Cepa de trichoderma útil para el tratamiento y/o prevención de infecciones provocadas por microorganismos fitopatógenos

ES 2 391 324 B1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 21 Núme o de publicación: 2 391 324 Núme o de solici ud: 201130606 51 In . CI.: C12N 1/14 (2006.01) A01N 63/04 (2006.01) (2006.01) C12R 1/885 12 PATENTE DE INVENCIÓN B1 54 Tí ulo: CEPA DE TRICHODERMA ÚTIL PARA EL TRATAMIENTO Y/O PREVENCIÓN DE INFECCIONES PROVOCADAS POR MICROORGANISMOS FITOPATÓGENOS 73 Ti ula /es: UNIVERSIDAD DE JAÉN (20.0%) CAMPUS LAS LAGUNILLAS, S/N - EDIFICIO B1 23071 JAÉN (Jaén) ES; NUTESCA, S.L. (20.0%); FUNDACIÓN CITOLIVA (20.0%); CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS (CSIC) (20.0%) y UNIVERSIDAD DE SEVILLA (20.0%) 72 In en o /es: BARROSO ALBARRACÍN, Juan Bau is a; CARRERAS EGAÑA, Al onso; VALDERRAMA RODRÍGUEZ, Raquel; CHAKI, Mouni a; BEGARA MORALES, Juan Ca los; MERCADO BLANCO, Jesús; PÉREZ ARTÉS, Enca nación; RINCÓN ROMERO, Ana Ma ía; CARBALLO CODÓN, An onio; BENÍTEZ FERNÁNDEZ, Tahía; VALVERDE CORREDOR, An onio; GUEVARA PEZOA, Felipe; RODRÍGUEZ PALERO, Ma ía Jesús; DUEÑAS SÁNCHEZ, Ra ael; FIERRO RISCO, Jesús y LÓPEZ GARCÍA , An onio Alejand o 74 Agen e/Rep esen an e: PONS ARIÑO, Ángel 22 Fecha de p esen ación: 15.04.2011 43 Fecha de publicación de la solici ud: 23.11.2012 Fecha de la concesión: 04.04.2014 45 Fecha de publicación de la concesión: 11.04.2014 Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP. A iso: ES 2 391 324 B1 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 21 Núme o de publicación: 2 391 324 Núme o de solici ud: 201130606 57 Resumen: Cepa de ichode ma ú il pa a el a amien o y/o p e ención de in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos i opa ógenos. La in ención se e ie e a una nue a cepa de hongos pe enecien e a la especie T ichode ma ha zianum esis en e a cob e capaz de inhibi el c ecimien o de o os mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos. Po ello, se p opone su uso como e ilizan e y pa a la p e ención y/o a amien o de in ecciones de plan as y/o suelos p o ocadas po mic oo ganismos i opa ógenos, p e e iblemen e po los pa o ipos de olian e o no de olian e de Ve icillium dahliae, agen e causan e de la e icilosis del oli o. Además, debido a su capacidad de esis encia a cob e, la cepa de la in ención puede se u ilizada en un mé odo de p e ención y/o a amien o de in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos en combinación con o os agen es an i úngicos. Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP. A iso: 2 DESCRIPCIÓN Cepa de T ichode ma ú il pa a el a amien o y/o p e ención de in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos i opa ógenos 5 La p esen e in ención se encuad a en el campo de la ag icul u a, la mic obiología y los p oduc os i osani a ios, y especí icamen e se e ie e a una nue a cepa de hongos pe enecien e a la especie T ichode ma ha zianum esis en e a cob e capaz de inhibi el c ecimien o de o os mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos. La in ención ambién se e ie e a una composición que comp ende dicha cepa, así como al uso de es a cepa y de es a composición como e ilizan es y pa a la 10 p e ención y/o a amien o de in ecciones de plan as y/o suelos p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos. ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR 15 La e icilosis o ma chi ez ascula es una en e medad causada po el hongo hi omice o Ve icillium dahliae Kleb. que puede a aca a una amplia gama de cul i os, an o leñosos como he báceos, en e ellos u ales, legumb es, ho ícolas, o es ales, o namen ales y malas hie bas. Así, los a aques de e icilosis cons i uyen un se io p oblema en di e sos cul i os como alcacho a, algodón, melón, oma e, pa a a u oli o. 20 Ac ualmen e, en cul i os como el oli o, la e icilosis es á conside ada como uno de los p oblemas i opa ológicos más g a e y amenazado , causan e de impo an es pé didas económicas. La e icilosis del oli o (VO) es una en e medad en p eocupan e expansión en países donde el oli a es un cul i o ele an e, a ec ando se e amen e an o a oli a es adul os como a las plan aciones jó enes, posiblemen e 25 como consecuencia, en e o as, del es ablecimien o de plan aciones in ensi as en suelos in es ados po el pa ógeno y/o de la u ilización de ma e ial de plan ación in ec ado. Los aislados de Ve icillium dahliae que in ec an oli os pueden se di e enciados po su i ulencia sob e la plan a y clasi ica se así en los pa o ipos de olian e (D) o no de olian e (ND) po su capacidad o no de o igina la caída gene alizada de las hojas e des de amos in ec ados, espec i amen e. La VO puede llega a p oduci la mue e de 30 á boles en e os o la seca de amas ocasionando un e aso en el c ecimien o y me mas de p oducción. En gene al, las e icilosis son en e medades de di ícil con ol, a lo cual con ibuyen ac o es ales como la capacidad del pa ógeno de sob e i i p olongadamen e en el suelo (has a 15 años), la amplia gama de plan as suscep ibles a la in ección po és e, la di icul ad de llega has a el hongo, ya que se encuen a en 35 el xilema de la plan a y en e ado en el suelo (a en e 10 y 30 cm de p o undidad), y la ine icacia de los a amien os químicos has a aho a explo ados pa a comba i al hongo du an e su ase pa así ica en el xilema. Como sucede con o as e icilosis de plan as leñosas, el con ol e icien e de la VO equie e la aplicación de una es a egia de manejo in eg ado de la en e medad. 