Desarrollo y fenotipado de dos generaciones para la construcción de líneas de introgresión de S.incanum en el fondo genético de la berenjena (S. melongena)

MÁSTER INTERUNIVERSITARIO OFICIAL EN MEJORA GENÉTICA VEGETAL DESARROLLO Y FENOTIPADO DE DOS GENERACIONES PARA LA CONSTRUCCIÓN DE LÍNEAS DE INTROGRESIÓN DE Solanum incanum EN EL FONDO GENÉTICO DE LA BERENJENA (Solanum melongena). Tesis pa a la ob ención del í ulo de Más e p esen ada po : Ignacio An onio So omayo Can os Tu o académico: San iago Vilano a Na a o Tu o expe imen al: Pie o G amazio Valencia, Julio del 2016 DEDICATORIA P ime o a Dios po da me una nue a opo unidad en mi ida y po cuida de mí y de mi amilia. A mi amada esposa Sil ia y a mi muñeca Saman ha po su ca iño y mucho amo , y po que han sido el pila undamen al pa a la culminación del Más e . A mis ado ados pad es Ignacio y Ri a po b inda me siemp e su inmenso amo , consejos y ayuda, a pesa de mis e o es. A mi ñaña Ka ina po su apoyo y ca iño de siemp e, y po da me dos azones más po quienes es o za me mis ñañi os Fe cho y Ja ie a Fe nanda. A mis sueg os po es a siemp e apoyándonos a la dis ancia, y dándonos ue zas y ca iño en odo momen o. A mi ía Nelly y a Manolo po es a siemp e pendien es de noso os, po da nos an o ca iño y amo ; y po se como nues os pad es en España. A la memo ia de mis abueli os que sé que es u ie on conmigo en cada momen o y en cada paso que di a lo la go de es e camino, has a alcanza mi me a. A la amilia en gene al an o mía como de mi esposa, que de uno u o o modo nos b inda on su apoyo. AGRADECIMIENTOS Dejo cons ancia de un especial y since o ag adecimien o a las pe sonas e ins i uciones: Al Ins i u o Nacional de In es igaciones Ag opecua ias (INIAP-Ecuado ) en la pe sona de su Di ec o Gene al el D . Juan Manuel Domínguez po o o ga me la beca pa a ealiza mis es udios de posg ado. Al Ing. Ca los Molina Hid o o Di ec o de las Es ación Expe imen al T opical Pichilingue po b inda me su apoyo pa a ealiza mis es udios. A la Uni e sidad Poli écnica de Valencia y en especial al Ins i u o de Conse ación y Mejo a de la Ag odi e sidad Valenciana (COMAV) en la pe sona de su di ec o el D . Jaime P ohens y su ges o a Ma ía José Pé ez quienes desde un p incipio y has a el úl imo momen o me o ecie on oda la ayuda necesa ia pa a cumpli es e obje i o, po el cual siemp e les oy a es a ag adecido. Un ag adecimien o especial a San i Vilano a mi u o académico po b inda me su ayuda y asmi i me sus conocimien os y expe iencia pa a el desa ollo de es e abajo, y a mi amigo y u o expe imen al Pie o G amazio po sus buenos consejos y g an apo e no solo pa a la elabo ación de es e TFM sino po oda la ayuda desin e esada, apoyo y enseñanza. G acias po odo Pie o!!. A los miemb os del g upo de “Mejo a Gené ica de la Be enjena”, a Ma iola po su buena amis ad y apoyo de siemp e. A Isabel, C is ina, Ja i, F ancesco, B ice y P ashan po odos los momen os compa idos en el labo a o io e in e nade o. Les es oy muy ag adecido. A odos mis p o eso es del Más e que de una u o a mane a colabo a on en mi o mación du an e mi es ancia como es udian e. A mis compañe os po los momen os i idos, en especial a Dionís, To en , Miquel y Miguel. A mi amigo Rubén y a mi compañe o de lucha cons an e y de ú bol mi g an amigo Alex. G acias a odos…!!!! ÍNDICE GENERAL 1. INTRODUCCIÓN. .................................................................................................................. 1 1.1.- Impo ancia económica del cul i o de be enjena. ........................................................ 1 1.2.- Taxonomía y bo ánica..................................................................................................... 4 1.3. Composición de la be enjena. ......................................................................................... 6 1.4. O igen, domes icación y di usión. ................................................................................... 7 1.5. Función nu acéu ica y poli enoles de la be enjena. ..................................................... 9 1.6. Oxidación de los poli enoles y pa deamien o. .............................................................. 11 1.7. Di e sidad y e osión gené ica de la be enjena. ........................................................... 12 1.8. Uso de especies sil es es en el aumen o de la base gené ica de la be enjena cul i ada. ................................................................................................................................ 13 1.9. Desa ollo de líneas de in og esión. ............................................................................ 13 1.10. Ca ac e ización con encional y enómica del u o de la be enjena. ..................... 15 2. OBJETIVOS: ......................................................................................................................... 18 3. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................. 19 3.1. Ma e ial ege al. ............................................................................................................. 19 3.2. Manejo del cul i o. ......................................................................................................... 22 3.2.1. Ge minación y cul i o de plan as. ............................................................................ 22 3.3. Au o ecundaciones de líneas. ......................................................................................... 23 3.4. Ca ac e ización mo ológica. ........................................................................................ 23 3.5. Me odología pa a e aluación del con enido en ácido clo ogénico (CGA). ................ 26 3.5.1. Ex acción me anólica de ácido clo ogénico. ............................................................ 26 3.5.2. De e minación del con enido en ácido clo ogénico. ................................................. 26 3.6. Análisis de esul ados. .................................................................................................... 27 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. .......................................................................................... 28 4.1. Feno ipado de las MIILs. ............................................................................................... 28 4.1.1. Fo ma del u o. ......................................................................................................... 28 4.1.2. Colo del u o. .......................................................................................................... 29 4.1.3. P esencia de espinas en el cáliz. ................................................................................ 30 4.1.4. Peso del u o (g). ...................................................................................................... 31 4.1.5. Colo y núme o de pé alos de las lo es. ................................................................... 32 4.1.6. Tamaño de lo . ......................................................................................................... 33 4.1.7. Con enido en ácido clo ogénico (CGA). ................................................................... 34 4.2. Análisis de ca ac e es cuan i a i os de la o ma del u o. ......................................... 36 4.3. Análisis mul i a ian e. ................................................................................................... 37 4.4. Co elaciones en e ca ac e es eno ípicos. ................................................................. 40 5. CONCLUSIONES: ............................................................................................................... 42 6. ANEXOS ................................................................................................................................ 44 7. BIBLIOGRAFÍA: .................................................................................................................. 57 ÍNDICE DE FIGURAS Figu a 1. Po cen ajes de p oducción en el me cado mundial de ho alizas. ................................ 1 Figu a 2. Inc emen o de la p oducción de be enjena a ni el mundial en millones de oneladas. 2 Figu a 3. P og eso del endimien o de la be enjena a ni el mundial en hg/ha. ........................... 2 Figu a 4. P oducción de be enjena en las comunidades au ónomas en España. .......................... 4 Figu a 5. Plan a, u os y lo de be enjena. ................................................................................. 5 Figu a 6. Di e sidad de colo es y o mas del u o de la be enjena (Knapp e al. 2013) ............. 5 Figu a 7. Pin u a de Solanum melongena de luchanyan bencao (1220ad) (wang e al. 2008) y be enjenas cul i adas en un campo japonés (pin u a de p incipios del siglo x iii) (Daunay & Janick 2007). ......................................................................................................................... 8 Figu a 8. P ime a ilus ación eu opea de be enjena en he ba io i aliano de He bis en 1330 ad y minia u a de plan as adul as con u os en manusc i o hea um sani a is en 1380 ad (Daunay & Janick 2007). ..................................................................................................................... 9 Figu a 9. Dos odajas de un mismo u o de be enjena, ecién e ec uado el co e (izquie da) y pasados 10 minu os después de e ec uado el co e (de echa). ............................................. 12 Figu a 10. Rep esen ación esquemá ica del genoma de una colección de ILs. Cada ba a ep esen a un c omosoma. Cada pa de c omosomas homólogos ep esen a una plan a. Las egiones en di e en e colo de inen los agmen os he edados po cada plan a (Pé ez de Cas o 2013). ....................................................................................................................... 14 Figu a 11. F u os de pa en ales (P1 y P2), híb ido (F1) y de la p ime a gene ación de e oc uzamien o (BC1). ...................................................................................................... 