Efecto de la irradiación y el flujo de nutrientes sobre el contenido en polisacáridos ácidos en macroalgas cultivadas

MASTER OFICIAL EN CULTIVOS MARINOS III MASTER INTERNACIONAL EN ACUICULTURA Las Palmas de G an Cana ias, España 2012-2014 EFECTO DE LA IRRADIACIÓN Y EL FLUJO DE NUTRIENTES SOBRE EL CONTENIDO EN POLISACÁRIDOS ÁCIDOS EN MACROALGAS CULTIVADAS YOLANDA GARCÍA FERNÁNDEZ TESIS PRESENTADA Y PUBLICAMENTE DEFENDIDA PARA LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE MASTER OFICIAL EN CULTIVOS MARINOS Las Palmas de G an Cana ia 23 de junio de 2014 MASTER OFICIAL EN CULTIVOS MARINOS III MASTER INTERNACIONAL EN ACUICULTURA O ganizado conjun amen e po la Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia (ULPGC), el Ins i u o Cana io de Ciencias Ma inas (Gobie no de Cana ias) y el Cen o In e nacional de Al os Es udios Ag onómicos Medi e áneos (CIHEAM), a a és del Ins i u o Ag onómico Medi e áneo de Za agoza (IAMZ) EFECTO DE LA IRRADIACIÓN Y EL FLUJO DE NUTRIENTES SOBRE EL CONTENIDO EN POLISACÁRIDOS ÁCIDOS EN MACROALGAS CULTIVADAS YOLANDA GARCÍA FERNÁNDEZ T abajo ealizado en el BEA, Banco Español de Algas; ULPGC Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia, Islas Cana ias, España, bajo la di ección del D . Juan Luís Gómez Pinche i. P esen ado como equisi o pa cial pa a la ob ención del Tí ulo o icial de Más e Uni e si a io en Cul i os Ma inos o o gado po la Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia y del Diploma de Mas e o Science en Acuicul u a o o gado po el Cen o In e nacional de Al os Es udios Ag onómicos Medi e áneos (CIHEAM). Di ec o Au o Fdo: Fdo: Ag adecimien os i Ag adecimien os Mis más since o ag adecimien o a odas las pe sonas que a lo la go de es e iempo me han es ado apoyado con mis sueños. A mi di ec o Juan Luis Gómez Pinche i po odo el apoyo y conocimien o que me lle a ansmi iendo du an e es e iempo, ambién po su paciencia y po las ho as de sueño que le es oy qui ando sob e odo en los úl imos meses, g acias po con ia en mí. Al BEA po o ece me sus ins alaciones y a odo su pe sonal, que al inal esul ó se mi segunda amilia, g acias a odos pe o en pa icula a Ne e, Vi gy, Mone, Edu, Loli, Ca ol, Mi eia, Lei e, Elena, An e a, g acias chicas po odo ues o apoyo en los buenos, pe o sob e odo en los malos momen os. A mis compañe os de más e y qué más e !!! Aunque odos han sido impo an es, algunos han sido compañe os y o os pasan a se amigos, Nay a, Wa a y Najlae po odas esas cha las esol iendo nues os p oblemas, incluso de mad ugada, Vini, Giampie o po se mis niños, An onio po ayuda me con los p og amas, segui é siendo ubia pa a que me los uel as a explica con an a paciencia y ca iño. Blanqui mi panchiña, g acias po se como e es. Yani, Sami a, me encan ó conoce las y abaja con us edes, son muy especiales pa a mí. Jesús, mi compañe o bajo el in e nade o, “cuán a caló” hemos pasado, pe o a pesa de odo, lo pasamos bien. Al es o Zeho , Se ha , Daniel, Luis, Houda, Giulia, Ana, Robe , Juani e I án, g acias po habe sido pa e impo an e del más e . Son an os los amigos que ue a de es e mundo de la ciencia me han es ado apoyando a pesa de odo, la gen e de As u ias, Sil ia, E a, Mónica, Pa i y la gen e de aquí, sob e odo Isa, amiga, e es la mejo , g acias po es a ahí siemp e. A los que sí es án en es e mundo po muchos mé i os ambién muchísimas g acias, Sé o a, cuán as ho as al elé ono explicándome cosas pa a o ien a me. Ag adecimien os ii Fe , g acias a i la isión cien í ica de las cosas iene o o colo . A mis compañe as de la acul ad, Ru h, Noe, Idai a, Sil ia, Yai, Le i, Ico que a pesa de odo seguimos unidas po las edes sociales y se in e esan po odo lo que hago, la quie o un mon ón. Y pa a inaliza a mi amilia, a la que quie o y ado o y a pesa de es a lejos, no dejo de pensa en ellos ni un minu o. G acias mamá po da me la ida y po se la mejo mad e he podido ene , u apoyo ha sido muy impo an e y decisi o en mi ida, me inculcas e buenos alo es y e es la que me das ue za pa a segui hacia delan e, e quie o mamá. A mi he mana que siemp e me ha animado a segui con mis ilusiones aunque no en endiese po qué quie o segui es udiando du an e an os años, e quie o Chunchi. A mi cuñado po se pa e ya de la amilia, g acias ambién po es a ahí. A mi pad e, al que quie o an o y ya no es á con noso as, sé que e sen ías o gulloso de mí y allá donde es és segui ás apoyándome. Te echo mucho de menos, e quie o papá. Índices iii Con enido AGRADECIMIENTOS ....................................................................................................... I ÍNDICE DE FIGURAS ...................................................................................................... V ÍNDICE DE TABLAS ...................................................................................................... VII RESUMEN ....................................................................................................................... IX ABSTRACT ..................................................................................................................... XI LISTAS DE ABREVIATURAS ...................................................................................... XIII 1. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 1 1.1. CULTIVOS MULTITRÓFICOS INTEGRADOS (AMTI) ................................................. 5 1.2. SISTEMAS DE CULTIVO ....................................................................................... 8 1.3. UTILIDADES DE LAS ALGAS ................................................................................. 9 1.3.1. Indus ia de los icocoloides ..................................................................... 10 1.3.2. O os polisacá idos con ac i idad biológica ............................................. 14 1.4. OTROS USOS .................................................................................................. 20 1.4.1. Alimen ación, nu acéu ica y cosmé ica ................................................... 20 1.4.2. Ag opecua ia ............................................................................................ 20 1.4.3. Acuicul u a ................................................................................................ 21 1.4.4. Biocombus ibles ....................................................................................... 21 2. OBJETIVOS .......................................................................................................... 24 3. MATERIAL Y MÉTODOS ..................................................................................... 25 3.1. ESPECIES SELECCIONADAS, DISEÑO EXPERIMENTAL Y CONDICIONES DE CULTIVO 25 3.2. DISEÑO EXPERIMENTAL Y CONDICIONES DE CULTIVO ......................................... 29 3.3. CÁLCULO DE LA PRODUCCIÓN DE LAS DISTINTAS ESPECIES ................................ 32 3.4. BIOFILTRACIÓN DE AGUAS RESIDUALES: AMONIO .............................................. 33 3.5. DETERMINACIÓN DEL RENDIMIENTO CUÁNTICO ÓPTIMO (FV/FM) DEL PSII COMO INDICADOR DE ESTRÉS (MEDIDAS DE FLUORESCENCIA DE CLOROFILA) ................ 34 Índices i 3.6. CARACTERIZACIÓN DE LA BIOMASA ................................................................... 35 3.7. DETERMINACIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS ............................................ 35 3.8. ANÁLISIS DE CONTENIDO DE CARBONO Y NITRÓGENO (C/N) ............................... 36 3.9. EXTRACCIÓN DE POLISACÁRIDOS ÁCIDOS ......................................................... 36 4. RESULTADOS ...................................................................................................... 38 4.1. PRODUCCIÓN DE LAS ESPECIES ENSAYADAS ..................................................... 38 4.2. CAPACIDAD DE BIOFILTRACIÓN ......................................................................... 42 4.3. RENDIMIENTO CUÁNTICO ÓPTIMO DEL FOTOSISTEMA II (FV/FM) ......................... 45 4.4. EVOLUCIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS ................ 46 4.5. ANÁLISIS DE LAS RELACIONES C:N ................................................................... 53 4.6. CONTENIDO EN POLISACÁRIDOS ....................................................................... 56 5. DISCUSIÓN ........................................................................................................... 61 6. CONCLUSIONES .................................................................................................. 69 7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................... 71 Índices Índice de igu as Figu a 1. U ilización y suminis o mundial de pescado. FAO, 2011. ................................................. 1 Figu a 2. Impac os p oducidos po la acuicul u a sob e el medio acuá ico, modi icado a pa i de “The ishp in o Aquacul u e. Can he blue e olu io n be siu anable?. K Wolowicz, 2005. ...... 2 Figu a 3. Países que in ie en en abajos de in es igación en acuicul u a con algas, en ama illo, países p oduc o es de biomasa, en na anja, y países que egis an pa en es. Maza asa e al., 2013 ..................................................................................................................................... 3 Figu a 5. P oducción de mac oalgas po especies. FAO, 2012. ...................................................... 4 Figu a 4. P oducción de mac oalgas po países. FAO, 2012. ........................................................... 4 Figu a 6. Sis ema de cul i o mul i ó ico (AMTI), o mado po peces, c us áceos, equinode mos, moluscos y algas en el medio ma ino. ...................................................................................... 6 Figu a 7. Usos indus iales de las algas. ......................................................................................... 10 Figu a 8. Hyd opun ia co nea, izquie da en na u aleza, de echa en cul i o.................................... 26 Figu a 9. Hypnea spinella, izquie da en na u aleza, de echa en cul i o ......................................... 27 Figu a 10. Jania adhae ens, izquie da en na u aleza, de echa en cul i o. ..................................... 28 Figu a 11. Halopi hys incu a, izquie da en na u aleza, de echa en cul i o.................................... 28 Figu a 12. BEA, Banco Español de Algas, si uado en el muelle de Talia e s/n, Telde, donde u o anscu so el expe imen o. ...................................................................................................... 29 Figu a 13. Ci cui o del sis ema de bombeo a escala pilo o. ............................................................ 30 Figu a 14. Esquema de dis ibución de los anques ........................................................................ 30 Figu a 15. Disposición de los anques a escala pilo o, A bajo in e nade o (80% PAR +10%UVA) y B en el ex e io (100% PAR). .................................................................................................. 31 Figu a 16. Toma de mues as de agua en la en ada del anque (izquie da) y a la salida del anque (de echa) pa a el análisis de bio il ación. ............................................................................... 33 Figu a 17. P ecipi ación de los polisacá idos ácidos (izquie da), polisacá ido pu i icado (de echa) y polisacá ido pu i icado lio ilizado y en asado (abajo). ............................................................ 37 Figu a 18. Radiación PAR acumulada semanal in e io y ex e io y empe a u a media en el in e io y ex e io semanal du an e el cul i o de Hypnea spinella. ...................................................... 40 Figu a 19. Rendimien o cuán ico óp imo del PSII po especies, a lo la go del expe imen o, 4 semanas con apo e de nu ien es y 2 semana con agua de ma (SW). Da os exp esados como medias ± SE. ................................................................................................................. 45 Figu a 20. . Hyd opun ia co nea con dis in a mo ología, amas co as y inas a modo de pequeños pompones. Colo ama illo sin apo e de nu ien es (izquie da) y con apo e de nu ien es, colo ojo (de echa). O a mo ología es la de amaño pelo a de enis, amas más g uesas y ala gadas. ................................................................................................................................ 51 Figu a 21. Dis in os cambios mo ológicos, an o en colo como en o ma. A Halopi hys incu a, con apo e de nu ien es B Jania adhae ens con apo e de nu ien es y C Hypnea spinella, con apo e de amonio, colo ojizo y sin apo e de nu ien es, colo ama illo. ........................ 51 Índices i Figu a 22. Relaciones C:N po anque y semana de cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. .......................................................................................................................................... 54 Figu a 23. Relaciones en e el con enido en polisacá idos con la elación C:N en unción de la i adiancia po anque. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. ...................................... 59 Índices ii Índice de ablas Tabla I. Países p oduc o es de mac oalgas y olumen de p oducción en millones de oneladas. FAO, 2012. ................................................................................................................................ 3 Tabla II. Solubilidad de los ca agena os. ........................................................................................ 13 Tabla III. Códigos asignados a los algina os en la indus ia. ........................................................... 14 Tabla IV. Re isión de las aplicaciones de los polisacá idos de dis in as especies de algas en la li e a u a ecien e (2003-2014). ............................................................................................... 