Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae)

ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIERIAS AGRARIAS Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Alumno: Rodrigo Pérez García Tutor: Julio Javier Díez Casero Director: Sergio Díez Hermano Abril 2023 Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 1 ÍNDICE Resumen ........................................................................................................................................ 2 Abstract ......................................................................................................................................... 3 1. ANTECEDENTES .................................................................................................................... 4 1.1 Descripción de Leptoglossus occidentalis ........................................................................... 4 1.2. Importancia económica del piñón ...................................................................................... 7 1.3. Control biológico mediante hongos entomopatógenos ...................................................... 8 2. OBJETIVOS ........................................................................................................................... 10 3. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................... 10 3.1. Recolección y establecimiento de colonia ........................................................................ 10 3.2. Cultivo de hongos en el laboratorio ................................................................................. 10 3.3. Ensayos de supervivencia de L. occidentalis ................................................................... 11 3.4. Análisis de datos .............................................................................................................. 13 4. RESULTADOS ....................................................................................................................... 14 4.1. Método de inoculación por contacto directo .................................................................... 14 4.2. Método de inoculación mediante aerosol ......................................................................... 15 5. DISCUSIÓN ........................................................................................................................... 17 6. CONCLUSIONES .................................................................................................................. 18 7. AGRADECIMIENTOS .......................................................................................................... 18 8. BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................................... 19 Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 2 Resumen Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) es una especie nativa de América del Norte, donde causa graves problemas en los huertos semilleros. Tras su llegada a Europa, la gran capacidad de expansión de L. occidentalis ha facilitado que en pocos años esté presente en todo el continente. Desde su detección en la región mediterránea se han registrado caídas en la producción de piñón de las masas de Pinus pinea, ocasionando grandes pérdidas económicas. Con el objetivo de encontrar estrategias respetuosas con el medio ambiente y capaces de controlar las poblaciones de este insecto, se han llevado a cabo ensayos de supervivencia con hongos hipocreales, endófitos de vegetación mediterránea, pertenecientes a los géneros Beauveria y Lecanicillium. Para ello, se recolectaron individuos de L .occidentalis en campo, con los que se formó una colonia estable en condiciones de laboratorio. Para determinar la efectividad de los hongos se emplearon dos técnicas de aplicación diferentes: contacto directo entre hongo y huésped e inoculación mediante aerosol (con una concentración de 109 conidios/ml). Todos los aislados fúngicos testados resultaron patógenos contra L. occidentalis mediante la técnica de contacto directo, con una mortalidad mínima del 30%. Beauveria bassiana alcanzó una mortalidad del 100% con un tiempo letal medio (TL50) de 7 días. Beauveria pseudobassiana y Lecanicillium CDS-E1020 obtuvieron valores de virulencia equiparables, con una mortalidad del 50% y un TL50 de 15 y 18 