19 Figu a 12. P oceso de cinco gene aciones de e oc uzamien os (BC) y dos de au o ecundaciones (S) pa a la ob ención de las MIILs. .................................................................................... 20 Figu a 13. A la izquie da una lo en es ado adecuado pa a ealiza la au o ecundación (an es de la an esis). A la de echa un u o e ique ado y o ulado p o enien e de au o ecundación o zada. ................................................................................................................................ 23 Figu a 14. F u os analizados median e el so wa e oma o analyze e sión 3.0. ...................... 25 Figu a 15. Fo mas de u o que p esen a on las MIILs. A la izquie da o ma pe a, en el cen o o ma globula y a la de echa o ma amelonada o ahue ado…………………………………...29 Figu a 16. Escala de onalidades de colo es que p esen a on las MIILs. De izquie da a de echa: e de cla o, e de, e de oscu o, mo ado cla o y mo ado. ................................................. 30 Figu a 17. F u os con p esencia de muchas, pocas y sin espinas en el cáliz. ............................. 31 Figu a 18. Di e encias de amaño y peso de 6 u os de la colección de MIILs. ....................... 32 Figu a 19. Las es onalidades de colo de lo es que p esen a on las MIILs. De izquie da a de echa: blanco, iole a cla o y muy iole a. ...................................................................... 33 Figu a 20. Tamaños de lo es obse adas en las MIILs. G ande (izq.), mediana (cen o) y pequeña (de .). ..................................................................................................................... 34 Figu a 21. Rep esen ación de esul ados ob enidos de la de e minación del con enido en CGA po c oma og a ía líquida de al o endimien o (HPLC), de mues as de las 4 MIILs que p esen a on los con enidos más al os de CGA. La abso bancia de la midió a 325nm. ....... 35 Figu a 22. El p ime (eje x) y segundo (eje y) componen e p incipal (32,75 y 24,40% de la a iación o al, espec i amen e). Diag ama de dispe sión del peso en los componen es de los ca ac e es e aluados en la colección de MIILs. ............................................................ 38 Figu a 23. El p ime (eje x) y segundo (eje y) componen e p incipal (32,76 y 24,25% de la a iación o al, espec i amen e). Diag ama de dispe sión de las MIILs basado en 28 ca ac e es (7 con encionales, 1 con enido en ácido clo ogénico y 20 ob enidos del so wa e oma o analyze ). ................................................................................................................. 39 Figu a 24. Diag ama de dispe sión de las MIILs basado en 28 ca ac e es (7 con encionales, 1 con enido en ácido clo ogénico y 20 ob enidos del so wa e oma o analyze ), sin oma en cuen a a las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 6. ...................................................... 40 INDICE DE TABLAS Tabla 1. P oducción de be enjena de los p incipales países p oduc o es a ni el mundial. .......... 3 Tabla 2. Composición de la be enjena en 100g de u o. ............................................................. 6 Tabla 3. Lis ado de líneas ca ac e izadas en el p esen e abajo y núme o de c omosoma (in . /c .) Donde se encuen a la in og esión de S. incanum. .................................................... 21 Tabla 4. Lis ado de desc ip o es mo omé icos ob enidos del so wa e oma o analyze . ........ 25 RESUMEN: La be enjena es un cul i o con una es echa base gené ica. Es o puede se debido a que la domes icación de la be enjena se ealizó a pa i de un ace o gené ico limi ado, lo cual pudo o igina un cuello de bo ella, que con ibui ía a que las a iedades de be enjena cul i ada p esen en una baja di e sidad gené ica. Con a iamen e a o os cul i os impo an es como el oma e, el uso de especies sil es es en la mejo a de be enjena ha sido muy limi ada. En la ac ualidad se es á desa ollando una colección de líneas de in og esión (MIILs) de S. incanum en el ondo gené ico de S. melongena que jun o con la selección asis ida po ma cado es (MAS) pe mi i án dilucida el con ol gené ico e iden i ica QTLs de ca ac e es an impo an es como la o ma, amaño y colo del u o, el con enido de an ocianinas y poli enoles de la ca ne, la espinosidad, esis encias y ole ancias a es eses bió icos y abió icos, e c. Pa a el desa ollo de es a colección es necesa io ealiza a ios ciclos de e oc uzamien os (BC) así como au o ecundaciones (S) pa a al inal del p oceso pode ija las líneas. Po o a pa e, en es as gene aciones ambién es con enien e eno ipa las plan as de mane a que podamos es ima la a iabilidad en los ca ac e es de las amilias que se an ob eniendo. Lo cual ayuda á a decidi que ca ac e es son más in e esan es al inaliza las líneas. La ca ac e ización eno ípica y enómica ealizada en el p esen e abajo mos ó una conside able a iabilidad en los ca ac e es e aluados en e las MIILs, lo cual o ece aliosas opo unidades pa a la selección en p og amas de mejo a, ya que pe mi i á selecciona aquellas que sean ep esen a i as de acue do a cada ca ác e de in e és y las posibilidad de c uza las en e sí pa a aumen a o mejo a dichos ca ac e es, y pos e io men e e alua su compo amien o en di e en es ambien es. La ca ac e ización de allada de la o ma del u o u ilizando el so wa e Toma o Analyze p opo cionó da os cuan i a i os sob e muchos ca ac e es que no se ob ienen u ilizando desc ip o es mo ológicos medidos manualmen e. O o de los obje i os impo an es en el desa ollo de la colección de MIILs es es udia el con ol gené ico de acumulación de poli enoles, en pa icula del ácido clo ogénico. Los esul ados del p esen e abajo mos a on que las MIILs p esen a on con enidos en ácido clo ogénico muy di e en es en e ellas y algunas supe a on cla amen e los con enidos de los pa en ales, en pa icula a de S. melongena. Po lo cual, dichas líneas se pod ían c uza en e ellas de o ma que se pueden ob ene ma e iales con un con enido mejo ado en dicho ca ác e de in e és nu acéu ico. 1. INTRODUCCIÓN In oducción 7 1.4. O igen, domes icación y di usión. A di e encia de la mayo ía de las especies del géne o Solanum, la be enjena no p ocede del con inen e ame icano (Daunay e al. 2001), las especies sil es es elacionadas con ella se encuen an dis ibuidas po Á ica y el sudes e asiá ico (Meye e al. 2012; Knapp e al. 2013). S. melongena ue iden i icada po Va ilo , el cual pos uló que an o la India como la China pod ían habe sido su cen os de domes icación (Va ilo 1951). Les e y Hasan sugi ie on que la be enjena común ue domes icada a pa i de S. incanum (Les e & Hasan 1991), especie que se encuen a dis ibuida en e Á ica O ien al y O ien e Medio (Knapp e al. 2013). Es os au o es pos ula on que en el Neolí ico, o incluso en el Paleolí ico, S. incanum siguió al se humano en sus desplazamien os desde el O ien e Medio has a la India como ad en icia. Según la hipó esis de es os au o es, en la egión indo-bi mana, bajo la selección na u al y a i icial, es as plan as hab ían e olucionado. La selección an o en la India como en o as egiones hab ía p oducido los cul i a es mode nos y o mas ad en icias espinosas. Las p ime as e e encias esc i as apa ecen mencionadas en ex os sánsc i os echados a ios siglos an es de C is o, a la cual se e e ían como “kan apa ika” po su ca ác e espinoso o “nid alu” po las p opiedades na có icas (Nadka ni 1927). Además se ep esen a on con di e sidad de mo ologías, lo cual sugie e la p esencia de o mas cul i adas en es a egión desde hace mucho iempo y que p obablemen e se a aba de una plan a ampliamen e conocida y u ilizada (Khan 1979). Pos e io men e el cul i o ue acogido en China (Wang e al. 2008) y luego en Japón, donde se iene cons ancia de a iedades locales de la época Edo (1615-1867), algunas de las cuales oda ía se cul i an a pequeña escala (Fig. 7). In oducción 8 Figu a 7. Pin u a de Solanum melongena de Luchanyan Bencao (1220AD) (Wang e al. 2008) y be enjenas cul i adas en un campo japonés (pin u a de p incipios del siglo XVIII) (Daunay & Janick 2007). Po o o lado la be enjena hab ía emig ado desde la zona indo-bi mana hacia el Medi e áneo a a és de la u a de la seda, en épocas ela i amen e ecien es y pos e io men e los á abes hab ían con ibuido a su di usión hacia Occiden e has a llega a la península ibé ica y de allí a o os países de Eu opa (Nuez e al. 2002). En I alia sus p ime as e e encias son de inales del siglo XVI mien as en F ancia las p ime as ci as de su cul i o son de siglo XVII en la egión de P o enza (Daunay 1996) (Fig. 8). En sus inicios en el Viejo Mundo u o mala ama, po el desconocimien o de cómo a a culina iamen e al u o, de hecho e a conocida como Mala Insana (manzana insana en la ín) y po eso du an e los p ime os siglos después de su llegada a Eu opa ue u ilizada como plan a o namen al y medicinal pa a sana in lamaciones cu áneas y quemadu as (Daunay 1996). Finalmen e, la in oducción en Amé ica la ealiza on los españoles. En e o os c onis as, el pad e Be nabé Cobo la mues a como una ho aliza habi ual en el eino de Pe ú (Cobo B. 1964). T abajos ecien es, ob enidos a pa i de es udios de a iabilidad mo ológica y molecula , a alan la hipó esis de un doble cen o de domes icación, según los cuales la zona indo-bi mana ep esen a ía un cen o p ima io mien as que China se ía un cen o secunda io (B and-Daunay & Haz a 2012; Meye e al. 2012). Además especulan que S. incanum no se ía el ances o de la be enjena común sino que se hab ía domes icado a pa i de la especie sil es e S. insanum L., la cual p esen a muchas simili udes In oducción 9 mo ológicas, hábi o de c ecimien o y siendo posible la ob ención de híb idos comple amen e é iles y con meiosis egula con la be enjena (Knapp e al. 2013). Figu a 8. P ime a ilus ación eu opea de be enjena en he ba io i aliano DE He bis en 1330 AD y minia u a de plan as adul as con u os en manusc i o Thea um sani a is en 1380 AD (Daunay & Janick 2007). 