17 Tabla V. Valo es de i adiación y empe a u a du an e el expe imen o. Da os exp esados como medias ± SE, n=16. ................................................................................................................. 39 Tabla VI. P oducción media po especies y semanas de cul i o en condiciones expe imen ales a escala pilo o ex e io e in e io (bajo in e nade o). (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. ................................................................................................................... 41 Tabla VII. Flujos medios ± SE du an e los cul i os expe imen ales an o en in e io como en ex e io . Da os exp esados como medias ± SE, n=3. ............................................................. 42 Tabla VIII. Valo es de NUE (%) y NUR (mmol m-2h-1) asa de eliminación po especie y semana de cul i o, en condiciones expe imen ales a escala pilo o ex e io e in e io (bajo in e nade o). (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co- cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. ............................................................... 44 Tabla IX. Concen aciones de icobilip o eínas (Ficoe i ina y Ficocianina) (mg g-1 PS) po especie y semana de cul i o, en condiciones expe imen ales a escala pilo o in e io (bajo in e nade o) y ex e io . (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. ............................... 49 Tabla X. Concen aciones de clo o ila a (mg g-1 PS) po especie y semana de cul i o, en condiciones expe imen ales a escala pilo o in e io (bajo in e nade o) y ex e io . (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. ........................................................................... 52 In oducción 1 1. In oducción Debido al g an in e és po las ma e ias p imas, el medio ma ino se ha is o some ido a una g an sob eexplo ación, la acuicul u a ha colabo ado con la gene ación del 39% de los alimen os de o igen acuícola, de ellos el 46.2% son algas (FAO, 2009), que al habe se desa ollado las bases cien í icas del cul i o de algas a ni el mundial (San élices and Do y, 1989), man ienen un i mo de c ecimien o sos enible. O os o ganismos ma inos cul i ados en acuicul u a son los bi al os con un 42.9%, peces diád omos 5.3%, peces ma inos 3.7% y c us áceos 1.8%. (FAO, 2011). El c ecimien o de la p oducción en acuicul u a se ha debido al p og eso en la dis ibución, aumen ando el suminis o mundial de alimen o cuan iosamen e en las úl imas 5 décadas, con una asa media del 3.2 % desde 1961-2009, supe ando así el índice de c ecimien o de la población mundial del 1.7 % anual ( ig. 1). La p oducción acuícola mundial ha seguido c eciendo, aunque a un i mo más len o que en las décadas de 1980 y 1990. En 2010 se alcanzó o o máximo his ó ico en p oducción acuícola mundial llegando a los 60 millones de oneladas, excluyendo las plan as acuá icas y los p oduc os no alimen a ios, pe o si se Figu a 1. U ilización y suminis o mundial de pescado. FAO, 2011. In oducción 2 incluyesen las ci as aumen a ían has a 79 millones de oneladas (FAO, 2011). El aumen o en las p oducciones pone de mani ies o o o ipo de p oblemas que hay que sol en a pa a que la acuicul u a pueda se sos enible en el iempo. Es os p oblemas son básicamen e debidos a la ges ión en el abas ecimien o y calidad de los piensos que se dan a los animales, los elacionados con en e medades y ambién con p oblemas de impac os ecológicos de i ados de los escapes, ubicación de las g anjas, e c ( ig. 2). (Buschmann e al., 2008a; Dua e e al., 2009; T oell e al., 2009; Chá ez-C ooke y Ob eque- Con e as, 2010). El inc emen o de los ecu sos biológicos ep esen a un cambio, en el que el se humano consigue bene icios del océano (Dua e e al., 2009). Siendo una opo unidad de desa ollo pa a el país, ya que hay una di e si icación en los p oduc os, apos ando po nue os me cados eme gen es. El e ec o combinado de una ápida domes icación y p oducción, po ejemplo con las algas, hace que inc emen e la demanda, a la ez que se p omue e la inno ación en la in es igación bio ecnológica desa ollando pa en es, pe o con inúa habiendo g andes di e encias en e países p oduc o es y los países que in ie en en Figu a 2. Impac os p oducidos po la acuicul u a sob e el medio acuá ico, modi icado a pa i de “The ishp in o Aquacul u e. Can he blue e olu ion be siu anable?. K Wolowicz, 2005. In oducción 3 in es igación y c ean pa en es (Maza asa e al., 2013) ( ig. 3). No obs an e, exis e una eno me di e encia en e la acuicul u a animal y el cul i o de algas, no an o en p oducción, debido a que es equipa able a las asas de las de los animales acuá icos, con un inc emen o de 3.8 millones de oneladas a 19 millones de oneladas desde los años 1990 a 2010, además sólo un 4.5 % de la p oducción pe enece a las ecolec adas en la na u aleza, si no en el núme o de países que se dedican al cul i o de algas (FAO, 2012). Sólo 31 países p oduje on algas en 2010 y el 99.6 % de la p oducción p o ienen de 8 países ( abla I), ( ig. 4). Figu a 3. Países que in ie en en abajos de in es igación en acuicul u a con algas, en ama illo, países p oduc o es de biomasa, en na anja, y países que egis an pa en es. Maza asa e al., 2013. Tabla I. Países p oduc o es de mac oalgas y olumen de p oducción en millones de oneladas. FAO, 2012. In oducción 4 El 98.9 % de la p oducción mundial en 2010 pe enece a un única especie de alga, Saccha ina/Lamina ia japónica, cul i adas en las aguas cos e as de China, le sigue en p oducción Eucheuma (Kappaphycus al a ezii y Eucheuma spp), G acila ia spp, Po phy a spp, Unda ia pinna i ida después hay especies no iden i icadas, p incipalmen e en China. En meno can idad ambién son cul i adas o as mac oalgas como Sa gassum usi o me y Caule pa spp, las mic oalgas ambién se ienen en cuen a, p incipalmen e se cul i an Spi ulina spp y en meno p opo ción Haema occocus plu ialis ( ig. 5) (FAO, 2012). Figu a 5. P oducción de mac oalgas po países. FAO, 2012. Figu a 4. P oducción de mac oalgas po especies. FAO, 2012. In oducción 5 1.1. Cul i os mul i ó icos in eg ados (AMTI) Como se ha comen ado an e io men e uno de los p incipales incon enien es pa a log a la sos enibilidad medioambien al de la indus ia acuícola, es el pode ecicla odos los desechos que se gene an, como es la libe ación de nu ien es al medio, que básicamen e p o ienen en o ma pa iculada como es os de pienso no consumido y las exc eciones de los o ganismos cul i ados y en o ma disuel a sob e odo en o ma de N-amonio (N- NH4+) y P- os a os (P-PO3 2-), (Neo i e al., 2000; Schuenho e al., 2003), además hay que ene en cuen a la p oducción del CO2 gene ado en los p ocesos espi a o ios, odos es os p ocesos son los que ocasionan un g an impac o en el medio sob e odo en las zonas más ce canas a las cos as dónde se encuen an las g anjas acuícolas (Acke o s y Enell, 1990; To a e al., 2000). Es os p ocesos conlle an una eu o ización del medio po el excesi o con enido en nu ien es (Chopin e al., 2001; T oell e al., 2003; Neo i e al., 2004). Si bien se conocen y se acep an es os impac os, se asume que debe án se minimizados al máximo, donde los esiduos sean econ e idos en biomasa ap o echando las sus ancias bioac i as asociadas, e i ando e idos y diluciones en el medio (Gómez Pinche i e al., 2011), además de emplea p ocedimien os de cul i o adecuados que incluyan unas ga an ías en la egulación, con ol y moni o eo de las aguas. Sin emba go, oda ía hay que ap ende de la es a egia y el ma co no ma i o pa a esa egulación, con ol y moni o eo de los impac os ambien ales de la acuicul u a ma ina en la Unión Eu opea (Read y Fe nandes, 2003). Hay asociaciones in oluc adas en el sec o acuícola que c een que la aplicación de mejo as en p ác icas de manejo, pudiendo se una mane a más azonable y al alcance de odos pa a educi el olumen de los e luen es y mejo a la calidad del medio ambien e (Boyd, 2003). La bio il ación de esos e luen es puede se ealizada po las mac oalgas, eniendo en cuen a dos concep os básicos, la e iciencia de asimilación (UE), que es la educción en po cen aje en la concen ación de nu ien es y la asa de asimilación (UR), es la concen ación de nu ien es que es asimilada/eliminada po unidad de iempo y en elación a la supe icie/ olumen del sis ema de cul i o (T oell e al., 2003). La bio il ación puede e se a ec ada po pa áme os ambien ales, ísicos o biológicos y en In oducción 6 Figu a 6. Sis ema de cul i o mul i ó ico (AMTI), o mado po peces, c us áceos, equinode mos, moluscos y algas en el medio ma ino. unción de ello se pueden plan ea a ios obje i os, una e iciencia de bio il ación al a donde las asas de asimilación, la p oducción de biomasa y la concen ación de nu ien es en el e luen e sean bajas, o po el con a io haya una e iciencia de la bio il ación baja dónde la asa de asimilación, la p oducción de biomasa y la concen ación de nu ien es en el e luen e sean al as (Buschmann el al., 2001). Bajo odos es os p ecep os, se es imula la acuicul u a mul i ó ica in eg ada (AMTI), no desechando nada, es o es, que el esiduo que gene a un eslabón de la cadena ó ica, puede se eu ilizado po o o como base de su alimen ación (Chopin e al., 2008; Neo i, 2008; T oell e al., 2009). Se in es iga el uso de algas en la depu ación de e luen es de pisci ac o ías ca gados de compues os de ni ógeno, ós o o y ca bono que al se consumidos po las algas educen la eu o ización de aguas cos e as, ap o echando la biomasa gene ada con o os obje i os (Figue oa e al., 2011). La biomasa gene ada en es os sis emas su e es és debidos al exceso o de ec o de nu ien es, condiciones ad e sas de i adiación, e c, es e es és puede se medido in i o median e la de e minación de la capacidad o osin é ica, midiendo la luo escencia de la clo o ila asociada al o osis ema II (PSII), ca ac e izando así es os cul i os (Figue oa e al., 2006, Ma a e al., 2006). Los sis emas de cul i o mul i ó icos es án diseñados pa a que haya una a monía en e el lujo de ma e ia y ene gía en e los dis in os eslabones de la cadena, siendo lo más e ec i o posible. Así, en el mismo espacio se encuen an dis in os o ganismos con unciones muy di e en es, como peces, c us áceos, equinode mos, moluscos ( ig. 6). In oducción 7 El in del cul i o conjun o, como hemos comen ado, es ap o echa los desechos de unos y con e i los en nu ien es pa a o os, a la ez que se eliminan los p oduc os que eu o izan el medio y se aumen a la p oduc i idad del sis ema (Shpigel e al., 1993; Neo i e al., 1998, 2000, 2004; Chow e al., 2001; Jones e al., 2002; T oell e al., 2003). Si además incluimos mac oalgas, es a emos di e si icando aún más las especies (Bun ing y Shpigel, 2009), al mismo iempo las mac oalgas ap o echan no sólo el exceso de nu ien es sino que al ealiza los p ocesos o osin é icos eliminan el CO2 y lo con ie en en O2, mejo ando el medio al apo a le oxígeno y ele a el pH. Las algas al ealizan a ios p ocesos me abólicos, du an e el día, consumen el amonio ans o mándolo en p o eínas. Con ie en al sis ema una pequeña p o ección ya que ienen p opiedades an i úngicas, an ioxidan es y an ibac e ianas con a los a aque de hongos y bac e ias (P abha e al., 2013). Exis en dis in os es udios que indican cuales son las mejo es especies de algas pa a se cul i adas en los sis emas AMTI, así pues especies de los géne os como Ul a, Codium, G acila iopsis, G acila ia, Palma ia, Hypnea, Chond us, Kappaphycus, Po phy a, Falkenbe gia y Lamina ia dan buenos esul ados como bio il o (Neo i e al., 2004; Msuya y Neo i, 2008), y como especies plás icas que se acomodan a las dis in as condiciones del cul i o. En o os abajos se selecciona on algas ojas (Rhodophy a), e des (Chlo ophy a) y pa das (Phaeophy a) y se obse ó la al a capacidad de bio il ación que poseen (Kang e al., 2013). O a endencia es la de inco po a co-cul i os de dos especies de mac oalgas en el mismo anque (Güenaga, 2011), y e si la combinación aumen a los po enciales que cada especie iene po sepa ado. En los sis emas AMTI, las mac oalgas ac úan como bio il o (Po e e al., 1987; Neo i e al., 1996; Msuya e al., 2006; Cahill e al., 2010), se puede da uso a la p oducción ob enida, ya sea como alimen o pa a especies más ap eciadas en el me cado (Schuenho e al., 2003; Vie a e al., 2005; T oell e al., 2009), como pa a la ex acción de sus ancias bioac i as de in e és. Las mac oalgas se pueden u iliza como sis emas de bio emediación ya In oducción 8 que pueden abso be iones de me ales pesados, como zinc y cadmio, del agua con aminada (Cuizano y Na a o, 2008). Algunas de las en ajas que o ece la i o emediación son el bajo cos o y la apidez con que pueden lle a se a cabo cie os p ocesos deg ada i os (Ca on-Kawagoshi e al., 2014). 