días, respectivamente. Mediante la inoculación con aerosol, Beauveria bassiana resulto patógena con una mortalidad del 60% y un TL50 de 19 días, mientras que Lecanicillium CDS-E2010 no mostró actividad contra L. occidentalis. El conocimiento acerca de la capacidad entomopatógena de hongos endófitos de la vegetación mediterránea puede resultar de gran ayuda a la hora de abordar la gran amenaza que supone la presencia de L. occidentalis para el sector del piñón, y se postula como una alternativa sostenible para el manejo de plagas forestales. Palabras clave Control biológico, Lecanicillium lecani, Beauveria, patología forestal, chinche americana del pino, ensayo de supervivencia. Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 3 Abstract Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) is native to North America, where it causes serious problems in seed orchards. After its arrival in Europe, the great capacity of L. occidentalis to spread has made it present throughout the continent within a few years. Since its detection in the Mediterranean region, pine nut production in Pinus pinea stands has fallen, causing large economic losses. In order to find environmentally friendly strategies capable of controlling the populations of this insect, survival trials have been carried out with hypocreales fungi, endophytes of Mediterranean vegetation, belonging to the genera Beauveria and Lecanicillium. For this purpose, individuals of L. occidentalis were collected in the field and a stable colony was formed under laboratory conditions. Two different application techniques were used to determine the effectiveness of the fungi: direct fungus-host contact and aerosol inoculation (with a concentration of 109 conidia/ml). All fungal isolates tested were found to be pathogenic against L. occidentalis by the direct contact technique, with a minimum mortality of 30%. Beauveria bassiana achieved 100% mortality with a median lethal time (TL50) of 7 days. Beauveria pseudobassiana and Lecanicillium CDS-E1020 obtained comparable virulence values, with 50% mortality and TL50 of 15 and 18 days, respectively. By spray inoculation, Beauveria bassiana was pathogenic with 60% mortality and a TL50 of 19 days, while Lecanicillium CDS-E2010 showed no activity against L. occidentalis. Knowledge about the entomopathogenic capacity of endophytic fungi of Mediterranean vegetation can be of great help in addressing the great threat posed by the presence of L. occidentalis to the pine nut sector, and is postulated as a sustainable alternative for forest pest management. Key words Biological control, Lecanicillium lecani, Beauveria, forest pathology, American pine bug, survival test. Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 4 1. ANTECEDENTES 1.1 Descripción de Leptoglossus occidentalis Leptoglossus occidentalis Heideman (Heteroptera: Coreidae), también conocido como la chinche americana del pino, es una especie invasora considerada plaga en España, incluida en el Catálogo Español de Especies Exóticas Invasoras (Real Decreto 630/2013). Por orden de importancia dentro de las principales amenazas para la diversidad bilógica, las especies invasoras ocupan el tercer lugar, solamente por detrás de la pérdida y de la fragmentación del hábitat (Baillie et al., 2004). L. occidentalis es nativo del oeste de los Estados Unidos (Heidemann, 1910), donde está considerado una plaga relativamente grave que afecta especialmente a huertos semilleros (Bates et al., 2000). A mediados del siglo pasado comenzó a extenderse por América en dirección oeste-este (Schaffner, 1967) (Figura 1A). En la década de 1990 fue detectado en la costa atlántica del país (Gall, 1992). En Europa, la primera detección de la chinche americana del pino se citó en 1999 en el norte de Italia (Taylor et al., 2001). En alrededor de una década, se ha expandido por todo el continente y de forma mayoritaria por todos los países mediterráneos (Figura 1B). Figura 1. Expansión global de Leptoglossus occidentalis. A Expansión en EEUU. La estrella roja indica la primera cita de L. occidentalis en el medio oeste y las flechas representan los movimientos de colonización de la costa este del mismo. B Expansión en Europa. La estrella roja indica la primera cita de L. occidentalis en Europa, los colores