1.5. Función nu acéu ica y poli enoles de la be enjena. El e mino nu acéu ico ue acuñado po el doc o S ephen DeFelice en 1989 a pa i de las palab as “Nu ición” y “Fa macéu ico” y puede se de inido como un alimen o, o una pa e de él, que p opo ciona bene icios médicos o de salud, incluyendo la p e ención y/o a amien o de una en e medad (Kal a 2003). Según es a de inición los p oduc os nu acéu icos, además de se uncionales, p opo cionando al cue po la can idad eque ida de i aminas, g asas, p o eínas, e c., son necesa ios pa a una ida saludable y ac úan de o ma ac i a en la p e ención y a amien os de en e medades. Desde el año 2003, la O ganización de las Naciones Unidas pa a la Ag icul u a y la Alimen ación (FAO) y la O ganización Mundial de la Salud (OMS), se unie on pa a p omo e un mayo consumo de u as y e du as, con el obje i o de bene icia a los consumido es de sus e ec os posi i os sob e la salud. Exis en e idencias cla as de que el consumo mínimo de cinco aciones dia ias de u a y e du a con ibuye a disminui el iesgo de padece en e medades c ónicas, como el cánce y en e medades ca dio ascula es (Yang e al. 2004; Reiss e al. 2012). In oducción 10 Los i oquímicos son me aboli os secunda ios que se encuen an en las plan as. Exis en cua o ipos p incipales de i oquímicos: los ca o enoides, los la onoides, los enoles y los e penos. Muchos de es os me aboli os se conside an an ioxidan es po su capacidad de e i a o e a da la oxidación de o as moléculas. A a és de dis in os mecanismos, como son la quelación me álica, la donación de hid ogeno de los g upos enólicos y la oxidación a un adical no p opagado . Su implicación en la salud humana, es á condicionada al me abolismo y a la capacidad de abso ción de cada indi iduo (Cala ayud e al. 2005). Ac ualmen e en e los obje i os de mejo a de la calidad nu acéu ica en ho alizas se impone el de inc emen a el con enido en i oquímicos, como el ácido ascó bico ( i amina C) o los poli enoles. El ácido ascó bico es un po en e an ioxidan e. Exis en di e encias signi ica i as en e accesiones de be enjena en el con enido de i amina C, pe o los con enidos ela i amen e bajos de ácido ascó bico en los u os de be enjena y el hecho de que se consumen cocinados limi an su in e és como an ioxidan es (Hanson e al. 2006; P ohens & Rod íguez-Bu uezo 2007). Los poli enoles, sin emba go, es án adqui iendo un in e és c ecien e po sus múl iples e ec os bene iciosos, habiéndose demos ado que muchos de ellos ienen un pode an ioxidan e simila al de la i amina C (S ommel & Whi ake 2003; Kinsella e al. 1993; Singh e al. 2009; Jung e al. 2011). Además, al con a io que la i amina C, los poli enoles ienen una g an es abilidad é mica, po lo que la deg adación de los mismos es mínima incluso después de se some idos a al as empe a u as (F iedman & Dao 1990; Dao & F iedman 1992). La be enjena p esen a compues os enólicos an o en la piel como en la ca ne del u o. Los compues os enólicos de la piel son p incipalmen e an ocianinas ( enoles del g upo de los la onoides), las cuales le con ie en el colo mo ado o neg o al u o, aunque ep esen an una acción mínima de los poli enoles o ales. En la ca ne los poli enoles más abundan es son los enilp opanoides, sob e odo los de i ados del ácido hid oxicinámico, los cuales son p oducidos po con e sión del aminoácido enilalanina a ácido cinámico (Macheix & Fleu ie 1990; S ommel & Whi ake 2003; Singh e al. 2009). El ácido clo ogénico (5-O-ca eoyl-quinic ácido y sus isóme os; CGA) es el conjugado dominan e en la be enjena, cons i uyendo en e un 70% y un 95% del con enido o al en poli enoles (S ommel & Whi ake 2003; P ohens & Rod íguez- Bu uezo 2007). P esen a múl iples p opiedades bene iciosas pa a la salud humana, como In oducción 11 las de se an ioxidan e, an iin lama o io (San os e al. 2006; Yun e al. 2012), ca diop o ec o (Kwon e al. 2008; Akani apicha e al. 2010; Das e al. 2011), an ica cinogénico (Bu gos-Mo ón & Calde on-Mon ano 2012), an iobesidad (Cho e al. 2010), y an idiabé ico (Coman e al. 2012). Es o hace que los p og amas mode nos de mejo a de es e cul i o engan como uno de sus obje i os la ob ención de a iedades con al o con enido en poli enoles. Hay una g an di e sidad en el con enido de poli enoles en be enjena, el cual es á in luenciado po la e apa de desa ollo, las condiciones de almacenamien o y los ac o es ambien ales. Algunos pa ien es sil es es, como S. incanum, p esen an ele ados con enidos en CGA de has a cinco eces mayo es a las a iedades mode nas (S ommel & Whi ake 2003; Jung e al. 2011; P ohens e al. 2013; Plazas e al. 2014). 1.6. Oxidación de los poli enoles y pa deamien o. Una ele ada concen ación de ácidos enólicos no solo iene aspec os posi i os. Du an e el p ocesado del u o, la des ucción de los compa imen os celula es pe mi e el con ac o en e los poli enoles, que se encuen a en las acuolas, con las enzimas poli enol oxidasas (PPOs), que se encuen an localizadas en los clo oplas os, p oduciéndose la oxidación de los p ime os y dando como p oduc os inales compues os de colo pa do que educen la calidad apa en e del u o (Fig. 9) (Mish a e al. 2013; Plazas e al. 2013). Po es e mo i o, las ac uales a iedades mode nas y come ciales suelen p esen a una meno concen ación de poli enoles, debido a que la selección de ma e iales con bajo pa deamien o esul a a a su ez en una selección indi ec a po a iedades con un meno con enido en poli enoles (P ohens & Rod íguez-Bu uezo 2007). Sin emba go, exis e una amplia a iación en la ac i idad poli enol oxidasa en e ma e iales de be enjena (Doğan e al. 2002), lo cual pe mi i ía la selección simul ánea de geno ipos que p esen en una baja ac i idad poli enol oxidasa y un al o con enido en poli enoles esul ando así en a iedades con mayo ac i idad an ioxidan e y bajo pa deamien o. A es e espec o, se han desc i o y mapeado, en un mapa gené ico in e especí ico en e S. melongena y S. incanum, cinco PPOs en be enjena, las cuales se encuen an en un clus e en el g upo de ligamien o 8 (G amazio e al. 2014). In oducción 12 Figu a 9. Dos odajas de un mismo u o de be enjena, ecién e ec uado el co e (izquie da) y pasados 10 minu os después de e ec uado el co e (de echa). 1.7. Di e sidad y e osión gené ica de la be enjena. La be enjena es un cul i o con una es echa base gené ica (P ohens e al. 2005). Es o puede se debido a que la domes icación de la be enjena se ealizó a pa i de un ace o gené ico limi ado, lo cual pudo o igina un cuello de bo ella, que con ibui ía a que las a iedades de be enjena cul i ada p esen en una baja di e sidad gené ica (Isshiki e al. 1994; Ka ihaloo & Go lieb 1995; Vo on so a e al. 2013). El dispone de ecu sos gené icos con una amplia di e sidad, adecuadamen e egene ados, conse ados, ca ac e izados y documen ados es esencial pa a la mejo a gené ica de un cul i o. Bio e si y In e na ional incluyó ya en 1977 a la be enjena en la lis a de especies p io i a ias cuyos ecu sos gené icos es aban su iendo e osión gené ica (G ubben e al. 1977). En las úl imas décadas, en la mayo ía de los cul i os domes icados se es án haciendo g andes es ue zos pa a amplia la di e sidad gené ica en las a iedades mode nas con la inclusión de a iedades locales u obsole as y de especies sil es es elacionadas en los p og amas de mejo a (Hu ado 2016). El aumen o de a iabilidad gené ica gene ada, se á mayo cuan o más alejados gené icamen e se encuen en los ma e iales. In oducción 13 1.8. Uso de especies sil es es en el aumen o de la base gené ica de la be enjena cul i ada. Usando di e en es écnicas bio ecnológicas, que pe mi en supe a las ba e as p e y pos cigó icas, se pueden ob ene híb idos con un amplio núme o de especies sil es es del ge moplasma p ima io, secunda io y e cia io (Daunay & Haz a 2012). Es as especies son gené icamen e muy a iables y pueden ep esen a uen es de a iación de in e és pa a la mejo a de la be enjena (Weese & Bohs 2010; B and-Daunay & Haz a 2012; Vo on so a e al. 2013; Mu egi e al. 2015). Además, es as especies se encuen an en un amplio ango de condiciones ambien ales, po lo que son de in e és pa a ca ac e es elacionados con adap ación al cambio climá ico, que es un p oblema ac ual de g an p eocupación (Daunay & Haz a 2012; Dempewol e al. 2014). Sin emba go, con a iamen e a o os impo an es cul i os como el oma e (P ohens e al. 2008; Hajja & Hodgkin 2007), el uso de las especies sil es es en la mejo a de la be enjena ha sido muy limi ada (Daunay & Haz a 2012; Ro ino e al. 2014). Plazas e al. (2016) es udia on la hib idación in e especí ica en e la be enjena común y pa ien es sil es es de su ace o gené ico p ima io, secunda io y e cia io. Con di e en es g ados de di icul ad ob u ie on un o al de 13 híb idos in e especí icos, lo cual ab e las pue as al uso de po enciales ma e iales de in e és pa a la mejo a gené ica de la be enjena. 1.9. Desa ollo de líneas de in og esión. Una colección de líneas de in og esión es un conjun o de líneas con un agmen o de genoma de un donan e, habi ualmen e una especie elacionada, en el ondo gené ico de un ecep o . De es a o ma, una colección comple a de líneas de in og esión econs i uye el genoma del pa en al donan e en segmen os c omosómicos solapan es y además se conside a como “inmo al”, ya que se puede p opaga po au o ecundación. De es a o ma, las líneas de in og esión acili an el análisis gené ico de ca ac e es complejos así como la ans e encia de ca ac e es de in e és p opios de las especies donan es a las especies ecep o as (Lippman e al. 2007). Además son muy e ec i as pa a la iden i icación de QTLs, ya que las di e encias eno ípicas en e una línea de in og esión In oducción 14 y el pa en al ecu en e se deben únicamen e al agmen o in og esado (Eshed & Zami 1995). A es e espec o, las líneas de in og esión pe mi en una mejo esolución y de ección de QTLs que las poblaciones con encionales (Zami 2001). El p oceso de ob ención consis e en sucesi os e oc uzamien os en e el híb ido, de i ado del c uce en e los dos pa en ales, y el pa en al ecu en e has a ob ene indi iduos con uno o pocos segmen os c omosómicos in og esados. Es os indi iduos inalmen e se au o ecundan has a consegui un ele ado g ado de homocigosis. (Fig.10). Figu a 10. Rep esen ación esquemá ica del genoma de una colección de ILs. Cada ba a ep esen a un c omosoma. Cada pa de c omosomas homólogos ep esen a una plan a. Las egiones en di e en e colo de inen los agmen os he edados po cada plan