40 Las medidas de con ol de las en e medades úngicas del oli o han sido en muchos casos indi ec as (eliminación de plan as en e mas, u ilización de abonos po ásicos, e c.). No obs an e, desde la pe spec i a de una ag icul u a sos enible y en una es a egia de con ol in eg ado de las en e medades, una de las posibles medidas de con ol a aplica es el uso de an agonis as mic obianos con po encial como agen es de con ol biológico (ACBs) de la en e medad. El con ol biológico de los o ganismos 45 i opa ógenos cons i uye una al e na i a más a ac i a que la de los p oduc os químicos, ya que es os ACBs son menos pe judiciales pa a el medio ambien e que los compues os químicos habi ualmen e u ilizados. Sin emba go, el uso de dichos ACBs se ha is o limi ado po di e en es causas, en e ellas, una inadecuada iden i icación de los mismos. 50 Algunas cepas del hongo ilamen oso T ichode ma, como po ejemplo cepas pe enecien es a la especie T ichode ma ha zianum, han sido u ilizadas como agen es de con ol biológico con a hongos pa ógenos de plan as, debido a su capacidad p o ec o a an o con a hongos del suelo que in ec an las aíces como con a los que p oducen en e medades en las pa es aé eas. Algunas de es as cepas ienen ambién un e ec o e ilizan e sob e las plan as, es imulando su igo , c ecimien o y mecanismos de de ensa. 55 Las cepas de T ichode ma emplean dis in os mecanismos pa a a aca a los hongos. Se han desc i o elaciones de micopa asi ismo en e T ichode ma ha zianum y Rhizoc onia solani, Scle o ium ol sii o Py hium, donde las enzimas lí icas juegan un papel p imo dial, y elaciones de compe ición en e T ichode ma ha zianum y Bo y is cine ea (en id) o Fusa ium (en algodón). Así, cepas de T ichode ma 60 ha zianum, T ichode ma i ens y T ichode ma i ide (He mosa e al., 2000, Applied and En i onmen al Mic obiology, 66:5, pp. 1890–1898), y o as de T ichode ma aspe ellum, T ichode ma a o i ide y T ichode ma inhama um (ES2200602 A1), han sido u ilizadas en combinación como ACBs en composiciones con a di e en es hongos pa ógenos de plan as. Un ejemplo de composición siné gica de es e ipo es aquella que comp ende di e en es cepas de T ichode ma ha zianum (aquellas con núme o de 65 acceso en la colección NRRL 30595, 30596 y 30597) que posee capacidad con olado a de hongos   ES 2 391 324 B1 3 i opa ógenos, es ole an e al es és abió ico, es imula el c ecimien o de la plan a así como su con enido en enoles e induce esis encia sis émica a en e medades causadas po o ganismos i opa ógenos (WO2007110686 A2). En el caso del pa ógeno Ve icillium dahliae, se han ca ac e izado una amplia gama de an agonis as del 5 mismo, en e los que se encuen an di e en es cepas de T ichode ma (Be g e al., 2005, Applied and En i onmen al Mic obiology, 71:8, pp. 4203–4213). De hecho, uno de los mé odos p opues os pa a el con ol biológico de es e hongo i opa ógeno en el oli o se basa en la aplicación de espo as de T ichode ma ha zianum, lo que además a o ece la bio e ilización (WO2009083819 A1). 10 Los c i e ios a u iliza pa a la elección de las cepas de T ichode ma adecuadas pa a su empleo como ACBs p esen an como p incipales ca ac e ís icas: 1) p oducción de enzimas lí icos y 2) buen desa ollo en condiciones de compe ición. Es o úl imo ambién depende de: 3) las condiciones de p oducción y p epa ación del inóculo y de 4) ac o es ambien ales, incluyendo la p esencia de ungicidas y/o pes icidas. En es e sen ido, se ha desa ollado una cepa mu an e de T ichode ma ha zianum CECT 2413, la cepa 15 T ichode ma ha zianum PF1, que posee una capacidad de p oducción de enzimas lí icos supe io a la de la cepa sal aje, y se ha ensayado su e ec o en el c ecimien o de agen es i opa ógenos como Rhizoc onia solani o Bo y is cine ea, demos ándose que e ec i amen e su ac i idad an i úngica se encuen a inc emen ada con espec o a la de la cepa de la que p ocede (Rey e al., 2001, Applied Mic obiology and Bio echnology, 55, pp. 604–608). 20 En cuan o a la mejo a de la capacidad de compe ición de las cepas en el en o no, és e es un p oceso complejo pe o en algunas ap oximaciones expe imen ales se ha in en ado la ob ención de cepas mejo adas, más adap ables al en o no (aumen o de los mecanismos de esis encia a la sequedad, a la p esencia de me ales, a la p oducción de enzimas o sus ancias óxicas po pa e de los pa ógenos, 25 capacidad de coloniza suelos con pHs ex emos, e c.). Sob e odo, se ían de in e és cepas esis en es a ungicidas, lo que pe mi i ía una mejo adap ación a un en o no a ado con es os compues os y la posibilidad de un a amien o in eg ado que combine pequeñas dosis de ungicidas a las que los pa ógenos sean sensibles combinadas con las cepas de T ichode ma esis en es. El e ec o combinado pe mi i ía un mejo con ol y una mayo p o ección que el simple a amien o químico o biológico. Po o o 30 lado, la compe encia de las cepas de T ichode ma en el suelo pod ía op imiza se aplicando de o ma óp ima el agen e de biocon ol. En esumen, se ía deseable dispone de cepas de T ichode ma que p opo cionasen un e ec o palia i o en e a la in ección po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos, conc e amen e en e a 35 los pa o ipos ND y D de Ve icillium dahliae en a iedades de plan as suscep ibles de se in ec adas po el mismo, como po ejemplo, el oli o. Pa a ello, es undamen al que dichas cepas p esen en una mejo capacidad de adap ación al medio, de mane a que así puedan a on a con éxi o la compe encia biológica que iene luga en el en o no a a a . Además, se ía in e esan e que es as cepas pe mi ie an lle a a cabo un a amien o combinado con ungicidas de na u aleza química. 