Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-amino-propano-1,3-diol potencialmente activos como antivirales

Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 1 UNIVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE FARMACIA DISEÑO, SÍNTESIS Y CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE COMPUESTOS DERIVADOS DE 2-AMINO-PROPANO-1,3- DIOL POTENCIALMENTE ACTIVOS COMO ANTIVIRALES CLAUDIA MURIANA CAMACHO Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 2 Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 3 UNIVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE FARMACIA TRABAJO FIN DE GRADO GRADO EN FARMACIA DISEÑO, SÍNTESIS Y CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE COMPUESTOS DERIVADOS DE 2-AMINO-PROPANO-1,3-DIOL POTENCIALMENTE ACTIVOS COMO ANTIVIRALES CLAUDIA MURIANA CAMACHO Sevilla, 17 de junio de 2019 Departamento de Química Orgánica y Farmacéutica Tutores: MARGARITA VEGA HOLM y JOSÉ MANUEL VEGA PEREZ Tipología del proyecto: Experimental Vº Bº MARGARITA VEGA HOLM Vº Bº JOSÉ MANUEL VEGA PEREZ Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 4 Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 5 RESUMEN Los adenovirus (AdV) son virus eucariotas con 36000 pares de bases, producen infecciones que son muy comunes y se dan durante todo el año. Las poblaciones susceptibles a la infección por adenovirus (AdV) incluyen niños, pacientes inmunocomprometidos y reclutas militares. Afectan mucho al tracto respiratorio y al tracto alimentario de los niños, considerándose endémico en la población pediátrica. Hoy en día se encuentran más de 50 serotipos distintos distribuidos en siete especies (A-G), con distinto receptor y distinto tropismo, pertenecientes al género Mastadenovirus de la familia Adenoviridae. Los síntomas de las infecciones por HAdV son frecuentemente leves y pasajeras en pacientes sanos. Pero estas infecciones han ido preocupando en los últimos años debido a un número creciente de pacientes con el sistema inmune debilitado, en los cuales, la infección persiste. Los pacientes de trasplante de células madre hematopoyéticas y órganos sólidos son sometidos a regímenes inmunosupresores severos y no se puede eliminar eficazmente la infección por el virus. En estos pacientes, las infecciones por AdV pueden convertirse en infección diseminada y ser mortal. La única vacuna oral aprobada que comprende los tipos 4 y 7 de HAdV se ha utilizado en los EE. UU. militar durante 40 años, pero no ha sido aprobado para su uso en la población general. A pesar del impacto clínico significativo, actualmente no hay terapias antivirales aprobadas para las infecciones por adenovirus humanos (HAdV). Los investigadores están desarrollando nuevos agentes y reutilizando los existentes, como Cidofovir, Ribavirina y también otros compuestos no análogos de nucleosidos, así como realizando programas de reposicionamiento de fármacos. Este trabajo se centra en el diseño y síntesis de nuevos compuestos derivados del 2- aminopropano-1,3-diol, para poder comprobar su actividad frente a AdV. Para ello se han sintetizado y caracterizado dos precursores y cuatro productos finales que presentan rasgos estructurales que podrían conferir actividad anti-adenoviral. Palabras clave: Adenovirus, Cidofovir, anti-adenoviral, Ribavirina, derivados de ureas Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 6 GLOSARIO DE ABREVIATURAS AdV: adenovirus HAdV: adenovirus humano TP: proteína terminal MLP: promotor tardío ADNds: ADN de doble cadena HAdV-3: adenovirus humano tipo 3 HAdV-7: adenovirus humano tipo 7 HAdV-B3, B4, B7: adenovirus humanos especie B y tipo 3, especie B y tipo 4, especie B y tipo 7 AdV 14: adenovirus 14 pTP: proteína preterminal HAdV-C5: adenovirus humano especie C serotipo 5 HAdV-C6: adenovirus humano especie C serotipo 6 CMV: citomegalovirus HCMV: citomegalovirus humano VHC: virus hepatitis C VRS: virus respiratorio sincitial VHS: virus herpes simple PCR: reacción en cadena de la polimerasa VIH-1: virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 AdV-2: adenovirus tipo 2 Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 7 ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................... 