Estudios de actividad antiinflamatoria, antioxidante y citotóxica de compuestos de origen natural

ESTUDIOS DE ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA, ANTIOXIDANTE Y CITOTÓXICA DE COMPUESTOS DE ORIGEN NATURAL Realizado por Irene Borrero Girón Departamento de Farmacología Facultad de Farmacia Universidad de Sevilla 1 TRABAJO FIN DE GRADO Estudios de actividad antiinflamatoria, antioxidante y citotóxica de compuestos de origen natural Alumna: Irene Borrero Girón Tutora: Elena María Talero Barrientos Grado en Farmacia Departamento de Farmacología Facultad de Farmacia Universidad de Sevilla Fecha de presentación: 5 de Julio de 2016 Lugar de presentación: Aula 2.1 de la Facultad de Farmacia Trabajo de carácter experimental 2 3 RESUMEN Introducción: Actualmente las plantas medicinales constituyen una fuente importante de compuestos para el desarrollo de nuevos fármacos. El género Garcinia contiene xantonas, metabolitos secundarios producidos principalmente como mecanismo de defensa, las cuales han demostrado numerosos efectos beneficiosos para la salud que se relacionan con sus propiedades antitumorales, antiinflamatorias y antioxidantes. Objetivo: Evaluar la actividad citotóxica de la xantona GAG, extraída de Garcinia achachairu, sobre las líneas celulares de adenocarcinoma de colon humano HT-29 y de leucemia aguda humana THP-1, así como su actividad antiinflamatoria en macrófagos THP-1 y su acción antioxidante respecto al compuesto ABTS. Materiales y métodos: En este estudio se utilizó la línea celular monocitaria de leucemia aguda humana THP-1 y línea de adenocarcinoma de colon humano HT-29. Se evaluó la citotoxicidad de la xantona mediante el método de la sulforhodamina B (SRB), la actividad antiinflamatoria mediante la producción de la citocina TNF-α aplicando la técnica ELISA, y la actividad antioxidante mediante la técnica del ABTS con el compuesto Trolox como control positivo. Resultados y discusión: La xantona en estudio presentó una notable actividad citotóxica sobre las células HT-29, tras 48 y 72 horas de incubación. En cambio, en los macrófagos THP-1 no mostró una citotoxicidad importante. El estudio de la producción de TNF-α evidenció una reducción significativa en los niveles de esta citocina tras el tratamiento con GAG a las dosis de 5 y 10 μM en macrófagos THP-1 estimulados con LPS. En cuanto a la actividad antioxidante, tras el cálculo de la EC50, se pudo observar una importante actividad para la xantona, en relación al compuesto Trolox. Conclusiones: Los resultados demostraron la actividad citotóxica, antiinflamatoria y antioxidante de la xantona GAG, sugiriendo el indudable interés de este compuesto como alternativa terapéutica en el tratamiento de patologías inflamatorias y en la prevención del cáncer. Palabras clave: Garcinia spp, Garcinia achachairu, inflamación, cáncer de colon, citotoxicidad, antioxidante 4 ÍNDICE I. INTRODUCCIÓN ........................................................................................ 5 1. El género Garcinia .............................................................................................................. 5 1.1.Estudios del género Garcinia en cáncer .......................................................................... 5 1.2. Estudios del género Garcinia en inflamación ................................................................. 9 2. Especie Garcinia achachairu ................................................................................... 10 II. OBJETIVOS .......................................................................................................... 13 III. MATERIALES Y MÉTODOS .................................................................................. 14 1. Material de estudio ................................................................................................. 