1.2. Sis emas de cul i o Al ededo de 221 especies de algas son u ilizadas (Dua e e al., 2007), 145 especies es án des inadas a la alimen ación y 101 pa a la p oducción de icocoloides (Zemke-Whi e y Ohno, 1999), las más u ilizadas han sido Lamina ia sp., Mac ocys is, Ascophyllum, Gelidium y P e ocladia, en e o as. Así pues, cada ez se hace más pa en e el a ance en los modelos de cul i o de algas, no sólo pa a la p ese ación de las especies en la na u aleza que son explo adas, si no pa a mejo a la calidad de la biomasa p oducida en dichos sis emas, haciendo al mismo iempo la p oducción sos enible. El cul i o de mac oalgas es muy e sá il, ya que pueden se cul i adas de mane a semi-in ensi a en es anques o lagunas sin con ol e ec i o, ambién se puede in ensi ica el cul i o, cul i ando en aceways y en anques. En los sis emas in ensi os se puede juga con el diseño, ma e iales de cons ucción, supe icies, olúmenes, ai eación y mecanización pa a ob ene un mejo endimien o del cul i o además de ene un al o con ol sob e la biomasa demos ando que son sis emas más p oduc i os que los semi-in ensi os (F iedlande y Le y, 1995). Es undamen al un buen diseño del sis ema de cul i o, pa a p ocu a que el es ado isiológico de las mac oalgas sea el idóneo, ya que de lo con a io, epe cu i á en la p oduc i idad y e iciencia del sis ema, pa a e i a es os p oblemas hay que ene en cuen a a ios pa áme os que esul an impo an es pa a que las mac oalgas es én isiológicamen e bien y puedan desa olla su unción p ima ia, que es la o osín esis. Hay que ene en cuen a, la i adiación y empe a u a, el apo e de nu ien es y bombeo del agua, ai eación, apo e de ca bono ino gánico, pH, compe encia en e especies, p edado es, densidad de cul i o, ya que no odas las In oducción 9 algas son suscep ibles de se cul i adas debido a su ecología y biología, así pues cuan o más con olado sea el sis ema, los endimien os se án mayo es y la biomasa ob enida end á una mejo calidad (F iedlande y Le y, 1995). Se puede combina el diseño de los sis emas ambién en a o de soluciona p oblemas de i ados de la eu o ización del medio, es deci , ap o echando las capacidades de bio il ación, incluso inc emen a la, dis ibuyendo los anques en cascada con dis in as concen aciones de nu ien es y lujo de nu ien es (Gómez Pinche i e al., 2011) o como mencionamos an es co-cul i os de a ias especies, en el mismo anque, ap o echando los po enciales de dis in as especies al mismo iempo (Güenaga, 2011). Di e si icando, an o el sis ema de cul i o como las especies en sí, podemos compa a los bene icios de un monocul i o en e a co-cul i os, de igual modo que los cul i os mul i ó icos in eg ados (AMTI) y los cul i os en cascada, obse ándose g andes di e encias y bene icios de es os úl imos (Ab eu e al., 2009; Nob e, e al., 2010, Gómez Pinche i e al.,2011; Güenaga, 2011). A pesa de se sis emas de cul i o muy e icien es en cuan o a bio il ación, p oducción y ob ención de me aboli os de in e és a escala de plan a pilo o (Buschmann e al., 2001; T oell e al., 2003; Neo i e al., 2004), si lo ex apolamos a escala indus ial, su gen una se ie de limi aciones que hay que esol e , sob e odo elacionados con las demandas supe iciales en los sis emas de cul i o de mac oalgas, que al con a io que los peces que son cul i ados en unción del olumen, las mac oalgas dependen de supe icie aé ea debido a que necesi an la adiación sola pa a ealiza la o osín esis. Es os p oblemas se pod ían soluciona si se plan ease aumen a el núme o de nue as especies con al a capacidad de bio il ación, los co-cul i os de a ias especies con in e eses aplicados o incluso la dis ibución de los bio il os, po ejemplo en cascada, haciendo más in e esan es, e icaces y sos enibles los sis emas mul i ó icos in eg ados (AMTI) con mac oalgas. 1.3. U ilidades de las algas Las algas es án a aigadas en la cul u a desde iempos ances ales, In oducción 10 habiéndoles dado dis in os usos, como alimen o suplemen a io po su al o con enido de sales mine ales (Yodo, Po asio, e c.) o po el hecho de posee sus ancias iscosas o coloidales dando una consis encia gela inosa a los alimen os, u ilidades que en la ac ualidad se siguen man eniendo de o ma adicional en pequeñas aldeas o pueblos, en cambio o as han e olucionado sacándoles pa ido a g an escala de mane a indus ial, po o o lado g acias a la in es igación se han descubie o nue os usos. En e las u ilidades que se les da a las algas se encuen an, la indus ia alimen a ia, ag opecua ia, nu acéu ica, química, cosmé ica, bio uel, médica- a macológica, indus ia de los icocoloides, bio emediación, acuicul u a (Chan e al., 2006) ( ig. 7). 1.3.1. Indus ia de los icocoloides El p incipal ex ac o come cial de las algas son los denominados hid ocoloides o icocoloides que son polisacá idos de cadena la ga y se encuen an en las pa edes celula es de algunas especies de mac oalgas. Cuando son ex aídos, o man disoluciones no c is alinas con el agua dando una solución iscosa, p opiedad muy u ilizada en la indus ia alimen a ia. Los icocoloides de impo ancia come cial ob enidos a pa i de las algas son el aga -aga , los Figu a 7. Usos indus iales de las algas. In oducción 17 Tabla IV. Re isión de las aplicaciones de los polisacá idos de dis in as especies de algas en la li e a u a ecien e (2003-2014). Especie G acila ia cauda a - Swiss mice Hypnea spinella y Halopi hys incu a Sphae ococcus co onopi olius y Boe geseniella huyoides Giganinaceae y Tichoca paceae G acila ia cauda a Po phy idium sp., P. c uen um, P. ae ugineum, and Dixoniella g isea Bo yocladia occiden alis Giganina acicula is, G. pisilla a, Eucheuma co onií, E. spinosa, F. esiculosus Schizymenia dubyi Hyd opun ia co nea· Solea senegalensis G a eloupia indica Ac i idad Rhodophy a Ac i idad an iin lama o ia y an iconcep i a en a ones P opiedades inmunoes imulado es , pa a e los e ec os en la sín esis de ci oquinas Inhibido es in i o de la eplicación del VIH , además del He pes simplex ipo 1 (HSV·1) Ac i idad an ioxidan e es imulando la ac i idad ca alí ica de la supe óxido dismu asa. P o ec o in es inal en e a daños inducidos en a as Múl iples aplicsciones , bio ecología , bioingenie ía , bioquímica , isiología , e c Ac i idad an ioxidan e en pos la as de Li openaeus annamei Ac i idad an ioxidan e compa ando algas pa das y ojas An icoagulan e , siendo e ec icos , segu os y más áciles de u iliza . Es imulación de los agoci os en el p oceso espi a o io en Solea senegalensis Ac i idad an i i al en e al i us HSV·1 y HSV·2 Re e encia Cha es e al , 2013 Abdala Díaz e al ., 2011 Bouhlal e al ., 2011 Sokolo a e al ., 2011 Sil a e al , 2011 A ad y Le y-On man , 2010 Ca alcan e e al , 2007 Rocha de Souza e al. , 2007 Ekanayake e al ., 2007 Díaz-Rosales e al ., 2007 Cha lopadhyay e al ., 2007 In oducción 18 G acila ia enuis ipi a a - Li openaeus annamei Po phy a hai anensis - mice Gymnogong us g i nhsiae, C yp onemia c enula a - i us ype 1 (HSV-1), 2 (HSV-2) Po phy a hai anesis - a s Ecklonia ca a Sa gassum naozhouense Sa gassum ulga e lona la sp., Chnoospo a sp. Sa gassum sp ., Spa oglossum sp. y Sa gassum sp. Ecklonia ca a - células cance ígenas humanas Lamina ia japónica Mac ocys is Py i e , Chond us c ispus - Epinephelus coicoides Inmunoes imulación en e a pa áme os como con ajel de hemoci os, la ac i idad enoloxidasa, p oceso espi a o io, la supe óxido dismu asa ,la ac i idad agocí ica y e iciencia en e al pa ógeno Vib io alginoly icusen Lilopenaeus annamei Ac i idad an ioxidan e in i o de la pe oxidación lipídica en a ones. P opiedades an i i ales en e al i us He pes simplex Ac i idad an ioxidan e en adicales hid oxilo lib es, inhibido es de la lipasa oxidasa en el hígado de a ones Phaeophy a Ac i idad an iin lama o ia en líneas celula es de mac ó agos mu inos Composición química pa a la indus ia alimen a ia y ac i idad an i i al pa a usos en medicina Ac i idad an icoagulan e, an i ómbica, an ioxidan e y an iin lama o ia en a as. Usos indus iales Ac i idad an icoagulan ean ip oli e a i a en el ca cinomade colon Ac i idad an ioxidan e en es udios en sis emas in il o, eliminando adicales supe óxido e hid oxilo, capacidad quelan e, y pode educ o Ac i idad inmunoes imulado a en e al Vib io alginolylicus Hou y Chen, 2005 Zhang el al ., 2004 Tala ico el al ., 2004 Zhang el al ., 2003 Wijesinghe el al., 2013 Peng el al ., 2013 Gue a Do e, el al., 2013 And iamanan oanina y Rinaudo,2010 A huko ala el al., 2009 Wang el al ., 2008 Chen el al ., 2007 In oducción 19 Lamina ia japonica Ac i idad an ioxidan e y hepa op o ec i a en polisacá idos de bajo Zhao el al. , 2004 peso molecula Chlo ophy a En e omo pha linza - plasma Ac i idad de sul a ación , an icoagulan e y an ioxidan e Wangel al. , 2013 de pollo Ul a sp. Aplicaciones biológicas Al es el al ., 2010 Ul a igida- Tu bo E alua la capacidad es imulado a de los agoci os del odaballo Cas o el al. , 2006 Ul a congloba a Ac i idad an icoagulan e en plasma humano Mao el al ., 2006 Ul a pe lusa Ac i idad an ioxidan e en unción de los dis in os pesos molecula es Qi el al ., 2005 de los polisacá idos sul a ados Di e en es especies Di e en es especies Reduci la hipe ensión , p eclampsia EI-Said y EI-Sikaily , 2013 Di e en es especies Inmunoes imulan es y p ebió icos en acuicul u a. Peso- Echa i el al. , 2013 Di e en es especies Ac i idad an ioxidan e , inmunoes imulación , indus ia nu acéu ica F ei as el al ., 2012 Di e en es especies Aplicaciones di e sas , cosmé ica , a macológica , alimen a ia , S engel el al ., 2011 an icoagulan e , an iin lama o ia , an i i al , an ioxidan e , e c Di e en es especies Ac i idad an ioxidan e , inmunoes imulado , an iin lama o ias , e c B own , el al ., 2014 In oducción 20 1.4. O os usos 1.4.1. Alimen ación, nu acéu ica y cosmé ica La mac oalgas son ap eciadas debido a sus al os con enidos en p o eínas y ib a con ibuyendo y p omo iendo la salud humana (Fe ei a e al., 2011), p e ienen el desa ollo de la hipe ensión y a e ioscle osis y mejo an el me abolismo de g asas, ya que son uen e de los llama dos “PUFA”, ácidos g asos poliinsa u ados (Nagao y Yanagi a, 2005). Algunas especies pueden educi los ni eles de coles e ol en sang e g acias a los mic o y mac onu ien es que ienen, les con ie en no solo un al o alo nu icional sino un g an po encial nu acéu ico (Abi ami y Kowsalya, 2011). Todas las algas ienen en su composición i aminas y especialmen e mine ales (has a 30% po olumen), como el Fe, Mg, Na, K, Fe, Mn, Zn, Cu, Ni, Co, C , Cd, y has a un 10% más de calcio que los p oduc os lác eos, además ienen ca bohid a os (El Said y El-Sikaily, 2013), aunque la composición a ía según la especie, hábi a , es ado de madu ación y condiciones ambien ales (I o y Ho i, 1989). A pa i de ellas se ex aen sus ancias an ioxidan es como la i amina C (ácido ascó bico), i amina E (α- oco e ol), ca o enoides (β-ca o eno, as axan ina), poli enoles de é e de, la onoides, ex ac os de Polypodium leuco omos y ácidos g asos Omega-3, en e o os (Figue oa e al., 2011). Las aplicaciones cosmé icas son de las más conocidas, c eando oda una gama de p oduc os como jabones, champús, c emas, masca illas, lociones, ba as de labios, espumas de a ei a , e c, ya que la acción bené ica es isible en a amien os con a el acné, de ma i is, pso iasis (G e he -Beck e al., 2008), la caída del cabello, an ia ugas, sebo ea y un la go e c. 1.4.2. Ag opecua ia Los a ibazones de algas, mejo an la composición nu icional y acondicionan el suelo po sus p opiedades, ayudan al con ol del c ecimien o de las malas hie bas y man ienen la humedad (Coupland e al., 2007). Las más u ilizadas han sido Lamina ia, Ascophyllum y Sa gassum, ambién son u ilizadas como complemen o en la die a del ganado (Casas-Valdez e al., In oducción 21 2006), como ex ac os pa a mejo a el es ado inmuni a io de los animales en e al es és (Kannan e al., 2007) o en cul i os hid opónicos mejo ando el amaño de las plan as además de mejo a pa áme os bioquímicos como pigmen os o con enido en p o eínas (La ique e al., 2013). Hay emp esas que ab ican ha inas de algas pa a suminis á selas al ganado, po su apo e en algunos aminoácidos esenciales como la A ginina, T ip ó ano y Fenilalanina, ambién po los be a- ca o eno y i aminas (Ma in e al., 2009). El p ocesado de las ha inas es cos oso, la indus ia op imiza el ecu so desa ollado e ilizan es basados en ex ac os líquidos de algas, y aplica los a cul i os de al o alo apo ando un mayo alo económico, como cie as ho alizas y las bayas. 1.4.3. Acuicul u a En acuicul u a las algas pueden se el cul i o p incipal o un cul i o auxilia , son las llamadas aguas e des y son mic oalgas, aunque ambién hay cul i os auxilia es de mac oalgas que si en de alimen o pa a un cul i o p incipal que se án dis in as especies de moluscos, c us áceos o peces. Las mic oalgas an a se i de alimen o pa a las ases la a ias y consegui una al a asas de supe i encia (Palme e al., 2007). El cul i o de las especies auxilia es es la base del desa ollo acuícola (Neo i, 2011), es os cul i os se en obligados a sopo a amplios angos de empe a u a y salinidad, además de cul i a se du an e odo el año. Las líneas de in es igación siguen la búsqueda de nue as especies que mejo en los eque imien os alimen a ios necesa ios pa a que la especie de cul i o p incipal enga una mayo asa de supe i encia y un mayo y mejo c ecimien o, e i ando de o maciones y en e medades así que se p oponen especies al e na i as a las adicionales (Chen e al., 2012). 