8 2. ANTECEDENTES ....................................................................................................................... 13 3. OBJETIVOS ............................................................................................................................... 20 4. METODOLOGÍA ........................................................................................................................ 21 4.1. Métodos generales ........................................................................................................... 21 4.2. Procedimiento para la obtención de ureas derivadas de 2-aminopropano-1,3-diol ....... 21 4.2.1. 2-Amino-N-(2-cloro-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-propano-1,3-diol (20) 22 4.2.2. 2-Amino-N-(2,4-dimetoxi)fenilaminocarbonil-propano-1,3-diol (21) .................. 22 4.3. Procedimiento de obtención de los diésteres derivados ................................................. 22 4.3.1. 2-Amino-N-(2-clorofenil-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-1,3-di-O-4- metilbenzoilpropano-1,3-diol (22) .................................................................................... 23 4.3.2. 2-Amino-N-(2,4-dimetoxifenil)aminocarbonil-1,3-di-O-4-metilbenzoil-propano- 1,3-diol (23) ......................................................................................................................... 23 4.3.3. 2-Amino-N-2-clorofenil-5-trifluorometilfenilaminocarbonil-1,3-di-O-4- trifluorometilbenzoil-propano-1,3-diol (24) ....................................................................... 24 4.3.4. 2-Amino-N-2,4-dimetoxifenilaminocarbonil-1,3-di-O-4-trifluorometilbenzoil- propano-1,3-diol (25) .......................................................................................................... 25 5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ...................................................................................................... 25 5.1. Diseño de las moléculas objetivos. Análisis retrosintético .............................................. 25 5.2. Síntesis de los precursores y de los productos finales ..................................................... 27 5.3. Caracterización estructural .............................................................................................. 29 6. CONCLUSIONES ....................................................................................................................... 31 7. REFERENCIAS ........................................................................................................................... 31 8. ANEXOS ................................................................................................................................... 35 Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 8 1. INTRODUCCIÓN Los adenovirus (AdV) son virus de ADN que generalmente causan infecciones leves que afectan al tracto respiratorio superior o inferior, al tracto gastrointestinal o la conjuntiva (Lynch and Kajon, 2016). Son eucariotas icosaedricos, no están envueltos (Graziano et al., 2013). Han sido reconocidos como patógenos comunes capaz de infectar una amplia gama de hospedadores, desde su descubrimiento en tejidos de adenoides humanos en 1953 (Malmberg et al., 2017). Son responsables de enfermedades que van desde infecciones respiratorias y oculares agudas hasta más graves, enfermedades entéricas, pero rara vez se asocian con síntomas clínicos graves en personas sanas (Sanchez-Cespedes et al., 2014). Puede causar un amplio espectro de enfermedades en niños y adultos, incluida la infección respiratoria aguda, gastroenteritis, queratoconjuntivitis epidémica. Las poblaciones susceptibles a la infección por AdV incluyen niños, pacientes inmunocomprometidos y reclutas militares (Chen and Tian, 2018). El número de infecciones por AdV diseminado continúa aumentando principalmente debido al uso creciente de tratamientos inmunosupresores. Los