CİNSİYETİ BELİRLENMİŞ SPERMA TEKNOLOJİSİ VE SÜT SIĞIRI YETİŞTİRİCİLİĞİNDE GÜNCEL KULLANIMI

29 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV BÖLÜM 2 CİNSİYETİ BELİRLENMİŞ SPERMA TEKNOLOJİSİ VE SÜT SIĞIRI YETİŞTİRİCİLİĞİNDE GÜNCEL KULLANIMI Doç. Dr. Ebru KARAKAYA BİLEN1 DOI: https://dx.doi.org/10.5281/zenodo.10408053 1Çukurova Üniversitesi, CeyhanVeteriner Fakültesi, Doğum ve Jinekoloji Ana Bilim Dalı, Adana, Türkiye. [email protected], Orcid ID: 0000-0003-4837-1858 SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 30 31 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV GİRİŞ Dünya genelinde süt ve sığır eti ürünlerine yönelik artan bir talep mevcuttur ve bu durum işletmelerde reprodüktif anlamda yeni teknolojik gelişmeler ile üretimi arttırmaya daha fazla odaklanmayı gerektirmektedir. Cinsiyete göre seçilmiş veya cinsiyete göre ayrılmış sperma teknolojisi neredeyse son otuz yıldır sütçü işletme endüstrisinde ticari olarak kullanılmaktadır. Özellikle süt hayvancılığında erkek buzağının ekonomik öneminin az olması, dişi buzağı ile doğum kolaylığının sağlanması, sürü içi büyümenin sağlanması, genetik ilerlemenin hızlandırılması gibi sebeplerden dolayı dişi buzağı elde edebilmek için cinsiyeti belirlenmiş sperma (CBS) kullanımı son yıllarda dünya çapında giderek yaygınlaşmaktadır. Türkiye’de ithal edilen tohumların 2019 yılı verilerine göre 3.003.560’ı konvansiyonel sperma, 38.604’ü ise CBS (%1,28) iken; 2023 yılında 3.034.814 konvansiyonel sperma, 204.794 CBS (%6,74) olduğu görülmektedir. Bu rakamlar cinsiyeti belirlenmiş sperma kullanım oranının diğer ülkelerdeki kadar hızlı olmasa da ülkemizde de arttığını göstermektedir. 1.Sperma Cinsiyetinin Belirlenmesinin Tarihçesi Mikroskobik olarak ilk defa cinsiyet kromozomunun tayin edilmesinin ardından birçok araştırmacı istenilen cinsiyette yavru elde edilebilmesi için X ve Y spermaları arasındaki farklılıklardan yola çıkarak çeşitli yöntemler geliştirmiştir. 80'li yılların başından bu yana, flow-sitometri yöntemini kullanılarak X ve Y kromozomlarındaki DNA farklılığına dayanarak spermaların ayrılması üzerine çalışmalar yapılmıştır (Johnson ve ark., 1989). Bu teknikte öncelikle dört memeli türünde X ve Y sperma hücrelerinin DNA içeriğindeki farklılıkları doğru bir şekilde tanımlanabildiği görüldü; sığırlar, domuzlar, tavşanlar ve koyunlar (Garner ve ark., 1983). Cinsiyete göre ayrılmış spermadan doğan ilk canlı yavru bir tavşandır. Sığırlarda X ve Y sperm hücreleri arasındaki ağırlığın cins farklılığına göre %3.73-%4.98 arasında olduğu bildirildi. Bos indicus sığırlarında X ve Y kromozomları arasında %3.73 oranında daha az ağırlık farkı bulunurken, Bos taurus sığırlarında X ve Y kromozomları arasında %4.98 oranında ağırlık farkı bildirildi (Garner ve Seidel, 2008). Boğa spermasında cinsiyet ayrımının yapılması ve ticari olarak üretime sunulmasına 2003 yılında başlanıldı, 2004 yılında sütçü işletmelerde kullanılmaya başlanıldı ancak CBS satışları 2006 yılına kadar bir gelişme göstermedi (De Vries ve Nebel, 2009). Günümüzde flowsitometri, sperma ayırma güvenilirliği en yüksek olan tek yöntem olarak kabul edilmektedir (Seidel, 2014). Diğer türlerde de ticarileşmesi ve satışlarında artış olması amacıyla çalışmalar devam etmektedir. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 32 2. Sperma Ayırma Teknolojisi - Flow-sitometrik Yöntem Flow sitometrik yönteme dayalı spermada cinsiyet belirleme işlemi, 20 yıl önceki ilk uygulamasından bu yana ayırma ve üretim verimliliğinde (tekniğin ticari olarak uygulanabilirliğine yönelik bir amaç doğrultusunda) bir takım iyileştirmelerden geçmiştir (Schenk ve ark., 1999). Günümüzde en yaygın ve güvenilir olarak kullanılan bu yöntemde sperma istenilen cinsiyete göre yaklaşık %90 oranında ayrılabilmektedir (Holden ve Butler, 2018). Spermanın istenilen cinsiyete göre ayrılması işleminde sperma konvasiyonel payet üretimine göre çok daha fazla basamaktan oluşan farklı işlemlerden geçmektedir. Öncelikli olarak cinsiyete göre ayırma işleminde ilk aşamada spermanın çok düşük konsantrasyona kadar sulandırılması gerekir (Garner ve ark., 1983; Jain, 2011). Daha sonra spermanın DNA’sı üzerinde genodotoksik etkisi olmayan ve geçici olarak nükleik asidin adenin-tiamin bölgesine bağlanan Hoechst 33342 (40-6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)) boya ile boyanması sağlanır (Garner, 2006). Boyama işleminden sonra spermanın flow-sitometri makinesinden belirli bir basınç ve hızda geçmesi sağlanır. Burada lazer ışınına maruz kalan spermler içerdikleri boya miktarına göre floresan göstermektedir ve bu sayede daha fazla DNA içeren X sperması daha fazla ışın absorbe eder (Garner, 2006). Sperma damlacıklar halinde makineden geçerken son aşamada X kormozomu pozitif elektrikle yüklenirken, Y kromozomu negatif elektrik ile yüklenir (Seidel, 2007). DNA içeriği belirlenemeyen, sperma içermeyen veya hasarlı sperm taşıyan damlacıklar elektriksel yük ile yüklenmediği için atık olarak sistemden çıkar. Ayrıca hasarlı hücre membranına sahip spermanın da ayrılarak uzaklaştırma işlemi sağlanmaktadır. Sonuç olarak bu işlem sonrasında spermalar X, Y ya da tanımlanamayan ölü spermalar olarak 3 farklı tüpe ayrıştırılır (Şekil 1). Şekil 1. Flow sitometrik yöntem ile sperma ayırma işleminin basit bir şeması (Vishwanath, 2014). 33 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV Ayrıştırma işleminin uygun bir şekilde yapılabilmesi için spermanın floresan ve lazerden düzgün bir şekilde geçmesi gerekir (Jain, 2011). Boğa spermasının baş kısmının düz olması özelliğinden dolayı flow-sitometri makinesinden %60-70 oranında düzgün bir şekilde geçer. Ancak semen zaten %48-49 oranında X kromozomu içeren sperma ihtiva ettiği için yalnızca %1520 gibi bir oran istenilen cinsiyete göre ayrılmış çıkar. Çoğunlukla da %60 civarında spermanın cinsiyeti, hasarlı olmasından veya herhangi başka bir sebepten dolayı belirlenemez (Seidel, 2014). Teknolojinin ilk kullanılmaya başlanıldığı yıllarda sperma ayırma işleminin yavaş olması ve elde edilen pazarlanabilir ürünün çok az olmasından dolayı ekonomik olması amacıyla payetler içerisine yaklaşık 2 milyon kadar sperma konulmuştur (De Vries ve Nebel, 2009). Spermanın boyanması, uygulanan basınç, hız, ultraviyole ışından geçmeleri, ayrıştırma, dondurma ve çözme işlemleri sonucu spermanın hareket kabiliyetinde azalma, kromatin stabilizasyonunun zarar görmesi, kapasitasyon ve akrozom reaksiyonlarının hızlanması gibi istenilmeyen durumlar söz konusu olabilmektedir (Seidel, 2003; Suh ve ark., 2005; Garner, 2006). Bununla birlikte her ne kadar boğa sperması yüksek bir ayrıştırılma kapasitesine sahip olsa da her boğanın sperması bu işlem için uygun olmayabilir (Seidel, 2007). Konvansiyonel spermada yüksek gebelik oranlarına sahip bir boğanın cinsiyeti belirlenmiş sperma payetleri kullanıldığında