40 DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La p esen e in ención p opo ciona una nue a cepa de hongos, pe enecien e a la especie T ichode ma ha zianum, capaz de inhibi el c ecimien o de o os mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, 45 i opa ógenos. Po ello, se p opone su uso como agen e de con ol biológico en e a los mismos, p e e iblemen e en e a Ve icillium, más p e e iblemen e en e a los pa o ipos de olian e y no de olian e de Ve icillium dahliae, agen e causan e de la e icilosis. Los ejemplos de la p esen e in ención demues an que es a nue a cepa p esen a la capacidad de inhibi 50 el c ecimien o del hongo i opa ógeno Ve icillium dahliae en aislados del pa ógeno an o sensibles como esis en es a hongos del géne o T ichode ma. Po an o, la cepa desc i a en la p esen e in ención posee un ele ado alo palia i o en e a la in ección de plan as y/o suelos p o ocada po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos, más p e e iblemen e po Ve icillium, aun más p e e iblemen e po Ve icillium dahliae, siendo aplicable an o en condiciones de i e o como de campo. 55 Además, la cepa desc i a en la p esen e in ención es esis en e a cob e, po lo que p esen a la en aja de que, en compa ación con o as cepas de su mismo géne o y especie, posee una mejo capacidad de adap ación a medios ca ac e izados po la p esencia de con aminan es me álicos. Es os con aminan es me álicos son empleados comúnmen e como an i úngicos y, en e ellos, el cob e es ampliamen e u ilizado 60 en el sec o del oli a . Así, la esis encia a cob e de dicha cepa pe mi e su uso de mane a combinada con agen es an i úngicos químicos, lo que de i a en un mejo con ol y una mayo p o ección de la plan a y/o el suelo en e a mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos en compa ación con el simple a amien o químico o biológico. 65  ES 2 391 324 B1 4 Po odo ello, un aspec o de la in ención se e ie e a la cepa de hongos de la especie T ichode ma ha zianum deposi ada en la Colección Española de Cul i os Tipo (CECT) con el núme o de depósi o 20756, de aho a en adelan e “cepa de la in ención” o “RCU2”. Dicha cepa ue deposi ada en la CECT el 15 de oc ub e de 2009. Se a a de un mu an e espon áneo (no manipulado gené icamen e) esis en e a cob e, conc e amen e, aunque sin limi a nos, a 4 mM de Cu2SO4, de i ado de T ichode ma ha zianum 5 CECT 2413. Es a cepa de la in ención compa e sus ca ac e ís icas eno ípicas con la cepa de la que p ocede. Es capaz de c ece in i o en, po ejemplo, aunque sin limi a nos, los medios de cul i o CECT 54/68, a una empe a u a de incubación de, po ejemplo, aunque sin limi a nos, 25ºC, du an e, po ejemplo, aunque sin limi a nos, 5 días y en condiciones ae obias. 10 En una ealización p e e ida, la cepa de la in ención se encuen a en es ado espo ulado. Se en iende po “es ado espo ulado” el es adio del hongo en el que és e se encuen a en o ma de espo a. El é mino “espo a” se e ie e a la célula ep oduc o a p oducida en los espo angios de los hongos, ya sea asexualmen e o como esul ado de un p oceso de ep oducción sexual, gene almen e haploide y unicelula , que al mismo iempo pe mi e la dispe sión y la supe i encia po la go iempo (do mancia) en 15 condiciones ad e sas. La espo a p oduce un nue o o ganismo al di idi se po mi osis sin usión con o a célula, p oduciendo un game o i o plu icelula . Cuando la espo a ge mina su ge de ella una p ime a hi a, po cuya ex ensión y ami icación se a cons i uyendo un micelio. O o aspec o de la in ención se e ie e a una composición, de aho a en adelan e “composición de la 20 in ención”, que comp ende un elemen o seleccionado de la lis a: a. cepa de la in ención, p e e iblemen e en es ado espo ulado, b. p oduc os del me abolismo de la cepa de la in ención, o una combinación de (a) y de (b). 25 Tal y como se u iliza en la p esen e in ención, el é mino “p oduc os del me abolismo” o “me aboli os” se e ie e a cualquie molécula exc e ada po la cepa de la in ención al medio, p e e iblemen e cuando dicha cepa se encuen a c eciendo en p esencia de medio de cul i o PDA (Aga Pa a a-Dex osa). Ejemplos de es os me aboli os son, aunque sin limi a nos, aminoácidos, nucleó idos, i aminas, ácidos o gánicos, 30 alcoholes, como los polioles, azúca es, como los polisacá idos, an ibió icos, enzimas, ales como po ejemplo, aunque sin limi a nos, enzimas hid olí icas de pa ed celula , e c. En los ejemplos de la p esen e in ención se demues a la e icacia, no solo de la cepa de la in ención y de sus p oduc os del me abolismo, sino ambién de o as cepas de T ichode ma, en conc e o de T ichode ma 35 a o i ide CECT 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 y T ichode ma ha zianum PF1, y de los p oduc os del me abolismo de és as, pa a inhibi el c ecimien o de mic oo ganismos i opa ógenos, como po ejemplo, aunque sin limi a nos, de Ve icillium dahliae. Po ello, en una ealización p e e ida de es e aspec o de la in ención, la composición de la in ención además comp ende al menos una cepa de T ichode ma seleccionada de la lis a: T ichode ma a o i ide CECT 40 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 o T ichode ma ha zianum PF1. En los ejemplos de la p esen e in ención ambién se demues a la e icacia de la composición de la in ención que comp ende las cinco cepas de T ichode ma: T ichode ma a o i ide IMI 206040, 45 T ichode ma a o i ide CECT 20755, T ichode ma ha zianum CECT 2413, T ichode ma ha zianum CECT 20756 y T ichode ma ha zianum PF1, pa a inhibi el c ecimien o de mic oo ganismos i opa ógenos, como po ejemplo, aunque sin limi a nos, de Ve icillium dahliae. Po ello, en una ealización más p e e ida, la composición de la in ención comp ende un elemen o seleccionado de la lis a: 50 a. cepa de la in ención, p e e iblemen e en es ado espo ulado, b. p oduc os del me abolismo de la cepa de la in ención, o una combinación de (a) y de (b), y además las cepas de T ichode ma: T ichode ma a o i ide CECT 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 y T ichode ma ha zianum PF1. 