receptores de trasplantes de órganos sólidos o de células madre hematopoyéticas, principalmente en unidades pediátricas, presentan una alta morbilidad y mortalidad debido a estas infecciones (Sanchez-Cespedes et al., 2014). Hasta la fecha, se han identificado más de 50 tipos de AdV, y estos se clasifican en siete especies, A – G (Tabla 1). Históricamente, los AdV se clasificaron principalmente en base a la serología, su oncogenicidad en roedores y su capacidad para aglutinar glóbulos rojos humanos y animales (Arnberg, 2012). Las infecciones por AdV son muy comunes y pueden ocurrir durante todo el año. En particular, los niños se infectan comúnmente en el tracto respiratorio y en el tracto alimentario, y el AdV puede considerarse endémico en la población pediátrica. Pertenecen al género Mastadenovirus de la familia Adenoviridae. Los AdV se asocian con una amplia variedad de síntomas clínicos en los seres humanos, como la enfermedad respiratoria superior aguda, la gastroenteritis, la cistitis hemorrágica y la conjuntivitis. Una infección puede provocar una enfermedad grave, pero las infecciones por AdV suelen ser autolimitadas en individuos inmunocompetentes. En individuos inmunocomprometidos, la situación es bastante diferente. Para estas personas, incluidos los pacientes inmunodeprimidos para trasplante de células madre hematopoyéticas o de órganos sólidos, pacientes con SIDA y pacientes con inmunodeficiencias genéticas, una infección por AdV puede dar lugar a enfermedad diseminada y fallo multiorgánico. Se han informado tasas de letalidad por encima del 50% para niños inmunocomprometidos con Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 9 infecciones por AdV y en pacientes pediátricos con trasplante de médula ósea en particular, la incidencia de la infección por AdV es mayor que la de los adultos. (Öberg et al., 2012). Varios AdV diferentes han sido aislados de pacientes inmunocomprometidos, más frecuentemente de las especies A, B, o C. Los serotipos de las especies B están predominantemente asociados con síndromes renales, y los serotipos de la especie C son generalmente asociados a la hepatitis. En los últimos años, las infecciones con AdV serotipo 31 especie A se han informado cada vez más, y ocurren a menudo en pacientes con infecciones que involucran serotipos múltiples de AdV, ocasionalmente con un resultado letal (Andersson et al., 2010). Las infecciones virales de ADN de doble cadena (ADNds) constituyen una complicación importante después del trasplante de órganos sólidos y células madre (Camargo et al., 2016). Diferentes serotipos muestran diferentes tropismos tisulares y se correlacionan con manifestaciones clínicas de infección. Los serotipos predominantes difieren entre países o regiones y cambian con el tiempo (Lynch et al., 2011). Tabla 1. Clasificación y características de adenovirus humanos (Arnberg, 2012) Especies Serotipos Receptores Tropismo A 12,18,31 CAR Respiratorio y entérico B1 3,7,16,21,50 CD46,DSG2,CD80,CD86 Respiratorio y ocular B2 11,14,34,35 11,14,34,35 Renal, respiratorio y ocular C 1,2,5,6 CAR,VCAM- 1,HSPG,MHC1-α2,SR Respiratorio, ocular, linfoide y hepático D 8-10,13,15,17,19,20,22- 30,32,33,36- 39,4249,51,53,54 SA,CD46,CAR Entérico y ocular E 4 CAR Respiratorio y ocular F 40,41 CAR Entérico G 52 ND Entérico Hay un problema con respecto a pacientes inmunocomprometidos, ya que cada vez este grupo crece más (Andersson et al., 2010). El adenovirus humano tipo 3 (HAdV-3) y adenovirus Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 16 Figura 5. Estructura de la ribavirina Otros nuevos compuestos análogos de nucleosidos se han descrito con actividad, entre otros filociclovir (6) y 6-azacitidina (7) que aparecen en la (Figura 6), se identificaron como compuestos activos después de probar una serie de compuestos in vitro (Wold et al., 2019). Figura 6. Estructura del filociclovir y de 6-azacitidina El compuesto 5-aminouracilo y derivados de 5-amino-6-azauracilo, como son los compuestos (8), (9) y (10) que aparecen en la (Figura 7), demostraron ser altamente efectivos para suprimir la