Diseño y evaluación de nuevas plataformas basadas en productos naturales frente a enfermedades degenerativas

Benemé i a Uni e sidad Au ónoma de Puebla Facul ad de Ciencias Químicas y Cen o de Química-Ins i u o de Ciencias Doc o ado en Ciencias Químicas Uni e sidad de Se illa Depa amen o de Química O gánica Facul ad de Química Doc o ado en Química “Diseño y e aluación de nue as pla a o mas basadas en p oduc os na u ales en e a en e medades degene a i as” T E S I S Que pa a ob ene el g ado de Doc o en Ciencias Químicas en el á ea de Química O gánica P esen a M. C. Rosa Isela Ma ínez La a Di ec o es de esis D a. Penélope Me ino Mon iel D . Ósca López López Puebla, México. Oc ub e 2024 Benemé i a Uni e sidad Au ónoma de Puebla Facul ad de Ciencias Químicas y Cen o de Química-Ins i u o de Ciencias Doc o ado en Ciencias Químicas Uni e sidad de Se illa Depa amen o de Química O gánica Facul ad de Química Doc o ado en Química Memo ia p esen ada po la M.C. Rosa Isela Ma ínez La a pa a op a al g ado de Doc o a en Química Puebla, México. Oc ub e 2024 Benemé i a Uni e sidad Au ónoma de Puebla Facul ad de Ciencias Químicas y Cen o de Química-Ins i u o de Ciencias Doc o ado en Ciencias Químicas Uni e sidad de Se illa Depa amen o de Química O gánica Facul ad de Química Doc o ado en Química Vo Bo. De los Di ec o es de la esis Fdo. D a Penelope Me ino Mon iel Fdo. D . Ósca López López A QUIEN CORRESPONDA: Po es e conduc o la Comisión Re iso a o mada po la D. C. Ma ía Concepción Sa a Mon iel Smi h, D.C. José Ma ía Fe nández-Bolaños Guzmán, D.C. Inés Maya Cas illa, D.C. Es ibaliz Sansinenea Royano y el D.C Jo ge R. Juá ez Posadas, in o man habe leído y ap obado pa a su imp esión, la esis denominada “Diseño y e aluación de nue as pla a o mas basadas en p oduc os na u ales en e a en e medades degene a i as ” , que p esen a la alumna M. en C. Rosa Isela Ma ínez La a pa a ob ene el g ado de Doc o a en Ciencias Químicas. Se ex iende la p esen e a los nue e días del mes de oc ub e del año dos mil ein icua o. A T E N T A M E N T E D. C. Ma ía Concepción Sa a Mon iel Smi h D. C. José Ma ía Fe nández-Bolaños Guzmán D.C. Inés Maya Cas illa D.C. Es ibaliz Sansinenea Royano D.C Jo ge R. Juá ez Posadas Posg ado en Ciencias Químicas FCQ - ICUAP Edi . 105 I, Ciudad Uni e si a ia, Col. San Manuel, Puebla, Pue. C.P. 72570 01 (222) 2 29-55-00 Ex . 7387 BUAP El p esen e abajo de in es igación se lle ó a cabo en el Labo a o io de Sín esis y Modi icación de P oduc os Na u ales de la Facul ad de Química de la Benemé i a Uni e sidad Au ónoma de Puebla, así como en el Depa amen o de Química O gánica de la Uni e sidad de Se illa, España bajo la di ección de la D a. Penélope Me ino y del D . Ósca López López, con el apoyo de la beca nacional o o gada po CONAHCyT (CVU/Beca io) 472799/758819 del 1 de ene o de 2020 al 31 de diciemb e de 2023 y de la VIEP-BUAP con el apoyo en los gas os de anspo e pa a la es ancia de in es igación ealizada en la Uni e sidad de Se illa, España. Publicación de i ada del p esen e abajo de Tesis: I Pa e de los esul ados de es e abajo se p esen a on en los siguien es cong esos: ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Blanca Colin Loza, Sa a Mon iel Smi h, José Luis Vega Báez, Ósca López. Es udios compu acionales de és e es del ácido oleanólico. Cong eso In e nacional de la Sociedad Química de México 2021, "Al i mo de nue os iempos" (Ca el, modalidad i ual). 30 de agos o del 2021. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Blanca Colin Loza, Penélope Me ino Mon iel, Sa a Mon iel Smi h, José Luis Vega Báez, Ósca López. Es udios compu acionales de és e es del ácido oleanólico en e a di e sas anhid asas ca bónicas. La inXChem Twi e Con e ence 2021 (Ca el, modalidad i ual). 20 de sep iemb e del 2021. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Sa a Mon iel Smi h, José Luis Vega Báez, Ósca López. Híb idos ácido oleanólico-cuma inas con po encial ac i idad an icance ígena. XVII Reunión de la Academia Mexicana de Química O gánica A.C. (Ca el, modalidad p esencial, Puebla). 25 de agos o del 2022. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Ósca López. Es udios compu acionales de és e es de ácido oleanólico en e a di e sas anhid asas ca bónicas. Simposio in e no XXVI del posg ado en Ciencias Químicas, BUAP (Ponencia, modalidad i ual). 9 de no iemb e de 2022. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Sa a Mon iel Smi h, José Luis Vega Báez, Ósca López. Sín esis de híb idos de ácido oleanólico con po encial ac i idad an icance ígena. La inXChem Twi e Con e ence 2022 (Ca el, modalidad i ual). 28 de no iemb e del 2022. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Ósca López. Sín esis de és e es de ácido oleanólico con po encial ac i idad an icance ígena. 3e II Simposio de Eg esados de la Maes ía en Química Bioo gánica (Ponencia, modalidad i ual). 30 de no iemb e del 2022. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Sa a Mon iel Smi h, José Luis Vega Báez, Ad ián Pue a, José M. Pad ón, José G. Fe nández Bolaños, Ósca López. Selenociana os de i ados de ácido oleanólico con po encial ac i idad an ip oli e a i a. Cong eso In e nacional de la Sociedad de Química de México 2023 (Ponencia, modalidad i ual). 2 de oc ub e del 2023. ▪ Rosa Isela Ma ínez La a, Penélope Me ino Mon iel, Sa a Mon iel Smi h, José Luis Vega Báez, Ad ián Pue a, José M. Pad ón, José G. Fe nández Bolaños, Ósca López. De i ados o ganoselénicos de i e penoides. E aluación de la ac i idad an ip oli e a i a. La inXChem Twi e Con e ence 2023 (Ca el, modalidad i ual). 16 de oc ub e del 2023. III Ag adecimien os A mis di ec o es de esis la D a. Penélope Me ino Mon iel y el D . Osca López López, po acep a me como alumna de doc o ado y po odo su apoyo an e las ad e sidades que se p esen a on en la ealización en es e abajo de esis y sob e odo po odas sus enseñanzas y dedicación. A mi comi é e iso , po su iempo y obse aciones pa a el p esen e abajo de esis: D a. Inés Maya Cas illa D a. Ma ía Concepción Sa a Mon iel Smi h D a. Es ibaliz Sansinenea Royano D . Jo ge R. Juá ez Posadas D . José Ma ía Fe nández-Bolaños Guzmán Al g upo de abajo del D . José Manuel Pad ón (Uni e sidad de la Laguna, Tene i e, España), po el apoyo en la ealización de las p uebas an ip oli e a i as. Al g upo de abajo del D . Claudiu T. Supu an (Uni e sidad de Flo encia, I alia) y a la D a. Paloma Begines Aguila , po el apoyo en la ealización de las p uebas de inhibición de anhid asas ca bónicas. Al g upo de abajo del D . Maikel Cas ellano (Facul ad de Biología, Uni e sidad de Se illa, España), po su apoyo en la ealización de los es udios de mecanismo de mue e celula y en los es udios in i o con C. elegans. A CONAHCYT, po la beca o o gada pa a la ealización de los es udios de doc o ado. A la VIEP BUAP, po el apoyo o o gado pa a la ealización de la es ancia en la Uni e sidad de Se illa, España. X median e écnicas de imagen holo omog á ica 3D en células i as (SW1573, célula de pulmón no pequeña); dicho es udio e eló la inducción de nec osis en las células umo ales. Es e ipo de mue e celula pod ía lle a se a cabo po a ec aciones en la eplicación du an e la ase S po e ec o del selenociana o 13, especí icamen e en células malignas HeLa, que, como consecuencia, lle ó a una educción de células mi ó icas, lo que indica daño en la eplicación ambién du an e la ase M del ciclo celula . Adicionalmen e, los selenociana os 11 y 14 (sus i ución en C-28, n=6, R=H; OH lib e o OAc en C-3, espec i amen e) se e alua on in i o empleando Caeno habdi is elegans, un nema odo con genoma secuenciado, y conside ado como un modelo alidado en in es igación oncológica. Los esul ados indica on que dichos compues os, po un lado, mos aban una excelen e selec i idad, no p o ocando al e aciones mo ológicas ni isiológicas del o ganismo, pe o sí una no able educción del amaño de la línea ge minal umo al, p esumiblemen e median e una acción ci os á ica. Figu a 1.2. Es uc u a gene al de los selenociana os de i ados del ácido oleanólico p epa ados. En el capí ulo 5 se ha abo dado una ap oximación no edosa pa a la ob ención de agen es an ip oli e a i a con ac i idad selec i a hacia las células umo ales (Figu a 1.3). Dicha ap oximación ha consis ido en la combinación de dos agmen os undamen ales, empleando un núcleo cen al de p-amino enol pa a la unión de ambos. Po un lado, un esiduo de ipo selenociana o, como a macó o o que p opo cione ac i idad an ip oli e a i a y, po o o lado, un ca ión lipo ílico diseñado XI pa a ac ua como ehículo selec i o hacia las mi ocond ias de las células umo ales. Los compues os con es uc u a de es e ipo se denominan agen es mi ocond io ópicos, y cuando mani ies an ac i idad an i umo al, mi ocans (mi ocond ia + cánce ). Se ha ob enido una amplia di e sidad es uc u al, modi icado la na u aleza, ipo y longi ud del conec o ( agmen o hid oca bonado, iou ea, amida), así como la na u aleza del ca ión lipo ílico ( i enil os onio (TPP), pi idinio, quinolinio, N- me ilimidazolio, odamina B), conduciendo a 8 de i ados. Los da os de la ac i idad an ip oli e a i a de es os de i ados a oja on que p esen an un e ec o de inhibición del c ecimien o celula sob e las 6 líneas celula es de umo es sólidos es udiadas en el ango mic omola bajo, des acando los ca iones de ipo i enil os onio y odamina, donde 25 ue el de i ado cabeza de se ie siendo has a casi 9 eces más po en e que los á macos de e e encia sob e la línea celula esis en e a mul i á macos. Po o o lado, la adición del agmen o de selenio a la odamina B pe mi ió aumen a la ac i idad de es a has a 11 eces en la línea celula esis en e a mul i á macos. Figu a 1.3. Es uc u a gene al de los agen es mi ocond io ópicos p epa ados. XII Finalmen e, en el Capí ulo 6 se ha lle ado a cabo la p epa ación de inhibido es duales de anhid asas ca bónicas y NAMPT (nico inamida adenina dinucleó ido os o ibosil ans e asa), como ejemplos de á macos mul idiana con ac i idad an i umo al; la Figu a 1.4 mues a la es uc u a gene al de los 10 híb idos ob enidos. Ambas enzimas se conside an en la ac ualidad como dianas e apéu icas de in e és en e al cánce . Las anhid asas ca bónicas, sob eexp esadas en umo es hipóxicos, son esponsables del mic oambien e ácido del umo , que pe mi e su supe i encia y expansión; como a macó o o pa a su inhibición se ha seleccionado un esiduo de cuma ina, que ac úa como inhibido suicida. Po o o lado, la NAMPT es la enzima limi an e de biosín esis de NAD+ (nico inamida adenina dinucleó ido), al amen e demandado po las células umo ales; pa a su inhibición se ha empleado un esiduo de pi idina, sus i uido en C-3 ó C-4, como mimé ico de la nico inamida (NAM). El diseño de inhibido es de ambas enzimas sigue un pa ón ela i amen e análogo, con la exis encia de una cabeza que in e accionan con el cen o ac i o de la enzima, y una cola hid o óbica, que puede es ablece in e acciones de an de Waals a o ables. Como agmen o he e ocíclico mimé ico de la NAM se ha empleado un esiduo de pi idina, sus i uido bien en la posición C-3 ó C-4, con conec o es de ipo cianoguanidina, iou ea o amida. El espaciado ue, en odos los casos, un agmen o de ipo hexame ileno; po o o lado, en la cuma ina se inco po a on dis in os sus i uyen es en las posiciones C-3 y C-4. XIII Figu a 1.4. Diseño es uc u al pa a la p epa ación de inhibido es duales de anhid asas ca bónicas-NAMPT. Todos los de i ados esul a on se inhibido es po en es y selec i os de las dos iso o mas de anhid asas ca bónicas humanas in oluc adas en p ocesos umo ales (CA IX y XII), con un ango de ac i idad nanomola -submic omola e índice de selec i idad supe io a 8700 con espec o a iso o mas ci osólicas. El o den de ac i idad obse ado ue: amida > cianoguanidina C-4 > iou ea C-3 > cianoguanidina C-3. Es os compues os se e alua án ambién p óximamen e como inhibido es del NAMPT. Po o o lado, con espec o a las ac i idades an ip oli e a i as, si bien no se obse a un pa ón cla o, el empleo de cianoguanidinas en C-4 y iou eas en C-3 del agmen o de pi idina, así como cuma inas dime iladas p opo cionó las mejo es ac i idades en la mayo ía de las líneas celula es e aluadas. De es a o ma, la iou ea 41 pod ía conside a se como el de i ado cabeza de se ie, con alo es de GI50 en el ango mic omola bajo pa a 5 de las 6 líneas, incluyendo las dos líneas de umo es esis en es a mul i á maco. XIV 1. Abs ac This Doc o al Thesis has been de eloped wi hin he esea ch g oups Sín esis y Modi icación de P oduc os Na u ales (Benemé i a Uni e sidad Au ónoma de Puebla (BUAP), Puebla, México) and Química Fina de Ca bohid a os (Uni e sidad de Se illa), whose esea ch is ocused on he p epa a ion o bioac i e compounds a ge ing degene a i e diseases like cance , diabe es, o Alzheime ’s disease. Resea ch p esen ed in his documen was unded by p ojec s o Basic Science (CB-2015/257464, CONACyT, México), Pa adigms and Con o e sies 2022 (320334, CONACyT, México), Syn hesis and in silico s udies o an ip oli e a i e agen s om na u al p oduc s (VIEP, 2023-2024, BUAP, México), and by p ojec s om he Spanish Minis y o Science and Inno a ion (MICIN), Molecules and Mac omolecules wi h Mul i a ge Ac i i y owa ds Degene a i e Diseases (CTQ2016-78703-P) and Chemical Sys ems o he Vec o iza ion and Selec i e Release o New Cy o oxic Enzyme Inhibi o s (PID2020-116460RB-I00), om he Spanish Minis y o Science and Inno a ion (MICIN, Spain). The Thesis is s uc u ed in o h ee di e en sec ions, each o hem add essing inno a i e app oaches o he de elopmen o new p oduc s wi h po en ial an i umo ac i i y. Chap e 4 desc ibes he p epa a ion o de i a i es o he pen acyclic i e penoid oleanolic acid, isola ed om mo e han 1600 plan species, pa icula ly abundan in he Oleaceae amily, mainly in he oli e ee. Oleanolic acid exhibi s in e es ing biological ac i i ies, especially an i umo al, sugges ing ha i can se e as an excellen building block o ob aining new de i a i es wi h enhanced ac i i ies. In his Chap e , he de i a iza ion o oleanolic acid a he C-3 (hyd oxyl g oup) and C-28 (ca boxylic acid) posi ions has been accomplished, using wo di e en app oaches. Thus, oleanolic acid-couma in hyb ids ha e been p epa ed o analyse he possible syne gy in he ac i i ies o bo h agmen s; couma ins, whose s uc u e XV comes om he usion o benzene and α-py one, a e phenolic sys ems widely dis ibu ed in na u e and conside ed as p i ileged s uc u es in biomedical esea ch. These hyb ids we e p epa ed by inse ing a hyd oca bon space a he C-28 posi ion o he oleanolic acid and C-7 o he couma in. Bo h, he dis ance be ween hese pha macopho es, and he subs i uen s on he C-3 and C-4 posi ions o he couma in we e modi ied, aiming o ob ain s uc u e-ac i i y ela ionships in hei an ip oli e a i e p ope ies; his allowed o ob ain 9 hyb ids, whose gene al s uc u e is shown in Figu e 1.1. The connec ion be ween he couma in esidue, ob ained in an e icien ashion h ough he Pechmann condensa ion o eso cinol and di e en β-ke oes e s, and he oleanolic acid ook place wi h good yields. The in i o e alua ion o an ip oli e a i e ac i i y, pe o med on 6 human solid umou cell lines, e ealed ha only compound 4 (R1=CH3, R2=H, n=3) showed app eciable ac i i y; his compound demons a ed good ac i i y agains he HeLa umo line (ce ical cance , GI50= 7.0 µM), wi h po ency signi ican ly supe io o ha shown by he e e ence d ug abi a e one. Figu e 1.1. Gene al s uc u e o he oleanolic acid-couma in hyb ids p epa ed he ein. The second app oach o he de i a iza ion o oleanolic acid in ol ed i s combina ion wi h a second pha macopho e o o ganoselenium na u e, speci ically selenocyana e. This s a egy comes om he as expe ience o he esea ch g oups XVI in ol ed in his Doc o al Thesis in he p epa a ion o o ganoselenium compounds wi h biological ac i i y. The inco po a ion o he o ganoselenium esidue was ca ied ou a bo h he C-3 and C-28 posi ions o oleanolic acid, using a space as shown in he p e ious sec ion. The in luence o he con o ma ional lexibili y o he space (hyd oca bon s. p-phenylene), i s leng h, he de i a iza ion posi ion on oleanolic acid (C-3 s. C-28), and he na u e o C-3 (OH s. OAc) we e analyzed; his allowed he syn hesis, wi h good o e all yields, o 14 hyb ids whose gene al s uc u e is shown in Figu e 1.2. The s udy o he in i o an ip oli e a i e p ope ies e ealed p omising esul s. On he one hand, de i a i es subs i u ed a C-28, wi h space leng hs o up o six ca bons, ac ed as po en an ip oli e a i e agen s, wi h GI50 alues in he low mic omola ange (1.3‒2.4 µM), ep esen ing an up o 19- old inc eased ac i i y compa ed o na u al oleanolic acid, and highe han 77- old compa ed o abi a e one, a syn he ic s e oidal d ug used in chemo he apy. The use o longe chains (n=9) led o a signi ican dec ease in ac i i y; no di e ence in ac i i y was obse ed when modi ying he con o ma ional lexibili y o he space . De i a i es subs i u ed a C-28 wi h he ee hyd oxyl g oup a C-3 p o ed o be mo e po en han hei O-ace yla ed coun e pa s; u he mo e, subs i u ion a C-28 p o ed o be mo e bene icial han ha a C-3, especially o mul id ug esis an cell lines. To u he in es iga e in o he mode o ac ion o hese compounds, selenocyana e 11 (subs i u ion a C-28, n=3, R=H) was subjec ed o a s udy using 3D holo omog aphic imaging echniques on li ing cells (SW1573, non-small cell lung); his s udy e ealed he induc ion o nec osis in umo cells. This ype o cell dea h could be ca ied ou by eplica ion impai men s o e he S phase p o oked by selenocyana e 13, speci ically in malignan HeLa cells, which as a consequence, led o a educ ion in mi o ic cells, indica ing damage o eplica ion also du ing he M phase o he cell cycle. XVII Addi ionally, selenocyana es 11 and 14 (subs i u ion a C-28, n=6, R=H) we e e alua ed in i o using Caeno habdi is elegans, a nema ode wi h a sequenced genome, conside ed as a alida ed model in oncological esea ch. The esul s indica ed ha hese compounds showed excellen selec i i y, causing no mo phological o physiological al e a ions in he o ganism, bu a no able educ ion in he size o he umo ge mline, p esumably h ough a cy os a ic ac ion. Figu e 1.2. Gene al s uc u e o oleanolic acid-de i ed selenocyana es p epa ed he ein. In Chap e 5, a no el app oach has been add essed o ob aining an ip oli e a i e agen s wi h selec i e ac i i y agains umo cells (Figu e 1.3). This app oach in ol ed he combina ion o wo key agmen s using a co e o p- aminophenol o hei inco po a ion. On he one hand, a selenocyana e esidue ha would ac as a pha macopho e p o iding an ip oli e a i e ac i i y, and on he o he hand, a lipophilic ca ion designed o se e as a selec i e ehicle a ge ing he mi ochond ia o umo cells. Compounds wi h his s uc u