KOYUNLARDA MASTİTİSLİ SÜTLERDE OMİK ANALİZLER

75 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV BÖLÜM 5 KOYUNLARDA MASTİTİSLİ SÜTLERDE OMİK ANALİZLER Dr. Öğr. Üyesi Öznur YILMAZ KOÇ1 Dr. Öğr. Üyesi Tarık ŞAFAK2 Prof. Dr. Ali RİŞVANLI3 DOI: https://dx.doi.org/10.5281/zenodo.10408062 1 Siirt Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Doğum ve Jinekoloji Anabilim Dalı, Siirt, Türkiye, [email protected], ORCID ID: 0000-0003-0424-9471 2Kastamonu Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Doğum ve Jinekoloji Anabilim Dalı, Kastamonu, Türkiye, [email protected], ORCID ID: 0000-0002-6178-4641 3Fırat Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Doğum ve Jinekoloji Anabilim Dalı, Elazığ, Türkiye, [email protected], ORCID ID: 0000-0001-5653-0025 SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 76 77 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV GİRİŞ Mastitis, meme dokusunda görülen yangısal reaksiyonlar ile sütün fiziksel ve kimyasal yapısındaki değişimlerle karakterize enfeksiyöz bir hastalıktır. Mastitisler, meme loblarında değişen derecede klinik semptomların gözlendiği klinik mastitis ya da klinik semptom ve sütte fiziksel herhangi bir değişikliğin tespit edilmediği subklinik mastitis olarak iki şekilde sınıflandırılabilir (Bergonier ve ark., 2003; Viguier ve ark., 2009). Her iki mastitis formunda da süt veriminde önemli derecede bir azalma söz konusudur. Mastitis vakalarında hastalık tedavi edilse bile eski süt verimine ulaşılmaz. Koyunda iyileşme sonrası süt üretim miktarı sağlıklı döneme göre çok daha düşük kalmaktadır. Mastitise bağlı olarak ortaya çıkan ekonomik zararlar; süt veriminde azalma, sütün atılması, süt kalitesinin düşmesi, veteriner hekim hizmetlerindeki maliyet artışı, mastitisli hayvanların sürüden erken yaşta çıkarılması, diğer hastalıklar, kontrol ve koruma tedbirlerinin getirdiği ek giderler ve hatta kuzu beslenmesinin/büyümesinin azalmasına bağlı ekonomik kayıplar şeklinde sıralanabilir (Kiossi ve ark., 2007; Conington ve ark., 2008; Huntley ve ark., 2012). KOYUNLARDA MASTİTİS ETKENLERİ Koyunlarda mastitise çoğunlukla Gram pozitif bakteriler neden olmaktadır (Bergonier ve ark., 2003). Klinik mastitis vakalarının çoğu laktasyonun erken döneminde ortaya çıkar ve çoğunlukla Staphylococcus aureus (S. aureus) ve Mannheimia haemolytica'dan kaynaklandığı bildirilmektedir (Contreras ve ark., 2007; Gelasakis ve ark., 2016). Klinik mastitis genellikle koyunlarda mastitis vakalarının %5'inden azında görülür (Olechnowicz ve Jaśkowski, 2014). Bununla birlikte, koyunlarda klinik mastitis sporadik vakalar halinde görülmektedir. Nadiren de olsa sürü salgınları şeklinde görülebilir. Klinik mastitis, artan hastalık şiddeti ile subakuttan kronik hale geçebilir. Klinik mastitisin teşhis edilmesi kolaydır, açıkça gözlemlenebilir klinik belirtiler ve memede renk değişikliği gibi fiziksel belirtiler ile kendini gösterir. Klinik mastitisli memeler genellikle şişer ve dokunulduğunda ağrı hissi uyandırır. Etkilenen koyunlar yem yemeyi reddeder, halsizdirler ve genellikle kuzularının emmelerine izin vermezler, bu da emziren kuzuların büyüme oranlarında azalmalara neden