1.4.4. Biocombus ibles La impo ancia de la búsqueda de biocombus ibles es debida al ago amien o de los combus ibles adicionales y al aumen o de los gases de e ec o in e nade o, los biocombus ibles p o enien es de las algas son sos enibles ecológicamen e y ayudan a la educción de esos gases ya que son o ganismos au ó o os que ans o man el CO2 en lípidos, que pod án se usados como In oducción 22 biodiesel (Saha an e al., 2013), que se ob iene po p ocesos de anses e i icación a pa i de iglicé idos y son una mezcla de és e es mono- alquilo de ácidos g asos de cadena la ga. Las algas p esen an muchas en ajas que las hacen se a ac i as pa a la p oducción de bio uel (Demi bas y Demi bas, 2011), ene una asa de c ecimien o ápida, que puedan c ece y pode se cul i adas en cualquie en o no como en á eas sume gidas, ie as in é iles e incluso con agua de ma (Singh e al., 2011), poseen g andes endimien os, que aunque dependen de cada especie, pueden a ia su composición en unción de las condiciones de cul i o, con olando ac o es ambien ales como la luz, pH, empe a u a (Bee e al., 2009), ambién se puede modi ica el con enido de lípidos con la limi ación de nu ien es (Chis i, 2007). El cosechado de algunas especies puede se dia io, y pueden educi las emisiones de CO2 del luga dónde es á c eciendo, es os son algunos de esos bene icios. De los biocombus ibles ob enidos a pa i de algas, se ob ienen cie as en ajas, al no con ene azu e no son óxicos, incluso se pueden u iliza los ex ac os de acei e como alimen o pa a el ganado, incluso siendo p ocesados con e anol. Son biodeg adables, los al os ni eles de ácidos g asos poliinsa u ados hacen que sean adecuados a países de climas muy íos, aunque es o a su ez es una des en aja, ya que lo hace ines able. Un incon enien e es la ecnología que ha de usa se pa a su p oducción y que unciona peo que el es o de al e na i as del me cado. Los dos biocombus ibles más comunes son el biodiesel y el bioe anol, y que a an de sus i ui a los combus ibles con encionales como el diésel y la gasolina (Rojan e al., 2011). Las mac oalgas con ienen mayo p opo ción de ca bohid a os lo que las con ie e en buenas p oduc o as de bioe anol y biome anol (Anas asakis e al., 2011). El p ecio de las mac oalgas en el me cado y el uso po pa e de la indus ia alimen a ia y de los icocoloides hacen que no sean en ables en la p oducción de combus ible (Da e e al., 2013). O os au o es se dedican a hace alo aciones pa a e dis in as especies y sus bene icios pa a la p oducción de biocombus ibles, dando como esul ado que In oducción 23 las que mayo can idad de lípidos o ales enían ue on las algas pa das, seguidas de algas e des, mien as que las algas ojas son las que menos con enido ienen, aunque los lípidos o ales y el pe il de ácidos g asos a ía ambién en unción del geno ipo y del ipo de cul i o que hayan enido (Gosch e al., 2012), son las mic oalgas son las que de po sí ienen un mayo po cen aje de lípidos. Los c i e ios que hay que hay que conside a a la ho a de selecciona las cepas de mic oalgas más e icien es pa a la p oduci biodiesel, son ene una buena asa de c ecimien o, ene cie a can idad y calidad lipídica, que las cepas sean esis en es a los cambios ambien ales y que el cul i o y p ocesado sean sencillos (Singh e al., 2011). Un ejemplo es el caso de Bo yococcus b aunii que iene en e un 25-75% de acei e en elación a su peso seco (Me zge y La geau, 2005), lo que es una de las mejo es candida as pa a la p oducción de bio uel (La don e al., 2009). Obje i os 24 2. Obje i os Los obje i os del p esen e abajo ue on: 1. Compa a la capacidad de c ecimien o de las dis in as especies de mac oalgas en monocul i o (Hyd opun ia co nea e Hypnea spinella) y en co-cul i o (Jania adhae ens, Halopi hys incu a) en sis emas de cul i o in ensi o, median e la p oducción de biomasa, con apo e con inuo de nu ien es con al o con enido en N-amonio, es imulando las u as me abólicas del ca bono y del ni ógeno de la biomasa. 2. E alua la capacidad de bio il ación de ni ógeno (N-amonio) p o enien es de aguas esiduales de pisci ac o ía, po las dis in as especies de mac oalgas ensayadas, en condiciones bajo adiación na u al (100% PAR) y adiación na u al bajo in e nade o (80% PAR + 10% UVA + 0% UVB). 3. Ex acción, alo ación y cuan i icación de polisacá idos ácidos ob enidos de la biomasa p oducida po las di e en es especies de mac oalgas ojas (Rhodophy a) ensayadas en las dis in as condiciones de cul i o (i adiación y apo e de nu ien es). Ma e ial y Mé odos 25 3. Ma e ial y mé odos 3.1. Especies seleccionadas, diseño expe imen al y condiciones de cul i o Los expe imen os desc i os en el p esen e abajo o man pa e de los desa ollados en el p oyec o BIFARO, dónde se plan eó el uso de algas ojas cul i adas de o ma in ensi a en e luen es de pisci ac o ías y con g an capacidad de bio il ación pa a la ob ención de sus ancias con aplicación o obiológica. Se p oyec ó in es iga sob e el desa ollo de mejo as en los sis emas de cul i o y bio il ación empleando anques dis ibuidos en cascada y es anques ipo “ aceway”. Se es udió la elación en e la al a disponibilidad de amonio y os a o en los e luen es y la adiación sola ul a iole a en la acumulación de compues os ni ogenados y o op o ec o es: aminoácidos ipo micospo ina (MAAs), ía es imulación del me abolismo del ni ógeno. Conc e amen e, se analiza on la capacidad de o op o ección de los MAAs no sólo con a el e i ema sino sob e o os ma cado es elacionados con o oca cinogénesis. Po o o lado, se in es igó la es imulación de la ía del ca bono en el sis ema de bio il ación de e luen es con el in de inc emen a la acumulación de polisacá idos y oligosacá idos con po encial inmunoes imulado . Se analizó la capacidad inmunoes imulado a de di e sos ipos de polisacá idos: polisacá idos ácidos de mic oalgas ojas (Po phy idium c uen um), polisacá idos de la amilia del aga (G acila ia sp) y los ca agena os (Hypnea spinella y G a eloupia dicho oma) y aquellos ob enidos de nue as especies de algas ojas ensayadas en el sis ema (Halopi hys incu a y Jania Adhae ens). La capacidad inmunoes imulan e de los polisacá idos se á ensayada an o in i o como in i o con modelos animales ( a ón). El p oyec o BIFARO p e ende in es iga y aplica una doble unción del cul i o de algas ojas p e iamen e seleccionadas: (1) capacidad y mejo a de la bio il ación de aguas esiduales de pisci ac o ías y (2) alo ación en aplicaciones o ode ma ológicas de compues os de la ía del ni ógeno, MAAs ( o op o ec o es y an ioxidan es) y de la ía del ca bono, polisacá idos (inmunoes imulan es). La unción o op o ec o a-an ioxidan e e inmunoes imulan e de p oduc os de algas Ma e ial y Mé odos 26 (ing edien es uncionales) pod ía educi el iesgo de o oca cinogénesis e inmunosup esión. Los expe imen os u ie on luga desde Junio de 2007 has a Mayo de 2008. Todas las especies seleccionadas pa a el es udio pe enecen al Phylum Rhodophy a o algas ojas, las seleccionadas ue on: Hyd opun ia co nea ( ig. 8) (J. Aga dh) M.J. Wynne (G acila iaceae; Rhodophy a), an e io men e desc i a como G acila ia co nea, Hypnea spinella ( ig. 9) (C. Aga dh) Kü zing (Hypneaceae; Rhodophy a), Jania adhae ens ( ig. 10) J.V. Lamou oux, (Co allinaceae; Rhodophy a) y Halopi hys incu a ( ig. 11) (Hudson) Ba e s, (Rhodomelaceae; Rhodophy a). Algunas de las ca ac e ís icas axonómicas de es as especies son desc i as a con inuación: Hyd opun ia co nea ( ig. 8) (J.Aga dh) M.J. Wynne, 1989; G acila ia ce ico nis (Tu ne ) J. Aga dh, Fucus ce ico nis Tu ne , que pe enece a la amilia G acilla iaceae. Posee un alo cilínd ico, ami icado, de consis encia ca ilaginosa, ca noso, lexible, lige amen e gela inoso; de colo ojo-ma ón a e de-ama illen o; de has a 20 cm de al o. Ejes p incipales con bi u caciones cla amen e comp imidas; ami icación casi dicó oma, con ámulas subcilínd icas, dis almen e ce ico nes. Es una especie p oduc o a de aga . Figu a 8. Hyd opun ia co nea, izquie da en na u aleza, de echa en cul i o. Ma e ial y Mé odos 33 Después del cosechado semanal los anques ue on ajus ados de nue o a las mismas densidades olumé icas iniciales. Los da os de p oducción ue on no malizados a g PS m-2 d-1. 3.4. Bio il ación de aguas esiduales: Amonio De acue do con la plani icación semanal, du an e el pe iodo de en iquecimien o con nu ien es, los análisis de bio il ación de amonio ue on ealizados el día pos e io al cosechado, cuando los anques es án eajus ados a una densidad inicial. Pa a ello ue on ecolec adas mues as de agua an o en la salida del anque de decan ación como en la en ada y la salida de cada anque ( ig. 16). Las mues as ue on p ocesadas inmedia amen e siendo u ilizado un mé odo colo imé ico, (Pa sons e al., 1984). El con ol u ilizado en és e análisis ue agua de ma il ada. Con los esul ados ob enidos se calculó la e iciencia de eliminación de N-amonio (NUE): Dónde Cs y Ce son las concen aciones de amonio y os a os en la salida (s) y en la en ada (e) del anque; y la asa de asimilación de N- amonio (NUR): Figu a 16. Toma de mues as de agua en la en ada del anque (izquie da) y a la salida del anque (de echa) pa a el análisis de bio il ación. Ma e ial y Mé odos 34 Dónde: Q = lujo de agua (l h-1) Ce = concen ación de N-amonio en la en ada (mmol) Cs = concen ación de amonio en la salida (mmol) A = supe icie del anque (m2) 3.5. De e minación del endimien o cuán ico óp imo (F /Fm) del PSII como indicado de es és (medidas de luo escencia de clo o ila) Uno de los indicado es de es és, en la biomasa de mac oalgas c eciendo bajo di e en es condiciones de cul i o, es la medida de emisión de la luo escencia de la clo o ila. Con es e ipo de medidas se puede de e mina el g ado de adap ación de las mac oalgas a las condiciones de cul i o, siendo un mé odo no des uc i o en que las medidas se ealizan in i o. Pa a ello se u ilizó el Plan E iciency Analize (PEA Hansa ech, UK) con el que se ob ienen alo es del endimien o cuán ico óp imo del PSII (F /Fm) Dónde: F0, es el ni el mínimo de luo escencia Fm, es el ni el de luo escencia máximo en un pulso de sa u ación F , es la luo escencia a iable PSII, o osis ema II Las mues as de biomasa ue on adap adas a la oscu idad du an e un iempo de 15 min an es de aplica un pulso de luz de 2.000 µmoles de o ones m-2 s-1 (100% de sa u ación) du an e un in e alo de 5 s. Las medidas ue on omadas Ma e ial y Mé odos 35 po iplicado semanalmen e du an e odo el expe imen o. 3.6. Ca ac e ización de la biomasa Los exceden es de la p oducción de la biomasa cosechada semanalmen e ue on almacenados en congelado es a - 20ºC. Pos e io men e pa e de la biomasa ue descongelada pa a la ealización de los co espondien es análisis. Pa a la ex acción y cuan i icación de polisacá idos ácidos, las mues as ue on secadas po lio ilización (F eezone 6L, Labconco, USA). Las mues as secas ue on en asadas al acío y almacenadas en oscu idad has a el momen o de su análisis. 3.7. De e minación de pigmen os o osin é icos Los pigmen os mayo i a ios (clo o ila a y las icobilip o eínas; R- icoe i ina y R- icocianina) ue on de e minados a pa i de 2 g amos de las mues as ecolec adas en cada cosechado y de cada anque de cul i o. Las mues as ue on homogeneizadas con mo e o. Pa a la clo o ila a se ealizó la ex acción con 4 milili os de me anol. La mues a ue cen i ugada du an e 5 min a 9.000 .p.m y 15 ºC, y los pigmen os concen ados en el sob enadan e ue on cuan i icados po espec o o ome ía de acue do con la ecuación (Wellbu n, 1994): En el caso de las icobilip o eínas 1 g de mues a ue homogeneizado en 4 milili os de ampón os a o (0,1 M; pH 6,0). Después de cen i uga 5 min a 9.000 .p.m. y 15ºC, el sob enadan e ob enido ue cuan i icado median e espec o o ome ía (Shimadzu UV- 160) de acue do con las ecuaciones de Bee y Eshel (1985): [ ] [ ] Las medidas ue on omadas po iplicado semanalmen e du an e odo el expe imen o y los da os ob enidos ue on no malizados a mg g-1 PS. Ma e ial y Mé odos 36 3.8. Análisis de con enido de ca bono y ni ógeno (C/N) El con enido in e no de ca bono y ni ógeno o al de las mues as almacenadas y lio ilizadas y las elaciones C:N, de las dis in as especies cul i adas ue de e minado median e combus ión con el analizado de CHN (Pe kin Elme 2400 CHN Elemen al Analize ). Es un análisis sencillo en el que las mues as son pesadas en cápsulas de es año, pos e io men e son selladas e in oducidas en una cáma a de eacción, abajando con un exceso de oxígeno. El ma e ial es mine alizado a 960 ºC. Los con enidos de ca bono y ni ógeno ue on de e minados en mg (ca bono o ni ógeno) g-1 PS y la elación C/N ue exp esada en po cen aje. 3.9. Ex acción de polisacá idos ácidos Pa a la ex acción de polisacá idos ácidos se siguió el mé odo desc i o po Abdala Díaz e al., (2010). Pa a ello se u ilizó la biomasa p e iamen e lio ilizada. Las mues as ue on seleccionadas especí icamen e pa a e la a iabilidad en con enido y calidad del polisacá ido a lo la go del pe iodo expe imen al. Las mues as omadas ue on las del inicio del expe imen o, pe enecien es a la p ime a semana, las de la 4 semana, que co esponden al inal del a amien o con nu ien es y a las de la 6 semana, úl ima semana del expe imen o y en la que se man u ie on en agua de ma . Además de las mues as seleccionadas, se u ie on en cuen a los con oles de cada una de esas semanas. Se oma on 20 g amos de mues a lio ilizada añadiéndosele un olumen de 500 ml de agua des ilada, pos e io men e se agi a y se au ocla a (mod. S e ilcla - C AE-75-DRY de la ma ca Raypa) a una empe a u a de 110ºC du an e 10 minu os. Una ez ob enidas las mues as del au ocla e, se sepa a el sob enadan e il ándolo, epi iendo el p oceso pa a ob ene un segundo sob enadan e. Los dos sob enadan es son calen ados con agi ación cons an e, añadiéndoseles B omu o de N-Ce ylpy imidinium-monohyd a o al 2% (Ce a lon; Mo is Que edo e al., 2000) de la casa Me ck. De es e modo se consigue p ecipi a sólo los polisacá idos ácidos sepa ándolos de los neu os. Una ez ue on p ecipi ados los polisacá idos ácidos se deja eposa du an e 10 minu os. Pos e io men e son lle ados a la cen í uga (A an i cen i uge J-26 XP, Ma e ial y Mé odos 37 o o JA-10, Beckman-Coul e ) du an e 10 minu os a 10.000 .p.m. El p ecipi ado ob enido ue pu i icado u ilizando una solución 4 M de NaCl. Una ez ío de nue o es p ecipi ado pe o aho a con e anol 96% / y se cen i uga du an e 10 minu os más a 10.000 .p.m. La pu i icación ue ealizada cómo mínimo dos eces ob eniéndose un p ecipi ado de colo blanquecino. Una ez pu i icado el polisacá ido es dializado u ilizando memb anas de diálisis (Sigma), en e una solución de NaCl 2M du an e 24 ho as y en agi ación, a o eciendo el in e cambio iónico. T anscu idas las 24 ho as se p ocede al aciado de la memb ana, el con enido es p ecipi ado con e anol al 96% y cen i ugado du an e 10 minu os a 10.000 .p.m. el polisacá ido ob enido es congelado y lio ilizado du an e 24-48 ho as e in oducido en iales pa a su pos e io u ilización. En la ( ig. 17) se puede ap ecia el p oceso de p ecipi ado de los