Canales intracelulares de cloro (CLICs). Prometedoras dianas terapéuticas frente al cáncer

Rafael Ramírez Vázquez UNIVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE FARMACIA Universidad de Sevilla Facultad de Farmacia Grado en Farmacia Trabajo Fin de Grado Trabajo bibliográfico Canales intracelulares de cloro (CLICs). Prometedoras dianas terapéuticas frente al cáncer Rafael Ramírez Vázquez Departamento de Química Orgánica y Farmacéutica Tutora: Margarita Luisa Vega Holm Facultad de Farmacia Sevilla, 21 de julio de 2021 RESUMEN Los canales de cloro pertenecen a una familia de canales la cual la podemos encontrar dividida en canales de cloro transmembrana, que actúan a nivel de la membrana celular, o en canales intracelulares de cloro, los cuales se encuentran en el interior de la célula, pero también pueden actuar a nivel de la membrana de los orgánulos celulares. En los últimos años, estos canales han ido ganando importancia debido a que se han relacionado con numerosos procesos fisiológicos donde por ejemplo destacan la regulación del ciclo celular, la proliferación celular o la apoptosis. Además, en estudios recientes, se ha comprobado que estos canales aparecen sobreexpresados o regulados a la baja en determinados tipos de cáncer, enfermedad que preocupa gravemente a la población actual y que presenta una alta tasa de mortalidad. Por ello, en las últimas investigaciones, al igual que ocurrirá en investigaciones futuras cercanas, se está tratando de estudiar con más profundidad a esta familia de canales, así como su relación con el cáncer, para desarrollar moléculas frente a ellos, con el fin de que se proponga como una importante diana terapéutica frente a esta enfermedad. Aquí es donde se centra el objetivo principal de esta revisión, en estudiar los distintos tipos de canales de cloro, su relación con determinados tipos de cáncer y en encontrar moléculas químicas que puedan actuar frente a estos canales para convertirse en un nuevo tratamiento para el cáncer. Para hacer este trabajo de revisión bibliográfica se han utilizado distintas bases de datos como: Scifinder, PubMed, Scopus y Google Scholar. En lo que respecta al tratamiento actual, como se puede ver en el apartado de resultados y discusión, existe algún fármaco que ya ha sido aceptado por la FDA u otros que están en estudio, ya que mayoritariamente lo que se está realizando es un reposicionamiento de fármacos, donde se utilizan fármacos ya comercializados frente a nuevas dianas terapéuticas. Palabras clave: canales de cloro, cáncer, diana terapéutica, inhibidores, potenciadores. GLOSARIO DE ABREVIATURAS AMPc - Adenosín monofosfato cíclico ANO1 - Anoctamina-1 ARNip - Ácido ribonucleico pequeño de interferencia ASC - Proteína adaptadora asociada a la apoptosis ATP - Adenosín trifosfato Ca2+ - Catión de calcio CFTR - Regulador de conductancia transmembranal de la fibrosis CLIC1 - Canal intracelular de cloro 1 CLIC2 - Canal intracelular de cloro 2 CLIC3 - Canal intracelular de cloro 3 CLIC4 - Canal intracelular de cloro 4 CLICs - Canales intracelulares de cloro Co2+ - Catión de cobalto FDA - Administración de Medicamentos y Alimentos de los Estados Unidos GAPDH - Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa IARC - Agencia Internacional de Investigación sobre el Cáncer IL-18 - Interleucina 18 IL-1-beta - Interleucina 1 beta K+ - Catión de potasio NLRP3 - Dominio de unión a nucleótidos rico en leucina con 3 dominios de pirina OMS - Organización Mundial de la Salud PKA - Enzima proteín quinasa TMEM16A - Miembro transmembrana 16A - 7 - ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................- 9 - 1.1. Cáncer y canales de cloro ...................................................................................