olmaktadır. Klinik mastitisten etkilenen koyunlardan elde edilen sütün görünümü ve bileşimi anormaldir; renk değişikliği, sulu, kan veya serum içerebilir. İrin ve sütte pıhtılaşma varsa kötü kokulu olabilir (Berthelot ve ark., 2006; Mork ve ark., 2007; Marogna ve ark., 2010; Smith ve ark., 2015). Subklinik mastitis koyunlarda oldukça yaygındır, koagülaz negatif stafilokoklar (KNS) en yaygın izole edilen bakteri türleridir ve sürü düzeyinde prevalansı %25 ila %90 arasında değişmektedir (Bergonier ve ark., 2003; Gelasakis ve ark., 2016; Van den Crommenacker-Konings ve ark., 2021). SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 78 Staphylococcus epidermidis ise bunlar arasında en çok izole edilen türdür (Onni ve ark., 2011). Son araştırmalarda koyunlarda subklinik mastitisin etiyolojik ajanları olarak KNS'nin önemini göstermektedir (Leitner ve ark., 2001; Pengov, 2001; McDougall ve ark., 2002; Contreras ve ark., 2007). Subklinik mastitiste KNS’lerden sonra en sık izole edilen bakteri S. aureus'tur (Ozenc ve ark., 2011). Öte yandan mikoplazmalar, karmaşık bilinmeyen patojenite faktörleri ile yok edilmesi zor kronik enfeksiyonlara neden olan mikroorganizmalardır. Mikoplasma kaynaklı mastitisler dünya çapında oldukça önemli bir sorun olarak devam etmektedir. Farklı türler arasında, Mycoplasma bovis sığırlarda en önemli türdür, buna karşın çok yakın filogenetik akrabası olan Mycoplasma agalactiae (M. agalactiae), küçük ruminantlarda benzer şiddetli mastitise neden olmaktadır. Mycoplasma agalactiae, koyun ve keçilerde kontagiyöz agalactia sendromunun ana etiyolojik ajanıdır ve özellikle enfeksiyonun antibiyotik tedavisinden sonra bile uzun yıllar sütte kalması nedeniyle büyük ekonomik kayıplara neden olmaktadır (Kauf ve ark., 2007; Corrales ve ark., 2007; Citti ve Blanchard, 2013; Dudek ve ark., 2020). MASTİTİS TEŞHİSİNDE KONVANSİYONEL YAKLAŞIM Subklinik mastitisin belirlenmesi, klinik belirtilerin olmaması nedeniyle oldukça zordur. Subklinik mastitis sadece sütte bakteriyolojik testler veya somatik hücre sayımı (SHS) (nötrofil lökositler ve bazı epitel hücreleri) ile tespit edilebilir. Koyunlarda, süt SHS>200 x 103 hücre/ml ise ve/veya California Mastitis Test (CMT) sonucuna göre pozitif reaksiyon vermişse subklinik mastitis olarak kabul edilir. Genel olarak subklinik mastitisli koyunlar sağlıklı görünürler ancak yangısal durum nedeniyle süt üretimi ve sütün bileşiminde değişiklikler gözlenmektedir (Berthelot ve ark., 2006; De Olives ve ark., 2013; Olechnowicz ve Jaśkowski, 2014). Somatik hücre sayımı ve CMT, nötrofil lökositlerin varlığıyla dolaylı ilişkileri nedeniyle tanı araçları olarak kullanılmaktadır (Sordillo ve Streicher, 2002; Sordillo, 2018). Ancak, bu testlerin özellikle küçük ruminantlarda özgüllükleri sınırlı kalmaktadır (Souza ve ark., 2012). California Mastitis Test mastitis tespiti için hızlı, kullanımı kolay ve ucuzdur. Ayrıca, mastitis kontrol ve önleme programlarında faydalı olmasına rağmen, test kalitatif ve subjektif olarak yorumlanmaktadır (Dingwell ve ark., 2003). Özgüllüğü (%86,2) ve duyarlılığı (%88,5) nedeniyle CMT'nin mastitisi teşhis etmek için bir araç olduğu belirtilmektedir (Leslie ve ark., 2002). Fakat, farklı çalışmalarda CMT'nin duyarlılığı ve özgüllüğü sırasıyla %61-69 ve %65-68 arasında değiştiği tespit edilmiştir (Roy ve ark., 2009; Mahmmod ve ark., 2013). Ayrıca, CMT, yeni doğum yapmış ineklerde ve kuruya çıkartılacak geç laktasyondaki inekler için önerilmemektedir. Çünkü SHS artması enfeksiyonla ilgili olmayabilir (Williamson ve ark., 2022). 