gebelik oranları düşük çıkabilir (Garner, 2006; Frijters ve ark., 2009). İlk yıllarda CBS ile yapılan farklı araştırmaların sonuçlarının değerlendirildiği bir derlemede CBS ile elde edilen gebelik oranlarının düvelerde %31-60, ineklerde ise %21-25 olduğu bildirilmiştir (Kurykin, 2017). Teknolojinin kullanılmaya başlanıldığı ilk yıllarda üretimin maliyetli ve çıkan ürünün az olması nedeniyle konvansiyonel sperma payetlerine göre pahalı olması ve gebelik oranlarının düşük çıkması nedeniyle CBS 2006 yılından 2015 yılına kadar sınırlı bir kullanım alanına sahip olmuştur (Şekil 2). Günümüzde ise özellikle 500 ve üzeri sağmal ineğe sahip işletmelerde kullanım oranı daha yüksektir. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 34 Şekil 2. ABD'de 2006'dan 2020'ye kadar Holstein dişilerini (düveler ve sütçü inekler) tohumlamak için konvansiyonel etçi (% Kon-etçi), konvansiyonel Holstein (% KonHolstein) ve cinsiyeti belirlenmiş sperma Holstein (% CBS-Holstein) kullanılarak yapılan tohumlamaların oranı. Veriler AgSource Dairy, Madison, WI. Ancak son yıllarda teknolojinin ilerlemesi ile birlikte bahsedilen bütün bu olumsuzluklarda ciddi bir iyileşme sağlanmıştır (Vishwanath ve Moreno, 2018). Spermanın ayrıştırılması işleminde maruz kaldığı olumsuz durumların azaltılmasına yönelik çalışmalar sonucunda ayrıştırma süreci güncellenmiş ve SexedULTRA™ teknolojisine geçiş yapılmıştır böylece payetler içerisindeki sperma miktarı 4 milyona çıkartılmıştır (Gonzalez-Marín ve ark., 2016; Gonzalez-Marín ve ark., 2018; Vishwanath ve Moreno, 2018). 2017 yılından itibaren de üretilen payetler SexedULTRA-4M™ adıyla piyasaya sunulmuştur. Bu yeni teknolojide, XY teknolojisi ile karşılaştırıldığında sperm motilitesinin ve akrozom bütünlüğünün arttığı, ayrıştırma sürecinin hızlandığı ve çıkan ürünün daha fazla olduğu bildirilmiştir (Gonzalez-Marin ve ark., 2016). Bu teknolojik ilerlemelerin elde edilen gebelik oranlarında %4.5 ile %7.4 arasında artışa neden olduğu da bildirilmektedir (Hall ve ark., 2017). Günümüzde flow sitometri yöntemi ile üretim tek bir şirket tarafından yapılmakta ve payetler 2×106 ya da 4×106 adet canlı sperma içeren dozlarda satışa sunulmaktadır. Sperma ayırma sürecinde ki teknolojik ilerlemeler sayesinde istenilen cinsiyette buzağıya sahip olma oranını %90’dan %96-97 seviyelerine çıktığı da bildirilmektedir. 35 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV 3.Cinsiyeti Belirlenmiş Sperma Kullanımının Sütçü İşletmeler İçin Önemi Sütçü işletmelerde yüksek süt verimine bağlı olarak fertilitede düşüş görülmesinin yanı sıra son yıllarda karşılaşılan en önemli problemlerden birisi de sürüden çıkartma yaşının düşmesidir. Bu nedenle sürü büyüklüğünü koruyabilmek ya da fazla sayıda üretilen damızlık düvenin satılarak ekonomik kazanç sağlanabilmesi için işletmede daha fazla dişi buzağı doğması amaçlanmaktadır (Quelhas ve ark., 2023). İşletmede doğacak genetik kapasitesi yüksek dişi buzağılar sayesinde sürüye dışarıdan hayvan teminine gerek kalmayacağı için bu durum biyogüvenlik açısından da önemlidir. Sütçü işletmeler için istenilmeyen erkek buzağı ve bunlara bağlı görülebilecek güç doğum olgularının da önüne CBS kullanımı ile büyük ölçüde geçilebilmektedir (Norman ve ark., 2010; Holden ve ark., 2014). Çünkü dişi buzağıların erkeklerden 2 kg daha düşük doğum ağırlığına sahip olması güç doğum oranı düşürmekte ve bu durum özellikle ilk doğumunu