Avances en los estudios preclínicos de aristotelia chilensis

AVANCES EN LOS ESTUDIOS PRECLÍNICOS DE ARISTOTELIA CHILENSIS UNIVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE FARMACIA José María Pastor Martínez 1 Universidad de Sevilla Facultad de Farmacia Trabajo de Fin de Grado Grado en Farmacia Avances en los estudios preclínicos de Aristotelia chilensis José María Pastor Martínez Sevilla, 19 de junio de 2024 Departamento de Farmacología Tutora: Isabel Villegas Lama Revisión bibliográfica 2 RESUMEN Introducción. Las plantas medicinales son grandes fuentes de recursos, que los humanos hemos utilizado desde la más antigua de las civilizaciones para el tratamiento de enfermedades. Aristotelia chilensis, más conocido como maqui, es un buen ejemplo de planta medicinal. Es autóctona de la Patagonia, y ha sido muy utilizada por los mapuches en medicina tradicional para el tratamiento de heridas, como antiinflamatorio y cicatrizante. Sin embargo, aún se desconoce el potencial real de esta planta medicinal, ya que hay pocos ensayos clínicos que reflejen la efectividad o seguridad de su aplicación en humanos. Justificación y objetivos. Realizar una búsqueda bibliográfica sistemática para hallar el potencial terapéutico de A. chilensis, en ensayos preclínicos. Materiales y métodos. Se han utilizado las bases de datos PubMed y Scopus como fuentes de información, para acceder a artículos científicos publicados entre 2019 y 2024, ambos incluidos, sobre estudios preclínicos en A. chilensis. Resultados y discusión. Observamos los diversos efectos terapéuticos de A. chilensis, probados en distintos modelos experimentales en estudios preclínicos. Los resultados en general son positivos, demostrando efectos antidepresivo, antiinflamatorio, antimicrobiano, fotoprotector, antinociceptivo, antifúngico y regulador de parámetros metabólicos. Conclusiones: Hay suficiente evidencia de que el maqui posee un gran efecto antioxidante, gracias a los polifenoles presentes en su fruto. Además, demuestra otras importantes actividades farmacológicas en distintos modelos de experimentación preclínica. Los estudios preclínicos suponen una herramienta clave para la valoración de la seguridad y eficacia antes de la puesta en uso de cualquier compuesto en humanos. Palabras clave: Aristotelia chilensis, maqui, modelo preclínico, antioxidante 3 INDICE 1. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………………………………………………………4 1.1 LAS PLANTAS MEDICINALES A LO LARGO DE LA HISTORIA……………………………………..4 1.2 ARISTOTELIA CHILENSIS…………………………………………………………………………………………5 1.2.1 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA…………………………………………………………………..5 1.2.2 CARACTERIZACIÓN BOTÁNICA…………………………………………………………………..6 1.2.3 USOS DE LA PLANTA………………………………………………………………………………….7 1.3 EVALUACIÓN DE LA EFECTIVIDAD Y SEGURIDAD DE LAS PLANTAS MEDICINALES…..7 2. JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS………………………………………………………………………………………..8 3. MATERIALES Y MÉTODOS…………………………………………………………………………………………..11 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN…………………………………………………………………………………………13 4.1 EFECTOS DE LA BAYA MAQUI EN DISTINTOS MODELOS EXPERIMENTALES……………13 - EFECTO ANTIDEPRESIVO………………………………………………………………………………..13 - EFECTO TERAPÉUTICO EN COLITIS ULCEROSA………………………………………………..14 - EFECTO FOTOPROTECTOR FRENTE AL DAÑO POR UVB……………………………………16 - EFECTO REGULADOR DE VÍAS ANTIOXIDANTES Y ANTIINFLAMATORIAS EN ENFERMEDAD DE CROHN………………………………………………………………………………17 - EFECTO INHIBITORIO DE DERMATITIS ATÓPICA……………………………………………..19 - EFECTO ANTINOCICEPTIVO……………………………………………………………………………21 - EFECTO BENEFICIOSO PARA LA MEMORIA Y DISMINUCIÓN DE ESTRÉS OXIDATIVO…………………………………………………………………………………………………….22 - EFECTO BENEFICIOSO ANTE EL DAÑO SUBCELULAR POR LUZ AZUL…………………24 - EFECTO INHIBITORIO DE LA FILAMENTACIÓN DE CANDIDA ALBICANS Y MEJORA DE LA EFICACIA ANTIFÚNGICA DE LA NISTATINA………………………………………….…25 - EFECTO MODULADOR DE MARCADORES DE ESTRÉS OXIDATIVO EN SÍNDROME METABÓLICO………………………………………………………………………………………………..28 4.2 PERSPECTIVAS DE FUTURO DE A. CHILENSIS…………………………………………………………31 5. CONCLUSIONES………………………………………………………………………………………………………….31 6. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………………………………………………….32 7. ANEXOS……………………………………………………………………………………………………………………..35 4 1. INTRODUCCIÓN 1.1 Las plantas medicinales a lo largo de la historia Las plantas medicinales han sido utilizadas por el ser humano desde tiempos remotos con fines curativos. Durante mucho tiempo, los remedios naturales, y en especial las plantas medicinales, eran el único recurso del que disponía el hombre para tratar enfermedades; por lo tanto, jugaban un papel crucial en la salud y bienestar de las sociedades humanas. En civilizaciones antiguas como la china, india, egipcia (figura 1) o griega las plantas medicinales eran tratadas como auténticos tesoros, y esto hizo que se promoviera el conocimiento de las plantas y sus propiedades, que ha sido transmitido de generación en generación, e incluso entre culturas, sin que se pierda el saber adquirido a través del tiempo. Toda esta información es la base de la medicina tradicional que, gracias a la suma de conocimientos, habilidades y prácticas obtenidas a lo largo de su extensa historia, se utiliza para el mantenimiento de la salud, diagnóstico y tratamiento de enfermedades físicas y mentales hasta nuestros días. La investigación científica ha validado muchas propiedades terapéuticas de las plantas, y existen ejemplos claros como el ácido salicílico o la morfina, compuestos medicinales con gran relevancia en la terapéutica actual y ambos de origen vegetal (Martín-Romo Mejías, 2012). Figura 1. Diosa del árbol, tumba de Sennedjem en Deir el-Medina, XIX Dinastía hacia el año 1250 a.c. (tomada de Acevedo y Arriagada, 2018) 5 1.2 Aristotelia chilensis Aristotelia chilensis (Stunz) es una especie vegetal conocida popularmente como maqui. Es un árbol autóctono de los bosques subantárticos de Chile y Argentina (figura 2). Crece principalmente en deslindes de bosques y lechos de cursos de agua. Siempre en suelos húmedos desde el nivel del mar hasta 2500 metros sobre el nivel del mar. Posee gran plasticidad morfológica, presentándose como arbusto en la zona más septentrional y como árbol en la zona meridional de su distribución (Salinas et al., 2012). 1.2.1 Clasificación taxonómica La clasificación taxonómica de esta especie vegetal queda recogida en la tabla 1 que, a continuación, se muestra: Tabla 1. Taxonomía de Aristotelia chilensis (Salina y Caballé, 2020; POWO, 2023) Reino Plantae División Magnoliophyta Clase Magnoliopsida Orden Oxalidales Familia Elaeocarpaceae Género Aristotelia Especie Aristotelia chilensis Nombre común Maqui; makiberry (inglés) Figura 2. Distribución geográfica de Aristotelia chilensis (POWO, 2023). 