- 9 - 1.2. CFTR ................................................................................................................ - 11 - 1.3. TMEM16A/ANO1 ............................................................................................. - 13 - 1.4. CLICs ................................................................................................................ - 15 - 2. OBJETIVOS ...................................................................................................................... - 17 - 3. METODOLOGÍA ............................................................................................................... - 17 - 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................................. - 18 - 4.1. Potenciación o corrección de CFTR ................................................................... - 19 - 4.2. Inhibición de TMEM16A/ANO1 ........................................................................ - 21 - 4.3. CLIC1 ............................................................................................................... - 23 - 4.3.1. Cáncer hepatocelular ........................................................................ - 23 - 4.3.2 Cáncer vesículo biliar ......................................................................... - 24 - 4.3.3. Cáncer gástrico ................................................................................. - 25 - 4.3.4. Cáncer colorrectal ............................................................................. - 26 - 4.3.5. Cáncer pancreático ........................................................................... - 27 - 4.3.6. Inhibición de CLIC1 ........................................................................... - 27 - 4.4. CLIC3 ............................................................................................................... - 29 - 4.4.1. Cáncer gástrico ................................................................................. - 29 - 4.4.2. Cáncer pancreático ........................................................................... - 30 - 4.4.3. Inhibición o potenciación de CLIC3 .................................................... - 30 - 4.5. CLIC4 ............................................................................................................... - 31 - - 8 - 4.5.1. Cáncer colorrectal ............................................................................. - 31 - 4.5.2. Cáncer de riñón ................................................................................ - 31 - 4.5.3. Inhibición o potenciación de CLIC4 .................................................... - 32 - 5. CONCLUSIONES .............................................................................................................. - 33 - 6. BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................. - 33 - - 9 - 1. INTRODUCCIÓN 1.1. Cáncer y canales de cloro En la actualidad, los distintos avances científicos que van apareciendo permiten conocer con mayor profundidad las enfermedades que afectan a la población. Aun así, se sigue teniendo una gran descompensación en relación con lo que se debería saber sobre las mismas. Hay que destacar con gran importancia el caso del cáncer, una de las enfermedades graves que más preocupa. La Agencia Internacional para Investigación en Cáncer (IARC) estimó que en el año 2002 hubo 10,9 millones de casos nuevos de cáncer y 6.723.887 muertes por cáncer en todo el mundo. Estas cifras representan un 22% en la incidencia y mortalidad por cáncer en comparación con las cifras del año 1990, y según la Organización Mundial de la Salud (OMS) el número de casos se elevaría a 15 millones para el pasado año 2020 (Santisteban 2006). El cáncer es una enfermedad que aparece tras una cadena de factores tanto genéticos como epigenéticos, que provoca que las células se multipliquen y crezcan sin ningún control, lo que se conoce como proliferación, evitando así los procesos de muerte celular o apoptosis. Este crecimiento descontrolado va a dar lugar a la formación de grandes masas de células, los denominados tumores. Los problemas fundamentales de la enfermedad del cáncer son explicar los mecanismos bioquímicos y genéticos que dan lugar al crecimiento descontrolado de células cancerosas, así como su capacidad para invadir y metastatizar, y crear tratamientos