yapacak olan düveler için önem arz etmektedir (Norman ve ark., 2010). Doğum kolaylığına geniş perspektifte bakıldığında güç doğumlara bağlı görülebilecek buzağı ölümlerinde azalma, güç doğum sonrası görülme insidansları artan retensiyo secundinarum, metritis, ovaryum aktivitesinin geç başlaması ve bunlara bağlı olarak fertilitede düşme gibi problemlerin görülmesindeki azalma sayesinde buzağılama aralığının işletmelerde ekonomik sınırlar içerisinde tutulabilmesini de sağlar (Holden ve Butler, 2018). Ayrıca cinsiyeti belirlenmiş spermadan doğan buzağılarda doğum ağırlığı, yaşama gücü, kilo kazanımı ve ölüm oranlarının konvansiyonel spermadan doğandan farklı olmadığı bildirilmiştir. Gebelik süresinin ve abort oranlarının da farklı olmadığı görülmüştür (Tumban ve ark., 2004). İneklerde güç doğum ve freemartin düve doğumlarına neden olan ikiz gebelik doğumları da CBS kullanımı ile azalmaktadır. Healy ve ark. (2013) CBS kullanımı sonrası doğan ikiz buzağılardan %60’ının dişi-dişi, %30’unun dişi-erkek ve %10’unun da erkek-erkek olduğunu tespit ederken, konvansiyonel spermadan doğan freemartin düve oranını %46 olarak bildirmişlerdir. Öte yandan 1.49 milyon ineğin değerlendirildiği bir çalışmada, ilk laktasyonda dişi buzağı doğuran düvelerin, erkek buzağı doğuranlardan 143 litre daha fazla süt verdiği bildirilmiştir. İkinci ve daha sonraki buzağılar için artış 95 litre civarında tespit edilmiştir (Hinde ve ark., 2014). Embriyo transferi çalışmalarında amaç genetik ilerlemenin hızlandırılmasıdır ve bu işlemde CBS kullanımı ile birlikte sürüdeki genetik ilerlemenin daha hızlı gerçekleştirildiği görülmektedir (Seidel, 2014). SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 36 4.Cinsiyeti Belirlenmiş Sperma Kullanımında Gebelik Oranını Etkileyen Faktörler Üretim maliyetinin yüksek olması ve elde edilen gebeliklerin konvansiyonel spermaya göre düşük olması CBS’nin ilk çıktığı yıllarda kullanımının sınırlı kalmasına neden olmuştur (Reese ve ark., 2021). Fakat ekonomik çalışmalar göstermiştir ki sütçü ya da etçi işletme modellerinde istenilen cinsiyette buzağıya sahip olunması ile 300 Amerikan Doları daha fazla kazanç sağlanabilmektedir (De Vries, 2008). Sperma ayırma teknolojisindeki gelişmelerle birlikte maliyetinde azalma ve payetler içerisindeki sperma sayısında artış sağlanmıştır. Ancak CBS ile elde edilen gebelik oranları hala konvansiyonel sperma ile elde edilenlere göre bazı çalışmalarda düşük kalmaktadır. Bunun nedenleri arasında işletmelerdeki yetersiz östrus tespit oranı, bakım-besleme koşulları ya da sağlık ile ilgili yönetimsel hatalar yer almaktadır (Seidel ve DeJarnette, 2022). CBS ile yapılan çalışmalara bakıldığında gebelik oranını etkileyen faktörler şu şekilde özetlenebilir; -Ayrıştırma sürecinden dolayı spermlerde kapasitasyon süresinin etkilendiği ve spermanın fertilizasyon ömrünün azaldığı bildirilmektedir (Seidel, 2007). Bu nedenle ovulasyona yakın zamanda yapılacak tohumlamaların gebelik oranını arttıracağı bildirilmiştir (Guner ve ark., 2020, Moore ve ark., 2023). - İlk yıllarda yapılan çalışmalar göstermiştir ki ayrıştırma sürecindeki olumsuzlukların tam olarak giderilememesi durumunda sadece payetlerdeki CBS’nin dozunun arttırılmasının tek başına gebelik oranına olumlu etkisi olmayacaktır (Seidel ve Schenk, 2008; DeJarnette ve ark., 2008). Ancak yeni teknoloji ile birlikte payetlerdeki dozun artması gebelikler üzerine olumlu