SIĞIRLARIN SOLUNUM YOLU HASTALIĞI KOMPLEKSİ ETKENİ: Pasteurella multocida

3 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV BÖLÜM 1 SIĞIRLARIN SOLUNUM YOLU HASTALIĞI KOMPLEKSİ ETKENİ: Pasteurella multocida Doç. Dr. Özgül GÜLAYDIN1 Prof. Dr. Kemal GÜRTÜRK2 DOI: https://dx.doi.org/10.5281/zenodo.10408046 1 Siirt Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji ABD, Siirt, Türkiye, ozgul.gula[email protected], ORCID ID 0000-0001-8376-2008 2 Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji ABD, Van, Türkiye kemalgur[email protected], ORCID ID 0000-0002-9372-8951 *Bu derleme 1. yazarın ‘Sığırların Solunum Yolundan İzole Edilen Pasteurella multocida Fenotip ve Genotiplerinde Virülens Genlerin Dağılımı’ başlıklı doktora tez eserinin bir kısmından özetlenmiştir. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 4 5 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV GİRİŞ Sığırların solunum yolu hastalığı kompleksi, dünyada besi sığırcılığının en önemli sorunlarından biridir (Smith, 1998; Horwood ve Mahony, 2011). Uzun yıllar süren çalışmalara rağmen bu hastalık kompleksi sığır besiciliğinde hala önemli ekonomik kayıplara neden olmaktadır. Hastalık, konakçı, çevre ve çeşitli patojen etkenlerin etkileşimine bağlı kompleks bir etiyolojiye sahiptir. Sıcaklık, hayvan sayısı, toz, nakliye ve diğer faktörler viral ve bakteriyel etkenlere karşı immun yanıtın oluşmasını olumsuz yönde etkileyebilmektedir (Horwood ve Mahony, 2011). Sığırların solunum yolu hastalığı kompleksi olgularında, sığır herpesvirus 1, sığır viral diyare virus, sığır parainfluenza virus 3 ve sığır respirator sinsityal virus en sık rastlanan viral etkenlerdir. Bu patojenlerin hastalık olgularında primer etken olarak rol oynayabildiği gibi sığır immun sisteminde baskılanmaya neden olarak sekonder bakteriyel enfeksiyonlara karşı duyarlılığı arttırdığına da inanılmaktadır (Horwood ve Mahony, 2011; Grissett ve ark., 2015). Bu durum sığırların solunum yolu hastalığı kompleksinde, Mannheimia (M.) haemolytica, Pasteurella (P.) multocida, Haemophilus (H.) somni gibi sığırların nazal boşluğunun doğal florasında yer alan fırsatçı patojenler ile Mycoplasma bovis gibi sekonder bakteriyel patojenlerin klinik hastalığa neden olmasına yol açmaktadır (Srikumaran ve ark., 2008; Horwood ve Mahony, 2011; Grissett ve ark., 2015). P. multocida’nın çeşitli hayvan türlerinde yaygın olarak bulunması nedeniyle bu bakteri ile ilişkili solunum yolu hastalıklarına yönelik sınırlı sayıda epidemiyolojik araştırma bulunmaktadır. Bununla birlikte bakterinin üst solunum yolunda kommensal olarak bulunması hastalığın teşhisi için yeterli görülmemekte ve P. multocida’nın sığırlarda görülen pnömoni olgularının primer sorumlusu olup olmadığı yönünde tartışmalar devam etmektedir (Dabo ve ark., 2008; Quinn ve ark., 2011). Bu nedenle P. multocida ile ilişkili hastalıkların, patojenik P. multocida suşları ile kommensal popülasyon arasındaki doğal farktan mı yoksa konakçı bakteri ilişkisindeki kesin bir değişime bağlı olarak mı ortaya çıktığı en önemli epidemiyolojik sorun olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte bakteriyel patojenlerin karakterizasyonuna yönelik yapılan çalışmalarda patojenik ve kommensal izolatlar arasında da doğal bir fark tespit edilmediği bildirilmiştir (Dabo ve ark., 2008). Birçok konakçı ve patojen ile ilişkili özellik, P. multocida suşlarının neden olduğu enfeksiyonların oluşumunu etkilemektedir. Bu kapsamda özellikle kapsül ve virülens ile ilişkili genlerin P. multocida enfeksiyonlarının patogenezinde önemli rol oynadığı bildirilmiştir (Harper ve ark., 2006; Dabo ve ark., 2008). Kapsül antijenlerine göre P. multocida suşları tip A, B, D, E ve F olmak üzere beş serogruba ayrılmaktadır. Tip A suşları kanatlı hayvanlarda SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 6 kolera ve sığırlarda “shipping fever“ hastalığına, tip B ve E ruminantlarda septisemiye, tip D ise domuzlarda atrofik nezleye neden olmaktadır. Günümüze kadar, sağlıklı veya klinik olarak hasta olan sığır, koyun, domuz, kanatlı hayvanlar gibi çeşitli konakçılardan kültürü yapılan P. multocida izolatlarında, kapsül genleri (capA, B, D, E ve F) ile birlikte, adherens ve kolonizasyon faktörleri (ptfA, fimA, hsf-1, hsf-2, pfhA ve tadD), demir bağlama ile ilişkili faktörler (exbB, exbD, tonB, hgbA, hgbB, Fur ve tbpA), hyaluronidaz (pmHAS) ve sialidaz (nanB ve nanH) gibi ekstrasellüler enzimler, süperoksit dismutaz (sodA ve sodC), dermonekrotoksin (toxA), dış membran ve porin proteinleri (ompA, ompH oma87 ve plpB,) ile ilişkili 23 adet virülens geni tanımlanmıştır (Ewers ve ark., 2006; Tang ve ark., 2009; Khamesipour ve ark., 2014). Farklı canlı türlerinden ve klinik olarak sağlıklı veya hasta hayvanlardan kültürü yapılan P. multocida izolatlarında virülens genlerinin belirlenmesine yönelik yapılan bir araştırmada konakçıya özgü olmamakla birlikte, toxA geninin domuzlarda capA ve klinik hastalıkla, klinik olarak hasta sığırlarda ise capB ve capE genlerinin pfhA virülens geni ile ilişkili olduğu, tbpA geninin ise hemorajik septisemi olgularından elde edilen P. multocida capB pozitif izolatlarında bulunduğu bildirilmiş ve söz konusu genlerin P. multocida izolatlarının karakterizasyonunda önemli bir epidemiyolojik marker olarak kullanılabileceği vurgulanmıştır. Araştırmada incelenen diğer virülens genlerinin (psl, ompH, oma87, nanB, tonB, sodA ve sodC) ise 9 farklı konakçı türünden elde edilen izolatlarda ve tüm kapsül tiplerinde bulunduğu ve patojenik suşların ayrımında önemli olmadığı bildirilmiştir (Ewers ve ark., 2006). Bu derlemede sığırlarda solunum yolu hastalıklarına neden olan önemli bakteriyel etkenlerin başında gelen P. multocida izolatlarının etiyolojik özelliklerinden, hayvanlarda neden olduğu hastalıklar ile identifikasyon ve tiplendirme yöntemlerinden bahsedilecektir. 