Composición fitoquímica de Arbutus unedo L. y su potencial uso en farmacoterapia

Trabajo de fin de Máster Universidad de Sevilla Facultad de Farmacia Composición fitoquímica de Arbutus unedo L. y su potencial uso en farmacoterapia María Isabel Perales Salas 1 Universidad de Sevilla Facultad de Farmacia Trabajo Fin de Mster Mster en Especializacin Profesional en Farmacia. Especialidad Gestión y Calidad asistencial en la Oficina de Farmacia Composición fitoquímica de Arbutus unedo L. y su potencial uso en farmacoterapia Autora: María Isabel Perales Salas Sevilla, septiembre 2024 Departamento de Farmacología Tutores: Estefanía Burgos Morón y Antonio José León González 2 RESUMEN El madroño, Arbutus unedo (Ericaceae), es un arbusto ampliamente distribuido por el Mediterráneo con gran interés alimentario y medicinal. Sus frutos son comestibles y pueden emplearse en la fabricación de dulces, licores o para enriquecer piensos animales. El uso en medicina tradicional de esta planta ha motivado numerosas investigaciones sobre su composición fitoquímica y su potencial empleo terapéutico. El objetivo de este trabajo ha sido revisar los estudios recientes sobre la composición de la planta y las actividades biológicas que puede presentar. Por un lado, se ha concluido en que la composición es muy variada y rica en compuestos primarios y secundarios. En cuanto a los primarios, destacan los hidratos de carbono, lípidos como los PUFA (Poly-Unsaturated Fatty Acids) u otros ácidos orgánicos como el quínico o el gálico. En cuanto a los secundarios, destacan las vitaminas, como la A y la E; los flavonoides, que son compuestos fenólicos y dentro de ellos se hallan flavonoles como la avicularina, antocianinas como la cianidina-3-galactósido y los taninos, como la catequina o galocatequina; terpenoides como el lupeol y ácido betulínico y, finalmente, carotenoides como el beta-caroteno. Por otro lado, estudios hallados muestran in vitro y algunos in vivo en ratas, una serie de actividades farmacológicas por parte de las diferentes drogas de la planta, como son la raíz, hoja, fruto y miel. Los efectos antidiabético, antioxidante, antihipertensivo, antiinflamatorio, citotóxico, antimicrobiano y antiagregante son los más respaldados por bibliografía. Más estudios serían necesarios para establecer el posible uso farmacoterapéutico de Arbutus unedo. Palabras clave: Arbutus unedo, madroño, composición fitoquímica, actividad farmacológica. 3 RESUMEN EN INGLÉS The strawberry tree, Arbutus unedo (Ericaceae), is a shrub widely distributed in the Mediterranean with great food and medicinal interest. Its fruits are edible and can be used in the manufacture of sweets, liqueurs or to enrich animal feed. The use of this plant in traditional medicine has motivated numerous investigations on its phytochemical composition and its potential therapeutic use. The aim of this work has been to review recent studies on the composition of the plant and the biological activities it may present. On the one hand, it has been concluded that the composition is very varied and rich in primary and secondary compounds. Regarding the primary ones, carbohydrates, lipids such as PUFA (Poly-Unsaturated Fatty Acids) or other organic acids such as quinic or gallic acid stand out. As for the secondary ones, vitamins stand out, such as vitamins A and E; flavonoids, which are phenolic compounds, including flavonols such as avicularin, anthocyanins such as cyanidin-3-galactoside and tannins such as catechin or gallocatechin; terpenoids such as lupeol and betulinic acid and, finally, carotenoids such as beta-carotene. On the other hand, studies have shown in vitro and some in vivo in rats, a series of pharmacological activities by the different drugs of the plant, such as root, leaf, fruit and honey. The antidiabetic, antioxidant, antihypertensive, anti-inflammatory, cytotoxic, antimicrobial and antiaggregant effects are the most supported by the literature. Further studies would be necessary to establish the possible pharmacotherapeutic use of Arbutus unedo. 4 ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………………………7 1.1. Generalidades de la planta……………………………………………………..7 1.1.1. Taxonomía y etimología………………………………..7 1.1.2. Descripción botánica…………………………………….8 1.1.3. Foliación, floración y fructificación………………..9 1.1.4. Distribución …………………………………………………10 1.2. Uso en alimentación humana y animal…………………………………..11 1.3. Uso en medicina tradicional……………………………………………………13 2. OBJETIVOS………………………………………………………………………………………………..15 3. MATERIAL Y MÉTODOS……………………………………………………………………………..16 4. RESULTADOS…………………………………………………………………………………………….17 4.1. Composición fitoquímica ……………………………………………………….17 4.1.1. Composición fitoquímica del fruto……………………….….17 4.1.1.1. Metabolitos primarios……………………………...17 4.1.1.2. Metabolitos secundarios……………….………….21 4.1.2. Composición fitoquímica de las hojas……………………..28 4.1.3. Composición fitoquímica de la raíz………………………….29 4.1.4. Composición fitoquímica de la miel y el própolis…….30 4.2. Efectos farmacológicos………………………………………………………….31 4.2.1. Efecto antihipertensivo…………………………………..………31 4.2.2. Efecto antidiabético……………………………………………….33 4.2.3. Efecto antioxidante………………………………………………..35 4.2.4. Efecto citotóxico y quimiopreventivo……………………..37 4.2.5. Efecto antimicrobiano…………………………………………….39 4.2.6. Efecto antiinflamatorio …………………………………………..40 4.2.7. Efecto antiagregante………………………………………………41 4.2.8. Ensayo clínico…………………………………………………………45 4.2.9. Atención farmacéutica………………………………….45 5. CONCLUSIONES………………………………………………………………………………………..47 6. BIBLIOGRAFÍA ………………………………………………………………………………………….49 5 ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1. Partes de A. unedo y usos medicinales asociados tradicionalmente. Fuente: Elaboración propia. 14 Tabla 2. Número de estudios obtenidos tras la búsqueda de las palabras clave en las Bases de datos empleadas antes de aplicar los criterios de inclusión. 16 Tabla 3. Contenido de minerales analizado en el fruto de A. unedo 20 Tabla 4. Efecto de los extractos de Arbutus unedo en dietil éter y acetato de etilo en la agregación plaquetaria inducida por trombina. 43 ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1. Esquema clasificación botánica de Arbutus unedo. 7 Figura 2. Imagen del arbusto Arbutus unedo (a), sus hojas (b), panícula floral(c), flores blancas (d) y frutos (e). 8 Figura 3. Frutos de A. unedo ordenados de menor a mayor madurez. 10 Figura 4. Distribución geográfica A. unedo. 11 Figura 5. Licor el Oso y el Madroño, obtenido a partir de destilación del fruto de A. unedo . 12 Figura 6. Estructura química de la glucosa, fructosa, sacarosa, celulosa y almidón. 18 Figura 7. Estructura química del cido α-linolénico. 19 Figura 8. Estructura química de los ácidos orgánicos encontrados en A. unedo: ácido fumárico, ácido málico, ácido cítrico y ácido quínico. 19 Figura 9. Estructura química los compuestos vitaminados encontrados en A. unedo: cido ascrbico, α-tocoferol, γ-tocoferol y γ-tocotrienol. 22 Figura 10. Estructura química de los ácidos fenólicos presentes en A. unedo: ácido gálico, ácido gentísico, ácido p-hidroxibenzoico, ácido vanílico y ácido m-anísico. 