polisacá idos (izquie da), el polisacá ido pu i icado (de echa) y el pos e io en asado del polisacá ido pu i icado lio ilizado (abajo). Figu a 17. P ecipi ación de los polisacá idos ácidos (izquie da), polisacá ido pu i icado (de echa) y polisacá ido pu i icado lio ilizado y en asado (abajo). Resul ados 38 4. Resul ados 4.1. P oducción de las especies ensayadas Los da os medios de p oducción pa a las dis in as especies cul i adas en és e expe imen o son mos ados en la abla V. Se oma on como ep esen a i as las semanas 1, 4 y 6, la semana 1 es el inicio del expe imen o y adap ación de las algas a las condiciones de cul i o, la semana 4 es el inal del pe iodo de en iquecimien o con nu ien es y la semana 6 es el inal del expe imen o que coincide con 2 semanas de cul i o sin apo e de nu ien es. La e olución en cuan o a la p oducción que siguie on las especies cul i adas en el caso de los anques con ol, ue la de disminui con el iempo, en cambio en los anques a amien o con nu ien es, ue aumen a en las semanas dónde hubo apo e de nu ien es, de la semana 1 a la 4, en las especies que es u ie on el co-cul i o, Jania adhae ens y Halopi hys incu a, y en Hypnea spinella, mien as que en Hyd opun ia co nea, hubo una disminución en las semanas en las que hubo un en iquecimien o con nu ien es, mien as que en las semanas con agua de ma ol ió a aumen a la p oducción. En gene al, los anques a amien o u ie on mayo p oducción que los anques con ol, an o en las si uaciones de apo e de nu ien es como cuando ue on man enidas sólo con agua de ma . Aunque hubo excepciones como en el caso de los anques con ol de la semana 1 de Hyd opun ia co nea en el ex e io , Hypnea spinella en el in e io y el co-cul i o an o en el ex e io (100% PAR) como bajo in e nade o (80% PAR + 10% UVA + 0% UVB) además del anque con ol den o del in e nade o de la semana 4. En el caso de H. co nea y del co-cul i o, los anques con ol de la p ime a semana ue on los más p oduc i os, aunque pa a el caso de H. co nea ue el anque de con ol en el ex e io con al a i adiación 82.2 g PS m-2 d-1, siendo el alo de p oducción más al o pa a odas las especies, mien as que en el co- cul i o ue en el anque in e io el que más p odujo con 66 g PS m-2 d-1. Resul ados 39 Con espec o a los anques a amien o los que más p oduje on ue on los de H. co nea de la p ime a semana an o in e io es como ex e io es con alo es de 73.33±4.41 g PS m-2 d-1 y 64.8±7.30 g PS m-2 d-1 espec i amen e e H. spinella en la semana 4 con alo es 48.85±5.37 g PS m-2 d-1 en el in e io y 65.21±8.85 g PS m-2 d-1 en el ex e io , así pues, la mayo p oducción media ue pa a H. co nea seguida de H. spinella. Los di e en es expe imen os de cul i o de las especies u ie on luga en dis in os pe iodos del año, con la consiguien e a iación de la adiación PAR an o en el ex e io como en el in e io del in e nade o ( abla IV). Tabla V. Valo es de i adiación y empe a u a du an e el expe imen o. Da os exp esados como medias ± SE, n=16. En la zona de Talia e (Telde) los alo es de adiación sola aumen an has a alo es máximos que se alcanzan du an e el mes de julio (Gómez Pinche i, com. pe s). La adiación PAR dia ia acumulada du an e el pe iodo de cul i o de H. co nea a ió desde 3354 7547 kj m-2 d-1 en el ex e io , mien as que en el in e io ue de 2683.2 6037.6 kj m-2 d-1. Pa a los ensayos con H. co nea y el co- cul i o de J. adhae ens y H. incu a, los senso es de empe a u a no es u ie on disponibles. En el caso del co-cul i o los alo es de i adiación ue on de 1456 - 5038 kj m-2 d-1 en el ex e io , y den o del in e nade o ue on de 1164 - 4030.4 kj m-2 d-1, con un alo medio de 3602.10±247.57 kj m-2 d-1 en el ex e io y de 2881.68±198.06 kj m-2 d-1 en el in e io . En el cul i o de H. spinella a ió en el ango de 1058 - 4407 kj m-2 d-1 en el ex e io con unos alo es medios de 3181.3±163.15 kj m-2 d-1, en cambio en el in e io el ango ue de 846.4 - 3525.6 kj m-2 d-1, con alo es medios de 2545.0±130.52 kj m-2 d-1. Con espec o a la empe a u a du an e el expe imen o de H. spinella los alo es alcanzados ue on en el ango desde 17.89±0.02 42.09±0.02 ºC en los Resul ados 40 anques del ex e io y de 18.72±0.03 32.63±0.08º C con unos alo es medios de 21.5±0.37ºC en los anques en el in e io del in e nade o y de 21.4±0.41ºC en los anques ex e io es. Si se compa a la adiación sola con la empe a u a du an e el pe iodo de cul i o pa a H. spinella ( ig. 18) se obse a una elación ascenden e, a medida que la i adiación aumen a, aumen a la empe a u a del agua en los anques de cul i o. Figu a 18. Radiación PAR acumulada semanal in e io y ex e io y empe a u a media en el in e io y ex e io semanal du an e el cul i o de Hypnea spinella. PAR s Tª (Hypnea spinella) Tiempo (Semanas) 1 semana 2 semana 3 semana 4 semana 5 semana 6 semana 7 semana 8 semana PAR (kj m-2 d-1) 0 1000 2000 3000 4000 5000 Tempe s u a (ºC) 19 20 21 22 23 24 I adiación Ex e io I adiación In e io Tempe a u a In e io Tempe a u a Ex e io Resul ados 41 Tabla VI. P oducción media po especies y semanas de cul i o en condiciones expe imen ales a escala pilo o ex e io e in e io (bajo in e nade o). (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. PRODUCCiÓN (g PS m- 2 d- 1 ) In e io Ex e io Especie Semana Con ol T a amien o Con ol T a amien o 1 54.00 73 . 33 ± 4.41 82.8 64.80 ± 7.30 Hyd opun ia co nea [ 4 14 . 57 37.71 ±3. 96 18.00 28.86 ± 8.24 6 (SW) (l) 22 . 29 41.43 ± 1. 59 14.57 39.14± 1.87 1 66 . 00 19.90 ± 9.70 53.43 29.86 ± 14 . 85 Ha/opnhys incu a 4 37.13 34.83 ± 17.42 0.00 30.25±5.99 Jania adhae ens (2) 6 (SW) (l) 37.71 42.43 38.76 ±6. 04 11.00 ± 2.40 1 35 . 36 30 . 90 ±5. 67 26.71 46 . 62 ±6. 81 Hypnea spinella 14 33 . 00 48 . 85 ±5. 37 18 . 07 65 . 21 ±8. 85 6 (SWP) (l) 0.00 30.25 ± 5.37 0.00 46.62±3.96 Resul ados 42 4.2. Capacidad de bio il ación Los da os de los lujos medios de apo e de N-NH4+ du an e los pe iodos ensayados se mues an en la abla VI. Tabla VII. Flujos medios ± SE du an e los cul i os expe imen ales an o en in e io como en ex e io . Da os exp esados como medias ± SE, n=3. Flujos medios (mmoles de N-NH4 h-1) Especie In e io Ex e io Hyd opun ia co nea 4.20±0.77 4.46±0.56 Jania adhae ens Halopi hys incu a 1.30±0.22 1.60±0.30 Hypnea spinella 3.65±0.89 3.00±0.56 La e iciencia de eliminación (NUE) y la asa de eliminación (NUR) de amonio se mues an en la abla VII. Todas las especies mues an al os alo es de e iciencia (NUE), llegando incluso al 100% en el caso del expe imen o de co-cul i o, seguida de Hypnea spinella con alo es en e 56±7.37% – 100±3.60% en el ex e io y 38.3±4.03% – 98.7±0.67% en el in e io y po úl imo Hyd opun ia co nea con un ango que a desde 22.3±0.62% - 99.6±0.65% en el ex e io y 35.4±9.67% – 96.2±1.86% en el in e io . Cabe des aca que, en gene al, los da os ob enidos en el ex e io son mayo es que en el in e io , aunque pun ualmen e haya algunas disminuciones, que pueden se a ibuidas a una a iación en la concen ación del lujo de nu ien es. En el caso de la NUR, que es la asa de eliminación po unidad de supe icie, la especie que mejo asimiló los nu ien es ue H. co nea con alo es en e 24.3±0.41 – 69.7±15.18 mmol m-2h-1 en el in e io , 18.9±3.44 – 24.9±0.12 mmol m-2h-1 en el ex e io . El co-cul i o a ió en e 6.1±0.02 – 50.1±0.06 mmol m-2h-1 en el in e io y 6.1±0.04- 34.0±15.50 mmol m-2h-1 en el ex e io y po úl imo H. spinella con angos en e 2.7±0.02 – 28.0±0.41 mmol m-2h-1 en el in e io y 1.8±0.22 - Resul ados 49 Tabla IX. Concen aciones de icobilip o eínas (Ficoe i ina y Ficocianina) (mg g-1 PS) po especie y semana de cul i o, en condiciones expe imen ales a escala pilo o in e io (bajo in e nade o) y ex e io . (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. PIGMENTOS Ficoe i ina IR-FE] mg g -1 PS Ficocianina IR-Fe] mg g -1 PS Especie Semana In e io Ex e io In e io Ex e io Con ol T a amien o Con ol T a amien o Con ol T a amien o Con ol T a amien o 0.27 1.60±0.11 0.66 1A2±0.05 0.06 0.32±0.01 0.10 0.26 ± 0.01 Hyd opun ía 4 0.00 1.90 ± 0.30 0.00 1.27 ± 0.08 0. 00 0.33 ± 0.04 0.00 0. 27±0.00 co nea 6 (SW) II) 0.00 OAO±0.04 0.00 0.37±0.14 0.01 0.07±0.01 0.03 0.07±0.01 2A6 1.34 ± 0.10 0.65 1.69 0.25 1.53 ± 0.03 0.02 0.28 Ha/opí hys 4 0.20±0.03 0.69±0.07 0.13 ± 0.04 0.05 0.00 0.06±0.01 0.03±0.02 0.005±0.00 íncu a (2) 6 (SW) II) 0. 32 ±0. 03 0.33 ± 0.05 000 0.32 ± 0.12 0. 00 0.02 ± 0.00 000 0. 01 ± 0.00 2.02 1.89 ± 0.012 1.26 1AO 0. 11 0.19±0.03 0.09 0.13 Janía 4 adhae ens (2) 0.25 0.26 ± 0.07 0.09 ±0. 00 0. 13 0.00 0.01 ± 0.05 0.005 ± 0.00 0.01 6 (SW) II) 0.01 ± 0.003 0.29 ± 0.12 0.55 ± 0.12 0.11 ± 0.01 0.00 0.02 ± 0.01 0.06±0.00 0.007±0.001 14.87 ± 2.09 20 . 04 ±2 .1 4 4. 35 ±0. 31 13.75 ± 1.29 0. 57 ± 0.3 1.02 ± 0.18 022±O . 02 0. 63 ±002 Hypnea 4 1.58±0.16 16.98±023 026± 0.04 18.18±0.14 0. 03 ± 0.OO 1.75±029 000 1.24 ±003 spínella 6 (SW) II) 0. 05 ±0. 02 15 . 76 ±0. 71 0.00 9. 92 ±1.9 0. 01 1.21 ± 0.10 0.00 1.17±0.16 Resul ados 50 Con espec o a la clo o ila ( abla IX), las concen aciones más bajas ue on mos adas po H. co nea, no llegando a 0.60 mg g-1 PS, es a especie e olucionó de o ma que ue disminuyendo la concen ación de clo o ila desde la semana 1 a la 6 a excepción del anque con ol en el in e io del in e nade o, en el que du an e la semana 6 hubo un lige o aumen o con espec o a la semana 4. No se puede habla de una e olución gene al, pe o en el co-cul i o de J. adhae ens y H. incu a, se dio la pa icula idad que después de 4 semanas con apo e de nu ien es, aumen a on las concen aciones de pigmen os en odos los anques, an o con ol como a amien o y en condiciones bajo in e nade o (80% PAR + 10 % UVA+ 0% UVB) como en el ex e io con al a i adiación, pa a luego disminui du an e las semanas en las que es u ie on solo con agua de ma , pe o con concen aciones mayo es a las egis adas en la semana 1, aunque hay una excepción en la especie H. incu a en los anques a amien o ex e io es, y es que en la semana 6 aumen ó la concen ación en ez de disminui . En H. spinella, los anques a amien o, an o en el in e io como en el ex e io , u ie on la misma e olución que las especies del co-cul i o, no sucediendo lo mismo en los anques con ol, en ellos la concen ación de clo o ila ue disminuyendo desde la semana 1 a la semana 6. Du an e la semana 4 se alcanzó la mayo concen ación de clo o ila en los anques a amien o en el in e io del in e nade o con un alo de 5.73±0.13 mg g-1 PS. Las especies que mayo es concen aciones medias ob u ie on ue on H. incu a en los anques con ol an o en el in e io como en el ex e io y H. spinella en los anques a amien o an o in e io es como ex e io es. A lo la go de las semanas del cul i o, se pudo ap ecia mo ológicamen e una se ie de cambios, aumen ando la in ensidad del colo en el pe iodo de apo e de nu ien es y disminuyendo, incluso pe diendo el colo ojo en el pe iodo de cul i o sólo en el agua de ma , lo que indica la u ilización del ni ógeno almacenado ( ig. 20). Además odas las especies, p esen an una g an plas icidad y su mo ología a iaba en elación a la supe icie olumen ( ig. 21). Resul ados 51 Figu a 21. Dis in os cambios mo ológicos, an o en colo como en o ma. A Halopi hys incu a, con apo e de nu ien es B Jania adhae ens con apo e de nu ien es y C Hypnea spinella, con apo e de amonio, colo ojizo y sin apo e de nu ien es, colo ama illo. Figu a 20. . Hyd opun ia co nea con dis in a mo ología, amas co as y inas a modo de pequeños pompones. Colo ama illo sin apo e de nu ien es (izquie da) y con apo e de nu ien es, colo ojo (de echa). O a mo ología es la de amaño pelo a de enis, amas más g uesas y ala gadas. Resul ados 52 Tabla X. Concen aciones de clo o ila a (mg g-1 PS) po especie y semana de cul i o, en condiciones expe imen ales a escala pilo o in e io (bajo in e nade o) y ex e io . (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. PIGMENTOS Clo o ila a (mg g"1 PS) Especies Semana In e io Ex e io Con ol T a amien o Con ol T a amien o 1 0.54 0.55±0. 01 0.28 0.49±0.05 Hyd opunlia 4 0.14 0.42±0.00 0.00 0.39±0.05 co nea 6 (SW)( 1) 0.20 0.24±0. 01 0.00 0.32±0.04 1 0.58 0.60±0. 01 0.65 0. 51 Halopilhys I 4 1.30±0.06 2.63±0.28 2.64±0.06 1.43±0.14 incu a (2) 6 (SW) (1) 1.24±0. 11 1.84±0. 01 0.83 1.69±0.85 1 0.28 0.27±0.00 0.32 0.27 Jania adhae ens 4 0.63±0. 04 1.16±0.20 0.64±0. 01 102±006 ( 2) 6 (SW)( 1) 0.30±0.00 1.16±0.63 0.67±0.23 0.49±0.19 1 2.69±0.26 4.45±0.06 1.54±0.05 3.65±0. 10 Hypnea spinella 4 0.71±0.08 5.73±0.13 0.52±0.02 5.27±0.63 6 (SW)( 1) 0.51±0.04 3.69±0.03 0.20±0.02 4.45±0.30 Resul ados 53 4.5. Análisis de las elaciones C:N Los esul ados del análisis de ca bono ni ógeno son mos ados a con inuación ( abla X). Si se obse a el compo amien o po anque ( ig. 22), en los anques con ol del in e io de odas las especies se e un aumen o de la elación C:N du an e las 4 p ime as semanas ( ig. 22 A), pa a luego disminui , con alo es in e io es incluso a los de la p ime a semana, excep o en el caso H. co nea y de H. spinella que los alo es en la semana 1 y 6 son p ác icamen e iguales, y que al a a se de los anques con ol, no hay apo e de nu ien es. En los anques a amien o en el in e io , se encuen a el alo más al o dado pa a es a elación en la especie J. adhae ens con 27.64±4.86 ( ig. 22 B) en la p ime a semana, pa a después baja y man ene se en el mismo alo en las semanas 4 y 6. En H. incu a los alo es an aumen ando de la semana 1 a la 6, al igual que en H. co nea. Al con a io que el es o de las especies H. spinella disminuye en las semanas con apo e de nu ien es pa a luego aumen a en las semanas en las que sólo es á con agua de ma , incluso la elación es mayo que en la p ime a semana. En los anques con ol del ex e io ( ig. 22 C), H. co nea y H. incu a siguen la misma e olución que en el in e io , aumen ando de la semana 1 a la 4 pa a luego disminui , J. adhae ens a disminuyendo a lo la go de las semanas de cul i o, en cambio H. spinella aumen a la elación C:N a lo la go del pe iodo de cul i o, alcanzando en la semana 6 el alo más al o 23.79±2.08 en los anques con ol, an o ex e io es como in e io es. Con espec o a los anques a amien o del ex e io ( ig. 22 D), en H. co nea al con a io que en los anques a amien o del in e io los alo es an disminuyendo a lo la go de las semanas, en J. adhae ens an aumen ando a la in e sa que en el anque con ol del ex e io . H. incu a sigue la misma e olución de los anques con ol, an o en el Resul ados 54 in e io como el ex e io , aumen ando en la semana 4 pa a luego disminui en la semana 6, en cambio H. spinella man iene una es abilidad a lo la go del cul i o. A B C D Figu a 22. Relaciones C:N po anque y semana de cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. Resul ados 55 Tabla XI. Relaciones C/N ob enidas en las mac oalgas cul i adas, (1) Después de dos semanas sin apo e/ lujo de N/P (sólo agua de ma ) (2) Expe imen o de co-cul i o. Da os exp esados como medias ± SE, n=3. Relación Ca bono:Ni ogeno In e io Ex e io Especies Semana Con ol T a amien o Con ol T a amien o 1 15 . 