1. PASTEURELLALARIN GENEL ÖZELLİKLERİ 1.1. Tarihçe ve Sınıflandırma P. multocida 1800’lü yıllarda ilk olarak Louis Pasteur tarafından tavuk kolerası etkeni olarak tanımlanmıştır. Pasteur yaptığı çalışmalar sonunda, seri pasajlama işleminin bakteri suşlarında virülensin düşmesine neden olduğunu ve bu suşların kanatlı hayvanlara inoküle edilmesiyle hayvanlarda etkene karşı koruyucu bağışıklık geliştiğini tespit etmiştir (Harper ve ark., 2006; Dabo ve ark., 2008). Pasteur’un çalışmasından yaklaşık yarım yüzyıl sonra morfolojik ve biyokimyasal özelliklerine göre etken, P. septica ve daha sonra 1939 yılında P. multocida olarak isimlendirilmiştir (Dabo ve ark., 2008). 7 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV Louis Pasteur’un yapmış olduğu araştırmalardan sonra pastörelloz terimi; Pasteurella cinsi altında sınıflandırılan ve Gram negatif, hareketsiz, fakültatif anaerob, çomak ya da kokobasil morfolojisine sahip olan etkenlerin, evcil hayvanlarda oluşturdukları enfeksiyonları ifade etmek için kullanılmıştır. Bununla birlikte Pasteurella, uzun yıllar boyunca başta ruminantlar olmak üzere birçok evcil hayvanda görülen sistemik, pulmoner ve septisemik enfeksiyonlarla ilişkilendirilen etkenleri içeren tek cins olarak değerlendirilmiştir. Moleküler biyoloji alanındaki gelişmeler ile birlikte gerçekleştirilen DNA hibridizasyon ve 16 S rRNA gen sekans analizleri sonucunda bu cins altında sınıflandırılan etkenlerin birçok ortak özellik taşıyan farklı türler olduğu kanısına varılmış ve yeniden sınıflandırılmaya gidilmiştir (Mohamed ve Abdelsalam, 2008). Son sınıflandırmada Pasteurellacea familyası içinde 15 bakteri cinsi tanımlanmakla birlikte bunlardan Actinobacillus, Avibacterium, Haemophilus, Histophilus, Mannheimia, Pasteurella ve Bibersteinia cinslerinin veteriner hekimlik açısından önem taşıdığı kabul edilmektedir (Quinn ve ark., 2011). Önceden P. haemolytica biyotip A olarak isimlendirilen tür; M. granulomatis, M. glucosida, M. ruminalis ve M. varigena türlerini de içeren Mannheimia cinsine dahil edilmiş ve M. haemolytica olarak yeniden adlandırılmıştır (Angen ve ark., 1999; Mohamed ve Abdelsalam, 2008). P. haemolytica biyotip T ise ilk önce P. trehalosi daha sonra ise Bibersteinia (B.) trehalosi olarak adlandırılmıştır (Backall ve ark., 2007; Mohamed ve Abdelsalam, 2008; Quinn ve ark., 2011;). Kanatlı hayvanlarda enfeksiyon oluşturan P. gallinarum, P. paragallinarum ve P. volantinium ise Avibacterium cinsi altında sınıflandırılmıştır (Blackall ve ark., 2005). P. multocida, B. trehalosi ve M. haemolytica, Pasteurellaceae familyası içerisinde en önemli patojenik türler olup, hayvanların üst solunum yollarının doğal florasında da bulunabilmektedirler (Mohamed ve Abdelsalam, 2008; Quinn ve ark., 2011). M. haemolytica’nın sığırlarda ‘shipping fever’ olarak adlandırılan pnömonik pastörelloz olguları ile sığır, koyun ve keçilerde görülen pnömoni olgularında primer ya da sekonder etken olarak rol oynadığı bildirilmiştir. Bununla birlikte etken, koyunlarda ise septisemi, gangrenli mastitis ve evcil memeli hayvanlarda spesifik olmayan yangısal reaksiyonlarla karakterize lezyonlardan izole edilmektedir. B. trehalosi ise özellikle 5-12 aylık koyunlarda görülen akut sistemik enfeksiyonlar ve septisemi ile ilişkilendirilmiştir (Mohamed ve Abdelsalam, 2008; Quinn ve ark., 2011;). P. multocida, P. canis, P. stomatis, P. dagmatis ve P. species B, P. sensu stricto kompleksinde yer alan Pasteurella türleri olup P. multocida, bu komplekste yer alan patojenitesi en yüksek türdür (Markey ve ark., 2013). Mutters ve ark. (1985), DNA hibridizasyon calışmaları sonucunda P. multocida’nın, P. multocida subsp. multocida, P. multocida subsp. gallicida ve P. multocida subsp. septica olmak üzere 3 alt türe ayrıldığını SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 8 bildirmişlerdir. Daha sonra yapılan bir çalışmada (Bisgaard ve ark., 1991) ise P. multocida alt türlerinin dulsitol, sorbitol ve trehaloz fermentasyon testlerine göre identifiye edilebileceği vurgulanmış ve P. multocida subsp. multocida’nın dulsitol negatif, sorbitol ve trehaloz pozitif; P. multocida subsp. septica’nın dulsitol ve sorbitol negatif, trehaloz pozitif; P. multocida subsp. gallicida’nın ise dulsitol ve sorbitol pozitif, trehaloz negatif olduğu bildirilmiştir. Fakat yapılan başka bir çalışmada (Fegan ve ark., 1995), P. multocida subsp. gallicida NCTC 10204 suşunun dulsitol negatif olduğu rapor edilmiştir. P. multocida subsp. gallicida daha çok kanatlı hayvanlardan izole edilirken, P. multocida subsp. septica sıklıkla kedi ve köpeklerden izole edilmektedir (Dabo ve ark., 2008). Capitini ve ark. (2002), kaplan ısırıklarından elde ettikleri izolatların fenotipik özellikleri ile 16 S rRNA gen sekansı analizlerini karşılaştırmalı olarak değerlendirmiş ve bu izolatları 4. alt tür, P. multocida subsp. tigris olarak isimlendirmişlerdir. 