a (Pé ez de Cas o 2013). En cul i os económicamen e impo an es, como el oma e o el a oz, las líneas de in og esión han sido muy ú iles pa a la mejo a de ca ac e es de in e és ag onómico (Eshed & Zami 1995; Mon o e & Tanksley 2000; Lippman e al. 2007; Fukuoka e al. 2010). En oma e ue on es ablecidas básicamen e po los abajos de Zami y colabo ado es con in ención de soluciona el a as e de agmen os c omosómicos indeseables. Es a p ime a colección de ILs en oma e cons aba de 50 líneas p oceden es de un c uzamien o en e S. pennellii y oma e cul i ado y pe mi ió la de ección de un o al de 104 QTLs: 16 pa a el peso de la plan a, 22 pa a el peso del u o inmadu o, 18 pa a la masa del u o, 23 pa a el con enido en azúca es, 14 pa a el con enido en sólidos solubles y 11 pa a el endimien o de la plan a, una ci a nunca an es alcanzada pa a un es udio de ca ac e es cuan i a i os en plan as (Eshed e al. 1992; Eshed & Zami 1994; Eshed & Zami 1995). In oducción 15 En be enjena oda ía no se dispone de líneas de in og esión, lo cual e idencia el e aso que su e es e cul i o en el ap o echamien o de ma e ial de in e és y en el es udio de ca ac e es complejos y poligénico. En la ac ualidad se es á desa ollando una colección de líneas de in og essión de S. incanum en el ondo gené ico de S. melongena (MIILs). Es as líneas, que es án en ase de se ul imadas, pe mi i án dilucida el con ol gené ico e iden i ica QTLs de ca ac e es an impo an es como la o ma, amaño y colo del u o, el con enido de an ocianinas y poli enoles de la ca ne, la espinosidad, esis encias y ole ancias a es eses bió icos y abió icos, e c. Po o a pa e, la disponibilidad de líneas de in og esión con ca ac e es complemen a ios pe mi e la pi amidación de alelos a o ables. Po ejemplo, las líneas con ele ado con enido en poli enoles se pod ían c uza en e ellas, de o ma que se puedan ob ene ma e iales con un con enido mejo ado en dicho ca ác e de in e és nu acéu ico. Es a es a egia se ha demos ado exi osa en o os cul i os con o os ca ac e es (Lippman e al. 2007). Pa a la ob ención de una colección de líneas de in og esión es deseable dispone de un mapa gené ico o ísico que cub a el genoma, con una dis ibución y densidad de ma cado es su icien e pa a alcanza el obje i o. Pa alelamen e a las MIILs se ha desa ollado un mapa gené ico de ligamien o el cual se ha usado pa a la selección de los geno ipos seg egan es en las gene aciones de e oc uzamien os y au o ecundaciones, en el cual se mapea on 42 ma cado es COSII, 99 SSRs, 88 AFLPs, 9 CAPS, 4 SNPs y un ma cado mo ológico elacionado con la p esencia de espinas. Es o dio como esul ado un mapa que aba ca 1.085 cM dis ibuidos en 12 g upos de ligamien o (G amazio e al. 2014). 1.10. Ca ac e ización con encional y enómica del u o de la be enjena. T adicionalmen e la ca ac e ización eno ípica de las plan as se ha lle ado a cabo con mediciones manuales, usando una egla o un pie de ey, con balanzas pa a medi el peso, y con desc ip o es mo ológicos (IBPGR. 1990; Nunome e al. 2001; Doganla e al. 2002; Polignano e al. 2010; Sunse i e al. 2010; Adeniji & Kusolwa 2012; Adeniji e In oducción 16 al. 2013). Aunque muchos asgos son áciles de medi o os no pe mi en una ca ac e ización p ecisa, como en el caso de la o ma del u o (Cos a e al. 2011). Recien emen e, un so wa e de análisis de imágenes denominado Toma o Analyze se ha desa ollado pa a el análisis de la o ma del u o de oma e (Solanum lycope sicum L.) (B ewe e al. 2006; Gonzalo & Knaap 2008). Es a he amien a enómica pe mi e la medición de un g an núme o de pa áme os a a és del escaneo de u os que han sido co ados longi udinalmen e. A pesa que ue diseñado o iginalmen e pa a el análisis mo ológico y mo omé ico de los u os de oma e, se ha demos ado la u ilidad de es udia la o ma de los u os de o as especies, como en papaya (Ca ica papaya L.) (Blas e al. 2012). El Toma o Analyze ha sido u ilizado pa a es udia la o ma de los u os de una amilia in e especí ica de i ada del c uce en e S. melongena y su pa ien e S. ae hiopicum L. (P ohens e al. 2012). Es a he amien a ambién ha sido ú il pa a ca ac e iza y clasi ica de acue do a la o ma del u o, una colección de 21 accesiones de be enjena de di e en es g upos a ie ales (Hu ado e al. 2013), lo cual pe mi ió la es imación de pa áme os de in e és pa a la mejo a, ab iendo camino pa a la disección gené ica, a a és de la iden i icación de genes y QTLs de es e impo an e a ibu o en la be enjena. Plazas e al. (2013) ambién u iliza on el Toma o Analyze pa a la ca ac e ización de un o al de 21 accesiones de be enjenas españolas, que di e ían en la o ma del u o, encon ando una amplia di e sidad en e las accesiones, así como en e g upos a ie ales. Los alo es de he edabilidad pa a muchos asgos de la o ma del u o indica on, que la selección usando los da os de ca ac e ización del Toma o Analyze es muy e icien e. El análisis de componen es p incipales mos ó que los di e en es g upos a ie ales ue on sepa ados de acue do a los asgos de la o ma del u o. En base a es os es udios, la u ilización del so wa e de análisis de imágenes Toma o Analyze es de g an u ilidad pa a la ca ac e ización de allada de la o ma del u o den o y en e g upos a ie ales de be enjena y la es imación de pa áme os gené icos de in e és pa a la mejo a del cul i o (Hu ado e al. 2013). Pa a la ca ac e ización de los ecu sos gené icos del géne o Solanum exis e un lis ado de desc ip o es publicado po el IPGRI y p epa ado po el Les e en el año 1990 (Les e 1990). Sin emba go, es os desc ip o es han sido e isados po un g upo de expe os en be enjena den o de la ed eu opea pa a ecu sos gené icos de be enjena Ma e iales y Mé odos 21 (Tabla 3). La pé dida de las in og esiones se debía a di e en es azones, en e las cuales la al a de cuajado de un c uce di igido, la al a de ge minación de las semillas seleccionadas que en algunos casos e an escasas y e o es en el geno ipado. Nº In ./C . Código Líneas Nº In ./C . Código Líneas 1 1 C1-1 BC4S1_22(4)9_PL1 32 6 C6-4 BC2S1_60(7)_PL4 2 1 C1-13 BC4S1_22(4)9_PL13 33 6 C6-7 (7) BC2S1_60(7)_PL7 3 1 C1-16 BC4S1_22(4)9_PL16 34 7 C7-1 BC4S1_76(3)3_PL1 4 1 C1-4 BC4S1_22(4)9_PL4 35 7 C7-13 BC4S1_76(9)3_PL13 5 2 C2-1 BC4S1_25(2)10_PL1 36 7 C7-15 BC4S1_76(9)3_PL15 6 2 C2-15 BC4S1_25(2)10_PL15 37 7 C7-2 BC4S1_76(9)3_PL2 7 2 C2-18 BC4S1_25(2)10_PL18 38 7 C7-5 BC4S1_76(9)3_PL5 8 2 C2-22 BC4S1_25(2)10_PL22 39 7 C7-7 BC4S1_76(9)3_PL7 9 2 C2-26 BC4S1_25(2)10_PL26 40 8 C8-11 BC4S1_53(6)5_PL11 10 2 C2-5 BC4S1_25(2)10_PL5 41 8 C8-13 BC4S1_53(6)5_PL13 11 2 C2-8 BC4S1_25(2)10_PL8 42 8 C8-2 BC4S1_53(6)5_PL2 12 2 C2-1 (1) BC5S1_25(10)1_PL1 43 8 C8-24 BC4S1_53(6)5_PL24 13 2 C2-4 BC5S1_25(10)1_PL4 44 8 C8-25 BC4S1_53(6)5_PL25 14 3 C3-12 BC5S1_31(5)5_PL12 45 8 C8-4 BC4S1_53(6)5_PL4 15 3 C3-16 BC5S1_31(5)5_PL16 46 8 C8-6 BC4S1_53(6)5_PL6 16 3 C3-5 BC5S1_31(5)5_PL5 47 9 C9-12 BC5S1_6(5)11A_PL12 17 3 C3-6 BC5S1_31(5)5_PL6 48 9 C9-21 BC5S1_6(5)11A_PL21 18 3 C3-8 BC5S1_31(5)5_PL8 49 9 C9-4 (A) BC5S1_6(5)11A_PL4 19 4 C4-14 BC5S1_56(10)3_PL14 50 9 C9-11 BC5S1_6(5)11B_PL11 20 4 C4-15 BC5S1_56(10)3_PL15 51 9 C9-13 BC5S1_6(5)11B_PL13 21 4 C4-16 BC5S1_56(10)3_PL16 52 9 C9-4 (B) BC5S1_6(5)11B_PL4 22 4 C4-5 BC5S1_56(10)3_PL5 53 9 C9-5 BC5S1_6(5)11B_PL5 23 4 C4-9 BC5S1_56(10)3_PL9 54 10 C10-17 BC4S1_55(4)5_PL17 24 5 C5-2 BC5S1_84(4)12_PL2 55 10 C10-18 BC4S1_55(4)5_PL18 25 5 C5-22 BC5S1_84(4)12_PL22 56 10 C10-2 BC4S1_55(4)5_PL2 26 5 C5-7 BC5S1_84(4)12_PL7 57 11 C11-12 BC4S1_26(2)9_PL12 27 6 C6-13 BC2S1_60(2)_PL13 58 12 C12-11 BC5S1_29(7)5_PL11 28 6 C6-15 BC2S1_60(2)_PL15 59 12 C12-12 BC5S1_29(7)5_PL12 29 6 C6-20 BC2S1_60(2)_PL20 60 12 C12-13 BC5S1_29(7)5_PL13 30 6 C6-7 BC2S1_60(2)_PL7 61 12 C12-15 BC5S1_29(7)5_PL15 31 6 C6-22 BC2S1_60(7)_PL22 62 12 C12-8 BC5S1_29(7)5_PL8 Tabla 3. Lis ado de líneas ca ac e izadas en el p esen e abajo y núme o de c omosoma (In . /C .) donde se encuen a la in og esión de S. incanum. En el anexo 1 se mues a un esquema del es ado ac ual del ondo gené ico de las líneas, de acue do a los esul ados del geno ipado median e GBS que se ha lle ado acabo pa alelamen e al p esen e abajo du an e el p oceso de desa ollo de las MIILs. Ma e iales y Mé odos 22 3.2. Manejo del cul i o. 3.2.1. Ge minación y cul i o de plan as. Pa a la ge minación de las semillas se aplicó un p o ocolo especí ico desa ollado en be enjena, el cual consis e en la inme sión en agua du an e 24 ho as, sucesi amen e inme sión en GA3 500 ppm du an e 24 ho as, siemb a en placa Pe i usando como solución KNO3 1000 ppm, en es u a a 37ºC du an e 24 ho as y en ne e a a 4ºC du an e una semana (Ranil e al. 2015). A medida que ue on ge minando las semillas se pasa on a las bandejas de al eolos con sus a o. Desde la echa de pues a en la placa has a que se pasa on a los semille os anscu ie on en e 10 a 15 días ap oximadamen e. Las bandejas e an de 5 x 8 al eolos, en cada al eolo se si uó una sola plán ula, luego cada bandeja se cub ió con e miculi a pa a que no se o ma a moho. El sus a o que se u ilizó es aba e ilizado y su composición en nu ien es e a: Ni ógeno 140mg/l, Fós o o 70mg/l, Po asio 150 mg/l, Azu e 76mg/l, Magnesio 4,2 mg/l, Ba io 0,3 mg/l, Manganeso 1,6 mg/l, Zinc mg/l, Hie o 0,9 mg/l, Molibdeno 2 mg/l y Cob e 1,2 mg/l. Pos e io men e, las plan as se asplan a on y se cul i a on en in e nade os ubicados en el Campus de la Uni e sidad Poli écnica de Valencia, en mace as de 12 li os con sus a o de ib a de coco, y se siguie on las p ác icas habi uales del cul i o de la be enjena (Baixauli 2001). El iego y el abonado se lle a on a cabo median e un sis ema de e i igación. Los a amien os de plagas y en e medades es u ie on a ca go del pe sonal del in e nade o. Las condiciones ambien ales en el in e nade o e an de en e 15 a 30ºC de empe a u a y 80% de humedad. Pa a man ene es as condiciones se u iliza un sis ema de e ige ación ipo “coole ” que in oduce un caudal de e minado de ai e en el in e nade o median e un en ilado , p e iamen e el ai e pasa po un panel mojado que le p opo ciona humedad disminuyendo así la empe a u a, al p oduci se la e apo ación del agua del panel. La e ec i idad del “coole ” es in e samen e p opo cional