e a e called mi ochond io opic agen s, and when hey exhibi an i umo ac i i y, hey a e known as mi ocans (mi ochond ia + cance ). A wide s uc u al di e si y has been achie ed by modi ying he na u e, ype, and leng h o he linke (hyd oca bon agmen , hiou ea, amide), as well as he na u e o he lipophilic ca ion ( iphenylphosphonium (TPP), py idinium, quinolinium, N-me hylimidazolium, hodamine B), leading o 8 de i a i es. The an ip oli e a i e ac i i y da a o hese de i a i es showed ha hey induce he inhibi ion o cell g ow h on he 6 solid umo cell lines in he low mic omola ange. The bes esul s we e ob ained when iphenylphosphonium b omide and hodamine we e used as XVIII lipophilic ca ions, compound 25 being he lead de i a i e, oughly 9- old s onge han he e e ence d ug agains WiD cell line. In e es ingly, he addi ion o he selenium agmen o hodamine B allowed o inc ease i s cellula inhibi ion e ec up o 11 imes in he mul id ug- esis an cell line. Figu e 1.3. Gene al s uc u e o he mi ochond io opic agen s p epa ed he ein. Finally, in Chap e 6, he p epa a ion o dual inhibi o s o ca bonic anhyd ases and NAMPT (nico inamide phospho ibosyl ans e ase) enzymes has been accomplished as examples o mul i a ge d ugs wi h an i umo ac i i y; Figu e 1.4 shows he gene al s uc u e o he 10 hyb ids ob ained. Bo h enzymes a e cu en ly conside ed as he apeu ic a ge s o in e es agains cance . Ca bonic anhyd ases, o e exp essed in hypoxic umo s, a e esponsible o he acidic mic oen i onmen o he umo , which allows i s su i al and expansion; a couma in esidue, ac ing as a suicide inhibi o , has been selec ed as he pha macopho e o hei inhibi ion. On he o he hand, NAMPT is he a e- limi ing enzyme in he biosyn hesis o NAD+ (nico inamide adenine dinucleo ide), highly demanded by umo cells; a py idine esidue subs i u ed a C-3 o C-4, ac ing as a nico inamide (NAM) mimic, has been selec ed o i s inhibi ion. XIX The design o inhibi o s o bo h enzymes ollows a ela i ely simila pa e n, ea u ing a head ha in e ac s wi h he enzyme ac i e cen e , and a hyd ophobic ail, which can es ablish a o able an de Waals in e ac ions. A py idine esidue subs i u ed ei he a he C-3 o C-4 posi ion was used o mimicking he he e ocyclic moie y o NAM, wi h linke s such as cyanoguanidine, hiou ea, o amide. The space was, in all cases, a hexame hylene agmen , and he couma in inco po a es di e en subs i uen s a he C-3 and C-4 posi ions. All de i a i es p o ed o be po en and selec i e inhibi o s o he wo human ca bonic anhyd ase iso o ms in ol ed in umo p ocesses (CA IX and XII), wi h ac i i ies in he nanomola -submic omola ange and a selec i i y index ela i e o cy osolic iso o ms g ea e han 8700. The obse ed ac i i y o de was: amide > C-4 cyanoguanidine > C-3 hiou ea > C-3 cyanoguanidine. These compounds will also be e alua ed as po en ial NAMPT inhibi o s. Rega ding an ip oli e a i e ac i i ies, al hough a no clea pa e n was obse ed, he use o C-4 cyanoguanidines and C-3 hiou eas, as well as dime hyla ed couma ins, p o ided he bes ac i i ies in mos o he e alua ed cell lines. Thus, hiou ea 41 could be conside ed he leading de i a i e, wi h GI50 alues in he low mic omola ange o 5 ou o he 6 lines, including he wo mul i-d ug esis an umo lines. Figu e 1.4. S uc u al design o he dual ca bonic anhyd ases-NAMPT inhibi o s. In oducción 1 3. In oducción gene al El cánce es un conglome ado de cien os de en e medades donde las células p esen an un desa ollo descon olado y iene el po encial de ex ende se a di e en es pa es del cue po, 1 siendo una de las p incipales causas de mo alidad y mo bilidad a ni el mundial. La O ganización Mundial de la Salud (OMS) epo ó que en el año 2022 hubo ce ca de 20 millones de nue os casos de cánce y al ededo de 9.7 millones de de unciones a ni el global, es imándose más de 35 millones de nue os casos pa a el año 2050. 2 En México se egis a on ce ca de 848 mil mue es en el año 2022, de las cuales un 10.6% ue causado po umo es malignos, p incipalmen e a pa i de los 50 años en ambos sexos. Po o o lado, en e los di e en es angos de edad de la población, los p incipales causan es de de unciones elacionadas con el cánce ue on leucemia, lin oma no Hodgking y umo es de mama, colon, es ómago, o a io y pulmón. 3 Los p incipales a amien os exis en es con a el cánce son la ci ugía, adio e apia y quimio e apia, incluyendo la inmuno e apia. 4 Sin emba go, en algunos casos es os a amien os esul an poco e ec i os, debido en pa e a la quimio esis encia adqui ida po las células umo ales a los di e en es agen es quimio e apéu icos, o son causan es de e ec os secunda ios se e os, a consecuencia de su al a de selec i idad. Todo es o hace que la búsqueda de nue os agen es e apéu icos sea un á ea p io i a ia en la in es igación biomédica. 5 1 . Du a S., Mahalanobish S., Saha S., Ghosh S., Sil P.C. Na u al p oduc s: An upcoming he apeu ic app oach o cance . Food Chem. Toxicol. 2019, 128, 240‒255. 2 . 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In oducción 2 Los p oduc os na u ales en el a amien o del cánce han cob ado g an ele ancia en la indus ia a macéu ica, g acias a su buena selec i idad con a las células “ano males” y a su amplia a iedad es uc u al, lo cual los con ie e en in e esan es a macó o os. 6 Muchos de ellos in e ie en en algunas ases del ciclo celula , ya que du an e el desa ollo de la en e medad se obse an mu aciones en el desa ollo de algunos genes que egulan la p oducción de p o eínas de señalización celula , ac o es de c ecimien o y sus ecep o es, así como p o eínas an iapop ó icas y p oapop ó icas o a ac o es de ansc ipción; es os úl imos se siguen u ilizando como algunas de las dianas e apéu icas pa a el descub imien o de á macos an icance ígenos. 7 Ap oximadamen e un 80% de los medicamen os ap obados pa a el a amien o del cánce de i a de los p oduc os na u ales, siendo un 75% de es os p o enien es de plan as. 8 , 9 Los p incipales p oduc os na u ales de i ados de plan as como agen es an icance ígenos, ya ap obados clínicamen e, se han clasi icado en cua o g andes g upos: alcaloides de la inca, epipodo ilo oxinas, axanos y camp o ecinas ( igu a 3.1). En e los alcaloides p oceden es de la inca, la inblas ina y la inc is ina se han u ilizado en quimio e apia du an e 40 años, donde su mecanismo de acción es la in e upción de la o mación del huso mi ó ico po el ensamblaje con la β- ubulina, lo que de iene el ciclo celula en la me a ase lo que a su ez lle a a la mue e celula , y se emplean p incipalmen e con a el lin oma de Hodgkin, cánce de pulmón y de mama. 10 6 . Ha ey A.L., Ed ada-Ebel R., Quinn R.J. 1 The e-eme gence o na u al p oduc s o d ug disco e y in he genomics e a. Na . Re . D ug Disco . 2015, 14, 111‒129. 7 . Liao Y., Y, G., Li Q., An, J., Wang, D. The signaling pa hways and a ge s o na u al p oduc s om adi ional Chinese medicine ea ing gas ic cance p o ide new candida e he apeu ic s a egies. Biochim. Biophys. Ac a - Re . Cance . 2023, 1878, 188998. 8 . Newman D.J., C agg G.M. Na u al p oduc s as sou ces o new d ugs o e he nea ly ou decades om 01/1981 o 09/2019. J. Na . P od. 2020, 83, 770‒803. 9 . 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Po o o lado, la camp o ecina, aislada de la co eza y hojas del á bol de o igen chino Camp o heca acumina a, ac úa sob e la opoisome asa I, inhibiendo la eplicación del ADN y la ansc ipción del ARN; an o el e opósido como la camp o ecina son u ilizados en a ios ipos de cánce . 11 Figu a 3.1. P incipales p oduc os na u ales de i ados de plan as. Del g upo de los axanos, el pacli axel o Taxol® es de los á macos an icance ígenos más u ilizados, y se ha aislado de la co eza del á bol Taxus b e i olia Nu . ( ejo del Pací ico; Nu . ab e ia u a del au o axonómico pa a Thomas Nu all) y se siguen p oponiendo u as sin é icas debido a la pequeña inblas ine, inc is ine, ino elbine and 4-O-deace yl ino elbine in human plasma using LC- MS/MS. J. Pha m. Biomed. Anal. 2022, 215, 114772. 11 . Topkaya C., Aslan S., Hökelek T., Gök ü k T., Kincal S., Al un as D.B., Güp R. Syn heses, c ys al s uc u es, hi sh eld su ace analyses and elec ochemical e oposide/camp o echin senso applica ions o ace aldehyde oxime de i a i es. J. Mol. S uc . 2022, 1265, 133339. In oducción 4 can idad aislada de su uen e na u al. La co eza de un solo á bol p opo ciona del o den de 0.5 g de axol, y pa a el a amien o e ec i o de un pacien e se eque i ían de 1 a 3 á boles. 12 Como al e na i a, de las agujas del ejo se aisló un compues o denominado baca ina III, sin comp ome e la in eg idad del á bol, y que puede se ans o mado en axol median e un p oceso de semisín esis. Su p incipal mecanismo de acción es sob e la ubulina, lo que causa p oblemas en el ensamblaje del huso mi ó ico y seg egación c omosómica, bloqueando la mi osis, lo cual conduce a su ez a la apop osis celula de las células umo ales. 13 Además de los compues os mencionados an e io men e, los i e penos pen acíclicos son un g upo de me aboli os secunda ios p ome edo es pa a el a amien o del cánce . Los i e penos que pe enecen a los g upos lupano, oleano o u sano ienen po encial pa a a a el cánce median e di e en es modos de acción, p incipalmen e po su e ec o induc o de apop osis, 14 lo cual se abo da á con mayo de alle en el Capí ulo 4 en la p epa ación de los de i ados del ácido oleanólico. Una de las dianas u ilizadas en la ac ualidad en la e apia con a el cánce es la mi ocond ia, o gánulo esponsable de la p oducción de la ene gía celula . En es e con ex o, se diseñan moléculas de bajo peso molecula que ac úan como ‘ ec o es’ pa a la adminis ación selec i a de á macos hacia el in e io de la mi ocond ia, a lo que se denomina agen es mi ocond io ópicos. 15 Un mecanismo pa a la ob ención de es e ipo de moléculas es median e la adición a los a macó o os de algunos ca iones lipo ílicos, es o debido a que la memb ana mi ocond ial p esen a un po encial nega i o, más acusado en las células umo ales, pe mi iendo de es a 12 . 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In oducción 5 mane a la acumulación de de i ados de ca ga posi i a en su in e io . 16 Un ejemplo, es la inco po ación del g upo i enil os onio (+PPh3, TPP+), lo que aumen a la e icacia de compues os an ip oli e a i os sin al e a su mecanismo de acción; 17 es a emá ica se desa olla á en el Capí ulo 5. O a de las es a egias pa a la búsqueda de moléculas an icance ígenas es la inhibición de enzimas cla e en el desa ollo y/o uncionamien o celula . En es e con ex o, exis e in e és en el desa ollo de compues os que, median e la inhibición de alguna enzima, a ec e alguna de las ases del me abolismo celula ; ejemplo de es o es el dinucleó ido de nico inamida adenina (NAD), el cual unciona como co ac o en p ocesos como la glucólisis y en la sín esis y oxidación de lípidos, donde la NAMPT (nico inamida os o ibosil ans e asa) ac úa como enzima egulado a de su biosín esis. 18 Se ha obse ado que en células cance ígenas hay un aumen o en el consumo de NAD, po lo que la inhibición de NAMPT esul a una diana a ac i a pa a el desa ollo de nue os agen es an icance ígenos. 19 En e los de i ados sin é icos epo ados con ac i idad sob e NAMPT, conside ados de p ime a gene ación, des acan de i ados de pi idina de ipo amida como el compues o FK866 y cianoguanidinas como el compues o CHS- 828 ( igu a 3.2). 20 16 . Hicke F.J., Pue a A., Dinić, J., Pešić M., Pad ón J.M., Lopéz Ó., Fe nandez‐Bolanos J.G. 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Small molecule inhibi o s simul aneously a ge ing cance me abolism and epigene ics: Disco e y o no el nico inamide phospho ibosyl ans e ase (NAMPT) and his one deace ylase (HDAC) dual inhibi o s. J. Med. Chem. 2017, 60, 7965‒7983. 20 . Ozgencil F., E en G. Field-based 3D-QSAR s udies on amide- and u ea-con aining NAMPT inhibi o s. Chemom. In ell. Lab. Sys . 2023, 242, 104984. In oducción 6 Figu a 3.2. Inhibido es de NAMPT de p ime a gene ación. O o ejemplo son las anhid asas ca bónicas, es e es un g upo de me aloenzimas cuya unción es ca aliza la hid ólisis e e sible de CO2 a bica bona o y p o ón. 21 Es as enzimas se han ca ego izado en 8 amilias, donde la amilia α co esponde a las anhid asas ca bónicas humanas. De en e las 15 iso o mas de es as úl imas, las anhid asas ca bónicas IX y XII son de in e és po su sob eexp esión en células umo ales, lo que las con ie e en una diana e apéu ica in e esan e pa a el descub imien o de moléculas bioac i as con a el cánce . 22 En e los p incipales inhibido es de anhid asas ca bónicas humanas des acan las cuma inas, las cuales se encuen an ca ego izadas como inhibido es no clásicos, y a ios g upos de in es igación han demos ado su e ec i idad. 23 Lo an e io se abo da á más de alladamen e en el Capí ulo 6. 21 . Takla F.N., Zaib S., Bayoumi W.A., Shehzadi K., El‐Messe y S.M., Anjum S., Faisal A., Nas M.N. Ta ge ing ca bonic anhyd ases II/IX/XII wi h no el se ies o couma in-based compounds: Syn hesis, biological ac i i y and molecula dynamics analysis. J. Mol. S uc . 2024, 1300, 137277. 22 . Singh P., Goud N.S., Swain B., Supu an C.T., Ullah Q., Supu an C.T., A i uddin M. 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Es e compues o es abundan e en plan as pe enecien es a la amilia Oleaceae, p incipalmen e el oli o (Olea eu opea), del cual adqui ió su nomb e. 24 , 25 Se encuen a ambién en plan as como la Lan ana cama a y Lisgus um lucidum, usadas en la medicina adicional pa a a a di e sos padecimien os. 26 Figu a 4.1. Es uc u a del ácido oleanólico con la nume ación de su esquele o ca bonado. En la na u aleza, el OA se encuen a en o ma de ácido lib e o como glicósidos de saponinas i e penoides, y comúnmen e iene acompañado de su isóme o, el ácido u sólico.25 Es un compues o de colo ama illo cla o, no olá il, 24 . Pollie J., Goossens A. Oleanolic acid. Phy ochemis y, 2012, 77, 10‒15. 25 . Lee J.H., Yoo E.S., Han S.H., Jung G.H., Han E.J., Jung S.H., Kim B.S., Cho S.D., Nam J.S., Choi C., Che J.H., Jun J.Y. Oleanolic acid induces apop osis and au ophagy ia he PI3K/AKT/mTOR pa hway in AGS human gas ic cance cells. J. Func . Foods, 2021, 87, 104854. 26 . Ayeleso T.B., Ma umba M.G., Mukwe ho E. 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Las es posiciones eac i as del OA, C-3 (g upo hid oxilo), C-12 y C-13 (doble enlace) y C-28 (ácido ca boxílico), han dado luga , median e ans o maciones químicas, a nue as se ies de i e penoides con dis in os e ec os biológicos. 29 27 . Cas ellano J.M., Ramos-Rome o S., Pe ona J.S. Oleanolic acid: Ex ac ion, cha ac e iza ion and biological ac i i y. Nu ien , 2022, 31, 623‒651. 28 . Gill B.S., Kuma S., Na gee . T i e penes in cance : signi icance and hei in luence. Mol. Biol. Rep. 2016, 43, 881‒896. 29 . Rali S., Oyedeji O.O., A emu O.O., Oyedeji A.O., Nkeh-Chungag B.N. Semisyn hesis o de i a i es o oleanolic acid om Syzygium a oma icum and hei an inocicep i e and an i- in lamma o y p ope ies. Media . In lamm. 2016, 8401843. An eceden es 9 Figu a 4.2. Ru a biosin é ica del ácido oleanólico. Ab e ia u as: IPP, pi o os a o de isopen enilo; DMAPP, di os a o de dime ilalilo; FPS, pi o os a o de a nesilo sin asa; FPP, pi o os a o de a nesilo; SQS, escualeno sin asa; SQE, escualeno epoxidasa; OCS, oxidoescualeno ciclasa; BAS, β-ami ina sin asa; CYP716, enzima del ci oc omo P450 que pe enece al g upo CP71. Adap ado de Bo ela e al. 30 La biodisponibilidad es la p opo ción de un compues o que ing esa a la ci culación sis émica con espec o a la can idad inicialmen e in oducida en el o ganismo; 31 es udios expe imen ales y clínicos desc ibie on la p esencia de ácido 30 . Bo ella R., Fo i L., Gibellini L., de Gae ano A., de Biasi S., Nasi M., Cossa izza A., Pin i M. Syn hesis and an icance ac i i y o CDDO and CDDO-Me, wo de i a i es o na u al i e penoids. Molecules, 2019, 24, 4097‒4116. 31 . Abuhassi a-Cohen Y., Li ney Y.D. Enhancing he bioa ailabili y o encapsula ed hyd ophobic nu aceu icals: Insigh s om in i o, in i o, and clinical s udies. Cu . Opin. Food Sci. 2022, 45, 100832. An eceden es 10 oleanólico en sang e a ias ho as después de la inges a sin se me abolizado, debido a su biodisponibilidad o al baja po su poca solubilidad en agua (4.61 mg/L a 20°C). 32 Debido a su baja biodisponibilidad, la baja solubilidad y poca pe meabilidad en memb anas biológicas, se ha clasi icado al OA den o de la ca ego ía IV de á macos, y una de las soluciones a es os p oblemas es su posible adminis ación en nanoemulsiones, liposomas o nanopa ículas, así como la bioconjugación con p o eínas, po ejemplo albúmina. 33 En e las p opiedades biológicas más impo an es del OA se encuen a su e ec o an iin lama o io, an ibac e iano, 34 an i i al, 35 an idiabé ico, 36 an ioxidan e 37 y an icance ígeno. 38 Tal ac i idad an icance ígena la eje ce median e la inducción de apop osis celula y median e ía mi ocond ial po la ac i ación de caspasas, como la caspasa C, disminución de la ac i idad de Bcl-2 y sob eexp esión del egulado 32 . Jiang, Q., Yang, X., Du, P., Zhang, H., Zhang, T. 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An eceden es 17 p opiedades biológicas, como an iin lama o ias, 56 an ibac e ianas, 57 an i i ales, an ioxidan es, an i ombó icos, an i-Alzheime y e ec os an i umo ales. 58 ‒ 61 Su e ec o biológico puede a ibui se a la capacidad de o ma in e acciones no co alen es, de ipo π-π, hid o óbicas, elec os á icas, enlaces de hid ógeno, coo dinación con me ales y ue zas de an de Waals con di e en es enzimas y dianas e apéu icas; adicionalmen e, suelen exhibi una educida oxicidad. 62 , 63 La inges a o con ac o dé mico con plan as que con ienen cuma inas pe mi e su abso ción al o en e sanguíneo, sin emba go, su ac i idad puede se a iable debido a di e en es ac o es como la es abilidad o su abso ción in es inal. La adminis ación di ec a po ía o al de las cuma inas, a di e encia de su consumo po uen es alimen a ias, dan luga a concen aciones mucho mayo es en el o en e sanguíneo. Se ha epo ado la p esencia de u anocuma inas en plasma 15 minu os después de su adminis ación y su concen ación máxima a los 60 minu os, lo que 56 . Song S., Ren B., Wu X., Xie Y., Cheng B., Wei Q., Pang W., Wu Z., Zhang X., Li X., Xiao W. Asia icasics A-O, s uc u ally in iguing couma ins om Toddalia asia ica wi h po en ial in lamma o y inhibi o y ac i i y. Phy ochemis y, 2024, 221, 114042. 57 . Logana han V., Ahamed A.J., Su end akuma R., Gaa a A.Z., Raman G., Idhayadhulla, A. Syn hesis o an h aquinone-connec ed couma in de i a i es ia g inds one me hod and hei e alua ion o an ibac e ial, an ioxidan , y osinase inhibi o y ac i i ies wi h molecula docking, and DFT calcula ion s udies. Heliyon, 2024, 10, e25168. 