55 En una ealización aun más p e e ida, la composición de la in ención comp ende la cepa de la in ención y las cepas de T ichode ma: T ichode ma a o i ide CECT 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 y T ichode ma ha zianum PF1. P e e iblemen e, la p opo ción de cada cepa en la composición de la in ención a ía en e un 10% y un 30% del olumen inal de la 60 composición (has a suma un o al de 100% con las cinco cepas); más p e e iblemen e la p opo ción de cada cepa en la composición de la in ención es de un 20% del olumen inal de dicha composición, es deci , las cinco cepas se encuen an en la composición de la in ención en la misma p opo ción (1:1:1:1:1).  ES 2 391 324 B1 5 En o a ealización p e e ida las cepas de T ichode ma T ichode ma a o i ide CECT 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 y/o T ichode ma ha zianum PF1 se encuen an en es ado espo ulado en la composición de la in ención. En o a ealización p e e ida la composición de la in ención además comp ende p oduc os del 5 me abolismo de al menos una cepa de T ichode ma seleccionada de la lis a: T ichode ma a o i ide CECT 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 o T ichode ma ha zianum PF1. Las cepas T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413, y los mu an es 10 T ichode ma a o i ide CECT 20755 y T ichode ma ha zianum PF1, se encuen an accesibles pa a un expe o en la ma e ia. Las cepas T ichode ma ha zianum CECT 2413 y T ichode ma a o i ide IMI 206040 son iden i icables an o po sus ca ac e ís icas mo ológicas, las cuales se pueden encon a desc i as en bases de da os pa a T ichode ma ales como po ejemplo, pe o sin limi a nos, la ecogida en h p://www.is h.in o, como po cie os ma cado es molecula es, como po ejemplo, aunque sin limi a nos, 15 la secuencia de los espaciado es in e nos de los genes de RNA, ITS1 e ITS2. El mu an e de i ado de T ichode ma ha zianum CECT 2413, T ichode ma ha zianum PF1, y el mu an e de i ado de T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma a o i ide CECT 20755 o RCU1, es e úl imo esis en e a cob e, compa en las ca ac e ís icas mo ológicas de las cepas de las que p oceden. P e e iblemen e, la composición de la in ención además comp ende elemen os necesa ios pa a el 20 c ecimien o y desa ollo de la cepa de la in ención y de las cepas de T ichode ma mencionadas en el pá a o an e io . Así, dicha composición puede comp ende aunque sin limi a nos, uen es de ca bono, sales mine ales y/o nu ien es o gánicos e ino gánicos. La composición de la in ención puede p esen a se en cualquie o ma de p esen ación adecuada pa a su 25 adminis ación o aplicación, po ejemplo, aunque sin limi a se, en o ma sólida o líquida. Las o mas de p esen ación líquidas son adecuadas pa a su pul e ización sob e el suelo, la plan a o el ma e ial ege al, o bien pa a c ea una solución en la que se sume gen las plan as o el ma e ial ege al, po lo que p e e iblemen e la composición de la in ención se p esen a en o ma líquida. 30 Los ejemplos de la p esen e in ención demues an que cuando se inoculan mic oo ganismos i opa ógenos ales como po ejemplo, aunque sin limi a nos, Ve icillium dahliae, en un medio de cul i o donde p e iamen e ha c ecido la cepa de la in ención y exc e ado oda clase de me aboli os an es de se e i ada de dicho medio, exis e inhibición del c ecimien o del mic oo ganismo i opa ógeno. También demues an dicha inhibición cuando el pa ógeno se inocula en un medio de cul i o donde p e iamen e 35 han c ecido las cepas de T ichode ma T ichode ma a o i ide CECT 20755, T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma ha zianum CECT 2413 y/o T ichode ma ha zianum PF1 y exc e ado oda clase de me aboli os an es de se e i adas de dicho medio. Así, los in en o es ponen de mani ies o que an o el micelio de la cepa de la in ención y de es as o as cepas de T ichode ma, como los me aboli os exc e ados al medio po las mismas, son capaces de inhibi el c ecimien o de mic oo ganismos, 40 p e e iblemen e hongos, i opa ógenos ales como po ejemplo, aunque sin limi a nos, Ve icillium dahliae. Po ello, o o aspec o de la in ención se e ie e al uso de la cepa de la in ención, p e e iblemen e en es ado espo ulado, y/o de los p oduc os de su me abolismo, o de la composición de la in ención, pa a la p e ención y/o a amien o de in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos i opa ógenos. 45 Una ez exc e ados, los p oduc os del me abolismo de la cepa de la in ención pueden se aislados y aplicados, solos o en combinación con dicha cepa, di ec amen e a la plan a, an o a las aíces como a la pa e aé ea, al ma e ial ege al, incluyendo pe o sin limi a nos semillas, hojas o u os, o al suelo. Cuando los p oduc os del me abolismo son adminis ados en combinación con la cepa de la in ención, el modo de adminis ación puede se simul áneo o secuencial. O bien, la cepa de la in ención puede se adminis ada 50 sola an o a las aíces como a la pa e aé ea de la plan a, al ma e ial ege al, incluyendo pe o sin limi a nos semillas, hojas o u os, o al suelo, de mane a que p oduzca dichos p oduc os del me abolismo in si u. El é mino “ a amien o”, al como se en iende en la p esen e in ención, se e ie e a comba i los e ec os 55 p o ocados como consecuencia de una in ección causada po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos, más p e e iblemen e po Ve icillium, aun más p e e iblemen e po Ve icillium dahliae, en una plan a, en un cul i o o en un suelo. Es e é mino incluye: (i) inhibi la in ección, es deci , de ene su desa ollo; (ii) ali ia los e ec os p o