79 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV Meme dokusundaki damar geçirgenliğindeki artışa bağlı olarak, mastitisli sütlerde iyon bileşimi de değişkenlik göstermektedir. Mastitisli sütlerde, potasyum oranı düşerken, sodyum ve klor miktarında da artış söz konusudur. Bu durumda mastitis teşhisinde bize yardımcı olmaktadır. Ancak, sütün elektrik iletkenliği; hayvanın ırkı, sütün bileşimi, miktarı, laktasyon dönemi, bakteriyel flora, mevsim, sağım sıklığı gibi birçok faktörün etkisine bağlı olarakta değişkenlik gösterebilmektedir (Baştan, 2018; Yağcı, 2008). Bir diğer tanı aracı ise enfeksiyona neden olan patojeni izole etmeyi amaçlayan mikrobiyolojik kültürdür. Mikrobiyolojik ekimlerle bakteri etkeninin tanımlanması yapılıp ona yönelik bir tedavi protokolü izlenebilir. Ancak bu yönteminde dezavantajları vardır; özellikle test için gereken sürenin uzunluğu ve mastitisli süt kültürlerinde sıklıkla 'üreme yok' vakalarının görülme sıklığı. Süt koyunlarında mastitisin diğer teşhis araçları ve belirteçleri arasında, enfekte koyunların meme dokusundan numunelerin toplanması ve ardından histolojik ve immünohistokimyasal analizlerin gerçekleştirilmesi yer almaktadır, ancak aynı zamanda pratik değildir ve çoğunlukla araştırma çalışmalarında uygulanmıştır (Libera ve ark., 2021). MASTİTİS TEŞHİSİNDE YENİ MODELLER Mastitis sırasında, laktoferrin, katelisidinler, sitokinler, kemokinler ve büyüme faktörleri dahil olmak üzere çok sayıda antibakteriyel ve bağışıklık savunma proteini süte salınır ve potansiyel olarak mastitis belirteçleri olarak kullanılabilmektedir (Smolenski ve ark., 2011; Thomas ve ark., 2015). Buna göre, alternatif/bütünleştirici tanı araçları olarak uygulanmaları, son yıllarda çeşitli çalışmaların konusu olmuştur. Günümüzde mevcut olan teşhis araçları ile karşılaştırıldığında, gelişmiş duyarlı ve özgül tanı araçlarını uygulamak için yeni biyobelirteçler keşfetmeye ihtiyaç duyulmaktadır (Chiaradia, ve ark., 2012). Artan tanısal performans olasılığına ek olarak, geleneksel tanı yaklaşımlarının mastitis marker proteinlerini ölçen immünoanalizlerle entegrasyonu, numuneler üzerinde verimli çalışma yeteneği, yüksek analitik verim ve minimum maliyet dahil olmak üzere ek faydalar sağlayabilir (Addis et al. 2016). Meme enfeksiyonu saptanması mastitisin teşhis edilmesi ve tedavisi için yararlı biyobelirteçlerin tanımlanmasına yardımcı olabileceğine ve böylece mastitisin diğer bölgelere yayılmasının önlenmesine yardımcı olabileceğine inanılmaktadır. Bu bağlamda, tespit edilebilecek spesifik proteinler, gelecekteki teşhis kitlerinin geliştirilmesi için daha fazla imkan sunacağı düşünülmektedir (Chiaradia ve ark., 2012; Giagu ve ark., 2022). Moleküler çalışmalar günümüzde aynı zamanda omik teknolojileri ile ifade edilerek geliştirilmeye ve araştırma konusu olmaya başlamıştır. Omik teknolojisi içerisinde oldukça farklı teknolojiler yer almaktadır. Bu teknolojiler sayesinde organizmayı oluşturan hücreleri, proteinleri ve molekülleri kapsamlı ve detaylı bir şekilde araştırabilme imkanı bulunmuştur. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 80 Bu biyolojik araştırmalar genomik, transkriptomik, proteomik ve metabolomik analizler olmak üzere dört temel başlıkta incelenmektedir (Li ve ark., 2017; Long, 2020). Omik teknolojileri evcil hayvanlarda hastalıkların tespiti (Katsafadou ve ark., 2015), beslenme stratejilerinin belirlenmesi (Shahzad ve ark., 2019), reprodüktif kalitenin belirlenmesi (Long, 2020), sperm kalitesinin belirlenmesi (Hitit ve ark., 2021; Özbek ve ark., 2021) ve embriyo gelişim aşamalarının ve kalitesinin değerlendirilmesi (Kropp ve Khatib, 2015; Banliat ve ark., 2022) amacıyla kullanılmaktadır. Östrüs siklusu ve erken gebelikte koyun endometriyumunda mRNA ekspresyonu araştırılmıştır (Hitit ve Köse, 2022). Keçi ovaryumlarında miRNA, circRNA ve lncRNA gibi mRNA ve non-coding-RNA'ların veri tabanları araştırılan bir çalışmada bu RNA'ların ekspresyonu, östrüs ve diöstrüs aşamasındaki gruplar arasında karşılaştırılmıştır. Östrüs siklus düzenlenmesi, östrüs ve diöstrüs aşaması arasındaki farklı RNA ifadelerine bakılarak tahmin edilmektedir (An ve ark., 2021). Erken gebelik teşhisi (Ioannidis ve Donadeu, 2016) ve amniyotik sıvıda fetal cinsiyetin belirlenmesi amacıyla da kullanılabileceği öngörülmektedir (Sanchez ve ark., 2021). Ayrıca, evcil hayvanların serum/plazma proteomundaki değişikliklerle erken gebelik ile ilgili araştırmalara artan bir ilgi bulunmaktadır. Buna göre, sığır (Lee ve ark., 2015), manda (Balhara ve ark., 2014), domuz (De ve ark., 2019), eşek (Deng ve ark., 2020), kısrak (Deng ve ark., 2022) ve köpek (Valdés ve ark., 2019) serum/plazmalarındaki gebeliğe özgü potansiyel belirteçler proteomik analizler yapılarak tanımlanmıştır. Son yıllarda, özellikle ineklerde gerek kan gerekse sütte transkriptomik çalışmalara odaklanılmıştır. Son miRBase sürümü ile sığırlar için 1.025, keçiler için 436 ve koyunlar için 153 miRNA içerdiği belirtilmiştir (Dysin ve ark., 2021). Bakteriyel sığır mastitisi ile ilgili miRNA'lar ilk olarak ısıyla inaktive edilmiş S. aureus ve E. coli ile enfekte olmuş meme hücrelerinde miR-21-5p, miR-27b, miR-22-3p, miR-184, let-7f, miR-2339, miR-499, miR23a, miR-99b dahil olmak üzere toplam 231 bilinen ve 113 yeni miRNA tanımlanmıştır (Jin ve ark., 2014). Staphylococcus aureus ile enfekte hücrelere özgü olan S. aureus ve E. coli'nin neden olduğu mastitis ile enfekte sığır meme dokularında hem bta-miR-146a hem de bta-miR-146b'de önemli bir artış tespit edilmiştir (Wang ve ark., 2016). Dahası, S. aureus ile enfekte olmuş ineklerin süt eksozomlarında 492 bilinen ve 980 yeni miRNA tanımlanmıştır. Bu miRNA’ların daha önceden bilinenlerden 22 tanesi ve yeni tespit edilenlerden ise 15 tanesi sağlıklı ineklere kıyasla mastitisli olanlarda ekspresyon göstermiştir (Cai ve ark., 2018). Han vd. (2020), öte yandan mastitisli ineklerin memelerinde, 10’u daha önce tanımlanmış olan toplam 48 miRNA’nın tanımlamasını yapmıştır. Birçok