58 . Al-Wa hi T., Sab A., Elkaeed E.B., Eldehna W.M. Recen ad ancemen s o couma in-based an icance agen s: An up- o-da e e iew. Bioo g. Chem. 2020, 103, 104163. 59 . Ce i A., Ailla d P., Haze i N., Pe i L., Chai, C.L.L., Willis A.C., Banwell, M.G. To al syn heses o he couma in-con aining na u al p oduc s Pimpinellin and F axe in using Au(I)-ca alyzed in amolecula hyd oa yla ion (IMHA) chemis y. J. O g. Chem. 2013, 78, 9876–9882. 60 . Gangopadhyay A. Plan -de i ed na u al couma ins wi h an icance po en ials: u u e and challenges. J. He b. Med. 2023, 42, 100797. 61 . Mus a a Y.F., Ismael R.N., Jebi R.M. Na u al couma ins om wo cul i a s o wa e melon seeds as biosa e an icance agen s, an algo i hm o hei isola ion and e alua ion. J. Mol. S uc . 2024, 1295, 136644. 62 . Ahmed E.Y., Abdelha ez O.M., Zaa a D., Se y A.M., Ahmed Y.H., El‐Telbany R.F.A., Abd Elmageed, Z.Y., Ali, H.I. An i umo and mul ikinase inhibi ion ac i i ies o some syn hesized couma in and benzo u an de i a i es. A chi . Pha m. 2022, 355, 2100327. 63 . Zeki N.M., Mus a a, Y.F. 6,7-Couma in-he e ocyclic hyb ids: A comp ehensi e e iew o hei na u al sou ces, syn he ic app oaches, and bioac i i y. J. Mol. S uc . 2024, 1303, 137601. An eceden es 18 indica una ácil abso ción po ía gas oin es inal y ápida dis ibución al es o del o ganismo. 64 Las cuma inas se me abolizan inicialmen e po enzimas monooxigenasas del ci oc omo P-450 (CYP2A6) en el hígado, lo que lle a a una hid oxilación (mayo i a iamen e en la posición 7 y 3 pa a da 7-hid oxicuma ina o 3- hid oxicuma ina) an es de la conjugación en el me abolismo de ase II p incipalmen e con ácido glucu ónico. 65 La p esencia de ácido O-cumá ico (OCA), p incipal me aboli o biodisponible de cuma inas en plasma puede indica una u a me abólica al e na i a de las cuma inas en humanos ( igu a 4.9). Las cuma inas pe manecen in ac as en el medio ácido del es ómago, en el in es ino son hid olizadas en el medio básico pa a o ma OCA y se abso be con el es o de cuma ina pa a llega al hígado y se me aboliza po la enzima CYP2A6 po me abolismo de ase I, mien as que o a pa e su e me abolismo de ase II pa a da el glucu ónido de 7-hid oxicuma ina.60, 66 64 . Melough M. M., Cho E. Fu ocouma ins: A e iew o biochemical ac i i ies, die a y sou ces and in ake, and po en ial heal h isks. Food Chem.Toxicol. 2018, 113, 99‒107. 65 . Annunzia a F., Pinna C., Dalla alle S., Tambo ini L., Pin o A. An o e iew o couma in as a e sa ile and eadily accessible sca old wi h b oad- anging biological ac i i ies. In . J. Mol. Sci. 2020, 21, 4618. 66 . Leona L.P., Gaspa e o J.C., Pon es F.L.D., Ce quei a L.B., De F ancisco T.M.G., Pon a olo R. New me aboli es o couma in de ec ed in human u ine using ul a pe o mance liquid ch oma og aphy/quad upole- ime-o - ligh andem mass spec ome y. Molecules, 2017, 22, 2031. An eceden es 19 Figu a 4.9. Me abolismo de cuma inas en humanos. Adap ado de Gangopadhyay e al.60 Las cuma inas han enido un ol impo an e ambién la indus ia alimen icia y cosmé ica, como blanqueado es óp icos, como an icoagulan es y en la p epa ación de insec icidas, así como en el campo de los senso es, celdas sola es, diodos o gánicos emiso es de luz y in es de láse es. 67 ‒ 69 Las cuma inas se sin e iza on po p ime a ez en 1868, con el a amien o de la sal sódica de salicilaldehído con anhíd ido acé ico, conocida como eacción de Pe kin. O os mé odos son con el a amien o de salicilaldehído con ynamidas u ilizando b omu o de zinc como ca alizado 70 o median e la i adiación con mic oondas a 1,3-dihid obenceno con ace oace a o de e ilo en condiciones lib es de 67 . Amoozadeh A., Ahmadzadeh M., Kol a i E. Easy access o couma in de i a i es using alumina sul u ic acid as an e icien and eusable ca alys unde sol en - ee condi ions. J. Chem. 2013, 767825. 68 . Lee J.H., Jeong A.R., Shin I., Kim H., Hong J. Fluo escence Tu n-On senso o cyanide based on a cobal (II)−couma inylsalen complex. O g. Le . 2010, 12, 764‒767. 69 . Zhou S., Jia J., Gao J., Li H., Li Y., Wei S. The one-po syn hesis and luo ime ic s udy o 3-(2′- benzo hiazolyl)couma ins. Dyes Pigmen s, 2010, 86, 123‒128. 70 . Yoo H.J., Youn S.W. Zn(II)-ca alyzed one-po syn hesis o couma ins om ynamides and salicylaldehydes. O g. Le . 2019, 21, 3422–3426. An eceden es 20 disol en e; 71 no obs an e, la condensación de Pechmann con inúa siendo la me odología más u ilizada pa a la sín esis de cuma inas. 72 La eacción de Pechmann consis e en la condensación de enoles con β- ce oés e es, usualmen e en p esencia de di e en es ácidos como ca alizado es, pa a da luga a cuma inas 4-sus i uidas ( igu a 4.10). 73 Se ha epo ado que la na u aleza del g upo p esen e en la posición C-4 a a condiciona la ac i idad con a células cance ígenas.51,74 Figu a 4.10. Mecanismo de eacción p opues o po Amoozadeh e al. de la condensación de Pechmann.67 Algunos de i ados de cuma inas han demos ado la capacidad de desencadena la de ención del ciclo celula , inhibición de angiogénesis, inhibición de quinasas, inhibición de elome asas, inhibición de anspo ado es de 71 . Bouasla S., Ama o-Gahe e J., Esqui el D., López M., Jiménez-Sanchid ián C., Teguiche M., Rome o-Salgue o F. Couma in de i a i es sol en - ee syn hesis unde mic owa e i adia ion o e he e ogeneous solid ca alys s. Molecules, 2017, 22, 2072. 72 . Chand akan h M., Thomas N.M., A ya C.G., Fabi ha K., Bano hu J. Couma in–1,2,4- iazole hyb ids: Recen ad ances in syn hesis and medicinal applica ions. J. Mol. S uc . 2024, 1299, 137197. 73 . Va gas-So o F.A., Céspedes-Acuña C.L., Aque eque-Muñoz P.M., Ala cón-Enos J.E. Toxici y o couma ins syn hesized by Pechmann-Duisbe g condensa ion agains D osophila melanogas e la ae and an ibac e ial e ec s. Food. Chem. Toxicol. 2017, 109, 1118‒1124. An eceden es 21 monoca boxila os, inhibición de anhid asas ca bónicas, inhibición de la a oma asa y sul a asas en di e en es líneas celula es de cánce , incluidas aquellas con quimio esis encia. 74 Po odo ello, muchos de es os de i ados mues an ac i idades an i umo ales p ome edo as. La a oma asa es una enzima esponsable de la con e sión de and ógenos en es ógenos, y al os ni eles de es a enzima es án elacionados en el desa ollo del cánce de mama, de endome io y de p ós a a. 75 En es e con ex o, Chen y e al. 76 sin e iza on de i ados de cuma ina con posible ac i idad inhibi o ia de a oma asa y emplea on como g upos uncionales bencilo y me ilo pa a modula al ac i idad. Se obse ó que el g upo me ilo y bencilo u ie on mejo a inidad hacia el g upo hemo de la a oma asa, sin emba go, solo se obse a la ac i idad inhibi o ia cuando C-4 es á sus i uido po un g upo bencilo ( igu a 4.11). R1 R2 R3 Ac i idad en a oma asa (IC50) Bencilo p-Clo o enilo Me oxilo 0.08 µM Figu a 4.11. Es udio SAR de de i ados de cuma inas con ac i idad sob e a oma asa. Modi icado de Dand iyal e al.53 74 . Zhang L., Xu Z. Couma in-con aining hyb ids and hei an icance ac i i ies. Eu . J. Med. Chem. 2019, 181,111587. 75 . Molehin, D., Filleu S., P ui , K. Regula ion o a oma ase exp ession: Po en ial he apeu ic insigh in o b eas cance ea men . Mol. Cell Endoc inol. 2021, 531, 111321. 76 . Chen S., Cho M., Ka lsbe g K., Zhou D., Yuan Y.C. Biochemical and biological cha ac e iza ion o a no el an i-a oma ase couma in de i a i e. J. Biol. Chem. 2004, 279, 48071–48078. An eceden es 22 O a de las dianas e apéu icas con a el cánce de las cuales se han diseñado nume osos de i ados de cuma inas son las anhid asas ca bónicas (CAs). Es e g upo de me aloenzimas ca alizan la hid a ación e e sible del dióxido de ca bono pa a gene a HCO3- e hid onio; es o pe mi e man ene la homeos asis del pH in e - e in acelula , y el anspo e ansmemb ana de iones, que pueden a ec a el me abolismo celula . 77 En e los a ios ipos de anhid asas ca bónicas, se ha obse ado que las iso o mas de ipo ansmemb ana CA IX y CA XII de la amilia α (mamí e os) se encuen an sob eexp esadas en cie os ipos de umo es y son una buena diana pa a el diseño de agen es an icance ígenos. 78 Se p opo ciona una desc ipción más de allada de es as enzimas en el Capí ulo 6 de la p esen e Tesis Doc o al. A modo de ejemplo, Zengin e al. desa olla on compues os basados en cuma inas y sul onamidas, con el obje i o de obse a su ac i idad inhibi o ia sob e CA I, CA II (ci osólicas, usadas como con ol pa a el es udio de la selec i idad), CA IX y CA XII y la elación en e es a inhibición y su ac i idad sob e células de cánce de colon. Con ello de e mina on que el compues o 59 mues a una inhibición selec i a en la p oli e ación celula y en la ac i idad de CA IX y XII con una Ki=45.5 nM y 596.6 nM espec i amen e, 79 así como de i ados de bis-cuma inas, donde el de i ado 60 mos ó una Ki=144.6nM y 71.5 nM sob e es as mismas anhid asas ( igu a 4.12). 80 En es e úl imo, al ealiza un es udio SAR obse a on que la adición de un g upo me ilo en C-4 de la cuma ina, así como un aumen o del amaño del espaciado e an de impo ancia en el aumen o de la ac i idad sob e CA IX. 77 . Supu an C.T. Ca bonic anhyd ase inhibi ion and he managemen o hypoxic umo s. Me aboli es, 2017, 7, 48. 78 . Wu Y., Xu J., Liu Y., Zeng Y., Wu G. A e iew on an i- umo mechanisms o couma ins. F on . Oncol. 2020, 10, 592853. 79 . Zengin Ku B.Z., Sonmez F., Oz u k D., Akdemi A., Angeli A., Supu an C.T. Syn hesis o couma in-sul onamide de i a i es and de e mina ion o hei cy o oxici y, ca bonic anhyd ase inhibi o y and molecula docking s udies. Eu . J. Med. Chem. 2019, 183, 111702. 80 . Ku B.Z, Dag A., Doğan B., Du dagi S., Angeli A., Nocen ini A., Supu an C.T., Sonmez F. Syn hesis, biological ac i i y and mul iscale molecula modeling s udies o bis-couma ins as selec i e ca bonic anhyd ase IX and XII inhibi o s wi h e ec i e cy o oxici y agains hepa ocellula ca cinoma. Bioo g. Chem. 2019, 87, 838–850. An eceden es 23 Figu a 4.12. T iazoles de i ados de cuma inas ob enidos po Zengin e al.79,80 O o ejemplo de de i ados de 7-hid oxicuma inas, ue el epo ado po Thacke e al. 81 En pa icula , p epa a on 7-hid oxicuma ina-3-ca boxamidas, des acando el de i ado 61 ( igu a 4.13), con una Ki =200 nM sob e CA IX. Es udios de docking molecula e ela on, in e acciones de 61 y los aminoácidos del si io ac i o de CA IX (His94, Th 198 y P o200). Figu a 4.13. De i ado de 7-hid oxicuma ina con ac i idad sob e CAs.81 En los g upos de in es igación donde se ha desa ollado es a Tesis Doc o al se han sin e izado una amplia a iedad de de i ados cuma ínicos con po encial ac i idad sob e anhid asas ca bónicas. Ejemplo ecien e es el epo ado po Fuen es-Aguila e al. 82 Se sin e iza on dos amilias de mi ocans con ac i idad dual 81 . Thacke P.S, Al ala M., A i uddin M., Angeli A., Supu an C.T. Design, syn hesis and biological e alua ion o couma in-3-ca boxamides as selec i e ca bonic anhyd ase IX and XII inhibi o s. Bioo g. Chem. 2019, 8, 386–392. 82 . Fuen es-Aguila A., González‐Bakke A., Jo ano ić M., S ojano S.J., Pue a A., Ga gano A.D., Dinić J., Vega-Báez J.L., Me ino-Mon iel P., Mon iel‐Smi h S., Alca o S., Nocen ini A., Pešić M., Supu an C.T., Pad ón, J.M., Fe nandez‐Bolaños J.G., López, Ó. Couma ins-lipophilic ca ions conjuga es: E icien mi ocans a ge ing ca bonic anhyd ases. Bioo g. Chem. 2024, 145, 107168. An eceden es 24 median e la combinación de cuma inas sus i uidas en C-3 y C-4 con po encial ac i idad sob e CA IX y XII y un agmen o lipó ilo ca gado posi i amen e (g upo os onio y sal de guanidinio) como ec o selec i o hacia las mi ocond ias de las células malignas. Se obse ó que los de i ados monosus i uidos en C-4 (R1=CH3), o disus i uidos en C-3 y C-4 (Me/Me, Cl/Me) y un g upo espaciado pen ilo u ie on ac i idad sob e CA IX y XII en el ango nM y ue on agen es an ip oli e a i os selec i os en e a células umo ales. El compues o 63 p esen ó la mejo ac i idad inhibi o ia con alo es de Ki= 7.8 y 8.1 nM con a CA IX y XII, espec i amen e ( igu a 4.14). Figu a 4.14. De i ados cuma ínicos con ac i idad sob e CAs.82 Po o o lado, se sin e iza on híb idos de cuma ina-aminobenzoxazol como inhibido es po enciales de CA IX y CA XII, modi icándose la na u aleza de los sus i uyen es sob e la cuma ina y el esiduo de benzoxazol, así como la longi ud del espaciado hid oca bonado ( igu a 4.15). Todos los de i ados p esen a on ac i idad selec i a ( ango nM) sob e las CAs IX y XII implicadas en p ocesos umo ales. También mos a on ac i idad an ip oli e a i a en el ango µM, siendo el compues o 64e el que p esen ó mejo ac i idad, con un alo de GI50= 2.6 µM sob e células A549 (cánce de pulmón). 83 83 . Fuen es-Aguila A., Me ino-Mon iel P., Mon iel‐Smi h S., Meza‐Reyes S., Vega-Báez J.L., Pue a A., Fe nandes M X., Pad ón J M., Pe eni A., Nocen ini A., Supu an C.T., López Ó., Fe nandez‐ Bolaños J.G. 2-Aminobenzoxazole-appended couma ins as po en and selec i e inhibi o s o umou -associa ed ca bonic anhyd ases. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2021, 37, 168‒177. An eceden es 25 Figu a 4.15. Ejemplo de híb idos cuma ina-benzoxazole.83 Po o o lado, se han desa ollado de i ados cuma ínicos conjugados con i e penos. Vega e al. 84 sin e iza on de i ados del ácido maslínico sob e los hid oxilos en C-2 y C-3 y en el g upo ácido de C-28 con di e en es cuma inas come ciales, u ilizando diaminas p ima ias de di e en e longi ud de cadena como g upo espaciado ( igu a 4.16). La inalidad e a ob ene sondas que unciona an como ma cado es de moléculas biológicas pequeñas, y a su ez e alua la ac i idad ci o óxica en a ias líneas de células de cánce y en células sanas. El de i ado 66 p esen ó los mejo es esul ados ci o óxicos, al posee dos moléculas de ácido cuma ino-3-ca boxílico acoplado a los g upos hid oxilo en C-2 y C-3 del i e peno, con a las líneas celula es B16-F10, HT29 y Hep G2 con una IC50= 0.6, 1.1 y 0.9 µM espec i amen e; adicionalmen e, mos a on una excelen e selec i idad man eniendo una iabilidad celula del 90% en células no umo ales a una dosis igual que su IC50 de e minado pa a células de cánce . 84 . Vega-G anados K., Medina-O’Donnell M., Ri as F., Reyes-Zu i a F. J., Ma inez A., Al a ez De Cien uegos L., Lupiañez J. A., Pa a, A. Syn hesis and biological ac i i y o i e pene−couma in conjuga es. J. Na . P od. 2021, 84, 1587–1597. Comp. R1 R2 R3 n a CH3 H H 3 b CH3 H H 5 c CH3 H H 6 d CH3 CH3 H 6 e CH3 Cl H 6 Ph H H 6 g CH3 H CH3 5 h CH3 H B 5 i CH3 H Ph 5 j CH3 H SO2NH2 5 An eceden es 26 Figu a 4.16. Conjugados ácido maslínico-cuma ina sin e izados po Vega e al.84 4.1.3. Aspec os gene ales de los compues os o ganoselénicos El selenio (Se) es un mic onu ien e esencial en el cue po humano y es ob enido a a és de la die a o de suplemen os alimen icios. 85 La can idad de selenio eque ida pa a man ene una salud óp ima es de 55 µg/día (0.7 µmol/día) en adul os; un consumo po debajo de 15 µg/día en la die a pod ía se un iesgo pa a el o ganismo, al igual que un consumo supe io a los 400 µg/día puede se causan e de una in oxicación po Se denominada selenosis. 86 , 87 La inges a de selenio es a iable po á ea geog á ica, ya que depende de ac o es como la can idad de Se en ie as de cul i o y o aje, pH del suelo, con enido de ma e ia o gánica y p esencia de algunos iones que pueden o ma complejos con el Se. Algunos e ec os de la de iciencia de consumo de es e elemen o 85 . Tan H.W., Mo H.Y., Lau A.T.Y., Xu Y.M. Selenium species: Cu en s a us and po en ials in cance p e en ion and he apy. In . J. Mol. Sci. 2018, 20, 75. 86 . Loscalzo J. Keshan disease, selenium de iciency, and he selenop o eome. N. Engl. J. Med. 2014, 370, 1756–1760. 87 . Su e M.E.; Thomas J.D.; B own J.; Mo gan B. Selenium oxici y: a case o selenosis caused by a nu i ional supplemen . Ann. In e n. Med. 2008, 148, 970–971. An eceden es 33 Recien emen e se ha epo ado la sín esis de de i ados de selenociana os es e oidales. Huang e al. 109 sin e iza on selenociana os de es adiol y analiza on su ac i idad an ip oli e a i a en e a líneas celula es dependien es de ho monas ( igu a 4.21). Obse a on que la in oducción del g upo SeCN al es e oide le o o gó la p obabilidad de inhibi el c ecimien o de células umo ales, siendo el compues o 75e (n=8) el que mos ó mejo ac i idad sob e células HeLa (cánce ce icou e ino, IC50= 5.69 µM). Es de des aca , que con o me aumen aba la cadena del agmen o selenoalquílico ambién aumen ó la ac i idad de los compues os 75a‒75 , has a los 8 ca bonos. Figu a 4.21. Me odología pa a la ob ención de selenociana os de es adiol.109 Huang e al. 110 sin e iza on selenociana os a pa i de la posición 17, 3 y 2 de la es ona, median e la o mación de amidas, és e es, é e es u oximas. E alua on la ac i idad an ip oli e a i a sob e líneas de células umo ales, obse ando que el g upo selenociona o inc emen ó la ac i idad de la es ona, man eniéndose la ac i idad ci o óxica has a un o al de 8 ca bonos. Las amidas con el g upo SeCN en la posición 2 de la es ona ue on los que p esen a on mejo ac i idad ci o óxica seguidos de los és e es. El compues o 81a ue el que u o la ac i idad inhibi o ia más po en e (IC50=1 µM en células HepG2 y IC50=2.6 µM en células Sk-O -3) en compa ación a abi a e ona y 2-me oxies adiol. Po o o lado, el compues o 81c indujo apop osis en células Sk-O -3 y el compues o 77d p esen ó mejo ac i idad in i o. 109 . Huang Y., Peng Z., Wei M., Gan C., Zhang Y., Chen S., Xiao J., Cui J. Syn hesis and an ip oli e a i e e alua ion o some no el es adiol selenocyana es. S e oids, 2022, 181, 108992. 110 . Huang Y., Wei M., Peng Z., Cheng Y., Zhang Y., Li J., Xiao J., Gan C., Cui J. Syn hesis o es one selenocyana e Compounds, an i- umo ac i i y e alua ion and s uc u e-ac i i y ela ionship analysis. Bioo g. Med. Chem. 2022, 76, 117086. Obje i os 34 Figu a 4.22. Selenociana os de i ados de es ona. Adap ado de Huang e al.110 4.2. Obje i o gene al de sección P epa a híb idos de ácido oleanólico y 7-hid oxicuma inas sus i uidas en C-3 y/o C-4 median e es e i icación de la posición C-28 del ácido oleanólico, así como híb idos ácido oleanólico-selenociana os modi icando an o las posiciones C-3 como C-28 del i e penoide, y analiza ambas amilias como po enciales agen es an ip oli e a i os. 4.3. Obje i os pa icula es de sección Pa e A: • Sin e iza 7-hid oxicuma inas a pa i de eso cinol con es di e en es β-ce o és e es (2-clo oace a o de e ilo, ace oace a o de e ilo y benzoilace a o de e ilo) median e la condensación de Pechmann. • Realiza la mono-alquilación de cada 7-hid oxicuma ina con di e en es dib omoalcanos (1,3-dib omop opano, 1,4-dib omobu ano y 1,6- dib omohexano) en medio básico (K2CO3). • P epa a híb idos de ácido oleanólico-cuma ina median e la eacción de cada cuma ina alquilada con ácido oleanólico en medio básico (K2CO3). Obje i os 35 • E aluación de la ac i idad an ip oli e a i a (Capí ulo 7). Pa e B: • Realiza la mono-alquilación de ácido oleanólico con di e en es α,ω- dib omoalcanos (1,3-dib omop opano, 1,4-dib omobu ano, 1,5- dib omopen ano, 1,6-dib omohexano y 1,9-dib omononano), así como α,α’- p-dib omoxileno en medio básico (K2CO3). • Sin e iza los selenociana os a pa i de ácido oleanólico alquilado median e la sus i ución con KSeCN. • E alua la ac i idad an ip oli e a i a in i o de los di e en es selenociana os sin e izados en e a líneas celula es de umo es sólidos humanos y ealiza un análisis es uc u a-ac i idad. • P o undiza en el modo de acción del de i ado cabeza de se ie. • E alua la ac i idad an ip oli e a i a in i o y selec i idad de los de i ados más po en es median e el modelo de C. elegans. 