14 2. Líneas celulares ................................................................................................................. 14 2.1. Línea monocitaria de leucemia aguda humana, THP-1 ................................................ 14 2.2. Línea de adenocarcinoma humano, HT29.................................................................... 15 3. Descongelación de las líneas celulares ................................................................... 15 4. Evaluación de la citotoxicidad mediante el ensayo SRB ......................................... 16 5. Evaluación de la actividad antiinflamatoria por la técnica ELISA ........................... 17 6. Evaluación de la actividad antioxidante por el método del ABTS .......................... 20 7. Análisis estadístico .................................................................................................. 20 IV. RESULTADOS ..................................................................................................... 20 1.Evaluación de la citotoxicidad.................................................................................. 21 2. Evaluación de la actividad antiinflamatoria ............................................................ 23 3. Evaluación de la actividad antioxidante ................................................................. 24 V. DISCUSIÓN ......................................................................................................... 26 VI. CONCLUSIONES ................................................................................................. 30 VII. BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................. 31 VIII. ABREVIATURAS ............................................................................................... 35 5 I.INTRODUCCIÓN 1. El género Garcinia Las plantas pertenecientes a la familia Clusiaceae (Guttiferae) se distribuyen principalmente por las regiones del trópico. Esta familia comprende unos 40 géneros y 1.200 especies, siendo el género Garcinia uno de los más numerosos ya que posee alrededor de 400 especies con una amplia distribución en Asia tropical, África, Nueva Caledonia y Polinesia (Niero y cols., 2012; Terrazas y cols., 2013). La familia Clusiaceae es una fuente muy rica en metabolitos secundarios, entre los que cabe destacar cuatro clases principales de compuestos: xantonas, cumarinas, flavonoides y benzofenonas, producidos principalmente como mecanismo de defensa (De Melo y cols., 2014). El campo de las plantas medicinales juega un papel muy importante en el desarrollo de nuevos fármacos, ya que el uso de sustancias naturales derivadas de plantas atrae mucho la atención para ciertas patologías. Tal es el caso del género Garcinia, el cual es conocido por poseer xantonas, tanto oxigenadas como preniladas, benzofenonas y biflavonoides. Este género presenta importantes actividades biológicas, como son actividad antiviral, antiinflamatoria, antitumoral, antimicrobiana, citotóxica y antioxidante (Sun y cols., 2016). 1.1.Estudios del género Garcinia en cáncer Diversos estudios in vitro e in vivo han evaluado la actividad citotóxica de diferentes especies del género Garcinia, los cuales se exponen a continuación y están resumidos en la tabla 1. La especie Garcinia mangostana, conocida comúnmente como ‘’la reina de las frutas’’ (Figura 1), es muy utilizada en la medicina tradicional, y por ello ha dado lugar a numerosos estudios destinados al campo de la oncología. Así, datos recientes han demostrado que el α-mangostán, una xantona extraída de la cáscara del fruto de Garcinia mangostana, disminuye la viabilidad de la línea celular de cáncer de mama humano T47D, un cáncer agresivo y con diseminación rápida, conocido como “cáncer de mal pronóstico”. El mecanismo de esta xantona consiste en