çalışmada, miRNA'ların inek (Izumi ve ark., 2012), domuz (Chen ve ark., 2014) ve keçi (Cremonesi ve ark., 81 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV 2022) gibi hayvanların sütünde ve kolostrumunda tespit edildiği bildirilmektedir. Sütteki miRNA'ların ekspresyon profilleri, farklı laktasyon dönemlerinde önemli değişikliklere uğrayabilmektedir. Böylece miRNA'ların laktasyonun düzenlenmesinde rol oynadığı düşünülmektedir. Bu miRNA'ların ayrıca farklı biyolojik fonksiyonlar için biyobelirteç olabileceği düşünülmektedir (Wang ve ark., 2022; Oyelami ve ark., 2022). Eksozomal miRNA'lar, Holstein ve Doğu Anadolu Kırmızı inek sütü ve kolostrumda karakterize edilmiştir. Süt sentezini düzenleyen miRNA'lar ve immünolojik yolaklarda yer alan miRNA'lar çoğunlukla Holstein inek kolostrumunda bulunmaktadır. Doğu Anadolu Kırmızı inek sütünde, süt yağı ve protein metabolizmasını ve immünolojik yolakları iyileştiren miRNA'ların yanı sıra kolostrumda daha önce hiç tanımlanmamış miRNA'lar da tespit edildiği bildirilmektedir (Özdemir, 2020). Streptococcus uberis (Lawless ve ark., 2013), S. aureus ve E. coli (Jin ve ark., 2014) ile enfekte olmuş sığır meme epitel hücreleri ve sütten (Sun ve ark., 2015) elde edilen miRNA’ların insan sütünden elde edilen bulgularla benzer olduğu tespit edilmiştir (Zhou ve ark., 2012). Ayrıca, sığır meme epitel hücrelerinin (Li ve ark., 2017) ve meme bezinin (Jensen ve ark., 2013) miRNA profili, mastitisle ilişkili olabileceği anlamına gelmektedir. Eksprese edilen miRNA'lardan miR-223 ve miR-142-5p’nin, sığır mastitis teşhisi için potansiyel adaylar olabileceği belirtilmektedir (Cai ve ark., 2018). Sığırların aksine koyunlarda tanımlanan miRNA'ların çoğu, meme bezi dışındaki dokulardan elde edilmiştir. Örneğin, Caiment vd. (2010), derin dizileme yoluyla iskelet kasından 747 miRNA tanımlarken, McBride vd. (2012), farklı üreme aşamalarındaki koyunların ovaryum foliküllerinden ve korpus luteumdan 212 miRNA tanımlamıştır. Galio vd. (2013) gebe ve laktasyondaki koyunlarda miR-21, miR-205 ve miR-200 ailesi dahil olmak üzere bilinen üç miRNA'nın ve 47 yeni miRNA'nın varlığını göstermiştir. Son zamanlarda koyunlarda yapılan bir çalışmada (Wang ve ark., 2021), koyun meme dokusunda 147 miRNA bulunmuş ve bunların ekspresyonunun laktasyon dönemine göre farklılık gösterdiği belirtilmiştir. Güncel çalışmalarda omic teknolojisinin bir diğer ayağı proteomik analizlerdir (Li ve ark., 2017; Cui ve ark., 2020; Lan ve ark., 2021). Bu teknolojilerin temel amacı doku veya plazma/serum örneklerinde hastalık teşhis etmeye ve yeni biyobelirteçler belirlemeye yöneliktir (Nedelkov ve ark., 2006). Proteomikteki son teknolojik gelişmeler, hayvan araştırmalarında protein değişikliklerini incelemeye büyük bir ilgi uyandırmaktadır. Proteomlarının profil tespiti, fizyolojik veya patolojik durumu karakterize etmek için güçlü bir araçtır (Chiaradia ve ark., 2012). Proteomik çalışmalar, gen fonksiyonunun etkilerini temsil eder ve karmaşık biyolojik süreçleri araştırmak için önemli bir araç olarak kullanılmaktadır. Genellikle gen transkripsiyonu ve translasyonundan protein ekspresyonu olarak tanımlanan SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 82 proteinlerin geniş ölçekli olarak araştırılmasıdır. Bu teknoloji, potansiyel hastalık ve beslenme çalışmalarında da uygulanarak, protein yapısının çeşitliliğini ve bu çeşitlilik ile birlikte temelde olan biyolojik süreçler arasındaki ilişkiyi karakterize etmek için kullanılabilir (Chiaradia ve ark., 2012). Proteom farklılıkları belirlenerek hastalıklara spesifik proteinlerin belirlenmesi (Nedelkov ve ark., 2006), mikroorganizmalara ait çeşitli proteinlerin belirlenmesi (de Souza ve Wiker, 2011), konak ve mikroorganizma proteomlarının karşılıklı etkileşimleri belirlenerek (Munday ve ark., 2012) hastalıkların seyrinin takip edilmesine yönelik bilgi vermektedir. Proteomik analiz ile büyük ölçekli protein analizler gerçekleştirir. Analiz sayesinde bir hücrenin, dokunun ve/veya biyolojik sıvıların tüm protein profili ortaya çıkar (Mavromati ve ark., 2014). Son yıllarda yapılan proteomik yaklaşımlarla yapılan analizler insanlarda obezite veya diyabet gibi karmaşık metabolik hastalıkların altında yatan mekanizmaları ortaya çıkarmada büyük ölçüde kolaylık sağlamaktadır (Oberbach ve ark., 2011). İnsanlarda olduğu gibi bu teknolojiler hayvanlarda da kullanılmakla birlikte, veteriner hekimlikte, özellikle paraziter (Lan ve ark., 2021), bakteriyel (Wu ve ark., 2014) ve viral (Cui ve ark., 2020) hastalık durumlarında serum proteomları üzerine çalışmalar yapılmış olmasına rağmen, küçükbaş hayvan türlerinde proteomik çalışmalar oldukça sınırlı kalmaktadır (Chiaradia, ve ark., 2012; Mavromati ve ark., 2014). İneklerde S. aureus kaynaklı mastitisli meme bezi hücrelerinde (Silva ve ark., 2022), E. coli kaynaklı mastitisli sütte (Boehmer ve ark., 2008), subklinik ve klinik mastitisli ineklerin serum örneklerinde (Turk ve ark., 2012) proteomik analizler yapılmıştır. Koyunlarda M. agalactiae ile enfekte meme epitel hücrelerinde (Addis ve ark., 2011), lipopolisakkarit ile toksemi oluşturulan keçilerde (Olumee-Shabon ve ark., 2013) ve S. aureus kaynaklı mastitisli sütlerde proteomiks analizler yapılmıştır. İnek mastitisinde biyobelirteçler olarak kullanılmaya imkan verebilecek transkriptomik ve proteomik bazlı çalışmalar yapılmaktadır. Giagu ve ark., (2022) yaptıkları çalışmada, inekler üzerinde yapılan proteomik çalışmalar %78,8 ile ilk sırada yer almaktadır. Bunu %12,1 ile koyun, %9,1 keçi ve %6,1 ile manda çalışmaları takip etmektedir. Sığır mastisinde tespit edilen serum vitronectin proteinin mastitis teşhisinde kullanılabileceği belirtilmektedir (Turk ve ark., 2012). Dahası Maity vd. (2020) inek ve manda mastitisinde 1.479 farklı protein tespit etmiştir. Bu proteinlerden 128’i inek ve 163'ü manda sütlerinde tespit edilmiş ve hastalığın prognozu ile ilgili fikir verdiği belirtilmektedir. Ayrıca, trankriptomik yaklaşımlarla sütte tespit edilen btamiR-1246 ve hsa-miR-424-5p seviyeleri, Enzootic sığır lökozu için biyolojik belirteçler olarak kullanılabileceği belirtilmektedir (Tsukada ve ark., 2022). Keçilerde meme bezi involüsyonunda RNA lar tespit edilmiş ve bu bulgularla involüsyon sürecinde lncRNA'ların düzenleyici rolü olduğu vurgulanmaktadır (Xuan ve ark., 2022). Son zamanlarda koyunlarda