4.4. Discusión de esul ados 4.4.1. Híb idos ácido oleanólico-cuma inas En es e capí ulo se abo da á la p epa ación de híb idos de ácido oleanólico- cuma inas, que pod ía conduci a una sine gia de las ac i idades biológicas exhibidas po ambos ipos de a macó o os; la es uc u a gene al de dichos híb idos se mues a en la igu a 4.23. Ambos agmen os pueden p opo ciona ac i idad an ip oli e a i a, y en el caso de la cuma ina, pod ía p o eni de la inhibición de CAs, a oma asa, sul a asa o elome asa. Adicionalmen e, la p esencia de un espaciado hid oca bonado pod ía modula las p opiedades ísico-químicas del híb ido. Discusión de esul ados 36 Figu a 4.23. Diseño de híb idos de ácido oleanólico-cuma ina. La u a de sín esis pa a la ob ención de es os de i ados se mues a en el esquema 4.1. Esquema 4.1. Ru a de sín esis de híb idos ácido oleanólico-cuma ina. a) H2SO4 al 60%, 24h, .a.; b) α,ω-Dib omoalcano, K2CO3, MeCN anhid o, 4h, 65°C; c) Ácido oleanólico, K2CO3, MeCN‒DMF anhid o (3:1), 24h, 65°C. Como se ha mencionado en la in oducción, uno de los p ocedimien os más u ilizados pa a la p epa ación de cuma inas es la eacción de Pechmann, la cual consis e en la condensación de enoles, en es e caso eso cinol come cial, con dis in os β-ce oés e es en medio ácido (H2SO4 al 60%) como ca alizado , pa a da luga a cuma inas sus i uidas en las posiciones 3 y 4, y con un g upo hid oxilo Discusión de esul ados 37 uncionalizable en la posición C-7. Las cuma inas se ob u ie on con un endimien o mode ado (55%‒65%) as p ecipi ación y pu i icación c oma og á ica. Pos e io men e, se lle ó a cabo la alquilación de cada cuma ina sob e el hid oxilo en la posición 7, con un exceso de di e en es α,ω-dib omoalcanos en medio básico (K2CO3) pa a la ob ención de los compues os 83‒85. Es a úl ima es una eacción ipo Williamson pa a la ob ención de é e es enólicos a pa i de un halu o de alquilo p ima io con un ion enola o (nucleó ilo) median e un mecanismo SN2. 111 Finalmen e, cada cuma ina alquilada eaccionó con el ácido oleanólico en medio básico (K2CO3) pa a ob ene el híb ido (1‒9) median e una eacción SN2 del ion ca boxila o sob e el g upo me ileno e minal. Es a me odología sencilla pe mi ió la ob ención de 9 és e es de i ados de ácido oleanólico con endimien os de mode ados a excelen es (64%‒88%). Se obse ó que al aumen a lige amen e los equi alen es de base (de 1.0 a 1.5 equi .) hubo una mejo ía en los endimien os. Los espec os de 1H- y 13C-RMN con i ma on las es uc u as 1‒9. En la igu a 4.24 se mues a, a modo de ejemplo, el espec o de 1H-RMN del compues o 2. Des acan las señales en 5.27, 3.19 y 2.85 ppm co espondien es a H-12, H-3 y H- 18 del i e penoide; los dos iple es a 4.09 y 4.05 ppm se co esponden con los me ilenos de las posiciones H-1’ y H-4’ de la cadena alquílica. La p esencia del agmen o cuma ínico se con i ma median e el pa ón de señales que esuenan en e 7.51-6.80 ppm: un doble e a 7.51, con J5’’,6’’=8.9 Hz, asignada a H-5’’, un doble de dobles a 6.89 (J5’’,6’’=8.9 Hz, J8’’,6’’=2.4 Hz), co espondien e a H-6’’ y un doble e (J8’’,6’’=2.4 Hz), de H-8’’. Igualmen e, en la igu a 4.25 se obse a a modo de ejemplo el espec o de 13C-RMN pa a el compues o 2. Des acan las señales en 177.9 y 162.0 111 . Yea y K.L., Mayna d R.K., Co es C.N., Mo ison, R. A mul iou come expe imen o he Williamson e he syn hesis. J. Chem. Educ. 2020, 97, 578‒581. Discusión de esul ados 38 co espondien es a los g upos ca bonilo del i e penoide (C-28) y de la cuma ina (C-2’’), espec i amen e. El agmen o cuma ínico se con i ma po las señales en e 157.6-101.4 ppm, a excepción de las señales en 143.9 y 122.5 ppm que co esponden a C-13 y C-12 del i e penoide, espec i amen e. Con espec o a la cadena alquílica, se obse an las señales en 68.2 y 63.7 ppm pa a los me ilenos C- 1’ y C-4’ unidos a oxígeno. Figu a 4.24. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 2. CH3 Cuma ina Discusión de esul ados 39 Figu a 4.25. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 2. O o ejemplo es el espec o de 1H-RMN del compues o 8, el cual se mues a en la igu a 4.26. Des aca el mul iple e en 7.47 ppm co espondien e al g upo enilo en C-4 de la cuma ina, y una señal simple en 6.21 ppm que co esponde a H-3’’ de la cuma ina. Po o o lado, en el espec o de 13C-RMN ( igu a 4.27) des acan las señales pa a el g upo enilo en C-4 de la cuma ina en 129.7 (A -Cipso), 128.9 (A - Cm), 128.5 (A -Co) y 128.1 (A -Cp) ppm. Discusión de esul ados 40 Figu a 4.26. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 8. Figu a 4.27. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 8. Discusión de esul ados 41 4.4.2. De i ados de selenio En es a sección abo damos la combinación del ácido oleanólico con una unción o ganoselénica, en conc e o, selenociana o, como po enciales agen es an ip oli e a i os, siguiendo la es uc u a gene al mos ada en la igu a 4.27. Se p e ende analiza la in luencia de la sus i ución en C-3 y C-28, la longi ud y la libe ad con o macional del espaciado , así como de la na u aleza del g upo sob e C-3 (R= H, Ac) en las p opiedades biológicas exhibidas. Figu a 4.28. Es uc u a gene al de los híb idos ácido oleanólico-selenociana o p epa ados en es a Tesis Doc o al. De es a o ma, una p ime a ap oximación pa a la ob ención de selenociana os del ácido oleanólico ue de i a iza la posición C-28 (ácido ca boxílico), y emplea la posición C-3 an o lib e como ace ilada; a al e ec o se emplea on cadenas alquílicas de di e en e longi ud como g upo espaciado . En un p ime paso, se lle ó a cabo la alquilación del ácido oleanólico y el ácido 3-O-ace iloleanólico en la posición C-28 empleando di e sos α,ω- dib omoalcanos (1,3-dib omop opano, 1,4-dib omobu ano y 1,6-dib omohexano), en medio básico (K2CO3) pa a ob ene los de i ados 86‒91. Pos e io men e, sob e el me ileno e minal de la cadena alquílica se lle ó a cabo una sus i ución nucleo ílica con KSeCN, ealizada en condiciones anhid as y de oscu idad pa a la ob ención de los selenode i ados 11‒16 (esquema 4.2). Discusión de esul ados 42 Esquema 4.2. Ru a de sín esis pa a la ob ención de selenociana os de ácido oleanólico. Se ob u ie on así un o al de 6 selenode i ados de ácido oleanólico (compues os 11‒16) con endimien os de buenos a excelen es (83‒91%). La ca ac e ización espec oscópica se desc ibe en la sección de me odología. Al e na i amen e, y con obje o de compa a ambas me odologías, ambién se e aluó la posibilidad de ealiza la sín esis in i iendo el o den de las es e apas implicadas. Así pues, se p ocedió en p ime luga a la alquilación del ácido oleanólico empleando espaciado es de ipo p- enileno, pen il y nonil (compues os 10, 92, 93), seguido de desplazamien o nucleo ílico con KSeCN (compues os 17‒ 19) y, inalmen e, ace ilación (compues os 20‒22), según lo indicado en el esquema 4.3. No se obse a on di e encias signi ica i as en el endimien o global de las me odologías mos adas en los esquemas 4.2 y 4.3, po lo que ambas a ian es son ap opiadas pa a el acceso a los p oduc os deseados. Discusión de esul ados 49 Figu a 4.36. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 22. Pa a los selenociana os en C-3 del ácido oleanólico se siguió la u a de sín esis del esquema 4.4. Como p ime paso, se lle ó a cabo la ans o mación del g upo ácido (C-28) en és e me ílico median e la alquilación con CH3I en medio básico (K2CO3) pa a ob ene el 3β-hid oxiolean-28-oa o de me ilo (94) con endimien o cuan i a i o. Pos e io men e, se ealizó la es e i icación en C-3 del ácido oleanólico con dos halu os de ácido come ciales de amaño de cadena a iable (clo u o de clo oace ilo y clo u o de 5-b omo ale ilo) en medio básico (TEA) y u ilizando DMAP como ca alizado . Se ob u ie on así los compues os 95 y 96 con buenos endimien os (76 y 78%, espec i amen e). Es e paso ue di ícil de moni o ea po c oma og a ía en capa ina, lo que di icul ó la pu i icación de los és e es en C-3. Como e ce paso, sob e el me ileno e minal se lle ó a cabo una sus i ución nucleo ílica con KSeCN, en condiciones C-A OCH2A CH3COO Discusión de esul ados 50 anhid as y de oscu idad pa a la ob ención de los selenode i ados 23 y 24, con endimien os del 70 y 64%, espec i amen e. Esquema 4.4. Ru a de sín esis pa a la ob ención de selenociana os en C-3 de ácido oleanólico. A modo de ejemplo, se mues an las señales ca ac e ís icas de RMN pa a el compues o 24. En 1H-RMN se obse a on como señales ep esen a i as las de 5.28, 4.51 y 2.85 ppm del H-12, H-3 y H-18 del i e penoide; a 3.62 ppm se obse a la señal del me oxilo, mien as que a 3.06 y 2.37 ppm esuenan los p o ones en 2’ y 5’ de la cadena alquílica ( igu a 4.37). En 13C-RMN des aca la señal del ca bonilo del és e en C-3 (172.8 ppm) y la señal de selenociana o en 101.4 ppm ( igu a 4.38), que con i man la es e i icación del hid oxilo en C-3 del OA. Discusión de esul ados 51 Figu a 4.37. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 24. Figu a 4.38. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 24. CH3O An eceden es 52 5. De i ados mi ocond io ópicos 5.1. In oducción 5.1.1. Papel de la mi ocond ia en el cánce Las mi ocond ias son el p incipal o gánulo en la célula euca io a, cuya unción p incipal es la p oducción de ene gía, con ola el me abolismo de ca bohid a os, la egulación de la ansducción de señales y la mue e celula . Es os o gánulos p esen an un diáme o y longi ud a iable en e 0.5 a 1.0 µm, 113 , 114 y además se ca ac e izan po posee una doble memb ana, siendo es e aspec o es uc u al undamen al en el diseño de los compues os aba cados en es a sección. Las mi ocond ias es án con o madas po cua o compa imen os: la memb ana mi ocond ial ex e na (OMM), el espacio in e memb ana (IMS), memb ana mi ocond ial in e na (IMM) y la ma iz mi ocond ial. La ca ac e ización de es e o gánulo ce ado po una doble memb ana se es ableció po Palade y Sjös and en el año 1950. Es e o gánulo p esen a una a iabilidad es uc u al dependiendo del ejido, el es ado isiológico y la e apa de desa ollo, pe o algunas a iaciones pueden elaciona se a cie os padecimien os en humanos. 115 , 116 Un papel impo an e de la mi ocond ia es el de almacén de ca iones calcio (Ca2+), siendo la memb ana mi ocond ial ex e na pe meable a es os. 117 La ansición de pe meabilidad mi ocond ial (MPT) es un aumen o ins an áneo de la pe meabilidad hacia el espacio in e memb ana a moléculas meno es a los 1500 Da. 113 . Roy S., Das A., Bai agi A., Das D., Jha A., S i as a a A.K., Cha e jee N. Mi ochond ia ac as a key egula o y ac o in cance p og ession: Cu en concep s on mu a ions, mi ochond ial dynamics, and he apeu ic app oach. Mu a . Res. Re . Mu a . Res. 2024, 793, 108490. 114 . Liu P., Ho P. Mi ochond ia: A mas e egula o in mac ophage and T cell immuni y. Mi ochond ion, 2018, 41, 45‒50. 115 . Zick M., Rabl R., Reiche A.S. C is ae o ma ion-linking ul as uc u e and unc ion o mi ochond ia. 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El ATP es la uen e de ene gía celula y se anspo a den o de las células en p ocesos me abólicos como la os o ilación oxida i a (OxPhos) o la glucólisis. En es e mismo espacio se encuen a ambién la cadena de anspo e de elec ones, donde pa icipa p incipalmen e la ATP sin asa, la cual es esponsable de p oduci ATP a pa i de ADP y os a o ino gánico. 120 Todos es os p ocesos me abólicos son impo an es pa a la supe i encia celula . El espacio in e memb ana (IMS) es el meno de los compa imen os de la mi ocond ia y juega un papel undamen al en el anspo e y modi icación de p o eínas, lípidos e iones me álicos, además en la egulación y mon aje de los complejos de la cadena espi a o ia. El IMS ambién es á in oluc ado en la coo dinación de los pasos cla es de la mue e celula po apop osis. 121 El espacio in e memb ana p opo ciona un espacio ac i o edox que p omue e la oxidación de esiduos de cis eína con un po encial de memb ana (ΔΨm) de ‒220 118 . Kalka an H., G een D.R. MOMP, cell suicide as a BCL-2 amily business. Cell Dea h Di e . 2017, 25, 46–55. 119 . Galluzzi L., Vi ale I., Aa onson S.A., Ab ams J., Adam D., Agos inis P., Alnem i E.S., Al ucci L., Amelio I., And ews D.W., Annicchia ico-Pe uzzelli M., An ono A.V., A ama E., Baeh ecke E.H., Ba le N.A., Bazán N.G., Be nassola F., Be and M., Bianchi K., Manic G. Molecula mechanisms o cell dea h: ecommenda ions o he Nomencla u e Commi ee on Cell Dea h 2018. Cell Dea h Di e . 2018, 25, 486‒541. 120 . Lu P., B uno B., Rabenau M., Lim C.S. Deli e y o d ugs and mac omolecules o he mi ochond ia o cance he apy. J. Con ol. Release, 2016, 240, 38‒51. 121 . Vög le F., Bu kha J.M., Rao S.R., Ge be h C., Hin ichs J., Ma inou J., Chacińska A., Sickmann A., Zahedi R.P., Meisinge C. In e memb ane space p o eome o yeas mi ochond ia. Mol. Cell. P o eom. 2012, 11, 1840‒1852. An eceden es 54 mV en células cance ígenas y de ‒108 a ‒180 mV en una célula no mal debido a que la ATP sin asa es á egulada nega i amen e po su unidad al a mu ada, lo que p o oca incapacidad pa a u iliza el g adien e de p o ones o mado, conlle ando a su acumulación en el espacio in e memb ana. 122 Pa a la sín esis de ATP se equie e un g adien e elec oquímico (de p o ones) en e IMS y la ma iz mi ocond ial pa a el co ec o uncionamien o de la ATP sin asa, lo que hace que la memb ana in e na mi ocond ial es e al amen e pola izada nega i amen e, y que lle a a concen aciones de p o ones más al as (mayo acidez) en el espacio in e memb ana con espec o a la ma iz mi ocond ial, causando mayo po encial de memb ana en una célula cance osa que en una célula no mal. 123 Figu a 5.1. Funciones biológicas de la mi ocond ia. Ab e ia u as: AAA, p o easas dependien es de ATP de la memb ana in e na; E3, ubiqui ina-p o eína ligasa; RE, e ículo endoplásmico; ADNm , ADN mi ocond ial; ATC, ciclo del ácido ica boxílico; Ub, ubiqui ina. Adap ado de P anne y col. 124 122 . Nuebel E., Manganas P., Toka lidis K. O phan p o eins o unknown unc ion in he mi ochond ial in e memb ane space p o eome: New pa hways and me abolic c oss- alk. Biochim. Biophys. Ac a Mol. Cell Res. 2016, 1863, 2613‒2623. 123 . Zo o a L.D., Popko V.A., Plo niko E.Y., Silache D.N., Pe zne I.B., Jankauskas, S. S., Babenko, V. A., Zo o , S. D., Balaki e a, A. V., Juhaszo a, M., Sollo , S. J., Zo o D.B. Mi ochond ial memb ane po en ial. Anal. Biochem. 2018, 552, 50‒59. 124 . P anne N., Wa scheid B., Wiedemann N. Mi ochond ial p o eins: om biogenesis o unc ional ne wo ks. Na . Re . Mol. Cell Biol. 2019, 20, 267‒284. An eceden es 55 La ma iz mi ocond ial con iene has a 10 000 unidades de ADN mi ocond ial (ADNm ), con es uc u a de doble hélice cíclica, y un amaño de 16.6 kb. Tiene, a su ez, enzimas y co ac o es implicados en una se ie de eacciones y ías me abólicas, incluido el ciclo del ácido ica boxilico (ATC), la os o ilación oxida i a, la deg adación de ácidos g asos, el ciclo de la u ea y la gluconeogénesis. 125 Se es ima que, en e el 0.2‒2.0% del oxígeno consumido po la mi ocond ia en la cadena espi a o ia, se educe has a anión supe óxido y o as especies eac i as del oxígeno (ROS), como el pe óxido de hid ógeno. De hecho, las mi ocond ias son esponsables de la gene ación de ap oximadamen e un 90% de los ROS celula es. 126 Los ROS libe ados po las mi ocond ias p o ocan la oxidación de lípidos y p o eínas, daño al ADNm /ARNm , la ac i ación de los canales dependien es de Ca2+, así como la ac i ación y libe ación del ci oc omo c. Lo an e io conlle a a la o mación del apop osoma, complejo mul ip o eico que inicia el p oceso de la mue e celula po apop osis. 127 Es po lo an e io que las mu aciones gené icas de p o eínas mi ocond iales y es és oxida i o causan dis unciones en la mi ocond ia que es án elacionadas con padecimien os como el cánce , diabe es, en e medades neu odegene a i as e insu iciencia ca díaca.116, 128 En una célula no mal, el supe óxido gene ado en la os o ilación oxida i a se con ie e a pe óxido de hid ógeno median e el supe óxido dismu asa (SOD) y es 125 . Singh B., Modica-Napoli ano J.S., Singh, K.K. De ining he momiome: P omiscuous in o ma ion ans e by mobile mi ochond ia and he mi ochond ial genome. Semin. Cance Biol. 2017, 47, 1‒ 17. 126 . Ti ichen H., Yaigoub H., Xu W., Wu C., Li R., Li Y. Mi ochond ial eac i e oxygen species and hei con ibu ion in ch onic kidney disease p og ession h ough oxida i e s ess. F on . Physiol. 2021, 12, 627837. 127 . Dong L., Neužil J. 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Es po ello que se pos ula que el con ol de ROS pod ía cons i ui un obje i o in e esan e en el diseño de á macos an icance ígenos. 130 No obs an e, exis e aún bas an e con o e sia en el ipo de compues os que se debe ían u iliza pa a comba i el desequilib io en e los ni eles de ROS y el sis ema an ioxidan e en cánce , ya que se pueden emplea agen es an ioxidan es ( educción de los ni eles de ROS) o agen es p o-oxidan es (inc emen o de los ni eles de ROS pa a gene a mue e celula p obablemen e po apop osis). 131 La impo ancia de las mi ocond ias en el cánce adica en su pa icipación en la umo igénesis, la p og esión y esis encia e apéu ica, debido a que el me abolismo mi ocond ial se e al e ado, lo que a o ece su ápida p oli e ación al ene mayo suminis o ene gé ico y de o os p ecu so es biosin é icos. 132 En una célula no mal el ATP es p oducido median e la os o ilación oxida i a, sin emba go, cuando se ans o ma a una célula cance osa po agen es como la adiación, ca cinógenos, oncogenes u oncop o eínas, la célula cambia su mecanismo de p oducción p e e en e de ATP median e glucólisis. Como consecuencia, el pi u a o o mado se con ie e a lac a o y se libe a ex acelula men e, po lo que el pH ex acelula se o na ácido (pHe=6.2-6.9), mien as que el pH in acelula se o na alcalino (pHi=7.12-7.65). El pH alcalino en la ma iz mi ocond ial pod ía ayuda a mejo a la solubilidad de á macos débilmen e 129 . Oyewole A.O., Bi ch‐Machin M.A. Mi ochond ia‐ a ge ed an ioxidan s. FASEB J. 2015, 29, 4766‒4771. 