inhibir la proliferación 6 de esta línea cancerosa por inducción de la apoptosis, mediante la inhibición de las vías de señalización PI3K/Akt y las proteínas cinasas activadas por mitogenos (MAPK) (Kritsanawong y cols., 2016). En cuanto al cáncer de páncreas, α-mangostán ha demostrado que inhibe in vitro las líneas tumorales MIAPaCa-2 y BxPC-3, de manera tiempo y dosis dependiente, por fosforilación de cinasas, lo que lleva a la inhibición de las metaloproteinasas de la matriz MMP-2 y MMP-9, enzimas que se encuentran altamente expresadas en este cáncer (Yuan y cols., 2013). Por último, un extracto de Garcinia mangostana, que contenía un 81% de α-mangostán y un 16% de γmangostán, presentó efectos quimiopreventivos contra la línea celular HCT-116 de carcinoma colorrectal humano, así como en ratones xenógrafos inyectados con dichas células. Estos efectos se debieron a la activación de la apoptosis y la inhibición de la metástasis. En el caso de los ratones, el extracto causó una reducción muy significativa del crecimiento del tumor (Aisha y cols., 2012). En relación a la especie Garcinia celebica, se han realizado estudios in vitro con su compuesto activo, un triterpenoide tipo lanostano, demostrando que tiene actividad antiproliferativa en una línea celular de adenocarcinoma de mama humano, MCF-7, mediante un mecanismo de activación de la apoptosis por la inhibición de la Figura 1. Fruto maduro de Garcinia mangostana (Prathapan y Chaboo, 2009) 7 proteína oncogénica Akt, involucrada en la supervivencia celular, de manera tiempo y dosis dependiente (Subarnas y cols., 2016) Un estudio reciente ha evaluado la actividad anticáncer del extracto metanólico del fruto de Garcinia Morella en el linfoma de Dalton, tanto in vitro como in vivo. Los resultados muestran que el extracto presenta actividad anticancerosa in vitro por inducción de la apoptosis, tanto por activación de las caspasas como por la fragmentación del ADN. Estos datos fueron confirmados en un posterior estudio in vivo sobre ratones con linfoma de Dalton que fueron tratados durante diez días con el extracto. En estos animales se observó un aumento en la supervivencia y una disminución del tamaño del tumor, así como la normalización de los parámetros hematológicos y bioquímicos (Choudhury y cols., 2016). El extracto y las semillas del fruto de Garcinia dulcis, concretamente una acción sinérgica de hidroximetilfurfural y 3-metil-2,5-furanodiona, junto con xantonas y flavonoides, han demostrado propiedades prometedoras en la inducción de la apoptosis en células HepG2 de cáncer de hígado (Bakar y cols., 2015) En el caso de Garcinia cowa, tanto las xantonas G y H, así como sus 23 análogos aislados de las hojas, indujeron la interrupción del ciclo celular, la apoptosis y la autofagia en diferentes células cancerosas (Xia y cols., 2015). 14 III.MATERIALES Y MÉTODOS 1. Material de estudio El material biológico utilizado para la realización de este trabajo se ha obtenido de la especie vegetal Garcinia achachairu. Este estudio se encuentra incluido dentro de las actividades desarrolladas dentro del proyecto brasileño RIBECANCER (Red Iberoamericana de Investigación en Cáncer) con el que colabora el grupo FARMOLAP (Farmacología Molecular y Aplicada, Departamento de Farmacología, Universidad de Sevilla). Para la realización de este trabajo experimental se utilizó una xantona, nombrada como GAG, aislada y caracterizada químicamente por el grupo del Dr. Valdir Cechinel (Universidad de Vale do Itajaí, Brasil). 2. Líneas celulares La investigación se realizó sobre la línea monocitaria de leucemia aguda humana THP-1 (donada desde el Instituto de la Grasa de Sevilla en 2009) y la línea de adenocarcinoma de colon humano HT-29 (obtenida del Banco Europeo de Cultivos Celulares -ECACC- en 2011 en el pase P.143). Ambas líneas se mantuvieron a 37ºC y a una atmósfera de CO2 al 5% en un incubador. 