23 Figura 11. Estructura química de los flavonoides encontrados en A. unedo: quercetina- 3-ramnósido, miricetina-3-xilósido y avicularina. 24 Figura 12. Estructura química de las antocianinas encontradas en A. unedo: delfinidina- 3-galactósido, cianidina-3-arabinósido, cianidina-3-glucósido y cianidina-3-galactósido. 25 Figura 13. Estructura química los taninos encontrados en A. unedo: catequina, galocatequina y epicatequina-4,8-epicatequina-4,8-catequina. 26 Figura 14. Estructura química de los terpenoides encontrados en A unedo: α-amirina, ácido betulínico y lupeol. 27 Figura 15. Estructura química del beta-caroteno. 27 Figura 16. Estructura química de compuestos fenólicos de las hojas de A. unedo: arbutina y kaempferol. 29 Figura 17. Estructura química de flavonoides encontrados en la raíz de A. unedo: afzelina e hiperósido. 30 6 Figura 18. Estructura química de los ácidos encontrados en la miel de A. unedo: ácido gentísico y ácido abscísico. 30 Figura 19. Mecanismo de acción de la enzima óxido nítrico sintasa y del óxido nítrico como agente relajante vascular. 32 7 1. INTRODUCCIÓN 1.1. Generalidades de la planta El madroño, Arbutus unedo es una planta muy extendida por la zona mediterránea que presenta gran valor ornamental, industrial y alimenticio, debido al aspecto colorido de sus flores y frutos, a la composición y al sabor dulce de los mismos. Además, presenta una buena regeneración tras incendios forestales, es resistente a condiciones ambientales duras como sequía, bajas temperaturas y suelos pesados o pobres (Morgado et al., 2018), lo que la hace una planta relativamente fácil de cultivar. Es conocida como planta medicinal debido a su uso tradicional como remedio ante diferentes patologías, tales como la diabetes, hipertensión o enfermedades infecciosas (Naceiri et al., 2019). 1.1.1. Taxonomía y etimología Taxonómicamente, Arbutus unedo pertenece al género Arbutus, familia de las Ericáceas (Ericaceae), orden Ericales, clase Magnoliópsida, división Magnoliophyta, reino Plantae (Figura 1). Figura 1. Esquema de la clasificación botánica de Arbutus unedo. Fue descrita por primera vez por Carlos Linneo, el padre de la Botánica, en 1753 y apareció en su obra ‘’Species Plantarum’’. Su nombre proviene del latín y, por un lado, Arbutus significa árbol pequeño, haciendo referencia al pequeño tamaño de la planta y, por otro, unedo hace referencia a ‘’unum tantum edo’’, que significa comer sólo una; posiblemente, debido al componente alcohólico que presentan sus frutos que, consumidos en cantidad, pueden ocasionar estados de embriaguez (Naiceri et al., 2019). Especie A. unedo Género Arbutus Familia Ericaceae Orden Ericales División Magnoliophyta Reino Plantae 8 1.1.2. Descripción botánica Arbutus unedo es un arbusto o árbol pequeño perennifolio, cuya altura oscila, normalmente entre 1,5 m y 3 m (Figura 2a). Presenta hojas alternas, simples, oblanceoladas, lanceoladas y habitualmente dentadas, de color verde claro intenso cuando son jóvenes y más oscuras cuando maduran. Son hojas coriáceas y con el margen aserrado, normalmente 2-3 veces más largas que anchas, glabras y con un peciolo de 10 mm o menos (Figura 2b) (Miguel et al., 2014). Las flores tienen forma de campana, de 8-9 mm de largo, y la corola es simpétala, es decir, con pétalos fusionados en uno solo. Estas flores pueden ser de color blanco o rosa pálido, dependiendo del estado de maduración de la planta. Las flores blancas presentan un nivel de maduración menor que las de color rosa. Están dispuestas en panículas colgantes con hasta 30 flores (Figura 2c, 2d) (Miguel et al., 2014). Las flores constituyen una importante fuente de néctar y polen para las abejas, siendo por tanto la polinización entomófila, es decir, realizada por insectos (Martins et al., 2021). Figura 2. Imagen del arbusto Arbutus unedo (a), sus hojas (b), panícula floral(c), flores blancas (d) y frutos (e). Fuente: Martins et al., 2021. Al fruto carnoso de esta planta se le conoce comúnmente como ‘’madroño’’. El fruto es una baya esférica roja comestible de, aproximadamente, unos 2 cm de diámetro, cubierta de papilas cónicas (Figura 2e). Generalmente contienen de 10 a 50 pequeñas semillas que son dispersadas mediante endozoocoria, es decir, su dispersión es llevada a cabo por aves y mamíferos (Martins et al., 2021). 15 2. OBJETIVOS Arbutus unedo presenta una amplia distribución, además de una multitud de empleos tradicionales, medicinales e industriales. Por tanto, el objetivo del presente trabajo ha sido realizar una revisión acerca de su composición fitoquímica, y de sus usos tradicionales, centrándose especialmente en la evidencia científica acerca de sus propiedades farmacológicas que podrían respaldar su uso medicinal, así como de otras posibles aplicaciones en la medicina actual. 16 3. MATERIAL Y MÉTODOS Se ha elaborado una revisión bibliográfica, cuyo tema principal es la planta A. unedo, su uso tradicional como planta medicinal y su posible inclusión en la medicina moderna. En la búsqueda bibliográfica, fueron seleccionadas como palabras clave las siguientes: “Arbutus unedo”, “Strawberry tree”, “Edible mediterranean berry” y ‘’madroño’’. Todas estas fueron introducidas en diferentes bases de datos electrónicas, como son Google Scholar, Pubmed, ScienceDirect y Web of Science (Tabla 2). La búsqueda de estudios clínicos que involucren a esta planta se ha realizado a través de ClinialTrials. Esta búsqueda se realizó entre abril de 2023 y junio de 2024. El número de artículos resultados de las búsquedas en cada base de datos con las distintas palabras clave se muestra en la tabla 2. Tabla 2. Número de estudios obtenidos tras la búsqueda de las palabras clave en las Bases de datos empleadas antes de aplicar los criterios de inclusión. Palabras clave Bases de Datos Strawberry tree Arbutus unedo Edible mediterranean Berry Madroño Google Scholar 257.000 30.700 25.900 35.200 PubMed 360 222 207 104 ScienceDirect 11.985 1.581 1.317 429 Web of Science 2.015 1.150 54 40 De los artículos así obtenidos, fueron aplicados unos criterios de inclusión para decidir qué artículos iban a formar parte de este trabajo. Para empezar, fueron seleccionados los artículos cuya fecha de publicación fuera lo más reciente posible, posteriormente los que estuvieran escritos en inglés o español y, finalmente, “disponible texto completo gratuito”. Se seleccionaron un total 40 artículos para incluir en esta revisión. 17 4. RESULTADOS 4.1. Composición fitoquímica La composición de A. unedo es diversa y compleja. Es rica en hidratos de carbono, ácidos orgánicos, minerales y compuestos bioactivos, entre los que destacan las vitaminas, fenoles, terpenoides y carotenoides. Aunque la mayoría de las publicaciones encontradas hablan de la composición del fruto, se conoce que las diferentes drogas de la planta presentan una composición similar, salvando algunas diferencias que se mostrarán posteriormente. 