replicación de los HAdV in vitro, mostrando actividad inhibidora contra el HAdV. Estos derivados son activos contra el virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y el Virus de Epstein Barr (Nikitenko et al., 2018). Figura 7. Compuestos derivados del 5-aminouracilo Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 17 Se construyó una serie de 1,2,3-triazolil-3-hidroxi-quinazolina-2,4 (1H, 3H) -diones utilizando un método de cicloadición de 1,3-dipolar (CuAAC) azida-alquino catalizado con cobre (Cu). Evaluándolas in vitro para determinar la actividad antiviral, varios compuestos mostraron una excelente actividad específicamente contra el virus vaccinia y el AdV. El compuesto (11), que se ve en la (Figura 8) fue el más potente contra el adenovirus tipo 2 (AdV-2) (Kang et al., 2016). Figura 8. Compuesto 11 El reposicionamiento de fármacos por parte de las agencias reguladoras para otras indicaciones está surgiendo como una alternativa valiosa para el desarrollo de nuevas terapias antimicrobianas, que conlleva menores riesgos y costos que el desarrollo de nuevos fármacos antimicrobianos (Marrugal-Lorenzo et al., 2018). Los investigadores intentan reutilizar distintos medicamentos aprobados para otras indicaciones, con el fin de conseguir actividad antiadenoviral. Mifepristona (12, Figura 9), un fármaco esteroide sintético disponible en el mercado, mostró una actividad antiadenoviral humana in vitro significativa a bajas concentraciones micromolares con poca citotoxicidad. Ensayos sugieren que este medicamento podría afectar el transporte de microtúbulos, interfiriendo con la entrada del virus en el núcleo y, por lo tanto, inhibe la infección por HAdV (Marrugal-Lorenzo et al., 2018). Figura 9. Estructura de mifepristona Los AdV, que son patógenos humanos comunes, también son susceptibles a los glucósidos cardíacos como la digoxina (13) y la digitoxina (14) (Figura 10), que son capaz de alterar la replicación del genoma de AdV mediante la alteración de la maquinaria de Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 18 empalme de ARN previo del huésped (Amarelle and Lecuona, 2018). Inhibio la replicación de AdV (Wold et al., 2019). Figura 10.Estructura de digoxina y digitoxina Los fármacos antihelmínticos derivados de salicilanilida restringen la infección por HCMV. Mostraron una actividad antiadenoviral significativa a concentraciones micromolares bajas con poca citotoxicidad. Los ensayos muestran diferencias en la forma en que los medicamentos ejercen la actividad antiadenoviral. Niclosamida (15) y rafoxanida (16) (Figura 11) dirigen el transporte de la partícula de HAdV desde el endosoma a la envoltura nuclear, mientras que la oxiclozanida (17) (Figura 11) se dirige específicamente al AdV inmediatamente antes de la transcripción del gen E1A (Marrugal-Lorenzo et al., 2019). Figura 11. Estructura de niclosamida, rafoxanida y oxiclozanida Se identifico que los fenoles en el extracto de té negro y dioscina, un compuesto extraído de la papa del aire tienen actividad contra HAdV in vitro (Wold et al., 2019). Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 19 El grupo de investigación donde se ha desarrollado este Trabajo de Fin de Grado, en colaboración con el grupo del Dr. Javier Sánchez Céspedes del Instituto de Biomedicina de Sevilla, trabaja en el diseño, síntesis y evaluación biológica de nuevos compuestos con posible actividad antiadenovirus. Está centrado en la búsqueda de nuevos prototipos que puedan presentar actividad biológica y puedan servir como punto de partida para el desarrollo de nuevos candidatos a fármacos. En este sentido han descrito dos tipos de estructuras, basadas en esqueletos de piperazin-2-ona (Sanchez-Cespedes et al., 2014) y piperazinas 2-sustituidas (Sánchez-Céspedes et al., 2016), obteniendo nuevos compuestos, algunos de los cuales están siendo evaluados en modelo animal. Dentro de esta línea, el grupo está trabajando en la búsqueda de compuestos que puedan ser análogos al cidofovir. En nuestra aproximación para modificar el esqueleto del cidofovir distinguimos tres puntos de