indican los años en que han sido citados y la flecha roja la primera detección en España. Figura adaptada de Parlak (2017). En España, la primera referencia de L. occidentalis se remonta a 2003 en Vallbona d'Anoia, provincia de Barcelona (Ribes y Escolà, 2005), posteriormente, en 2008, hubo nuevos avistamientos en Murcia (Valcárcel y Portillo, 2009) y Madrid (Vazquez et al., 2009). En Castilla y León, la primera cita de la chinche americana del pino se realiza en 2012, en la localidad de San Martin Del Agostedo (León) (Pérez, 2012). La amplia capacidad de expansión que presenta esta chinche puede estar relacionada con el gran número de coníferas de las que puede alimentarse, llegando a ser estas un total de 48 especies (Barta, 2016). En su área de distribución nativa americana se ha observado que L. occidentalis tiene predilección por el género Pinus y el Abeto Douglas (Pseudotsuga menziesii) (Lesieur et al., 2014) En el continente europeo los estudios realizados muestran resultados similares, siendo capaz de alimentarse de especies autóctonas como Pinus nigra, Pinus sylvestris, Pinus halepensi o, Pinus pinea, además de otras coníferas como Picea abies, Larix decidua, Abies spp. y Juniperus spp. (Taylor et al., 2001). También se ha documentado la preferencia del Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 5 insecto por los conos de Pinus pinea en comparación con Pinus pinaster y Pinus halepenis (Farinha et al., 2018), posiblemente motivado por el mayor tamaño del piñón. Además de la gran polifagia que presenta el insecto, hay que sumarle las altas capacidades dispersivas del mismo, ya que están considerados como buenos voladores (Koerber, 1963). También es necesario considerar la ayuda ejercida por las acciones humanas, tanto de transporte de especímenes vegetales por mar o tierra, como de comercialización de piñas, que han ayudado a la chinche a prácticamente colonizar por completo el continente europeo. El tamaño de L. occidentalis oscila entre los 15-20 mm de longitud y los 5-7 mm de anchura. Una de las principales características morfológicas es el ensanchamiento de las tibias en las patas posteriores espinosas (metatibias) (Figura 2A). Presentan en la parte posterior de los hemélitros unas líneas blancas en zig-zag. (Figura 2B) Las antenas de tipo filiforme están formadas por 4 artejos, mientras que el rostro lo componen 4 segmentos articulados de tipo tubular. Figura 2. Características morfológicas de Leptoglossus occidentalis. A Ensanchamiento de las tibias posteriores. B Líneas blancas en zig-zag en la parte posterior de los hemélitros. C Macho de Leptoglossus occidentalis. D Hembra de Leptoglossus occidentalis Esta especie presenta un claro dimorfismo sexual en la genitalia de machos y hembras. Es apreciable a simple vista, en el último segmento abdominal (esterno 7), la cápsula genital o pigóforo en los machos (Figura 2C) y una hendidura que se corresponde con la cámara genital (Figura 2D) en las hembras (Goula y Mata, 2015). También se encuentran diferencias en el tamaño de los insectos, siendo mayor el de las hembras que el de los machos (Bernardinelli y Zandigiacomo, 2001). En cuanto a la fenología de L. occidentalis, su umbral de desarrollo se encuentra en los 14.37°C y su integral térmica es de 533 grados-día (Barta, 2016). Según estudios realizados por Ponce y Domínguez (2020), el ciclo de la chinche de las piñas en Castilla y León presenta dos generaciones anuales (Figura 3). Los adultos postinvernantes comienzan a activarse en el mes de marzo y realizarán sus primeras puestas a mediados del mes de mayo, de las cuales emergerá la primera generación anual (F1) que se desarrollará, entre los meses de junio y julio. Posteriormente, esta generación (F1) realizará una segunda puesta (F2) que emergerá y se desarrollará entre agosto y septiembre. Esta segunda generación anual (F2) procede entonces a agruparse en lugares cerrados, con mayor temperatura y próximos a masas forestales, donde invernarán desde octubre hasta febrero del año siguiente. La localización de estos lugares más D C Estudio de la eficacia d e hongos entomopatógenos en el control (Heteroptera: Coreidae) UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural cálidos la llevan a cabo mediante una serie de receptores de radiación infrarroja