1.2. Pasteurella multocida’nın Morfolojik ve Kültürel Özellikleri P. multocida (0.2 x 1-2 µm), Gram negatif, hareketsiz, spor oluşturmayan, küçük çomak ya da kokobasil şeklinde bir bakteridir. Fakültatif anaerob, oksidaz ile katalaz rekasiyonu pozitiftir. Besiyerine kan veya serum ilavesinin etkenin üremesi üzerine olumlu etkileri bulunmakla birlikte agar besiyerlerinde birkaç gün canlı kalabilmektedir (Quinn ve ark., 2011; Markey ve ark., 2013). Nutrient agar, kanlı agar ve çikolata agar bakterinin izolasyonunda en çok tercih edilen besiyerleridir (Dziva ve ark., 2008). Lee ve ark. (2000), yaptıkları çalışmada %10 koyun kanı ilave edilmiş dekstroz nisaşta agara polymyxin, kristal violet, thallous acetate, bacitracin ve cycloheximide ilavesinin kanatlı hayvanların sindirim sisteminden P. multocida izolasyonunda başarı ile kullanılabileceğini bildirmişlerdir. P. multocida kanlı agarda mukoid ya da mukoid olmayan koloniler oluşturur. Mukoid koloniler sığır, domuz ve tavşanların pnömonik akciğer lezyonlarından izole edilirken, mukoid olmayan koloniler ise daha çok kanatlı hayvanlardan izole edilmektedir (Dziva ve ark., 2008). Dokulardan hazırlanan preparatlar Giemsa yöntemiyle boyandığında Pasteurella türleri bipolar boyanma özelliğine sahiptirler. Katı besiyerinde yuvarlak, gri renkli, parlak ve hemolitik olmayan koloniler oluştururlar. P. multocida safra tuzlarına duyarlı olduğu için MacConkey agarda üreme yeteneğine sahip değildir. Üreaz negatif, ancak ornitin dekarboksilaz ve indol pozitiftir. Laktoz ve maltozu fermente etmezken, glikoz, sukroz ve mannitolu kullanırlar. Bunun yanında D-trehaloz, L-arabinoz ve D-ksiloz fermentasyonları değişkendir (Quinn ve ark., 2011; Markey ve ark., 2013). 9 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV P. multocida, dezenfektanlar ve olumsuz çevre şartlarından kolay etkilenebilen bir bakteri olup su ve toprakta 30 gün canlı kalabildiği bildirilmiştir (Rimler ve Glisson, 1997; Christensen ve Bisgaard, 2000). 2. Pasteurella multocida ENFEKSİYONLARINDA PATOGENEZ P. multocida, üst solunum yolunun doğal florasında bulunan kommensal suşların özellikle immun sistemi baskılanan hayvanlarda dokularda yayılmasıyla enfeksiyon oluşabilmektedir. Bununla birlikte enfekte hayvanlar ile direk temas veya aerosol yolla bulaşmayla da enfeksiyon oluşmaktadır (Quinn ve ark., 2011). Ancak kommensal suşlar ile patojen suşlar arasında herhangi bir farkın olup olmadığı henüz anlaşılamamıştır (Dabo ve ark., 2008). Hastalığın gelişiminde, bakterinin mukozal yüzeylere tutunabilmesi ve kapsül yapısı sayesinde fagositozdan kaçabilme yeteneğinin rol oynadığı düşünülmektedir. Bununla birlikte P. multocida’nın konakçıdan demir alımını sağlayan genleri de bulunmaktadır. Kapsül tip D suşlarında esas virülens faktörünün ise toksin üretme yeteneği olduğu bilinmektedir (Quinn ve ark., 2011). Hem besi hem de süt sığırlarında P. multocida’nın neden olduğu ve diğer bakteriyel patojenlerle birlikte seyreden pnömoni olgularında hastalık etkeninin teşhisi oldukça zor olabilmektedir (Dabo ve ark, 2008). Ancak, ani gelişen bronkopnömonilerin daha çok P. multocida kaynaklı olduğu bildirilmiştir (Dungworth, 1985). P. multocida’nın diğer bakteriyel ya da viral patojenlerle birlikte pnömoni olgularından izole edildiği (Virtala ve ark., 2000; Hirose ve ark., 2003; Gagea ve ark., 2006; Autio ve ark., 2007) ve etkenin primer patojen olup olmadığı konusunda şüphelerin ortaya çıktığı bildirilmiştir (Lopez, 2007). Bununla birlikte bakterinin hem deneysel hem de doğal enfeksiyonlarda tek başına izole edilebilmesi primer patojen olduğunu desteklemektedir (Dabo ve ark., 2008). P. multocida’nın akciğerlerde oluşturduğu patolojik lezyonlar, hastalığın inkübasyon süresine de bağlı olarak birçok araştırmacı tarafından farklı değerlendirilmiştir. Bazı araştırmacılar (Haritani ve ark., 1989; Mathy ve ark., 2002; Ewers ve ark., 2006; Lopez, 2007) hastalığın basit bronkopönmoni bulguları ile seyrettiğini ifade ederken, diğer araştırmalarda ise fibrinosupuratif akut (Gagea ve ark., 2006), subakut-kronik fibrinopurulent (Mosier, 1997), fibrinli ve fibrinopurulent (Dungworth, 1985), supuratif ve fibrinonekrotik (Tegtmeier ve ark., 1999) lezyonlarla karakterize olabileceğini bildirmişlerdir. 3. Pasteurella multocida’nın VİRÜLENS FAKTÖRLERİ VE GENLERİ P. multocida ile ilişkili enfeksiyonların patogenezinde rol oynayan kapsül, lipopolisakkarit, fimbria ve adhezinler, toksin, demir bağlama SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 10 proteinleri, sialik asit metabolizma proteinleri, hyaluronidaz ve dış membran proteinleri gibi birçok virülens geni tanımlanmıştır (Harper ve ark., 2006; Dabo ve ark., 2008). 3.1. Kapsül P. multocida suşları kapsül antijenlerine göre A, B, D, E, ve F olmak üzere 5 serogruba ayrılmaktadır (Harper ve ark., 2006). Kapsül tip A ve daha az oranda tip D kanatlı hayvanlarda kolera hastalığına neden olmaktadır. Tip F suşları daha çok hasta kanatlı hayvanlardan (özellikle hindilerden) ve buzağılarda öldürücü fibrinli peritonit olgularından izole edilmektedir. Kapsül tip D’nin toksijenik suşları domuzlarda atrofik rinit olgularından, tip A suşları ise domuzlarda pnömoni olgularından izole edilmektedir. P. multocida kapsüler tip B ve E suşları Afrika ve Asya’nın tropik bölgelerindeki sığır ve su bufalolarında hemorajik septisemi olgularıyla ilişkilendirilmektedir. Tüm dünyada P. multocida kapsül tip A, sığır solunum yolu hastalıklarının primer etkenlerinden biri olarak kabul edilmektedir (Dabo ve