ocados po la in ección, es deci , causa su eg esión; 60 (iii) es abiliza los e ec os p o ocados po la in ección. El é mino “p e ención”, al como se en iende en la p esen e in ención, consis e en e i a la apa ición de daños cuya causa sean las in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos, más p e e iblemen e po Ve icillium, aun más p e e iblemen e po Ve icillium dahliae; es 65 deci , e i a que se p oduzca la in ección en una plan a, en un cul i o o en un suelo, en pa icula , cuando   ES 2 391 324 B1 6 dicha plan a, cul i o o suelo ienen p edisposición a la in ección pe o aún no se ha diagnos icado que la engan. Se en iende po “in ección” la colonización de un o ganismo huésped, po ejemplo, aunque sin limi a nos, una plan a, po agen es pa ógenos, los cuales en el con ex o de la p esen e in ención consis en en 5 mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos, que in aden el o ganismo y se mul iplican en él, p oduciendo sus ancias óxicas. El o ganismo colonizado es pe judicial pa a el uncionamien o no mal y la supe i encia del huésped, po lo que se cali ica al agen e como pa ógeno o, en el con ex o de la p esen e in ención, como i opa ógeno. Den o del é mino “in ección” se incluyen an o las in ecciones localizadas que a ec an a una única á ea del o ganismo huésped, como las in ecciones gene alizadas que 10 a ec an a odo el o ganismo; y an o las in ecciones sin omá icas como asin omá icas. Asimismo, den o de dicho é mino se incluyen ambién in ecciones de suelos p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos. En la p esen e in ención se en iende po “mic oo ganismos i opa ógenos” aquellos mic oo ganismos 15 pe enecien es al eino Fungi o a la clase Oomyce es, capaces de p o oca in ecciones, y en ocasiones en e medades, en las plan as. Ejemplos de mic oo ganismos i opa ógenos pe enecien es a la clase Oomyce es son, aunque sin limi a nos, aquellos pe enecien es a los géne os Phy oph ho a, Plasmopa a, Pseudope onospo a o Py hium. Los “hongos i opa ógenos” son aquellos o ganismos pe enecien es al eino Fungi capaces de p o oca in ecciones, y en ocasiones en e medades, en las plan as po medio de 20 al e aciones en su me abolismo, median e po ejemplo, aunque sin limi a nos, la sec eción de enzimas, oxinas, i o egulado es y o as sus ancias y, además, median e la abso ción de nu ien es de la plan a pa a su p opio c ecimien o. Se engloban den o de es e é mino los hongos i opa ógenos que causan en e medades po c ece y mul iplica se en el xilema y/o loema de la plan a y, po ende, po bloquea el anspo e de agua y nu ien es desde la aíz hacia las hojas o el lujo de sa ia desde las hojas hacia el 25 es o de la plan a. Algunos ejemplos de hongos i opa ógenos son, aunque sin limi a nos, aquellos pe enecien es a los géne os A milla ia, Bo y is, Chond os e eum, Colle o ichum, Cladospo ium, Fusa ium, Monilia, Nec ia, Rhizoc onia, Rhizopus, Scle o inia, Scle o ium o Ve icillium. La p esencia de mic oo ganismos i opa ógenos en las plan as o en el suelo puede de ec a se median e 30 écnicas de biología molecula conocidas en el es ado de la écnica pa a lle a a cabo dicha iden i icación, como po ejemplo, ampli icando median e, po ejemplo, aunque sin limi a nos, eacción en cadena de la polime asa (PCR), eacción en cadena de la polime asa en iempo eal (RT-PCR) o Q-PCR, una egión del genoma del mic oo ganismo i opa ógeno p esen e en una mues a aislada del suelo o de la plan a y compa ando el p oduc o de ampli icación ob enido con las secuencias génicas disponibles en bases de 35 da os ales como, po ejemplo, pe o sin limi a nos, GenBank, especí icas de o ganismo pa a de e mina el ipo de pa ógeno p esen e en la mues a. La p esencia de mic oo ganismos i opa ógenos en las plan as o en el suelo ambién pod ía lle a se a cabo median e écnicas inmunohis oquímicas, como po ejemplo, pe o sin limi a nos, ELISA; o bien median e el c ecimien o in i o de los o ganismos con enidos en la mues a aislada de suelo o de la plan a en medios de cul i o selec i os especí icos de pa ógeno 40 conocidos en el es ado de la écnica. Algunas cepas pe enecien es al géne o T ichode ma son capaces de eje ce una inhibición del c ecimien o no solo sob e un único ipo de mic oo ganismo i opa ógeno sino sob e una amplia a iedad de ellos, como es el caso de cepas pe enecien es a las especies T ichode ma a o i ide o T ichode ma 45 ha zianum. Po ello, aunque los ejemplos de la p esen e in ención demues en el e ec o de la cepa de la in ención y de la composición de la in ención, así como de las cepas que la componen po sepa ado, en la inhibición del c ecimien o del hongo i opa ógeno Ve icillium dahliae, dicha cepa y composición ambién son de u ilidad en la p e ención y/o a amien o de in ecciones p o ocadas po o os mic oo ganismos i opa ógenos suscep ibles de se con olados po cepas pe enecien es a las especies T ichode ma 50 a o i ide o T ichode ma ha zianum. Po an o, en una ealización p e e ida de es e aspec o de la in ención el mic oo ganismo i opa ógeno pe enece a un géne o seleccionado de la lis a que comp ende: A milla ia, Bo y is, Chond os e eum, Colle o ichum, Cladospo ium, Fusa ium, Monilia, Nec ia, Phy oph ho a, Plasmopa a, 55 Pseudope onospo a, Py hium, Rhizoc onia, Rhizopus, Scle o inia, Scle o ium o Ve icillium. En una ealización más p e e ida, el mic oo ganismo i opa ógeno pe enece al géne o Ve icillium. En una ealización aun más p e e ida, el mic oo ganismo i opa ógeno es Ve icillium dahliae. El géne o de hongos Ve icillium pe enece a la di isión o ilo Ascomico a, amilia Plec osphae ellaceae e 60 incluye di e sos g upos que comp enden pa ási os y sap ó i os de plan as, insec os, nemá odos, hue os de moluscos y o os hongos, po lo que el géne o iene un amplio ango de g upos axonómicos, con eniendo unas 51 especies, en e las que se encuen an, aunque sin limi a nos, Ve icillium dahliae, Ve icillium alboa um, Ve icillium nubilium, Ve icillium nig escens o Ve icillium ico pus. Las especies de es e géne o son las causan es de las en e medades conocidas como e icilosis. 