4.1.1 Composición fitoquímica del fruto 4.1.1.1. Metabolitos primarios Los metabolitos primarios de las plantas son aquellas moléculas que resultan de sus procesos vitales como son el crecimiento, reproducción y supervivencia. Estas moléculas son los hidratos de carbono, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Los hidratos de carbono o glúcidos se definen como compuestos formados por carbono, oxígeno e hidrógeno que se combinan para dar lugar a monómeros (monosacáridos) y pueden encontrase unidos a otros para formar moléculas más grandes (disacáridos, trisacáridos y polisacáridos). Se encuentran, principalmente, en vegetales y su función es energética y de reserva. Estos hidratos de carbono se han hallado en A. unedo como monosacáridos (fructosa y glucosa), disacáridos (sacarosa) y polisacáridos (celulosa y almidón) (Ayaz et al., 2000). El fruto es la parte de la planta que presenta mayor cantidad de glúcidos, representando un 40% del peso de la baya fresca. Su proporción varía dependiendo del nivel de madurez. A mayor grado de madurez, menor concentración de carbohidratos, puesto que se consumen en la fermentación alcohólica, dando lugar a ciertas concentraciones de etanol. Esto hace que el fruto sea la base de distintas bebidas alcohólicas (Ayaz et al., 2000). 18 En la baya inmadura predomina la sacarosa mientras que, en la etapa madura, lo hace la fructosa. En el resto de las partes, hojas y raíces, predominan los glúcidos complejos como la celulosa y su función es, principalmente, estructural (Ait et al., 2021). Figura 6. Estructura química de principales hidratos de carbono encontrados en A. unedo: glucosa, fructosa, sacarosa, celulosa y almidón. La fracción proteica de la planta en general es casi inapreciable. En cuanto a la fracción aminoacídica del fruto, se descubrió que los principales aminoácidos libres son la prolina, el ácido glutámico, arginina, alanina y fenilalanina (Miguel et al., 2014). Otros metabolitos primarios son los lípidos. Son biomoléculas formadas por cadenas hidrocarbonadas solubles en solventes apolares, que se clasifican en diferentes grupos como ácidos grasos, esteroles, glicéridos y fosfolípidos. En A. unedo han sido caracterizados los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA, del inglés Poly- Unsaturated Fatty Acids). Estos PUFA son compuestos orgánicos formados por una larga cadena carbonada unida a un ácido carboxílico. En función de donde aparezcan estas insaturaciones, los cidos pueden ser ω3 si el primer doble enlace se encuentra en el carbono 3 contando desde el extremo metilo (denominado omega) y ω6 si el primer doble enlace se encuentra en el carbono 6 contando desde el extremo metilo. Representan el 60% del total de ácidos orgánicos de la planta, siendo el fruto la parte 19 donde más se concentran, ya que se presentan en un 52,47 ± 4,26% relativo en frutos inmaduros un y 62,01 ± 0,26 % relativo en frutos maduros (Morgado et al., 2018). Entre los ácidos mayoritarios se encontraron el ácido linolénico (37-43%), el ácido linoleico (19-20%) y el ácido oleico (26-29%), cuyos porcentajes dependen de la maduración de los frutos. La relacin ω3/ω6 se considera muy favorable, debido a la riqueza en cido α-linolénico (Figura 7) (Miguel et al., 2014). Debido a los ácidos grasos omega 3, el fruto posee propiedades antioxidantes y antiinflamatorias. Esto es muy importante debido a que muchas enfermedades crónicas cursan con inflamación crónica y, en esos casos, estos compuestos pueden ser beneficiosos. Figura 7. Estructura química del cido α-linolénico. Dentro de los ácidos de la planta, se ubican los ácidos orgánicos, que son compuestos con cadenas cortas hidrocarbonadas y extremos ácido carboxílico. En frutos, así como en hojas y raíces, están presentes el ácido fumárico, ácido málico, ácido cítrico y ácido quínico (Figura 8) (Hernández-Rodríguez et al., 2015). Figura 8. Estructura química de los ácidos orgánicos encontrados en A. unedo: ácido fumárico, ácido málico, ácido cítrico y ácido quínico. Ácido α-linolénico 20 En relación con los minerales, el contenido de Ca2+, K+, Mg, Na y P es muy elevado en todos los frutos del madroño (Oliveira et al., 2011). Estos minerales son imprescindibles para el correcto funcionamiento del organismo, dado que poseen funciones esenciales en el mismo. Por ejemplo, el Ca2+ es el principal componente de los huesos y contribuye al desarrollo de los dientes y el Mg, Fe y P participan en numerosas reacciones en actuando como cofactores enzimáticos. Sin embargo, la cantidad de Cd, Cu, Li, Mn, Ni, Pb y Sr observada en el fruto es muy bajo. Las cantidades se han medido por 100 g de extracto seco del fruto y sus valores pueden comprobarse en la Tabla 3 (Özcan et Hacıseferogulları, 2006). Tabla 3. Contenido de minerales analizado en el fruto de A. unedo medido en mg/kg. Fuente: Özcan et Hacıseferogulları, 2006. Para finalizar los metabolitos primarios hallados en el fruto de A. unedo, se debe mencionar la fibra dietética, ya que representa un 10-30% de su peso seco (Morales, 2022). La fibra se define como el conjunto de polisacáridos no almidones más la lignina, que no pueden ser digeridos o absorbidos en el intestino delgado. Principalmente provienen de las paredes celulares de las plantas. La fibra enlentece y reduce la absorción de colesterol y glucosa, a la vez que favorece el tránsito gastrointestinal y sirve de alimento para la microbiota, entre otras muchas funciones beneficiosas que posee en el organismo. 21 4.1.1.2. Metabolitos secundarios Los metabolitos secundarios son compuestos que sintetizan las plantas como productos secundarios de su metabolismo, con fines diferentes del crecimiento y la reproducción, como son la supervivencia ante patógenos o agentes oxidantes de la naturaleza. Muchos de ellos se consideran compuestos bioactivos, que son sustancias que se encuentran en plantas y alimentos de origen vegetal, promueven o participan en procesos fisiológicos y se asocian a presuntas actividades biológicas en el organismo. Por un lado, se encuentran los compuestos vitaminados. La vitamina C o ácido ascrbico, la vitamina E (α-tocoferol y γ-tocoferol) y el γ-tocotrienol (Figura 9) han sido hallados en los frutos A. unedo. Son moléculas fuertemente antioxidantes. La vitamina C es una molécula hidrosoluble que ejerce una gran función como protector dérmico y coadyuvante del correcto funcionamiento del sistema inmune. La vitamina E es, por el contrario, liposoluble y se encarga de prevenir y revertir la oxidación lipídica, por lo que es muy beneficiosa para el sistema circulatorio, entre otros. En los frutos, el γ-tocotrienol es muy abundante. En función de su estado de maduración, su valor puede oscilar entre 1013,88 ± 90,33 mg/kg en frutos inmaduros y 498,96 ± 12,18 mg/kg en frutos maduros (Morgado et al., 2018). Son los frutos con un grado de madurez intermedia los que poseen una proporción considerable tanto de cidos grasos rico en ω-3 PUFA como de vitamina E, lo que implica son considerados fuentes importantes de compuestos biológicamente activos (Oliveira et al., 2011). 