ark., 2008). Tip A’da kapsül yapısının hyaluronan, tip D’de heparosan ve tip F’de ise kondroitinden oluşmasının yanı sıra sadece tip B suşlarının hyaluronidaz enzimine sahip olduğu bilinmektedir. Bu yapılar birçok konakçı hücresinin yapısal glikozaminoglikanları ile benzer yapıya sahiptir. Bu özellik sayesinde bakteri kapsülüne karşı oluşan antikor yanıtı ve komplement aktivasyonu yetersiz kalmakta ve mikroorganizmanın konakçı hücreye adhezyon gücü artmaktadır. Genel olarak kapsülün fagositoza karşı dirençte önemli rol oynadığı ve kapsüllü suşların virülenslerinin kapsülsüz suşlara göre daha yüksek olduğu kabul edilmektedir (Harper ve ark., 2006; Dabo ve ark., 2008). P. multocida kapsül tip B suşlarının kapsülsüz mutantlarının, kapsüllü suşlara göre makrofaj fagositozuna daha duyarlı olduğu bildirilmiştir (Boyce ve Adler, 2000). P. multocida tip A mutant suşlarının da mutant olmayan suşlara göre kanatlı serum komplement lizisine daha duyarlı olduğu tespit edilirken (Chung ve ark., 2001), kapsülsüz tip B suşlarının kapsüllü suşlara göre sığır ve fare serum komplement aktivasyonuna karşı dirençliliğinde herhangi bir fark tespit edilemediği belirtilmiştir (Boyce ve Adler, 2000). 3.2. Lipopolisakkarit P. multocida lipopolisakkarit antijenlerine göre 16 somatik serotipe ayrılmaktadır (Harper ve ark., 2006). Lipopolisakkarit, endotoksik şoktan sorumlu ve humoral immun yanıtı uyararak koruyucu bağışıklığın oluşmasını sağlayan önemli bir komponent olup (Harper ve ark., 2006), özellikle kanatlı kolerası ve sığırlarda görülen hemorajik septisemi hastalıklarının patogenezinde önemli rol oynamaktadır (Markey ve ark., 2013). Lipopolisakkarit yapının antijenik özelliğe sahip olduğu ancak immunojenik özelliğinin düşük olduğu bildirilmiş ve protein ya da 11 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV ribozomlarla birlikte kompleks oluşturduğunda hem humoral hem de hücresel immun yanıtı daha iyi uyararak koruyucu bağışıklık sağladığı bildirilmiştir (Ryu ve Kim, 2000). Bununla birlikte diğer bir çalışmada lipopolisakkarit yapının, bakterinin konakçı hücreye adhezyonu ve invazyonunda rol oynadığı bilinen fosfokolini içerdiği ve bu özelliğin P. multocida’nın nötrofillere tutunarak; bakteriye endotelyal hücrelerin arasına girebilme yeteneği sağladığı rapor edilmiştir (Galdiero ve ark., 2000). Serotip A suşlarından saflaştırılan lipopolisakkarit yapının farelere inokulasyonu sonucunda önemli düzeyde monoklonal antikor sentezlenirken (Wijewardana ve ark., 1990), serotip B suşlarından izole edilen lipopolisakkarit yapının farelerde kısmi koruma sağladığı gözlenmiştir (Ramdani ve Adler, 1991). Buna karşın P. multocida serotip B:2’den elde edilen lipopolisakkarit antijeninin inokülasyonu sonucunda bufalolarda hemorajik septisemi semptomlarında önemli artış gözlenmiş ancak, serotip A lipopolisakkarit yapısının endotoksik özelliğinin tam olarak anlaşılamadığı bildirilmiştir (Horadagoda ve ark., 2002). 3.3. Fimbria ve Adhezinler P. multocida genetik materyalinde fimbria proteinlerini kodlayan bazı genler (ptfA, fimA, flp1, flp2, hsf-1 ve hsf-2) bulunmaktadır (Harper ve ark., 2006). Kapsüler tip A, B ve D suşlarında tespit edilen tip IV fimbria (Ruffola ve ark., 1997) ve bu proteini kodlayan ptfA geninin aminoasit sekanslarının suşlar arasında farklılık gösterdiği bildirilmiştir (Doughty ve ark., 2000). Bordetella pertussis’te filamentöz hemaglutininleri kodlayan genlerle benzerlik gösteren pfhaB1 ve pfhaB2 genleri P. multocida izolatlarında tespit edilmiş ve bu hemaglütininlerin, etkenin üst solunum yolunda kolonize olmasında önemli rol oynadığı bildirilmiştir (Kimura ve ark., 1990). 3.4. Toksin Hemorajik septisemi, pnömoni ve kanatlı kolerasına neden olan suşların toksin sentezleyip sentezlemediği tam olarak bilinmemekle birlikte, dermonekrotoksin (toxA geni) kapsüler tip D suşlarında tespit edilmiş ve domuzlarda atrofik rinit olgularında klinik bulguların oluşmasından sorumlu olduğu tespit edilmiştir (Rimler ve Rhodes, 1989). 3.5. Demir Bağlama Proteinleri Demir, bakterilerin konakçıdan sağladığı ve üreme için gerek duyduğu bir üreme faktörüdür. Fakat toksik etkisinin fazla olması nedeniyle ortamda eser miktarda bulunması gereklidir. Bu nedenle P. multocida diğer bakteriler gibi demire karşı tolerans gösterebilmek için birçok mekanizmaya sahiptir (Harper ve ark., 2006). SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 18 Al-Maary ve ark. (2017), yaptığı benzer bir çalışmada da hasta buzağı, koyun ve keçilerden kültürü yapılan 157 P. multocida izolatının 105’inin kapsül tip A ve 52’sinin kapsül tip E olarak belirlendiği rapor edilmiştir. Ülkemizde P. multocida izolatlarının PCR ile kapsül tiplerinin belirlenmesine yönelik bir çalışmada, sığırlardan elde edilen 36 izolatın 33’ü kapsül tip A olarak belirlenirken diğer 3 izolatın tiplendirilemediği bildirilmiştir. Araştırmada 33 koyun izolatının 11’i tip D, 2’si tip A, 1’i tip F olarak tespit edilirken, 19 izolatın tiplendirilemediği, keçilerden elde edilen 3 izolatın 2’sinin kapsül tip D olduğu, 1 izolatın ve tavşanlardan elde edilen 3 izolatın kapsül tipinin belirlenemediği rapor edilmiştir (Güler ve ark., 2013). 