65  ES 2 391 324 B1 7 El mé odo más sencillo pa a iden i ica a pa ógenos del géne o Ve icillium es, po ejemplo, aunque sin limi a nos, el cul i o en un medio selec i o, como po ejemplo, pe o sin limi a nos, en medio PDA (Aga Pa a a-Dex osa) a empe a u a ambien e, donde las colonias c ecen de colo blanco y el colo del ondo de las placas es en e incolo o y ama illen o. Algunos cul i os pueden ene un pe il bajo con bo des edondeados y o mando cu as. Las especies Ve icillium alboa um, Ve icillium dahliae y Ve icillium 5 ico pus p esen an colonias pos adas y de un colo ama illo ana anjado en medio de cul i o PDA, la especie Ve icillium nubilium o ma clamidospo as globosas y Ve icillium nig escens o ma clamidospo as abundan es. La especie Ve icillium dahliae se ca ac e iza po la p oducción de conidió o os con iálidas dispues as en 10 e icilo y la o mación de nume osos mic oescle ocios, es uc u as de esis encia. El hongo se puede encon a en el suelo en o ma de micelio y conidios, o en o ma de mic oescle ocios. Algunos cul i os in ec ados po es e pa ógeno pueden se asin omá icos pe o en gene al se dis inguen dos ipos de sínd omes de i ados de es a in ección que o igina la en e medad denominada “ e icilosis”: apoplejía y decaimien o len o. Los sín omas iniciales del p ime sínd ome consis en en la pé dida de colo ación de las 15 hojas, más a de se p oduce una seca ápida de b o es y amas que suele comenza desde la pun a y que puede ocasiona la mue e del á bol. La co eza de las amas a ec adas puede oma colo mo ado o pú pu a y a eces ambién se obse a una colo ación ma ón en los ejidos del xilema. Los sín omas más ípicos del decaimien o len o son la nec osis y momi icado de las in lo escencias mien as que las hojas gene almen e se desp enden, excep o las del ex emo. En el con ex o de la p esen e in ención, se 20 incluyen den o de Ve icillium dahliae an o su pa o ipo de olian e (D) como su pa o ipo no de olian e (ND). El pa o ipo D de Ve icillium dahliae se ca ac e iza po p o oca la caída gene alizada de las hojas e des de amos in ec ados, al con a io que el pa o ipo ND. El diagnós ico de la in ección po uno u o o pa o ipo de V. dahliae pod ía lle a se a cabo median e écnicas de isualización eno ípica en base a la ca ac e ís ica sin omá ica an e io men e mencionada, o bien median e écnicas molecula es de 25 ca ac e ización de ambos pa o ipos, como po ejemplo, pe o sin limi a nos, median e PCR (Me cado- Blanco e al., 2002, Oli ae: e is a o icial del Consejo Oleícola In e nacional, 94:41-46). Ejemplos de plan as suscep ibles a la in ección po Ve icillium dahliae son, pe o sin limi a nos, alcacho a, algodón, melón, oma e, pa a a u oli o. Po an o, en o a ealización p e e ida, la plan a a ec ada po el 30 mic oo ganismo i opa ógeno se selecciona de la lis a que comp ende: alcacho a, algodón, melón, oma e, pa a a u oli o. En una ealización más p e e ida, la plan a es el oli o. Cuando Ve icillium dahliae in ec a al oli o p o oca lo que se denomina “ e icilosis del oli o o VO”. La p esen e in ención se e ie e an o a las a iedades de oli o muy suscep ibles al pa o ipo D, como po ejemplo, aunque sin limi a nos, Picual o A bequina, como a las a iedades suscep ibles al pa o ipo ND. 35 Como se ha explicado an e io men e, la cepa de la in ención es esis en e a cob e, me al u ilizado como ungicida p incipalmen e en el sec o del oli a . Po an o, es a capacidad de la cepa de la in ención pe mi e su uso en un mé odo de a amien o y/o p e ención de in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos de mane a combinada con o os agen es 40 an i úngicos. Po ello, o a ealización p e e ida se e ie e al uso de la cepa de la in ención, y/o de los p oduc os de su me abolismo, o de la composición de la in ención, en combinación con o os agen es an i úngicos. El é mino “agen e an i úngico” se e ie e a aquellas sus ancias, an o de na u aleza biológica como 45 química, que se emplean pa a inhibi el c ecimien o ( ungis á icos) o pa a ma a ( ungicidas) a los hongos capaces de p o oca in ecciones en las plan as y/o suelos, p e e iblemen e a Ve icillium, más p e e iblemen e a Ve icillium dahliae. El é mino se e ie e an o a agen es an i úngicos p o ec o es o de con ac o, que se aplican an es de que se p oduzca la in ección, como a agen es an i úngicos e adicado es o sis emá icos, que se aplican una ez p oducida la in ección, así como a agen es 50 an i úngicos de uso en e es imien os de semillas, de uso pa a desin ección del suelo, pa a su aplicación sob e las plan as, e c. Un ejemplo de agen e an i úngico de na u aleza biológica son los mic oo ganismos que ac úan como agen es de con ol biológico de hongos i opa ógenos, como po ejemplo, pe o sin limi a nos, hongos del géne o T ichode ma dis in os a los comp endidos en la composición de la in ención, hongos pe enecien es a o os géne os o bac e ias, y sus mezclas, siemp e y cuando és os no 55 sean incompa ibles con la cepa de la in ención y con los hongos comp endidos en la composición de la in ención. Algunos ipos de agen es an i úngicos que pod ían emplea se en combinación con la cepa de la in ención, y/o con los p oduc os de su me abolismo, o con la composición de la in ención, son, aunque sin limi a nos, aquellos compues os po clo u o de cob e, oxiclo u o de cob e, óxido