localizados en su abdomen (Takacs, 2009). Figura 3. Ciclo biológico de Leptoglossus occ La reproducción de L. occidentalis denominados pará meros que emplean para la 4A). L as hembras llegan a la madurez sexual aproximadamente 8 días edad adulta (Ponce, 2017). Las ventral de las acículas del hospedador. aproximadamente pasadas las dos semanas. (Figura 4, N1-N5). E n esta fase pasan a la edad adulta. Figura 4. Reproducción de Leptoglossus occidentalis. sobre acícula de Pinus halepensis occidentalis (Fotos de Laura Ponce Herrero) L. occidentalis es un insecto fitófago, tanto ninfas como adultos se alimentan de los tejidos de las piñas. Para su alimentació Agrupación e hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural mediante una serie de receptores de radiación infrarroja localizados en Leptoglossus occ identalis en Castilla y León. L. occidentalis es sexual. El macho presenta un par de apénd meros que emplean para la sujeción de la hembra durante as hembras llegan a la madurez sexual aproximadamente 8 días después Las puestas las realizan en hilera, adhiriendo los huevos en la cara ventral de las acículas del hospedador. (Barta, 2016) (Figura 4B). L a eclosión se produce aproximadamente pasadas las dos semanas. L as ninfas atraviesan 5 estadios n esta fase se desarrollan las alas y se define el sexo, momento en que Leptoglossus occidentalis. A Apareamiento de L. occidentalis Pinus halepensis (Foto de Laura Ponce Herrero). N1-N5 Estadios ninfales de (Fotos de Laura Ponce Herrero) . es un insecto fitófago, tanto ninfas como adultos se alimentan de los tejidos de las piñas. Para su alimentació n está provisto de un pico o rostro (aparato bucal, picador A B Heidemann E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS 6 mediante una serie de receptores de radiación infrarroja localizados en par de apénd ices quitinosos durante la cópula (Figura después de alcanzar la puestas las realizan en hilera, adhiriendo los huevos en la cara a eclosión se produce as ninfas atraviesan 5 estadios post emergencia desarrollan las alas y se define el sexo, momento en que L. occidentalis . B Puesta Estadios ninfales de L. es un insecto fitófago, tanto ninfas como adultos se alimentan de los tejidos de (aparato bucal, picador -suctor), Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 7 el cual introduce entre las escamas de las piñas. A través del mismo inyectan una serie de enzimas capaces de degradar la pared celular, lo que permite al insecto succionar los productos licuados (Campbell y Shea, 1990). Numerosos estudios han demostrado que es en el momento de la alimentación de la chinche, cuando se producen los daños en el piñón (Calama, 2020; Ponce, 2017; Farinha, 2019), y con ello, el gran impacto económico asociado. 1.2. Importancia económica del piñón El pino piñonero, Pinus pinea, es una especie nativa de la Península Ibérica con gran importancia desde la antigüedad en los países mediterráneos gracias al aprovechamiento de la madera, la leña y los piñones (Prada et al., 1997). Según López et al. (2019) la distribución de Pinus pinea discurre de manera natural y discontinua por el norte y el este de la Región Mediterránea, desde Portugal a Siria, pasando por costas occidentales del Mar Negro y el Líbano a lo largo de 4000 km, creciendo desde el nivel del mar y hasta los 1000 m o incluso ocasionalmente hasta los 1400 msnm (Figura 5). Figura 5. Distribución de Pinus pinea (Fuente, EUFORGEN, 2022) Esta conífera se desarrolla bien en suelos pobres y sin apenas prácticas culturales y es capaz de resistir adversidades climáticas como sequias o heladas (Guadaño y Mutke, 2016). Desde hace décadas, la elevada demanda del mercado por los piñones ha conducido a un aumento del cultivo de esta especie en las zonas de clima mediterráneo. Los individuos de P.pinea pueden alcanzar una altura de entre 20 y 25 metros en condiciones óptimas de suelo y clima. No obstante, por lo general se encuentra en tallas más reducidas, debido a la pobreza de los suelos que habita, con un diámetro de entre 40 y 50 cm al terminar la rotación silvícola. Presentan una forma característica de copa en forma de paraguas o porte aparasolado. (Fady et al., 2004) El turno empleado en su selvicultura oscila entre 60 y 150 años, dependiendo del objetivo preferente de la