etki yapmıştır (Vishwanath ve Moreno, 2018). - Laktasyon sayısı da gebelik oranlarını etkileyen bir faktördür. Bu nedenle düvelerin ve primipar ineklerin ilk tohumlamalarında CBS kullanımının daha stratejik olduğu bildirilmektedir (Healy ve ark., 2013; Seidel ve DeJarnette, 2022). - Özellikle doğal kızgınlıkları takiben CBS kullanılmasının daha yüksek gebelik oranları ile sonuçlandığı bildirilmesine rağmen işletmelerdeki en büyük problem östrusların doğru ve yeterli olarak tespit edilememesidir (Ribeiro ve ark., 2012). Bu doğrultuda zaman ayarlı senkronizasyon protokollerinin kullanımı reprodüktif yönetimin düzgün yapılabilmesi için düve ve ineklerde zorunluluk haline gelmektedir. CBS’nin bu protokoller ile kullanımı ve yeterli gebelik oranlarının elde edilebilmesi için farklı çalışmalar 37 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV yapılmıştır (Karakaya ve ark., 2014; Karakaya-Bilen ve ark., 2019; Güner ve ark., 2021). - Gebelik sonuçlarını etkileyen en önemli etmenlerden birisi de boğanın fertilitesidir. Konvansiyonel spermada yüksek gebelik oranlarına sahip olan bir boğanın CBS ile elde edilecek gebelik oranları düşük olabilir. Her boğa spermasının ayırma işlemine aynı şekilde dayanıklı olmadığı bilinmektedir ve gebelik oranı ortaya konulmuş bir CBS’yi kullanmak önemli bir strateji olacaktır (Hall ve ark., 2017; Güner ve ark., 2020). DeJarnette ve ark. (2011) düve ve ineklerde yaptığı çalışmada farklı dozlarda ve farklı boğalardan elde ettikleri CBS kullanmış, gebelik oranı sperma dozundan etkilenmezken, boğanın etkisinin olduğunu tespit etmişlerdir. Sonuç olarak uygun boğa seçimi CBS’nin işletmelerde kullanımı yönünden önemli bir ayrıntıdır. - CBS’nin yaşam süresinin normal spermaya göre daha kısa olması ve kapasitasyonunun erken başlaması nedeniyle tohumlamaların muhtemel ovulasyonun olacağı kornu uteriye yapılması denenmiş fakat gebelik oranları üzerine olumlu bir etkisi olmadığı çalışmalarda görülmüştür (Kurykin ve ark., 2007; Karakaya ve ark., 2014). - Hem konvansiyonel hem de CBS’de tohumlayıcının etkisi göz ardı edilemez bir faktördür. Deneyimsiz ve özensiz davranan tohumlayıcılarda gebelik oranlarının daha düşük olduğu bildirilmektedir (Vartia ve ark., 2017; Güner ve ark., 2020). - CBS’nin kullanılmaya başlanıldığı ilk yıllarda özellikle gebe kalma oranı daha yüksek olan düvelerde ve yine özellikle doğal kızgınlıklarını takiben tohumlanılması gerektiği bildirilmekteydi. İlerleyen teknoloji ile birlikte ve uygun östrus tespit yöntemlerinin ya da senkronizasyon protokollerinin kullanımının yaygınlaşması ile ideal tohumlama zamanının belirlenmesi gebelik oranlarında da artış görülmesine neden olmuştur (Seidel ve DeJarnette, 2022). Öte yandan yıllar içerisinde CBS kullanımı düvelerde ineklere oranla çok daha hızlı bir ivme yakalamıştır (Hutchison ve Bickhart, 2016). 5. Cinsiyeti Belirlenmiş Spermanın Düvelerde Kullanımı Günümüze kadar CBS’nın kullanımında gebelik oranlarının düşük olması nedeniyle sadece düvelerde ilk tohumlamada ve östrus takibi sonrası kullanılmasının daha uygun olduğu bildirilmiştir. Bu düşünce de zaman ayarlı suni tohumlama protokollerinde ve ineklerdeki kullanımının yaygınlaşmasını kısıtlamıştır (Seidel, 2007). Ayırma sürecinde zaman içerisinde kaydedilen gelişmelere rağmen, cinsiyeti belirlenmiş sperma ile tohumlanan düvelerin gebelik oranlarının konvansiyonel sperma ile tohumlanan düvelere göre %11 civarında