52 ±O. 31 7. 38 ± O.71 8. 68 ±O .1 0 11 . 82 ±4. 04 Hyd opun ia 4 22.38 ± O.12 12.85 ± 5.47 14.7±O.26 8.24 ± O.21 co nea 6 (SW) (1) 17.47 ± O.83 20.38 ± 2.79 7.49 ± O.O3 7.79 ± O.66 1 12 . 24 ±O .32 10.63±O.98 10 . 84 ± 1.48 9. 29 ±O .3 5 Halopi hys incu a 4 19.04 ± 2.04 11.89 ±3. 24 16.07±1.3 11.41 ± 1.27 (2) 6 (SW) (l) 10.90 ± 1.52 15.25 ± 3.61 12.44 ± 1.71 8.23 ± O.36 1 13.51 ± O.14 27.64 ±4 .86 18.46 ± 1.19 8.81 ± O.O4 Jania adhae ens 4 16.03 ±O. 52 10.53 ± O.20 11 . 13 ±O. 25 11 . 05 ±O. 75 (2) 6 (SW) (1) 11 . 04 ±1. 21 10.96±2.12 7.3±O.15 17.01 ±4. 8 1 6.85 ± O.21 17.25 ± 6.42 9.36 ± O.17 6.43 ± O.12 Hypnea spinella 4 13.96 ±. O2 12.74±O.11 12.23 ± O.73 6.7 ± O.24 6 (SW) (1) 6.42 ± .OO3 20 . 56 ±2. 88 23.79 ± 2.08 6.58 ±O. O9 Resul ados 56 4.6. Con enido en polisacá idos Los da os de con enido de polisacá idos ácidos en po cen aje se mues an en la abla XI. Las especies que p oduje on mayo can idad de polisacá idos ue on Hyd opun ia co nea con angos en e 21.8% 45.4% e Hypnea spinella con angos en e 23.3% 47.1%, mien as que Halopi hys incu a y Jania adhae ens no sob epasan el 10%. H. co nea iene mayo po cen aje de polisacá idos en la semana 4 del cul i o, coincidiendo con el in del pe iodo de apo e de nu ien es, luego en las dos semanas con apo e sólo con agua de ma disminuye el con enido. En el caso de los anques con ol, an o en el in e io del in e nade o como en el ex e io , los alo es son incluso más bajos que en la p ime a semana, no ocu e lo mismo con los anque a amien o, ya que los alo es es án po encima. A lo la go de odo el cul i o los anques con ol, an o en el in e io como en el ex e io , ienen un mayo po cen aje de polisacá idos, es a si uación se e ie e en la úl ima semana de cul i o. El alo más al o pa a H. co nea se da en el anque con ol del in e io en la semana 4 con un 45.4%. En Jania adhae ens, du an e odo el cul i o, los anques con ol an o en el in e io del in e nade o como en el ex e io , ienen menos po cen aje de polisacá idos que los anques a amien o espec i os, ambién sigue la e olución de H. co nea, aumen ando en las semanas con apo e de nu ien es pa a luego disminui . El mayo alo se ob u o en el anque a amien o del ex e io de la semana 4 con 6.4%, mien as que el mínimo ue de 0.5% en la semana 6 del anque con ol in e io . Halopi hys incu a, ue la especie con meno con enido en polisacá idos de odas las especies ensayadas, no supe ando el 3%, el alo máximo es á dado en la semana 6 en el anque con ol en el in e io con un 2.2%. En el ex e io du an e la semana 4 y 6 an o el anque con ol como en el de a amien o, el po cen aje es p ác icamen e el mismo. Hypnea spinella se compo ó de mane a di e en e a H. co nea ya que ue inc emen ando el po cen aje de polisacá idos en el anscu so del cul i o, Resul ados 57 alcanzando el alo máximo en el anque de con ol en el in e io en la semana 6 con 47.1% seguido del anque con ol en el ex e io de la misma semana con 41.3%, ambién p oduje on más can idad de polisacá idos los anques con ol, an o en el in e io como en el ex e io que los anques a amien o a excepción del anque a amien o de la semana 1 que ue el que más p odujo sob e el es o de los anques en esa semana, con 31.0%. Du an e odo el cul i o los anque a amien o del ex e io u ie on una p oducción muy pa ecida, al igual que sucedió con H. incu a. Si compa amos el endimien o de los polisacá idos con la elación C:N du an e las semanas de cul i o, podemos obse a cie as di e encias po anque y a amien o ( ig. 23). En gene al las especies que p oduje on más polisacá idos, como se mencionó an e io men e, ue on Hyd opun ia co nea e Hypnea spinella, po el con a io Jania adhae ens y Halopi hys incu a, mos a on alo es bajos en con enido de polisacá idos en odos los anques, an o en los con oles con agua de ma como en los anques a amien o. Al compa a los dos ac o es obse amos una endencia simila en las especies del co-cul i o J. adhae ens y H. incu a, en cambio pa a H. co nea e H. spinella, la e olución ue más a iable. En los anques con ol del in e io ( ig. 23 A), se obse a que pa a las mismas elaciones C:N, en e 10 20, H. co nea e H. spinella ienen mayo con enido en polisacá idos, aún incluso pa a elaciones más pequeñas y más al as que es e ango, es as dos especies son las que acumulan mayo po cen aje de polisacá idos, llegando al máximo en H. co nea en la semana 4 con 45.1 % y una elación de C/N de 22.38±0.12. En los anques a amien o in e io es ( ig. 23 B), se obse a una a iación, hay una disminución en las elaciones C:N en las especies del co-cul i o y un aumen o en el con enido de polisacá idos, menos en el caso de J. adhae ens que aumen ó su elación C:N y el con enido en polisacá idos es el meno de odas las semanas de cul i o. En H. co nea en e la semana 4 y 6 no a ían mucho su con enido en polisacá idos mien as que la elación C:N pasa de 12.85±5.47 a 20.38±279, al Resul ados 58 con a io que en H. spinella, que se man u ie on iguales du an e la semana 1 y 4 y la elación C:N pasa de 17.25±6.42 a 12.74±0.11. En los anques con ol ex e io es ( ig. 23 C), aumen an el con enido en polisacá idos de las especies del co-cul i o en compa ación con los anques con ol in e io es, mien as que en el caso de H. incu a el C:N aumen a de la semana 1 a la 4 en J. adhae ens a disminuyendo la elación con el anscu so del expe imen o. En H. co nea, hay un aumen o en el con enido de polisacá idos de la semana 1 a la 4 mien as que en H. spinella aumen a en odas las semanas de cul i o, compo ándose igual la elación C:N. En el caso de los anques a amien o ex e io es ( ig. 23 D), las especies del co-cul i o ob u ie on mayo es endimien os que en el es o de anques incluso si se compa an con los anques in e io es, sob e odo J. adhae ens, aunque la elación C:N aumen ó con espec o a las semanas de cul i o, siendo el alo más bajo de polisacá idos en la semana 6 con un 1.1±0.34 % en e al mayo alo de C:N con un 17.01±4.08, en H. incu a an o el con enido en polisacá idos como la elación C:N no a ió excesi amen e. En H. co nea hay una disminución de los polisacá idos en e a los anques con ol aunque con el anscu so de las semanas de cul i o an aumen ando, sob e odo en e la semana 4 y la 6 a la pa que disminuye la elación C:N du an e odo el cul i o. Mien as que en H. spinella an o los alo es de polisacá idos como la elación C:N pe manece cons an e a lo la go del cul i o. Discusión 65 Lideman e al., 2013). Los da os ob enidos en nues o expe imen o, nos indican que los cul i os es u ie on isiológicamen e es ables, a pesa de habe sido some ido a un es és po al a de nu ien es du an e un pe iodo de dos semanas, únicamen e los con oles ex e io es, sob e odo en la especie Hypnea spinella ue on los que se ie on más a ec ados po es e es és, a la is a de los alo es de endimien o cuán ico máximo del PSII (Ma a e al., 2006). Como hemos mencionado an e io men e, una ez e minada la ase de cul i o desa ollamos el análisis y la alo ación de la biomasa. Los alo es ob enidos de los análisis no son independien es y es án elacionados en e sí como e emos a con inuación. En la abla VIII se mues an los alo es de icobilip o eínas ( icoe i ina y icocianina), en nues o es udio ob u imos mayo es alo es de concen ación de icoe i ina que de icocianina, como cab ía espe a , ya que la icoe i ina es el pigmen o acceso io ca ac e ís ico de las algas ojas, les da el colo y se encuen a en mayo concen ación en los icobilisomas. En Hyd opun ia co nea hay mayo con enido de icobilip o eínas en los anques con apo e de nu ien es que en los anques con ol, además de que una ez co ado el apo e ex a de nu ien es, disminuye el con enido ápidamen e, al igual que en el es udio de Figue oa e al. (2008). La que más concen ación de icobilip o eínas u o ue Hypnea spinella, no hubo g andes di e encias en e in e io del in e nade o y el ex e io con espec o a la icoe i ina a excepción de la p ime a semana, pe o puede debe se a di e sos ac o es, uno de ellos puede se que es as algas ue on man enidas, du an e un pe iodo p e io al expe imen o, en o as condiciones y es e cambio gene a un es és de adap ación a las nue as condiciones de cul i o (Ribei o y Necchi, 2001;Aguile a e al., 2002; Figue oa e al., 2009). En el co-cul i o, la concen ación de icoe i ina ue disminuyendo con el anscu so del pe iodo de cul i o, aun habiendo apo e de nu ien es, es o coincide con el es udio de Figue oa e al., (2012), en el cual obse ó que du an e pe iodos la gos de cul i o, sin apo e de nu ien es, las especies cul i adas su en una Discusión 66 disminución en la acumulación de compues os con ni ógeno como las icobilip o eínas, p oduciendo una deg adación en los icobilisomas pa a p opo ciona el nu ien e de ici a io (A áoz & Häde , 1997), en al a i adiación disminuyen menos ya que la adiación PAR p o oca un e ec o posi i o en es os compues os (G ossman e al., 1993). En o os es udios el con enido en bilip o eínas inc emen ó un 90% espec o a los con oles c ecidos en agua de ma , en condiciones de adiación PAR+UVR y con nu ien es p o enien es de pisci ac o ía (Figue oa e al., 2010). En gene al, la icocianina dio alo es muy in e io es a la icoe i ina, en la mayo ía de las especies no se llegó a 0.65 mg g-1PS, la que mayo concen ación mos ó ue Hypnea spinella, llegando a 1.75±0.29 mg g-1PS. En Hyd opun ia co nea, la concen ación de clo o ila a e olucionó de o ma que ue disminuyendo a lo la go del pe iodo de cul i o, en cambio en el es o de las especies ensayadas siguie on la e olución de aumen a la concen ación de clo o ila a en el pe iodo de apo e de nu ien es, sob e odo en las especies del co-cul i o que se inc emen ó has a el doble en el caso de los anques con ol y se llegó a cuad uplica en el caso de los anques a amien o, es o puede se debido a la adiación UV como señalan Aguile a e al., (2008) y Buschmann e al., (2008b), mien as que disminuye on al cesa , es o concue da con los es udios de Buschmann e al. (2008b) ya que el ni ógeno inc emen a la concen ación en pigmen os o osin é icos, p o eínas solubles y ni ógeno in e no. El apo e de nu ien es como es amos iendo, con ibuye an o a la concen ación de pigmen os como a la p oducción de polisacá idos. Si elacionamos el con enido C:N de las especies con los pe iodo de cul i o, cuando ienen una baja disponibilidad de ni ógeno, se e leja con alo es al os de la elación C:N y que en las algas gene almen e oscila en e un 1 y 7 % de su peso seco (I o y Ho i, 1989). Ma ínez y Rico, (2008) señalan que las algas aclima adas a al a i adiación p esen an un mayo con enido en ca bono y meno con enido en ni ógeno, que las algas aclima adas a zonas con menos i adiación. En el expe imen o en gene al, hubo un aumen o en la elación C:N en elación a las semanas donde Discusión 67 hubo apo e de nu ien es, es o es que el alga no necesi a u iliza las ese as ya que hay disponibilidad en el medio, pe o necesi a ene ese as pa a su c ecimien o o di igi el me abolismo hacia la sín esis de polisacá idos o pigmen os. Con espec o al con enido en polisacá idos, en gene al, se pudo obse a dos e oluciones, las especies que p oduje on g an can idad como Hyd opun ia co nea e Hypnea spinella que son ípicas p oduc o as de icocoloides, aga y ca agena os espec i amen e (Ma inho-So iano, 2001; F eile-Peleg ín y Mu ano., 2005; Beze a y Ma inho-So iano, 2010; Vázquez-Del ín e al., 2014), y las que p oduje on pocos polisacá idos que ue on las especies que es u ie on en co- cul i o Jania adhae ens y Halopi hys incu a (Abdala e al., 2011; Güenaga, 2011). Es o es debido al me abolismo p opio de cada especie, que en el caso de las especies del co-cul i o es á más di igido a la concen ación de me aboli os secunda ios con ac i idad an ioxidan e (Güenaga, 2011). En nues o caso, Hyd opun ia co nea mos ó alo es más bajos de concen ación de polisacá idos en aguas con apo e de nu ien es que en los anques con ol, mien as que en las semanas en las que ue cul i ada en agua de ma aumen a on, es o hace pensa que acumula el ni ógeno po la gos pe iodos de iempo (Figue oa e al., 2008) y di ige el me abolismo hacia la acumulación de polisacá idos du an e los pe iodos de limi ación. En el co-cul i o los polisacá idos ex aídos no llega on al 7% en e a los de Hypnea spinella que supe a on el 23%, pe o en cambio las calidades son dis in as, como lo demues an los es udios de Abdala-Díaz e al. (2011). Los polisacá idos ob enidos ue on analizados po espec oscopia in a oja ob eniendo cla as di e encias en e los polisacá idos ex aídos de H. spinella, que esul a on se simila es en un 90% al kappa ca agena o del ipo III, un polisacá ido sul a ado que demues a ene ac i idad an i umo al e Inmunomodulado a (Abdala-Díaz e al., 2011), ya que el g upo sul a o pa ece se impo an e en la ac i ación de mac ó agos, mien as que los polisacá idos de H. incu a ue on simila es al pululano en un 86%, es os polisacá idos en cambio demos a on ene ac i idad an iin lama o ia induciendo la libe ación de ci oquinas. Discusión 68 En o os es udios, ambién demos a on que los polisacá idos ácidos, ob enidos en es e caso de Ul a igida, inducen la exp esión de las in e leuquinas y la o mación de leucoci os en el iñón del odaballo, pe o si se desul a an los polisacá idos, pie den esa ac i idad, lo que indica que se equie en los g upos sul a o pa a la inducción (Cas o e al., 2006). A pesa de se es uc u almen e di e en es, es e ipos de polisacá idos ácidos pueden se u ilizados como po enciales p oduc os a macéu icos aplicados cuando la ac i ación de mac ó agos sea necesa ia (Abdala-Díaz e al., 2011). Conclusiones 69 6. Conclusiones De los esul ados ob enidos y p esen ados en es e abajo, podemos ex ae las siguien es conclusiones: 1. Todas las especies de mac oalgas ensayadas (Hyd opun ia co nea, Jania adhae ens, Halopi hys incu a e Hypnea spinella), se adap a on a las condiciones es ablecidas en el sis ema de cul i o, p incipalmen e, apo e de nu ien es, i adiación y agi ación lib e en la columna de agua, demos ando una g an plas icidad en e a su mo ología en la na u aleza. 