ordenación (Montero et al 2008), pudiendo ser esta la producción de madera, la producción mixta de madera y piña, producción exclusiva de piña o masas con un uso protector o paisajístico. En el grupo taxonómico de los pinos mediterráneos el pino piñonero posee la semilla más grande, con un tamaño que puede llegar a los 15-20 mm. Morfológicamente son globosas y no Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 8 presentan pedúnculo. La maduración ocurre transcurridos dos años y medio desde la polinización, un año más tarde que en la mayoría de especies del género Pinus (Montero 2004). Actualmente, España posee la mayor superficie a nivel mundial de Pinus pinea (490000 ha), sin embargo, las limitaciones tanto climáticas como orográficas sitúan a España en segundo lugar por detrás de Portugal en cuanto a producción de piñón (Calama, 2020). A partir de 2012, se ha contabilizado una gran bajada en el rendimiento (kg de piñón/kg de piña verde) de las masas de Pinus pinea (Figura 6). Esta caída de rendimiento puede obedecer a diversas causas. En primer lugar, las precipitaciones ocurridas durante el último año de maduración de la piña están estrechamente relacionadas con el rendimiento (Mutcke et al., 2007). Por tanto, la crisis climática podría estar contribuyendo a la bajada en la producción de piñón, debido al incremento en la frecuencia de períodos de sequía. Figura 6. Impacto económico de L. occidentalis en la producción de piñón. A Rendimiento final en la Meseta Norte para la serie de años 1996-2019. B Tasa de piñones dañados de la Meseta Norte para la serie de años 1996-2019. Figura adaptada de Calama (2020). En segundo lugar, el año en que se detectó por primera vez la chinche de las piñas en Castilla y León, 2012, coincide con la cronología observada en la bajada del rendimiento. En estudios realizados por Calama (2020) en la Meseta Norte se puede observar cómo en la serie de datos 1996-2000 el rendimiento medio se situaba en torno al 3.5 %, con una tasa de piñones dañados inferiores al 15% (Figura 6A). En contraposición, en la serie de años 2012-2019, el rendimiento medio cayó por debajo del 1.5% (Figura 6B), por lo que es plausible considerar la introducción de L. occidentalis como la causa principal del aumento en el porcentaje de piñones dañados (60%). Todo esto lleva consigo unas importantes pérdidas económicas, puesto que el valor del piñón en el mercado minorista puede llegar a ser superior a 100 € el kg. Por tanto, es necesario buscar herramientas capaces controlar la plaga de L. occidentalis, de cara a mitigar su efecto pernicioso, tanto sobre la salud del árbol como sobre la actividad humana. Controlar la presencia de especies invasoras en su entorno natural requiere desarrollar nuevas estrategias que puedan ser efectivas contra el insecto y a la vez racionales, respetuosas con el medio ambiente y que estén de acuerdo con el desarrollo sostenible. Es en este punto donde entra el manejo integrado de plagas y la utilización de hongos entomopatógenos como método de control de las poblaciones de insectos plaga. 1.3. Control biológico mediante hongos entomopatógenos Se han catalogado cerca de 100 géneros y más de 750 especies de hongos entomopatógenos (Pucheta Díaz et al. 2006). Una de las grandes ventajas que plantea su utilización se basa en que su patogenicidad no depende exclusivamente de las toxinas que generan, sino que pueden invadir al insecto a través del tegumento de manera directa, lo que complica la aparición de organismos hospedadores resistentes a los mismos (Alves, 1998). A B Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 15 Figura 12. Análisis de supervivencia del ensayo por contacto directo. Comparaciones por parejas de los hongos aplicados. El eje vertical representa la probabilidad de supervivencia y el eje horizontal representa el tiempo, medido en días. Los colores rojo y azul indican la correspondencia entre las líneas de supervivencia y el hongo aplicado. El área sombreada en torno a las líneas representa un intervalo de confianza al 95%. Se considera que dos curvas de supervivencia son diferentes si el p-valor < 0.05 (esquina inferior izquierda de cada gráfico). B.pseudo: Beauveria pseudobassiana. B.bas: Beauveria bassiana. 