6 1.2.2 Caracterización botánica El maqui es un árbol dioico, pequeño, perteneciente a la familia Elaeocarpaceae, que puede alcanzar los 4 o 5 metros de altura cuando crece en lugares abiertos o adquirir forma arbustiva cuando su lugar de crecimiento se da en las comunidades. Presenta el tronco dividido, ramas abundantes, delgadas y flexibles, de corteza lisa que se desprende en largas tiras fibrosas (figura 3). Sus hojas son perennes, simples, opuestas, decusadas, péndulas, de forma oval-lanceolada, con borde aserrado, glabras, de textura coriácea, con nervadura marcada y provista de un pecíolo largo y rojizo (figura 4) (Salinas y Caballé, 2020). Sus flores (figura 5) son unisexuales, axilares, reunidas en corimbos cortos, con un cáliz campanulado formado por 5 o 6 sépalos fusionados, y una corola constituida por 5 o 6 pétalos libres, de color amarillento y alternos a los lóbulos del cáliz. Las flores masculinas presentan 10- 15 estambres y un estilo rudimentario, mientras que las femeninas poseen un ovario grueso con un estigma dividido en tres rodeado por estaminodios. Y su fruto (figura 6) es una baya negra brillante de 4-6 mm de diámetro, cuyo interior contiene 4-8 semillas angulosas de 3x2 mm (Salinas et al., 2012; Salinas y Caballé, 2020). Figura 3. Ejemplar de A. chilensis (Fernández et al., 2019; PlantNet, 2024). Figura 4. Hojas de A. chilensis (Salinas y Caballé, 2020). Figura 5. Flores de A. chilensis (POWO, 2024). Figura 6. Frutos de A. chilensis (PlantNet, 2024). 7 1.2.3 Usos de la planta Para la cultura mapuche (pueblo indígena más numeroso de Chile y Argentina) el maqui es una especie sagrada. Se utiliza principalmente en la medicina popular: su fruto sirve para curar diarreas crónicas y disentería; sus hojas frescas, en infusión, se utilizan para tratar enfermedades de la garganta y fiebre; y las hojas secas, y en polvo, son usadas para curar heridas y cicatrices (Salinas et al., 2012). Esta planta es muy conocida en la parte central y sur de Chile por el consumo del fruto y su utilización en la preparación del tecu, una bebida alcohólica típica. Los principios activos aislados en este órgano son fundamentalmente alcaloides y taninos, que le otorgan las propiedades terapéuticas antiespasmódicas, antiinflamatorias y cicatrizantes, principalmente, pero también contiene los niveles más elevados de fenoles (Genskowsky et al., 2016) y la actividad antioxidante más alta en comparación con el resto de los frutos sudamericanos, además de una de las concentraciones más elevada de antocianinas, así como ácidos fenólicos y flavonoides (Fredes et al., 2014; Fernández et al., 2019; Vega-Galvez et al., 2021). La hoja también contiene flavonoides, polifenoles y antocianinas (Fernández et al., 2019). No obstante, se ha descrito un efecto negativo sobre los eritrocitos humanos que ha sido asociado a los flavonoides del maqui (Suwalsky et al., 2008). Por ello, se hace necesario conocer no sólo los efectos beneficiosos que los productos naturales puedan ejercer sobre el organismo humano, sino también los posibles efectos adversos que se deriven de su utilización, ya que lo natural no es sinónimo de inocuidad. 1.3 Evaluación de la efectividad y seguridad de las plantas medicinales Entidades como la Organización Mundial de la Salud (OMS) reconocen el valor de la medicina tradicional por su contribución a la salud, bienestar y atención sanitaria centrada en las personas, que es de gran importancia sobre todo en aquellos países en desarrollo que no disponen de recursos económicos suficientes para el acceso a la medicina alopática y que, en contrapartida, tienen una gran fuente de recursos naturales a su disposición para tratar las enfermedades que padecen. Además, la integración de la medicina tradicional de forma complementaria en los sistemas nacionales de salud de los países desarrollados facilitaría aprovechar su potencial de actividades terapéuticas. Tanto en un caso como en el otro, el empleo de preparados vegetales o de sus compuestos activos aislados se debe hacer de manera adecuada, efectiva y segura, sobre la base de pruebas científicas. La OMS ayuda a países que 8 quieren adoptar prácticas de medicina tradicional basada en la ciencia, con el objetivo de que la cobertura sanitaria sea de calidad, segura y completa (OMS, 2024). Para ello es fundamental que se realicen pruebas rigurosas en las que se determine la seguridad y eficacia de los tratamientos tradicionales basados en el empleo de recursos naturales antes de que estos sean utilizados por el humano, como así se hace en el caso de los principios activos de origen sintético que van a formar parte de los medicamentos (AEMPS, 2024). En la fase de investigación no clínica o preclínica se ensaya exhaustivamente el compuesto aislado de una planta o el preparado vegetal (tisana, tintura, extracto, etc.) seleccionado para evaluar la actividad farmacológica y la seguridad antes de su administración en humanos. La fase preclínica incluye modelos de experimentación in vitro, realizados en células o tejidos, y ensayos en organismos vivos (modelos in vivo), así como modelos computacionales (in silico) y pruebas fisicoquímicas (in chimico). La finalidad de estos tipos de estudio es la de conocer la actividad farmacológica y la toxicología del preparado o del compuesto aislado que se quiere evaluar. Los ensayos que estudian la seguridad del medicamento a nivel preclínico deberán realizarse cumpliendo las Normas de Buena Práctica de Laboratorio (BPL) (AEMPS, 2024). 2. JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS Las bayas son una fuente rica en micronutrientes y varios fitoquímicos bioactivos. Son reconocidas ente las frutas y verduras por sus beneficios para la salud cardiovascular. Las propiedades antioxidantes de estas bayas han sido bien documentadas en varios estudios in vitro, en animales y en humanos, aunque los efectos cardiovasculares obtenidos se han explicado por mecanismos que van más allá de la actividad antioxidante (Basu y Lyons, 2012). Se cree que los mecanismos subyacentes para estos efectos beneficiosos incluyen la regulación positiva de la enzima óxido nítrico sintasa endotelial, la disminución de las actividades de las enzimas digestivas de los carbohidratos, la disminución del estrés oxidativo y la inhibición de la expresión génica inflamatoria y la formación de células espumosas (Basu et al.,2010). Los principales compuestos bioactivos presentes en este tipo de frutos son compuestos fenólicos, como las antocianinas y flavonoles (figura 9), flavonas, ácidos gálicos, egálico y sus derivados (Schmeda Hirschmann et al., 2019). 