2.1. Línea monocitaria de leucemia aguda humana, THP-1 Para el cultivo y mantenimiento de la línea THP-1 se utilizó medio RPMI 1640 con L-Glutamina 2 mM y HEPES 25 mM (GIBCO, USA), suplementado con suero fetal bovino (PAA, Austria) al 10% y 1% de Penicilina/Estreptomicina (PAA). La línea fue subcultivada en su estado de monocitos (células en suspensión) o bien fueron diferenciados a macrófagos (células adherentes) con porbol-12-miristato-13-acetato (PMA) 0.2 μM durante 72 h (Figura 3). 15 2.2. Línea de adenocarcinoma humano, HT29 Para el cultivo de la línea HT-29 se utilizó medio McCoy’s 5A (PAA, Austria) suplementado con un 10% de suero fetal bovino y un 1% de Penicilina/Estreptomicina. Esta línea crece de forma adherente, por lo que para su mantenimiento y subcultivado requiere de la individualización de las células mediante un tratamiento con tripsina- EDTA (5 min, 37 ºC) (Figura 4). 3. Descongelación de las líneas celulares En primer lugar, se procedió a la descongelación parcial de los viales de THP-1 y HT-29, conservados en nitrógeno líquido. A continuación, se añadió el contenido celular a un tubo falcon que contenía el medio de cultivo requerido para cada línea Figura 3. Monocitos diferenciados a macrófagos vistas al microscopio 40X Figura 4. Línea HT-29 vista al microscopio 40X 16 celular. Posteriormente, se centrifugaron los tubos (1000 rpm, 3 min) para eliminar el dimetilsulfóxido (DMSO), vehículo en el que se habían congelado las células. Tras este paso, se eliminó el sobrenadante y se añadió nuevo medio de cultivo a cada tubo falcon (10-12 ml aproximadamente), asegurándose que el contenido estaba correctamente resuspendido. Finalmente, las células se colocaron en frascos de cultivo, se visualizaron al microscopio para asegurar su correcta morfología y se incubaron a 37ºC y a una atmósfera de CO2 al 5%. 4. Evaluación de la citotoxicidad mediante el ensayo de la sulforhodamina B (SRB) Para la determinación de la actividad citotóxica del compuesto GAG sobre las líneas celulares THP-1 y HT-29 se utilizó el método de la sulforhodamina B (SRB), compuesto de color violeta, capaz de teñir de forma rápida y específica las proteínas de las células vivas. Para las células HT-29, se partió de 5.000 células/pocillo (10.000 células/pocillo en caso de la línea THP-1) sembradas en placas NUNC estériles de 96 pocillos, a las que se adicionaron dosis crecientes de la xantona en estudio (desde 100 μM a 6,25 μM) o del vehículo utilizado (DMSO), durante 24, 48 y 72 horas para establecer aquellas concentraciones no tóxicas para las distintas líneas (Figura 5). Figura 5. Esquema del método de la Sulforhodamina B (SRB) 17 Transcurrido el tiempo de incubación, las células se fijaron con ácido tricloroacético (TCA) al 50% v/v a 4 ºC. Tras una hora de incubación, las placas se lavaron 5 veces con agua desionizada, se adicionaron 100 µL de SRB (0.4% p/v) en una solución de ácido acético al 1% v/v, y se incubaron 30 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. Posteriormente, se lavaron de nuevo 5 veces con ácido acético al 1% v/v y se dejaron secar unos minutos antes de añadir tampón Tris Base 10 mM, para finalmente medir la absorbancia a 492 nm con un espectrofotómetro Labsystems Multiskan EX (Helsinki, Finlandia) (Figura 6). Una vez realizado el ensayo, los resultados se expresaron según el índice de inhibición 50 (IC50), que se define como la dosis que produce la muerte del 50% de las células en cultivo en un tiempo determinado. 