4.2. Método de inoculación mediante aerosol Dos aislamientos fueron seleccionados para este ensayo en base a la letalidad alcanzada mediante la técnica por contacto directo, Beauveria bassiana (B.bas vs Control p-valor < 0.01) y CDS-E1020 (CDS-E1020 vs Control p-valor < 0.05). Los insectos se expusieron a estos patógenos mediante inoculación en aerosol. Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 16 La Figura 13 muestra el periodo de tiempo transcurrido hasta la muerte (supervivencia) de los insectos en el tiempo del ensayo. Ninguno de los insectos control murió durante los 21 días de seguimiento. Las comparativas entre curvas de supervivencia pueden observarse en la Figura 14. El grupo tratado con Beauveria bassiana experimentó la mayor mortalidad (mortalidad = 60%, TL50 = 19 días, Bbas aero vs Control p-valor < 0.01, Bbas aero vs CDS-E1020 aero pvalor < 0.05). La mortalidad en el grupo tratado con CDS-E2010 fue del 20% y no se encontraron diferencias significativas respecto a la supervivencia del grupo control (CDS-E1020 aero vs Control p-valor = 0.07). Figura 13. Perfiles de supervivencia del experimento en aerosol. Cada línea representa un insecto. Los puntos negros representan la muerte del insecto, mientras que los puntos blancos indican que el insecto sobrevivió. El eje horizontal representa el número de días que se realizó el seguimiento de supervivencia. El eje vertical izquierdo indica el hongo aplicado, mientras que el eje vertical derecho indica el número de días de supervivencia (expresa en forma numérica la longitud de las líneas proyectadas sobre el eje horizontal). B.bas: Beauveria bassiana. Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 17 Figura 14. Análisis de supervivencia del experimento en aerosol Comparaciones por parejas de los hongos aplicados. El eje vertical representa la probabilidad de supervivencia y el eje horizontal representa el tiempo, medido en días. Los colores rojo y azul indican la correspondencia entre las líneas de supervivencia y el hongo aplicado. El área sombreada en torno a las líneas representa un intervalo de confianza al 95%. Se considera que dos curvas de supervivencia son diferentes si el p-valor < 0.05 (esquina inferior izquierda de cada gráfico). B.bas: Beauveria bassiana. 5. DISCUSIÓN En el presente trabajo se ha estudiado la efectividad, en condiciones de laboratorio, de hongos del orden hipocreales (Beauveria bassiana, Beauveria pseudobassiana y tres cepas de Lecanicillium lecanii) como patógenas de la chinche de las piñas Leptoglossus occidentalis. Las tres especies de hongos hipocreales utilizadas en este estudio son considerados como patógenos facultativos de insectos (Alavo, 2015; Barta, 2010; Baz, 2016). En los ensayos en laboratorio se ha podido comprobar que L. occidentalis es susceptible a los hongos empleados, siendo mayor la virulencia del género Beauveria que Lecanicillium. El uso de hongos entomopatógenos en la gestión de plagas ha sido ampliamente explorado con anterioridad (Biryol et al., 2022). Sin embargo, son escasos los estudios centrados en determinar el potencial entomopatógeno de los hongos contra L. occidentalis. Los resultados preliminares presentados por Rumine y Barzanti (2008) ya mostraban la patogenicidad de Beauveria bassiana sobre adultos de L. occidentalis. Por otra parte, Barta (2010) evaluó la virulencia de Beauveria bassiana, Isaria fumosorosea y Metarhizium anisopliae, encontrando los aislados de Isaria fumosorosea como los de mayor efectividad. Por último, un estudio más reciente realizado por Eski et al (2022) encontró como mejor candidato un aislado de Metarhizium flavoviride, con una patogenicidad del 90% y un TL50 de 2.5 días, con una concentración de 107 conidios/ml. Los resultados de mortalidad obtenidos en el presente trabajo son comparables a los reflejados en el trabajo de Barta (2010), que alcanzó una mortalidad del 70% mediante aplicación en suspensión acuosa, frente al 100% en contacto directo y el 60% en aerosol conseguidos aquí con B. bassiana. Respecto al tratamiento mediante aerosol, en el estudio de Eski et al (2022) se obtuvieron resultados similares a los aquí mostrados, con una mortalidad del 60 % para el Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 18 tratamiento de B. bassiana frente al rango de 40-60% que obtuvieron las diferentes cepas de B. bassiana empleadas