22 Figura 9. Estructura química los compuestos vitaminados encontrados en A. unedo: cido ascrbico, αtocoferol, γ-tocoferol y γ-tocotrienol. Por otro lado, se encuentran los compuestos fenólicos. Son compuestos orgánicos cuya estructura presenta, al menos, un grupo fenol. Estructuralmente, engloban una gran variedad de compuestos y se pueden clasificar en simples o complejos. Dentro de los complejos, existen lignanos y flavonoides. Siendo estos últimos caracterizados y muy abundantes en A. unedo (Oliveira et al., 2011). Dentro de los fenoles simples, se ubican los ácidos fenólicos, más presentes en el fruto que en el resto de la planta. Su estructura se compone de un anillo fenol con, al menos, un extremo carboxilo y diferentes radicales. De ellos, han sido identificados y cuantificados en el fruto del madroño el ácido gálico, ácido gentísico, ácido phidroxibenzoico, ácido vanílico y ácido m-anísico (Figura 10) (Ayaz et al., 2000). 23 Figura 10. Estructura química de los ácidos fenólicos presentes en A. unedo: ácido gálico, ácido gentísico, ácido p-hidroxibenzoico, ácido vanílico y ácido m-anísico. Los flavonoides, que son derivados estructurales del fenol y por tanto también compuestos fenólicos, se pueden clasificar en función de su estructura química en flavonas, flavonoles, flavonodioles, antocianinas, chalconas y taninos. De todos ellos, solamente se han caracterizado en A. unedo flavonoles, antocianinas y taninos (Oliveira et al., 2011). Los flavonoles son flavonoides cuya estructura básica es la 3-hidroxiflavona y, en función del lugar en el que se ubiquen los diferentes radicales, se obtendrán los diferentes flavonoles. Los que se han caracterizado en esta planta son derivados glicosilados de la quercetina, la quercetina-3-ramnósido, y de la miricetina, miricetina-3-xilósido (Figura 11). Se determinó un contenido total de flavonoles en el fruto de A. unedo de 11,4 ± 3,46 mg/kg (Pallauf et al., 2008). En menor proporción que los anteriores se encuentra la avicularina, que es un quercetin-3-O-alfa-L-arabinofuranósido. Este grupo también presenta actividad antioxidante y aportan color a la planta. La avicularina es objeto de estudio por su potencial empleo en insuficiencia hepática y osteoporosis, aunque se obtiene de otras fuentes en la que es más abundante, como Polygonum aviculare (Shi et al., 2023). 24 Figura 11. Estructura química de los flavonoides encontrados en A. unedo: quercetina-3-ramnósido, miricetina-3-xilósido y avicularina. Las antocianinas son glucósidos fenólicos, es decir, proceden de la unión de una estructura de naturaleza fenólica, antocianidina, y un carbohidrato, mediante un enlace glucosídico. Se han encontrado antocianinas en el fruto de A. unedo y se han definido cuatro antocianinas: delfinidina-3-galactósido, cianidina-3-glucósido, cianidina-3- arabinósido y cianidina-3-galactósido (Figura 12) (Fortalezas et al., 2010). Su cantidad se ve incrementada durante la maduración, aumentando de 0,25±0,2 g/kg a 1,01±0,1 g/kg de peso seco a medida que el fruto alcanza la madurez roja. Tienen una gran importancia industrial, ya que se emplean como colorantes alimentarios en multitud de productos como golosinas, pasteles, o yogures. Además, se conoce que son fuertes antioxidantes vegetales (Pallauf et al., 2008). 31 4.2. Efectos farmacológicos 4.2.1. Efecto antihipertensivo La hipertensión arterial (HTA) es una de las patologías cardiovasculares más prevalentes del mundo, afectando a cerca de mil millones de personas a nivel mundial, especialmente en países desarrollados (Banegas, 2005). La HTA es un factor de riesgo cardiovascular que aumenta la predisposición de padecer otras enfermedades como la arterioesclerosis o accidentes cerebrovasculares, entre otros. La HTA se asocia a tasas de morbimortalidad elevadas, por lo que se considera uno de los problemas más importantes de salud pública (Banegas, 2005). Cursa de forma asintomática pero fácil de detectar; causa complicaciones graves si no se controla pudiendo llegar a ser letales. El mecanismo por el que esta condición aparece es complejo, debido a que involucra varios órganos y sistemas como son el riñón y el sistema circulatorio, principalmente. Su principal tratamiento está basado en medidas higiénico-dietéticas y en fármacos antihipertensivos y/o diuréticos (Consejería de Salud, 2022). A pesar de que en el mercado coexistan numerosos fármacos para tratarla, se sigue llevando a cabo la búsqueda de nuevos y más potentes principios activos, entre ellos los que proceden de fuentes naturales. A. unedo constituye una potencial fuente de obtención de principios activos contra la HTA. Debido a su rica composición en compuestos polifenólicos, esta planta ha resultado ser objeto de estudio para analizar sus propiedades diuréticas y vasorelajantes. Serán las hojas y raíces las drogas más estudiadas en este ámbito, debido a la riqueza de taninos en las raíces y flavonoides como afzelina, juglamina, avicularina, quercitrosido e hiperósido en la parte aérea. Un estudio in vivo llevado a cabo en ratas (Akfir et al., 2008) ha demostrado que el tratamiento crónico de estos animales con extracto acuoso de raíz de A. unedo enlentece el desarrollo de hipertensión, previene la hipertrofia miocárdica, mejora la reactividad vascular y los parámetros de función renal. Este estudio muestra que el efecto vasorelajante del extracto acuoso de hoja y raíz de A. unedo está mediado por un mecanismo dependiente del endotelio, que probablemente implica una mejora de la activación de la NOS (óxido nítrico sintasa) endotelial. Esta enzima sintetiza óxido nítrico, una de las sustancias endógenas que median la relajación de los vasos sanguíneos y, debido a eso, es diana de varios tratamientos farmacológicos para controlar la hipertensión arterial (Figura 19). 32 Figura 19. Mecanismo de acción de la enzima óxido nítrico sintasa y del óxido nítrico como agente relajante vascular. Fuente: Mata et al., 2010. Por lo tanto, este mecanismo de acción podría ser responsable de la actividad antihipertensiva que se asocia al extracto acuoso de A. unedo. Además, también mejoró la sensibilidad del barorreceptor arterial que controla la frecuencia cardíaca a los aumentos agudos de la presión arterial (Akfir et al., 2008). Para conocer de forma más precisa qué compuestos están relacionados con esta actividad presente en hojas, se llevaron a cabo diferentes análisis, tal y como explican Sandra Morgado y su equipo en 2018. Este artículo relata que una serie de ratas cuyos vasos sanguíneos habían sido contraídos previamente con noradrenalina habían sido tratados con extractos acuosos, etanólicos y metanólicos de hojas y raíz de A. unedo observando una relajación del endotelio de los anillos aórticos. Tras ésto, concentraron la proporción de taninos condensados en el extracto etanólico de las hojas mostrando dicho concentrado una fuerte actividad vasorelajante. A su vez, probaron la actividad del extracto etanólico libre de taninos y no se detectó ninguna actividad vasorelajante. Posteriormente, separaron el extracto metanólico con cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa (RP-HPLC) y obtuvieron que las fracciones más activas como vasorelajantes correspondieron a los compuestos polifenólicos. Por tanto, estos análisis concluyen que la actividad vasorelajante de las hojas de A. unedo se atribuyó a los compuestos polifenólicos, principalmente taninos condensados (Morgado et al., 2018). Óxido Nítrico Sintasa (enzima) 33 Aun así, se necesitan más estudios para evaluar el beneficio y seguridad de estos compuestos y conocer cuáles serían los efectos en el ser humano. 