daha düşük olduğu bildirilmiştir (Silva ve ark., 2015; Noonan ve ark., 2016; Chebel ve Cunha 2020). Öte yandan Holştayn ırkı düvelerin SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 44 36-45. Johnson, L.A., Flook, J.P., Hawk, H.W. (1989). Sex pre-selection in rabbits: live birth from X and Y sperm seperated by DNA and cell sorting. Biology of Reproduction, 41, 199-203. Karakaya, E., Yilmazbas-Mecitoglu, G., Keskin, A., Alkan, A., Tasdemir, U., Santos, J.E.P., Gumen, A. (2014). Fertility in dairy cows after artificial insemination using sex-sorted sperm or conventional semen. Reproduction in Domestic Animals, 49, 333-337. Karakaya-Bilen, E., Yilmazbas-Mecitoglu, G., Keskin, A., Guner, B., Serim, E., Santos, J.E.P., Gumen, A. (2019). Fertility of lactating dairy cows inseminated with sex-sorted or conventional semen after Ovsynch, PresynchOvsynch and Double-Ovsynch protocols. Reproduction in Domestic Animals, 54, 309-316. Karakaya-Bilen, E., Ribeiro, E.S., Bisinotto, R.S., Gümen, A., Santos, J.E.P. (2019). Effect of presynchronization with prostaglandin F2α before the 5-d timed AI protocol on ovarian responses and pregnancy in dairy heifers. Theriogenology, 132,138-143. Kurykin, J., Jaakma, U., Waldmann, A., Jalakas, M., Aidnik, M., Majas, L., Padrik, P. (2006). Low semen dose intracornual insemination of cows at fixed time after PGF2α treatment or at spontaneous estrus. Animal Reproduction Science, 95, 116-124. Kurykin, J., Jaakma, Ü., Jalakas, M., Aidnik, M., Waldmann, A., Majas, L. (2007). Pregnancy percentage following deposition of sex-sorted sperm at different sites within the uterus in estrus-synchronized heifers. Theriogenology, 67, 754-759. Lauber, M. R., E. M. Cabrera, V. G. Santos, P. D. Carvalho, C. Maia, B. Carneiro, A. Valenza, V. E. Cabrera, J. J. Parrish, P. M. Fricke. (2021). Comparison of reproductive management programs for submission of Holstein heifers for first insemination with conventional or sexed semen based on expression of estrus, pregnancy outcomes, and cost per pregnancy. Journal of Dairy Science, 104,12953-12967. Lenz, R.W., Gonzalez-Marin, C., Gilligan, T.B., DeJarnette , J.M., Utt, M.D., Helser, L.A., Hasenpusch, E., Evans, K.M., Moreno, J.F., Vishwanath, R. (2016). SexedULTRA™, a new method of processing sex-sorted bovine sperm improves conception rates. Reproduction, Fertility and Development, 29, 203-204. Meirelles, C., Kozicki, L.E., Weiss, R.R., Segui M.S., Souza, A., Santos, 45 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV I.W., Santos Breda, J.C. (2012). Comparison between deep intracornual artificial insemination (DIAI) and conventional artificial insemination (AI) using low concentration of spermatozoa in beef cattle. Brazilian Archives of Biology and Technology, 55, 371-374 Moore, S.G., Crowe, A.D., Randi, F., Butler, S.T., (2023). Effect of delayed timing of artificial insemination with sex-sorted semen on pregnancy per artificial insemination in synchronized dairy heifers managed in a seasonal-calving pasture-based system, JDS Communications, 4(5), 417-421. Norman, H.D., Hutchison, J.L., Miller, R.H. (2010). Use of sexed semen and its effect on conception rate, calf sex, dystocia, and stillbirth of Holsteins in the United States. Journal of Dairy Science, 93, 38803890. Reese, S., Pirez, M.C., Steele, H., Kölle, S. (2021).The reproductive success of bovine sperm after sex-sorting: a