en el citado trabajo. El estudio llevado a cabo presenta algunas limitaciones. En primer lugar, L. Occidentalis presenta una elevada mortalidad en el estadio N2, lo que dificulta su cría en cautividad. El tiempo que tarda en llegar a adulto, con dos generaciones anuales, también resultó limitante a la hora de alcanzar el tamaño muestral deseado, teniendo en cuenta que tampoco podía utilizarse el total de los insectos para no poner en peligro la viabilidad de la colonia. Asimismo, por norma general se admite que los hongos más virulentos son los que consiguen ser aislados del propio huésped (Papierok et al., 1984), no siendo este el caso aquí presentado, ya que han sido utilizados los candidatos que obtuvieron mejores resultados sobre otro insecto, T. molitor. En este trabajo se ha podido comprobar el potencial entomopatógeno de hongos hipocreales, de cara a su uso como estrategias alternativas de control de chinches coreidas. No obstante, debe tenerse en cuenta que “la susceptibilidad de los insectos a los entomopatógenos demostrada en el laboratorio generalmente no se relaciona con la tasa de infección obtenida en campo” (Barta 2010). Por lo tanto, será necesario llevar a cabo estudios adicionales, que puedan determinar la efectividad de los hongos entomopatógenos como controladores de las poblaciones de Leptoglossus occidentalis en condiciones naturales. 6. CONCLUSIONES Las conclusiones obtenidas en el presente trabajo son las siguientes: - Respecto al primer objetivo, relativo a la capacidad entomopatógena de hongos endófitos sobre L.occidentalis mediante inoculación por contacto directo: o El hongo con más potencial entomopatógeno fue B.bassiana, seguido de B. pseudobassiana y la cepa CDS-E1020 de L. lecanii. o B. pseudobassiana y la cepa CDS-E1020 de L. lecanii mostraron una capacidad entomopatógena equiparable. o Las cepas 151 y G-12 de L. lecanii no mostraron actividad entomopátogena, en comparación con el grupo control. - Respecto al segundo objetivo, relativo a la capacidad entomopatógena de hongos endófitos sobre L.occidentalis mediante inoculación con aerosol: o El hongo con más potencial entomopatógeno fue B.bassiana. o La cepa CDS-E1020 de L. lecanii no mostró actividad entomopatógena mediante inoculación con aerosol, en comparación con el grupo control. 7. AGRADECIMIENTOS En primer lugar, quiero agradecer a mis tutores Sergio y Julio, por la oportunidad de realizar este trabajo con ellos y por la ayuda y las buenas críticas hacia el mismo. A Álvaro y Mariano por la inestimable ayuda con los ensayos en el laboratorio. A Laura Ponce por allanar el camino. A Miguel por abrirme las puertas de la Casa de la Madera. A mi compañera de vida, por compartir estos años y por la gran ayuda y amor prestados, te los devolveré con creces. A mi madre y mi hermana, las raíces y el sustento de lo que soy hoy. A mis sobrinos, el futuro que seremos. Y en especial a mi padre… quien me enseño a amar la naturaleza, disfrutar del maravilloso mundo natural en el que vivimos, del vuelo del milano, el frescor del rio, a disfrutar de la senda sin importar el destino, el respeto y la grandeza escondida detrás de las pequeñas cosas. Espero que te enorgullezcas de esto y que algún día volvamos a pasear juntos. Estudio de la eficacia de hongos entomopatógenos en el control de Leptoglossus occidentalis Heidemann (Heteroptera: Coreidae) Rodrigo Pérez García UNIVERSIDAD DE VALLADOLID (CAMPUS DE PALENCIA) – E.T.S. DE INGENIERÍAS AGRARIAS Titulación de: Grado en Ingeniería Forestal y del Medio Natural 19 8. BIBLIOGRAFÍA ALAVO, T. B. 201). The insect pathogenic fungus Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas and its use for pests control: A review. Journal of experimental biology and agricultural sciences, 3(4), 337-345. http://dx.doi.org/10.18006/2015.3(4).337.345 ALVAREZ-BAZ G., FERNANDEZ-BRAVO M., PAJARES, J., QUESADA-MORAGA E., 2016. Cepa nativa de Beauveria pseudobassiana como agente potencial en el control biológico de Monochamus galloprovincialis, vector del nematodo de la madera del pino. Cuadernos De La Sociedad Española De Ciencias Forestales, (42). https://doi.org/10.31167/csef.v0i42.17484 ALVES S.B., 1998 Fungus Entomopatogenicos. p. 289-370. Controle microbiano de insetos. 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