4.2.2. Efecto antidiabético La diabetes mellitus (DM) es una enfermedad crónica que se caracteriza por una hiperglucemia debido a una incapacidad para producir y segregar insulina con/sin resistencia insulínica. Es el más frecuente de los trastornos endocrinos y, además, presenta una serie de posibles complicaciones de gran relevancia clínica, como son la retinopatía diabética, nefropatía diabética y neuropatías, además de aumentar el riesgo de accidentes cerebro y cardiovasculares y de gangrena de extremidades (Consejería de Salud, 2022). Diversos estudios han apoyado el efecto antihiperglucemiante del extracto de raíz de A. unedo in vitro y de su miel. Además, también se ha evaluado la evolución de la enfermedad renal y hepática, consecuencia directa de la diabetes, tras la ingesta de extractos de esta planta (Naiceri et al., 2019). Por un lado, un análisis realizado por la Universidad Mohamed 1º de Marruecos, evaluó el efecto antidiabético que posee el extracto acuoso de raíz de A. unedo y otras especies autóctonas, en ratas inducidas a hiperglucemia por un tiempo prolongado, valorando únicamente la función pancreática. El resultado obtenido fue que las ratas tratadas con extracto acuoso de raíz de A. unedo no mostraron ninguna mejoría estadísticamente significativa con respecto al grupo control. Esto puede implicar que el mecanismo por el que de A. unedo disminuye los niveles de glucemia en el organismo es extrapancreático, lo que apoya la teoría del siguiente estudio (Bnouham et al., 2010). Por otro lado, destaca el estudio de Naiceri et al. desarrollado en 2019 cuya metodología se dividió en dos partes bien diferenciadas en función de las muestras: hígados de ratas obtenidos in vitro tratados con glucosa para estudiar su absorción intestinal, y estudio in vivo en grupos de ratas en las que se estudiaron los niveles de glucemia. Todos los animales fueron sobrecargados con 2 g/kg de glucosa mediante sonda intragástrica. Fueron divididos en 3 grupos: en uno recibieron extracto acuoso de raíz de A. unedo; en otro, metformina (fármaco antidiabético de elección para el tratamiento de la DM2) y, finalmente, en el último grupo control recibieron agua destilada. Estos tratamientos duraron 6 semanas y cada día fueron pesadas y controlada su glucemia. Como 34 resultados, obtuvieron que el extracto acuoso de raíz de A. unedo mostró efecto inhibidor sobre la absorción intestinal de glucosa, efecto que es completamente independiente de la acción de la insulina, ya que sólo se ve implicado el transportador SGLT de las células intestinales (Naceiri et al., 2019). En cuanto a la glucosa basal y la postprandial, las ratas tratadas con raíz de A. unedo mostraron una reducción de la glucemia significativa, con respecto al grupo control. Resultado estadísticamente similar al obtenido en el grupo tratado con metformina. Finalmente, el peso corporal medio de los animales tratados con A. unedo y metformina fue significativamente inferior al de sus homólogos de control a partir de la semana 2 (Naceiri et al., 2019). Por otro lado, la miel y própolis del madroño son también objeto de estudio y análisis de sus propiedades fitoquímicas. Como muestra, destaca el estudio (Touzani et al., 2023) en el que se intenta establecer relación entre la miel y própolis de madroño y la mejoría de la diabetes y sus consecuencias, como la enfermedad renal. Los sujetos de estudio fueron ratas sometidas a hiperglucemia inducida de forma constante en el tiempo que, por ende, habían desarrollado las consecuencias negativas de la diabetes, como son daños hepáticos, renales y pancreáticos, entre ellos elevación significativa de HBA1c, creatinina sérica, enzimas hepáticas, colesterol total, TG y excreción urinaria de proteínas, albúmina y glucosa, así como disminución significativa del nivel de insulina, el peso corporal, la hemoglobina, el HDL y la excreción urinaria de creatinina, urea, ácido úrico, fósforo y magnesio y además, el páncreas sufrió la pérdida de diversos islotes de Lagerhans (Touzani et al., 2023). Quedó demostrado que la aportación en su dieta de miel y própolis obtenida a partir del madroño, ejerció un efecto protector de la función renal y hepática, ayudó a reducir los niveles de glucemia y de HBA1c, aumentó el nivel de insulina y mejoró el daño histológico ocasionado en diversos órganos. El resultado que se obtuvo tras el tratamiento de ratas sometidas a hiperglucemia con extractos de miel y própolis del madroño fue que la miel, el propóleo o su combinación, mostraron una actividad terapéutica en la nefropatía diabética establecida, mejoró la insuficiencia renal, la lesión hepática, la proteinuria y la microalbuminuria. Estos efectos se asocian a 35 la posible aceleración del proceso de curación que provoca la miel de madroño. Al mejorar el estado de estas células, secretarán más insulina y reducirán los niveles de glucemia en el organismo, ejerciendo por tanto un efecto antidiabético (Touzani et al., 2023). De este estudio, se podría deducir que la miel, el propóleo y su combinación son preventivos contra los cambios histopatológicos observados en ratas tratadas con hiperglucemia, y que mejoran el pronóstico y desarrollo de la enfermedad diabética (Miguel et al., 2014). A pesar de que los resultados de estos estudios in vivo han sido positivos, se necesitan más estudios in vivo sobre los efectos antidiabéticos de esta planta y así como resultados de efecto antidiabético y de seguridad en humanos. 4.2.3. Efecto antioxidante Múltiples enfermedades cardiovasculares, oncológicas, endocrinas o neurológicas están mediadas por radicales libres. Éstos se forman a partir de las especies reactivas de oxígeno (EROs), y provocan daño celular a diferentes niveles. Cuando reaccionan con las proteínas, las modifican y generan daño proteico. También dañan los ácidos nucleicos, alterando las bases y el sentido de su lectura. En los carbohidratos provocan fragmentación, autooxidación y producción de agentes mutagénicos. Por último, en los lípidos generan peroxidación lipídica y enranciamiento (Hernández-Rodríguez et al., 2015). El organismo posee mecanismos para controlar el nivel de radicales libres y EROs. Estos mecanismos pueden ser mediados por enzimas (superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa) o sin ellas a través de vitaminas (A, C y E), carotenoides o fenoles. El artículo realizado por Hernández-Rodríguez (Hernández-Rodríguez et al., 2015) evalúa el potencial antioxidante de extractos de hojas y frutos de A. unedo con diferentes métodos in vitro mediante modelos directos e indirectos. Los métodos indirectos han podido estudiar la capacidad antioxidante mediante la estabilización de radicales libres cromgenos como son: el ABTS (cido 2,2”-azinobis-3-etilbenzotiazolin-6-sulfónico), DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidracilo) y FRAP (poder antioxidante reductor de hierro). 