5. Evaluación de la actividad antiinflamatoria por el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA) El estudio de producción de la citocina TNF-α se realizó empleando la línea celular THP-1, diferenciada a macrófagos desde la forma monocítica. Para ello, se sembraron 10.000 células por pocillo en placas estériles NUNC de 96 pocillos, que se trataron con PMA 0.2 µM, durante 72 horas a 37 ºC, para inducir su diferenciación a macrófagos. A continuación, las células se lavaron con tampón fosfato salino (PBS) estéril frío para eliminar los monocitos no transformados y se añadieron 100 µL de medio completo (37 ºC) junto con la xantona en estudio a las distintas concentraciones Figura 6. Placa NUNC de 96 pocillos sembrada con macrófagos y adicionadas dosis decrecientes de GAG a las 24 horas 18 (1, 5 y 10 µM). Tras 1 hora de incubación con el compuesto, los macrófagos se estimularon con LPS (1 µg/mL) durante 24 horas (Figura 7). Los sobrenadantes de los cultivos celulares, que contenían las citocinas solubles, se recolectaron y almacenaron a -40 ºC hasta su uso. La cuantificación de TNF-α se llevó a cabo siguiendo las instrucciones del correspondiente kit comercial (Bionova), que se describe a continuación. Para la realización de este kit se utilizó una placa de 96 pocillos, donde se pipetearon 100 µL del anticuerpo de captura o anticuerpo primario frente a TNF-α, diluido en PBS 1X. La placa se incubó en el frigorífico, a 4ºC durante la noche. Después de 2 lavados con aproximadamente 400 µL de PBS-Tween 0,05% para arrastrar el anticuerpo primario no unido al pocillo, se añadieron 250 µL de tampón de saturación (albúmina bovina sérica al 5% en PBS 1X) y se dejó incubar durante 2 horas a temperatura ambiente. Seguidamente, se pipetearon 100 µL de las muestras diluidas y de la curva patrón a las diferentes concentraciones (800 a 25 pg/ml), así como 50 µL de anticuerpo secundario o biotinilado. Las placas se dejaron incubar durante 3 horas a Figura 7. Esquema de la diferenciación a macrófagos desde la forma monocítica y tratamiento con GAG a concentraciones 1, 5 y 10 µMpara la posterior medida de TNF-α. 19 temperatura ambiente. Transcurrido ese tiempo, se lavaron 3 veces con aproximadamente 400 µL de tampón de lavado y se añadieron 100 µL de una dilución que contenía estreptavidina unida a peroxidasa de rábano (HRP), incubándose durante 30 minutos a temperatura ambiente. Nuevamente, se repitió el proceso de lavado y se añadieron 100 µL de solución sustrato 3,3', 5,5'-tetrametilbenzidina (TMB). Este sustrato da una señal de color azul cuando se une con el conjugado (Figura 8), virando a amarillo cuando se le añade ácido sulfúrico, reactivo de parada en todos los pocillos, siendo el color proporcional a la concentración de TNF-α presente en los pocillos. Finalmente, se procedió a la medida de la absorbancia en un espectrofotómetro a 450 nm con un filtro de referencia fijado a 630 nm o 650 nm. Los resultados se expresaron en pg/ml de TNF-α producidos, calculados a partir de una recta patrón de concentraciones conocidas de esta citocina. Figura 8. Esquema del fundamento de la técnica ELISA 20 6. Evaluación de la actividad antioxidante por el método del ABTS Para este ensayo se empleó el método del ABTS (2,2-Azino-bis-3- ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid), basado en la degradación o secuestramiento de los radicales por la interacción con la sustancia antioxidante. Este método monitoriza los cambios de absorbancia del ABTS en el tiempo y permite determinar la capacidad antioxidante en muestras con absorbancia en el visible, ya que las medidas se realizan a 734 nm (rojo lejano). Esta técnica se realizó en placas de 96 pocillos utilizando concentraciones crecientes de la muestra (3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 100 y 200 µM), diluidas en etanol, que se mezclaron con el radical catiónico ABTS. Una vez estabilizada la absorbancia de la reacción a los 6 min, se determinó la absorbancia de cada muestra. Como control positivo se utilizó Trolox (Figura 9), un derivado de la vitamina C, con alta capacidad antioxidante. La absorbancia se midió en un lector de placa Labsystems Multiskan EX a una λ = 734 nm. El cálculo de la actividad antioxidante se expresó como equivalentes de Trolox (EC50 del antioxidante/ EC50 Trolox), dando valor de 1 a la Concentración Efectiva 50 (EC50) del Trolox (concentración de Trolox capaz de generar una actividad antioxidante del 50 %). 