2. Las medidas de la luo escencia de la clo o ila omadas in i o como indicado del es és del cul i o, se man u ie on es ables du an e odo el expe imen o, obse ándose di e encias en e los anques con ol y los anques a amien o, pa a el caso de Hypnea spinella, lo que es á elacionado con sus capacidad o osin é ica bajo condiciones de limi ación de nu ien es. 3. Todas las especies mos a on un aumen o de la p oducción, en las semanas con apo e de nu ien es, a excepción de Hyd opun ia co nea que se man u o es able. Las mayo es p oducciones medias ue on obse adas pa a Hyd opun ia co nea e Hypnea spinella en compa ación a las ob enidas en el sis ema de co-cul i o de Jania adhae ens y Halopi hys incu a. 4. En condiciones de apo e de nu ien es las capacidades de bio il ación pa a odas las especies ensayadas, alcanza on alo es medios de NUE supe io es al 40% en Hyd opun ia co nea e Hypnea spinella llegándose a de e mina alo es del 100%, y en el caso del co-cul i o (Jania adhae ens y Halopi hys incu a) llegando al100% du an e odo el expe imen o, lo que es á di ec amen e elacionado con los lujos de amonio en el sis ema. En cuan o a la NUR, la especie más e ec i a ue Hyd opun ia co nea con alo es máximos de 69.7±15.2 mmoles m-2h-1 bajo in e nade o, seguida de las especies del co-cul i o con 50.0±01 mmoles m-2h-1, po úl imo Hypnea spinella con 28.3±0.4 mmoles m-2h-1, en condiciones del ex e io . Conclusiones 70 5. El apo e de nu ien es p odujo el aumen o espe ado en la concen ación de pigmen os o osin é icos (clo o ila y icobilip o eínas) bajo las condiciones ensayadas, cumpliéndose la e olución espe ada de consumo como uen e de ni ógeno, en el caso de las icobilip o eínas, en los pe iodos de limi ación de ni ógeno. 6. Hyd opun ia co nea e Hypnea spinella mos a on los mayo es po cen ajes en la p oducción de polisacá idos ácidos, con posibles aplicaciones bio ecnológicas, en compa ación con las especies co-cul i adas, lo que concue da con la e olución ob enida pa a las elaciones C:N. Es e hecho es á di ec amen e elacionado con el ipo de me abolismo u ilizado po los dos g upos de especies, siendo Halopi hys incu a y Jania adhae ens p oduc o as de me aboli os secunda ios (H. incu a) o es uc u as calci icadas (J. adhae ens), en de imen o de sus ancias del me abolismo p ima io como los polisacá idos es uc u ales. Re e encias bibliog á icas 71 7. Re e encias bibliog á icas Abi ami, R G., Kowsalya, S. 2011. Nu ien and Nu aceu ical Po en ials o Seaweed Biomass Ul a lac uca and Kappaphycus al a ezii. Jou nal o Ag icul u al Science and Technology. Volume 5, No.1 (Se ial No.32). Ab eu, M H., Pe ei a, R., Ya ish, C., Buschmann, A H., Sousa-Pin o, I. 2011. IMTA wi h G acila ia e miculophylla: P oduc i i y and nu ien emo al pe o mance o he seaweed in a land-based pilo scale sys em. Aquacul u e. Volume 312:77–87. Abdala-Díaz, R T., Chab illón, M., Cabello-Pasini, A., López Sole , B., Figue oa, F L. 2010. E ec o de los polisacá idos de Po phy idium c uen um sob e la ac i idad de la línea celula de mac ó agos mu inos RAW 264.7. 36(4:345- 353. Abdala-Díaz, R T., Chab illón, M., Cabello-Pasini, A., Gómez-Pinche i, J L., Figue oa, F L. 2011. Cha ac e iza ion o polysaccha ides om Hypnea spinella (Giga inales) and Halopi hys incu a (Ce amiales) and hei e ec on RAW 264.7 mac ophage ac i i y. Jou nal o Applied Phycology. Volume 23, Numbe 3, Page 523. Acke o s, H., Enell, M. 1990. Discha ge o nu ien s om Swedish ish a ming o adjacen sea a eas. Ambio 19(1): 28–35. Aguile a, J., Bischo , K., Ka s en, U., Hanel , D., Wiencke, C. 2002. Seasonal a ia ion in ecophysiological pa e ns in mac oalgae om an A c ic jo d. II. Pigmen accumula ion and biochemical de ence sys ems agains high ligh s ess. Ma ine Biology 140.6:1087-1095. Aguile a, J., Figue oa F.L., Häde , D-P., Jiménez C., 2008. Pho oinhibi ion and pho osyn he ic pigmen eo ganisa ion dynamics in ligh /da kness cycles as pho op o ec i e mechanisms o Po phy a umbilicalis agains damaging e ec s o UV adia ion. Scien ia Ma ina, Vol. 72, Nº 1. Al es, A., Ca idade, S G., Mano, F., Sousa, R A., Reis, R L. 2010. Ex ac ion and physico-chemical cha ac e iza ion o a e sa ile biodeg adable Re e encias bibliog á icas 72 polysaccha ide ob ained om g een algae. Ca bohyd a e esea ch. 345(15), 2194-2200. Anas asakis, K., Ross, A B., Jones, J M. 2011. Py olysis beha iou o he main ca bohyd a es o b own mac o-algae. Fuel 90, 598–607. And iamanan oaninaa, H., Rinaudo, M. 2010. Cha ac e iza ion o he algina es om i e madagascan b own algae. Ca bohyd a e Polyme s 82:555–560. Angelis, S., No ak, A C., Sydney, E B., Soccol, V T., Ca alho, J C., Pandey, A., Noseda, M D., Tholozan, J L., Lo quin, J., Soccol, C R. 2012. Co-cul u e o mic oalgae, cyanobac e ia, and mac omyce es o exopolysaccha ides p oduc ion: p ocess p elimina y op imiza ion and pa ial cha ac e iza ion. Applied biochemis y and bio echnology, 167(5), 1092-1106. A ad, S M., Le y-On man, O. 2010. Red mic oalgal cell-wall polysaccha ides: bio echnological aspec s. Cu en opinion in bio echnology. 21(3), 358-364. A aoz, R., Häde , D P. 1997. Ul a iole adia ion induces bo h deg ada ion and syn hesis o phycobilisomes in Nos oc sp.: a spec oscopic and biochemical app oach. FEMS Mic obiol Ecol 23:301-313. A huko ala, Y., Ahn, G N., Jee, Y H., Kim, G Y., Kim, S H., Ha, J H., Jeon, Y J. 2009. An ip oli e a i e ac i i y o sul a ed polysaccha ide isola ed om an enzyma ic diges o Ecklonia ca a on he U-937 cell line. Jou nal o applied phycology, 21(3), 307-314. Bee , S., Eshel, A. 1985. De e ming phycoe y h in and phycocyanin concen a ions in aqueous c ude ex ac s o ed algae. Aus . J. Ma . F eshw. Res. 36: 785–792. Bee , L L., Boyd, E S., Pe e s, J W., Posewi z, M C. 2009. Enginee ing algae o biohyd ogen and bio uel p oduc ion. Ene gy Bio echn. 20(3): 264-271. Beze a, A F., Ma inho-So iano, E. 2010. Cul i a ion o he ed seaweed G acila ia bi diae (G acila iales, Rhodophy a) in opical wa e s o no heas B azil. Biomass and Bioene gy. Volume 34:1813–1817. Biskup, S., Be occi, I., A enas, F., Tuya, F. 2014. Func ional esponses o ju enile Re e encias bibliog á icas 73 kelps, Lamina ia och oleuca and Sacco hiza polyschides, o inc easing empe a u es. Aqua ic Bo any 113: 117– 122. Bixle , H J., Po se, H. 2011. A decade o change in he seaweed hyd ocolloids indus y. Jou nal o Applied Phycology, 23(3), 321-335. Bo gogna, M., Bellich, B., Cesà o, A. 2011. Ma ine polysaccha ides in mic oencapsula ion and applica ion o aquacul u e: “F om Sea o Sea”. Ma ine d ugs. 9(12), 2572-2604. Bouhlal, R., Haslin, C., Che mann, J C., Colliec-Jouaul , S., Sinquin, C., Simon, G., Ce an ola, S., Riadi, H., Bou gougnon, N. 2011. An i i al Ac i i ies o Sul a ed Polysaccha ides Isola ed om Sphae ococcus co onopi olius (Rhodophy ha, Giga inales) and Boe geseniella huyoides (Rhodophy a, Ce amiales). Ma . D ugs 9, 1187-1209. Boyd, C E. 2003. Guidelines o aquacul u e e luen managemen a he a m- le el. Aquacul u e 226:101– 112. B own, E M., Allsopp, P J., Magee, P J., Gill, C I., Ni ecki, S., S ain, C R., McSo ley, E M. 2014. Seaweed and human heal h. Nu i ion e iews, 72(3), 205-216. Bun ing, S W., Shpigel, M. 2009. E alua ing he economic po en ial o ho izon ally in eg a ed land-based ma ine aquacul u e. Aquacul u e 294: 43-51. Buschmann, A H., Co ea, J A., Wes e meie , R., He nández-González M C., No ambuena, R. 2001. Red algal a ming in Chile: a e iew. Aquacul u e 194. 203–220. Buschmann, A., He nández-González, M C., A anda, C., Chopin, T., Neo i, A., Halling, C., T oell, M. 2008a. Ma icul u e was e managemen . In: S.E. Jø gensen and B.D. Fa h (Eds.), Encyclopaedia o Ecology. Vol. 3, Else ie , Ox o d, 2463-2475. Buschmann, A.H., Va ela, D.A., He nández-González, M.C., Huo inen P., 2008b. Oppo uni ies and challenges o he de elopmen o an in eg a ed seaweed-based aquacul u e ac i i y in Chile: de e mining he physiological Re e encias bibliog á icas 74 capabili ies o Mac ocys is and G acila ia as bio il e s. J. Appl. Phycol. 20: 571–577. Cahill, P L., Hu d, C L., Lokman, M. 2010. Keeping he wa e clean — Seaweed bio il a ion ou pe o ms adi ional bac e ial bio ilms in eci cula ing aquacul u e. Aquacul u e 306:153–159. Ca on-Kawagoshi, R Y., Elle, B Y., Co e V J ., Sa oh, S., No oya, M, Fuji a, D. Low wa e exchange G acila iopsis bailiniae Zhang & B.M. Xia. 2014. Cul u e in in ensi e milk ish cul u e e luen s: e ec s o seaweed densi y on seaweed p oduc ion and e luen ea men . Aquacul In 22:573–584. Casas-Valdez, M., He nández-Con e as, H., Ma ín-Ál a ez, A., Aguila-Ramí ez, R N. 2006. The seaweed Sa gassum (Sa gassaceae) as opical al e na i e o goa s' eeding. Re is a de Biología T opical. 54(1), 83-92. Cas o, R., Piazzon, M C., Za a, I., Lei o, J., Noya, M., Lamas, J. 2006. S imula ion o u bo phagocy es by Ul a igida C. Aga dh polysaccha ides. Aquacul u e. 254(1), 9-20. Ca alcan e Ba oso, F E., Gu gel Rod igues, J A., Ma ins To es, V., Holanda Sampaio, A., Lobo Fa ias, V R. 2007. E ec o sul a ed polysaccha ides ex ac ed om he ed ma ine alga Bo yocladia occiden alis in sh imp Li openaeus annamei pos -la ae. Re is a Ciência Ag onômica. Volumen 38, Núme o 1, p. 58. Chan, C-X., Ho, C-L., Phang, S M. 2006. T ends in seaweed esea ch. T ends in Plan Science ol.11 No.4:165-166. Cha opadhyay, K., Ma eu, C G., Mandal, P., Pujol, C A., Damon e, E B., Ray, B. 2007. Galac an sul a e o G a eloupia indica: Isola ion, s uc u al ea u es and an i i al ac i i y. Phy ochemis y. 68(10), 1428-1435. Chá es, L D. S., Nicolau, L A D., Sil a, R O., Ba os, F C N., F ei as, A L P., A agão, K S., Medei os, J V R. 2013. An iin lamma o y and an inocicep i e e ec s in mice o a sul a ed polysaccha ide ac ion ex ac ed om he ma ine ed algae G acila ia cauda a. Immunopha macology and immuno oxicology, 35(1), 93-100. Re e encias bibliog á icas 81 La ique, S., Che nane, H., Manso i, M., Kaoua, M E. 2013. Seaweed liquid e ilize e ec on physiological and biochemical pa ame e s o bean plan (Phaesolus ulga is a ie y Paulis a) unde hyd oponic sys em. Eu opean Scien i ic Jou nal, olumen 9, Núme o 30, p. 174. La don, L., Hélias, A., Sial e, B., S eye , J P., Be na d, O. 2009. Li e-Cycle Assessmen o Biodiesel P oduc ion om Mic oalgae. En i onmen al Science & Technology 43 (17), 6475-6481. Lei o, J M., Cas o R., A anz J A., Lamas, J. 2007. Immunomodula ing ac i i ies o acidic sulpha ed polysaccha ides ob ained om he seaweed Ul a igida C. Aga dh. In e na ional Immunopha macology 7 879–888. Lideman, Nishiha a, G N., No o, T., Te ada, R. 2013. E ec o empe a u e and ligh on he pho osyn hesis as measu ed by chlo ophyll luo escence o cul u ed Eucheuma den icula um and Kappaphycus sp. (Sumba s ain) om Indonesia. J Appl Phycol 25:399–406 Mao, W., Zang, X., Li, Y., Zhang, H. 2006. Sul a ed polysaccha ides om ma ine g een algae Ul a congloba a and hei an icoagulan ac i i y. Jou nal o Applied phycology. 18(1), 9-14. Ma ín, A., Casas-Valdez, M., Ca illo, S., He nández, H., Mon oy, A., Sanginés, L., Pé ez-Gil, F. 2009. The ma ine algae Sa gassum spp. (Sa gassaceae) as eed o sheep in opical and sub opical egions. Re . Biol. T op. Vol. 57 (4): 1271-1281. Ma inho-So iano, E. 2001. Aga polysaccha ides om G acila ia species (Rhodophy a, G acila iaceae). Jou nal o Bio echnology Volume 89: 81–84. Ma inho-So iano, E., Bou e , E. 2003. E ec s o season on he yield and quali y o aga om G acila ia species (G acila iaceae, Rhodophy a). Bio esou ce Technology 90 329–333. Ma inho-So iano, E., Nunes, S O., Ca nei o, M A A., Pe ei a, D C. 2009. Nu ien s emo al om aquacul u e was ewa e using he mac oalgae G acila ia bi diae. Biomass and Bioene gy 33:327-331. Re e encias bibliog á icas 82 Ma sham S., Sco G W., Tobin M L. 2007. Compa ison o nu i i e chemis y o a ange o empe a e seaweeds. Food Chemis y 100, 1331–1336. Ma ínez B., Rico J. 2008. Changes in nu ien con en o Palma ia palma a in esponse o changes in nu ien o a iable ligh and upwelling in no he n Spain. Jou nal o Phycology. 