36 Los análisis basados en ABTS mostraron un valor TEAC (capacidad antioxidante equivalente al Trolox) de 1,71 mM y 2,25 mM para extractos alcohólicos de hojas de A. unedo, indicando que estos extractos contienen metabolitos que estabilizan los radicales mediante un mecanismo principal de transferencia electrónica, con un aporte secundario de transferencia de átomos de hidrógeno (Hernández-Rodríguez et al., 2015). El DPPH es un compuesto formado por moléculas estables radicalarias. Es capaz de reducirse y se determina así la capacidad antioxidante de diferentes agentes. Sus resultados se miden en el índice EC50, que se calcula a partir de una reducción del 50% de la concentración inicial de DPPH. Su valor es inversamente proporcional a su actividad antioxidante. Los análisis basados en DPPH, han mostrado que los extractos acuosos de hojas y frutas presentan una notable eficiencia a la hora de atrapar radicales DPPH (Hernández-Rodríguez et al., 2015). Los valores fueron de EC50 0,087 para las hojas y 0,790 mg/mL para el fruto. Los análisis basados en FRAP evidenciaron un mayor potencial de reducción las hojas que los frutos (EC50 0,318 mg/mL y 2,894 mg/mL). Esto indica que la planta presenta gran poder reductor y que es capaz de regular el estado redox de los tejidos mediante un mecanismo de transferencia de electrones. Por otro lado, los métodos directos han medido la capacidad antioxidante de los extractos acuosos de A. unedo frente a células eritrocitarias humanas (Hernández- Rodríguez et al., 2015). Los extractos acuosos de las hojas y frutos de A. unedo presentaron valores de CI50 de 0,062 mg/mL y 0,430 mg/mL, respectivamente, frente a CI50 0,031 mg/ml obtenido para el control (ácido ascórbico). Esto muestra un efecto protector contra la hemólisis de eritrocitos provocada por el daño oxidativo. Además, el efecto inhibidor de los extractos sobre la peroxidación lipídica fue significativo, con unos valores de CI50 0,075 y 0,732 mg de extracto/mL para hojas y frutas, respectivamente. Ningún método puede evaluar la capacidad antioxidante total de la planta, ya que entran en juego diversos factores como lipofilia e hidrofilia o los diferentes mecanismos antioxidantes. Aun así, los resultados que se han llevado a cabo ponen de manifiesto una potente actividad antioxidante por parte de los extractos estudiados de hojas y frutos de A. unedo. 37 Sin embargo, Tuberoso et al. realizaron un estudio similar al anterior en 2013 (Tuberoso et al., 2013) con la miel del madroño y no obtuvieron resultados positivos. Se aplicaron los mismos análisis que se han explicado anteriormente (DPPH, FRAP y ABTS) y obtuvieron resultados muy diferentes, ya que no se observó ningún efecto antioxidante esperado. Esto puede deberse a que la actividad antioxidante de la planta corresponde a compuestos que no se encuentran en la miel tanto como en las hojas y frutos. Como conclusión, algunos de los resultados obtenidos del empleo de A. unedo como antioxidante in vitro son prometedores, pero, aun así, todavía se necesitan más estudios in vitro e in vivo. 4.2.4. Efecto citotóxico y quimiopreventivo El cáncer es la segunda causa de muerte en todo el mundo, a lo que le acompaña una elevada morbilidad. Esto provoca una gran preocupación general, que ha motivado a buscar nuevas alternativas terapéuticas basadas en productos naturales y que puedan evitar los inconvenientes de los fármacos quimioterápicos, como son sus efectos secundarios. Existen estudios que asocian a A. unedo efectos citotóxicos (Morales, 2022). Existe un estudio elaborado por Morgado et al en 2018 en el que se analizaron el contenido fitoquímico y las propiedades citotóxicas de la miel de madroño contra el adenocarcinoma de colon humano en las líneas celulares HCT-116 y LoVo. Según este estudio, en las células tratadas con miel de madroño (0-60 mg/mL) disminuía la viabilidad celular en comparación con las células no tratadas. Estos resultados sugieren que la miel del madroño puede presentar un efecto quimioprotector y es una herramienta potencialmente útil contra el cáncer de colon. También se ha demostrado la disminución de viabilidad de células cancerosas en neuroblastoma y fibroblastoma (Morgado et al., 2018). Algunos ensayos in vitro han mostrado que la inhibición de la enzima COX-2 representa los principales mecanismos de protección contra la promoción del desarrollo de 38 tumores. Los componentes de A. unedo han mostrado esta inhibición son la catequina, ácido betulínico y lupeol (Morgado et al., 2018). Otro estudio ha empleado los residuos del fruto de A. unedo que se desechan tras su destilación para la preparación de bebidas alcohólicas como fuente anticancerosa. Estos fueron sometidos a tecnología supercrítica-CO2, utilizando etanol, altas presiones y temperaturas. Mostraron actividad antiproliferativa contra células HT29 (adenocarcinoma colorrectal humano) y se observaron correlaciones entre la actividad y el contenido en compuestos fenólicos. Además, el crecimiento de las células HT-29 también fue inhibido por un producto rico en proteínas que se preparó a partir de hojas de A. unedo (Morales et al., 2018). Los extractos de hojas han mostrado capacidad citotóxica de líneas celulares animales y humanas, como son: L20B (rabdomiosarcoma embrionario de rata), VeRo (carcinoma renal de mono), KB (carcinoma epitelial humano), HeLa (carcinoma epitelial cervical humano), A431 (carcinoma epidermioide humano), A375 (melanoma maligno humano) y RD (rabdomiosarcoma embrionario humano) (Morales, 2022). Según Jurika K., el extracto acuoso de hoja de madroño muestra una elevada biocompatibilidad frente a los linfocitos, causando insignificantes efectos perjudiciales a nivel celular sobre las células sanas, tales como citotoxicidad o daño en el ADN, el cual es casi inapreciable a dosis medias y bajas (Jurika et al., 2018). La gran capacidad antioxidante de los extractos de diferentes partes de A. unedo podría ser responsable de la inhibición de proliferación de tumores y citotoxicidad, aunque los mecanismos involucrados se desconocen. Aun así, se requieren más ensayos para obtener más información sobre las posibles terapias con A. unedo como agente citotóxico y/o quimiopreventivo. 39 4.2.5. Efecto antimicrobiano Los antibióticos o antimicrobianos están sufriendo un proceso de resistencia cada vez mayor, que supone un grave problema de salud pública (Consejería de Salud, 2022). Es por eso por lo que, cada vez más, se realizan estudios en búsqueda de nuevos compuestos antimicrobianos. Muchas especies vegetales se han probado como fuente de estos compuestos, siendo una de ellas A. unedo (Morales, 2022). Todas las drogas de la planta han sido objeto de estudio exhaustivo para este fin, tanto frutos como hojas, raíces y miel. El estudio de Morales realizado en 2022 ha recopilado información disponible acerca de la actividad antimicrobiana de cada parte de la planta. Por un lado, estudios evaluaron la actividad del fruto mediante una fracción etanólica rica en compuestos fenólicos, que mostró una fuerte actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa. Los extractos metanólicos obtenidos de la raíz también han sido evaluados mostrado una escasa capacidad antimicrobiana frente a S. aureus y P. aeruginosa y un efecto moderado sobre E. coli. Sin embargo, al emplear técnicas de extracción como la PLE para obtener extractos de raíces, mostraron una actividad antimicrobiana muy superior a la inicial frente a los microorganismos citados. Además, existe un estudio que evaluó la