exitosos que las destruyan, causando un mínimo daño a las células normales (Murray et al. 2014). Se está trabajando con un mayor esfuerzo en el proceso de búsqueda de nuevas dianas terapéuticas como estrategia para combatir esta enfermedad. Entre estas dianas terapéuticas caben destacar unas que están ganando mayor peso en las últimas investigaciones, los canales de cloro (Tabla 1). Estos canales son un tipo de canal aniónico que afectan y contribuyen a muchos procesos celulares, como pueden ser la variación del potencial de la membrana, el volumen celular, el transporte entre membranas y la regulación del pH intracelular. Por ello, cada vez hay más evidencia de que una variación en la conducción de aniones cloruro puede afectar en muchos de - 16 - Tabla 2. Canales intracelulares de cloro en los cánceres gastrointestinales. Adaptado de: (Anderson et al. 2019). Nombre del gen Cáncer Papel Actividad funcional CLIC1 Colorrectal Oncogén Expresión al alza. Se encuentra sobreexpresado en cáncer de colon Pancreático Oncogén Expresión al alza. Sobreexpresión en el 69% de los tumores y asociado a un mal pronóstico del paciente, así como al grado y tamaño del tumor Gástrico Oncogén Expresión al alza. Sobreexposición en el 68% de los cánceres gástricos, correlacionado también con metástasis, proliferación, apoptosis, etc Hepatocelular Oncogén Expresión regulada al alza Vesícula biliar Oncogén Expresión regulada al alza CLIC3 Pancreático Oncogén Expresión al alza. Colabora para promover la progresión de la terapia anticancerígena personalizada - 17 - Nombre del gen Cáncer Papel Actividad funcional Gástrico Oncogén Expresión regulada a la baja. CLIC 4 Colorrectal Oncogén Expresión al alza. Se asocia con una pobre supervivencia del paciente a 5 años Riñón Supresor del tumor Expresión regulada a la baja Posteriormente en esta revisión vamos a ver como los estudios científicos actuales se están basando en obtener distintas moléculas o fármacos que vayan dirigidos a los canales ya nombrados, con el fin de darles un enfoque de diana terapéutica para disminuir con ello los casos de enfermedad de cáncer en la población. 2. OBJETIVOS 1. Explicar la importancia del cáncer en la actualidad y con ello la urgencia del desarrollo de nuevas moléculas frente a dianas terapéuticas como tratamiento. 2. Describir las características de los canales de cloro (intracelulares y transmembranas). 3. Estudiar la relación que presentan los canales de cloro con determinados tipos de cáncer para utilizarlos como futuras dianas terapéuticas. 4. Detallar las nuevas moléculas investigadas que se podrán utilizar como inhibidores o potenciadores de los canales para hacer frente al cáncer. 3. METODOLOGÍA En la revisión bibliográfica realizada se habla sobre los canales de cloro, más concretamente sobre los canales intracelulares de cloro, así como su relación con - 18 - distintos tipos de cáncer para utilizarlos como posibles dianas terapéuticas para futuros tratamientos. Para realizar esta revisión se ha realizado una búsqueda de numerosos artículos con la ayuda de algunas bases de datos tanto de estilo químico como médico, como han sido: Scifinder, donde se ha centrado la mayor parte de la búsqueda, PubMed, Scopus y Science Direct. Además, también se ha usado la herramienta de Google, Google Scholar, conocida como Google académico. Las palabras utilizadas para la búsqueda han sido palabras claves en idioma inglés, donde destacan: `channels´, `chloride´, `intracellular´, `therapeutic target´, `cancer´, `inhibition´, `empowerment´, `correction´, `inhibitors´, `treatment´, `colorrectal´, `pancreatic´, `gastric´, `hepatocellular´, `gallbladder´, `kidney´. Para combinar estos términos se han utilizado marcadores booleanos como AND, OR o AND NOT, para así poder centrar la búsqueda en un determinado tema y encontrar con ello los artículos más adecuados para este. Además, se han tenido en cuenta ciertos criterios de inclusión y exclusión a la hora de realizar la búsqueda en una determinada base de datos. Respecto al idioma, se han buscado publicaciones tanto