130 . Weinbe g F., Chandel N.S. Mi ochond ial me abolism and cance . Ann. N. Y. Acad. Sci. 2009, 1177, 66‒73. 131 . Kim S.J., Kim H.S., Seo Y.R. Unde s anding o ROS-inducing s a egy in an icance he apy. Oxid. Med. Cell. Longe . 2019, 2019, 1‒12. 132 . Singh D. A sojou n on mi ochond ia a ge ed d ug deli e y sys ems o cance : S a egies, clinical and u u e p ospec s. Mi ochond ion, 2024, 74, 101826. An eceden es 57 ácidos o acoplados a nanopa ículas, lo que pod ía mejo a su a inidad hacia es e ipo de células como a amien o del cánce . 133 ‒ 135 O o ac o impo an e pa a la mi ocond ia es el oxígeno, ya que unciona como acep o de elec ones du an e la sín esis de ATP, consumiéndose ce ca del 85‒90% de oxígeno in acelula . 136 En una célula cance osa, el ni el de oxígeno in acelula es meno po el ambien e hipóxico de los umo es, pe o el oxígeno mi ocond ial p esen a mayo es ni eles a compa ación de una célula no mal.135, 137 Debido a que la sín esis de ATP es meno en mi ocond ias cance osas, el oxígeno es empleado en su mayo ía pa a la p oducción de ROS lo que causa, en e o os e ec os, un mayo daño al ADN, a o eciendo la umo igénesis. 138 133 . Shi mano a M V., D uzhko a I., Lukina M.M., Ma lasho M.E., Belouso V.V., Snopo a L.B., P odane z N.N., Dudenko a V.V., Lukyano S., Zagayno a E.V. In acellula pH imaging in cance cells in i o and umo s in i o using he new gene ically encoded senso SypHe 2. Biochim. Biophys. Ac a Gen. Subj. 2015, 1850, 1905‒1911. 134 . Pe y S.W., No man J.P., Ba bie i J., B own E.B., Gelba d H.A. Mi ochond ial memb ane po en ial p obes and he p o on g adien : a p ac ical usage guide. BioTechniques. 2011, 50, 98‒ 115. 135 . Cho H., Cho Y., Shim M.S., Lee J.Y., Lee H.S., Kang H.C. Mi ochond ia- a ge ed d ug deli e y in cance s. Biochim. Biophys. Ac a Mol. Basis Dis. 2020, 1866, 165808. 136 . Ku okawa H., I o H., Inoue M., Taba a K., Sa o Y., Yamaga a K., Kizaka‐Kondoh S., Kadonosono T., Yano S., Inoue M., Kamachi T. High esolu ion imaging o in acellula oxygen concen a ion by phospho escence li e ime. Sci. Rep. 2015, 5, 10657. 137 . Kueh H.Y., Nie hamme P., Mi chison T.J. Main enance o mi ochond ial oxygen homeos asis by cosubs a e compensa ion. Biophys. J. 2013, 104, 1338‒1348. 138 . Mo eno A.C.R., Olean‐Oli ei a A., Olean-Oli ei a T., Nunes M.T., Teixei a M.F., Se aphim P.M. Resis ance aining p e en s damage o he mi ochond ial unc ion o he skele al muscle o a s exposed o seconda y ciga e e smoke. Li e Sci. 2022, 309, 121017. An eceden es 58 Figu a 5.2. Di e encias es uc u ales en la memb ana mi ocond ial en una célula no mal y una célula cance osa. Adap ado de Cho e al.135 En es e sen ido, un obje i o e apéu ico con a el cánce que ha gene ado un in e és c ecien e en el seno de la comunidad cien í ica en los úl imos años es el diseño de moléculas con especi icidad hacia la mi ocond ia de la célula cance osa pa a educi e ec os secunda ios p oducidos en la quimio e apia po su acción hacia o os compa imen os celula es. Sin emba go, log a es a especi icidad es complicado debido a la he e ogeneidad umo al, que causa ambién di e encias en las p opiedades mi ocond iales de células cance osas con espec o a una célula An eceden es 65 El de i ado F-16 ha sido ecien emen e descubie o y se acumula selec i amen e en la ma iz mi ocond ial de células umo ales. Al as concen aciones de es e ca ión inducen la mue e celula median e la in e upción de la cadena espi a o ia, disminución de los ni eles in acelula es de ATP e inducción de la apop osis. 151 , 152 El análogo de i ado de odacianina MKT-077 es un ca ión lipó ilo soluble en agua y p esen a la capacidad de inhibi miemb os de la amilia HSP70 mi ocond ial (Hea Shock P o ein, p o eína sob eexp esada en si uación de es és celula ) lo que p o oca la deses abilización de la memb ana mi ocond ial; sin emba go, algunos es udios clínicos de de i ados de MKT-077 han mos ado oxicidad enal, 153 , 154 lo que educe su posibilidad de aplicación clínica. Uno de los ca iones lipó ilos más u ilizados es el i enil os onio (TPP+), el cual p esen a una ca ga posi i a es abilizada po la p esencia de es g upos enilo, y no malmen e se acopla a moléculas bioac i as median e un conec o ali á ico. 155 , 156 Fue implemen ado po p ime a ez po Mu phy e al. median e la sín esis de 151 . Peng Y., Zha, Z L., L, T., Xi, G J., Chen, J., Den, T.G., Sun Y., Li X., Hu X., Zhang X.B., Ye M., Tan W.A Mul i‐mi ochond ial an icance agen ha selec i ely kills cance cells and o e comes d ug esis ance. Chem. Med. Chem. 2017, 12, 250‒256. 152 . Spi ak A.Y., Nedopekina D.A., Gubaidullin R.R., Da le shin E., Tukhba ullin A.A., D’yakono V. A., Yunusbae a M.M., Dzhemile a L.U., Dzhemile U.M. Pen acyclic i e pene acid conjuga ed wi h mi ochond ia- a ge ing ca ion F16: Syn hesis and e alua ion o cy o oxic ac i i ies. Med. Chem. Res. 2021, 30, 940‒951. 153 . Hong S., S a enki D., Johnson O.T., Ges wicki J.E., Pa k J.I. Analogs o he hea shock p o ein 70 inhibi o MKT-077 supp ess medulla y hy oid ca cinoma cells. In . J. Mol. Sci. 2022, 23, 1063‒ 1076. 154 . Shao H., Li X., Moses M.A., Gilbe L.A., Kalyana aman C., Young Z.T., Che no a M., Jou ney S. N., Weissman J.S., Hann B., Jacobson M.P., Necke s L., Ges wicki J.E. Explo a ion o benzo hiazole hodacyanines as allos e ic inhibi o s o p o ein–p o ein in e ac ions wi h hea shock p o ein 70 (Hsp70). J. Med. Chem. 2018, 61, 6163‒6177. 155 . Chen Z., Li M., Zhang L., He J., Wu L., Xiao Y., Duan J., Cai T., Li W. Mi ochond ia- a ge ed d ug deli e y sys em o cance ea men . J. D ug Ta ge . 2015, 24, 492‒502. 156 . Zino kin R.A., Zamya nin A.A. Mi ochond ia- a ge ed d ugs. Cu . Mol. Pha macol. 2019, 12, 202‒214. An eceden es 66 b omu o de iobu il i enil os onio. 157 El acoplamien o de TPP a moléculas bioac i as iene como en aja la ec o ización de es os de i ados hacia la mi ocond ia, mejo a sus p opiedades lipo ílicas e hid o ílicas y una sín esis y pu i icación sencillas.144 Los de i ados de TPP ienen endencia a uni se a biomemb anas, como consecuencia de su ca ga y lipo ilicidad. De es a o ma, la acción ca gada iende a asocia se a la cabeza de los os olípidos, ca gadas nega i amen e, y si el es o de la molécula es lipó ila puede acumula se en el espacio in e memb ana y en la ma iz. 158 De es a o ma, el p incipal mecanismo de acción de TPP es median e su acumulación en la mi ocond ia de células cance osas, aumen ando la gene ación de ROS, induciendo la mue e celula po apop osis. 159 5.1.2.2. Pép idos mi ocond io ópicos Compa ado con los ca iones lipo ílicos, los pép idos p esen an un g an po encial pa a el diseño de agen es mi ocond io ópicos debido a la biocompa ibilidad con los componen es celula es, lo que disminuye su oxicidad. Los pép idos de pene ación mi ocond ial (MPPs) es án con o mados po 4‒16 aminoácidos, que con ienen un es o ca iónico (a ginina, lisina) y un es o hid o óbico ( enilalanina, i osina e isoleucina) y su e ec i idad pa a di igi se hacia la mi ocond ia depende á del po encial de memb ana y su lipo ilicidad y han uncionado como una pode osa he amien a pa a el diseño de moléculas an ineoplásicas ( igu a 5.6).145, 160 157 . Bu ns R.J., Smi h R A., Mu phy M. Syn hesis and cha ac e iza ion o hiobu yl iphenyl- phosphonium b omide, a no el hiol eagen a ge ed o he mi ochond ial ma ix. A ch. Biochem. Biophys. 1995, 322, 60‒68. 158 . Szabó I., Zo a i M., Biasu o L. Ta ge ing mi ochond ial ion channels o cance he apy. Redox Biol. 2021, 42, 101846. 159 . Neužil J., Dong L., Rohlena J., T uksa J., Ralph S.J. Classi ica ion o mi ocans, an i-cance d ugs ac ing on mi ochond ia. Mi ochond ion, 2013, 13, 199‒208. 160 . Wu J., Li J., Wang H., Liu, C. Mi ochond ial- a ge ed pene a ing pep ide deli e y o cance he apy. Expe Opin. D ug Deli . 2018, 15, 951‒964. An eceden es 67 Figu a 5.6. Op imización pa a el diseño de pép idos pene an es de células (CPP) y de mi ocond ias (MPP). Ab e ia u as: Fx, ciclohexilalanina; hex, hexilo; , D-a ginina; OMM; memb ana mi ocond ial ex e na; IMS, espacio in e memb ana; IMM, memb ana mi ocond ial in e na. Imagen omada de Jean e al. 161 Una clase de pép ido mi ocond io ópico son los denominados Sze o-Schille (SS). Es os es án o mados po aminoácidos a omá icos y básicos al e nados (10 aminoácidos de ca ga +3 y un D-aminoácido en la p ime a y segunda posición). 162 Su mecanismo de acción es la educción de la p oducción de ROS, al e ación de la pe meabilidad mi ocond ial y subsecuen e libe ación del ci oc omo c.156, 163 La unción an ioxidan e la lle a a cabo el esiduo de i osina o dime il i osina. A di e encia de los ca iones lipó ilos, es os pép idos ing esan a la célula independien emen e de la ene gía y lib emen e a pH isiológico. Se c ee que su ing eso a la mi ocond ia iene luga como consecuencia de las in e acciones elec os á icas con los g upos os a o de las ca diolipinas en la memb ana in e na mi ocond ial. 164 , 165 161 . Jean S.R., Ahmed M., Lei E.K., Wisno sky S., Kelley S. O. Pep ide-media ed deli e y o chemical p obes and he apeu ics o mi ochond ia. Acc. Chem. Res. 2016, 49, 1893‒1902. 162 . Sze o, H.H. De elopmen o Mi ochond ia‐ a ge ed A oma ic‐ca ionic pep ides o neu odegene a i e diseases. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2008, 1147, 112‒121. 163 . Sze o, H. H., Liu, S. Ca diolipin- a ge ed pep ides eju ena e mi ochond ial unc ion, emodel mi ochond ia, and p omo e issue egene a ion du ing aging. A ch. Biochem. Biophys. 2018, 660, 137‒148. 164 . Sze o H.H. Fi s ‐in‐class ca diolipin‐p o ec i e compound as a he apeu ic agen o es o e mi ochond ial bioene ge ics. B . J. Pha macol. 2014, 171, 2029‒2050. 165 . Gasano E.S., Yaguzhinsky L.S., Ga ab, G. Ca diolipin, non-bilaye s uc u es and mi ochond ial bioene ge ics: ele ance o ca dio ascula disease. Cells, 2021, 10, 1721‒1745. An eceden es 68 5.1.2.3. Nanopa ículas y liposomas El uso de nanopo ado es ha pe mi ido la ehículización de moléculas bioac i as a si ios especí icos pa a mejo a su e icacia y e i a el iesgo de oxicidad. Des acan nanopo ado es basados en micelas, políme os, ma e iales a base de ca bono, liposomas, nanopa ículas me álicas y dend íme os ( igu a 5.7), p incipalmen e con un en oque quimio e apéu ico. 166 Un nanopo ado se encuen a en un ango de 10 a 200 nm de diáme o, lo que les pe mi e el ácil acceso a di e en es ejidos, y especí icamen e pa a di ecciona se a la mi ocond ia se conjugan con di e en es ligandos ca iónicos, siendo los más empleados el TPP y DQA. Es as nanopa ículas pe mi en mejo a p oblemas de solubilidad, selec i idad y quimio esis encia, pe mi iendo su acumulación den o de la mi ocond ia. 167 Algunos de los mecanismos de acción de de i ados de nanopa ículas es la des ucción de células cance osas selec i amen e median e la gene ación de ROS, al e ación del po encial de memb ana mi ocond ial y el bloqueo de la sín esis de ATP.127 Po o o lado, los liposomas mi ocond io ópicos (MITO-po e ) se diseña on como po ado es e icien es de moléculas pequeñas o mac omoléculas hacia la mi ocond ia. Su especi icidad es debida a la p esencia de ca gas posi i as deslocalizadas en los liposomas, p incipalmen e de i ados de DQA y TPP, 168 y son capaces de libe a moléculas bioac i as de di e en es amaños y di e en es ca ac e ís icas químicas y isicoquímicas, lo que aumen a su capacidad de 166 . Zeng Z., Fang C., Zhang Y., Chen C., Zhang Y., Zhang, K. Mi ochond ia- a ge ed nanoca ie s p omo e highly e icien cance he apy: A e iew. F on . Bioeng. Bio echnol. 2021, 9, 784602. 167 . Tabish T.A., Na ayan R.J. Mi ochond ia- a ge ed g aphene o ad anced cance he apeu ics. Ac a Bioma e . 2021, 129, 43‒56. 168 . Benien P., Almu e i M., Shah S., Böhlke M., Mehanna A.S., D’Souza G.G.M. Syn hesis o iphenylphosphonium phospholipid conjuga es o he p epa a ion o mi ochond io opic liposomes. En Me hods in molecula biology-Mi ochond ial Medicine (Eds. Weissig V., Edeas M.), 2015, Vol. 2, pp. 51‒57. An eceden es 69 anspo a agen es a la mi ocond ia, y son una buena al e na i a pa a el a amien o del cánce .144,145, 169 Figu a 5.7. Es uc u as pa a el diseño de nanopo ado es mi ocond iales. Adap ado de Liew e al. 170 Ab e ia u as: PLGA, poli(ácido lác ico-glicólico); PDA: poli(dopamina); PDMAEMA: poli[2- (Dime ilamino) e il me acli alo]; PMMA: poli(Me il me ac ila o); PGA: poli(Ácido glicólico); PGE: poli(e ilenglicol); PCL, Policap olac ona; STTP: Es ea il-TPP; DLPE-TPP, 1,2-Dilau oil-sn-glice o-3- os o ile anolamina-TPP. 5.1.3. Ejemplos de agen es mi ocond io ópicos con ac i idad an ip oli e a i a Méndez y col. 171 diseña on di e en es o-ca bonilhid oquinonas bicíclicas conec adas a un ca ión de i enil os onio median e una cadena alquílica co a ( igu a 5.8), con la inalidad de e alua su e ec o an iplaque a io e i ando la o mación de coágulos, y mejo ando de es a mane a la salud ca dio ascula . El de i ado 104 ue el que mos ó mejo e ec o an iplaque a io y baja ci o oxicidad a dosis de 10-100 µM 169 . Benien P., Solomon M., Nguyen P., Sheehan E.M., Mehanna A.S., D’Souza G.G.M. Hyd ophobized iphenyl phosphonium de i a i es o he p epa a ion o mi ochond io opic liposomes: choice o hyd ophobic ancho in luences cy o oxici y bu no mi ochond io opic e ec . J. Liposome Res. 2015, 26, 21‒27. 170 . Liew S.S., Qin X., Zhou J., Li L., Huang W., Yao S Q. Sma design o nanoma e ials o mi ochond ia‐ a ge ed nano he apeu ics. Angew. Chem. In . Ed. 2021, 60, 2232‒2256. 171 . Méndez D., Telle ía F., Mon oy-Cá denas M., Mon ecino-Ga ido H., Mansilla S., Cas o L., T os chansky A., Muñoz-Có do a F., Zicke mann V., Schille J., Al a o S., Caballe o J., A aya‐ Ma u ana R., Fuen es E. Linking iphenylphosphonium ca ion o a bicyclic hyd oquinone imp o es hei an ipla ele e ec ia he egula ion o mi ochond ial unc ion. Redox Biol. 2024, 72, 103142. An eceden es 70 en plaque as, al di igi se y acumula se co ec amen e a la mi ocond ia g acias a la unión con el ca ión TPP+. El mecanismo de acción p opues o ue la ac i idad a ni el de OxPhos, al e ando la p oducción de ROS mi ocond ial. Figu a 5.8. De i ados de hid oquinonas bicíclicas y sus sales de os onio.171 a) BF3·2H2O, 140 °C, 30 min; b) Ag2O, CH2Cl2, 4-(2-me il-1-p openil)-mo olina; c) HCl, E OH, e lujo; d) PPh3, MeCN, 130 °C, 30 min; e) CH3I, K2CO3, ace ona; ) PPh3, MeCN, 130 °C, 30 min. El ácido glici e ínico ( igu a 5.9) ha sido es udiado po su ac i idad an i umo al; sin emba go, p esen a la des en aja de posee una pob e biodisponibilidad po su educida solubilidad en agua. Jin y col. 172 sin e iza on de i ados a pa i del i e penoide uncionalizando la posición C-3 o C-30 con TPP+ y cadenas alquílicas de di e en e longi ud a modo de espaciado es, con la inalidad de biodi igi lo a la mi ocond ia. Así mismo, e alua on su ac i idad ci o óxica en 172 . Jin L., Dai L., Ji M., Wang H. Mi ochond ia- a ge ed iphenylphosphonium conjuga ed glycy he inic acid de i a i es as po en an icance d ugs. Bioo g. Chem. 2019, 85, 179‒190. An eceden es 71 di e en es líneas celula es, an o umo ales como no umo ales, pa a compa a su selec i idad g acias al acoplamien o del ca ión lipó ilo. Los de i ados mos a on un inc emen o en su ac i idad ci o óxica con espec o al ácido glici e ínico sin uncionaliza . El de i ado 111b mos ó buena ci o oxicidad sob e líneas de cánce (IC50=5.25‒9.22 µM) y bajos alo es de ci o oxicidad en células no males de hígado HL-7702 (IC50=68.22 µM), además de induci la p oducción de ROS que pod ía conlle a a la mue e celula po apop osis ( igu a 5.9). Figu a 5.9. De i ados del ácido glici é inico-TPP uncionalizados en C-3 y C-30.172 An eceden es 72 Con la inalidad de inhibi la enzima colina quinasa α1, como una diana e apéu ica pa a el a amien o del cánce , Rubinni e al., 173 sin e iza on una nue a clase de de i ados pi idinio/quinolinio asimé icos ( igu a 5.10). La ac i idad an ip oli e a i a ue e aluada en e a un panel de 6 líneas celula es: ca cinoma de cé ix (HeLa), células T de leucemia (Ju ka ), ca cinoma al eola (A549), células de leucemia p omielocí ica (HL-60), adenoca cinoma de mama (MDA-MB-231) y ca cinoma de colon (HT-29). Todos los de i ados p esen a on ac i idad an ip oli e a i a, que osciló el ango nanomola y el mic omola bajo. Los de i ados 117‒121 p esen a on la mejo ac i idad an ip oli e a i a; en e ellos des aca el compues o 119, con alo es de GI50 en el ango 0.05 a 0.90 µM pa a las líneas en las que ue e aluado. Los compues os 120 y 121, dos de los más po en es de la se ie, ue on e aluados en e a lin oci os pe i é icos de la sang e, mos ando una ac i idad cla amen e in e io con espec o a la obse ada en las células umo ales (GI50=10 y 5.1 µM, espec i amen e). No obs an e, en p esencia de i ohemaglu inina, un es ímulo mi ogénico, dicho alo de GI50 bajó has a 1.5 µM, indicando que su acción depende de la elocidad de c ecimien o celula . Po o o lado, el de i ado 121 ue el que p esen ó mejo ac i idad inhibi o ia sob e la colina quinasa (IC50=0.29 µM). En base a lo an e io , concluye on que la adición de dos cabezas ca iónicas mejo a la ac i idad an ip oli e a i a y de inhibición enzimá ica, con el bene icio de una baja ci o oxicidad hacia células sanas. 173 . Rubbini G., Buades A.B., Kima ai-Sal ado M., En ena A., Gallo-Mezo M.