a la humedad del ai e. La cale acción se consigue median e la u ilización de ae o e mos, po los cuales ci cula el agua de un ci cui o alimen ado po calde as. Ma e iales y Mé odos 23 3.3. Au o ecundaciones de líneas. Las au o ecundaciones se ealiza on según el p o ocolo desc i o pa a la be enjena po P ohens & Rod íguez-Bu uezo (2010). An es de la an esis, u ilizando una pinza se ab ió la lo y se p ocedió a deposi a polen de la misma plan a sob e el es igma u ilizando un po aobje o. El po aobje o u ilizado e a desin ec ado con e anol al 70% al pasa de una plan a a o a, pa a e i a con aminación con polen ajeno. Luego se p ocedió al e ique ado de cada lo ano ando la echa de la polinización. Las au o ecundaciones ue on ealizadas a medida que se p esen aban lo es en el es ado adecuado (Fig. 13). Po cada plan a se ealiza on al ededo de en e 10 a 20 au o ecundaciones, has a ob ene como mínimo 1 o 2 u os de au o ecundación o zada, pa a ealiza la ca ac e ización mo ológica de los mismos. Los u os ue on cosechados en madu ez isiológica y las semillas se ex aje on en el labo a o io. Figu a 13. A la izquie da una lo en es ado adecuado pa a ealiza la au o ecundación (an es de la an esis). A la de echa un u o e ique ado y o ulado p o enien e de au o ecundación o zada. 3.4. Ca ac e ización mo ológica. Como se ha mencionado an e io men e, en el ma co del p esen e TFM se ealizó el eno ipado las lo es y u os de una población de 62 líneas de in og esión empleando desc ip o es de be enjena EGGNET y la he amien a enómica “Toma o Analyze ” pa a la ca ac e ización de allada de los u os (Rod íguez e al. 2010). Los ca ac e es e aluados son an o cuan i a i os como cuali a i os, elacionados con la lo y el u o de cada línea. Ma e iales y Mé odos 24 La me odología del eno ipado se de alla a con inuación: a) P ime amen e se ca ac e izó el ma e ial ege al en in e nade o, donde se e alua on los siguien es ca ac e es: - Núme o de pé alos de la lo . Es e ca ác e se e aluó con ando el núme o de pé alos de las lo es después de la an esis. - Colo de la lo . Se e aluó de o ma isual el colo de la co ola de la lo , u ilizando la siguien e escala: 5 blanca, 7 iole a cla o y 9 muy iole a. - Tamaño de la lo . E aluación isual del amaño de la lo (1 pequeña, 2 mediana y 3 g ande). - P esencia de espinas en el cáliz. (0 ausen es, 1 pocas y 2 muchas). - Colo del u o. Se e aluó de o ma isual el colo del u o, u ilizando la siguien e escala: 1 e de cla o, 2 e de, 3 e de oscu o, 4 mo ado cla o, 5 mo ado y 6 neg o). - Fo ma del u o. E aluación isual de la o ma de u o siguiendo los desc ip o es de be enjena: 1 pe a, 2 globula y 3 ahue ado (IBPGR. 1990). b) Luego de cosecha los u os en madu ez isiológica, se ca ac e iza on y e alua on en labo a o io los siguien es ca ac e es: - Peso del u o (g amos). Medido con báscula digi al, a odos los u os ob enidos po cada línea ca ac e izada. - Ca ac e ización de allada de la o ma de u o u ilizando el so wa e Toma o Analyze . Después del egis o del peso de los u os, se les ealizó un co e longi udinal y ue on escaneados u ilizando un escáne o og á ico Scanje G4010 HP a una esolución de 300 dpi y se some ie on a análisis mo omé ico con el so wa e Toma o Analyze e sión 3.0 (Fig. 14). Ob eniéndose 20 desc ip o es de o ma au omá ica incluyendo mediciones básicas (6), índice de o ma del u o (2), o mación de bloques (3), homogeneidad (3), o ma del ex emo p oximal del u o (1), o ma del ex emo e minal del u o (1), asime ía (3) y excen icidad (1) (Tabla 4). Todos los desc ip o es del u o ue on mé icos. Los ajus es po de ec o se u iliza on pa a desc ip o es en la o mación de bloques, la o ma del ex emo p oximal y la o ma del ex emo dis al de los u os (Rod íguez e al. 2010). Ma e iales y Mé odos 25 Figu a 14. F u os analizados median e el so wa e Toma o Analyze e sión 3.0. Tabla 4. Lis ado de desc ip o es mo omé icos ob enidos del so wa e Toma o Analyze . Nº Desc ip o es del u o Desc ipción/Unidades 1 Pe íme o Longi ud del pe íme o (cm). 2 Á ea Á ea del u o (cm2). 3 Anchu a a media al u a Medida del ancho a la media al u a del u o (cm). 4 Anchu a máxima Dis ancia ho izon al máxima del u o (cm). 5 Al u a a la mi ad de la anchu a Medida de la al u a a la mi ad del ancho del u o (cm). 6 Al u a máxima Dis ancia e ical máxima del u o (cm). 7 Al u a de la cu a u a Al u a medida a lo la go de una línea cu a a a és del u o (cm). 8 Índice de la o ma ex e na del u o 1 Ra io en e la al u a máxima y anchu a máxima. 9 Índice de la o ma ex e na del u o 2 Ra io en e la al u a media de la anchu a y la anchu a a media al u a. 10 Indice de la o ma del u o cu ado Ra io en e la al u a cu ada a la anchu a del u o a media cu a de la al u a. 11 Fo mación de bloques p oximal del u o Ra io de la anchu a en la posición de la o mación de bloques supe io al ancho 12 Fo mación de bloques e minal del u o Ra io de la anchu a en la posición más baja de o mación de bloques pa a el ancho. 13 T iangulo de la o ma del u o Ra io de la anchu a en la posición de o mación de bloques supe io a la posición de o mación de bloques in e io . 14 Ci cula P ecisión de ajus e ( 2) de la o ma eal de un cí culo; los alo es más al os indican que la u a es más ci cula . 15 Elipsoide P esición de ajus e ( 2) de la o ma eal de una elipse; los alo es más al os indican que la u a es más elipsoide. 16 Rec angula Ra io del ec ángulo delimi ado del u o al ec ángulo delimi ado del u o; alo es mayo es indican que la u a es más ec angula . 17 Al u a del homb o Ra io de la al u a media de los pun os de homb o po encima del pun o ex emo p oximal a la máxima al u a. 18 Obo oide Calculado de acue do con la ó mula disponible en el manual del Toma o Analyze , cuan o mayo sea el alo , mayo es el á ea del u o po debajo de media al u a. 19 O oide Calculado de acue do con la ó mula disponible en el manual del Toma o Analyze , cuan o mayo sea el alo , mayo es el á ea del u o po encima de la media al u a. 20 Índice de la o ma in e na del u o Ra io en e la al u a de la elipse in e na a la anchu a. Ma e iales y Mé odos 26 3.5. Me odología pa a e aluación del con enido en ácido clo ogénico (CGA). 3.5.1. Ex acción me anólica de ácido clo ogénico. Pa a gua da mues as de pulpa, una ez pesados y escaneados, los u os se congelaban en ni ógeno líquido y después en congelado es a -80 ºC. Dichas mues as pos e io men e ue on lio ilizadas en un lio ilizado Vi is Genesis (Wiza d 2.0) pa a ealiza la sepa ación del agua po sublimación. De es a mane a se eliminó el agua desde el es ado sólido al gaseoso sin pasa po el es ado líquido. Las mues as, una ez lio ilizadas, se i u a on con un molinillo eléc ico. La ex acción me anólica del ácido clo ogénico se ealizó según el p o ocolo de Helmja e al. (2008). Las mues as lio ilizadas (0,1 g) se homogeneiza on en 1,5 ml de me anol: agua (80:20, / ) más 0,1% (w/ ) de 2,3- e -bu il-4-hid oxianisol (BHT). El ex ac o o al se agi ó en ó ex igo osamen e, se sonicó du an e 45 minu os a empe a u a ambien e, y después se cen i ugó a 2000 pm du an e 3 minu os en una cen í uga Eppendo 5804R. El sob enadan e se il ó a a és de un il o de memb ana de poli e a luo oe ileno (PTFE) de 0.2 µm. Las soluciones es ánda de ácido clo ogénico se p epa a on usando el mismo p o ocolo. 3.5.2. De e minación del con enido en ácido clo ogénico. La de e minación del con enido en ácido clo ogénico se ealizó po c oma og a ía líquida de al o endimien o (HPLC) de acue do con el p o ocolo de Lu h ia & Mukhopadhyay (2006). Los ex ac os se analiza on en un sis ema HPLC In ini y LC 1220 (Agilen Technologies, San a Cla a, CA, EE.UU.). Las alícuo as de 10 µl ue on inyec ados con el mues eado au omá ico 1220 Sis ema In ini y LC en un ZORBAX Eclipse Plus C18 (3,5 µm; 4,6 x 12,5 mm; Agilen Technologies) p o egida po una columna de segu idad ZORBAX Eclipse Plus C18 (5 µm; 4,6 x 12,5 mm ; Agilen Technologies). El mé odo u ilizado ue una modi icación del desc i o po P ohens e al. (2013). El g adien e bina io consis ió en 0,1% de ácido ó mico (disol en e A) y me anol (disol en e B). El g adien e de la ase mó il ue el siguien e: 0 min, 95A: 5B a 0,5 ml / min; aumen o lineal desde 0 has a 5 min a 10% B en 0,5 ml / min; 5-10 min, aumen o lineal a 20% B en 0,5 ml / min; 10 a 18 min, los aumen os lineales a 83% B y 0,5 ml / min; 18 a 23 min, aumen o lineal de has a 100% B en 0,5 ml / min; 23 a 27 min, 100% B Ma e iales y Mé odos 27 en 1,0 ml / min; 27 a 30 min, disminuye a 5% de B a 1,0 ml / min; 30 a 40 min, 95A: 5B a 0,5 mL / min. La cuan i icación se basa en la abso bancia a 325 nm. La concen ación de ácido clo ogénico en las mues as ex aídas se calculó u ilizando las cu as de calib ación desa olladas. La cu a de calib ación se calculó u ilizando un análisis de eg esión lineal no ponde ado y en condiciones de linealidad se e aluó con el alo de 2 ( 2> 0,99). El á ea del pico se de e minó y se usó pa a calcula el po cen aje de á ea o al del pico co espondien e al ácido clo ogénico. 3.6. Análisis de esul ados. Después de habe ob enido los esul ados de la ca ac e ización de las lo es y u os de las líneas es udiadas, se elabo a on ablas de esul ados an o de los da os ob enidos de la ca ac e ización con encional (in e nade o y labo a o io) como los da os ob enidos con el so wa e Toma o Analyze , median e el p og ama in o má ico Excel. Pos e io men e, u ilizando el so wa e es adís ico S a g aphics Cen u ion e sión XVI se e ec ua on los cálculos de análisis de la a ianza (ANOVA) pa a de e mina la a iabilidad de los ca ac e es en e las MIILs. Luego se aplicó el mé odo de di e encias signi ica i as de S uden -Newman-Keuls pa a un in e alo de con ianza de 95%, es a p ueba se u iliza pa a iden i ica las medias de los pa áme os que son signi ica i amen e di e en es en e sí. También se ealizó un Análisis de Componen es P incipales (ACP) écnica de sín esis de in o mación o educción de a iables cuan i a i as a componen es p incipales que ep esen en de mane a más p ecisa la a iabilidad exis en e en la in es igación, pe diendo la meno can idad posible de in o mación. Y po úl imo, se calculó el coe icien e de co elación de Pea son pa a obse a el g ado de elación en e las a iables en es udio. 