15 antioxidante y antiinflamatoria, por lo que se seleccionó MWE como fármaco de prueba. Los grupos de control y retratamiento de la colitis se retiraron con un 3% (p/v) de DSS disuelto en agua potable durante 7 días y se les administraron, vía intragástrica, los diferentes tratamientos: 5-ASA (ácido 5-aminosalicílico): 200 mg por kg de peso corporal; MWE: 50, 100 y 200 mg por kg de peso corporal (se denominaron MWE-L, MWE-M y MWE-H, respectivamente). Los animales fueron sacrificados tras anestesiarlos en el noveno día. El colon de cada ratón fue cuidadosamente diseccionado, y se midió su extensión. A continuación, se preparó un homogeneizado a 4ºC de cada colon. Se determinaron los niveles de óxido nítrico (NO), glutatión (GSH) y malonil dialdehído (MDA); y las cantidades de proteínas con un kit BAC-100. También se tomaron muestras de sangre, de las que fue extraído el suero y se midió la cantidad de factor de necrosis tumoral (TNF)-α y de interleucina (IL)-1β con ELISA y MPO con un kit comercial. Algunos de los resultados se muestran en la figura 11. El estudio pone de manifiesto que la MWE que contenía los principios activos antioxidantes y antiinflamatorios más abundantes, exhibió un efecto terapéutico distintivo sobre la colitis ulcerosa. MWE no solo mejoró significativamente la pérdida de peso de los animales, la sangre en las heces y el daño al tejido del colon, sino que también inhibió significativamente el estrés oxidativo, la producción de citoquinas inflamatorias y la expresión de ocludina en el intestino (Zhou et al., 2019). Figura 11. Resultados del estudio. Índice de actividad de la enfermedad (A), longitud de colon (B) y (C), y peso de colon húmedo (D) (Zhou et al., 2019). 16 ❖ Efecto fotoprotector frente al daño inducido por radiación ultravioleta B En el estudio realizado por Chen et al. (2020), se investigó sobre las propiedades fotoprotectoras de la fracción de acetato de etilo del extracto etanólico de baya de maqui (MEE), in vitro e in vivo (anexo 2, tabla 1). Las muestras se colocaron en etanol durante 24 horas. Luego se hizo un extracto con una máquina de ultrasonidos. El disolvente del extracto se eliminó con evaporación rotativa y luego se reconstituyó con agua. La suspensión se extrajo sucesivamente con éter de petróleo, cloroformo, acetato de etilo y butanol. La MEE obtenida presentó un alto contenido polifenólico. Se determinó que el contenido fenólico total era de 486,44 ± 1,54 mg equivalentes de ácido gálico (utilizado como estándar) por gramo de extracto. - Fotoprotección de la baya maqui en un cultivo celular Se obtuvieron células queratinocitos humanos HaCaT y se incubaron 24 horas en placas de 96 pocillos. A estos cultivos se les aplicó MEE en concentraciones seleccionadas durante 24 h. Las células fueron irradiadas con UVB (5, 10, 25, 50 y 100 mJ/cm2) antes de evaluar el daño en el ADN. Se midió la viabilidad celular, la fragmentación del ADN mediante el Comet test, el nivel de NO y los sistemas antioxidantes celulares endógenos (niveles de superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y GSH) mediante métodos estándar, y se utilizaron como indicadores para evaluar el efecto de MEE en el daño por radiación UVB. - Fotoprotección de la baya maqui en ratones BALB/c Los ratones BALB/c se asignaron aleatoriamente por grupos: grupo control, grupo UVB tratados con carboximetilcelulosa Na, grupo UVB tratados con ácido gálico (GA) y grupos 4 a 6, tratados con MEE a dosis baja, media y alta (25, 50 y 100 mg/kg, respectivamente). Los ratones fueron expuestos durante 1 h en los días 1-5 (la dosis total de radiación fue de 0,22 J/cm2 por día) y 2 h en los días 6-10 (la dosis total de radiación fue de 0,44 J/cm2 por día) con una lámpara desde una distancia de 15 cm. Las muestras de tejido cutáneo de los ratones fueron homogeneizadas en solución salina y se centrifugaron, para recoger el sobrenadante. En el sobrenadante se llevó a cabo la determinación de MDA, SOD, CAT y GSH. También se determinaron los niveles de TNF-α, IL-4 y IL-6. Para la detección de las cinasas activadas por mitógenos ERK, p-ERK, p-38 y p-p38, se realizó un análisis Western Blot. 17 Los resultados fueron realmente positivos, y se llegó a la conclusión de que MEE revierte el daño de ADN causado por la exposición a UVB, y normaliza valores de SOD, CAT, NO y GSH (sistemas antioxidantes endógenos). Además, revierte el engrosamiento de la piel en ratones de manera dosis dependiente y previene la inflamación. El maqui puede ser un agente terapéutico efectivo contra el daño de la piel por radiación UVB. ❖ Regulador de vías antioxidantes y antiinflamatorias para el tratamiento de la enfermedad de Crohn (EC) inducida por TNBS (ácido 2,4,6-trinitrobenceno sulfónico) En el estudio realizado por Ortiz et al. (2020), el principal objetivo del estudio fue explorar los efectos terapéuticos de la baya maqui en la fase agua de la enfermedad de Crohn (EC) (anexo 2, tabla 1). La obtención del extracto, para que incluyera la totalidad de los polifenoles, se realizó con MeOH. La extracción partió de una muestra inicial de baya maqui de 50 g de polvo liofilizado. En total, se añadieron a la muestra 250 ml de MeOH/H+ (0,1% HCl) a pH1, y luego se homogeneizaron con un dispositivo de ultrasonidos. El extracto se centrifugó y se recolectó el sobrenadante. Estos pasos se repitieron 5 veces, se mezclaron los sobrenadantes y se evaporaron hasta obtener un extracto seco. Se resuspendió en agua destilada, para filtrarlo y por último liofilizarlo. Para demostrar el efecto terapéutico del extracto de baya maqui se utilizaron ratones BALB/c de 12 a 14 semanas de edad y peso entre 19 y 35 gramos. A estos ratones se les indujo EC con una solución de TNBS en etanol por vía intrarrectal. Esta solución actúa volviendo inmunogénicas a las proteínas para el sistema inmunológico del huésped. El extracto polifenólico de maqui (Ach) se administró diariamente, con una dosis única de sonda oral de Ach a 50 mg/kg/día, durante 4 días después de la administración de TNBS (grupo curativo) y durante 1 semana previa a la inducción de la enfermedad, hasta el sacrificio (grupo preventivo). Los ratones fueron sacrificados a los 5 días de empezar el experimento. Tras confirmar su muerte, se extrajo cuidadosamente el intestino grueso de cada animal, se lavó con solución fisiológica, y luego se midió. Posteriormente se llevó a cabo una puntuación de daño del 18 intestino por una persona ajena al estudio, en una escala de 0 a 11 teniendo en cuenta parámetros como ausencia de daño, ulceración local o engrosamiento de la pared intestinal. También se evaluaron las células calciformes del tejido colónico y la inmunohistoquímica de