Identificazione e quantificazione della cicloossigenasi-2 nella lesione arteriosclerotica mediante PCR
Heike Oberwittler
Dott. medico: rilevazione e quantificazione della cicloossigenasi-2 nella lesione arteriosclerotica mediante PCR nato il 12 ottobre 1965 in Werther maturation test il 21 maggio 1985 a Bielefeld corso di studio della facoltà di medicina dal WS 1989 al WS 1996 fisica il 2 settembre 1991 presso l'università di Heidelberg studio clinico a Heidelberg anno pratico a Heidelberg esame statale il 7 novembre 1996 presso l'università di Heidelberg corso di laurea: medicina interna dottorato: Priv.
Come enzima chiave nella modificazione di questi eicosanoidi, la cicloossigenasi
Nel 1991 è stata descritta una seconda forma dell'enzima che, a differenza della prima forma, è sottoposta ad un modo di espressione induttivo oltre al costitutivo. Fino alla descrizione di questa cicloossigenasi-2, l'aumento dei prodotti non era chiaramente correlato all'aumento dell'enzima.
In questo lavoro sono stati utilizzati campioni di pareti aeree sane di centri di donazione cardiaca e
le placche arteriosclerotiche di arterie endometriche trombologiche provenienti dall'arteria carottica
Il contenuto di cicloossigenasi-1 e -2 è stato studiato. A causa della grande omologia tra i due enzimi e delle poche quantità di singoli campioni, la rilevazione a livello di mRNA è stata effettuata tramite RT-PCR. Per la quantificazione del COX-2-mRNA, in questo lavoro è stata stabilita una metodologia RT-PCR competitiva con uno standard non omologico, che è stato amplificato per quantificare cDNA e la sequenza standard con gli stessi primari.
Questo metodo ha permesso di dimostrare la specificità e la sensibilità di COX-2 fino a un minimo di 2 molecole nell'approccio PCR. Il competitivo RT-PCR è stato significativo con coefficienti di variazione < 12% in termini di riproducibilità. Per cDNA e sequenza standard è stata dimostrata la stessa efficienza di amplificazione, consentendo di effettuare la quantificazione con poco materiale di base indipendentemente dalla fase esponenziale del PCR.
In questo studio, oltre all'mRNA della cicloossigenasi-1 sono stati rilevati quelli della cicloossigenasi-2 nella parete aurea sana e nelle placche arteriosclerotiche.
La quantificazione della cicloossigenase-2 ha rilevato un'espressione media più elevata nel
la placca arteriosclerotica rispetto alla parete aurea sana. Questi risultati indicano una possibile importanza della cicloossidegenasi-2 nell'aterogenesi. La questione relativa alla funzione pro- o anti-aterogena non può essere risolta per l'enzima a causa della diversità dei prodotti finali. Da alcuni anni la cicloossidegenasi viene bloccata nella terapia clinica con ASS per inibire l'aggregazione dei trombociti favorita dal thromboxane.
Tuttavia, ulteriori ricerche hanno anche evidenziato la funzione protettiva della prostaglandina e
L'intervento terapeutico-bloccante a livello di cicloossigenasi, la cui induzione induce anche la produzione di protective prostaglandine e prostacycline, dovrebbe quindi essere ulteriormente studiato.