variabilidad estructural: La cadena acíclica de tres átomos de carbono (que puede considerarse que proviene del 3-amino-1,2-propanodiol, el grupo fosfonato en el alcohol secundario, y la base nitrogenada inserta en el nitrógeno terminal de la cadena (Figura 12). Figura 12. Análisis de los puntos de variabilidad estructural en el cidofovir Se están preparando análogos al Cidofovir basados en el reemplazo de la parte nitrogenada y el grupo fosfonato, manteniendo en una primera aproximación el esqueleto central de 3- amino-propano-1,2-diol y en otra se empleará como esqueleto el isómero de posición serinol (2-amino-propano-1,3-diol). El trabajo realizado en este Trabajo de Fin de Grado se encuadra en esta segunda aproximación. Se emplean como prototipos los compuestos (18) y (19) que presentan 66% y 25% de inhibición de la replicación viral respectivamente, resultados previos del grupo en esta línea de trabajo (Figura 13). Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 20 Figura 13. Estructuras de los compuestos 18 y 19 escogidos como prototipos 3. OBJETIVOS El presente Trabajo Fin de Grado (TFG) se engloba dentro de una de las líneas de investigación llevada a cabo en el Departamento de Química Orgánica y Farmacéutica, basada en la búsqueda, diseño, síntesis y caracterización de nuevos compuestos con potencial actividad anti-adenoviral. Se plantean tres objetivos parciales con el fin de conseguir una meta final, que es la obtención de una serie de análogos de compuestos activos, mediante la introducción de modificaciones en su estructura. 1) Diseño de nuevos compuestos. En base a las estructuras de los prototipos escogidos (compuestos 18 y 19) resultados anteriores de la propia línea de investigación, se plantea el diseño de los nuevos compuestos basados en el esqueleto de serinol y mediante introducción de modificaciones en la función urea y en los sustituyentes del anillo aromático en la función éster. Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 21 2) Síntesis química de los nuevos compuestos diseñados. Emplear una metodología sintética, sencilla y corta que transcurra con elevado rendimiento y que permita obtener en el menor número de pasos posible una pequeña colección de compuestos análogos. 3) Caracterización de los nuevos compuestos. Los nuevos compuestos obtenidos se someten a estudios que permiten confirmar la estructura propuesta. Como son la realización de sus espectros de Masas y de Resonancia Magnética Nuclear. Para alcanzar este objetivo se cuenta con la colaboración de los Servicios de Espectrometría de Masas y de Resonancia Magnética Nuclear, respectivamente, del CITIUS de la Universidad de Sevilla. 4. METODOLOGÍA 4.1. Métodos generales Todos los reactivos, disolventes y materiales de partida fueron obtenidos a partir de proveedores comerciales y usados directamente sin previa purificación. Las evaporaciones fueron realizadas a presión reducida en rotavapor. Las reacciones fueron monitorizadas por cromatografía en capa fina (CCF) en soportes de aluminio Kieselgel 60 F254 y detector UV para su visualización. La cromatografía en columna fue realizada en Silica Gel 60. Los rendimientos obtenidos proceden de los productos purificados. Los espectros de masas (MS) fueron registrados en un espectrómetro de masas Micromass AUTOSPECQ mediante las técnicas de ionización química (CI) a 150 eV y bombardeo de átomos rápidos (FAB) usando una matriz de tioglicerol. Los espectros de masas de alta resolución (HRMS) se registraron con una resolución de 10.000. Los espectros de resonancia magnética nuclear (NMR) fueron realizados a 25ºC en un espectrómetro Bruker AV500 a 500 MHz para 1H y 125 MHz para 13C. Los desplazamientos químicos están expresados en ppm en la escala relativa al tetrametilsilano (TMS). 4.2. Procedimiento para la obtención de ureas derivadas de 2-aminopropano-1,3-diol A una disolución del correspondiente isocianato (3,6 mmol, 1,2 equivalentes) en diclorometano seco (15 ml), se adiciona gota a gota una disolución de 2-aminopropano-1,3- diol (3 mmol, 1 equivalente) en metanol (1ml), manteniéndose en agitación a temperatura ambiente, hasta que la cromatografía en capa fina indica que el producto de partida ha reaccionado. Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 22 4.2.1. 2-Amino-N-(2-cloro-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-propano-1,3-diol (20) El producto precipita en el medio de reacción, y se aisla mediante filtración. Se resuspende en éter, manteniéndose en agitación dos horas. La filtración proporciona un producto cromatográficamente puro (512 mg, 56% rendimiento); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)  8,67 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,64 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,28-7,26 (m, 2H), 4,72 (bs, 2H), 3,69- 3,62 (m, 1H), 3,55-3,42 (m, 4H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)  154,4, 137,8, 130,2, 124,3, 118,1, 116,2, 116,1,, 60,1, 52,9. HRMS (m/z): calcd. para C11H12N2O3F3ClNa 335,0381 M+Na+; encontrado 335,0381. 4.2.2. 2-Amino-N-(2,4-dimetoxi)fenilaminocarbonil-propano-1,3-diol (21) Se obtuvo el producto como un sólido mediante cromatografía en columna empleando diclorometano-metanol (20:1) como eluyente (719 mg, 89 % rendimiento); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)  7,87 (s, 1H9), 7,85 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,43 (dd, J = 1,8 Hz, J = 8,7 Hz, 1H), 4,64 (t, J = 4,7 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,64- 3,57 (m, 1H), 3,51-3,38 (m, 4H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)  154,3, 154,2, 148,9, 122,9, 119,5, 104,0, 98,7, 60,5, 55,6, 55,2, 52,9. HRMS (m/z): calcd. para C12H18N2O5Na 293,1108 M+Na+; encontrado 293,1112. 4.3. Procedimiento de obtención de los diésteres derivados A una disolución del precursor (0,5 mmol, 1 eq) en diclorometano seco (30ml) se adiciona 4- dimetilaminopiridina (1,25 mmol, 2,5 eq), y se añade el correpondiente cloruro de acilo (1,1 mmol, 2,2 eq) disuelto en diclorometano (2 ml). Se deja en agitación a temperatura ambiente Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 23 varios días hasta que la cromatografía en capa fina indica que el producto de partida se ha agotado. El medio de reacción se lava sucesivamente con HCl (2 x 20ml), HCO3Na (2 x 20ml), disolución saturada de sal (20ml). Se seca sobre Na2SO4, se filtra y se evapora a sequedad. 4.3.1. 2-Amino-N-(2-clorofenil-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-1,3-di-O-4-metilbenzoil- propano-1,3-diol (22) Se obtuvo el producto como un sólido mediante cromatografía en columna empleando diclorometano-metanol (200:1) como eluyente (178 mg, 65% rendimiento). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)  8,56 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,2 Hz, 4H), 7,66 (d, J = 8,2 Hz, 1H) 7,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,1 Hz, 5H), 4,59-4,43 (m, 5H), 2,39 (bs, 6H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)  165,6, 165,5, 143,8, 137,3, 1302, 129,3, 129,2, 126,7, 124,9, 118,8, 116,7, 63,7, 47,6, 21,1. HRMS (m/z): calcd. para C27H24ClN2F3O5Na 571,1224 M+Na+; encontrado 501,1218. 4.3.2. 2-Amino-N-(2,4-dimetoxifenil)aminocarbonil-1,3-di-O-4-metilbenzoil-propano-1,3- diol (23) Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 24 Se obtuvo el producto como un sólido mediante cromatografía en columna empleando diclorometano-metanol (70:1) como eluyente (202 mg, 80% rendimiento). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)  7,95-7,82 (m, 6H), 7,32 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 7,9 Hz, 1H) 6,59-6,57 (m, 1H), 6,47-6,44 (m, 1H), 4,52-4,37 (m, 5H), 3,80 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 2,39 (s, 6H) 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)  165,5, 154,9, 154,6, 149,0, 129,4, 129,2, 126,7, 122,3, 119,7, 104,1, 98,7, 64,0, 55,7, 55,2, 47,2, 21,1. HRMS (m/z): calcd. para C28H30N2O7Na 529,1945 M+Na+; encontrado 529,1937. 4.3.3. 2-Amino-N-2-clorofenil-5-trifluorometilfenilaminocarbonil-1,3-di-O-4- trifluorometilbenzoil-propano-1,3-diol (24) Se obtuvo el producto como un sólido mediante cromatografía en columna empleando diclorometano-metanol (45:1) como eluyente (202 mg, 80% rendimiento). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)  8,62 (d, J 1,3 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,07(d, J = 8,4 Hz, 4H), 7,77 (d, J = 8,3 Hz, 4H), 7,67 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 1,5 Hz, J = 8,3 Hz, 1H) 4,61-4,49 (m, 5H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)  165,2, 154,5, 143,7, 137,3, 130,2, 130,1, 128,8, 127,8, 92,5, 63,9, 47,5. HRMS (m/z): calcd. para C27H18ClF9N2O5Na 679,0658 M+Na+; encontrado 679,0652. Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 25 4.3.4. 2-Amino-N-2,4-dimetoxifenilaminocarbonil-1,3-di-O-4-trifluorometilbenzoil-propano- 1,3-diol (25) Se obtuvo el producto como un sólido mediante cromatografía en columna empleando diclorometano-metanol (30:1) como eluyente (202 mg, 80% rendimiento). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)  8,14-8,01 (m, 4H), 7,87-7,83 (m, 3H), 7,78-7,73 (m, 3H), 7,07 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,59-6,56 (m, 1H), 6,46-6,41(m, 1H), 4,55-4,44 (m, 5H), 3,79 (s, 3H), 3,73 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)  165,4, 154,1, 143,7, 130,1, 128,8, 127,8, 104,1, 98,7, 92,1, 64,1, 55,6, 55,2, 47,2. HRMS (m/z): calcd. para C28H24F6N2O7Na 637,1385M+Na+; encontrado 637,1379. 5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 5.1. Diseño de las moléculas objetivos. Análisis retrosintético Atendiendo a las estructuras químicas vistas anteriormente como compuestos con actividad antiadenoviral, compuestos (18) y (19), ureas derivadas del serinol, se puede proponer un esqueleto general (Figura 14) en el que se aprecien los puntos de variabilidad estructural en los que actuar para el diseño de nuevos análogos, así como incrementar el tamaño de la colección de análogos diferentes, relacionados estructuralmente. La posterior evaluación biológica de estos compuestos permitirá el estudio relación estructura-actividad y conducirá el proceso de optimización de los más activos. Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 32  Chen S, Tian X. Vaccine development for human mastadenovirus. J Thorac Dis 2018;10:S2280–94.  Chiang LC, Chiang W, Liu MC, Lin CC. In vitro antiviral activities of Caesalpinia pulcherrima and its related flavonoids. 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ANEXOS  Espectro de 1H y 13C NMR de 2-Amino-N-(2-cloro-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil- propano-1,3-diol (20) 36  Espectro de 1H y 13C NMR de 2-Amino-N-(2,4-dimetoxi)fenilaminocarbonil-propano- 1,3-diol (21) 37  Espectro de 1H y 13C NMR de 2-Amino-N-(2-clorofenil-5- trifluorometil)fenilaminocarbonil-1,3-di-O-4-metilbenzoil- propano-1,3-diol (22) 38  Espectro de 1H y 13C NMR de 2-Amino-N-(2,4-dimetoxifenil)aminocarbonil-1,3-di-O- 4-metilbenzoil-propano-1,3-diol (23) 39 Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 36 Espectro de 1H-NMR de 2-Amino-N-(2-cloro-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-propano-1,3- diol (20) Espectro de 13C-NMR de 2-Amino-N-(2-cloro-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-propano- 1,3-diol (20) Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 37 Espectro de 1H-NMR de 2-Amino-N-(2,4-dimetoxi)fenilaminocarbonil-propano-1,3-diol (21) Espectro de 13C-NMR de 2-Amino-N-(2,4-dimetoxi)fenilaminocarbonil-propano-1,3-diol (21) Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 38 Espectro de 1H-NMR 2-Amino-N-(2-clorofenil-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-1,3-di-O-4- metilbenzoilpropano-1,3-diol (22) Espectro de 13C-NMR de 2-Amino-N-(2-clorofenil-5-trifluorometil)fenilaminocarbonil-1,3-di- O-4-metilbenzoil- propano-1,3-diol (22) Claudia Muriana Camacho Diseño, síntesis y caracterización estructural de compuestos derivados de 2-aminopropano- 1,3-diol potencialmente activos como antivirales 39 Espectro de 1H-NMR 2-Amino-N-(2,4-dimetoxifenil)aminocarbonil-1,3-di-O-4-metilbenzoil- propano-1,3-diol (23) Espectro de 13C-NMR de 2-Amino-N-(2,4-dimetoxifenil)aminocarbonil-1,3-di-O-4- metilbenzoil-propano-1,3-diol (23)