yapılan çalışmada, koyun 83 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV meme dokusunda miRNA’lar tespit edilmiştir. Bu miRNA’ların ekspresyonlarınında laktasyon dönemine göre farklı olduğu ifade edilmektedir (Wang ve ark., 2021). SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 90 Özbek, M., Hitit, M., Kaya, A., Jousan, F. D., & Memili, E. (2021). Sperm functional genome associated with bull fertility. Frontiers in Veterinary Science, 8, 610888. Özdemir, S. (2020). Identification and comparison of exosomal microRNAs in the milk and colostrum of two different cow breeds. Gene, 743, 144609. Pengov, A. (2001). The role of coagulase-negative Staphylococcus spp. and associated somatic cell counts in the ovine mammary gland. Journal of Dairy Science, 84(3), 572-574. Roy, J. P., Du Tremblay, D., DesCôteaux, L., Messier, S., Scholl, D., & Bouchard, É. (2009). Evaluation of the California Mastitis Test as a precalving treatment selection tool for Holstein heifers. Veterinary Microbiology, 134(1-2), 136-142. Sánchez, J. M., Gómez-Redondo, I., Browne, J. A., Planells, B., GutiérrezAdán, A., & Lonergan, P. (2021). MicroRNAs in amniotic fluid and maternal blood plasma associated with sex determination and early gonad differentiation in cattle. Biology of Reproduction, 105(2), 345358. Shahzad, K., Lopreiato, V., Liang, Y., Trevisi, E., Osorio, J. S., Xu, C., & Loor, J. J. (2019). Hepatic metabolomics and transcriptomics to study susceptibility to ketosis in response to prepartal nutritional management. Journal of Animal Science and Biotechnology, 10, 1-17. Silva, B. C., Aguilar, A. P., Dutra, L., Moon, K. M., Sébastien, A., Foster, L. J., ... & de Oliveira Barros Ribon, A. (2022). Proteomic Profiles of Staphylococcus aureus Strains Associated with Subclinical Bovine Mastitis. Current Microbiology, 79(4), 101. Smith, E. M., Willis, Z. N., Blakeley, M., Lovatt, F., Purdy, K. J., & Green, L. E. (2015). Bacterial species and their associations with acute and chronic mastitis in suckler ewes. Journal of Dairy Science, 98(10), 7025-7033. Smolenski, G. A., Wieliczko, R. J., Pryor, S. M., Broadhurst, M. K., Wheeler, T. T., & Haigh, B. J. (2011). The abundance of milk cathelicidin proteins during bovine mastitis. Veterinary Immunology and Immunopathology, 143(1-2), 125-130. Sordillo, L. M., & Streicher, K. L. (2002). Mammary gland immunity and mastitis susceptibility. Journal of mammary Gland Biology and Neoplasia, 7, 135-146. 91 | SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV Sordillo, L. M. (2018). Mammary gland immunobiology and resistance to mastitis. Veterinary Clinics: Food Animal Practice, 34(3), 507-523. Souza, F. N., Blagitz, M. G., Penna, C. F. A. M., Della Libera, A. M. M. P., Heinemann, M. B., & Cerqueira, M. M. O. P. (2012). Somatic cell count in small ruminants: Friend or foe?. Small Ruminant Research, 107(2-3), 65-75. Sun, J., Aswath, K., Schroeder, S. G., Lippolis, J. D., Reinhardt, T. A., & Sonstegard, T. S. (2015). MicroRNA expression profiles of bovine milk exosomes in response to Staphylococcus aureus infection. BMC Genomics, 16(1), 1-10. Thomas, F. C., Waterston, M., Hastie, P., Parkin, T., Haining, H., & Eckersall, P. D. (2015). The