miel de A. unedo que informó de actividad antifúngica contra Candida spp. Sin embargo, las hojas de A. unedo han sido la droga más estudiada de esta planta. Una gran diversidad de extractos, etanólicos, metanólicos y acuosos, fueron evaluados y mostraron inhibición en el crecimiento de S. aureus, P. aeruginosa, E. coli, Enterococcus faecalis, Bacillus cereus y Mycobacterium spp. También se notificó actividad antiviral en el caso de un extracto etanólico de hoja que fue eficaz contra el virus del herpes simple tipo 1 (Morales, 2022). Un estudio llevado a cabo por Malheiro et al. (Malheiro et al., 2012) estudió más detenidamente el efecto antimicrobiano de las hojas de A. unedo. Bacterias Gram positivas como B. cereus, B. subtilis, S. aureus y S. epidermis; Gram-negativas, como E. coli y P. aeruginosa y levaduras, como C. albicans, C. krusei, C. parapsilosis y C. glabrata fueron tratadas con extractos acuosos de hoja de A. unedo, para estudiar su capacidad 40 antimicrobiana. Los microorganismos fueron expuestos a concentraciones crecientes desde 0,1 hasta 20 mg/mL. El extracto acuoso de hoja mostró actividad antimicrobiana frente a todas las bacterias, pero no frente a las levaduras. Por un lado, las bacterias Grampositivas fueron más susceptibles al potencial antimicrobiano del extracto, con valores CMI de 1 mg/mL. A esta concentración, la inhibición del crecimiento fue mayor para B. cereus y B. subtilis, seguidos de S. epidermis. Por otro lado, las bacterias Gram negativas registraron valores de CMI superiores a las anteriores: P. aeruginosa y S. aureus de 2,5 mg/mL. y E. coli de 5 mg/mL, siendo la más resistente. Los estudios asocian estos resultados con el alto contenido de compuestos fenólicos en la planta, ya que evidencian actividad antimicrobiana contra un amplio espectro de microorganismos. Sin embargo, aunque se han mostrado efectos positivos sobre la inhibición de estos microorganismos, se necesitan más estudios que avalen este efecto (Malheiro et al., 2012). 4.2.6. Efecto antiinflamatorio Las enfermedades inflamatorias presentan una alta prevalencia, además muchas de ellas pueden llegar a cronificarse y convertirse en patologías con las que el paciente debe lidiar de por vida cuyo tratamiento principal se basa en medidas higiénico-dietéticas y farmacológicas a través de fármacos antiinflamatorios (Consejería de Salud, 2022). Es por eso que la búsqueda de nuevos antiinflamatorios e, incluso, de propiedades antiinflamatorias en alimentos que se pueden incluir fácilmente en la dieta está a la orden del día, pudiendo ser las hojas de A. unedo un buen candidato para este tipo de estudios (Morgado et al., 2018). La reacción inflamatoria se inicia tras una agresión, mediante la liberación de mediadores inflamatorios como son la histamina, serotonina, eicosanoides, factor activador de plaquetas, ON (óxido nítrico), ERO (especies reactivas de oxígeno), citoquinas IL-1alfa (interleucina), IL-6, TNF-alfa (factor de necrosis tumoral) y factores derivados del plasma. Algunos de estos mediadores, activan a la proteína STAT3 que actúa como mediador en la expresión de diversos genes proinflamatorios, promoviendo 47 5. CONCLUSIONES 1. Arbutus unedo es una planta ampliamente distribuida por la zona mediterránea, fácil de cultivar y que goza de una gran tradición en su empleo medicinal y alimenticio. 2. La composición fitoquímica de esta planta incluye numerosos compuestos bioactivos, como vitaminas, compuestos fenólicos como flavonoles, antocianinas y taninos, terpenoides y carotenoides. 3. Las raíces y hojas ejercen un efecto antihipertensivo in vivo debido a que activan mecanismos vasorelajantes en el organismo. Esta actividad se atribuye a la presencia de taninos, mayoritariamente. 4. Tanto la raíz como la miel del madroño ejercen un efecto hipoglucemiante in vivo. La raíz disminuye la absorción intestinal de glucosa y la glucemia. La miel previene los cambios histopatológicos en ratas con hiperglucemia y mejora el pronóstico de la enfermedad diabética. 5. Las hojas, frutos y miel de A. unedo tienen una capacidad antioxidante significativa, lo que justifica su empleo en la industria alimentaria y muestra su potencial interés en la prevención de enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo. 6. Extractos de miel, hojas y fruto de madroño han mostrado efecto quimiopreventivo y anticanceroso in vitro frente a líneas celulares de cáncer de colon, en neuroblastoma, fibroblastoma y diversos tipos de cáncer epiteliales, entre otros. Posiblemente debido a compuestos como el lupeol, ácido betulínico y catequina. 7. Extractos de fruto, raíz y, especialmente, de las hojas han mostrado inhibición en el crecimiento de diversas bacterias grampositivas, gramnegativas, hongos e, incluso, del virus del herpes simplex, abriendo puertas a su utilización como agente antimicrobiano. 8. El efecto antiinflamatorio de A. unedo ha sido analizado in vitro y se ha observado que la inflamación pulmonar aguda se atenúa significativamente mediante el tratamiento con extracto de A. unedo. 48 9. Diversos extractos obtenidos a partir de las hojas de A. unedo, han mostrado una reducción significativa de la agregación plaquetaria provocada por trombina, de una manera dependiente de la concentración, desde 0,05 mg/ hasta 1,5 mg/mL. También fueron capaces de abolir la producción endógena de ROS provocada por la trombina, así como la movilización de Ca2+ y la fosforilación de tirosina. 10. Los resultados hasta ahora obtenidos otorgan numerosas actividades biológicas a A. unedo por las que podría tener uso farmacológico. Estas propiedades deben ser más ampliamente evaluadas mediante más estudios in vitro e in vivo, así como en humanos, que permitan además profundizar en los mecanismos de acción implicados, así como establecer el perfil de seguridad. 49 6. BIBLIOGRAFÍA Afkir S, Nguelefack TB, Aziz M, Zoheir J, Cuisinaud G, Bnouham M, et al. Arbutus unedo prevents cardiovascular and morphological alterations in L-NAME-induced hypertensive rats. Part I: Cardiovascular and renal hemodynamic effects of Arbutus unedo in L-NAME- induced hypertensive rats. J Ethnopharmacol. 2008;116(2):288–95. Ayaz FA, Kucukislamoglu M, Reunanen M. Sugar. Non-volatile and phenolic acids composition of strawberry tree (Arbutus unedo L. var.ellipsoidea ) fruits. J Food Compos Anal. 2000;13(2):171–7. Banegas Banegas JR. Epidemiología de la hipertensión arterial en España. Situación actual y perspectivas. 2005;22(9):353–62. Bnouham M, Merhfour FZ, Ziyyat A, Aziz M, Legssyer A, Mekhfi H. Antidiabetic effect of some medicinal plants of Oriental Morocco in neonatal non-insulin-dependent diabetes mellitus rats. Hum Exp Toxicol. 2010;29(10):865–71. Boussalah N, Boussalah D, Cebadera-Miranda L, Fernández-Ruiz V, Barros L, Ferreira ICFR, et al. Nutrient composition of Algerian strawberry-tree fruits (Arbutus unedo L.). Fruits. 2018;73(5):283–97. Carcache-Blanco EJ, Cuendet M, Park EJ, Su BN, Rivero-Cruz JF, Farnsworth NR, et al. Potential cancer chemopreventive agents from Arbutus unedo. Nat Prod Res. 2006;20(4):327–34. Carlos R. Universidad Rey Juan Carlos. CccomUrjcEs [Internet]. 