Á., Ríos-Ma co P., Ma co C., Ma iuzzo E., Bo olozzi R., Ma io o E., G eco F., Macchia ulo A., Ca asco-Jiménez M. P., Viola G., Ca a C.L. Lead op imiza ion-hi expansion o new asymme ical py idinium/quinolinium compounds as choline kinase α1 inhibi o s. Fu u e Med. Chem. 2018, 10, 1769‒1786. An eceden es 73 Figu a 5.10. De i ados asimé icos pi idinio/quinolinio. a) .a., bu anona, 72 h; b) 140 °C (Re lujo), MeCN, P > 1 a m, 72 h.173 O o ca ión lipó ilo u ilizado como ec o mi ocond ial es la odamina B 133. K a y col. sin e iza on como agen es ci o óxicos híb idos del i e penoide ácido asiá ico con el ca ión lipo ílico odamina B y ue on e aluados en di e en es líneas celula es de umo es sólidos, así como su selec i idad con ib oblas os no malignos ( igu a 5.11). Obse a on que la adición de un g upo espaciado en el ca boxilo del anillo E del i e penoide pe mi ió modula su ac i idad, donde los de i ados 131a, 131b y 133 p esen a on alo es simila es de ci o oxicidad, pe o la adición de la odamina aumen ó conside ablemen e su ci o oxicidad y selec i idad hacia líneas celula es de cánce . El de i ado 132b ue el que p esen ó la mejo ac i idad inhibi o ia (EC50=0.8 nM) en células A2780 (cánce de o a io). Po su pa e, el análisis de unción mi ocond ial demos ó el e ec o de 132b sob e el me abolismo An eceden es 74 ene gé ico como p incipal mecanismo de acción obse ándose una disminución casi o al en los ni eles de p oducción de ATP. 174 Figu a 5.11. Híb ido ácido asiá ico-Rodamina B.174 Ba ula e al. diseña on es amidas de i adas de odamina B. El g upo ca boxilo ue uncionalizado con aminas secunda ias, pa a da luga a las amidas co espondien es ( igu a 5.12). E alua on la iabilidad celula en di e en es líneas de células umo ales y ob u ie on alo es de IC50 en el ango de 14 a 61 µM en células A549, B16F10 y MDA-MB-231, donde la amida 134 ue la que p esen ó mejo e ec o sob e la línea A549 (IC50=14.86 µM). Los de i ados p esen a on 174 . K a O., Ha mann A., B and S., Hoenke S., Heise N.V., Csuk R., Muelle T. Asia ic acid as a leading s uc u e o de i a i es combining sub-nanomola cy o oxici y, high selec i i y, and he abili y o o e come d ug esis ance in human p eclinical umo models. Eu . J. Med. Chem. 2023, 250, 115189. Discusión de esul ados 81 Esquema 5.5. Ru a de sín esis de iou eas de i adas de pi idinio, quinolinio y N-me ilimidazolio. Con espec o a la odamina B, se in en ó lle a a cabo la conexión median e enlace de ipo amida con el p-amino enol O-alquilado 141a, empleando pa a ellos una eacción ipo Scho en-Baumann; és a consis e en la eacción de una amina con un halu o de ácido pa a la ob ención de amidas. Como p ime paso, se hizo eacciona odamina B con SOCl2 y al inaliza se concen ó a sequedad pa a da luga al halu o de ácido 149. Es e úl imo se hizo eacciona con la amina 141a en medio básico (DIPEA) du an e 72 h pa a da luga a 150, que ue ob enido en can idades de aza as pu i icación c oma og á ica (4%). Al e na i amen e, se op ó po la eacción de odamina B con un agen e acoplan e (EDC•HCl) en medio básico (DIPEA) y en p esencia de can idades ca alí icas de DMAP. Con es a me odología se ob u o a 150 con un endimien o mode ado (35%) (esquema 5.6), pe o sensiblemen e supe io al ob enido median e la eacción de Scho en-Baumann. Discusión de esul ados 82 Esquema 5.6. Ru a de sín esis pa a la p epa ación de amida a pa i de odamina B. Una ez sin e izadas las iou eas 147a‒d, 148a‒c y la amida de odamina 150 se lle ó a cabo la ob ención de selenociana os, median e una eacción de sus i ución nucleo ílica sob e el agmen o b omoalquílico con KSeCN. Los híb idos selenociana os-ca iones lipo ílicos 25‒28 se ob u ie on con endimien os mode ados (13‒56%, esquemas 5.7 y 5.8). Esquema 5.7. Ru a de sín esis pa a la ob ención de selenociana os mi ocond io ópicos de i enil os onio. A modo de ejemplo se mues a en la igu a 5.15 el espec o de 1H-RMN de 25. Des acan las señales en 7.80 ppm de los p o ones del i enil os onio, los mul iple es en 7.31 y 6.87 ppm de los H del agmen o p-amino enol y las señales en el ango 2.10‒4.12 ppm, co espondien es a las cadenas alquílicas. Discusión de esul ados 83 Figu a 5.15. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 25. En la igu a 5.16 se mues a el espec o de 13C-RMN de 25, des acando la señal en 182.5 ppm de C=S del g upo iou eido; las señales dobles en 135.4, 133.7 y 130.8 ppm de los ca bonos de la unidad del i enil os onio: A -Cpa a (4JC,P=3.0 Hz), A -Co o (2JC,P=10.1 Hz) y A -Cme a (3JC,P=12.8 Hz) y sob e 118.1 ppm el doble e de A -Cipso (1JC,P=86.1 Hz), odos ellos acoplados al á omo de ós o o. La o mación del selenociana o se con i ma con la señal en 102.4 ppm. Po o o lado, las señales de 66.4 a 20.3 ppm co espondie on a los ca bonos de las cadenas alquílicas; se des aca la señal doble en 44.1 ppm pa a C-2 (2JC,P=16.0 Hz), el doble e en 22.5 ppm de C-3 (3JC,P=3.9 Hz) y el doble e en 20.6 ppm de C-1 (1JC,P=51.9 Hz) co espondien es a la cadena alquílica unida al agmen o del i enil os onio. Con lo an e io , se con i ma la o mación del compues o 25. Discusión de esul ados 84 Figu a 5.16. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 25. El esquema 5.8 mues a la me odología pa a accede a los selenociana os 29‒31, de i ados de pi idina, quinolina y N-me ilimidazolio. Discusión de esul ados 85 Esquema 5.8. Ru a de sín esis pa a la ob ención de selenociana os de pi idinio, quinolinio y N- me ilimidazolio. A modo de ejemplo se mues a el espec o de 1H-RMN de 29 en la igu a 5.17. Des acan las señales en 9.06 a 8.10 ppm, co espondien es a los p o ones del núcleo pi idínico, los mul iple es en 7.18 y 6.98 ppm de los p o ones de enilo y el conjun o de señales de 4.73 a 2.30 ppm de los hid ógenos de las cadenas alquílicas. En el espec o de 13C-RMN de 29 se con i ma la p esencia del g upo iou eido con la señal en 182.9 ppm (C=S), y la o mación del selenociana o po la señal en 104.3 ppm ( igu a 5.18). Discusión de esul ados 86 Figu a 5.17. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) del compues o 29. Figu a 5.18. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CD3CD) del compues o 29. Finalmen e se lle ó a cabo la p epa ación del selenociana o de i ado de odamina B. A pa i de la amida 150 y con una eacción de sus i ución nucleo ílica Discusión de esul ados 87 sob e el agmen o b omoalquílico 150 con KSeCN se ob u o el compues o 32 con un endimien o del 52% (esquema 5.9). Esquema 5.9. Ru a de sín esis del selenociana o de odamina B. En la igu a 5.19 se obse a el espec o de 1H-RMN pa a 32. Des acan las señales en 7.99 y 7.16 ppm de los H-3’ y H-4’, espec i amen e, el mul iple e sob e 6.65‒6.59 ppm de los p o ones de enilo (H-2’’, H-3’’, H-5’’, H-6’’) y H-8 de la odamina; Las señales en 3.95, 3.21 y 2.20 ppm co esponden a los p o ones de la cadena selenoalquílica y sob e 3.32 (CH2) y 1.15 (CH3) ppm se obse an las señales del g upo die ilamino de odamina B. Con espec o a las señales de 13C-RMN, se obse a en 167.8 la señal de ca bonilo de amida, la señal de SeCN en 102.0 ppm, las señales en 66.0, 30.2 y 26.5 ppm de los ca bonos de la cadena selenoalquílica y las señales en 44.4 y 12.7 de CH2 y CH3 del g upo die ilamina de la odamina B ( igu a 5.20). Lo an e io con i ma la ob ención de 32. Discusión de esul ados 88 Figu a 5.19. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 32. Figu a 5.20. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 32. An eceden es 89 6. De i ados de cuma ina como po enciales inhibido es duales de NAMPT y anhid asas ca bónicas 6.1. In oducción 6.1.1. Nico inamida adenina dinucleó ido (NAD+) La nico inamida adenina dinucleó ido (NAD+) es un me aboli o que desempeña un papel esencial en la homeos asis celula , p incipalmen e como co ac o de eacciones de oxido- educción elacionadas con la p oducción de ene gía, la glucólisis, el ciclo del ácido ica boxílico (TCA), la os o ilación oxida i a, oxidación de ácidos g asos y biosín esis de se ina. 177 , 178 El NAD+ se desc ibió po p ime a ez en 1906 po A hu Ha den como un co ac o necesa io en la e men ación del alcohol. Años después, en 1929, Hans on Eule -Chelpin iden i icó a es e co ac o como un os a o de azúca nucleósido. Pos e io men e, en 1935, O o Wa bu g aisló al NADP+ y desc ibió su papel en la ans e encia de hid ógeno en eacciones bioquímicas como una coenzima impo an e pa a el me abolismo ene gé ico. 179 El NAD se p esen a en dos o mas, la oxidada (NAD+) y la o ma educida (NADH), y su equilib io es c ucial pa a man ene la uncionalidad en humanos y su consumo y egene ación se egulan po di e en es ías del me abolismo ( igu a 6.1). 180 Es de des aca , que la elación de NAD+/NADH disminuye con la edad, lo que causa una disminución en la capacidad de epa ación del ADN y a la esis encia 177 . Yaku K., Okabe K., Nakagawa T. NAD me abolism: Implica ions in aging and longe i y. Ageing Res. Re . 2018, 47, 1‒17. 178 . Yaku K., Okabe K., Hikosaka K., Nakagawa, T. NAD me abolism in cance he apeu ics. F on . Oncol. 2018, 8, 622. 179 . Can ó C., Menzies K.J., Auwe x, J. NAD(+) me abolism and he con ol o ene gy homeos asis: A balancing ac be ween mi ochond ia and he nucleus. Cell Me ab. 2015, 22, 31‒53. 180 . Nishigaki J., Ishida T., Honma T., Ha u a M. Oxida ion o β-nico inamide adenine dinucleo ide (NADH) by au clus e and nanopa icle ca alys s aiming o coenzyme egene a ion in enzyma ic glucose oxida ion. ACS Sus ainable Chem. Eng. 2020, 8, 10413‒10422. An eceden es 90 de adicales lib es, po lo que man ene los ni eles es una es a egia con a el en ejecimien o y p oblemas elacionados. 181 , 182 Figu a 6.1. Es uc u a química de NAD+ y NADP+.180 Es no mal encon a a NAD+ en su o ma oxidada como o ma mayo i a ia, con una p opo ción NAD+/NADH que a ían de 10/1 a 700/1, con una concen ación celula o al en e 0.3 y 1.0 mM en mamí e os. A su ez, NAD+ puede os o ila se a NADP+ po la NAD quinasa, y ambién p esen a se en su o ma educida (NADPH), cuyo papel p incipal es ac ua como educ o en eacciones anabólicas, como la biosín esis de ácidos nucleicos o de lípidos y ambién ienen un papel impo an e en la homeós asis del calcio y en la supe i encia o mue e celula . Las concen aciones de NADP(H) se encuen an en un 10% con espec o a los ni eles 181 . Zhang H., Ryu D., Wu Y., Ga iani K., Wang X., Luan P., D’Amico D., Ropelle E.R., Lü ol M.P., Aebe sold R., Schoonjans K., Menzies K.J., Auwe x, J. NAD⁺ eple ion imp o es mi ochond ial and s em cell unc ion and enhances li e span in mice. Science, 2016, 352, 1436‒1443. 182 . Li X., An Q., Ma Z., Zhang Y., Chen X., Chai Y., Meng F. Bioac i e NAD+ egene a ion p omo ed by mul ime allic nanopa icles based on g aphene–polyme nanolaye s. ACS Appl. Ma e . In e aces, 2022, 14, 39285‒39292. An eceden es 97 inhibido de NAMPT del que hay epo e, con capacidad pa a induci apop osis en HepG2 (ca cinoma hepá ico), con una IC50 de ap oximadamen e 1.0 nM. Se comp obó que su mecanismo de acción es sup imi la ac i idad espi a o ia mi ocond ial debido a la educción de la p oducción de NAD.186, 209 Figu a 6.4. Inhibido es de NAMPT de p ime a gene ación. CHS828 es una pi idinil cianoguanidina con ac i idad an icance ígena desa ollado po la compañía Leo Pha ma A/S (Dinama ca). Fue epo ado en 1997 po Bjö kling y colabo ado es, y mos ó un po en e e ec o an icance ígeno con a células de cánce de pulmón y de mama (IC50=31 nM en células MCF-7 y IC50=2.7 nM en células NYH, espec i amen e). 210 No ue has a 2008 que Olesen e al. demos a on su ac i idad de bloqueo de NAMPT en células cance ígenas lle ando a su mue e celula al educi la p oducción de NAD. 211 G acias a su e aluación en ase clínica, se han diseñado di e sos p o á macos con mejo a macociné ica y solubilidad.186 O o inhibido de NAMPT en ase clínica I es OT-82 ( igu a 6.5) y ue diseñado po OncoTa is en 2019. Su mecanismo de acción es po el con ol en la p oducción 209 . Hasmann M., Schemainda I. FK866, a highly speci ic noncompe i i e inhibi o o nico inamide phospho ibosyl ans e ase, ep esen s a no el mechanism o induc ion o umo cell apop osis. Cance Res. 2003, 63, 7436‒7442. 210 . Schou C., O osen E.R., Pe e sen H., Bjö kling F., La ini S., Hja naa P.V., B amm E., Binde up L. No el cyanoguanidines wi h po en o al an i umou ac i i y. Bioo g. Med. Chem. Le . 1997, 7, 3095‒3100. 211 . Olesen U.H., Ch is ensen M.K., Bjö kling F., Jää elä M., Jensen P.B., Sehes ed M., Nielsen S. An icance agen CHS-828 inhibi s cellula syn hesis o NAD. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2008, 367, 799‒804. An eceden es 98 de NAD y ATP que lle ó a la mue e celula po apop osis. Es e compues o p esen ó una ue e acción con a neoplasias malignas hema opoyé icas con una IC50= 2.89 nM y en células no hema opoyé icas con una IC50=13.03 nM y una po en e inhibición de NAMPT, con IC50=41 nM. Po o o lado, en es udios oxicológicos ealizados en a ones y p ima es no se obse a on e ec os oxicológicos a ni el ca díaco, neu ológico o en e inas, po lo que OT-82 es un candida o pa a el a amien o de neoplasias hema ológicas. 212 Figu a 6.5. Inhibido de NAMPT OT-82. Los inhibido es de NAMPT de segunda gene ación han sido clasi icados po He y col. 213 en cua o ipos: 1) inhibido es de NAMPT siguiendo el modelo clásico; 2) inhibido es de NAMPT es uc u almen e dis in os; 3) inhibido es de NAMPT sin sus a o; 4) inhibido es duales. Ejemplo de de i ados que siguen el modelo clásico ue on los epo ados po Zheng e al. 214 P esen a on una se ie de u eas y iou eas como inhibido es de NAMPT. De en e odos los de i ados, el análogo con g upo enlazan e iou eido 151 212 . Ko o chkina L.G., Kazyulkin D., Koma o P.G., Polinsky A., And iano a E.L., Joshi S., Gup a M., Vujcic S., Konono E., Toshko I., Tian Y., K asno P., Che no M.V., Vei h J., An och M.P., Middlemiss S., Some s K., Lock R.B., No is M.D., Gudko , A.V. e . al. OT-82, a no el an icance d ug candida e ha a ge s he s ong dependence o hema ological malignancies on NAD biosyn hesis. Leukemia, 2020, 34, 1828‒1839. 213 . He T., Wang L., Wang T., Yang J., Zheng S., Tong J., Jiang S., Zhang X., Zhang K. Recen ad ances o a ge ing nico inamide phospho ibosyl ans e ase (NAMPT) o cance d ug disco e y. Eu . J. Med. Chem. 2023, 258, 115607. 214 . Zheng X., Baue P., Baumeis e T., Buckmel e A.J., Caligiu , M., Clod el e K.H., Han B., Ho Y.K., Kley N., Lin J., Reynolds D.J., Sha ma G., Smi h C.C., Wang Z., D ago ich P.S., Oh A., Wang W., Zak M., Gunzne -Tos e J., Bai K. W. e . al. S uc u e-based iden i ica ion o u eas as no el nico inamide phospho ibosyl ans e ase (NAMPT) inhibi o s. J. Med. Chem. 2013, 56, 4921‒4937. An eceden es 99 y u eido 152 ue on po en es inhibido es de NAMPT (IC50=7 y 3 nM, espec i amen e). Es udios compu acionales p edije on la exis encia de in e acciones de ambos compues os con Asp219 y Se 241 de la cadena la e al de NAMPT a a és de enlaces de hid ógeno. Obse a on que al sus i ui el g upo u eido po una amida pa a ob ene el de i ado 153 se mejo aba la ene gía de in e acción con NAMPT o iginando una IC50=9 nM y una ue e ac i idad an ip oli e a i a (IC50=10 nM) en e a células A2780 (cánce de o a io humano). La modi icación de los g upos cabeza y cola con di e en es agmen os o iginó los de i ados 154 (GNE-617), 155 y 156, con ac i idades inhibi o ias y an ip oli e a i as (A2780) en el ango nM bajo ( igu a 6.6). Es de des aca que GNE-617 en modelos in i o de a ón p o ocó una eg esión umo al con xenoinje o U251 a los 7 días de a amien o (dosis: 25 mg/kg) y los e ec os pe du a on aun después de e minado el a amien o, e inhibición de c ecimien o umo al de cánce de colon a una dosis de 15 mg/kg. Sin emba go, GNE-617 p esen ó baja solubilidad en agua y p o ocó daño a la e ina.214 Figu a 6.6. Tiou eas, u eas y amidas con ac i idad inhibi o ia de NAMPT.214 An eceden es 100 O o g upo enlazan e como po encial inhibido de NAMPT son los iazoles. Los p ime os iazoles inhibido es de NAMPT ue on epo ados po T on y colabo ado es en 2010. 215 Ellos eemplaza on la 3-(pi idin-3-il) ac ilamida de FK866 con un iazol 1,4-disus i uido ( igu a 6.7). Los de i ados con la pi idina me a sus i uida p esen a on ac i idad ci o óxica en el ango nM. Al ealiza un es udio de elación es uc u a-ac i idad obse a on que el mejo e ec o lo u o el g upo cola bi enilo >> 1,1’-di enil é e > 1,1’-bi enilme ano ≥ 1,1’-di enile ano y con espec o al g upo espaciado la mejo ac i idad ue pa a n=8 > n=6 > n=7. En base a lo an e io , el compues o 158b ue el que p esen ó mejo ac i idad an ip oli e a i a en e a líneas de cánce de leucemia, colon, melanoma, o a io, enal y p ós a a. Figu a 6.7. P ime os de i ados de iazol inhibido es de NAMPT sin e izados po Colombano e al.215 En base a lo epo ado po T on y colabo ado es, más ecien emen e T a elli e al. sin e iza on una se ie de de i ados de iazol con di e en es g upos cola 215 . Colombano G., T a elli C., Galli U., Calda elli A., Chini M.G., Canonico P.L., So ba G., Bi ulco G., T on G.C., Genazzani A.A. A no el po en nico inamide phospho ibosyl ans e ase inhibi o syn hesized ia click chemis y. J. Med. Chem. 2010, 53, 616‒623. An eceden es 101 hid o óbicos como po enciales inhibido es de NAMPT ( igu a 6.8). 216 El compues o más ac i o ue el 165c en modelos de xenoinje o y aloinje o lo que co obo ó su po encial an ip oli e a i o (EC50=5.2 nM, células SH-SY5Y neu oblas oma) po medio de la inhibición de NAMPT (IC50=3.8 nM) y disminución de los ni eles de NAD (IC50=6.7 nM). Adicionalmen e, es e de i ado ayudó a disminui la coli is en a ones, siendo el p ime inhibido de NAMPT con es e ipo de e ec o. Figu a 6.8. Ejemplo de algunos iazoles con ac i idad inhibi o ia de NAMPT.216 Un ejemplo de de i ado inhibido de NAMPT es uc u almen e di e en e es el descubie o po Zhao e al., el LSN3154567, en la búsqueda de inhibido es selec i os de NAMPT pa a disminui el iesgo de daño a e ina al disminui su pe meabilidad ( igu a 6.9). Es e de i ado p esen ó un IC50=3.2 nM con a NAMPT y es udios in i o demos a on una disminución en el con enido de NAD a una dosis de 2 mg/kg en a ones, además de posee ac i idad an ip oli e a i a en a ias líneas celula es de cánce . Con la adminis ación o al gene al mode ada de 2 mg/kg se 216 . T a elli C., Ap ile S., Rahimian R., G olla A.A., Roga i F., Be olo i M., Malagnino F., Di Paola R., Impellizze i D., Fusco R., Me calli V., Massa o i A., S o ini G., Te azzino S., Del G osso E., Fakh ou i G., T oiani M.P., Alisi M.A., G osa G., So ba G., Canonico P.L., O somando G., Cuzzoc ea S., Genazzani A.A., Galli U., T on G.C. Iden i ica ion o no el iazole-based nico inamide phospho ibosyl ans e ase (NAMPT) inhibi o s endowed wi h an ip oli e a i e and an iin lamma o y ac i i y. J. Med. Chem. 2017, 60, 1768‒1792. An eceden es 102 epo ó una biodisponibilidad del 39% (Cmax= 57 nM) y un acla amien o enal al o (CL=158.73 ml/min/kg). Al e alua la oxicidad de es e compues o no se obse ó e inopa ía en a as en compa ación con o os inhibido es de NAMPT y en combinación con ácido nico ínico se pudo a a a pe os con oxicidad e iniana. 217 Figu a 6.9. Es uc u a del inhibido de NAMPT LSN3154567.217 Con el obje i o de ob ene inhibido es de NAMPT con mejo solubilidad en agua, Ma a y colabo ado es ecien emen e sin e iza on β-D-imino ibo u anósidos o mados po di e en es he e ociclos conec ados a a és de la posición anomé ica del ca bohid a o ( igu a 6.10). E alua on su ac i idad inhibi o ia en di e en es líneas de células umo ales, la inhibición enzimá ica de NAMPT y la disminución in acelula de los ni eles NAD+. Sin emba go, la p esencia del iminoazúca p odujo una educción en la po encia an o de la inhibición de NAMPT, como an ip oli e a i a en compa ación con FK866 (IC50=2.4nM). De los de i ados p epa ados, el compues o 174 u o la mejo ac i idad an ip oli e a i a, aunque mode ada en células MiaPaCa-2 (células de cánce de pánc eas) con una IC50=32 µM. Pa a es e úl imo, el ago amien o de NAD+ a dosis de 100 mM, después de 24 h, ue del 79%. Po lo cual, es e ipo de de i ados son p ome edo es pa a el desa ollo de inhibido es de NAMPT. 