major acute phase proteins of bovine milk in a commercial dairy herd. BMC Veterinary Research, 11, 1-10. Turk, R., Piras, C., Kovačić, M., Samardžija, M., Ahmed, H., De Canio, M., ... & Roncada, P. (2012). Proteomics of inflammatory and oxidative stress response in cows with subclinical and clinical mastitis. Journal of Proteomics, 75(14), 4412-4428. Tsukada, F., Takashima, S., Wakihara, Y., Kamatari, Y. O., Shimizu, K., Okada, A., & Inoshima, Y. (2022). Characterization of miRNAs in milk small extracellular vesicles from enzootic bovine leukosis cattle. International Journal of Molecular Sciences, 23(18), 10782. Wang, X. P., Luoreng, Z. M., Zan, L. S., Raza, S. H. A., Li, F., Li, N., & Liu, S. (2016). Expression patterns of miR-146a and miR-146b in mastitis infected dairy cattle. Molecular and Cellular Probes, 30(5), 342-344. Wang, J., Hao, Z., Hu, J., Liu, X., Li, S., Wang, J., ... & Luo, Y. (2021). Small RNA deep sequencing reveals the expressions of microRNAs in ovine mammary gland development at peak-lactation and during the nonlactating period. Genomics, 113(1), 637-646. Wang, Y., Fang, J., Zeng, H. F., Zhong, J. F., Li, H. X., & Chen, K. L. (2022). Identification and bioinformatics analysis of differentially expressed milk exosomal microRNAs in milk exosomes of heat-stressed Holstein cows. Functional & Integrative Genomics, 1-11. Williamson, J., Callaway, T., Rollin, E., & Ryman, V. (2022). Association of milk somatic cell count with bacteriological cure of intramammary infection-a review. Agriculture, 12(9), 1437. Wu, Z., Sahin, O., Wang, F., & Zhang, Q. (2014). Proteomic identification of immunodominant membrane-related antigens in Campylobacter jejuni associated with sheep abortion. Journal of Proteomics, 99, 111-122. SAĞLIK BİLİMLERİ ALANINDA ULUSLARARASI AKADEMİK ÇALIŞMALAR VE TEORİK BİLGİLER-IV | 92 Valdés, A., Holst, B. S., Lindersson, S., & Ramström, M. (2019). Development of MS-based methods for identification and quantification of proteins altered during early pregnancy in dogs. Journal of Proteomics, 192, 223-232. Van den Crommenacker-Konings, L. W., van Dam, P., Everts, R., Shittu, A., Nielen, M., Lam, T. J., & Koop, G. (2021). Dynamics of intramammary infections in suckler ewes during early lactation. Journal of Dairy Science, 104(5), 5979-5987. Viguier, C., Arora, S., Gilmartin, N., Welbeck, K., & O’Kennedy, R. (2009). Mastitis detection: current trends and future perspectives. Trends in Biotechnology, 27(8), 486-493. Yağcı, P. (2008). Koyunlarda subklinik mastitis: Etiyoloji, epidemiyoloji ve tanı yöntemleri. Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, 14(1). Xuan, R., Zhao, X., Li, Q., Zhao, Y., Wang, Y., Du, S., ... & Wang, J. (2022). Characterization of long noncoding RNA in nonlactating goat mammary glands reveals their regulatory role in mammary cell involution and remodeling. International Journal of Biological Macromolecules, 222, 2158-2175. Zhou, Q., Li, M., Wang, X., Li, Q., Wang, T., Zhu, Q., ... & Li, X. (2012). Immune-related microRNAs are abundant in breast milk exosomes. International Journal of Biological Sciences, 8(1), 118.