Estudio mediante cromatografía en capa fina de la esencia de Thymus Longiflorus Boiss

DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGIA ESTUDIO MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA DE LA ESENCIA DE THYMUS LONGIFLORUS BOISS J. Cabo To es, M. M. Cabo Ci es, T. C uz Ga cía y J. Jiménez Ma ín RESUMEN Basándonos en la écnica de C oma og a ía en Capa Fina, se ha conseguido la de ección y pos e io iden i icación de a ios de los componen es de la esencia de Thymus Longi lo us Boiss. Asimismo se ha lle ado a cabo la cuan i icación de aquellos componen es que se p esen aban en mayo p opo ción. SUMMARY Fine Laye Ch oma og aphy was used o achie e he sepa a ion and subsequen iden i ica ion o a se ies o componen s o he essen ial oil o Thymus Longi lo us Boiss. Those componen s ob ained in la ges amoun s we e al so quan i ied by pho odensi ome y. INTRODUCCION Es e abajo se engloba en una de las líneas de in es igación del Depa amen o: Plan as a omá icas (1,2,3). Nos cen amos en el es udio del Thymus longi lo us Boiss, po a a se de una especie escasamen e es udiada y que además es endémica de cie as zonas del Le an e y del Su es e español. Empleamos la écnica de C oma og a ía en Capa Fina po se un mé odo clásico de de ección, an o de componen es esenciales, como de o o ipo de p incipios (4). Resul a una écnica muy álida dada su ep oduc ibilidad, apidez y sencillo u illaje. Además la C oma og a ía en Capa Fina nos esul a pa icula men e ú il po que se i á como base pa a la cuan i icación de aquellos componen es de la esencia que A s Pha maceu ica. Tomo XXIX. Núm. 1, 1988 78 ARS PHARMACEUTlCA esul en más in e esan es po su mayo abundancia en la misma. La cuan i icación se ealizó po o odensi ome ía (5,6,7,8), écnica muy in e esan e y sin emba go aún poco u ilizada en el campo conc e o de las esencias. MATERIAL Y METO DOS Mues a.- Thymus longi lo us Boiss, ecolec ado en época de lo ación Uunio), en la Subes ación de Tabla e (G anada). La ex acción de la esencia se ealizó po el mé odo de ele enge (9), ob enién- dose un endimien o medio de 0,72 %. Análisis cuali a i o po C oma ología en capa Fina. -Ex enso : Desaga (manual). -Placas: 20 x 20 cm, capa de 250 Ínic as de espeso de Silicagel G Me ck. -Ac i ación: a 110· e du an e 30 minu os, p e ia desecación a empe a u a ambien e y en iadas en desecado sob e Silicagel con indicado de humedad. -Fase mó il: . Benceno / E e 85/15 ·N-hep ano N-hexano / E e 85/15 -Desa ollo: 10 cm unidimensional ascenden e en cube as "Desaga" a sa u a ción. -Re elado : solución e anólica de ainilla al 3%. A 100 mI de es a solución se le adicionan 4 mI de ácido sul ú ico concen ado en el momen o de su empleo. -Visualización: median e nebulizado ino de id io, con olando la can idad de eac i o (ap oximadamen e 25 mI po placa). Pos e io calen amien o en es u a a 110· e du an e unos 7 minu os. Análisis cuan i a i o po Fo odensi ome ía U ilizamos un o odensi óme o Shimadzu High-speed hin-Iaye eh oma o Scanne (model eS-920). Las lec u as se ealiza on a 520 nm, sob e placas de Silicagel G Me e, con 25 0 mic as de espeso . La ase mó il seleccionada ue Benceno/ E e 85/15. El e elado se ealizó con ainillina alcohólica adicionada de ácido sul ú ico al 4% y pos e io calen amien o en es u a a 110· e, du an e 7 minu os. RESULTADOS Y DISeUSION Fase mó il.