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Resul ados y Discusión 28 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. 4.1. Feno ipado de las MIILs. Tan o las lo es como los u os ob enidos de la au o ecundación de las MIILs (en e 1 a 8 u os/plan a) se eno ipa on según los ca ac e es desc i os en el pun o 3.4 de ma e iales y mé odos. La abla de esul ados del eno ipado de cada MIILs se de alla en los anexos 2 y 3. La ca ac e ización mo ológica con encional y enómica pe mi ió obse a di e encias cla as en e las líneas pa a los dis in os ca ac e es. Pa a los ca ac e es medidos en in e nade o u ilizando escalas, las líneas se dis ibuye on en los di e en es ni eles en cada una de ellas. Así mismo, los esul ados mos a on una conside able a iabilidad pa a los ca ac e es de peso, o ma de u o y con enido de ácido clo ogénico. 4.1.1. Fo ma del u o. La o ma del u o se la ealizó de o ma isual siguiendo los desc ip o es de be enjena (IBPGR. 1990). El 52.38% de las líneas p esen a on o ma de u o amelonada (ahue ado), el 36.51% p esen a on o ma de pe a y un 11.11% p esen a on u os globula es (Fig. 15). Es os esul ados concue dan con los esul ados de Plazas e al. (2014), que indica que la ecupe ación de los asgos ca ac e ís icos de S. melongena se puede log a en unas pocas gene aciones de e oc uzamien os. Po consiguien e, en la quin a gene ación de e oc uces se ha ecupe ado en g an po cen aje la o ma amelonada del u o del pa en al S. melongena (P2) y pocas líneas p esen an ca ac e ís icas simila es al pa en al S. incanum (P1), en es e caso la o ma globula . En es e sen ido Po is e al. (2014) u ilizando una población F2 ob enida po c uzamien o en e 2 líneas de be enjenas (P1=305E40 x P2=67/3) iden i ica on QTLs asociados a la o ma del u o en los c omosomas 1, 3, 7, 8 ,11 y 12. Los esul ados ob enidos en el p esen e abajo mues an que las líneas seleccionadas pa a dichos c omosomas p esen a on una mode ada a iabilidad pa a es e ca ác e . Po ejemplo de las sie e líneas seleccionadas pa a el c omosoma 8, cua o de ellas p esen a on o ma del u o pe a y las es es an es p esen a on el u o ahue ado. Resul ados y Discusión 29 Figu a 15. Fo mas de u o que p esen a on las MIILs. A la izquie da o ma pe a, en el cen o o ma globula y a la de echa o ma amelonada o ahue ado. 4.1.2. Colo del u o. Es e ca ác e se e aluó de o ma isual, cuando los u os se encon aban en madu ez come cial. El colo que p edominó ue el mo ado cla o en un 62% de las líneas, seguido del colo mo ado en un 23% (las líneas C6-15, C6-20, C6-7 y C6-4) y , un 14.52% onos de colo e de, que iban desde el e de cla o (C3-5, C6-13, C6-22, C7-15, C10-18 y C12-13), e de (C7-2 y C4-14) y e de oscu o C6-7(7). Hay que comen a que las líneas co espondien es al c omosoma 6 solo han sido e oc uzadas dos gene aciones, lo que signi ica que poseen un mayo po cen aje de genoma de S. incanum espec o a las líneas de o os g upos de ligamien os. También hay que des aca que no se obse a on u os de colo neg o (Fig. 16). Cabe eco da en es e apa ado, que los pa en ales u ilizados o iginalmen e pa a el desa ollo de las MIILs S. incanum (MM577) y S. melongena (ANS26) y el híb ido F1 esul an e de es e c uzamien o p esen an colo de u o e de, mo ado y mo ado cla o espec i amen e. Po lo cual, como se puede obse a en los esul ados se a ecupe ando el colo de u o del pa en al ecu en e (S. melongena) y que la p esencia de an ocianos en el u o es dominan e a la al a de an ocianos (Tigchelaa e al. 1968; Doganla e al. 2002). Con espec o a es e ca ác e , Toppino e al. (2016) iden i ica on un QTL en el c omosoma 5 in oluc ado en la p oducción de an ocianos esponsable del colo del u o y un segundo QTL iden i icado en el c omosoma 10. Es e úl imo pa ece se el mismo QTL iden i icado p e iamen e po Doganla e al. (2002). Cabe menciona que es os au o es u iliza on pa en ales di e en es a los u ilizados en el p esen e abajo. Nues os esul ados mos a on que las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 5 mos a on poca Resul ados y Discusión 36 de la colección de las MIILs, cuando las líneas engan las in og esiones de incanum en homocigosis. Es udios como los mencionados, jun o con abajos simila es al p esen e TFM, iden i icación de QTLs, a iación y exp esión de es os genes ayuda án a dilucida los ac o es gené icos cla es in oluc ados en el con enido de ácido clo ogénico pe mi iendo así inc emen a lo en la be enjena cul i ada. 4.2. Análisis de ca ac e es cuan i a i os de la o ma del u o. Los esul ados del análisis de la a ianza (ANOVA) ealizados a los 21 ca ac e es cuan i a i os e aluados en el es udio (incluyen el peso del u o y 20 ca ac e es e aluados con el so wa e Toma o Analyze ) mos a on di e encias signi ica i as (P<0.05) en 20 ca ac e es del u o. Pa a el ca ác e al u a de homb os no se de ec a on di e encias signi ica i as, mien as que pa a el ca ác e O oide el análisis de la a ianza mos ó di e encias signi ica i as, pe o as ealiza se la p ueba de angos múl iples de S uden - Newman-Keuls se obse ó que no había di e encias en e las MIILs (Anexo 4). Los alo es medios del ca ác e o oide, elipsoide y al u a de homb os ue on bajos con 0,04, 0,04 y 0,01 espec i amen e, es o esul a del hecho que los u os de muchas líneas p esen an alo es de 0 o ce canos a 0. El coe icien e de a iación osciló en e 8,82% pa a ec angula y 124,08% pa a el ca ác e o oide. Los alo es al os de coe icien e de a iación pa a o oide y al u a de homb os son esul ado de los alo es medios bajos pa a es os dos ca ac e es. Pa a el es o de ca ac e es con excepción de ec angula y o mación de bloque p oximal, que p esen an alo es po debajo del 10%, los alo es de coe icien e de a iación se encuen an en el ango en e 10,11 ( o mación de bloque e minal) y el 69,58% (o oboide) (Anexo 4). En los ocho ca ac e es cuan i a i os elacionados con el amaño del u o la línea C7-1 p esen ó los alo es signi ica i amen e más al os, mien as que la línea C7-2 p esen ó los alo es más bajos pa a dichos ca ac e es. En cuan o a los 13 ca ac e es cuan i a i os elacionados a la o ma de u o la línea C6-13 p esen ó alo es signi ica i amen e al os en 10 a excepción de los ca ac e es: bloque p oximal, iangulo de la o ma del u o y ec angula , mien as que la línea C5-7 p esen ó en 4 ca ac e es los alo es más bajos (Índice de o ma ex e na I y II, índice de la o ma del u o cu ado e índice de la o ma in e na del u o) (Anexo 4). Resul ados y Discusión 37 4.3. Análisis mul i a ian e. El p ime y segundo componen e de ACP ep esen an el 32,75% y el 24.40% de la a iación o al en e las MIILs. La inclusión del e ce componen e y pos e io es no mejo ó la in e p e ación. Se conside a on como ele an es los ca ac e es con alo es de co elación con la p ime a y segunda componen e p incipal mayo es a 0,15. El p ime componen e se co elacionó posi i amen e con asgos elacionados a: amaño del u o como: pe íme o, á ea, al u a a la mi ad del ancho y al u a de la cu a u a; y ca ac e es elacionados a la o ma del u o como: índice de la o ma ex e na del u o I y II, índice de la o ma del u o cu ado, o mación de bloque e minal, elipsoide, ci cula , o oboide e índice de la o ma in e na del u o, y nega i amen e co elacionado con la o ma del u o o oide. El segundo componen e se co elacionó posi i amen e con ca ac e es de la o ma del u o: índice de la o ma del u o cu ado, o mación de bloque e minal, ci cula y o oboide, y con enido en ácido clo ogénico; y nega i amen e con ca ac e es elacionados al peso del u o, amaño del u o como: pe íme o, á ea, anchu a a media al u a, anchu a máxima, al u a a la mi ad de la anchu a, al u a máxima y al u a de la cu a u a, y de la o ma del u o como: o mación de bloque p oximal, iangulo de la o ma del u o, o oide y o ma del u o (Fig. 22). Resul ados y Discusión 38 Figu a 22. El p ime (eje x) y segundo (eje y) componen e p incipal (32,75 y 24,40% de la a iación o al, espec i amen e). Diag ama de dispe sión del peso en los componen es de los ca ac e es e aluados en la colección de MIILs. La dis ibución de las MIILs en un g á ico de ACP de 2 dimensiones mues a que en gene al, las líneas seleccionadas p e iamen e po sus in og esiones de S. incanum en los 12 c omosomas de la be enjena (de la línea seleccionada pa a el c omosoma 11 no se ob u o da o de con enido en ácido clo ogénico, po lo cual no apa ece en el g á ico de ACP), no se alejan mucho en e sí, an o en el p ime como segundo componen e, en alo es posi i os y nega i os. A excepciones de las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 5 que p esen an solo alo es nega i os pa a el p ime componen e y las líneas pa a el c omosoma 10 que p esen an solo alo es nega i os pa a el segundo componen e. De las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 7 la C7-1 se sepa a conside ablemen e de las demás, es o puede debe se a que de es a línea se ob u o un único u o de au o ecundación y es e ue de g an amaño (Fig. 23). Resul ados y Discusión 39 Figu a 23. El p ime (eje x) y segundo (eje y) componen e p incipal (32,76 y 24,25% de la a iación o al, espec i amen e). Diag ama de dispe sión de las MIILs basado en 28 ca ac e es (7 con encionales, 1 con enido en ácido clo ogénico y 20 ob enidos del so wa e Toma o Analyze ). Po o o lado, las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 6, p esen an el ango más amplio de a iación sepa ándose mucho en e ellas, es o puede a ibui se a que es as líneas se encuen an en la gene ación 2 de e oc uzamien o hacia el pa en al S. melongena, po lo cual aún poseen muchas in og esiones de S. incanum en he e ocigosis, es o se debe a como se había mencionado an e io men e y en el capí ulo de ma e iales y mé odos, que du an e el p oceso inicial se habían pe dido las in og esiones y se u o que ol e hacia a ás pa a pode ecupe a las. En la igu a (24) se mues a el g á ico ACP de 2 dimensiones sin oma en cuen a las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 6 y podemos obse a que las demás líneas no se sepa an mucho en e ellas, a excepción de las líneas C7-1 y C7-2 que son las que p esen a on los alo es más ex emos en elación al peso y amaño del u o. -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 ANS_26 C1-1 C1-13 C1-16 C1-4 C2-1 C2-15 C2-18 C2-22 C2-26 C2-5 C2-8 C2-1 (1) C2-4 C3-12 C3-16 C3-5 C3-6 C3-8 C4-14 C4-15 C4-16 C4-5 C4-9 C5-2 C5-22 C5-7 C6-13 C6-15 C6-20 C6-7 C6-22 C6-4 C6-7 (7) C7-1 C7-13 C7-15 C7-2 C7-5 C7-7 C8-11 C8-13 C8-2 C8-24 C8-25 C8-4 C8-6 C9-12 C9-21 C9-4 (A) C9-11 C9-13 C9-4 (B) C9-5 C10-17 C10-18 C10-2 C12-11 C12-12 C12-13 C12-15 C12-8 2do CP: 24.25% de la a iación o al 1e CP: 32.76% de la a iación o al Resul ados y Discusión 40 Figu a 24. Diag ama de dispe sión de las MIILs basado en 28 ca ac e es (7 con encionales, 1 con enido en ácido clo ogénico y 20 ob enidos del so wa e Toma o Analyze ), sin oma en cuen a a las líneas seleccionadas pa a el c omosoma 6. 