cúp ico, "caldo bo delés", quinolinola o de cob e-8, ca bona o de cob e básico, na ena o de cob e, sul a o de cob e, 60 c oma o de cob e u olea o de cob e. Po o o lado, los hongos pe enecien es al géne o T ichode ma con ecuencia ac úan como agen es e ilizan es. Po es a azón, y po que además la cepa de la in ención posee capacidad pa a inhibi el c ecimien o de mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos, los cuales pueden comp ome e 65 la iabilidad y el desa ollo de la plan a a la que in ec an o la idoneidad del suelo de cul i o, o a aplicación   ES 2 391 324 B1 8 de la cepa de la in ención es su uso como e ilizan e. Así, o o aspec o de la in ención se e ie e al uso de la cepa de la in ención, y/o de los p oduc os de su me abolismo, o de la composición de la in ención, como e ilizan e. Una ealización p e e ida de es e aspec o de la in ención se e ie e al uso de la cepa de la in ención, y/o de los p oduc os de su me abolismo, o de la composición de la in ención, como e ilizan e en plan as de oli o. 5 El é mino “ e ilizan e” se e ie e a cualquie sus ancia o mezcla de sus ancias químicas y/o biológicas, de o igen na u al o sin é ico, u ilizada pa a suminis a los elemen os ino gánicos u o gánicos al suelo con el in de que la plan a los abso ba y a o ece así su c ecimien o o igo . 10 La cepa de la in ención, y/o los p oduc os de su me abolismo, o la composición de la in ención, pueden adminis a se a una plan a, a un suelo o al ma e ial ege al, incluyendo pe o sin limi a nos semillas, hojas o u os, en combinación con uno o más agen es an i úngicos y/o e ilizan es de mane a simul ánea o secuencial. 15 La cepa de la in ención, y/o los p oduc os de su me abolismo, así como la composición de la in ención, se pueden adminis a a, po ejemplo pe o sin limi a nos, una plan a, an o a las aíces como a la pa e aé ea, al ma e ial ege al, incluyendo pe o sin limi a nos semillas, hojas o u os, o al suelo, en una can idad e ec i a pa a el a amien o y/o p e ención de in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos y pa a p o oca la e ilización. En el sen ido u ilizado en es a 20 desc ipción, el é mino “can idad e ec i a" se e ie e a la can idad su icien e de la cepa de la in ención, y/o de los p oduc os de su me abolismo, o de la composición de la in ención, que pe mi a ob ene los esul ados deseados. Dicha can idad e ec i a puede adminis a se en una sola ez o en a ias adminis aciones. En é minos de a amien o, p e ención y e ilización, una “can idad su icien e" es la can idad su icien e pa a e i a , palia , mejo a , es abiliza , e e i , e a da o e asa los e ec os de i ados 25 de las in ecciones p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, pa ógenos de plan as, o pa a es imula el c ecimien o de las mismas. P e e iblemen e, la can idad e ec i a a adminis a de la cepa de la in ención en es ado espo ulado es de en e 104 y 106 espo as/ml de agua de iego, y más p e e iblemen e de 105 espo as/ml (a pa i de 1,4 x 1011 unidades o mado as de colonias/g). 30 El modo de adminis ación de la cepa de la in ención, y/o de los p oduc os de su me abolismo, así como de la composición de la in ención, puede ealiza se, po ejemplo, aunque sin limi a nos, median e el agua de iego, pul e ización, ociado, e es imien o, umigación, imp egnación, mezcla con el sus a o, inme sión de la aíz de la plan a en una solución que comp enda la cepa de la in ención, o espo as de la misma p ege minadas, y/o los p oduc os de su me abolismo, o la composición de la in ención. 35 El é mino “géne o” se e ie e a la ca ego ía de la clasi icación biológica (ca ego ía axonómica) que se ubica en e la amilia y la especie y que comp ende una o más especies mo ológicamen e simila es elacionadas ilogené icamen e. Po “ca ego ía axonómica” se en iende el ni el de je a quía u ilizado pa a la clasi icación de los o ganismos. 40 A lo la go de la desc ipción y las ei indicaciones la palab a "comp ende" y sus a ian es no p e enden exclui o as ca ac e ís icas écnicas, adi i os, componen es o pasos. Pa a los expe os en la ma e ia, o os obje os, en ajas y ca ac e ís icas de la in ención se desp ende án en pa e de la desc ipción y en pa e de la p ác ica de la in ención. Los siguien es ejemplos y dibujos se p opo cionan a modo de 45 ilus ación, y no se p e ende que sean limi a i os de la p esen e in ención. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Fig. 1. Mues a los esul ados de los ensayos de en en amien o di ec o en e las cepas de 50 T ichode ma y dos aislados de Ve icillium dahliae. (A) Placas de Pe i en las que se encuen an c eciendo en un ex emo las cepas T ichode ma a o i ide IMI 206040, T ichode ma a o i ide RCU1 o T ichode ma ha zianum CECT 2413, y en el ex emo opues o los aislados de Ve icillium dahliae 1A-2 ó 2A-12. (B) Placas de Pe i en las que se encuen an c eciendo en un ex emo las cepas T ichode ma ha zianum RCU2, T ichode ma ha zianum PF1 o una combinación de las cinco cepas o mada po 1/5 de 55 cada una ( o mulación), y en el ex emo opues o los aislados de Ve icillium dahliae 1A-2 ó 2A-12. Con ol: cajas de Pe i en las que únicamen e se inoculó Ve icillium dahliae 1A-2 ó 2A-12. Las imágenes se oma on as 18 días de c ecimien o. Fig. 2. Mues a el c ecimien o de dos aislados de Ve icillium dahliae, 1A-2 (A) y 2A-12 (B), en 60 medios donde habían c ecido p e iamen e las cepas de T ichode ma, T ichode ma a o i ide IMI 206040 (T. a o i ide), T ichode ma a o i ide RCU1, T ichode ma ha zianum CECT 2413 (T. ha zianum), T ichode ma ha zianum RCU2 o T ichode ma ha zianum PF1, o una combinación de las cinco cepas o mada po 1/5 de cada una ( o mulación). La igu a mues a el c ecimien o de dos aislados del pa ógeno en p esencia de me aboli os exc e ados po las di e en es cepas de T ichode ma. 65  ES 2 391 324 B1 INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA Nº de solici ud: 201130606 CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD C12N1/14 (2006.01) A01N63/04 (2006.01) C12R1/885 (2006.01) Documen ación mínima buscada (sis ema de clasi icación seguido de los símbolos de clasi icación) C12N, A01N, C12R Bases de da os elec ónicas consul adas du an e la búsqueda (nomb e de la base de da os y, si es posible, é minos de búsqueda u ilizados) INVENES, EPODOC In o me del Es ado de la Técnica Página 2/4 OPINIÓN ESCRITA Nº de solici ud: 201130606 Fecha de Realización de la Opinión Esc i a: 31.10.2012 Decla ación No edad (A . 