macrófagos. El tejido colónico fue homogeneizado previa congelación. La concentración proteica de los homogeneizados de colon se determinó siguiendo el método colorimétrico de Bradford. La puntuación histológica del intestino grueso mostró un aumento significativo en el daño tisular en el grupo de EC no tratado, en comparación con el grupo control. Ach redujo significativamente la puntuación histopatológica, sugiriendo un efecto protector y curativo en la inflamación aguda de la EC. También se evaluó la tinción de PAS (ácido peryódico de Schiff) en el tejido del colon para determinar la distribución de las células caliciformes y la presencia de glicoproteínas dentro de la mucosa colónica. La EC inducida por TNBS mostró una tinción negativa para PAS, lo que indica una reducción significativa en la cantidad de células caliciformes. Por el contrario, la administración de Ach mostró un patrón de restauración significativo en forma de tejido colónico. Figura 12. Efecto preventivo y curativo del extracto polifenólico de maqui (Ach) sobre la mucosa colónica en un modelo murino de enfermedad de Crohn (EC). Observación con PAS (ácido peryódico de Schiff). (A) Grupo control, tinción fuerte de PAS en glicoproteínas. (B) Grupo EC, tinción deficiente. (C) Grupo tratamiento, curativo. (D) Grupo preventivo, distribución de células caliciformes similar a grupo control (Ortiz et al., 2020). 19 Se llegó a la conclusión de que los ratones con tratamiento preventivo con Ach están protegidos de la EC inducida por TNBS. La administración oral de Ach previene la pérdida de peso y reduce el daño al tejido colónico. Además, hay reducción de la inflamación transmural y un aumento de la recuperación de la arquitectura mucosa y de su función mucosecretora (Ortiz et al., 2020). ❖ Efecto inhibitorio sobre la dermatitis atópica inducida por 2,4-dinitroclorobenceno En el estudio realizado por Moon y Kim (2020), se investigó el mecanismo de regulación inmune del extracto acuoso de Aristotelia chilensis (ACWE) relacionado con la dermatitis atópica (anexo 2, tabla 1). La preparación del extracto se llevó a cabo con agua caliente, mezclando 100 g del material en polvo con 1 L de agua durante 3 horas a 80 °C, repitiendo este proceso 3 veces, para luego filtrarlo. A continuación, el ACWE se liofilizó hasta convertirlo en polvo. Los componentes principales del extracto fueron las antocianinas, destacando las delfinidinas. - Experimento antiinflamatorio en células RAW 264.7: Se sembraron células RAW 264.7 en una placa de 96 pocillos y se cultivaron a 37 °C 24 horas en una incubadora de CO₂ al 5 %. Las muestras se diluyeron en DMEM (medio águila modificada Dulbecco) suplido con LPS, y se añadieron a cada pocillo (200 μL/pocillo), seguido de una incubación a 37 °C. Después de extraer 100 μl de sobrenadante de cultivo de cada pocillo, se añadió el reactivo de Griess seguido de la incubación a temperatura ambiente durante 10 minutos. La absorbancia se midió a una longitud de onda de 540 nm utilizando un lector de placas ELISA. La concentración de NO en el sobrenadante del cultivo celular se calculó a partir de una curva cuantitativa. - Modelo animal inflamatorio subagudo inducido por oxazolona: Se utilizaron ratones macho BALB/c de siete semanas de edad. Los ratones se distribuyeron en los siguientes grupos: grupo sin tratamiento (NC), grupo control de dermatitis subaguda inducida por oxalazona (CO), grupo tratado por vehículo tras inducir la dermatitis (VC), grupo tratado por dexametasona 0,5% (PC), grupo experimental 1 tratado con ACWE 1% (E1), grupo experimental 2 tratado con ACWE 5% (E2) y grupo experimental 3 tratado con ACWE 10% tras la inducción de la dermatitis. 20 A los ratones se les afeitó la zona de la oreja, para aplicarle una solución de oxalazona 2% que le indujera la dermatitis subaguda. A los 15 minutos y 6 horas después de la aplicación de la solución de oxazolona, se aplicó material de prueba en acetona (20 μl) a varias concentraciones sobre la misma área. A los 6 días del experimento los ratones fueron sacrificados. El grosor y peso de la oreja fueron medidos. - Modelo animal de dermatitis atópica inducida por DNCB (2,4-dinitrocolorobenceno). Se utilizaron ratones macho BALB/c de cinco semanas de edad. Los animales se distribuyeron en los siguientes grupos: grupo no tratado (N), grupo control con dermatitis atópica inducida por DNCB (C), grupo control de vehículo acetona: aceite de oliva (AOO) (VC), grupo tratado con dexametasona 0,5% (PC), grupo prueba 1 tratado con ACWE 1% (T1) y grupo prueba 2 tratado con ACWE 6% tras la inducción de dermatitis atópica inducida por DNCB. La solución de DNCB (1%, 150 μL) en el vehículo (AOO) se aplicó en el área de la piel de la espalda afeitada del ratón dos veces con un intervalo de 3 días para sensibilizar la dermatitis de tipo atópico. La semana siguiente, se aplicó una solución de DNCB al 0,2% en la misma área dos veces con un intervalo de 3 días para combatir la dermatitis de tipo atópico. Después de eso, se aplicaron 150 μL de dexametasona y ACWE en el área de la piel de la espalda cinco veces por semana durante seis semanas. Se observaron características de comportamiento, como la frecuencia de rascado en el área de la piel de la espalda con las patas traseras. La pérdida de agua transepidérmica y el índice de eritema se midieron con un tewametro y un mexámetro. Los síntomas de dermatitis atópica se observaron macroscópicamente. Los síntomas se clasificaron como inespecíficos (0), leves (1), intermedios (2) y graves (3) de acuerdo con la evaluación del índice SCORAD para síntomas como eritema, edema, exfoliación, abrasión, liquenificación y sequedad. Asimismo, se recogieron 100 μl de sangre y se centrifugaron. El suero obtenido se almacenó a - 80 °C para su posterior análisis. El suero se descongeló inmediatamente y los niveles de IgE se cuantificaron utilizando un kit de ensayo inmunoespecífico. También se realizó un cultivo de las células del bazo, donde luego se cuantificaron las citoquinas. Los resultados fueron muy positivos, demostrando una vez más el potencial terapéutico del extracto de Aristotelia chilensis. El extracto acuoso de maqui presenta gran efecto antioxidante, con baja citotoxicidad in vivo. Tuvo un alto efecto antiinflamatorio en un modelo animal de inflamación cutánea subaguda inducida por oxazolona in vivo. Además, ACWE fue eficaz para 21 ayudar a la recuperación de lesiones cutáneas y respuesta inmunológica en el modelo de dermatitis atópica inducida por DNCB. Además, se llegó a la conclusión de que hay varios componentes de ACWE que trabajan de manera sinérgica (no solo delfinidinas) (Moon y Kim, 2020). ❖ Efecto antinociceptivo Estudio realizado