4.4. Co elaciones en e ca ac e es eno ípicos. Los alo es de co elación en e los 28 ca ac e es es udiados p esen an alo es al amen e signi ica i os (P<0,001) (Anexos 5). Pa a las 7 co elaciones en e los ca ac e es elacionados con el amaño del u o, el alo más al o de coe icien e de co elación eno ípica ue en e el ca ác e al u a a la mi ad de la anchu a con al u a máxima ( =0,999). En gene al, los alo es de coe icien e de co elación eno ípicos en e el peso (g) con los 7 ca ac e es elacionados con el amaño del u o se p esen a on po encima de 0,6. Como e a de espe a , los u os con mayo peso p esen a on alo es de co elación más al os con ca ac e es como: pe íme o, á ea, anchu a a media al u a, anchu a máxima, al u a a mi ad de la anchu a, al u a máxima y al u a de la cu a u a. Con espec o a los ca ac e es elacionados a la o ma del u o, se p esen a on 31 co elaciones con alo es al amen e signi ica i os, los alo es de co elación más ce canos a 1 ue on las co elaciones en e índice de la o ma ex e na del u o I con el índice II ( =0,990), índice de la o ma ex e na del u o II con el índice de la o ma in e na -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 -12 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 ANS_26 C1-1 C1-13 C1-16 C1-4 C2-1 C2-15 C2-18 C2-22 C2-26 C2-5 C2-8 C2-1 (1) C2-4 C3-12 C3-16 C3-5 C3-6 C3-8 C4-14 C4-15 C4-16 C4-5 C4-9 C5-2 C5-22 C5-7 C7-1 C7-13 C7-15 C7-2 C7-5 C7-7 C8-11 C8-13 C8-2 C8-24 C8-25 C8-4 C8-6 C9-12 C9-21 C9-4 (A) C9-11 C9-13 C9-4 (B) C9-5 C10-17 C10-18 C10-2 C12-11 C12-12 C12-13 C12-15 C12-8 Resul ados y Discusión 41 del u o ( =0,987), índice de la o ma ex e na del u o I con el índice de la o ma in e na del u o ( =0,977) y en e el índice de la cu a u a del u o con ci cula ( =0,960). También se encon a on 5 co elaciones nega i as con alo es al os en e ca ac e es asociados a la o ma del u o como: o mación de bloque dis al con elipsoide ( =-0,802) y con o oide ( =-0,560), índice de la cu a u a del u o con ec angula ( =-0,531), iangulo de la o ma del u o con obo oide ( =-0,845), y obo oide con o oide ( =- 0,859). Po úl imo, 18 ue on las co elaciones con alo es posi i os y al amen e signi ica i os en e los ca ac e es elacionados al amaño del u o y los elacionados a la o ma del u o, en e los cuales des acan las co elaciones en e al u a a mi ad de la anchu a con el índice de la o ma ex e na del u o I y II ( =0,689 y =0,676 espec i amen e), la al u a máxima con el índice de la o ma ex e na del u o I, II y el índice de la o ma in e na del u o ( =0,688, =0,675 y =0,662 en su o den); y las co elaciones en e la al u a de la cu a u a y los índices de la o ma ex e na del u o I, II y el índice de la o ma in e na del u o ( =0,651, =0,644 y =0,646 espec i amen e). De acue do a es os esul ados, en es udios pos e io es ya no se ía necesa io medi odos los ca ac e es (aunque el so wa e Toma o Analyze hace sencilla su medición), como esul ado de la al a co elación que exis e en e algunos ca ac e es asociados al amaño y o ma del u o. 5. CONCLUSIONES Conclusiones 42 5. CONCLUSIONES:  La ca ac e ización eno ípica y enómica halla on una conside able a iabilidad en los ca ac e es e aluados en e las MIILs. Es o o ece aliosas opo unidades pa a la selección en p og amas de mejo a, ya que una ez inalizadas las líneas, pe mi i á selecciona aquellas que sean ep esen a i as de acue do a cada ca ác e de in e és, y la posibilidad de c uza las en e sí pa a aumen a o mejo a dichos ca ac e es, y pos e io men e e alua su compo amien o en di e en es ambien es.  La disponibilidad de un conjun o de da os enómicos de la o ma del u o ob enidos con el so wa e Toma o Analyze ep esen a un a ance con espec o a la ca ac e ización manual, y es de g an u ilidad pa a la ca ac e ización de ge moplasma y cul i a es, así como pa a la selección en p og amas de mejo a de la be enjena, como lo ealizado en el eno ipado de las MIILs. P opo cionando da os cuan i a i os sob e muchos ca ac e es de la o ma del u o que no se ob ienen u ilizando desc ip o es mo ológicos medidos manualmen e. Po ejemplo en la ca ac e ización con encional espec o a la o ma del u o, es os se ag upa on en es ca ego ías (pe a, ahue ado y globula ). Mien as que, los esul ados ob enidos u ilizando el so wa e Toma o Analyze pe mi ie on obse a di e encias en e las MIILs den o de las ca ego ías mencionadas.  Las MIILs que ac ualmen e se es án desa ollando jun o con la selección asis ida po ma cado es (MAS) pe mi i á en un u u o ce cano dilucida el con ol gené ico e iden i ica QTLs de ca ac e es impo an es como la o ma, amaño y colo del u o, el con enido en an ocianinas, la espinosidad, esis encias y ole ancias a es eses bió icos y abió icos.  El mejo amien o pa a p opiedades bioac i as en los ege ales es cada ez más impo an e en los p og amas de mejo a de cul i os ho ícolas, la cons ucción de la colección de MIILs ab i á muchas opo unidades pa a el desa ollo de nue as a iedades de be enjenas con mayo ac i idad an ioxidan e y un meno pa deamien o del u o. Los esul ados del p esen e TFM en cuan o al con enido en CGA de las MIILs, mos a on que hubie on líneas que supe a on cla amen e al pa en al S. melongena. Po lo cual, dichas líneas se pod ían c uza en e ellas Conclusiones 43 de o ma que se pueden ob ene ma e iales con un con enido mejo ado en dicho ca ác e de in e és nu acéu ico. 6. ANEXOS Anexos 50 Anexo 4.- Tablas de signi icancias median e la p ueba de angos múl iples de S uden -Newman-Keuls. 1 PAR ANS_26_JPTO209 177,85 abcd 26,86 abcd 49,87 abcd 7,46 abcd 7,47 abcd 8,50 abcde 8,59 abcde 8,66 abcde 2 1 C1-1 BC4S1_22(4)9_PL1 243,60 abcd 27,07 abcd 55,77 abcd 7,76 abcd 7,81 abcd 7,87 abcd 8,05 abcd 8,07 abcd 3 1 C1-13 BC4S1_22(4)9_PL13 238,90 abcd 32,55 abcde 65,84 abcd 7,87 abcd 7,98 abcd 10,13 abcde 10,22 abcde 10,36 abcde 4 1 C1-16 BC4S1_22(4)9_PL16 163,27 abcd 26,84 abcd 47,91 abcd 7,04 abcd 7,14 abcd 8,22 abcd 8,31 abcd 8,34 abcd 5 1 C1-4 BC4S1_22(4)9_PL4 197,91 abcd 28,79 abcd 53,89 abcd 7,11 abcd 7,30 abcd 9,11 abcde 9,32 abcde 9,50 abcde 6 2 C2-1 BC4S1_25(2)10_PL1 284,36 abcd 34,11 bcde 74,89 abcd 9,51 cde 9,65 cde 9,39 abcde 9,72 abcde 9,76 abcde 7 2 C2-15 BC4S1_25(2)10_PL15 258,71 abcd 32,05 abcde 58,44 abcd 7,65 abcd 7,84 abcd 9,41 abcde 9,48 abcde 10,04 abcde 8 2 C2-18 BC4S1_25(2)10_PL18 159,49 abcd 26,26 abcd 43,41 abcd 6,09 abc 6,29 abc 8,44 abcde 8,57 abcde 9,74 abcde 9 2 C2-22 BC4S1_25(2)10_PL22 229,41 abcd 34,27 bcde 72,50 abcd 7,79 abcd 8,00 abcd 10,94 bcde 11,12 bcde 11,28 bcde 10 2 C2-26 BC4S1_25(2)10_PL26 144,16 abcd 27,90 abcd 46,55 abcd 7,57 abcd 7,89 abcd 7,68 abcd 8,19 abcd 8,85 abcde 11 2 C2-5 BC4S1_25(2)10_PL5 178,87 abcd 30,16 abcde 59,28 abcd 7,65 abcd 8,01 abcd 8,89 abcde 9,11 abcde 9,17 abcde 12 2 C2-8 BC4S1_25(2)10_PL8 163,15 abcd 30,70 abcde 61,94 abcd 7,69 abcd 7,84 abcd 9,51 abcde 9,69 abcde 9,74 abcde 13 2 C2-1 (1) BC5S1_25(10)1_PL1 192,62 abcd 31,56 abcde 63,02 abcd 7,09 abcd 7,13 abcd 10,72 bcde 10,89 bcde 10,87 abcde 14 2 C2-4 BC5S1_25(10)1_PL4 285,38 abcd 34,39 bcde 79,39 abcd 9,00 abcde 9,03 abcde 10,50 abcde 10,53 abcde 10,84 abcde 15 3 C3-12 BC5S1_31(5)5_PL12 234,62 abcd 31,18 abcde 64,45 abcd 7,89 abcd 8,10 abcd 9,94 abcde 10,14 abcde 10,18 abcde 16 3 C3-16 BC5S1_31(5)5_PL16 171,46 abcd 29,86 abcde 51,49 abcd 7,68 abcd 7,82 abcd 7,95 abcd 8,25 abcd 8,15 abcd 17 3 C3-5 BC5S1_31(5)5_PL5 325,04 abcd 34,97 bcde 78,96 abcd 8,91 abcde 9,06 abcde 10,78 bcde 10,89 bcde 10,90 abcde 18 3 C3-6 BC5S1_31(5)5_PL6 357,85 abcd 38,32 de 89,99 bcd 9,36 cde 9,72 cde 11,73 de 11,97 cde 12,43 de 19 3 C3-8 BC5S1_31(5)5_PL8 355,87 abcd 35,94 cde 85,02 abcd 9,46 abcd 9,73 cde 10,74 bcde 10,98 bcde 10,93 abcde 20 4 C4-14 BC5S1_56(10)3_PL14 226,48 abcd 31,55 abcde 67,81 abcd 8,19 abcd 8,27 abcde 9,83 abcde 9,99 abcde 10,01 abcde 21 4 C4-15 BC5S1_56(10)3_PL15 283,38 abcd 34,04 abcde 76,13 abcd 7,85 abcd 8,09 abcd 11,36 cde 11,45 cde 11,42 bcde 22 4 C4-16 BC5S1_56(10)3_PL16 154,13 abcd 27,97 abcd 44,97 abcd 7,92 abcd 8,44 abcde 6,77 abcd 7,24 abcd 9,84 abcde 23 4 C4-5 BC5S1_56(10)3_PL5 242,26 abcd 29,10 abcde 59,09 abcd 7,71 abcd 7,84 abcd 9,26 abcde 9,33 abcde 9,37 abcde 24 4 C4-9 BC5S1_56(10)3_PL9 217,32 abcd 29,41 abcde 58,12 abcd 7,85 abcd 7,95 abcd 9,22 abcde 9,28 abcde 9,28 abcde 25 5 C5-2 BC5S1_84(4)12_PL2 209,53 abcd 27,60 abcd 51,45 abcd 7,73 abcd 7,82 abcd 8,15 abcd 8,27 abcd 8,26 abcd 26 5 C5-22 BC5S1_84(4)12_PL22 269,51 abcd 33,56 abcde 75,02 abcd 8,84 abcde 8,92 abcde 10,16 abcde 10,27 abcde 10,38 abcde 27 5 C5-7 BC5S1_84(4)12_PL7 90,06 abc 19,31 abc 27,22 abc 6,11 abc 6,13 abc 5,00 ab 5,14 ab 5,27 ab 28 6 C6-13 BC2S1_60(2)_PL13 189,15 abcd 34,15 bcde 65,53 abcd 6,07 abc 6,94 abcd 12,41 de 12,56 de 12,70 de 29 6 C6-15 BC2S1_60(2)_PL15 217,96 abcd 33,71 abcde 66,24 abcd 6,78 abcd 7,54 abcd 11,54 cde 11,74 cde 11,90 cde 30 6 C6-20 BC2S1_60(2)_PL20 247,31 abcd 31,50 abcde 64,98 abcd 8,01 abcd 8,26 abcde 10,13 abcde 10,60 abcde 10,14 abcde 31 6 C6-7 BC2S1_60(2)_PL7 153,82 abcd 31,23 abcde 54,16 abcd 6,15 abc 6,66 abcd 10,41 abcde 10,72 abcde 11,13 bcde 32 6 C6-22 BC2S1_60(7)_PL22 82,87 abc 22,03 abcd 32,39 abcd 5,94 abc 6,02 abc 6,76 abcd 6,88 abcd 6,92 abcd Al u a de la cu a u a Nº CH Código Líneas Peso del u o (g s). Pe ime o Á ea Anchu a a media al u a Anchu a máxima Al u a a mi ad de la anchu a Al u a máxima Anexos 51 33 6 C6-4 BC2S1_60(7)_PL4 125,06 abc 24,20 abcd 39,74 abcd 6,61 