44:50-59 Ma a, L., Sil a, J., Schuenho , A., San os, R., 2006. The e ec s o ligh and empe a u e on he pho osyn hesis o he Aspa agopsis a ma a e aspo ophy e (Falkenbe gia u olanosa), cul i a ed in anks. Aquacul u e 252: 12–19. Ma a, L., Schuenho , A., San os, R., 2010. A di ec compa ison o he pe o mance o he seaweed bio il e s, Aspa agopsis a ma a and Ul a igida. J Appl Phycol 22: 639-644. Maza asa, I., Olsen, Y S., Mayol, E., Ma bá, N., Dua e, C M. 2013. Rapid g ow h o seaweed bio echnology p o ides oppo uni ies o de eloping na ions. Na u e bio echnology olumen 3, numbe 7: 591-592. McHugh D J. 2003. A guide o he seaweed indus y. FAO Fish Biol Tech Pap 441:52–72. Me zge P., La geau C. 2005. Bo yococcus b aunii: a ich sou ce o hyd oca bons and ela ed e he lipids. Appl Mic obiol Bio echnol. 66:486– 96. Mo is Que edo H J., Ma ínez Man ique C., Abdala Díaz R., Cobas Pupo G. 2000. E idencias p elimina es de la ac i idad Inmunomodulado a de la acción polisacá ida de o igen ma ino PC-1. Re Cuba Oncol 16:171–176 Msuya, F E., Neo i A. 2008. E ec o wa e ae a ion and nu ien load le el on biomass yield, N up ake and p o ein con en o he seaweed Ul a lac uca cul u ed in seawa e anks. J Appl Phycol 20:1021–1031. Msuya, F E., Kyewalyanga, M S., Salum, D. 2006. The pe o mance o he seaweed Ul a e icula a as a bio il e in a low- ech, low-cos , g a i y gene a ed wa e low egime in Zanziba , Tanzania. Aquacul u e 254: 284– Re e encias bibliog á icas 83 292. Nagao, K., Yanagi a, T. 2005. Conjuga ed a y acids in ood and hei heal h bene i s. Jou nal o Bioscience and Bioenginee ing. The Socie y o Bio echnology, Japan. Vol. 100, No. 2, 152–157. Neo i, A. 2011. “G een wa e ” mic oalgae: he leading sec o in wo ld aquacul u e. Jou nal o Applied Phycology, Volumen 23, Núme o 1, pp. 143 – 149. Neo i, A. 2008. Essen ial ole o seaweed cul i a ion in in eg a ed mul i- ophic aquacul u e a ms o global expansion o ma icul u e: an analysis. J. Appl. Phycol. 20: 567–570. Neo i, A., Chopin, T., T oell, M., Buschmann, A.H., K aeme , G.P., Halling, C., Shpigel, M., Ya ish, C. 2004. In eg a ed aquacul u e: a ionale, e olu ion and s a e o he a emphasizing seaweed bio il a ion in mode n ma icul u e. Aquacul u e, 231, 361-391. Neo i, A., Shpigel, M., Ben-Ez a, D. 2000. A sus ainable in eg a ed sys em o cul u e o ish, seaweed and abalone. Aquacul u e 186: 279-291. Neo i, A., Ragg, N L C., Shpigel, M. 1998. The in eg a ed cul u e o seaweed, abalone, ish and clams in modula in ensi e land-based sys ems: II. Pe o mance and ni ogen pa i ioning wi hin and abalone (Halio is ube cula a) and mac oalgae cul u e sys em. Aquacul u e Enginee ing 17: 215-239. Neo i, A, K om, M D., Ellne , S p., Boyd, C E, Poppe , D., Rabino i ch, R., Da ison, P J., D i , O., Zube , D., Ucko, M., Angel, D., Go din, H. 1996. Seaweed bio il e s as egula o s o wa e quali y in in eg a ed ish-seaweed cul u e uni s. Aquacul u e 141: 183- 199. Nob e, A M., Robe son-Ande sson, D., Neo i, A., Sanka , K. 2010. Ecological– economic assessmen o aquacul u e op ions: Compa ison be ween abalone monocul u e and in eg a ed mul i- ophic aquacul u e o abalone and seaweeds. Aquacul u e 306:116–126. Re e encias bibliog á icas 84 O duña-Rojas, J., Ga cía-Camacho, K Y., O ozco-Meye , P., Ríosmena- Rod íguez, R., Pacheco-Ruiz, I., Ze uche-González, J A., Meling-López, A E. 2008. Aga p ope ies o wo species o G acila iaceae om he Gul o Cali o nia, México. J Appl Phycol 20:169–175. Palme , P J., Palme , C J., Bu ke, M J., Bu ke, J B. 2007. De elopmen s in con olled g een-wa e la al cul u e echnologies o es ua ine ishes in Queensland, Aus alia and elsewhe e. Aquacul u e, Volumen 272, Núme o 1, pp. 1 – 21. Pa sons, T.R., Mai a, Y., Lalli, C.M., 1984. A manual o chemical and biological me hods o seawa e analysis. Pe gamon P ess, Ox o d. 173p. Peng, Y, Xie, E., Zheng, K., F edimoses, M., Yang, X., Zhou, X., Wang, Y., Yang, B., Lin, Y., Liu, J., Liu, Y. 2013. Nu i ional and chemical composi ion and an i i al ac i i y o cul i a ed seaweed Sa gassum naozhouense Tseng e Lu. Ma . D ugs 11: 20-32. Pe ei a, L., Amado, A M., C i chley, A T., an de Velde, F., Ribei o-Cla o, P J A. 2009. Iden i ica ion o selec ed seaweed polysaccha ides (phycocolloids) by ib a ional spec oscopy (FTIR-ATR and FT-Raman). Food Hyd ocolloids. Volumen 23, Núme o 7, pp. 1903 – 1909. Pe ei a, L., C i chley, A T., Amado, A M., Ribei o-Cla o, P J A. 2009. A compa a i e analysis o phycocolloids p oduced by unde u ilized e sus indus ially u ilized ca ageenophy es (Giga inales, Rhodophy a). J Appl Phycol 21:599–605. Peso-Echa i, P., F on ela-Sase a, C., González-Be múdez, C A., Ros-Be uezo, G F., Ma ínez-G aciá, C. 2012. Polisacá idos de algas como ing edien es uncionales en acuicul u a ma ina: algina o, ca agena o y ul ano. Re is a de biología ma ina y oceanog a ía. 47(3), 373-381. P abha, V., P akash, D J., Sudha, P N. 2013. Analysis o bioac i e compounds and an imic obial ac i i y o ma ine algae Kappaphycus al a ezzi using h ee sol en ex ac s. In e na ional Jou nal o Pha maceu ical Sciences and Resea ch, 4(1), 306-310. Re e encias bibliog á icas 85 Pomin, V H., Mou ão, P A S. 2008. S uc u e, biology, e olu ion, and medical impo ance o sul a ed ucans and galac ans. Glycobiology ol. 18 no. 12 pp. 1016–1027. Po e , C., K om, M D., Robbins, M G., B ickel, L., Da idson, A. 1987. Ammonia exc e ion and o al N budge o gil head sea b eam (Spa us au a a) and i s e ec s o wa e quali y condi ions. Aquacul u e 66: 287–297. Qi, H., Zhao, T., Zhang, Q., Li, Z., Zhao, Z., Xing, R. 2005. An ioxidan ac i i y o di e en molecula weigh sul a ed polysaccha ides om Ul a pe usa Kjellm (Chlo ophy a). Jou nal o Applied Phycology. 17(6), 527-534. Ramí ez-Higue a, A., Que edo-Co ona, L., Paniagua-Cas o, N., Chamo o- Ceballos, G., Millia -Ga cia, A., Ja amillo-Flo es, M E. 2014. An ioxidan enzymes gene exp ession and an ihype ensi e e ec s o seaweeds Ul a linza and Lessonia abecula a in a s ed a high- a and high-suc ose die . Jou nal o Applied Phycology. Volume 26, pp 597-605. Read, P., Fe nándes, T. 2003. Managemen o en i onmen al impac s o ma ine aquacul u e in Eu ope. Aquacul u e 226:139–163. Ribei o Zucchi, M., Necchi, O. J . 2001. E ec o empe a u e, i adiance and pho ope iod on g ow h and pigmen con en s in some eshwa e ed algae in cul u e. Phycological Resea ch 49:103-114. Rinaudo, M. 2008. Main p ope ies and cu en applica ions o some polysaccha idesas bioma e ials. Polyme In e na ional, 57(3), 397–430. Rocha de Souza, M C., Teixei a Ma ques, C., Gue a Do e. CM., Fe ei a da Sil a, F R., Oli ei a Rocha, H A., Lisboa Lei e, E. 2007. An ioxidan ac i i ies o sul a ed polysaccha ides om b own and ed seaweeds. J Appl Phycol 19:153–160. Rojan P J., Anisha, G S., Madha an Nampoo hi i, K., Pandey, K. 2011. Mic o and mac oalgal biomass: A enewable sou ce o bioe anol. Bio esou ce Technology 102:186–193. Saha an, B S., Sha ma, D., Sahu, R., Sahin, O., Wa en, A. 2013. Towa ds Re e encias bibliog á icas 86 algalbio uel p oduc ion: A concep o G een bio ene gy de elopmen . Inno a i e Romanian Food Bio echnology, 12, 1-21. San elices, B., Do y, M S. 1989. A e iew o G acila ia a ming. Aquacul u e 78, 95–133. Sanz, Y., Collado, M., Dalmau, J. 2006. Con ibu ion o he in es inal mic obio a and he genus Bi idobac e ium o he hos de ense mechanisms agains gas oin es inal pa hogens. Ac a Pedia ica Española. 64.2: 74-78. Schuenho , A., Shpigel, M., Lupa sch, I., Ashkenazi, A., Msuya, F E., Neo i, A. 2003. A semi- eci cula ing, in eg a ed sys em o he cul u e o ish and seaweed. Aquacul u e 221: 167-181. Schuenho , A., Ma a L., San os, R., 2006. The e aspo ophy e o Aspa agopsis a ma a as a no el seaweed bio il e . Aquacul u e 252: 3–11. Se e i a hne, M., Lee, K-H., Ahn, C-B., Pa k, P J., Je, J Y. 2012. E alua ion o an ioxidan , an i-alzheime and an i-in lama o y ac i i ies o enzyma ic hyd olysa es om edible B own seaweed (Lamina ia japonica). Jou nal o Food Biochemis y 36:207–216. Sheih, I-C., Fang,T J., Wu, T-K., And Lin, P H. 2010. An icance and an ioxidan ac i i ies o he pep ide ac ion om algae p o ein was e. J. Ag ic. Food Chem. 58, 1202–1207. Shpigel, M., Neo i, A. 2007. Mic oalgae, mac oalgae, and bi al es as bio il e s in land-based ma icul u e in Is ael. In Ecological and Gene ic Implica ions o Aquacul u e Ac i i ies, edi ed by Be , T.M. Do d ech , The Ne he lands: Sp inge . Shpigel, M., Neo i, A., Poppe , D.M., Go din, H. 1993. A p oposed model o "en i onmen ally clean" land-based cul u e o ish, bi al es and seaweeds. Aquacul u e 117: 115-128. Sil a, R O., San os, G M P D., Nicolau, L A D., Luce i, L T., San ana, A P M., Cha es, L D S., Medei os, J V R. 2011. Sul a ed-polysaccha ide ac ion om ed algae G acila ia cauda a p o ec s mice gu agains e hanol-induced Re e encias bibliog á icas 87 damage. Ma ine d ugs, 9(11), 2188-2200. Singh, A., Singh-Nigam, P., Mu phy, J D. 2011.Mechanism and challenges in comme cialisa ion o algal bio uels. Bio esou ce Technology. 102(1): 26-34. Sokolo a, E V., Ba abano a, A O., Homenko, V A., Solo ’e a , T F., Bogdano ich, R N., Ye mak, I M. 2011. In i o and ex i o s udies o an ioxidan ac i i y o ca ageenans, sul a ed polysaccha ides om ed algae. Bulle in o Expe imen al Biology and Medicine, Vol. 150, No. 4:426-428. S engel, D B., Connan, S., Poppe , Z. A. 2011. Algal chemodi e si y and bioac i i y: sou ces o na u al a iabili y and implica ions o comme cial applica ion. Bio echnology ad ances. 29(5), 483-501. Tala ico, L B., Pujol, C A., Zibe i, R G M., Fa ía P C S., Noseda, M D., Dua e M E R., Damon e, E B. 2005. The an i i al ac i i y o sul a ed polysaccha ides agains dengue i us is dependen on i us se o ype and hos cell. An i i al esea ch. 66(2), 103-110. Tala ico, L B., Zibe i, R G M., Fa ia, P C S., Scola o, L A., Dua e, M E R., Noseda, M D., Pujol, C A., Damon ea, E B. 2004. An i-he pes simplex i us ac i i y o sul a ed galac ans om he ed seaweeds Gymnogong us g i i hsiae and C yp onemia c enula a. In e na ional Jou nal o Biological Mac omolecules 34:63–71. Tanaka, Y., S anley, C S., Wald on- Edwa d D. 1968. S udies on he Inhibi ion o in es inal abso p ion o adioac i e s on ium. Canad. Med. Ass. J. ol. 98, 1179-1182. Taylo , R B., Peek, J T A., Rees, T A V. 1998. Scaling o ammonium up ake by seaweeds o su ace a ea. olume a io:geog aphical a ia ion and he ole o up ake by passi e di usion. Ma Ecol P og Se 169:143-148. To a , A., Mo eno, C., Mánuel-Vez, M P., Ga c a-Va gas, M. 2000. En i onmen al impac s o in ensi e aquacul u e in ma ine wa e s. Wa e Resea ch, Volume 34, Issue 1, Pages 334–342. T oell, M., Halling, C., Neo i, A., Chopin, T., Buschmann, A H., Kau sky, N., Re e encias bibliog á icas 88 Ya ish, C. 2003. In eg a ed ma icul u e: asking he igh ques ions. Aquacul u e, 226, 69–90. T oell, M., Joyce, A., Chopin, T., Neo i, A., Buschmann, A H., Fang, J-G. 2009. Ecological enginee ing in aquacul u e - Po en ial o in eg a ed mul i- ophic aquacul u e (IMTA) in ma ine o sho e sys ems. Aquacul u e 297:1-9. Tseng, C K. 2001. Algal bio echnology indus ies and esea ch ac i i ies in China. Jou nal o Applied Phycology 13: 375–380. Ukabi, S., Dubinsky, Z., S einbe ge , Y., Is ael, A. 2013. Tempe a u e and i adiance e ec s on g ow h and pho osyn hesis o Caule pa (Chlo ophy a) species om he eas e n Medi e anean. Aqua ic Bo any 104, 106–110. an de Velde, F., de Rui e , G A. 2002. Ca ageenan. In A. S einbüchel, S. DeBae s, E. J. VanDamme (Eds.), Biopolyme s. Vol. 6: Polysaccha ides II: Polysaccha ides om euka yo es, Vol. 6 (pp.245–274). Weinheim: Wiley- VCH. Vázquez-Del ín, E., Robledo, D., F eile-Peleg ín, Y. 2014. Mic owa es-assis ed ex ac ion o he ca ageenan om Hypnea musci o mis (Cys ocloniaceae, Rhodophy a). J. Appl Phycol 26:901-907. Vie a, M P., Gómez Pinche i, J L., Cou ois de Viçose, G., Bilbao, A., Suá ez, S. Ha oun, R J., Izquie do, M S. 2005. Sui abili y o h ee ed mac oalgae as a eed o he abalone Halio is ube cula a coccinea Ree e. Aquacul u e 248: 75– 82. Wang, X., Zhanga, Z., Yao, Z., Zhao, M., Qic, H. 2013. Sul a ion, an icoagulan and an ioxidan ac i i ies o polysaccha ide om g een algae En e omo pha linza. In e na ional Jou nal o Biological Mac omolecules 58 225– 230. Wang, J., Zhang, Q., Zhang, Z., Li, Z. 2008. An ioxidan ac i i y o sul a ed polysaccha ide ac ions ex ac ed om Lamina ia japónica. In e na ional Jou nal o Biological Mac omolecules 42:127–132. Re e encias bibliog á icas 89 Wellbu n, A R., 1994. The spec al de e mina ion o chlo ophylls a and b, as well as o al ca o enoids, using a ious sol en s wi h spec opho ome e s o di e en esolu ion. J. Plan Physiol. 144: 307–313. Wijesinghe, W A J P., Ahn, G., Lee, W-W., Kang, M C., Kim, E A., Jeon, Y-J. 2013. An i-in lamma o y ac i i y o phlo o annin- ich e men ed Ecklonia ca a p ocessing by-p oduc ex ac in lipopolysaccha ide-s imula ed RAW 264.7 mac ophages. J Appl Phycol 25:1207–1213. Wi ouw, M., De Cle cq, E. 1997. Sul a ed polysaccha ides ex ac ed om sea algae as po en ial an i i al d ugs. Gen. Pha mac. Vol. 29, No. 4, pp. 497– 51. Wolowicz, K. 2005. The ishp in o aquacul u e. Can he blue e olu ion be sus ainable? Rede ining P og ess. Cali o nia, USA. Zemke-Whi e, L., Ohno, M. 1999. Wo ld seaweed u ilisa ion: An end-o -cen u y summa y. 1999. Jou nal o Applied Phycology 11: 369–376. Zhang, Q., Li, N., Liu, X., Zhao, Z., Li, Z., and Xu, Z .2004. The s uc u e o a sul a ed galac an om Po phy a hai anensis and i s in i o an ioxidan ac i i y. Ca bohyd a e Resea ch 339:105–111. Zhang, Q.,Yu, P., Li, Z., Zhang, H., Xu, Z., Li, P. 2003. An ioxidan ac i i ies o sul a ed polysaccha ide ac ions om Po phy a hai anesis. Jou nal o Applied Phycology 15: 305–310. Zhao, X., Xue, C H., Li, Z-J., Cai, Y-P., Liu, H-Y., Qi H-T. 2004. An ioxidan and hepa op o ec i e ac i i ies o low molecula weigh sul a ed polysaccha ide on Lamina ia japonica. Jou nal o applies phycology. 16:111-115. Zou, D., Gao, K. 2014. Tempe a u e esponse o pho osyn he ic ligh - and ca bon- use cha ac e is ics in ed seaweed G acila iopsis lemanei o mis (G acila iales, Rhodophy a)1. J. Phycological Socie y o Ame ica. 50, 366- 375.