en idioma inglés como en español, siendo estas publicaciones posteriores a 2015. Si bien es cierto, se han incluido algunos artículos anteriores a este año que reflejaban algún estudio de gran importancia para la revisión, así como también alguna figura destacada. También han sido documentos realizados por la Organización Mundial de la Salud (OMS), así como la página web de la Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitarios (AEMPS) para la búsqueda de determinados fármacos. Para el desarrollo de las moléculas químicas que aparecen en la revisión, las cuales pertenecen a estructuras de fármacos que pueden actuar en los distintos canales de cloro haciéndolos importantes dianas terapéuticas frente al cáncer, se han elaborado con un programa informático dedicado a la química orgánica denominado ChemDraw. 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN En este apartado de la revisión se va a tratar con más profundidad el estudio de los canales intracelulares de cloro, así como la modulación tanto de estos como de los - 19 - canales transmembranas, la cual irá enfocada según el tipo de cáncer, ya que en el que los canales de cloro se encuentren sobreexpresados se necesitarán moléculas inhibidores para contrarrestar las células tumorales, y en el que los canales de cloro se encuentran infraexpresados, se necesitarán potenciadores. 4.1. Potenciación o corrección de CFTR Como ya se ha comentado anteriormente en esta revisión, CFTR es un canal de cloruro con un importante papel en el fluido homeostático a través de distintas membranas celulares. Una de las mutaciones más importantes que afecta a este canal y que va a desembocar en un aumento de la supervivencia de las células cancerosas es la mutación “deltaF508”, donde se produce una disminución de la expresión del canal, que finaliza con una bajada en el número de las especies reactivas de oxígeno y con ello de la apoptosis de las células ya nombradas (Shi et al. 2021). Aunque aún no se tienen aún mecanismos claros, se habla de que esta mutación puede ser corregida por la unión de distintas moléculas llamadas correctores o potenciadores, los cuales pueden unirse directamente a la unión “deltaF508-CFTR”. El único potenciador aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) hoy en día es el Ivacaftor (Figura 6), molécula con la cual se ha demostrado un aumento de la secreciones de aniones de cloro a través del canal CFTR. Se ha realizado un estudio con niños que presentaban la mutación “deltaF508”, a los cuales se le administraba Ivacaftor, en un centro de Londres. Se determinó que este tratamiento mostraba una gran mejoría en los pacientes y aumentaba con ello el tiempo de apertura del canal (Figura 7), lo que conllevaba a una mayor salida de aniones cloruro, aumentando así las especies reactivas de oxígeno y con ello la apoptosis de las células cancerígenas. Además también, se confirmó la efectividad y seguridad del Ivacaftor en situaciones clínicas que no se tienen en consideración en ensayos clínicos (Gomez-Pastrana et al. 2019). Figura 6. Estructura química del Ivacaftor - 20 - Figura 7. Mutación F508del-CFTR corregida con Ivacaftor. Fuente: (White et al. 2015) Más recientemente, la FDA ha aprobado una terapia combinada donde aparecen el Ivacaftor ya nombrado y el Lumacaftor (Figura 8), que en este caso se trata de un corrector, una molécula cuyos estudios iniciales evidenciaron una mejoría en la maduración de CFTR, lo que se acompañó con una mejoría cinco veces mayor del transporte de cloro (De la Hoz et al. 2019). Este ensayo se realizó en personas adultas con la mutación “deltaF508-CFTR” presente, y al igual que en el análisis anterior, la combinación de estos fármacos revelaron un aumento de aproximadamente el 30% en el transporte de cloruro mediado por CFTR en comparación con no haber usado los fármacos (Kumar et al. 2014). En último lugar, la FDA ha dado validez a una terapia combinada con dos correctores como son el Tezacaftor y el Elexacaftor (Figura 9), junto con un potenciador, de nuevo el Ivacaftor. Esta combinación, conocida