meta-analysis. Scientific Reports, 30, 11(1):17366. Ribeiro, E.S., Galvão, K.N., Thatcher ,W.W., Santos, J.E.P. (2012). Economic aspects of applying reproductive technologies to dairy herds. Animal Reproduction, 9, 370-387. Sá Filho, M. F., H. Ayres, R. M. Ferreira, M. Nichi, M. Fosado, E. P. Campos Filho, and P. S. Baruselli. (2010). Strategies to improve pregnancy per insemination using sex-sorted semen in dairy heifers detected in estrus. Theriogenology, 74,1636-1642. Santos, J.E.P., Thatcher, W.W., Chebel, R.C., Cerri, R.L.A., Galvão, K.N. (2004). The effect of embryonic death rates in cattle on the efficacy of estrus synchronization programs. Animal Reproduction Science, 8283, 513-535. Schenk, J.L., Cran, D.G., Everett, R.W., Seidel, G.E. Jr,. (2009). Pregnancy rates in heifers and cows with cryopreserved sexed sperm: Effects of sperm numbers per inseminate, sorting pressure and sperm storage before sorting. Theriogenology, 71, 717-728. Schenk, J.L., Suh, T.K., Cran, D.G., Seidel Jr, G.E. (1999). Cryopreservation of flow-sorted bovine sperm. Theriogenology, 52, 1375-1391. Seidel Jr, G.E. (2003). Sexing mammalian sperm-intertwining of commerce, technology, and biology. Animal Reproduction Science, 79, 145-156. Seidel Jr, G.E., Schenk, J.L. (2008). Pregnancy rates in cattle with cryopreserved sexed sperm: effects of sperm numbers per inseminate and site of sperm deposition. Animal Reproduction Science, 105, 129- SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 46 138. Seidel Jr, G.E. (2007). Overviwe of sexing sperm. Theriogenology, 68, 443446. Seidel Jr, G.E. (2012). Sexing mammalian sperm – Where do we go from here? Journal of Reproduction and Development, 58, 505-509. Seidel Jr, G.E. (2014). Update on sexed semen technology in cattle. Animal, 8, 160-164. Seidel Jr, G.E., DeJarnette, J.M. (2022). Applications and world-wide use of sexed semen in cattle. Animal Reproduction Science, 246, 106841. Suh, T.K, Schenk, J.L, Seidel Jr, G.E. (2005). High pressure flow cytometric sorting damages sperm. Theriogenology, 64, 1035-1048. Thomas, J.M., Locke, J.W.C., Vishwanath, R., Hall, J.B., Ellersieck, M.R., Smith, M.F., Patterson, D.J. (2017). Effective use of SexedULTRA™ sex-sorted semen for timed artificial insemination of beef heifers. Theriogenology, 98, 88-93. Tubman, L.M., Brink, Z., Suh, T.K., Seidel, G. E., Jr. (2004). Characteristics of calves produced with sperm sexed by flow cytometry/cell sorting. Journal of Animal Science, 82, 1029-1036. Vartia, K., Taponen, J., Heikkinen, J., Lindeberg, H. (2017). Effect of education on ability of AI professionals and herd-owner inseminators to detect cows not in oestrus and its relation with progesterone concentration on day of re-insemination. Theriogenology, 102, 23-28. Vishwanath, R. (2014). SexedULTRA-raising the fertility bar of sexed sorted semen. 25th Technical Conference on Artificial Insemination and Reproduction, National Association of Artificial Breeders, Wisconsin, USA, pp: 57-61. Vishwanath, R., Moreno, J. F. (2018). Review: Semen sexingcurrent state of the art with emphasis on bovine species. Animal, 12, 85-96. Quelhas, J., Pinto-Pinho, P., Lopes, G., Rocha, A., Pinto-Leite, R., Fardilha, M., Colaço, B. (2023). Sustainable animal production: exploring the benefits of sperm sexing technologies in addressing critical industry challenges. Frontiers in Veterinary. Science, 10, 1181659.