7. Análisis estadístico Los datos que se presentan en el apartado de “Resultados”, se expresan como la media ± error estándar de las valoraciones obtenidas en las muestras ensayadas. Los datos han sido tratados con el programa GraphPad 5.0. En poblaciones múltiples, con diferentes medias, se analizó la varianza de las mismas mediante el test ANOVA (análisis de varianza) de una rama, comparándose dichas medias mediante un test de Bonferroni. Un valor de p igual o inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativo. Figura 9. Estructura química del Trolox (Luo y cols,. 2009) 21 IV. RESULTADOS 1. Evaluación de la citotoxicidad La actividad citotóxica de la xantona GAG se ensayó sobre la línea de leucemia monocitaria aguda THP-1 y sobre la línea celular procedente de un adenocarcinoma de colon humano HT-29, tras 24, 48 y 72 horas de incubación, mediante el método de la SRB. En ambos casos, se ensayaron concentraciones desde 6.25 µM hasta 100 µM. Con esta técnica se busca determinar la concentración del compuesto que causa la muerte del 50% de la población en cultivo (IC50), y así evaluar la posible actividad contra células cancerosas. Como se observa en la figura 10, el compuesto GAG mostró una citotoxicidad notable sobre las células HT-29, tras 48 y 72 horas de incubación. Por el contrario, no se apreció muerte celular en el control sin tratar (control DMSO). A. B. C. Figura 10. Efecto de la xantona GAG sobre la viabilidad de las células HT-29. La viabilidad se midió a diferentes concentraciones de GAG (desde 6.25 µM hasta 100 µM) mediante el método de la SRB a las 24 (A), 48 (B) y 72 horas (C). Se expresa en porcentaje respecto al control sin tratar (DMSO). Los datos son la media de 2 experimentos independientes. 22 La actividad citotóxica de la xantona se confirmó tras el cálculo de los valores de IC50 tras 48 y 72 horas de incubación, representados en la tabla 3. Tabla 3. Representación de los valores de IC50 mostrados por la xantona GAG (μM) sobre la línea celular HT-29 a 24, 48 y 72 horas de incubación Compuesto IC50 24h de incubación IC50 48h de incubación IC50 72h de incubación GAG >100 16,63 ± 1,98 16,72 ± 2,96 En el caso de la línea celular THP-1, este ensayo permitió seleccionar concentraciones no letales del compuesto, que mantienen una viabilidad celular del 100% tras 24 horas, para el posterior estudio de la producción de la citocina TNF-α. Como se aprecia en la figura 11 y la tabla 4, los resultados obtenidos tras los experimentos realizados a este tiempo de incubación mostraron valores de IC50 mayores de 100 µM, por lo que se concluyó que la xantona no presentaba citotoxicidad sobre las células THP-1 tras 24h. Como refleja el cálculo de la IC50, la actividad citotóxica de este compuesto aumentó de manera progresiva tras 48 y 72 horas. Figura 11. Efecto de la xantona GAG sobre la viabilidad de las células THP-1. La viabilidad se midió a diferentes concentraciones de GAG (desde 6.25 µM hasta 100 µM) mediante el método de la SRB a las 24 (A), 48 (B) y 72 horas (C). Se expresa en porcentaje respecto al control sin tratar (DMSO). Los datos son la media de 2 experimentos independientes. A. B. C. 23 Tabla 4. Representación de los valores de IC50 mostrados por la xantona GAG (μM) sobre macrófagos THP-1 a 24, 48 y 72 horas de incubación. Compuesto IC50 24h de incubación IC50 48h de incubación IC50 72h de incubación GAG >100 78,62 ± 7,55 46,04 ± 12,55 2. Evaluación de la actividad antiinflamatoria Para conocer