218 217 . Zhao G., G een C.F., Hui Y., P ie o L., Shepa d R L., Dong S., Wang T., Tan B., Gong X., Kays L., Johnson R.L., Wu W., Bha acha S., Del P ado M., Gillig J.R., Fe nandez M., Ro h K.D., Buchanan S.G., Kuo M., Geeganage S., Bu kholde T.P. Disco e y o a highly selec i e NAMPT inhibi o ha demons a es obus e icacy and imp o ed e inal oxici y wi h nico inic acid coadminis a ion. Mol. Cance The . 2017, 16, 2677‒2688. 218 . Con o i I., Benzi A., Ca a I., B uzzone S., Nencioni A., Ma a A. Iminosuga -based nico inamide phospho ibosyl ans e ase (NAMPT) inhibi o s as po en ial an i-panc ea ic cance agen s. Pha maceu ics, 2023, 15, 1472. An eceden es 103 Figu a 6.10. De i ados β-D-Imino ibo u anósidos inhibido es de NAMPT.218 Ejemplo de inhibido es de NAMPT sin sus a o ue on las u eas de isoindolina epo ados po Cu in e al. 219 Los inhibido es de NAMPT cuen an con un á omo de ni ógeno básico indispensable pa a la in e acción con la enzima, sin emba go, las u eas epo adas ca ecían del he e oá omo con ni ógeno como g upo cabeza. De la se ie de compues os p epa ados, el 176 y 177 ( igu a 6.11) p esen a on una buena ac i idad an ip oli e a i a en el ango nM y ac i idad an i umo al in i o en modelo de xenoinje o en a ón. Ambos compues os p esen a on una excelen e disponibilidad o al (100 y 59% espec i amen e), acla amien o enal de 0.11 L/h/kg y 0.26 L/h/kg y una ida media de 4.8 y 3 h, espec i amen e. Los alo es de educción de c ecimien o umo al en a ón ue on del 90% y 78% pa a 177 y 176, espec i amen e. Al e alua la inhibición de NAMPT ob u ie on alo es de Ki= 56 y 83 nM pa a 176 y 177, espec i amen e. Los esul ados, aunque no son mejo es a moléculas inhibido as de NAMPT de e e encia, ma ca on la pau a pa a nue os de i ados de es e ipo. 219 . Cu in M.L., Heyman H.R., Cla k R.F., So ensen B.K., Dohe y G., Hansen T.M., F ey R.R., Sa is K., Agui e A.L., Sh es ha A., Tu N.P., Wolle K.R., Pliushche M., Sweis R.F., Cheng M., Wilsbache J.L., Ko a P., Guo J., Cheng D., Longenecke K.L., Raich D., Ko epano a A.V., Soni N.B., Algi e M.A., Richa dson P.L., Ma in V.L., Badagnani I., Vasude an A., Buchanan F.G., Maag M., Chiang G.G., Tse C., Michaelides M. SAR and cha ac e iza ion o non-subs a e isoindoline u ea inhibi o s o nico inamide phospho ibosyl ans e ase (NAMPT). Bioo g. Med. Chem. Le . 2017, 27, 3317‒3325. An eceden es 104 Figu a 6.11. U eas de isoindolina con po encial ac i idad inhibi o ia de NAMPT.219 Con la inalidad de mejo a p oblemas de a maco esis encia, a macociné ica y de oxicidad se ha op ado po el diseño de moléculas híb idas, que puedan p esen a dos mecanismos de acción di e en es (inhibido es duales) pa a el desa ollo de á macos. En algunos casos, son más bene iciosos en compa ación a las e apias combinadas, sob e odo po la disminución de e ec os secunda ios.186 Un ejemplo de inhibido dual es el epo ado po Dong e al. ( igu a 6.12).207 Diseña on moléculas que inhibían simul áneamen e a NAMPT e his ona desace ilasa (HDAC). Las HDAC’s ienen un papel impo an e en la egulación de la exp esión gené ica de la umo igénesis y el man enimien o del umo y cons i uyen la diana e apéu ica de di e sos á macos en el a amien o del cánce cu áneo y de lin omas de células T. 220 De los de i ados epo ados, el compues o 178 p esen ó una ac i idad excelen e y equilib ada con a NAMPT (IC50=31 nM) y HDAC1 (IC50= 55 nM), y su posible mecanismo de acción se ía la inducción de apop osis, au o agia y consecuen e mue e celula . Además, 178 p esen ó e icacia an i umo al in i o en modelo de xenoinje o en a ón con células HCT116 a una dosis de 25 mg/kg dos eces al día du an e 21 días consecu i os. A dosis de 2 mg/kg en a a se obse ó que la ida media de 178 ue de 1.8 h y un acla amien o plasmá ico de 745 ng/ml, lo cual indicó p oblemas de a macociné ica. Sin emba go, es os compues os cons i uyen una buena base pa a el diseño de o as moléculas duales. 220 . Zhou M., Yuan M., Zhang M., Lei C., A as Ö., Zhang X., An F. Combining his one deace ylase inhibi o s (HDACis) wi h o he he apies o cance he apy. Eu . J. Med. Chem. 2021, 226, 113825. An eceden es 105 Figu a 6.12. Diseño de inhibido es duales de NAMPT/HDAC.220 En base a odo lo an e io , un epo e ecien e de de i ados con ac i idad inhibi o ia sob e NAMPT con ac i idad an i umo al po pa e de Robina y colabo ado es, 221 se basó en la p epa ación de es amilias de compues os basados en inhibido es de NAMPT de p ime a gene ación ( igu a 6.13), que con ienen g upos (pi idin-3-il) iazol, (pi idin-3-il) iou ea y (pi idin-3/4- il)cianoguanidinas como g upo conec o y un g upo u ano como g upo cola (como mimé ico del g upo benzamida en FK866). Los de i ados se e alua on en di e en es líneas de células de cánce hema ológico y de umo es sólidos, mos ando una ac i idad ci o óxica en el ango 221 . F a a S., Biniecka P., Mo eno-Va gas A.J., Ca mona A.T., Nahimana A., Duchosal M.A., Piacen e F., B uzzone S., Ca a I., Nencioni A., Robina I. Syn hesis and s uc u e-ac i i y ela ionship o new nico inamide phospho ibosyl ans e ase inhibi o s wi h an i umo ac i i y on solid and haema ological cance . Eu . J. Med. Chem. 2023, 250, 115170. An eceden es 106 nM o subnanomola , in e io es a los epo ados pa a el compues o de e e encia FK866. De los de i ados sin e izados los compues os 179, 180 y 181 mos a on ac i idad ci o óxica con a células ML2 (células de leucemia mieloide aguda) con una IC50=18, 46 y 49 pM y con a MiaPaCa-2 (células de cánce panc eá ico) con una IC50=0.005, 0.455 y 2.81 nM, espec i amen e, siendo la del compues o 179 mucho más po en e FK866 (IC50=2.4 nM). También es de des aca que cuando emplea on como g upo espaciado cadenas alquílicas, la cadena de 6C ue la que p esen ó mejo e ec o ci o óxico y de en e los g upos enlazan es, el g upo iazol ue el que p esen ó meno ac i idad ci o óxica con espec o a las iou eas y cianoguanidinas. Se obse ó po o o lado, que al modi ica el g upo pi idina po isoindolina la ac i idad an i umo al decayó. Figu a 6.13. Inhibido es de NAMPT basados en FK866.221 An eceden es 113 ex e io del si io ca alí ico, lo que impide el ing eso de sus a os, inhibiendo la ca álisis de la anhid asa ca bónica.241, 242 Figu a 6.18. Ejemplos de inhibido es no clásicos de anhid asas ca bónicas. En pa icula , las cuma inas, que son los inhibido es de CAs abo dados en es e capí ulo de la Tesis Doc o al, ac úan en ealidad como p o á macos; las CAs ienen ambién ac i idad de ipo lipasa, pudiendo hid oliza la lac ona de las cuma inas, o iginando un de i ado del ácido o-hid oxicinámico, que ocluye la en ada al si io ac i o de la enzima (inhibido suicida). Las cuma inas suelen compo a se como inhibido es muy selec i os de CA IX y CA XII, y, po an o, pueden se un pun o de pa ida in e esan e pa a el desa ollo de á macos an i umo ales. 243 , 244 242 . Lomelino C.L., Supu an C.T., McKenna R. Non-classical inhibi ion o ca bonic anhyd ase. In . J. Mol. Sci. 2016, 17, 1150. 243 . Gio annuzzi S., De Luca V., Nocen ini A., Capasso C., Supu an C.T. Couma ins inhibi η-class ca bonic anhyd ase om Plasmodium alcipa um. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2022, 37, 680‒ 685. 244 . Gümüş A., Bozdağ M., Akdemi A., Supu an C.T., Selle i S., Ca a F., Supu an C.T. Thiosemica bazide-subs i u ed couma ins as selec i e inhibi o s o he umo associa ed human ca bonic anhyd ases IX and XII. Molecules, 2022, 27, 4610. Obje i os 114 6.2. Obje i o gene al de sección Sin e iza inhibido es duales de NAMPT y CAs IX y XII como po enciales agen es an ip oli e a i os. Como a macó o o en la inhibición de NAMPT se emplea á un esiduo de pi idin-3(ó 4)-il unido a un conec o de ipo iou ea, cianoguanidina o amida. Po o o lado, se inco po a á una unidad de cuma ina con di e en es sus i uyen es en C-3 y C-4 como p o á maco en la inhibición de CAs elacionadas con p ocesos umo ales. Ambos a macó o os es a án conec ados po un espaciado de longi ud ija (hexame ileno). 6.3. Obje i os pa icula es de sección • Sin e iza 7-hid oxicuma inas a pa i de eso cinol, y es di e en es β- ce oés e es (ace oace a o de e ilo, 2-me ilace oace a o de e ilo y 4,4,4- i luo oace oace a o de e ilo). • Realiza la alquilación de cada hid oxicuma ina con 1,6-dib omohexano, seguido de la p epa ación de la consecuen e azida con NaN3, e hid ogenación ca alí ica es ánda pa a o igina las co espondien es aminas en posición ω de la cadena alquílica. • Sin e iza (pi idin-3-il)amidas a pa i de ácido nico ínico y los amino- de i ados de cuma ina. • P epa a los in e media ios pa a la sín esis de cianoguanidinas (ca bamimida os) a pa i de 3 y 4-aminopi idina con imidoca bona o de N- cianodi enilo. • Sin e iza las co espondien es (pi idin-3/4-il)cianoguanidinas, median e la eacción de las aminas de cuma ina con el co espondien e ca bamimida o. • Sin e iza las iou eas a pa i de las aminas de cuma ina con 3- pi idiliso iociana o come cial. • E alua la ac i idad an ip oli e a i a. • E alua la inhibición de CAs humanas elacionadas con p ocesos umo ales (CA IX, XII), así como el índice de selec i idad. • E alua la inhibición de NAMPT. • Es ablece elaciones es uc u a-ac i idad. Discusión de esul ados 115 6.4. Discusión de esul ados Pa a el diseño de los de i ados inhibido es de NAMPT, es e es udio se basó en el epo e de F a a e al.221 En es e capí ulo se abo dó la p epa ación de 3 amilias de inhibido es duales de NAMPT y CAs: iou eas, cianoguanidinas y amidas inco po ando una unidad de pi idina y de cuma ina sus i uida en cada ex emo del espaciado ( igu a 6.19). Figu a 6.19. Diseño es uc u al de la amilia de compues os inhibido es duales de NAMPT-CAs sin e izados. En p ime luga , se lle ó a cabo la p epa ación de las 7-hid oxicuma inas 182a‒c ( eacción de Pechmann en e eso cinol y di e sos β-ce oés e es) y su alquilación en el hid oxilo enólico median e sín esis de Williamson (compues os 183a‒c). La p epa ación de las azidas de cuma ina se ealizó po una eacción SN2 con azida de sodio, en DMF, ob eniéndose los de i ados 184a‒c con endimien os de excelen e a cuan i a i os. Las azidas se u iliza on sin pu i ica pa a el siguien e paso de eacción (esquema 6.1), una hid ogenación es ánda con ca álisis Discusión de esul ados 116 he e ogénea, pa a o igina las co espondien es aminas 185a‒c, in e medios cla e en la p epa ación de las es amilias de inhibido es abo dadas en es e capí ulo de la Tesis Doc o al. Esquema 6.1. Ru a de sín esis pa a la p epa ación de aminas de i adas de cuma inas. Pa a la sín esis de amidas, se u ilizó como eac i o de pa ida ácido nico ínico come cial que se acopló con las aminas 185a y 185b en medio básico (DIPEA), al y como se mues a en el esquema 6.2, en p esencia de EDCI (1-e il-3-(3- dime ilaminop opil)ca bodiimida) y HOB (1-hid oxibenzo iazol) como agen es acoplan es. EDCI iene como unción ac i a al ácido ca boxílico pa a da luga a un in e media io más eac i o (O-acilisou ea), que a su ez eacciona con HOB pa a o igina un és e (esquema 6.3), 245 capaz de eacciona más ácilmen e con aminas y da luga a las amidas 33 y 34. El mecanismo de eacción pa a la ob ención de amidas con es os agen es acoplan es se mues a en el esquema 6.3. Consis e en p ime luga , en la o mación del ion ca boxila o del ácido nico ínico, seguida de la adición nucleo ílica de és e a EDCI pa a o ma el in e media io O-acilisou ea. Pos e io men e, se da una nue a 245 . Magano J. La ge-scale amida ions in p ocess chemis y: p ac ical conside a ions o eagen selec ion and eac ion execu ion. O g. P ocess Res. De . 2022, 26, 1562‒1689. Discusión de esul ados 117 adición al ca bonilo po pa e de HOB pa a da luga a la eliminación de la u ea de EDCI y el co espondien e és e del ácido nico ínico con HOB . Finalmen e, se p oduce el a aque nucleo ílico al ca bonilo de dicho és e po pa e de la amina de cuma ina pa a da las co espondien es amidas y eliminación de HOBT. Esquema 6.2. Sín esis de amidas con po encial inhibición dual de NAMPT-CAs. Esquema 6.3. Mecanismo de eacción pa a la o mación de amidas mediada po EDCI/HOB . Discusión de esul ados 118 A modo de ejemplo, en la igu a 6.20, se mues a el espec o de 1H-RMN pa a el compues o 34. Las señales en 8.96, 8.71, 8.11 y 7.37 ppm co esponden a los p o ones de pi idina; las señales en 7.47, 6.82, 6.76 ppm co esponden a los p o ones H-5’, H-6’, H-8’, espec i amen e, de la cuma ina. Po o o lado, la señal en 6.32 ppm se asigna al NH del g upo amida y las señales localizadas en 3.99 ( iple e) y 3.49 (cua e e) ppm se co esponden con los ex emos de la cadena alquílica (H-6 y H-1, espec i amen e). Po su pa e, en el espec o de 13C-RMN, la esonancia en 165.8 ppm, asignada al g upo ca bonilo de amida, con i ma la o mación de es a ( igu a 6.21). Figu a 6.20. Espec o de 1H-RMN (CDCl3, 300 MHz) del compues o 34. Discusión de esul ados 119 Figu a 6.21. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) del compues o 34. También se abo dó la p epa ación de cianoguanidinas de i adas de pi idina sus i uidas en las posiciones C-3 y C-4. Pa a ello, en p ime luga , se sin e izó el co espondien e cianoca bamimida o de enilo, a pa i de cianoca bonimida o de di enilo come cial con 3 ó 4-aminopi idina en medio básico (TEA, esquema 6.4). Los ca bamimida os se ob u ie on con endimien os mode ados de 69% pa a 186a y de 53% pa a 186b. Esquema 6.4. Ru a de sín esis de los ca bamimida os 186a,b. A con inuación, se lle ó a cabo el acoplamien o de los ca bamimida os 186a ó 186b con un exceso de las cuma inas 185a‒c en medio básico (TEA), en p esencia de DMAP como ca alizado (esquema 6.5). En o al se ob u ie on 6 cianoguanidinas con endimien os de mode ados (36, 59%) a buenos (38, 85%). Discusión de esul ados 120 Esquema 6.5. Sín esis de cianoguanidinas de i adas de cuma inas como po enciales inhibido es duales de NAMPT-CAs. A modo de ejemplo, la igu a 6.22 mues a el espec o de 1H-RMN de la cianoguanidina 36 sus i uida en C-3’ de la pi idina, de g an semejanza al indicado p e iamen e pa a el compues o 34; en él se obse an los p o ones del esiduo de pi idina (8.55, 8.50, 7.50 y 7.36 ppm) y de cuma ina (7.47, 6.84 y 6.80 pa a H-5’, H- 6’ y H-8’, espec i amen e). También pueden obse a se las señales de los g upos NH unidos a la pi idina y a la cadena ali á ica (7.72 y 5.17 ppm, espec i amen e). En la egión ali á ica des acan las señales que esuenan en 3.97 y 3.33 ppm, asignadas de nue o a los ex emos de la cadena hid oca bonada (H-6 y H-1), así como los singule es en 2.36 y 2.17 ppm, co espondien es a los dos g upos me ilo sob e las posiciones C-3’ y C-4’ de la cuma ina. Po o o lado, en el espec o de 13C-RMN de 36 des acan las señales en 162.7 ppm (g upo ca bonilo de la cuma ina), 161.1 ppm (g upo imino de la cianoguanidina), así como la del g upo ciano (114.3 ppm). Adicionalmen e, las señales en 68.3 y 42.3 ppm co esponden a los ca bonos me ilénicos si uados en los ex emos de la cadena alquílica y sob e 15.2 y 13.3 ppm las señales pa a los me ilos de cuma ina en las posiciones C-3’ y C-4’ ( igu a 6.23). Todo ello co obo a la o mación de la cianoguanidina espe ada. Discusión de esul ados 121 Figu a 6.22. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 36. Figu a 6.23. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) del compues o 36. C=O Discusión de esul ados 122 También se incluyen los espec os de 1H- y 13C-RMN de la cianoguanidina 37 sus i uida en C-4’ de la pi idina ( igu as 6.24 y 6.25, espec i amen e). Con espec o a los de i ados an e io men e indicados, des aca la ausencia de sus i uyen es en la posición C-3’ de la cuma ina, po lo que se obse a un cua e e ancho co espondien e al p o ón H-3’ en 6.07 ppm, con una 4JH,H=1.2 Hz, po su acoplamien o alílico con los p o ones del CH3 en C-4’ de la cuma ina, el cual se obse a como una señal doble en 2.36 ppm. Figu a 6.24. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 37. El espec o de 13C-RMN de 37 posee una g an analogía con el mos ado pa a la cianoguanidina 36, des acando las señales a 160.2 y 114.6 ppm, que demues an la p esencia del g upo cianoguanidino. H-6 H-1 Pa e expe imen al 225 9.8.4.7. B omu o de 1-me il-3-{3’-[3’’-(4’’’-(3’’’’-selenociana op opoxi) enil) iou eido]p opil}-1H-imidazol-3-io (31) Se empleó 148c (89 mg, 0.18 mmol) y KSeCN (78 mg, 0.54 mmol), ob eniéndose 31 como espuma de colo osa (12 mg, 13%). 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) δ 8.98 (s, 1H, H-2), 7.67 (m, 1H, H-5), 7.58 (m, 1H, H-4), 7.17 (m, 2H, H- 2’’’, H-6’’’), 6.99 (m, 2H, H-3’’’, H-5’’’), 4.28 ( , 2H, JH,H=8.6 Hz, H-1), 4.15 ( , 2H, JH,H=7.4 Hz, H-1’’’’), 3.93 (s, 3H, CH3), 3.65 ( , 2H, JH,H=2.4 Hz, H-3), 3.31 (m, 2H, H-3’’’’), 2.37 (quin ., 2H, H-2), 2.20 (quin ., 2H, H2’’’’) ppm. 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) δ 182.8 (C=S), 158.7 (C-4’’’), 132.2 (C-2), 134.8 (C-1’’’), 124.4 (C-2’’’, C-6’’’), 124.9 (C-4), 123.7 (C-5), 116.5 (C-3’’’, C-5’’’), 104.3 (SeCN), 67.8 (C-1’’’’), 42.4 (C- 1), 36.5 (C-3), 31.7 (CH3), 30.7(C-2’’’’), 27.4 (C-2) ppm. 9.8.4.8. Clo u o de 3,6-bis(die ilamino)-9-{2'-[N-(4''-(3'''-selenociana op opoxi) enil)ca bamoil] enil}xan ilio (32) Se empleó 150 (69 mg, 0.10 mmol) y KSeCN (43 mg, 0.30 mmol) ob eniéndose después de 2 h a 32 como espuma osa (37.5 mg, 52%). 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7.99 (m, 1H, H-3’), 7.49 (m, 2H, H-6’,H-1), 7.16 (m, 1H, H-4’/H- 5’), 6.65-6.59 (m, 5H, H-2’’, H-3’’, H-5’’,H-6’’,H-8), 6.32 (dd, 2H, J2,1=11.1 Hz, J2,4=3.3 Hz, H-2/H-7), 6.24 (d, 2H, J4,2= 3.3 Hz, H-4, H-5 ), 3.95 ( , 2H, JH,H=7.2 Hz, H-1’’’), 3.32 (m, 8H, H-15, H-15’, H-17, H-17’), 3.21 ( , 2H, JH,H=8.4 Hz, H-3’’’), 2.30 (quin ., 2H, JH,H=8.9 Hz, H-2’’’), 1.15 ( , 12H, JH,H=8.8 Hz, H-16, H-16’, H-18, H-18’) ppm. 13C-RMN (125.7 MHz, CD3OD) δ 167.8 (C=O), 157.0 (C-11, C-12), 153.4 (C-4’’), Pa e expe imen al 226 153.1 (C-3/C-6), 148.9 (C-1’’), 132.8 (C-1), 131.4 (C-9), 129.8 (C-8), 129.2, 129.0 (C-2’’,C-6’’), 128.3 (C-6’), 124.2 (C-4’), 123.4(C-3’), 114.6 (C-5’’/C-3’’), 108.2 (C-2/C- 7), 106.5, 102.0 (SeCN), 97.9 (C-4/C-5), 67.5, 66.0 (C-1’’’), 44.4 (C-15, C-15’, C-17, C-17’), 30.2 (C-2’’’), 26.5 (C-3’’’), 12.7 (C-16, C-16’, C-18, C-18’) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C38H41N3N+O377Se ([M+H]+): 681.2317, encon ado: 681.2317. 9.8.5. P ocedimien o gene al pa a la p epa ación amidas con po encial ac i idad inhibi o ia de NAMPT A una solución de ácido nico ínico (1.0 equi .), amina 185a ó 185b (2.0 equi .), EDCI (4.0 equi .), y HOB (1.5 equi .) en DMF anhid a (3 mL) se adicionó DIPEA (1.5 equi .). La eacción se man u o en agi ación a .a. has a consumo de ma e ia p ima (~24h). Al inaliza la eacción, se concen ó a sequedad y se disol ió en CH2Cl2 y se la ó con NH4Cl aq. sa . (2x10 mL), NaHCO3 aq. sa . (2x10mL) y agua (1x15 mL). La ase o gánica se secó sob e MgSO4, se il ó y el il ado se concen ó a sequedad. El esiduo se pu i icó median e c oma og a ía en columna con una mezcla de CH2Cl2‒MeOH (60:1→50:1). 