como TRIKAFTA, es una combinación terapéutica muy novedosa que está dirigida a trastornos gastrointestinales con la posibilidad de una aplicación futura al cáncer, la cual parece tener un perfil de seguridad mejorado en comparación con el Lumacaftor, por lo que será de gran importancia en futuros métodos científicos (Bear 2020). Figura 8. Estructura química del Lumacaftor - 21 - Figura 9. (A) Estructura química del Tezacaftor, (B) Estructura química del Elexacaftor 4.2. Inhibición de TMEM16A/ANO1 Tras mencionar anteriormente a este canal, conocido como TMEM16A o ANO1, cabe añadir que nos encontramos ante un canal de cloruro activado por calcio el cual se expresa ampliamente en muchos tipos de células, tales como las vías respiratorias, el estómago, el páncreas, etc, participando en la secreción de líquido epitelial, la proliferación celular, la excitabilidad neuronal y la transducción de señales (Cil et al. 2019). Por ello, estamos ante una importante diana terapéutica sobre la que se puede actuar para disminuir con ello distintos tipos de cánceres. Aunque este es un tema muy novedoso y aún no se sabe con certeza los procedimientos que pueden llevar a cabo una inhibición del canal TMEM16A, se han estudiado algunas moléculas que pueden influenciar notablemente en el funcionamiento de este, intentando que se reduzca el riesgo del aumento de la proliferación de las células tumorales. Uno de los tipos de cáncer más importante estudiado en la actualidad es el adenocarcinoma pulmonar, sobre el cual puede tener una influencia importante el canal TMEM16A, que tras varias investigaciones se ha visto que se encuentra sobreexpresado cuando tenemos esta enfermedad (Guo et al. 2019). Por ello, se ha descubierto y se está analizando una molécula, la matrina (Figura 10). Esta es un alcaloide natural de Sophora Figura 10. Estructura química de la Matrina - 22 - flavescences con actividades antiproliferativas y proapoptóticas, especialmente en varios tipos de colon humano (Chang and Liu 2020). Es decir, puede actuar frente a células cancerígenas disminuyendo la supervivencia de estas y provocando una muerte celular. Cabe decir que como desventaja tenemos que la actividad de la matrina está limitada por la baja eficacia y su corta vida media (Qian et al. 2021). Tras un primer experimento realizado con células de adenocarcinoma de pulmón de ratón se ha detectado que la matrina puede actuar de inhibidor del TMEM16A, ya que la corriente de TMEM16A disminuye al aumentar la dosis de matrina. Sin embargo, aún no se conocen por completo los sitios sensibles a TMEM16A que puede tener esta nueva molécula descubierta (Guo et al. 2019). Otro de los estudios que se han realizado respecto a este canal ha sido un estudio respecto al cáncer de colon, en el cual se utilizaron líneas celulares de colon de ratón infectado y estas se expusieron frente a cinco compuestos (Figura 11), los cuales inhibieron las corrientes de cloruro activadas por calcio (Zhu et al. 2020). Figura 11. Cinco compuestos inhibidores de las corrientes de cloruro activadas por calcio. Fuente: (Zhu et al. 2020) Por último, otra molécula descubierta capaz de mantener una interacción con el canal TMEM16A es el cobalto, en este caso un catión divalente. Este mecanismo es uno de los que parece estar más claro. Por un lado, como ya se conoce, este canal es un canal dependiente de una corriente de calcio, Ca2+. Por lo tanto, al ser un catión divalente al igual que el cobalto, Co2+, este es capaz de unirse a los sitios de activación del canal donde debería unirse el Ca2+, inhibiendo así la unión de este, por lo que el canal queda bloqueado y con ello la corriente de aniones de cloro (Nguyen et al. 2020). Por otro lado, si nos encontramos ante una saturación de cationes cobalto, se produciría un efecto de - 23 - potenciación del canal TMEM16A, lo que provocaría una apertura descontrolada del canal, con la siguiente salida de aniones cloruro, aumentando así la supervivencia de las células cancerígenas (Nguyen et al. 2021a). 