6.1 LP 11/1986) Rei indicaciones 1-15 SI Rei indicaciones NO Ac i idad in en i a (A . 8.1 LP11/1986) Rei indicaciones 1-15 SI Rei indicaciones NO Se conside a que la solici ud cumple con el equisi o de aplicación indus ial. Es e equisi o ue e aluado du an e la ase de examen o mal y écnico de la solici ud (A ículo 31.2 Ley 11/1986). Base de la Opinión.- La p esen e opinión se ha ealizado sob e la base de la solici ud de pa en e al y como se publica. In o me del Es ado de la Técnica Página 3/4 OPINIÓN ESCRITA Nº de solici ud: 201130606 1. Documen os conside ados.- A con inuación se elacionan los documen os pe enecien es al es ado de la écnica omados en conside ación pa a la ealización de es a opinión. Documen o Núme o Publicación o Iden i icación Fecha Publicación D01 REY M. ET AL., "Imp o ed an i ungal ac i i y o a mu an o T ichode ma ha zianum CECT 2413 which p oduces mo e ex acellula p o eins"Applied Mic obiology and Bio echnology (2001), ol. 55, nº 5, pág. 604-608, odo el documen o. Ci ado en la solici ud. 2. Decla ación mo i ada según los a ículos 29.6 y 29.7 del Reglamen o de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de ma zo, de Pa en es sob e la no edad y la ac i idad in en i a; ci as y explicaciones en apoyo de es a decla ación La p esen e in ención se e ie e a una nue as cepa de hongo CECT 20756 pe enecien e a las especie T ichode ma ha zianume esis en e a cob e y capaz de inhibi el c ecimien o de o os mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos. La in ención ambién se e ie e a una composición que comp ende dichas cepas, así como al uso de es as cepa y de es a composición como e ilizan es y pa a la p e ención y/o a amien o de in ecciones de plan as y/o suelos p o ocadas po mic oo ganismos, p e e iblemen e hongos, i opa ógenos más p e e iblemen e po Ve icillium dahliae, agen e causan e de las e icilosis. El documen o D01 desc ibe lel aislamien o de un mu an e de la cepa CECT 2413 T ichode ma ha zianum capaz pa a p oduci halos más amplios que el ipo sal aje, al hid oliza pus ulano, un políme o de β-1,6 glucano. El mu an e iene en e dos y cua o eces más ac i idad qui inasa y ac i idades β -1,3 y β -1,6 glucanasa que el ipo sil es e, y p oduce al ededo de es eces más p o eínas ex acelula es y seg ega mayo can idad de un pigmen o ama illo (α-pi ona). Con es e mu an e se ob u ie on mejo es esul ados que con el ipo sal aje en los expe imen os in i o: en e a Rhizoc onia solani mos o sob ec ecimien o y espo ulación más emp anos y eliminación del pa ógeno an es y en e Bo y is ciné ea mos ó una p o ección mejo ada de sus u as. 1.- NOVEDAD Ninguno de los documen os ci ados en el in o me de la écnica desc ibe una cepa que se pueda conside a igual a la cepa CECT 20756. En consecuencia la ei indicación 1 así como odas las ei indicaciones dependien es que se e ie en a la cepa deposi ada son nue as de acue do al A 6.1 LP 11/1986. 2.- ACTIVIDAD INVENTIVA Según se menciona en la página 7 de la desc ipción la cepa de hongo de la especie T ichode ma ha zianum 20756, es un mu an e espon áneo (no manipulado gen¨¦ icamen e) esis en e a cob e, conc e amen e, aunque sin 30 limi a nos, a 4 mM de Cu2SO4, de i ado de T ichode ma ha zianum CECT 2413 con la cual compa e sus ca ac e ís icas eno ípicas. En es e sen ido las di ulgaciones e e en es a T ichode ma ha zianum CECT 2413 se pueden conside a como el es ado de la ¨¦cnica m¨¢s ce cano. T ichode ma ha zianum es un conocido agen e de con ol biológico con a en e medades de las plan as causadas po hongos. En es e sen ido el documen o D01 en su igu as 2 y 3 demues a que T ichode ma ha zianum CECT y el mu an e espon ¨¢neo PF1 ienen e icacia como agen es de con ol biológico sob e las in ecciones causadas po Rhizoc onia solani y Bo y is ciné ea espec i amen e. An e la al a de da os que compa en el compo amien o en e CECT 20756 y el mu an e PF1, la cepa sil es e CECT 2413 se conside a el es ado de la écnica más ce cano a la in ención. A la is a de los esul ados compa a i os del ejemplo 1 y igu as 1 y 2 de la solici ud, la di e encia en e CECT 20756 y el agen e de con ol del es ado de la écnica, es deci la cepa sil es e, consis e en que la cepa de la solici ud demues a una e icacia mejo ada como agen e de biocon ol sob e el hongo i opa ógeno Ve icillium dahliae. En es e sen ido el p oblema écnico obje i o es la p o isión de un agen e de biocon ol nue o más e ec i o en e a hongos i opa ógenos. La solución es la cepa CECT 20756 pe enecien e a las especie T ichode ma ha zianum, las composiciones que la comp enden así como sus usos. Ni la exis encia, ni las p opiedades en ajosas de la nue a cepa es aban an icipadas ni suge idas en el es ado de la écnica an e io y po lo an o la ei indicación 1 así como odas las ei indicaciones dependien es que se e ie en a la cepa deposi ada ienen ac i idad in en i a de acue do al A 8.1 LP 11/1986. In o me del Es ado de la Técnica Página 4/4