por Agulló et al., en 2021. Se evaluó la actividad antinociceptiva de las antocianinas presentes en el maqui, ya que, hasta entonces, habían mostrado potencial neurológico pero la evidencia sobre la actividad nociceptiva era escasa (anexo 2, tabla 1). Para la preparación del extracto se mezcló el polvo liofilizado de maqui (100mg) diluido en un disolvente de metanol/agua/ácido fórmico, y se centrifugó 5 minutos a 10500 rpm. La identificación y cuantificación de antocianinas se realizó mediante la aplicación del método de cromatografía líquida de alta resolución acoplada a detección de matriz de diodos (HPLC-DAD). En la evaluación farmacológica, se utilizaron ratones macho Swiss Webster de entre 25 y 30 gramos de peso. - Diseño experimental de actividad nociceptiva: Grupos de al menos 6 ratones recibieron el fármaco de referencia (tramadol, un agonista opioide parcial) o el polvo de A. chilensis diluido en agua, en un volumen de 0,1 ml por 10 g de peso corporal (12’5, 25, 62’5, 125 y 250 mg/kg; y 250, 500 y 1000 mg/kg,). Después de 30 min de tratamiento, se inyectó el agente nociceptivo (formalina intraplantar al 1%) para inducir el comportamiento de lamido, evaluando mediante el Formalin test (donde l tiempo empleado en lamer la pata inyectada se tomó como comportamiento nociceptivo). Los animales del grupo control recibieron el vehículo por la misma vía y hora de administración. Todas las dosis inhibieron significativamente la nocicepción en la etapa central, alcanzando el efecto del tramadol. Esta inhibición significativa también se observó en la etapa inflamatoria, donde el maqui, a dosis de 62.5, 125 y 250 mg/kg, inhibió de manera total el comportamiento nociceptivo en todo el período de tiempo evaluado, siendo mejor que la respuesta inducida por el fármaco de referencia. El efecto es dosis-dependiente alcanzando el máximo a dosis de 125mg/kg. 22 - Daño gástrico: Una vez concluido el Formalin test, los animales fueron sacrificados para la observación del daño gástrico. Se diseccionó cada estómago, se lavaron cuidadosamente, y finalmente se escanearon para observar las lesiones gástricas en comparación con las producidas por la indometacina. El daño gástrico, como posible efecto adverso producido por antiinflamatorios o analgésicos, no fue observado a ninguna dosis de A. chilensis. Por el contrario, sí que se observó, aunque levemente, en el tratamiento con el fármaco de referencia (indometacina). En conclusión, los resultados obtenidos de este estudio evidencian las propiedades de la baya de maqui para la terapia del dolor y sugieren que una pequeña ingesta de la baya ser una potencial alternativa natural o complemento al uso de los fármacos habituales para la terapia analgésica (Agulló et al., 2021). ❖ Efecto beneficioso para la memoria y disminución del estrés oxidativo en el cerebro Estudio realizado por Bribiesca-Cruz et al., en 2021. El estudio se centró en evaluar si la protección que ejerce el extracto acuoso de baya de maqui en regiones cerebrales asociadas al desempeño cognitivo se debe a su capacidad antioxidante (anexo 2, tabla 1). Se utilizaron ratas macho Sprague Dawley, de entre 250 y 300 gramos de peso, colocadas en cajas acrílicas. Durante 30 días consecutivos, los animales fueron expuestos a O3 una dosis constante de 0,25 ppm durante 4 h al día. Las ratas se dividieron aleatoriamente en siete grupos experimentales: - Grupo 1 (NT): las ratas no se expusieron al O3 ni recibieron ningún tratamiento. - Grupo 2 (VEH): ratas expuestas a una corriente de aire y se les administró 200 μl agua por sonda nasogástrica oral. - Grupos 3 (50MQ) y 4 (100MQ): expuestas a corriente de aire y tratadas con 50 o 100 mg/kg de extracto de maqui. - Grupo 5 (O3): ratas expuestas a O3 y a las que se les administró agua por sonda nasogástrica oral. - Grupos 6 (O350MQ) y 7 (O3100MQ): expuestas a O3 y administradas con 50 o 100 mg/kg de polvo liofilizado de maqui, respectivamente. 23 Prueba de evitación pasiva: La prueba de evitación pasiva (PAT) se llevó a cabo 24h después de la última administración. Todos los animales fueron entrenados una vez para realizar el PAT y se evaluó la memoria a corto y largo plazo (10 min y 24 h después del entrenamiento, respectivamente). Las ratas fueron colocadas en un aparato PAT con dos cámaras: el compartimento seguro (blanco) y el de castigo (negro). La duración del estímulo se controló automáticamente y las latencias se midieron manualmente con cronómetros. Durante el entrenamiento (adquisición), cada animal se colocó en el compartimento de seguridad durante 10 s. A continuación, se levantó la puerta y se registró el tiempo necesario para que el animal cruzara el umbral del departamento de castigo (latencia de adquisición). Una vez que el animal estaba en el compartimiento de castigo, se cerraba la puerta y se activaba una sola descarga eléctrica (3 mA durante 5 s). Inmediatamente después, se abrió la puerta y se midió el tiempo necesario para que el animal regresara al compartimento de seguridad (latencia de escape). El animal permaneció en el compartimento de seguridad durante 30 s antes de regresar a su alojamiento individual. Diez minutos (memoria a corto plazo) y 24 h (memoria a largo plazo) después del entrenamiento, se realizó la fase de retención, en la que se colocó de nuevo al animal en el compartimento de seguridad durante 10 s y se abrió la puerta. Se registró el tiempo que el animal permaneció en el compartimento de seguridad antes de entrar en el compartimento de castigo (latencia de retención). La prueba finalizaba cuando el animal entraba en el compartimento de castigo o permanecía en el compartimento de seguridad durante 600 s. La exposición crónica al O3 disminuyó significativamente la latencia de retención tanto en las pruebas de memoria a corto como a largo plazo. Por el contrario, la latencia de retención en la memoria a corto y largo plazo aumentó en los animales expuestos a O3 y tratados con 50 y 100 mg/kg de maqui. Tras el PAT, los animales fueron sacrificados, y se les extirpó el cerebro para continuar con un análisis. Los tejidos se homogeneizaron en tampón de lisis, y se centrifugaron a 15000 rpm 15 minutos. Se determinó la concentración de proteínas con un espectrofotómetro. Luego se determinó la concentración de MDA, uno de los productos finales de la peroxidación de ácidos grasos poliinsaturados y un marcador de la actividad de los radicales libres. Primero hubo que desproteinizar la muestra, luego se hizo reaccionar el MDA con ácido tricloroacético (TCA), que forma productos rosados medibles con un espectrofotómetro. En los animales expuestos al 24 ozono, aumentó significativamente la concentración de MDA en el cerebro