En relación a la presencia de organismos procariotas en solénidos, además de observarse colonias intracelulares tipo rickettsias en glándula digestiva en las tres especies, y en branquia en E. siliqua y S. marginatus, lo más destacable fueron unos quistes de organismos procariotas en branquia de S. marginatus. Las prevalencias más altas fueron las de las colonias procariotas intracelulares y los quistes en branquia en S. marginatus. El estudio ultraestructural confirmó que las características morfológicas de los organismos procariotas contenidos en dichas colonias y quistes eran similares, aunque la localización de los quistes parece extracelular, presentando una envoltura gruesa compuesta por material electro-denso y una pared exterior. Quistes extracelulares similares, presentando una envuelta que según Gulka y Chang (1984) podría ser producida por el hospedador como respuesta defensiva, se describieron en otros bivalvos (Carballal et al., 2001; Costa et al., 2012; Goggin y Lester, 1990; Gulka y Chang, 1984; Villalba et al., 1999), Otros organismos simbiontes que no destacaron por su potencial efecto patogénico, sino por su naturaleza vírica, fueron las inclusiones basófilas observadas en el interior de células epiteliales de la glándula digestiva de E. magnus y E. siliqua. Morfológicamente recordaron a las inclusiones intranucleares de origen viral de la gónada de las ostras Crassostrea virginica (Farley, 1976) y Crassostrea gigas (Cheslett et al., 2009; Choi et al., 2004; Garcia et al., 2006). El análisis ultraestructural confirmó que se trataba de virus, siendo esta la primera descripción de partículas virales en solénidos. El tamaño y la simetría de las partículas virales concuerdan con los virus descritos en la ostra Crassostrea virginica (Farley, 1976; McGladdery y Stephenson, 1994; Winstead y Courtney, 2003) y C. gigas (Cheslett et al., 2009; Choi et al., 2004; Garcia et al., 2006; Meyers et al., 2009) causantes de la patología conocida como hipertrofia gonadal viral (VGH). En base a su morfología, estos autores relacionan estos virus con los de las familias Papillomaviridae y Polyomaviridae. Entre las alteraciones patológicas, no asociadas a la presencia de organismos simbiontes, cabe destacar la presencia de neoplasia gonadal (germinoma) en E. magnus y E. siliqua; y neoplasia diseminada en S. marginatus y E. siliqua. Darriba et al. (2006) reportó el primer caso de germinoma en E. magnus, aunque con menor prevalencia que los resultados obtenidos en esta tesis en la misma especie. Esta patología según su extensión puede llegar Bibliografía 61 Abollo, E., Ramilo, A., Casas, S.M., Comesana, P., Cao, A., Carballal, M.J., Villalba, A., 2008. First detection of the protozoan parasite Bonamia exitiosa (Haplosporidia) infecting flat oyster Ostrea edulis grown in European waters. Aquaculture. 274, 201-207. Alderman, D.J., van Banning, P., Pérez-Colomer, A., 1977. Two european oyster (Ostrea edulis) mortalities associated with an abnormal haemocytic condition. Aquaculture. 10, 335-340. Alderman, D.J., 1979. Epizootiology of Marteilia refringens in Europe. Marine Fisheries Review. 41, 67-69. Alonso-González, A., Mariño Folla-Cisneros, J.A., 1994. Os longueiróns e as navallas: recursos emerxentes. Marisqueo en Galicia. 3ª Xornadas de medio mariño e acuicultura. Edicións do Castro, Sada, pp. 109-125. Alonso, A., Suárez, P., Alvarez, C., San Juan, F., Molist, P., 2001. 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