4.3. CLIC1 A sabiendas de apartados anteriores, CLIC1 es el primer canal intracelular de cloro de esta familia que se identificó. Va a actuar como oncogén en distintos procesos celulares, por lo que puede ser clave en investigaciones sobre futuras dianas terapéuticas frente al cáncer. Los primeros estudios realizados han demostrado el papel de este canal en la invasión y metástasis en varios tipos de tumores malignos como el cáncer de hígado, el cáncer colorrectal y el cáncer de próstata, entre otros (Li et al. 2018). Los tipos de cáncer más importantes donde va a tener un efecto este canal son los siguientes: 4.3.1. Cáncer hepatocelular Uno de los tipos de cáncer que más muertes provoca en el mundo es el cáncer de hígado, conocido su subtipo más importante como carcinoma hepatocelular. La mayoría de los pacientes con este cáncer pasan por una cirrosis y finalizan con un cáncer hepático, causado principalmente por distintos factores como pueden ser la edad, el sexo, infección por un virus o el alcohol. Este tumor se suele detectar cuando ya se encuentra en etapas bastante avanzadas, lo que dificulta la mejoría de la enfermedad, así como la salud del paciente (Domínguez et al. 2009). Por ello, es importante estudiar y conocer los mecanismos por los cuales se produce la progresión y la metástasis del cáncer de hígado, donde podemos encontrar con un papel importante a CLIC1, con el fin de obtener nuevos procesos de tratamiento. Se realizó un estudio tanto con hígados afectados como con tejidos hepáticos que no eran tumorales, con el que se quería investigar sobre la expresión de CLIC1 en el carcinoma hepatocelular (Wei et al. 2015). Se detectó que los niveles de CLIC1 se veían aumentados en los tejidos que presentaban el tumor comparado con los hígados normales. Además, estos niveles también se encontraban elevados en los tumores metastásicos frente a los no metastásicos, con lo que se concluía que CLIC1 presenta un - 24 - papel importante tanto en el carcinoma hepatocelular como en la metástasis de este (Wei et al. 2015). Por último, también cabe destacar, como podemos ver en la Figura 12, que este canal de cloruro se relacionó con el grado del cáncer de hígado, ya que, si aumenta la cantidad de expresión de CLIC1, se aumenta con ello el grado tumoral de dicha enfermedad (Jiang et al. 2020). Figura 12. Grados tumorales del carcinoma hepatocelular relacionado con la expresión diferencial del canal CLIC1. Fuente: (Jiang et al. 2020). Estos resultados obtenidos indican que CLIC1 es un factor crítico en el desarrollo del cáncer de hígado así como en su metástasis, pero aún se necesitan más investigaciones para conocer con exactitud el mecanismo molecular en la aparición y el desarrollo de tumores (Peretti et al. 2015). 4.3.2 Cáncer vesículo biliar Otro de los tipos de cáncer donde va a presentar gran influencia el canal intracelular de cloro CLIC1 es el cáncer vesículo biliar. Al igual que en otros estudios, se utilizaron células tanto normales como tumorales de vesícula biliar humana. En este caso, el objetivo de este estudio fue determinar si el silenciamiento del gen CLIC1 se veía reflejado en un inducción de la apoptosis y con ello en una inhibición del proceso de proliferación de las células oncogénicas del cáncer vesículo biliar (He et al. 2018). Para esta investigación se eligió la técnica de Western Blot. Esta es una técnica utilizada para identificar una proteína en una muestra que contiene varias proteínas mediante una separación de las mismas por su peso molecular y con un anticuerpo específico que detecta la proteína de interés (Veiga 2013). En nuestro estudio, la proteína de interés a - 25 - encontrar va a ser CLIC1, utilizando como control una banda de beta-actina. Tras realizar este análisis, se obtuvieron unos resultados que mostraban que las proteínas CLIC1 se encontraban en niveles altamente significativos en los tejidos con cáncer vesículo biliar comparado con tejidos normales de la vesícula biliar, ya que como podemos comprobar en la Figura 13, la expresión de CLIC1 en células oncogénicas en ascendencia se refleja con una mancha más