6.2. Genotiplendirme P. multocida izolatlarının genotipik ayrımında pulsed-field gel electrophesis (PFGE), multilokus sekans tiplendirme (MLST), ribotiplendirme, restriction endonuclease analysis (REA), random-amplified polymorphic DNA (RAPD), PCR fingerprint yöntemleri kullanılmaktadır. Kısa sürede ve kolay uygulanabilir olmaları nedeniyle RAPD ve PCR fingerprint yöntemleri diğer tekniklere göre avantaj sağlamaktadır (Blackall ve Miflin, 2000; Dziva ve ark., 2008). PCR fingerprint yöntemi birçok araştırmacı tarafından domuz, tavşan ve kanatlı hayvanlardan elde edilen P. multocida izolatlarının ayırımında kullanılmış (Dabo ve ark., 1999; Dabo ve ark., 2000; Dziva ve ark., 2001; Dziva ve ark., 2004; Shivachandra ve ark., 2007), ancak sığırların solunum yolundan elde edilen izolatlarda kullanımı hakkında çok az sayıda literatüre rastlanmıştır (Taylor ve ark., 2010). Domuzların solunum yolundan elde edilen P. multocida subsp. multocida izolatlarında M13 core ve (GACA)4 primerlerinin kullanıldığı PCR-fingerprint analizinde sırasıyla 5 ve 7 farklı fingerprint profili tespit edildiği, farklı fingerprint profiline sahip izolatların aynı kapsül tipine sahip olabileceği gibi, farklı kapsül tipi taşıyanların da benzer fingerprint profili gösterebileceği bildirilmiştir (Zucker ve ark., 1996). Atrofik rinitis semptomları gözlenen 3 farklı domuz çiftliğinden elde edilen 21 P. multocida izolatının RAPD kitinin kullanıldığı yöntem ile 10 ve ribotyping yöntemiyle ise 4 farklı genotipe ayrıldığı rapor edilmiş ve RAPD yönteminin ribotyping yöntemine göre izolatlar arası ayırım gücünün daha yüksek olduğu vurgulanmıştır (Dziva ve ark., 2004). Gerardo ve ark. (2001), yaptığı bir çalışmada ise, dulcitol negatif P. multocida subsp. multocida ve P. multocida subsp. septica suşlarının sorbitol fermentasyonu ve α-glikozidaz aktiviteleri M13 core PCR-fingerprint profilleri ile karşılaştırılmış, α-glikozidaz aktivitesi ile PCR-fingerprint profilleri birbirleriyle ilişkili bulunurken, sorbitol fermentasyonu ile ilişkinin önemli olmadığı bildirilmiştir. Bununla birlikte P. multocida subsp. septica 19 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV izolatlarında α-glikozidaz pozitif bulunan tüm izolatların grup I fingerprint profiline sahip olduğu, 11 P. multocida subsp. multocida izolatının 9’unun da α-glikozidaz negatif olduğu ve grup II ya da grup III PCR-fingerprint profili gösterdiği bildirilmiş ve PCR-fingerprint yönteminin P. multocida izolatları arasındaki genotipik farklılığın tespitinde önemli olduğu vurgulanmıştır. Buzağıların solunum yolundan elde edilen P. multocida izolatlarının RAPD yöntemi ile tiplendirilmesine yönelik bir çalışmada, İskoçya’da izole edilen 105 ve Fransa’da izole edilen 140 izolatın sırasıyla 15 ve 23 farklı RAPD profili tespit edildiği bildirilmiştir. RAPD yönteminin, PFGE ve MLST yöntemiyle karşılaştırıldığında, PFGE’nin ayrım gücünün RAPD yöntemine göre daha yüksek olduğu, MLST’nin ise farklı çiftliklerden elde edilen izolatlardaki genotipik farklılığın tespit edilmesinde yeterli ayırım gücüne sahip olmadığı bildirilmiştir (Hotchkiss ve ark., 2011). Ülkemizde P. multocida ve M. haemolytica izolatlarının OPA-11 primerinin kullanıldığı RAPD yöntemi ile tiplendirildiği bir çalışmada, sığır ve koyunlardan elde edilen P. multocida izolatlarında, sırasıyla 2 ve 3 ayrı RAPD profili tespit edilirken, sığır, koyun ve keçilerden izole edilen M. haemolytica suşlarında genotipik farklılığın tespit edilemediği bildirilmiştir (Özbey ve ark., 2004). SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 20 KAYNAKÇA Ali, H. A. H., Sawada, T., Hatakeyama, H., Ohtsuki, N., & Itoh, O. (2004). Characterization of a 39 kDa capsular protein of avian Pasteurella multocida using monoclonal antibodies. Veterinary Microbiology, 100(1-2), 43-53. Al-Maary, K. S., Dawoud, T. M., Mubarak, A. S., Hessain, A. M., Galal, H. M., Kabli, S. A., & Mohamed, M. I. (2017). Molecular characterization of the capsular antigens of Pasteurella multocida isolates using multiplex PCR. Saudi Journal of Biological Sciences, 24(2), 367-370. Angen, Ø., Mutters, R., Caugant, D. A., Olsen, J. E., & Bisgaard, M. (1999). Taxonomic relationships of the [Pasteurella] haemolytica complex as evaluated by DNA-DNA hybridizations and 16S rRNA sequencing with proposal of Mannheimia haemolytica gen. nov., comb. nov., Mannheimia granulomatis comb. nov., Mannheimia glucosida sp. nov., Mannheimia ruminalis sp. nov. and Mannheimia varigena sp. nov. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 49(1), 67-86. Arumugam, N. D., Ajam, N., Blackall, P. J., Asiah, N. M., Ramlan, M., Maria, J., Yuslan, S., & Thong, K. L. (2011). Capsular serotyping of Pasteurella multocida from various animal hosts-a comparison of phenotypic and genotypic methods. Tropical Biomedicine, 28(1), 5563. Autio, T., Pohjanvirta, T., Holopainen, R., Rikula, U., Pentikäinen, J., Huovilainen, A., Rusanen, H., Soveri, T., Sihvonen, L., & Pelkonen, S. (2007). Etiology of respiratory disease in non-vaccinated, nonmedicated calves in rearing herds. Veterinary Microbiology, 119(2-4), 256-265. Barbour, E. K., Nabbut, N. H., Hamadeh, S. K., & Al-Nakhli, H. M. (1997). Bacterial identity and characteristics in healthy and unhealthy respiratory tracts of sheep and calves. Veterinary Research Communications, 21, 421-430. Batu, A., & Elverdi, R. (1970). Türkiye’de sığır ve mandalardan izole edilen Pasteurella serotiplerinin tayini. Pendik Vet Kont Araş Enst Derg I, II, 50-60. Bisgaard, M., Houghton, S. B., Mutters, R., & Stenzel, A. (1991). Reclassification of German, British and Dutch isolates of so-called 21 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV Pasteurella multocida obtained from pneumonic calf lungs. Veterinary Microbiology, 26(1-2), 115-124. Blackall, P. J., Bojesen, A. M., Christensen, H., & Bisgaard, M. (2007). Reclassification of [Pasteurella] trehalosi as Bibersteinia trehalosi gen. nov., comb. nov. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 57(4), 666-674. Blackall, P. J., Christensen, H., Beckenham, T., Blackall, L. L., & Bisgaard, M. (2005). Reclassification of Pasteurella gallinarum,[Haemophilus] paragallinarum, Pasteurella avium and Pasteurella volantium as Avibacterium gallinarum gen. nov., comb. nov., Avibacterium paragallinarum comb. nov., Avibacterium avium comb. nov. and Avibacterium volantium comb. nov. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 55(1), 353-362. Boot, R., Van den Brink, M., Handgraaf, P., & Timmermans, R. (2004). The use of the API 20 NE bacteria classification procedure to identify Pasteurellaceae strains in rodents and rabbits. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science, 31(3), 177-183. Boyce, J. D., & Adler, B. (2000). The capsule is a virulence determinant in the pathogenesis of Pasteurella multocida M1404 (B: 2). Infection and Immunity, 68(6), 3463-3468. Capitini, C. M., Herrero, I. A., Patel, R., Ishitani, M. B., & Boyce, T. G. (2002). Wound infection with Neisseria weaveri and a novel subspecies of Pasteurella multocida in a child who sustained a tiger bite. Clinical Infectious Diseases, 34(12), 74-76. Christensen, J.P., Bisgaard, M. (2000). Fowl cholera. Revue Scientifique et Technique (International Office of Epizootics), 19(2), 626-637. Chung, J. Y., Wilkie, I., Boyce, J. D., Townsend, K. M., Frost, A. J., Ghoddusi, M., & Adler, B. (2001). Role of capsule in the pathogenesis of fowl cholera caused by Pasteurella multocida serogroup A. Infection and Immunity, 69(4), 2487-2492. Corney, B. G., Diallo, I. S., Wright, L. L., Hewitson, G. R., De Jong, A. J., Burrell, P. C., Duffy, P. F., Stephens, C. P., Rodwell, B. J., Boyle, D. B., & Blackall, P. J. (2007). Pasteurella multocida detection by 5′ Taq nuclease assay: a new tool for use in diagnosing fowl cholera. Journal of Microbiological Methods, 69(2), 376-380. Dabo, S. M., Taylor, J. D., & Confer, A. W. (2007). Pasteurella multocida and bovine respiratory disease. Animal Health Research Reviews, 8(2), 129-150. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 22 Doughty, S. W., Ruffolo, C. G., & Adler, B. (2000). The type 4 fimbrial subunit gene of Pasteurella multocida. Veterinary Microbiology, 72(1-2), 79-90. Dungworth, D. C. (1985). The respiratory system, in ‘Pathology of Domestic Animals’. Editor, Jubb KVF, Kennedy PC, Palmer N, 448-489, Academic Press, Orlando. Dziva, F., Christensen, H., Van Leengoed, L. A. M. G., Mohan, K., & Olsen, J. E. (2004). Differentiation of Pasteurella multocida isolates from cases of atrophic rhinitis in pigs from Zimbabwe by RAPD and ribotyping. Veterinary Microbiology, 102(1-2), 117-122. Dziva, F., Muhairwa, A. P., Bisgaard, M., & Christensen, H. (2008). Diagnostic and typing options for investigating diseases associated with Pasteurella multocida. Veterinary Microbiology, 128(1-2), 1-22. Ekundayo, S. O., Odugbo, M. O., Olabode, A. O., & Okewole, P. A. (2008). Phenotypic variability among strains of Pasteurella multocida isolated from avian, bovine, caprine, leporine and ovine origin. African Journal of Biotechnology, 7(9). Erbaş, G. (2007). Aydın ve İzmir bölgesindeki sığırlardan Pasteurella multocida’nın izolasyonu, tiplendirilmesi ve antibiyotiklere duyarlılıkları. Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Doktora Tezi, Aydın. Ewers, C., Lübke-Becker, A., Bethe, A., Kießling, S., Filter, M., & Wieler, L. H. (2006). Virulence genotype of Pasteurella multocida strains isolated from different hosts with various disease status. Veterinary Microbiology, 114(3-4), 304-317. Fegan, N., Blackall, P. J., & Pahoff, J. L. (1995). Phenotypic characterisation of Pasteurella multocida isolates from Australian poultry. Veterinary Microbiology, 47(3-4), 281-286. Filion, L. G., Cho, H. J., Shewen, P. E., Raybould, T. J., & Wilkie, B. N. (1985). Comparison of serological techniques to measure antibody to Pasteurella haemolytica A1. Canadian Journal of Comparative Medicine, 49(1), 99. Gagea, M. I., Bateman, K. G., Van Dreumel, T., McEwen, B. J., Carman, S., Archambault, M., Shanahan, R. A., & Caswell, J. L. (2006). Diseases and pathogens associated with mortality in Ontario beef feedlots. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 18(1), 18-28. Galdiero, M., Folgore, A., Nuzzo, I., & Galdiero, E. (2000). Neutrophil adhesion and transmigration through bovine endothelial cells in vitro 23 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV by protein H and LPS of Pasteurella multocida. Immunobiology, 202(3), 226-238. Hunt Gerardo, S., Citron, D. M., Claros, M. C., Fernandez, H. T., & Goldstein, E. J. (2001). Pasteurella multocida subsp. multocida and P. multocida subsp. septica differentiation by PCR fingerprinting and αglucosidase activity. Journal of Clinical Microbiology, 39(7), 25582564. Guler, L., Gunduz, K., & AS, S. (2013). Capsular typing and antimicrobial susceptibility of Pasteurella multocida isolated from different hosts. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, 19(5), 843-849. Haritani, M., Narita, M., Murata, H., Hashimoto, K., & Takizawa, T. (1989). Immunoperoxidase evaluation of pneumonic lesions induced by Pasteurella multocida in calves. American Journal of Veterinary Research, 50(12), 2162-2167. Harper, M., Boyce, J. D., & Adler, B. (2006). Pasteurella multocida pathogenesis: 125 years after Pasteur. FEMS Microbiology Letters, 265(1), 1-10. Hirose, K., Kobayashi, H., Ito, N., Kawasaki, Y., Zako, M., Kotani, K., Ogawa, H., & Sato, H. (2003). Isolation of Mycoplasmas from nasal swabs of calves affected with respiratory diseases and antimicrobial susceptibility of their isolates. Journal of Veterinary Medicine, Series B, 50(7), 347-351. Horadagoda, N. U., Hodgson, J. C., Moon, G. M., Wijewardana, T. G., & Eckersall, P. D. (2002). Development of a clinical syndrome resembling haemorrhagic septicaemia in the buffalo following intravenous inoculation of Pasteurella multocida serotype B: 2 endotoxin and the role of tumour necrosis factor-α. Research in Veterinary Science, 72(3), 194-200. Horwood, P. F., & Mahony, T. J. (2011). Multiplex real-time RT-PCR detection of three viruses associated with the bovine respiratory disease complex. Journal of Virological Methods, 171(2), 360-363. Hotchkiss, E. J., Hodgson, J. C., Schmitt-Van De Leemput, E., Dagleish, M. P., & Zadoks, R. N. (2011). Molecular epidemiology of Pasteurella multocida in dairy and beef calves. Veterinary Microbiology, 151(34), 329-335. Hunt, M. L., Adler, B., & Townsend, K. M. (2000). The molecular biology of Pasteurella multocida. Veterinary Microbiology, 72(1-2), 3-25. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 24 Kasten, R. W., Carpenter, T. E., Snipes, K. P., & Hirsh, D. C. (1997). Detection of Pasteurella multocida-specific DNA in turkey flocks by use of the polymerase chain reaction. Avian Diseases, 676-682. Khamesipour, F., Momtaz, H., & Azhdary Mamoreh, M. (2014). Occurrence of virulence factors and antimicrobial resistance in Pasteurella multocida strains isolated from slaughter cattle in Iran. Frontiers in Microbiology, 5, 536. Kimura, A. L. A. N., Mountzouros, K. T., Relman, D. A., Falkow, S., & Cowell, J. L. (1990). Bordetella pertussis filamentous hemagglutinin: evaluation as a protective antigen and colonization factor in a mouse respiratory infection model. Infection and İmmunity, 58(1), 7-16. Kumar, P., Singh, V. P., Agrawal, R. K., & Singh, S. (2009). Identification of Pasteurella multocida isolates of ruminant origin using polymerase chain reaction and their antibiogram study. Tropical Animal Health and Production, 41, 573-578. Lee, C. W., Wilkie, I. W., Townsend, K. M., & Frost, A. J. (2000). The demonstration of Pasteurella multocida in the alimentary tract of chickens after experimental oral infection. Veterinary Microbiology, 72(1-2), 47-55. Liu, D., Lawrence, M. L., & Austin, F. W. (2004). Specific PCR identification of Pasteurella multocida based on putative transcriptional regulator genes. Journal of Microbiological Methods, 58(2), 263-267. Lizarazo, Y. V., Ferri, E. R., & Martín, C. G. (2008). Evaluation of different API systems for identification of porcine Pasteurella multocida isolates. Research in Veterinary Science, 85(3), 453-456. Lopez, A. (2007). Respiratory system, in ‘Pathological Basis of Veterinary Disease’, Editors, McGarvin MD, Zachary, 522–523, Mosby Elsevier, St. Louis. Lu, Y. S., Lai, W. C., Pakes, S. P., & Nie, L. C. (1991). A monoclonal antibody against a Pasteurella multocida outer membrane protein protects rabbits and mice against pasteurellosis. Infection and Immunity, 59(1), 172-180. Luo, Y., Glisson, J. R., Jackwood, M. W., Hancock, R. E., Bains, M., Cheng, I., & Wang, C. (1997). Cloning and characterization of the major outer membrane protein gene (ompH) of Pasteurella multocida X-73. Journal of Bacteriology, 179(24), 7856-7864. Markey, B., Leonard, F., Archambault, M., Cullinane, A., Maguire, D. (2013). Pasteurella, Mannheimia, Bibersteinia and Avibacterium species, 25 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV chapter 21, in ‘Clinical Veterinary Microbiology’ Second Edition, 307-316, Elsevier Ltd., UK. Mathy, N. L., Mathy, J. P., Lee, R. P., Walker, J., Lofthouse, S., & Meeusen, E. N. T. (2002). Pathological and immunological changes after challenge infection with Pasteurella multocida in naive and immunized calves. Veterinary Immunology and Immunopathology, 85(3-4), 179-188. Merlin, C., Gardiner, G., Durand, S., & Masters, M. (2002). The Escherichia coli metD locus encodes an ABC transporter which includes Abc (MetN), YaeE (MetI), and YaeC (MetQ). Journal of Bacteriology, 184(19), 5513-5517. Miflin, J. K., & Blackall, P. J. (2001). Development of a 23S rRNA‐based PCR assay for the identification of Pasteurella multocida. Letters in Applied Microbiology, 33(3), 216-221. Mizan, S., Henk, A., Stallings, A., Maier, M., & Lee, M. D. (2000). Cloning and characterization of sialidases with 2-6′ and 2-3′ sialyl lactose specificity from Pasteurella multocida. Journal of Bacteriology, 182(24), 6874-6883. Mohamed, R. A., & Abdelsalam, E. B. (2008). A review on pneumonic pasteurellosis (respiratory mannheimiosis) with emphasis on pathogenesis, virulence mechanisms and predisposing factors. Bulgarian Journal of Veterinary Medicine, 11(3), 139-160. Mosier, D. A. (1997). Bacterial pneumonia. Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice, 13(3), 483-493. Namioka, S., & Murata, M. (1961). Serological studies on Pasteurella multocida. I. A simplified method for capsule typing of the organism. Cornell Veterinarian, 51, 498-507. Ogunnariwo, J. A., & Schryvers, A. B. (2001). Characterization of a novel transferrin receptor in bovine strains of Pasteurella multocida. Journal of Bacteriology, 183(3), 890-896. Ozbey, G., Kilic, A., Ertas, H. B., & Muz, A. (2004). Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of Pasteurella multocida and Manheimia haemolytica strains isolated from cattle, sheep and goats. Veterinární Medicína, 49(3), 65. Quinn, P. J., Markey, B. K., Leonard, F. C., FitzPatrick, E. S., Fanning, S., Hartigan, P. J. (2011). Pasteurella species, Mannheima haemolytica ve Bibersteinia trehalosi, chapter 27, in “Veterinary Microbiology SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 26 and Microbial Diseaseˮ Second Edition, 300-308, John Wiley & Sons Ltd., UK. Adler, R., & Adler, B. (1991). Opsonic monoclonal antibodies against lipopolysaccharide (LPS) antigens of Pasteurella multocida and the role of LPS in immunity. Veterinary Microbiology, 26(4), 335-347. Rimler, R. B., Glisson, J. R. (1997). Fowl cholera, in ‘Disease of Poultry’, 10th Edition, Editor, Calnek, B. W., Barnes, H. J., Beard, C. W., McDougald, L. R. and Saif, Y. M., 143-161, Iowa State University Press, Ames. Rimler, R. B., Rhoades, K. R. (1989). Pasteurella multocida, in Pasteurella and Pasteurellosis, Editors, Adlam, C., Rutter, J. M., 37-73, Academic Press Limited, London. Ryu, H. I., & Kim, C. J. (2000). Immunologic reactivity of a lipopolysaccharide-protein complex of type A Pasteurella multocida in mice. Journal of Veterinary Science,1(2), 87-95. Samuel, M. D., Shadduck, D. J., Goldberg, D. R., & Johnson, W. P. (2003). Comparison of methods to detect Pasteurella multocida in carrier waterfowl. Journal of Wildlife Diseases, 39(1), 125-135. Sarangi, L. N., Thomas, P., Gupta, S. K., Priyadarshini, A., Kumar, S., Nagaleekar, V. K., Kumar, A., & Singh, V. P. (2015). Virulence gene profiling and antibiotic resistance pattern of Indian isolates of Pasteurella multocida of small ruminant origin. Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases, 38, 33-39. Sellyei, B., Rónai, Z., Jánosi, S., & Makrai, L. (2015). Comparative analysis of Pasteurella multocida strains isolated from bovine respiratory infections. Acta Microbiologica et Immunologica Hungarica, 62(4), 453-461. Shivachandra, S. B., Kumar, A. A., & Chaudhuri, P. (2007). Short communication differentiation of Avian Pasteurella multocida strains by single-primer PCR. Veterinary Research Communications, 31, 941-949. Smith, R. A. (1998). Impact of disease on feedlot performance: a review. Journal of Animal Science, 76(1), 272-274. Srikumaran, S., Kelling, C. L., & Ambagala, A. (2007). Immune evasion by pathogens of bovine respiratory disease complex. Animal Health Research Reviews, 8(2), 215-229. Tang, X., Zhao, Z., Hu, J., Wu, B., Cai, X., He, Q., & Chen, H. (2009). Isolation, antimicrobial resistance, and virulence genes of Pasteurella 27 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV multocida strains from swine in China. Journal of Clinical Microbiology, 47(4), 951-958. Taylor, J. D., Fulton, R. W., Dabo, S. M., Lehenbauer, T. W., & Confer, A. W. (2010). Comparison of genotypic and phenotypic characterization methods for Pasteurella multocida isolates from fatal cases of bovine respiratory disease. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 22(3), 366-375. Tegtmeier, C., Uttenthal, A. A., Friis, N. F., Jensen, N. E., & Jensen, H. E. (1999). Pathological and microbiological studies on pneumonic lungs from Danish calves. Journal of Veterinary Medicine, Series B, 46(10), 693-700. Townsend, K. M., Boyce, J. D., Chung, J. Y., Frost, A. J., & Adler, B. (2001). Genetic organization of Pasteurella multocida cap loci and development of a multiplex capsular PCR typing system. Journal of Clinical Microbiology, 39(3), 924-929. Townsend, K. M., Frost, A. J., Lee, C. W., Papadimitriou, J. M., & Dawkins, H. J. (1998). Development of PCR assays for species-and typespecific identification of Pasteurella multocida isolates. Journal of Clinical Microbiology, 36(4), 1096-1100. Ulker, H., Kucuk, D., Cantekin, Z., & Solmaz, H. (2012). Hatay yöresinde kesimhanede kesilen sığır akciğerlerinden Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica izolasyonu ve antibiyotiklere duyarlılığı. AVKAE Derg, 2(2), 10-14. Soriano-Vargas, E., Vega-Sánchez, V., Zamora-Espinosa, J. L., AcostaDibarrat, J., Aguilar-Romero, F., & Negrete-Abascal, E. (2012). Identification of Pasteurella multocida capsular types isolated from rabbits and other domestic animals in Mexico with respiratory diseases. Tropical Animal Health and Production, 44, 935-937. Verma, S., Sharma, M., Katoch, S., Verma, L., Kumar, S., Dogra, V., Chahota, R., Dhar, P., & Singh, G. (2013). Profiling of virulence associated genes of Pasteurella multocida isolated from cattle. Veterinary Research Communications, 37, 83-89. Virtala, A. M., Grohn, Y. T., Mechor, G. D., Erb, H. N., & Dubovi, E. J. (2000). Association of seroconversion with isolation of agents in transtracheal wash fluids collected from pneumonic calves less than three months of age. The Bovine Practitioner, 77-80. Wijewardana, T. G., Wilson, C. F., Gilmour, N. J. L., & Poxton, I. R. (1990). Production of mouse monoclonal antibodies to Pasteurella multocida