la actividad antiinflamatoria de la xantona en estudio, GAG, se evaluó la producción de la citocina TNF-α en células THP-1, diferenciadas a macrófagos desde la forma monocítica. Se conoce que esta citocina juega un papel muy importante en la respuesta inflamatoria del organismo (Toussirot y cols., 2012). Las concentraciones ensayadas de GAG para determinar la producción de TNF- α producida por los macrófagos fueron 1, 5 y 10 μM. Estas concentraciones se seleccionaron según el método de la SRB, asegurándose que no presentaban citotoxicidad sobre las células THP-1. Los resultados de la técnica ELISA pusieron de manifiesto un incremento significativo de los niveles de TNF-α en las células estimuladas con LPS en comparación con las no estimuladas (control con DMSO) (p < 0.001) (Figura 12). Cabe destacar que no se observaron diferencias significativas entre los controles con y sin DMSO (DMSO y (-)DMSO), por lo que se confirmó que el DMSO no interfiere en la producción de TNF- α. Como era de esperar, la dexametasona, utilizada como fármaco antiinflamatorio, redujo significativamente la producción de esta citocina (p < 0,001). El tratamiento con la xantona durante 24 horas a las concentraciones de 5 y 10 μM indujo una reducción significativa en los niveles de TNF-α respecto al control estimulado con LPS (p < 0,01 y p < 0,001, respectivamente). 30 VI. CONCLUSIONES 1. Los ensayos de citotoxicidad mediante el ensayo de la SRB muestran que la xantona GAG posee una notable actividad citotóxica en la línea de adenocarcinoma de colon humano HT-29, tras 48 y 72 horas de incubación. 2. El compuesto GAG presenta una potente actividad antiinflamatoria in vitro, generando una inhibición significativa de la producción de la citocina proinflamatoria TNF-α en macrófagos THP-1, a las concentraciones de 5 y 10 μM. 3. La xantona GAG muestra una importante actividad antioxidante con respecto al compuesto de referencia Trolox. 4. Estos datos sugieren el indudable interés de las xantonas como alternativa terapéutica en el tratamiento de patologías inflamatorias y en la prevención del cáncer. 31 VII. BIBLIOGRAFÍA AECC. Asociación Española Contra el Cáncer. Consultado [en línea].[Consultado en Junio 2016]. Disponible en: https://www.aecc.es/SobreElCancer/CancerPorLocalizacion/cancerdecolon/Pagina s/incidencia.aspx Ahmad I. Recent insight into the biological activities of synthetic xanthone derivatives. Eur J Med Chem. 2016; 116: 267-80. Aisha A, Abu-Salah K, Ismail Z, Majid A. In vitro and in vivo anti-colon cancer effects of Garcinia mangostana xanthones extract. 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Mediators Inflamm. 2015; 2015. 35 VIII.ABREVIATURAS ABTS: 2,2-Azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid CCR: Cáncer de colon COX-2: Ciclooxigenasa-2 DEX: Dexametasona DMSO: Dimetilsulfóxido EC50: Concentración Efectiva 50 EII: Enfermedad inflamatoria intestinal ECACC: Banco Europeo de Cultivos Celulares ELISA: Ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima FARMOLAP: Farmacología Molecular y Aplicada HRP: Peroxidasa de rábano HT-29: Línea de adenocarcinoma de colon humano IC50: Índice de inhibición 50 iNOS: Óxido Nítrico Sintasa Inducible LPS: Lipopolisacárido MAPK: Proteínas cinasas activadas por mitógenos MMP-2 / MMP-9: Metaloproteinasas de la matriz-2/9 NF-kB: Factor nuclear Kappa B NO: Óxido Nítrico PBS: Tampón fosfato salino PGE2: Prostaglandina E2 PKC: Proteína cinasa C PMA: porbol-12-miristato-13-acetato 36 RIBECANCER: Red Iberoamericana de Investigación en Cáncer ROS: Especies reactivas de oxígeno SIRT-1: The Silent Information Regulator-1 SRB: Sulforhodamina B TCA: Ácido tricloroacético THP-1: Línea monocitaria de leucemia aguda humana TIE: 1,3,5,7-Tetrahydroxy-8-isoprenylxanthone TMB: 3,3', 5,5'-tetrametilbenzidina TNF-α: Factor de necrosis tumoral α