Muses déficients du récepteur de la vitamine D comme modèle pour la Rachite de type II dépendante de la vitamine D

Desi Wisdhajanti Soegiarto

Dipl. Biol. Muses déficients de la vitamine D-récepteur comme modèle de la Rachite de type II dépendante de la vitamine D né le 27 décembre 1965 Examen de maturité le 28 avril 1984 Curriculum de la faculté de biologie du WS 1986/87 à SS 1993 Diplôme de premier cycle le 25 janvier 1989 à l'Université de Heidelberg Diplôme du 27 mai 1993 à l'Université de Heidelberg doctorat: génétique humaine Docteur: Prof. Dr. Werner Buselmaier Dans ce travail de thèse, un mutant de souris (VDR tmNeu1 - souris) avec le gène du récepteur de vitamine D (VDR) inactivé a été créé. Le gène VDR de la souris a été isolé de la bibliothèque génétique de l'ADN de la souris 129/SvJ en -DASHII en utilisant les deux premiers exons codants du gène VDR comme sondes. Le gène VDR a été désactivé par recombinaison homologue entre le gène endogène et un vecteur de ciblage. Les séquences 5' (6 kb de long) et 3' (2,7 kb de long) de l'exon 2 qui a codé la première région du doigt de zinc du domaine de liaison de l'ADN ont été utilisées pour les points de recombinaison homologue. Comme beaucoup d'autres stéroïdes récepteurs, le gène VDR n'est exprimé que très peu dans certains tissus et à un moment donné. C'est pourquoi l'expression du gène est difficile à détecter. L'intégration des bactéries

lacZ

Une cassette dans la structure a permis d'utiliser une méthode plus sensible pour analyser l'expression de

VDR-Gens. Die

lacZ

- la cassette a été utilisée avec les trois premiers acides aminés de l'exon 2 du VDR

Le gène a fusionné, ce qui a permis d'exprimer le gène réporteur sous régulation du promoteur endogène et en utilisant le code de départ endogène du gène VDR. Le vecteur de ciblage a été équipé d'une cassette de néomycinphosphotransferase (neo) pour le positif et d'un gène Herpes simplex thymidine kinase (HSV) pour la sélection négative de la recombination homologue. Le vecteur linéaire a été électrophorisé dans les cellules souches embryonnaires (cellules ES) des souris de la ligne R1 et respectivement. E14 eingeschleust. L'intégration du vecteur a été sélectionnée avec le métabolite de sélection positif G418 (généticine) et le métabolite de sélection négatif Gancyclovir (GANC). La recombinaison homologue a été vérifiée par l'entité d'intégration par l'hybridation de Southern Blot 5' et 3'. La transfection du vecteur dans les cellules ES de la ligne R1 a révélé huit clones positifs sur un total de 288 clones sélectionnés, tandis que l'électroforation du vecteur dans la ligne E14 de la ligne ES n'a révélé qu'un seul clone sur 187 sélectionnés. Pour créer les souris chimères, les clones ES positifs avec morulae de la tribu de la souris CD1 ont été agrégés. Les embryons portaient des souris défectueuses, dans l'utérus desquelles se trouvaient les embryons.

En parallèle avec des souris de la tribu, le CD1 a été transféré à l'aide de

La couleur de la peau a testé la transmission des germes chez les souris chimères.

Des souris du clone de la ligne de cellule E14 ES ont transmis la mutation aux descendants. Pour la reproduction des mutants de souris, les chimères ont été associés aux souris de la tribu mes C57BL/6 et les descendants ont été génotypés par l'hybridation de la plaque sud. Les animaux homozygotes ont été préservés par l'accouplement d'heterozygot en souris.

La preuve de l'activité de la β-galactosidase a permis d'exprimer largement le

Il s'agit là d'une analyse. L'expression de la VDR est détectée dès le jour de 10,5 pcs et persiste pendant le développement embryonnaire jusqu'à l'état adulte. Non seulement dans les organes cibles classiques de l'OH1, comme les os et les reins, et dans la thyroïde, l'expression de la VDR a été démontrée, mais aussi dans les tissus non directement impliqués dans l'homéostase du calcium, par exemple dans le pancréas, le foie, les organes reproducteurs, le système nerveux central et le cœur. Malgré la large expression de la VDR au cours du développement embryonnaire, les souris VDR tmNeu1 n'ont pas de phénomène post-natal. Les souris hétérozygotes (+/-) ne présentent aucun changement phénotypique même à l'âge de 12 mois. Jusqu'à l'abandon de l'animal maternel, on ne distinguait pas les souris homozygotes (-/-) du type sauvage (+/+) et des souris +/-.

Les souris femelles et mâles +/- et -/- sont fertiles et peuvent être jumelées. Le phénomène des descendants d'un animal maternel est plus caractéristique que celui des souris d'un animal maternel. L'âge des souris +/- et -/- n'est pas affecté par l'inactivation du VDR, mais quelques souris -/- sont mortes prématurément (à l'âge de six mois). Une semaine après l'abandon de l'animal maternel, le phénomène des -/- souris est déjà visible. Les -/- souris développent une alopécie et un hyperparathyroidisme secondaire. La mesure de la teneur totale en calcium dans le sérum permet de détecter une hypocalcémie qui n'est pas observée chez tous les -/- animaux. Die -/- Mäuse zeigen typische Veränderungen am Knochen. Le squelette des -/- souris apparaît plus transparent sur l'échographie suite à une perturbation de la minéralisation osseuse que celui des +/+ ou +/- souris. La perturbation de l'ossification perturbe la croissance de la longueur de l'os. La perturbation de la minéralisation entraîne des élargissements dans l'épiphyséphygène, appelés croix de rose rachique, sur les côtes. Il y a eu de nombreuses pseudo-fractures.

On trouve par exemple des zones sous-escarpées à l'intérieur des côtes, ce qui indique -/- VDR.

tmNeu1

-Mäuse

Les phénotypes correspondant aux symptômes des patients atteints de VDDR type II.

tmNeu1

Le mous mutant est destiné à servir de modèle animal pour l'étude de nouveaux domaines d'expression

Il s'agit d'examiner les effets génomiques et non génomiques de la vitamine D dans les organes cibles classiques et non classiques.