oscura en la lectura de la técnica de Western Blot (Ding et al. 2015). Figura 13. Transferencia de Western de la expresión de la proteína CLIC1 en comparación con tejidos normales de la vesícula biliar. Fuente: (He et al. 2018) 4.3.3. Cáncer gástrico El cáncer gástrico también es uno de los tumores malignos comunes en la sociedad. Los primeros estudios han demostrado que, aunque las vías de señalización aún no están claras, CLIC1 está involucrado en la invasión y metástasis del cáncer gástrico (Li et al. 2018). Uno de los ensayos realizados más frecuente ha sido el efectuado con pacientes con cáncer gástrico de un hospital, el cual tenía la finalidad de estudiar el silenciamiento de CLIC1 (Qiu et al. 2021). Como se puede ver en la Figura 14, en este se certificó que, al silenciar la expresión de CLIC1, disminuyeron las capacidades migratorias e invasivas de las células tumorales (Qiu et al. 2021). En este estudio se informó además que estos niveles de CLIC1 aumentaron 1,95 veces en comparación con muestras de tejido no canceroso (Zhao et al. 2015). - 32 - cancerosas humanas, aumentando la apoptosis y disminuyendo la proliferación celular (Zou et al. 2016). Aun así, se sugiere que el aumento de CLIC4 sería el gran objetivo a revertir en la terapia enfocada a este canal, incluyéndolo en la lista de grandes futuras dianas terapéuticas frente al cáncer (Suh et al. 2007). 4.5.3. Inhibición o potenciación de CLIC4 El canal intracelular de cloro 4 es una proteína que está relacionada con el ciclo celular y los procesos de apoptosis, por lo que es un importante objetivo en nuevas investigaciones para la terapia frente al cáncer (Suh et al. 2005). Un reciente estudio se ha basado en la idea de suprimir la expresión de CLIC4 a través de un ARN de interferencia pequeño específico (ARNip) con el fin de identificar el papel del canal en la apoptosis de una línea celular de carcinoma (Xue et al. 2016), debido a la capacidad del canal de promover la apoptosis cuando se encuentra regulado a la baja (Yu et al. 2018). En el nombrado experimento, se realizó un ensayo en el que se utilizó ATP para detectar células apoptóticas (Figura 21), donde se obtuvo un mayor porcentaje de las mismas en las células de CLIC4 unidas a ARNip en comparación con las del grupo control (Xue et al. 2016). Figura 21. Porcentaje de células apoptóticas en la unión CLIC4-ARNip comparado con el grupo control de ATP. Fuente: (Xue et al. 2016). - 33 - 5. CONCLUSIONES 1. El cáncer es una de las enfermedades de la actualidad que más preocupa a la población, presenta una elevada gravedad y un aumento cada vez mayor de la tasa de mortalidad. Y, aunque los métodos científicos que van apareciendo son cada vez más novedosos y nos permiten conocer nuevos detalles de ciertas enfermedades, según los datos recabados de los últimos años, es de urgencia obtener nuevos caminos para hacerle frente. 2. Tras el estudio de los distintos tipos de canales de cloro y su relación con el cáncer, así como distintas moléculas que pueden actuar sobre ellos, cabe destacarlos como importantes potenciales dianas terapéuticas frente al cáncer. 3. El estudio de los canales de cloro como nuevas dianas terapéuticas, así como la investigación de nuevas moléculas, se encuentra en las primeras etapas, por lo que, aunque ya son de gran relevancia, irán ganando cada vez más importancia en investigaciones futuras. 4. La existencia de nuevas moléculas que están siendo desarrolladas u otras que ya existían, utilizando el método de reposicionamiento de fármacos, están presentando buenos resultados actuando sobre los canales de cloro y ejerciendo efecto sobre el cáncer, reforzando su papel como nuevas dianas frente al cáncer. 6. BIBLIOGRAFÍA  Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios. Ficha Técnica: Metmorfina STADA. Cima [En línea]. 2017. Disponible en: https://cima.aemps.es/cima/dochtml/ft/69709/FT_69709.html [Consultado en mayo 2021]  Anderson KJ, Cormier RT, Scott PM. Role of ion channels in gastrointestinal cancer. World J. 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