9.8.5.1. N-(6-[(4’-me il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il)oxi]hexil)nico inamida (33) Se empleó acido nico ínico (17 mg, 0.14 mmol), 185a (75 mg, 0.27 mmol), EDCI (104 mg, 0.54 mmol), HOB (28 mg, 0.20 mmol) y DIPEA (26 mg, 0.20 mmol) ob eniéndose 33 como espuma ama illa cla a (20 mg, 73%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8.96 (dd, 1H, J2’’,6’’=1.7 Hz, H-2’’), 8.70 (dd, 1H, J6’’,4’’=1.6 Hz, J6’’,5’’=4.8 Hz, H-6’’), 8.11 (ddd, 1H, J4’’,5’’=9.7 Hz, J4’’,2’’=1.8 Hz, J4’’,6’’=2.2 Hz, H-4’’), 7.47 (d, 1H, J5’,6’=8.8 Hz, H-5’), 7.37 (m, 1H, H-5’’), 6.83 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=8.8 Hz, H-6’), 6.77 (d, 1H, J8’,6’=2.5 Hz, H-8’), 6.37 (sa, 1H, NH), 6.11 (ca, 1H, JH,H=1.3 Hz, H-3’), 4.00 ( , 2H, JH,H=6.4 Hz, H-6), 3.49 (c, 2H, JH,H=6.9 Hz H-1), 2.38 (d, 3H, JH,H=1.3 Hz, CH3), 1.83 (m, 2H, H-5), 1.68 (m, 2H, H-2), 1.50 (m, 4H, H-3, H-4) ppm. 13C- RMN (75.5 MHz, CDCl3) δ 165.8 (OC-NH), 162.3 (C-2’), 161.5 (C-7’), 155.4 (C-8a’), Pa e expe imen al 227 152.8 (C-2’’), 152.3 (C-6’’), 147.9 (C-4’), 135.2 (C-4’’), 130.6 (C-3’’), 125.6 (C-5’), 123.7 (C-5’’), 113.6 (C-3’), 112.8 (C-4a’), 112.0 (C-6’), 101.5 (C-8’), 68.5 (C-6), 40.2 (C-1), 29.7 (CH2), 29.0 (CH2), 26.8 (CH2), 25.8 (CH2), 18.8 (CH3) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C22H25N2O4 ([M+H]+): 391.1809, encon ado: 381.1818. 9.8.5.2. N-(6-[(3’,4’-dime il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il)oxi]hexil)nico inamida (34) Se empleó acido nico ínico (10 mg, 0.08 mmol), 185b (47 mg, 0.16 mmol), EDCI (62 mg, 0.33 mmol), HOB (16 mg, 0.12 mmol) y DIPEA (16 mg, 0.12 mmol) ob eniéndose 34 como espuma ama illa cla a (27 mg, 84%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8.96 (dd, 1H, J2’’,6’’=1.7 Hz, H-2’’), 8.71 (dd, 1H, J6’’,4’’=1.8 Hz, J6’’,5’’=4.8 Hz, H-6’’), 8.11 (ddd, 1H, J4’’,5’’=8.0 Hz, J4’’,2’’=1.8 Hz, J4’’,6’’=2.0 Hz, H-4’’), 7.85 (d, 1H, J5’,6’=8.9 Hz, H-5’), 7.38 (m, 1H, H-5’’), 6.82 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=8.9 Hz, H-6’), 6.76 (d, 1H, J8’,6’=2.5 Hz, H-8’), 6.32 (sa, 1H, NH), 3.99 ( , 2H, JH,H=6.3 Hz, H-6), 3.49 (c, 2H, JH,H=7.0 Hz, H-1), 2.35 (s, 3H, CH3), 2.17 (s, 3H, CH3), 1.83 (m, 2H, H- 5), 1.68 (m, 2H, H-2), 1.51 (m, 4H, H-3, H-4) ppm. 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) δ 165.8 (OC-NH), 162.7 (C-2’), 161.1 (C-7’), 153.7 (C-8a’), 152.3 (C-2’’), 147.9 (C-4’), 146.5 (C-6’’), 135.2 (C-4’’), 130.6 (C-3’’), 125.4 (C-5’), 123.7 (C-5’’), 119.0 (C-3’), 114.2 (C-4a’), 112.6 (C-6’), 101.2 (C-8’), 68.4 (C-6), 40.2 (C-1), 29.7 (CH2), 29.0 (CH2), 26.8 (CH2), 25.9 (CH2), 15.2, 13.3 (CH3-3’,CH3-4’) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C23H26N2O4 ([M+H]+): 395.1975, encon ado: 395.1975. 9.8.6. Mé odo gene al pa a la p epa ación de cianoguanidinas con po encial ac i idad inhibi o ia de NAMPT A una solución del ca bamimida o 186a ó 186b (1.0 equi .) en MeCN‒DMF anhid os (3:1, 8mL), se le adicionó la amina co espondien e (1.3 equi .), TEA (2.8 equi .) y DMAP (ca .) y se agi ó a 80 °C bajo a mós e a ine e du an e una noche (~16 h). Al inaliza la eacción, se concen ó a sequedad y el esiduo se pu i icó median e c oma og a ía en columna con una mezcla de AcOE ‒MeOH 80:1→40:1. Pa e expe imen al 228 9.8.6.1. N-Ciano-N’-(6-([4’-me il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il]oxi)hexil)-N’’-pi idin-3- il guanidina (35) Se empleó 185a (57 mg, 0.21 mmol), 186a (38 mg, 0.16 mmol) y TEA (45 mg, 0.45 mmol) ob eniéndose 35 como espuma blanca (50 mg, 75%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8.51 (dd, 1H, J2’’,4’’=2.3 H-2’’), 8.35 (da, 1H, J6’’,5’’=4.7 Hz, H-6’’), 7.67 (da, 1H, J5’,6’=8.1 Hz, H-5’’), 7.44 (d, 1H, J5’’,4’’=8.8 Hz, H-5’), 7.27 (ddd, 1H, J4’’,6’’=4.8 Hz, J5’’,4’’=8.5 Hz, H-4’’), 6.81 (dd, 1H, J6’,5’=8.8 Hz, J6’,8’=2.4 Hz, H-6’), 6.71 (d, 1H, J6’,8’=2.4 Hz, H-8’), 6.06 (ca, 1H, JH,H=1.3 Hz, H-3’), 5.78 (sa, 1H, NH), 3.96 ( , 2H, JH,H=6.3 Hz, H-1), 3.32 (m, 2H, H-6), 2.35 (d, 3H, JH,H=1.3 Hz, CH3), 1.77 (m, 2H, H- 5), 1.59 (m, 2H, H-2), 1.42 (m, 2H, H-3, H-4) ppm. 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) δ 162.3 (C=O),161.6 (C-7’), 158.6 (C=N), 155.3 (C-8a’), 153.1 (C-4’), 147.1 (C-2’’), 145.9 (C-6’’), 133.6 (C-3’’), 132.3 (C-4’’), 125.7 (C-5’), 124.2 (C-5’’) 117.8 (CN), 113.5 (C-4a’), 112.8 (C-6’), 101.4 (C-8’), 68.4 (C-6), 42.3 (C-1), 29.3 (CH2), 28.9 (CH2), 26.5 (CH2), 25.7 (CH2), 18.8 (CH3) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C23H26N5O3 ([M+H]+): 420.2030, encon ado: 420.2028. 9.8.6.2. N-Ciano-N’-(6-([3’,4’-dime il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il]oxi)hexil)-N’’- pi idin-3-ilguanidina (36) Se empleó 185b (44 mg, 0.15 mmol), 186a (28 mg, 0.11 mmol) y TEA (33 mg, 0.33 mmol) ob eniéndose 36 como espuma blanca (30 mg, 59%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8.58 (dd, 1H, J2’’,4’’=2.4 H-2’’), 8.50 (dd, 1H, J6’’,5’’= 8.5 Hz, J6’’,4’’= 1.2 Hz, H-6’’), 7.72 (sa, 1H, NH), 7.66 (da, 1H, J5’,6’=8.5 Hz, H-5’’), 7.47 (d, 1H, J5’’,4’’=8.9 Hz, H-5’), 7.36 (ddd, 1H, J4’’,6’’=4.8 Hz, J5’’,4’’=8.1 Hz, H-4’’), 6.82 (dd, 1H, J6’,5’=8.9 Pa e expe imen al 229 Hz, J6’,8’=2.5 Hz, H-6’), 6.74 (d, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, H-8’), 5.17 (sa, 1H, NH), 3.97 ( , 2H, JH,H=6.3 Hz, H-1), 3.33 (m, 2H, H-6), 2.36 (s, 3H, CH3), 2.17 (s, 3H, CH3), 1.80 (m, 2H, H-5), 1.60 (m, 2H, H-2), 1.50 (m, 2H, H-3) 1.40 (m, 2H, H-4) ppm. 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) δ 162.7 (C=O),161.1 (C-7), 158.7 (C=N), 153.7 (C-8a’), 148.2 (C- 4’), 146.6 (C-2’’), 132.8 (C-6’’), 125.4 (C-3’’), 124.5 (C-4’’), 119.0 (CN), 114.3 (C-4a’), 112.6 (C-6’), 101.2 (C-8’), 68.3 (C-6), 42.3 (C-1), 29.3 (CH2), 29.0 (CH2), 26.6 (CH2), 25.8 (CH2), 15.2, 13.3 (CH3-3’,CH3-4’) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C24H28N5O3 ([M+H]+): 434.2187, encon ado: 434.2195. 9.8.6.3. N-Ciano-N’-(6-([4’-me il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il]oxi)hexil)-N’’-pi idin-4- ilguanidina (37) Se empleó 185a (55 mg, 0.20 mmol), 186b (37 mg, 0.15 mmol) y TEA (44 mg, 0.43 mmol) ob eniéndose 37 como espuma blanca (54 mg, 83%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8.35 (d, 2H, J2’’,3’’= 6.3 Hz, H-2’’, H-6’’), 7.46 (d, 1H, J5’,6’=8.8 Hz, H- 5’), 7.23 (d, 2H, J3’,2’=5.3 Hz, H-3’’, H-5’’), 6.81 (dd, 1H, J6’,8’=2.4 Hz, J6’,5’=8.8 Hz, H- 6’), 6.73 (d, 1H, J6’,8’=2.4 Hz, H-8’), 6.07 (ca, 1H, JH,H=1.0 Hz, H-3’), 3.97 ( , 2H, JH,H=2.4 Hz, H-1), 3.37 ( , 2H, JH,H=2.4 Hz, H-6), 2.36 (d, 3H, JH,H=1.0 Hz, CH3), 1.78 (m, 2H, H-5), 1.62 (m, 2H, H-2), 1.44 (m, 4H, H-3, H-4) ppm. 13C-RMN (75.5 MHz, DMSO-d6) δ 161.8 (C=O),160.2 (C=N), 157.1 (C-7’), 154.8 (C-8a’), 153.4 (C-2’’), 150.2 (C-NH), 145.8 (C-3’’), 126.4 (C-5’), 116.4(C-4’’) 114.6 (C-3’), 113.0 (C-4a’), 112.4 (C-4’), 111.0 (C-6’), 101.1 (C-8’), 68.2 (C-6), 41.7 (C-1), 28.6 (CH2), 28.3 (CH2), 25.9 (CH2), 25.1 (CH2), 18.1 (CH3) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C23H26N5O3 ([M+H]+): 420.2030, encon ado: 420.2027. Pa e expe imen al 230 9.8.6.4. N-Ciano-N’-(6-([3’,4’-dime il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il]oxi)hexil)-N’’- pi idin-4-ilguanidina (38) Se empleó 185b (46 mg, 0.16 mmol), 186b (29 mg, 0.12 mmol) y TEA (35 mg, 0.34 mmol) ob eniéndose 38 como espuma blanca (45 mg, 85%). 1H-RMN (300 MHz, MeOD) δ 8.60 (d, 2H, J2’’,3’’= 6.2 Hz, H-2’’, H-6’’), 7.82 (d, 1H, J5’,6’=8.8 Hz, H- 5’), 7.58 (d, 2H, J3’,2’=5.2 Hz, H-3’’, H-5’’), 7.14 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=8.8 Hz, H- 6’), 7.05 (d, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, H-8’), 4.29 ( , 2H, JH,H=6.3 Hz, H-1), 3.68 ( , 2H, JH,H=7.2 Hz, H-6), 2.65 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 2.10 (m, 2H, H-5), 1.94(m, 2H, H-2), 1.77 (m, 4H, H-3, H-4) ppm. 13C-RMN (75.5 MHz, MeOD) δ 164.0 (C=O),162.0 (C=N), 154.0 (C-7’), 153.4 (C-8a’), 150.0 (C-2’’), 148.4 (C-NH), 147.7 (C-3’’) 126.2 (C-5’), 118.9 (C-3’), 115.8 (C-4’’), 114.7 (C-4a’), 114.4 (C-4), 113.3 (C-6’), 101.5 (C- 8), 68.9 (C-6), 42.9 (C-1), 30.2 (CH2), 29.8 (CH2), 26.9 (CH2), 26.2 (CH2), 15.3, 13.1 (CH3-3’, CH3-4’) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C24H28O3N5 ([M+H]+): 434.2187, encon ado: 434.2186. 9.8.6.5. N-Ciano-N’-(6-([4’- i luo ome il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il]oxi)hexil)-N’’- pi idin-4-ilguanidina (39) Se empleó 185c (53 mg, 0.16 mmol), 186b (29 mg, 0.12 mmol) y TEA (35 mg, 0.34 mmol) ob eniéndose 39 como espuma ama illo cla o (45 mg, 76%). 1H- RMN (500 MHz, CDCl3) δ 8.54 (d, 2H, J2’’,3’’= 5.9 Hz, H-2’’, H-6’’), 7.61 (d, 1H, J5’,6’=9.0 Hz, H-5’), 7.20 (d, 2H, J3’,2’=4.9 Hz, H-3’’, H-5’’), 6.90 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=9.0 Hz, H-6’), 6.83 (d, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, H-8’), 6.60 (s, 1H, H-3’), 5.58 (sa, 1H, NH), 4.04 ( , 2H, JH,H=6.3 Hz, H-1), 3.38 (m, 2H, H-6), 1.84 (m, 2H, H-5), 1.66 (m, Pa e expe imen al 231 2H, H-2), 1.53 (m, 2H, H-3) 1.44 (m, 2H, H-4) ppm. 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) δ 163.1 (C=O),159.7 (C=N), 157.7 (C-7’), 156.5 (C-2’’), 151.4 (C-NH), 142.2 (C-3’’), 141.8 (c, 2JCF= 32.7 Hz, C-4’), 126.5 (C-5’), 121.7 (c, 1JCF= 275.7 Hz, CF3), 117.0 (C-4’’), 116.2 (C-4a'), 113.9 (C-2’), 112.2 (c, 3JCF= 5.7 Hz, C-3’), 107.1 (C-6’) 102.0 (C-8’), 68.9 (C-6), 42.5 (C-1), 29.2 (CH2), 28.9 (CH2), 26.6 (CH2), 25.7 (CH2) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C23H23F3N5O3 ([M+H]+): 474.1748, encon ado: 474.1754. 9.8.7. Mé odo gene al pa a la p epa ación de iou eas con po encial ac i idad inhibi o ia de NAMPT A una solución de 185a, 185b ó 185c (1.0 equi .) en THF (5 mL), se adicionó 3-pi idinil iso iociana o (1.5 equi .) y se e luyó du an e 4 h. Al inaliza la eacción, se concen ó a sequedad y el c udo se pu i icó median e c oma og a ía en columna empleando como eluyen e una mezcla de CH2Cl2‒MeOH (90:1→80:1). 9.8.7.1. N-(6-[(4’-Me il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il)oxi]hexil)-N’-(pi idin-3-il) iou ea (40) Se empleó 185a (34 mg, 0.12 mmol) y 3-pi idinil iso iocinana o (25 mg, 0.19 mmol) ob eniéndose 40 como espuma blanca (14 mg, 27%). 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) δ 8.53 (dd, 1H, J2’’,4’’=2.5 Hz, H-2’’), 8.50 (dd, 1H, J6’’,4’’=1.1 Hz, J6’’,5’’=4.7 Hz, H-6’’), 7.88 (sa, 1H, NH), 7.71 (ddd, 1H, J5’’,6’’=6.8 Hz, H-4’’), 7.48 (d, 1H, J5’,6’=8.8 Hz, H-5’), 7.36 (m, 1H, H-5’’), 6.84 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=8.8 Hz, H-6’), 6.77 (d, 1H, J8’,6’=2.5 Hz, H-8’), 6.16 (sa, 1H, NH), 6.12 (ca, 1H, JH,H=1.2 Hz, H-3’), 4.99 ( , 2H, JH,H=6.5 Hz, H-6), 3.49 (m, 2H, H-1), 2.39 (d, 3H, JH,H=1.2 Hz, CH3), 1.81 (m, 2H, H-5), 1.64 (m, 2H, H-2), 1.51 (m, 2H, H-4), 1.43 (m, 2H, H-3) ppm. 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) δ 181.4 (C=S), 162.3 (C=O), 161.7 (C-7’), 155.4 (C-8a’), 153.0 (C-4’), 147.9 (C-6’’), 146.6 (C-2’’), 132.7 (C-3’’), 125.7 (C-4’’), 124.4 (C-5’), 113.6 (C- Pa e expe imen al 232 5’’), 112.9 (C-3’), 111.9 (C-6’), 101.4 (C-8’), 68.5 (C-6), 45.5 (C-1), 29.0 (CH2), 28.9 (CH2), 26.7 (CH2), 25.5 (CH2), 18.8 (CH3) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C22H26N3O3S ([M+H]+): 412.1689, encon ado: 412.1701. 9.8.7.2. N-(6-[(3’,4’-Dime il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il)oxi]hexil)-N’-(pi idin-3- il) iou ea (41) Se empleó 185b (59 mg, 0.20 mmol) y 3-pi idinil iso iocinana o (42 mg, 0.31 mmol) ob eniéndose 41 como espuma blanca (14.8 mg, 17%). 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8.53 (dd, 1H, J2’’,6’’=2.4 Hz, H-2’’), 8.46 (dd, 1H, J6’’,4’’=1.3 Hz, J6’’,5’’=4.7 Hz, H-6’’), 8.13 (sa, 1H, NH), 7.79 (da, 1H, J5’’,6’’=8.2 Hz, H-5’’), 7.63 (dd, 1H, J5’,6’=8.8 Hz, H-5’), 7.33 (m, 1H, H-5’’), 6.82 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=8.9 Hz, H-6’), 6.77 (d, 1H, J8’,6’=2.5 Hz, H-8’), 6.34 (sa, 1H, NH), 3.97 ( , 2H, JH,H=6.4 Hz, H-6), 3.64 (m, 2H, H-1), 2.36 (s, 3H, CH3), 2.16 (s, 3H, CH3), 1.79 (m, 2H, H-5), 1.65 (m, 2H, H-2), 1.46 (m, 4H, H-4 y H-3) ppm. 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) δ 181.4 (C=S), 162.8 (C=O), 161.1 (C-7’), 153.4 (C-8a’), 146.9 (C-4’), 146.8 (C-6’’), 145.8 (C-2’’), 134.8 (C-3’’), 125.3 (C-4’’), 123.9 (C-5’), 118.6 (C-5’’), 114.0 (C-3’), 112.6 (C-6’), 101.0 (C- 8’), 68.3 (C-6), 45.1 (C-1), 29.8 (C-2), 28.9 (C-5), 26.6 (C-3), 25.7 (C-4), 15.2 (CH3), 13.3 (CH3) ppm. HRESI-MS m/z calcd. pa a C23H28N3O3S ([M+H]+): 426.1846, encon ado: 426.1855. 9.8.7.3. N-(6-[(4’-T i luo ome il-2’-oxo-2’H-c omen-7’-il)oxi]hexil)-N’-(pi idin-3- il) iou ea (42) Pa e expe imen al 233 Se empleó 185c (33 mg, 0.10 mmol) y 3-pi idinil iso iocinana o (20 mg, 0.15 mmol) ob eniéndose 42 como espuma ama illa (19 mg, 40%). 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) δ 8.53 (m, 2H, H-2’’, H-6’’), 7.73 (sa, 1H, NH), 7.65 (da, 1H, J5’’,6’’=5.2 Hz, H- 4’’), 7.38 (m, 1H, H-5’’), 6.90 (dd, 1H, J6’,8’=2.5 Hz, J6’,5’=9.0 Hz, H-6’), 6.77 (d, 1H, J8’,6’=2.5 Hz, H-8’), 6.60 (s, 1H, H-3), 6.01 (sa, 1H, NH), 4.02 ( , 2H, JH,H=6.4 Hz, H- 6), 3.65 (m, 2H, H-1), 1.82 (m, 2H, H-5), 1.64 (m, 2H, H-2), 1.52 (m, 2H, H-4), 1.42 (m, 2H, H-3) ppm. 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) δ 181.4 (C=S), 163.2 (C-7’), 159.7 (C=O), 156.5 (C-8a’), 148.2 (C-6’’), 146.7 (C-2’’), 141.8 (c, 1C, 2JCF= 33.1 Hz, C-4’), 132.9 (C-3’’), 126.5 (C-4’’), 124.6 (C-5’), 121.7 (c, 1C, 1JCF= 272.1 Hz, CF3), 118.5 (C-5’’), 113.9 (C-4a), 112.2 (c, 1C, 3JCF= 5.7 Hz, C-3’), 107.1 (C-6’), 102.0 (C-8’), 68.7 (C-6), 45.6 (C-1), 29.0 (CH2), 28.9 (CH2), 26.7 (CH2), 25.7 (CH2) ppm. HRESI- MS m/z calcd. pa a C22H23F3N3O3S ([M+H]+): 466.1407, encon ado: 466.1419. 234 10. ANEXO Espec oscopía de RMN 241 Espec oscopía de RMN Figu a 10.7. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 4. 242 Espec oscopía de RMN Figu a 10.8. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 4. 243 Espec oscopía de RMN Figu a 10.9. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 5. 244 Espec oscopía de RMN Figu a 10.10. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 5. 245 Espec oscopía de RMN Figu a 10.11. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 6. 246 Espec oscopía de RMN Figu a 10.12. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 6. 247 Espec oscopía de RMN Figu a 10.13. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 7. 248 Espec oscopía de RMN Figu a 10.14. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 7. 249 Espec oscopía de RMN Figu a 10.15. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 8. 250 Espec oscopía de RMN Figu a 10.16. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 8. 257 Espec oscopía de RMN Figu a 10.23. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 12. 258 Espec oscopía de RMN Figu a 10.24. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 12. 259 Espec oscopía de RMN Figu a 10.25. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 13. 260 Espec oscopía de RMN Figu a 10.26. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 13. 261 Espec oscopía de RMN Figu a 10.27. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 14. 262 Espec oscopía de RMN Figu a 10.28. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 14. 263 Espec oscopía de RMN Figu a 10.29. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 15. 264 Espec oscopía de RMN Figu a 10.30. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 15. 265 Espec oscopía de RMN Figu a 10.31. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 16. 266 Espec oscopía de RMN Figu a 10.32. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 16. 273 Espec oscopía de RMN Figu a 10.39. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 20. 274 Espec oscopía de RMN Figu a 10.40. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) del compues o 20. 275 Espec oscopía de RMN Figu a 10.41. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 21. 276 Espec oscopía de RMN Figu a 10.42. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) del compues o 21. 277 Espec oscopía de RMN Figu a 10.43. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 22. 278 Espec oscopía de RMN Figu a 10.44. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 22. 279 Espec oscopía de RMN Figu a 10.45. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 23. 280 Espec oscopía de RMN Figu a 10.46. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 23. 281 Espec oscopía de RMN Figu a 10.47. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 24. 282 Espec oscopía de RMN Figu a 10.48. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 24. 289 Espec oscopía de RMN Figu a 10.55. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 28. 290 Espec oscopía de RMN Figu a 10.56. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 28. 291 Espec oscopía de RMN Figu a 10.57. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 29. 292 Espec oscopía de RMN Figu a 10.58. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 29. 293 Espec oscopía de RMN Figu a 10.59. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 30. 294 Espec oscopía de RMN Figu a 10.60. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 30. 295 Espec oscopía de RMN Figu a 10.61. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CD3OD) del compues o 31. 296 Espec oscopía de RMN Figu a 10.62. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CD3OD) del compues o 31. 297 Espec oscopía de RMN Figu a 10.63. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 32. 298 Espec oscopía de RMN Figu a 10.64. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 32. 305 Espec oscopía de RMN Figu a 10.71. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 36. 306 Espec oscopía de RMN Figu a 10.72. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) del compues o 36. 307 Espec oscopía de RMN Figu a 10.73. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 37. 308 Espec oscopía de RMN Figu a 10.74. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, DMSO-d6) del compues o 37. 309 Espec oscopía de RMN Figu a 10.75. Espec o de 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) del compues o 38. 310 Espec oscopía de RMN Figu a 10.76. Espec o de 13C-RMN (75.5 MHz, CDCl3) del compues o 38. 311 Espec oscopía de RMN Figu a 10.77. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 39. 312 Espec oscopía de RMN Figu a 10.78. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 39. 313 Espec oscopía de RMN Figu a 10.79. Espec o de 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) del compues o 40. 314 Espec oscopía de RMN Figu a 10.80. Espec o de 13C-RMN (125.7 MHz, CDCl3) del compues o 40.