con respecto a los expuestos a una corriente de aire. Además, el tratamiento con maqui disminuyó la concentración de MDA en los animales en los animales expuestos a ozono. La determinación de los productos finales de glicación avanzada (AGE) se basó en la detección espectrofluorométrica de algunos productos fluorescentes. Los resultados fueron similares a la concentración de MDA. En animales expuestos al ozono, aumentó la concentración de AGE, y en los animales tratados con maqui, disminuyó significativamente la concentración de estos productos de glicación avanzada. La actividad de la enzima SOD se midió mediante la reducción del colorante formazán soluble en agua. Se siguió el protocolo de actividad de SOD a partir de un kit de determinación de SOD. En animales expuestos a O3 y tratados con VEH, la actividad enzimática de la SOD aumentó significativamente en el hipocampo, corteza prefrontal y la amígdala en comparación con los animales expuestos al aire, mientras que la administración de 50 y 100 mg/kg disminuyó significativamente este aumento en el hipocampo. Los resultados indican que el extracto acuoso de baya de maqui disminuye el estrés oxidativo inducido por la exposición al ozono y se considera que el mayor efecto del maqui se debe a su contenido en flavonoides (Bribiesca-Cruz et al., 2021). ❖ Efecto beneficioso ante el daño de orgánulos subcelulares por exposición a luz azul. Estudio realizado por Yamazaki et al., en 2024, donde se investigó los efectos del extracto de baya de maqui (MBE) y sus componentes en el daño subcelular inducido por la irradiación de luz azul en células 661W derivadas de retina de ratón (anexo 2, tabla 1). Cultivo celular e irradiación con luz azul: Se mantuvo una línea celular retiniana de ratón (línea celular 661W) en medio águila y una atmósfera al 5% CO2. Se sembraron las células en placas de pocillos, sustituyendo el medio por DMEM (medio águila Dulbecco modificado) suplementado con FBS, MBE (1, 3 o 10 μg/ml), D3S5G (delphinidin 3-sambobioside-5-glucoside 1, 3 o 10 μM), D3G5G (delphinidin 3,5-O- diglucósido 1, 3 o 10 μM), NAC (1 mM) o Mdivi-1 (30 μM) e incubados a 37 ° C. Los cultivos celulares se expusieron a luz azul (464 nm) de una fuente LED y finalmente se realizaron varias evaluaciones. 31 de estos desórdenes metabólicos, y tiene gran potencial terapéutico (Castillo-García et al., 2023). 4.2 Perspectivas de futuro de A. chilensis. Aristotelia chilensis ha demostrado tener un gran potencial terapéutico en estudios preclínicos recientes, como todos estos resultados muestran a partir de un conjunto de ensayos realizados sobre distintos modelos preclínicos, tanto in vitro como in vivo o in silico, que ponen de manifiesto un abanico de actividades terapéuticas para esta especie vegetal, ampliamente consumida en Chile y Argentina, tras la aplicación de diferentes preparados vegetales de maqui, y en las cuales se deberá ir profundizando para generar un mayor conocimiento sobre dicha especie. Sin embargo, no hay suficientes estudios clínicos que avalen su eficacia en humanos. Estos estudios en humanos son fundamentales para confirmar los resultados de los estudios preclínicos, evaluar la dosificación, identificar los efectos adversos y determinar el perfil de seguridad en una población amplia. Por lo tanto, en los próximos años podemos esperar un crecimiento en el número de estudios preclínicos de esta planta, y el comienzo de numerosos estudios clínicos para su evaluación en humanos. 5. CONCLUSIONES Por todo lo expuesto, podemos concluir lo siguiente: 1ª. Los estudios preclínicos son fundamentales para evaluar la actividad farmacológica y el perfil de seguridad de los compuestos antes de su administración en humanos. 2ª. Existen evidencias científicas suficientes sobre la capacidad antioxidante de Aristotelia chilensis. Además, muestra actividades antiinflamatoria, antimicrobiana, fotoprotectora, antinociceptiva, antidepresiva, antifúngica y reguladora de parámetros metabólicos en estudios preclínicos. 3ª. No obstante, aunque esta planta ha demostrado tener un prometedor potencial terapéutico, es necesario evaluar su seguridad, dosis y efectos adversos en humanos. 32 6. BIBLIOGRAFÍA - Acevedo CN, Arriagada JT. Plantas del Antiguo Egipto: origen, usos y presencia en Chile. Publicación Ocasional del Museo Nacional de Historia Natural 2018; 67: 1-69. - AEMPS (Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitarios). Investigación preclínica de medicamentos de uso humano. 2021 [en línea]. [Consultado en Abril 2024]. Disponible en: https://www.aemps.gob.es/medicamentos-de-uso- humano/investigacion-preclinica-de-medicamentos-de-uso-humano/ - Agulló V, González-Trujano ME, Hernandez-Leon A, Estrada-Camarena E, Pellicer F, García-Viguera C. Antinociceptive effects of maqui-berry (Aristotelia chilensis (Mol.) Stuntz). Int J Food Sci Nutr. 2021;72(7):947-955. - Basu A, Lyons TJ. Strawberries, blueberries, and cranberries in the metabolic syndrome: clinical perspectives. J Agric Food Chem. 2012;60(23):5687-92. - Basu A, Rhone M, Lyons TJ. Berries: emerging impact on cardiovascular health. Nutr Rev. 2010;68(3):168-177. - Bribiesca-Cruz I, Moreno DA, García-Viguera C, Gallardo JM, Segura-Uribe JJ, Pinto- Almazán R, Guerra-Araiza C. Maqui berry (Aristotelia chilensis) extract improves memory and decreases oxidative stress in male rat brain exposed to ozone. Nutr Neurosci. 2021;24(6):477-489. - Castillo-García EL, Cossio-Ramírez AL, Córdoba-Méndez ÓA, Loza-Mejía MA, Salazar JR, Chávez-Gutiérrez E, Bautista-Poblet G, Castillo-Mendieta NT, Moreno DA, García-Viguera C, Pinto-Almazán R, Almanza-Pérez JC, Gallardo JM, Guerra-Araiza C. In silico and in vivo evaluation of the maqui berry (Aristotelia chilensis (Mol.) Stuntz) on biochemical parameters and oxidative stress markers in a metabolic syndrome model. Metabolites. 2023;13(12):1189. - Chen L, Zhou G, Meng XS Fu HY, Mo QG, Wang YW . Photoprotection of maqui berry against ultraviolet B-induced photodamage in vitro and in vivo. Food Funct. 2020;11(3):2749-2762. - Di Lorenzo A, Sobolev AP, Nabavi SF, Sureda A, Moghaddam AH, Khanjani S, Di Giovanni C, Xiao J, Shirooie S, Tsetegho Sokeng AJ, Baldi A, Mannina L, Nabavi SM, Daglia M. Antidepressive effects of a chemically characterized maqui berry extract (Aristotelia chilensis (molina) stuntz) in a mouse model of Post-stroke depression [published correction appears in Food Chem Toxicol. 2019 Sep;131:110641]. Food Chem Toxicol. 2019;129:434-443. 33 - Fernández MP, Doll U, Vallejos, C. El maqui fruto forestal chileno famoso a nivel mundial. Fondo de Innovación para la Competitividad de la Región del Maule. Código BIP: 30.388.074-0. 2019 [en línea]. [Consultado en Junio 2024]. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/338296911_El_maqui_fruto_forestal_chilen o_famoso_a_nivel_mundial - Fitoterapia.net. Arándano rojo. 2024a [en línea]. [Consultado en Mayo 2024]. Disponible en: https://www-fitoterapia- net.eu1.proxy.openathens.net/vademecum/plantas/arandano-rojo.html - Fitoterapia.net. Goji. 2024b [en línea]. [Consultado en Mayo 2024]. Disponible en: https://www-fitoterapia-net.eu1.proxy.openathens.net/vademecum/plantas/goji.html - Fitoterapia.net. Saúco. 2024c [en línea]. [Consultado en Mayo 2024]. Disponible en: https://www-fitoterapia- net.eu1.proxy.openathens.net/vademecum/plantas/sauco.html - Fredes C, Yousef GG, Robert P, Grace MH, Lila MA, Gómez M, Gebauer M, Montenegro G. Anthocyanin profiling of wild maqui berries (Aristotelia chilensis [Mol.] Stuntz) from different geographical regions in Chile. J Sci Food Agric. 2014 Oct;94(13):2639-48. - Genskowsky E, Puente LA, Pérez-Álvarez JA, Fernández-López J, Muñoz LA, Viuda-Martos M. Determination of polyphenolic profile, antioxidant activity and antibacterial properties of maqui [Aristotelia chilensis (Molina) Stuntz] a Chilean blackberry. J Sci Food Agric. 2016;96(12):4235-42. - Joncic-Savic K, Djokic L, Stankovic N, Moric I, Pavlovic B, Senerovic L, Aydogan C, Pavic A. Maqui berry extract inhibits filamentation of Candidaalbicans and improves the antifungal efficacy of nystatin. J Funct Foods 2023; 106: 105617-105631. - Moon HD, Kim BH. Inhibitory effects of Aristotelia chilensis water extract on 2,4- Dinitrochlorobenzene induced atopic-like dermatitis in BALB/c Mice. Asian Pac J Allergy Immunol. 2020;38(3):190-199. - OMS (Organización Mundial de la Salud). Medicina Tradicional. 2023 [en línea]. [Consultado en Abril 2024]. Disponible en: https://www.who.int/es/newsroom/questions-and-answers/item/traditional-medicine - Ortiz T, Argüelles-Arias F, Illanes M, García-Montes JM, Talero E, Macías-García L, Alcudia A, Vázquez-Román V, Motilva V, De-Miguel M. Polyphenolic Maqui Extract as a Potential Nutraceutical to Treat TNBS-Induced Crohn's Disease by the Regulation of Antioxidant and Anti-Inflammatory Pathways. Nutrients. 2020;12(6):1752. 34 - POWO (Plants of the world online). Aristotelia chilensis (Molina) Stuntz. 2023 [en línea]. [Consultado en Abril 2024]. Disponible en: https://powo.science.kew.org/taxon/urn:lsid:ipni.org:names:19666-2 - Salinas J, Caballé G. Maqui, el fruto silvestre de mayor importancia en Chile. 1ª edición. Chile: INFOR; 2020. - Salinas SJ, Fuentes Díaz V, González González M, Pavez C, Soto Aguirre D. Monografía de Maqui Aristotelia chilensis (Mol.) Stuntz. 2012 [en línea]. [Consultado en Abril 2024]. Disponible en:https://doi.org/10.52904/20.500.12220/20243 - Schmeda-Hirschmann G, Jiménez-Aspee F, Theoduloz C, Ladio A. Patagonian berries as native food and medicine. J Ethnopharmacol. 2019 Sep 15;241:111979. - Suwalsky M, Vargas P, Avello M, Villena F, Sotomayor CP, 2008. Human erythrocytes are affected in vitro by flavonoids of Aristotelia chilensis (Maqui) leaves. Int J Pharm 2008;363:85-90. - Vega-Galvez A, Rodríguez A, Stucken K. Antioxidant, functional properties and healthpromoting potential of native South American berries: a review. J Sci Food Agric. 2021;101(2):364-378. - Yamazaki K, Ishida K, Otsu W, Muramatsu A, Nakamura S, Yamada W, Tsusaki H, Shimoda H, Hara H, Shimazawa M. Delphinidins from Maqui Berry (Aristotelia chilensis) ameliorate the subcellular organelle damage induced by blue light exposure in murine photoreceptor-derived cells. BMC Complement Med Ther. 2024;24(1):3-16. - Zhou G, Chen L, Sun Q, Mo QG, Sun WC, Wang YW. Maqui berry exhibited therapeutic effects against DSS-induced ulcerative colitis in C57BL/6 mice. Food Funct. 2019;10(10):6655-6665. 35 ANEXOS ANEXO 1. RELACIÓN DE ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS - ACH: Aristotelia chilensis. - ACWE: Extracto acuoso de A. chilensis (Aristotelia chilensis water extract). - CAT: Catalasa - DST: Prueba de natación desesperada (Despair swimming test). - D3G5G: delphinidin 3,5-O-diglucoside. - D3S5G: delphinidin 3-O-sambudioside-5-O-glucoside. - GSH: Glutation reducido. - MBE: Extracto de baya maqui (Maqui berry extract). - MDA: Malondialdehído. - MEE: Fracción etil acetato de extracto de baya maqui. - MPO: mieloperoxidasa. - NO: Óxido nitroso - OCR: Tasa de consumo de oxígeno (Oxygen consumption rate). - PAT: Prueba de evitación pasiva (Passive avoidance test). - ROS: Especies reactivas de oxígeno (Reactive oxygen species). - SM: Síndrome metabólico. - SOD: Superóxido dismutasa. - TMA: Antocianinas monoméricas totales (Total monomeric anthocyanin). - TNBS: Ácido trinitro benceno sulfónico (2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid). - TST: Prueba de suspensión de cola (Tail suspension test). ANEXO 2 Tabla1. Relación de artículos científicos extraídos de PubMed y resumen de los modelos preclínicos descritos en ellos. Tabla 2. Relación de artículos científicos extraídos de Scopus y resumen de los modelos preclínicos descritos en ellos. ANEXO 2 Tabla1. Relación de artículos científicos extraídos de PubMed y resumen de los modelos preclínicos descritos en ellos. Autores y año Componentes Ensayo Reactivo biológico Tratamiento Parámetros evaluados Resultados Di Lorenzo et al., 2019 Antocianinas monoméricas (TMA). Experimento in vivo: modelo murino. Ratones BALB/c machos de 5 semanas de edad, entre 20 y 25 gramos de peso. Administración intraperitoneal de 3 dosis de extracto de baya de maqui al día durante 7 días. - Comportamiento depresivo: despair swimming test (DST). - Evaluación del comportamiento: tail suspension test (TST). - Peroxidación lipídica. - Actividad superóxido dismutasa. - Actividad catalasa. - Reducción de nivel de glutatión. - Contenido de proteínas en homogenizado de tejido cerebral. MBE es capaz de ejercer actividades antioxidantes y antidepresivas in vivo en un sistema modelo de la depresión post-ictus en ratones. Los biomarcadores de estrés oxidativo medidos podrían ser marcadores predictivos de síntomas depresivos en niveles preclínicos. Zhou et al., 2019 Compuestos fenólicos (en especial quercetina y kaempferol). - Estudio in vivo. - Comparativa de actividades antioxidante y antiinflamatoria de diferentes fracciones in vitro. - Ratones macho wild-type C57BL/6 de seis semanas de edad. - Línea celular macrófagos RAW 264.7. Administración de agua para beber con un contenido de 3% (w/v) de los diferentes tratamientos (fracciones de MBE y control). - Concentración de proteínas y niveles de NO, MDA y GSH en homogeneizados de colon. - Longitud de colon. - Niveles de TNF alfa, IL-1B y MPO en suero. - Flora intestinal. La fracción de etil