2009;100790. Disponible en: http://www.cccom.urjc.es/informacion/estatutos/archivos/estatutos_urjc.pdf Caro RA, Carrera JP, Cabello MM, Guerrero BV, Ovelar C, Ennme I, Jiménez MD. Uso de plantas medicinales en la provincia de Sevilla. Rev Esp Cien Farm. 2020;1(2):138-47. 50 Consejería de Salud y Consumo Servicio Andaluz de Salud. Guía farmacoteraputica de atención primaria al día. [en línea]. 2022 [Consultado en agosto 2024]. Disponible en: https://www.sspa.juntadeandalucia.es/servicioandaluzdesalud/sites/default/files/sincfiles/wsas-media- mediafile_sasdocumento/2022/gftapd_06_04_2022_vinculada_0.pdf Delgado-Pelayo R, Gallardo-Guerrero L, Hornero-Méndez D. Carotenoid composition of strawberry tree (Arbutus unedo L.) fruits. Food Chem. 2016;199:165–75. El Haouari M, López JJ, Mekhfi H, Rosado JA, Salido GM. Antiaggregant effects of Arbutus unedo extracts in human platelets. J Ethnopharmacol. 2007;113(2):325–31. El Haouari M, Mekhfi H. Anti-platelet aggregation effects of extracts from Arbutus unedo leaves. Plant Sci Today. 2017;4(2):68. Escoda Casas H. El madroño [Internet]. Bio Eco Actual. 2018. Disponible en: https://www.bioecoactual.com/2018/01/15/el-madrono/ Fortalezas S, Tavares L, Pimpão R, Tyagi M, Pontes V, Alves PM, et al. Antioxidant properties and neuroprotective capacity of strawberry tree fruit (Arbutus unedo). Nutrients. 2010;2(2):214–29. Gomes F, Canhoto JM. Micropropagation of strawberry tree (Arbutus unedo L.) from adult plants. Vitr Cell Dev Biol - Plant. 2009;45(1):72–82. González-Chamorro F, Palacios R, Alcover J, Campos J, Borrego F, Dámaso D. Urinary tract infections and their prevention. Actas Urol Esp. 2012;36(1):48–53. HernándezRodríguez P, Baquero LCP, Álvarez MFR. Propiedades químicas y biológicas de Arbutus unedo: Una planta con potencial medicinal. Rev Cuba Farm. 2015;49(1):144– 55. 51 Howell, A. B. Cranberry Proanthocyanidins and the Maintenance of Urinary Tract Health. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 2002;42(3): 273–278. Jiménez M. MADROÑO, FRUTO DE OTOÑO [Internet]. Aktiveco. 2016. Disponible en: https://www.aktiveco.es/2016/10/14/madrono-fruto-de-otono Jurič A, Hudek Turković A, Brčić Karačonji I, Prdun S, Bubalo D, Durgo K. Cytotoxic activity of strawberry tree (Arbutus unedo L.) honey, its extract, and homogentisic acid on CAL 27, HepG2, and Caco-2 cell lines. Arh Hig Rada Toksikol. 2022;73(2):158–68. Jurica K, Brčić Karačonji I, Mikolić A, Milojković-Opsenica D, Benković V, Kopjar N. In vitro safety assessment of the strawberry tree (Arbutus unedo L.) water leaf extract and arbutin in human peripheral blood lymphocytes. Cytotechnology. 2018;70(4):1261–78. Lhaj ZA, Ait Lhaj F, Taghzouti K, Abbas Y, Gaboun F, Diria G, et al. Moroccan strawberry tree (Arbutus unedo l.) leaves: comparative study of the nutritional value and mineral composition. J Exp Biol Agric Sci. 2021;9(6):734–44. Madrueño M. El Oso y El Madroño – Licor de Madroño [Internet]. M.Madrueño. 2014. Disponible en: https://marianomadrueno.es/producto/comprar-el-oso-y-el-madrono- licor/ Malheiro R, Sá O, Pereira E, Aguiar C, Baptista P, Pereira JA. Arbutus unedo L. leaves as source of phytochemicals with bioactive properties. Ind Crops Prod. 2012;37(1):473–8. Mariotto S, Esposito E, Di Paola R, Ciampa A, Mazzon E, de Prati AC, et al. Protective effect of Arbutus unedo aqueous extract in carrageenan-induced lung inflammation in mice. Pharmacol Res. 2008;57(2):110–24. Martins J, Ares A, Costa J, Canhoto J. A baseline of Arbutus unedo L. microbiome for future research: In vitro versus ex vitro. Sci Hortic (Amsterdam). 2022;292(1). 52 Martins J, Pinto G, Canhoto J. Biotechnology of the multipurpose tree species Arbutus unedo: a review. J For Res [Internet]. 2022;33(2):377–90. Mata C, Martínez S, Olivia M, Leyva S, Carmen M, Nieto G, et al. El xido nítrico : una molécula biológica llena de contrastes. Acta Univ Univ Guanajuato. 2010;20(3):24–33. Mendes L, De Freitas V, Baptista P, Carvalho M. Comparative antihemolytic and radical scavenging activities of strawberry tree (Arbutus unedo L.) leaf and fruit. Food Chem Toxicol. 2011;49(9):2285–91. Miguel MG, Faleiro ML, Guerreiro AC, Antunes MD. Arbutus unedo L.: Chemical and biological properties. Molecules. 2014;19(10):15799–823. Morales D. Use of Strawberry Tree (Arbutus unedo) as a Source of Functional Fractions with Biological Activities. Foods. 2022;11(23). Morales P, Sánchez-mata MC. Revalorización de frutos silvestres de uso tradicional en España, Arbutus unedo L., Crataegus monogyna Jacq., Prunus spinosa L. y Rubus ulmifolius. Schott. 2015;107–12. Morgado S, Morgado M, Plácido AI, Roque F, Duarte AP. Arbutus unedo L.: From traditional medicine to potential uses in modern pharmacotherapy. J Ethnopharmacol. 2018;225:90–102. Mrabti HN, El Abbes Faouzi M, Mayuk FM, Makrane H, Limas-Nzouzi N, Dibong SD, et al. Arbutus unedo L., (Ericaceae) inhibits intestinal glucose absorption and improves glucose tolerance in rodents. J Ethnopharmacol. 2019;235:385–91. Oliveira I, Baptista P, Malheiro R, Casal S, Bento A, Pereira JA. Influence of strawberry tree (Arbutus unedo L.) fruit ripening stage on chemical composition and antioxidant activity. Food Res Int. 2011;44(5):1401–7. 53 Özcan MM, Haciseferogullan H. The Strawberry (Arbutus unedo L.) fruits: Chemical composition, physical properties and mineral contents. J Food Eng. 2007;78(3):1022–8. Pallauf K, Rivas-Gonzalo JC, del Castillo MD, Cano MP, de Pascual-Teresa S. Characterization of the antioxidant composition of strawberry tree (Arbutus unedo L.) fruits. J Food Compos Anal. 2008;21(4):273–81. Paoletti E. Ozone slows stomatal response to light and leaf wounding in a Mediterranean evergreen broadleaf, Arbutus unedo. Environ Pollut. 2005;134(3):439–45. Scarano P, Guida R, Zuzolo D, Tartaglia M, Prigioniero A, Postiglione A, et al. An Endemic Plant of the Mediterranean Area: Phytochemical Characterization of Strawberry Tree (Arbutus unedo L.) Fruits Extracts at Different Ripening Stages. Front Nutr. 2022;9(June). Shi P, Zhu W, Fu J, Liang A, Zheng T, Wen Z, et al. Avicularin alleviates acute liver failure by regulation of the TLR4/MyD88/NF-κB and Nrf2/HO-1/GPX4 pathways to reduce inflammation and ferroptosis. J Cell Mol Med. 2023;27(21):3326–38. Tan YM, Yu R, Pezzuto JM. Betulinic acid-induced programmed cell death in human melanoma cells involves mitogen-activated protein kinase activation. Clin Cancer Res. 2003;9(7):2866–75. Tardío J, Pardo-De-Santayana M, Morales R. Ethnobotanical review of wild edible plants in Spain. Bot J Linn Soc. 2006;152(1):27–71. Tartaglia M, Scarano P, Prigioniero A, Zuzolo D, Postiglione A, Falzarano A, et al. Multiomic characterisation as a tool to improve knowledge, valorisation and conservation of wild fruit genetic resources: the case of Arbutus unedo L. Front Plant Sci. 2023;14:1–14. 54 Touzani S, Al-waili A. The effect of propolis and honey on oxidant and antioxidant parameters and D-glucose induced hyperglycemia , acute kidney injury and proteinuria in rats. 2023;1(1):1–22. Tuberoso CIG, Boban M, Bifulco E, Budimir D, Pirisi FM. Antioxidant capacity and vasodilatory properties of Mediterranean food: The case of Cannonau wine, myrtle berries liqueur and strawberry-tree honey. Food Chem. 2013;140(4):686–91.