-En el apa ado "Ma e ial y Mé odos", ci ábamos las ases mó iles que habían esul ado más idóneas como esul ado de una se ie de ensayos p e ios. T as el es udio c í ico compa a i o de es as ases, adop amos Benceno/E e 85/15 como ase única po es ima que se ap ecia en ella: a) Mayo núme o de compone es de ec ados y mejo sepa ación de los mismos. b) Mejo esolución de los p incipios u ilizados. Iden i icación de componen es.- Los alo es absolu os de R de las manchas c oma og á ica� que po su in ensidad pa ecían co esponde a los p incipales componen es de la esencia de Thymus longi lo us Boiss, no ienen, po supues o más alo que el me amen e o ien a i o, aunque se basa en una acep able coincidencia con ARS PHARMACEUTICA 79 los ob enidos an e ionnen e en condiciones simila es. Tal o ien ación, es sin emba go ú il, pa a busca una a i icación más sólida seleccionando los posibles componen es, al es ado pu o, que es aconsejable con as a con los de la esencia. Dichos componen es son: bo neol, cineol, e pinen-4-01, ace a o de e penilo y a- e pineol. La pau a seguida pa a su a i icación p e ia iden i icación ha sido: -Esencia -Esencia en iquecida en un de enninado componen e !: -Componen e !: Los esul ados ob enidos median e la me odología de allada an e ionnen e, que dan e lejados en las o og a ías 1,2 Y 3. Su es udio minucioso y azonado, adecuada men e discu ido en p o y en con a, nos lle a a suge i que en la esencia de Thymus longi lo us Boiss es án p esen es: Cineol (Tabla 1), Bo neol (Tabla 1), Te pinen-4-01 (Tabla 11), Ace a o de e penilo (Tabla 11) y a- e pineol (Tabla I1I). De los cinco componen es iden i icados en p incipio po C oma og a ía en Capa Fina, y dado que es de ellos (a- e pineol, bo neol y e pinen-4-01) son los que p esen an manchas c oma og á icas de mayo supe icie, nos cen amos en el es udio de los mismos median e la écnica o odensi omé ica. Las mues as u ilizadas pa a es a écnica ue on: -Dilución al 5% de esencia de Thymus longi lo us Boiss -Dilución de cineol al 1,7% y 2% -Dilución de a- e pineol al 0,06% y 0, 3% -Dilución de e pinen-4-01 al 0,05% y 0,2% En odos los casos los depósi os ue on de 2 111. En p ime luga se p ocedió a la cons ucción de las cu as pa ón co espondien es a cineol, a- e pineol y e pinen-4-01; pa a ello se emplea on concen aciones muy p óximas en e sí y pe ec amen e conocidas de cada uno de es os componen es, ep esen ándose pos e ionnen e concen ación en e a núme o de cuen as absolu as que p opo cionaba el o odensi óme o pa a cada una de las concen aciones, así pudimos llega al conocimien o de cuál e a el ma gen de concen ación con el cual debíamos abaja pa a la cuan i icación de la mues a p oblema. Una ez conocidos los má genes de concen ación adecuados, se lle a on a cabo nume osas lec u as de la mues a en es udio. Los esul ados ob enidos en onna de "cuen as absolu as" se e lejan en las Tablas IV, V Y VI. Po úl imo y aplicando un mé odo de in e polación (5 ), se llegó a la de enninación de los po cen ajes absolu os de los es componen es es udiados en la esencia de Thymus longijlo us Boiss: -Cineol: 37,2% ± 0,043 -a- e pineol: 3,44% ± 0,0265 - e pinen-4-01: 2,62% ± 0,00216 Aplicando es a me odología hemos ob enido esul ados conco dan es, incluso compa ando los ob enidos con placas di e en es, como lo e elan los cálculos es adís icos. Ello penni e conclui que ins umen al y écnica empleados son adecua dos pa a es e ipo de análisis cuan i a i o de compues os p esen es en esencias. 