acetato del extracto acuoso de baya maqui es la más abundante en compuestos antioxidantes y antiinflamatorios. Además, esta fracción muestra efecto terapéutico sobre la colitis ulcerosa. Chen et al., 2020 Fenoles (ácido gálico) y flavonoides. - Estudio de viabilidad celular en queratinocitos humanos HaCaT. - Estudio in vivo de fotoprotección de baya maqui en ratones. - Queratinocitos humanos HaCaT. - 48 Ratones BALB/c machos de unos 20 gramos. Tratamiento de pocillos con la fracción etil acetato de extracto de maqui (MEE) (línea celular) y tratamiento de ratones con dosis baja, media y alta de MEE. - Comet test (daño celular). - Determinación de NO, SOD, CAT y GSH en línea celular queratinocitos humanos HaCaT. - Determinación de MDA, SOD, CAT, y GSH en piel de ratón. - Examen histopatológico. - Western blotting análisis (detección de proteínas ERK, p- ERK, p-38, p-p38). - ELISA (niveles de TNF-alfa, IL-4 y IL-6). MEE revierte el daño de ADN causado por la exposición a UVB, y normaliza valores de SOD, CAT, NO y GSH. Revierte el engrosamiento de la piel en ratones de manera dosis dependiente. Previene la inflamación. El maqui puede ser un agente terapéutico efectivo contra el daño de la piel por radiación UVB. Moon y Kim, 2020 Antocianinas (delfinidinas). Estudio in vitro de efecto inhibitorio de atopía, y estudio in vivo en modelo de ratones con dermatitis atópica inducida. - Línea célula RAW 264.7. - Ratones macho BALB/c de siete semanas de edad. - Ratones macho BALB/c de cinco semanas de edad. Aplicación de 150 µl de extracto acuoso de A. chilensis (ACWE) sobre la piel del área de la espalda dañada, 5 veces a la semana durante 6 semanas. - Actividad antioxidante. - Porcentaje de inhibición de inflamación. - Daño cutáneo macroscópico. - IgE en suero. - Citocinas. El extracto acuoso de maqui presenta gran efecto antioxidante, con baja citotoxicidad en vivo. Es muy efectivo como ayuda para la recuperación del daño. Hay varios componentes de ACWE que trabajan de manera sinérgica (no solo delfinidinas). Ortiz et al., 2020 Polifenoles. Estudio in vivo en modelo de ratones con enfermedad de Crohn inducida. Ratones BALB/c machos de entre 12-14 semanas de edad y peso entre 19 y 35 gramos. Administración diaria de extracto de baya maqui (ACH) mediante sondaje oral durante 4 días tras la inducción de Crohn (grupo tratamiento) o 1 semana antes de la inducción (grupo preventivo). - Evaluación macroscópica del colon. - Inmunohistoquímica de macrófagos. - Estudio histopatológico. - Proteínas citoplasmáticas y Western Blot análisis. Los ratones con tratamiento preventivo con ACH están protegidos de la enfermedad de Crohn inducida por TNBS. La administración oral de ACH previene la pérdida de peso y reduce el daño al tejido colónico. Además, hay reducción de la inflamación transmural y un aumento de la recuperación de la arquitectura mucosa y de su función mucosecretora. Agulló et al., 2021 Antocianinas (delfinidinas y cianidinas). Estudio in vivo. Ratones macho Swiss Webster de entre 25 y 30 gramos de peso. Ingesta de zumo de maqui rico en antocianidinas; Administración parenteral. - Actividad antinociceptiva (Formalin test). - Daño gástrico (escaneado de estómago). - Formalin test. Se observa evidencia de las propiedades de la baya maqui para el tratamiento del dolor y sugiere que una ingesta controlada puede ser una alternativa o complemento en la terapia analgésica. Bribiesca-Cruz et al., 2021 Flavonoides, antocianinas (especialmente delfinidinas y cianidinas). Estudio in vivo de ratas expuestas a ozono. Ratas macho Sprague Dawley de entre 250 y 300 gramos. Sondaje oral de extracto acuoso de baya maqui disuelto en agua. - Test de evitación pasiva (PAT) (latencia de detección). - Western blot (contenido de proteínas en homogenizado de cerebro). - MDA. - Actividad SOD. El MBE mejora la memoria a corto y largo plazo en las ratas. El tratamiento con baya maqui disminuyó significativamente los biomarcadores de estrés oxidativo en el cerebro de ratas expuestas a O3. Yamazaki et al., 2024 Delfinidinas: - delphinidin 3- O- sambudioside- 5-O-glucoside (D3S5G) - delphinidin 3,5-O- diglucoside (D3G5G). Estudio in vitro. Línea celular 661W de retina. Pretratamiento de la línea celular mediante la suplementación de pocillos. - Tasa de consumo de oxígeno (OCR) - Producción de especies radicales de oxígeno (ROS). La mitocondria es susceptible al daño por luz azul en las células fotorreceptoras de la retina. Las delfinidinas contenidas en el extracto de maqui demuestran efecto protector contra este daño celular, mostrando utilidad en la salud de la visión. Tabla 2. Relación de artículos científicos extraídos de Scopus y resumen de los modelos preclínicos descritos en ellos. Autores y año Componentes Ensayo Reactivo biológico Tratamiento Parámetros evaluados Resultados Castillo García et al., 2023 Glicósidos y diglicósidos de delfinidinas, cianidinas. Ensayo in vivo modelo murino de síndrome metabólico inducido. Estudio in silico de las moléculas bioactivas presentes en la baya maqui. Ratas adultas de entre 250 y 300 gramos machos y hembras (40 y 40), a las que se les induce síndrome metabólico. Administración de polvo liofilizado de baya maqui diluido en agua. - Peso (monitorización). - Presión sanguínea (monitorización). - Análisis de muestra de sangre. - Malondialdehido (MDA). - Actividad superóxido dismutasa (SOD) - Proteínas carbonilos. El consumo de baya maqui puede tener un efecto beneficioso para las complicaciones asociadas al síndrome metabólico (SM) como el aumento de peso, lípidos, metabolismo de la glucosa e hipertensión. Supone también un efecto beneficioso para el estrés oxidativo asociado al SM. Sus principios activos pueden ser ligandos de varias dianas biológicas de estas enfermedades, tiene gran potencial terapéutico. Joncic Savic et al., 2023 Antocianinas (en especial delfinididnas). Estudio de viabilidad in vitro. Inhibición de filamentación bajo diferentes condiciones de crecimiento y en combinación con nistatina. Estudio in vivo sobre pez cebra y evaluación de toxicidad. Pez cebra (Danio rerio) y líneas celulares de Candida albicans: C. albicans ATCC10231 y C. albicans ATCCMYA-2876™ Tratamiento de los embriones de pez cebra con extracto de baya maqui (MBE), nistatina y su combinación en los pocillos. - Susceptibilidad antifúngica. - Inhibición de filamentación en distintas condiciones de crecimiento. - Efecto de la combinación nistatina-MBE. - Evaluación de toxicidad in vivo. - Eficacia antifúngica in vivo. MBE puede atenuar la patogenicidad de C. albicans de diferentes fenotipos de filamentación. En combinación con nistatina, tiene actividad antifúngica sinérgica, sin toxicidad in vivo.