80 ARS PHARMACEUTICA Tabla 1 R x 100 1.- Esencia 28 33 39 52 61 70 2.- Esencia + Te pinen-4-o1 28 33 39 52 61 70 3.- Te pinen-4-o1 39 4.- Esencia 28 33 39 52 61 70 5.- Esencia + Te pinen-4-o1 28 33 39 52 61 70 6.- Te pinen-4-o1 39 7.- Esencia 28 J3 39 52 61 70 8.- Esencia + Ace . e penilo 28 33 39 52 61 70 9.-Ace . e penilo 61 10.- Esencia 28 33 39 52 61 70 1 1.- Esencia+Ace . e penilo 28 33 39 52 61 70 12.- Ace . e penilo 61 . .. • • ARS PHARMACEUTICA 81 Tabla II R x 100 1.-Esencia 28 33 39 53 61 70 2.- Esencia + Cineol 28 33 39 52 61 70 3.- Cineol 39 4.- Esencia 28 33 39 52 61 70 5.- Esencia + Cineol 28 33 39 52 61 70 6.- Cineo) 39 7.- Esencia 28 33 39 52 61 70 8.-E encia + Bo neo) 28 33 39 52 61 70 9.- Bo neol 61 10.-Esencia 28 33 39 52 61 70 11.-Esencia + Bo neol 28 33 39 52 61 70 12.- Bo neol 33 82 ARS PHARMACEUTICA Tabla III R x 100 1.-Esencia 29 33 40 53 61 69 2.-Esencia + (X-Te pineol 29 33 40 53 61 69 3.- (X-Te pineol 29 4.- Esencia 29 33 40 53 6 69 5.- Esencia + (X-Te pineol 29 33 40 53 61 69 6.-(X-Te pineol 29 ARS PHARMACEUTICA 83 Tabla IV Esencia Thy nus longi lo us al 5 % (lOO Y /2111). Cineol al 1,7 % (34 Y /2111). Cineol al 2 % (40 Y /2111) Lec u a o odensi o né icas ("cuen as absolu as") PLACA Cin(34y) Es (100 y) Cin(40y) Cin(34y) Es (100 y) Cin(40y) nº I 20034 23241 25324 20322 23060 25498 20370 23018 25427 20374 22983 25279 20349 22597 25028 20213 22937 25164 20318 22829 25138 20319 22852 25137 nº 2 20389 22938 25158 20374 22888 25135 20095 22869 25122 20122 22773 25301 20312 22773 25264 19967 22886 25104 20365 22893 25129 20085 22796 25304 Tabla V Esencia Thy nus longi lo us al 5 % (100 Y /2111). a- e pineol al 0,06 % (1,2 Y /2111). a- e pineol al 0,3 % (6 Y /2111) Lec u as o odensi o né icas ("cuen as absolu as") I PLACA a- e (1,2 y) Es(lOOy) a- e (6y) a- e ( I ,2y) Es(lOOy) a- e (6y) nº 3 1384 2859 4331 1329 2716 4330 1345 2718 4322 1317 2711 4315 1317 2720 4408 1323 2741 4367 1293 2742 4323 1292 2704 4336 nº 4 1300 2273 3640 1337 2697 4330 1299 2703 4343 1304 2737 4344 1297 2716 4348 1311 2722 4361 1315 2716 4365 1306 2748 4364 84 ARS PHARMACEUTICA Tabla VI Esencia Thy nus longi lo us al 5 % (100 Y /2 111). Te pinen-4-ol al 0,05 % (Iy /211 1). Te pinen-4-ol al 0,2 % (4 Y /2111) Lec u as o odensi o né icas ("cuen as absolu as") PLACA Te (Iy) Es (lOOy) Te (4y) Te (ly) Es (lOOy) Te (4y) nQ 5 1275 2585 3692 1239 2568 3696 1262 2586 3715 • 1265 2577 3713 1246 2588 3728 1264 2592 3735 1266 2592 3735 1266 2610 3741 nQ 6 1288 2614 3764 1300 2642 3807 1288 2629 3776 1295 2630 3772 1261 2631 3772 1276 2635 3791 1273 2637 3811 1289 2647 38l·8 BIBLIOGRAFIA (1) CABO TORRES, J.; CABO ClRES, M. M.; CRESPO GIL, M. E.; JIMENEZ MARTIN, J.; NA VARRO MOLL, C. "Thymus g ana ensis Boiss. 1.-E ude quali a i e e quan i a i e de son huile essen ielle". Plan es medo e phy o he . 20 (1), 18-24, (1986). (2) CABO TORRES, J.; BRAVO DIAZ, L; JIMENEZ MARTIN, J; NAVARRO MOLL, C. "Thymus hiemalis Lange. E ude quali e quan i a i e de son huile essen ielle pa C. G.". Plan a méd. 39, 270 (1980). (3) GOMIS HURTADO, E. "Thymus se pylloides subesp. Gado ensis: Es udios a macognós icos". Tesina, G anada, (1987). 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