abcd 6,67 abcd 7,06 abcde 7,34 abcd 7,32 abcd 34 6 C6-7 (7) BC2S1_60(7)_PL7 81,42 abc 17,99 ab 21,81 ab 5,26 ab 5,31 ab 5,16 ab 5,18 ab 5,31 ab 35 7 C7-1 BC4S1_76(3)3_PL1 690,90 e 45,7 e 139,00 e 11,77 e 11,81 e 14,43 e 14,47 e 14,66 e 36 7 C7-13 BC4S1_76(9)3_PL13 273,14 abcd 31,65 abcde 67,49 abcd 8,74 abcde 8,89 abcde 9,47 abcde 9,58 abcde 9,81 abcde 37 7 C7-15 BC4S1_76(9)3_PL15 201,59 abcd 30,16 abcde 59,64 abcd 7,12 abcd 7,19 abcd 10,17 abcde 10,24 abcde 10,08 abcde 38 7 C7-2 BC4S1_76(9)3_PL2 67,83 a 17,11 a 19,86 a 5,15 a 5,17 a 4,60 a 4,73 a 4,85 a 39 7 C7-5 BC4S1_76(9)3_PL5 297,56 abcd 33,32 abcde 74,68 abcd 8,92 abcde 9,06 abcde 10,11 abcde 10,20 abcde 10,31 abcde 40 7 C7-7 BC4S1_76(9)3_PL7 227,52 abcd 31,90 abcde 67,63 abcd 8,41 abcd 8,50 abcde 9,95 abcde 10,02 abcde 9,90 abcde 41 8 C8-11 BC4S1_53(6)5_PL11 223,80 abcd 29,49 abcde 59,21 abcd 7,99 abcd 8,13 abcd 8,90 abcde 9,10 abcde 9,15 abcde 42 8 C8-13 BC4S1_53(6)5_PL13 250,21 abcd 32,73 abcde 68,43 abcd 7,47 abcd 7,88 abcd 10,91 bcde 11,04 bcde 11,04 bcde 43 8 C8-2 BC4S1_53(6)5_PL2 225,91 abcd 30,99 abcde 60,57 abcd 6,90 abcd 7,10 abcd 10,54 abcde 10,67 abcde 10,72 abcde 44 8 C8-24 BC4S1_53(6)5_PL24 178,40 abcd 27,21 abcd 49,83 abcd 6,84 abcd 6,93 abcd 9,00 abcde 9,06 abcde 9,15 abcde 45 8 C8-25 BC4S1_53(6)5_PL25 294,58 abcd 32,51 abcde 70,76 abcd 8,19 abcd 8,37 abcde 10,56 abcde 10,68 abcde 10,55 abcde 46 8 C8-4 BC4S1_53(6)5_PL4 289,37 abcd 31,89 abcde 69,03 abcd 8,05 abcd 8,35 abcde 9,99 abcde 10,20 abcde 10,25 abcde 47 8 C8-6 BC4S1_53(6)5_PL6 332,85 abcd 37,70 de 88,19 abcd 8,78 abcde 9,32 bcde 12,38 de 12,56 de 12,33 de 48 9 C9-12 BC5S1_6(5)11A_PL12 211,40 abcd 31,61 abcde 64,25 abcd 7,68 abcd 7,94 abcd 10,59 abcde 10,69 abcde 10,72 abcde 49 9 C9-21 BC5S1_6(5)11A_PL21 380,13 bcd 38,15 de 96,15 cd 8,96 abcde 9,14 abcde 12,77 de 12,93 de 13,03 de 50 9 C9-4 (A) BC5S1_6(5)11A_PL4 434,58 d 36,17 abcde 87,41 abcd 9,45 abcd 9,68 cde 11,46 cde 11,52 cde 11,56 cde 51 9 C9-11 BC5S1_6(5)11B_PL11 264,02 abcd 32,06 abcde 68,62 abcd 8,24 abcd 8,35 abcde 10,23 abcde 10,30 abcde 10,49 abcde 52 9 C9-13 BC5S1_6(5)11B_PL13 239,90 abcd 32,56 abcde 68,04 abcd 7,74 abcd 7,87 abcd 10,93 bcde 11,02 bcde 11,11 bcde 53 9 C9-4 (B) BC5S1_6(5)11B_PL4 169,36 abcd 27,99 abcd 51,18 abcd 7,18 abcd 7,24 abcd 8,63 abcde 8,79 abcde 8,84 abcde 54 9 C9-5 BC5S1_6(5)11B_PL5 262,69 abcd 32,46 abcde 67,92 abcd 8,19 abcd 8,25 abcde 10,32 abcde 10,39 abcde 10,42 abcde 55 10 C10-17 BC4S1_55(4)5_PL17 386,05 cd 38,06 de 100,79 d 10,37 de 10,50 de 11,42 cde 11,46 cde 11,46 bcde 56 10 C10-18 BC4S1_55(4)5_PL18 342,32 abcd 32,52 abcde 71,60 abcd 8,53 abcde 8,68 abcde 10,54 abcde 10,57 abcde 10,64 abcde 57 10 C10-2 BC4S1_55(4)5_PL2 356,08 abcd 27,19 abcd 50,69 abcd 8,30 abcd 8,32 abcde 7,42 abcd 7,49 abcd 7,63 abcd 58 11 C11-12 BC4S1_26(2)9_PL12 74,05 ab 20,30 abc 26,94 abc 5,74 abc 6,10 abc 5,47 abc 5,77 abc 5,84 abc 59 12 C12-11 BC5S1_29(7)5_PL11 314,66 abcd 32,68 abcde 73,07 abcd 8,47 abcd 8,69 abcde 10,27 abcde 10,39 abcde 10,48 abcde 60 12 C12-12 BC5S1_29(7)5_PL12 187,23 abcd 31,24 abcde 61,24 abcd 7,38 abcd 7,63 abcd 10,12 abcde 10,17 abcde 10,18 abcde 61 12 C12-13 BC5S1_29(7)5_PL13 154,04 abcd 25,86 abcd 45,29 abcd 6,90 abcd 7,05 abcd 8,13 abcd 8,27 abcd 8,30 abcd 62 12 C12-15 BC5S1_29(7)5_PL15 259,71 abcd 31,53 abcde 59,55 abcd 7,82 abcd 8,05 abcd 9,29 abcde 9,52 abcde 9,64 abcde 63 12 C12-8 BC5S1_29(7)5_PL8 322,23 abcd 33,88 abcde 74,87 abcd 9,12 bcde 9,28 bcde 10,37 abcde 10,55 abcde 10,71 abcde 239,12 30,76 63,00 7,81 8,00 9,56 9,72 9,85 99,04 4,93 19,24 1,18 1,17 1,87 1,85 1,82 12,48 0,62 2,42 0,15 0,15 0,24 0,23 0,23 41,42 16,01 30,54 15,09 14,62 19,55 19,05 18,43 Al u a máxima Al u a de la cu a u a Pe ime o Á ea Anchu a a media al u a Anchu a máxima Al u a a mi ad de la anchu a Nº CH Código Líneas Peso del u o (g s). Media: Des iación es ánda E o es ánda Coe icien e de Va iación: Anexos 52 1 PAR ANS_26_JPTO209 1,15 abcde ghi 1,14 abcde 1,16 abcde 0,57 abcd 0,61 abc 0,93 abc 0,02 a 0,05 ab 2 1 C1-1 BC4S1_22(4)9_PL1 1,01 abcde 0,99 abcde 1,02 abcde 0,69 abcd 0,65 abc 1,06 abc 0,03 ab 0,04 ab 3 1 C1-13 BC4S1_22(4)9_PL13 1,28 abcde ghi 1,29 abcde g 1,32 abcde 0,69 abcd 0,66 abc 1,04 abc 0,03 ab 0,09 abcd 4 1 C1-16 BC4S1_22(4)9_PL16 1,16 abcde ghi 1,16 abcde 1,18 abcde 0,66 abcd 0,64 abc 1,05 abc 0,03 ab 0,06 ab 5 1 C1-4 BC4S1_22(4)9_PL4 1,27 abcde ghi abcde g 1,36 abcde 0,65 abcd 0,66 abc 0,97 abc 0,04 abc 0,09 abcd 6 2 C2-1 BC4S1_25(2)10_PL1 1,01 abcde 0,99 abcde 1,03 abcd 0,62 abcd 0,73 abc 0,85 abc 0,03 ab 0,04 ab 7 2 C2-15 BC4S1_25(2)10_PL15 1,21 abcde ghi 1,23 abcde g 1,36 abcde 0,67 abcd 0,61 abc 1,10 abc 0,03 ab 0,09 abcd 8 2 C2-18 BC4S1_25(2)10_PL18 1,37 cde ghi 1,40 bcde g 1,45 bcde 0,69 abcd 0,67 abc 1,05 abc 0,04 abc 0,12 abcd 9 2 C2-22 BC4S1_25(2)10_PL22 1,39 cde ghi 1,41 bcde g 1,47 bcde 0,79 cd 0,64 abc 1,23 bc 0,04 abc 0,13 abcd 10 2 C2-26 BC4S1_25(2)10_PL26 1,04 abcde g 1,01 abcde 1,38 abcde 0,59 abcd 0,54 a 1,10 abc 0,04 abc 0,09 abcd 11 2 C2-5 BC4S1_25(2)10_PL5 1,15 abcde ghi 1,17 abcde 1,22 abcde 0,69 abcd 0,78 abc 0,89 abc 0,05 abcd 0,08 abcd 12 2 C2-8 BC4S1_25(2)10_PL8 1,24 abcde ghi 1,24 abcde g 1,27 abcde 0,71 abcd 0,69 abc 1,04 abc 0,04 abc 0,09 abcd 13 2 C2-1 (1) BC5S1_25(10)1_PL1 1,53 ghij 1,51 e g 1,54 de 0,71 abcd 0,64 abc 1,11 abc 0,04 abc 0,14 abcd 14 2 C2-4 BC5S1_25(10)1_PL4 1,17 abcde ghi 1,17 abcde 1,21 abcde 0,75 bcd 0,65 abc 1,15 abc 0,03 ab 0,06 ab 15 3 C3-12 BC5S1_31(5)5_PL12 1,26 abcde ghi 1,26 abcde g 1,29 abcde 0,60 abcd 0,70 abc 0,92 abc 0,04 abc 0,08 abcd 16 3 C3-16 BC5S1_31(5)5_PL16 1,05 abcde g 1,04 abcde 1,07 abcde 0,65 abcd 0,63 abc 1,04 abc 0,04 abc 0,04 ab 17 3 C3-5 BC5S1_31(5)5_PL5 1,20 abcde ghi 1,21 abcde g 1,23 abcde 0,66 abcd 0,64 abc 1,06 abc 0,03 ab 0,07 ab 18 3 C3-6 BC5S1_31(5)5_PL6 1,24 abcde ghi 1,26 abcde g 1,32 abcde 0,60 abcd 0,57 abc 1,11 abc 0,06 abcd 0,10 abcd 19 3 C3-8 BC5S1_31(5)5_PL8 1,13 abcde ghi 1,14 abcde 1,17 abcde 0,69 abcd 0,61 abc 1,18 abc 0,04 abc 0,06 ab 20 4 C4-14 BC5S1_56(10)3_PL14 1,21 abcde ghi 1,20 abcde g 1,23 abcde 0,71 abcd 0,64 abc 1,12 abc 0,03 ab 0,08 abc 21 4 C4-15 BC5S1_56(10)3_PL15 1,41 de ghi 1,44 cde g 1,45 bcde 0,65 abcd 0,72 abc 0,92 abc 0,04 abc 0,12 abcd 22 4 C4-16 BC5S1_56(10)3_PL16 0,86 ab 0,86 ab 1,61 e 0,56 abc 0,63 abc 0,89 abc 0,04 abc 0,12 abcd 23 4 C4-5 BC5S1_56(10)3_PL5 1,18 abcde ghi 1,19 abcde 1,21 abcde 0,65 abcd 0,66 abc 0,99 abc 0,03 ab 0,06 ab 24 4 C4-9 BC5S1_56(10)3_PL9 1,17 abcde ghi 1,18 abcde 1,19 abcde 0,64 abcd 0,61 abc 1,05 abc 0,03 ab 0,06 ab 25 5 C5-2 BC5S1_84(4)12_PL2 1,06 abcde g 1,05 abcde 1,08 abcde 0,58 abcd 0,63 abc 0,93 abc 0,03 ab 0,03 ab 26 5 C5-22 BC5S1_84(4)12_PL22 1,16 abcde ghi 1,16 abcde 1,19 abcde 0,67 abcd 0,67 abc 1,01 abc 0,03 ab 0,06 ab 27 5 C5-7 BC5S1_84(4)12_PL7 0,83 a 0,82 a 0,87 a 0,69 abcd 0,67 abc 1,03 abc 0,03 ab 0,06 ab 28 6 C6-13 BC2S1_60(2)_PL13 1,80 j 2,04 h 2,10 h 0,58 abcd 0,86 c 0,68 ab 0,08 d 0,22 e 29 6 C6-15 BC2S1_60(2)_PL15 1,57 hij 1,72 g 1,84 gh 0,58 abcd 0,82 abc 0,72 ab 0,07 cd 0,12 de 30 6 C6-20 BC2S1_60(2)_PL20 1,28 abcde ghi 1,26 abcde g 1,30 abcde 0,56 abc 0,54 a 1,04 abc 0,05 abcd 0,09 ab 31 6 C6-7 BC2S1_60(2)_PL7 1,61 ij 1,69 g 1,84 gh 0,60 abcd 0,75 abc 0,80 abc 0,06 abcd 0,19 cde 32 6 C6-22 BC2S1_60(7)_PL22 1,14 abcde ghi 1,14 abcde 1,17 abcde 0,58 abcd 0,67 abc 0,87 abc 0,03 ab 0,06 ab Nº CH Código Líneas Índice de la o ma ex e na I Índice de la o ma ex e na II Índice de o ma de u o cu ado Fo mación de bloque p oximal Elipsoide Ci cula Fo mación de bloque e minal T iángulo de la o ma del u o Anexos 53 33 6 C6-4 BC2S1_60(7)_PL4 1,11 abcde gh 1,07 abcde 1,12 abcde 0,66 abcd 0,70 abc 0,94 abc 0,03 ab 0,05 ab 34 6 C6-7 (7) BC2S1_60(7)_PL7 0,98 abcde 0,98 abcde 1,00 abcd 0,70 abcd 0,58 abc 1,21 abc 0,02 a 0,02 a 35 7 C7-1 BC4S1_76(3)3_PL1 1,23 abcde ghi 1,23 abcde g 1,25 abcde 0,74 bcd 0,64 abc 1,15 abc 0,03 ab 0,08 abcd 36 7 C7-13 BC4S1_76(9)3_PL13 1,08 abcde gh 1,09 abcde 1,14 abcde 0,75 bcd 0,55 ab 1,37 c 0,03 ab 0,06 ab 37 7 C7-15 BC4S1_76(9)3_PL15 1,43 e ghi 1,43 cde g 1,39 abcde 0,69 abcd 0,66 abc 1,04 abc 0,04 abc 0,12 abcd 38 7 C7-2 BC4S1_76(9)3_PL2 0,92 abcd 0,90 abc 0,97 abc 0,66 abcd 0,63 abc 1,05 abc 0,02 a 0,03 ab 39 7 C7-5 BC4S1_76(9)3_PL5 1,13 abcde ghi 1,14 abcde 1,17 abcde 0,77 bcd 0,61 abc 1,27 bc 0,03 ab 0,05 ab 40 7 C7-7 BC4S1_76(9)3_PL7 1,18 abcde ghi 1,18 abcde 1,18 abcde 0,75 bcd 0,53 a 1,41 c 0,03 ab 0,06 ab 41 8 C8-11 BC4S1_53(6)5_PL11 1,13 abcde ghi 1,12 abcde 1,16 abcde 0,63 abcd 0,70 abc 0,91 abc 0,03 ab 0,06 ab 42 8 C8-13 BC4S1_53(6)5_PL13 1,41 de ghi 1,48 de g 1,50 cde 0,63 abcd 0,75 abc 0,84 abc 0,05 abcd 0,13 abcd 43 8 C8-2 BC4S1_53(6)5_PL2 1,50 ghij 1,53 e g 1,55 de 0,62 abcd 0,73 abc 0,86 abc 0,04 abc 0,14 bcd 44 8 C8-24 BC4S1_53(6)5_PL24 1,31 abcde ghi 1,32 abcde g 1,34 abcde 0,60 abcd 0,68 abc 0,88 abc 0,03 ab 0,10 abcd 45 8 C8-25 BC4S1_53(6)5_PL25 1,28 abcde ghi 1,30 abcde g 1,30 abcde 0,62 abcd 0,69 abc 0,90 abc 0,04 abc 0,09 abcd 46 8 C8-4 BC4S1_53(6)5_PL4 1,22 abcde ghi 1,23 abcde g 1,27 abcde 0,61 abcd 0,74 abc 0,83 abc 0,04 abc 0,08 abcd 47 8 C8-6 BC4S1_53(6)5_PL6 1,35 bcde ghi 1,41 bcde g 1,42 bcde 0,59 abcd 0,68 abc 0,87 abc 0,06 abcd 0,12 abcd 48 9 C9-12 BC5S1_6(5)11A_PL12 1,35 bcde ghi 1,38 bcde g 1,41 abcde 0,54 ab 0,66 abc 0,81 abc 0,04 abc 0,11 abcd 49 9 C9-21 BC5S1_6(5)11A_PL21 1,41 de ghi 1,43 cde g 1,46 bcde 0,69 abcd 0,68 abc 1,03 abc 0,04 abc 0,12 abcd 50 9 C9-4 (A) BC5S1_6(5)11A_PL4 1,20 abcde ghi 1,23 abcde g 1,24 abcde 0,59 abcd 0,68 abc 0,87 abc 0,03 ab 0,07 ab 51 9 C9-11 BC5S1_6(5)11B_PL11 1,23 abcde ghi 1,24 abcde g 1,27 abcde 0,56 abc 0,75 abc 0,74 ab 0,04 abc 0,08 abcd 52 9 C9-13 BC5S1_6(5)11B_PL13 1,40 cde ghi 1,42 cde g 1,44 bcde 0,63 abcd 0,65 abc 0,90 abc 0,04 abc 0,12 abcd 53 9 C9-4 (B) BC5S1_6(5)11B_PL4 1,22 abcde ghi 1,21 abcde g 1,24 abcde 0,65 abcd 0,68 abc 0,97 abc 0,03 ab 0,07 ab 54 9 C9-5 BC5S1_6(5)11B_PL5 1,26 abcde ghi 1,26 abcde g 1,28 abcde 0,64 abcd 0,64 abc 1,00 bc 0,03 ab 0,09 abcd 55 10 C10-17 BC4S1_55(4)5_PL17 1,09 abcde gh 1,10 abcde 1,11 abcde 0,80 d 0,58 abc 1,40 c 0,04 abc 0,06 ab 56 10 C10-18 BC4S1_55(4)5_PL18 1,22 abcde ghi 1,24 abcde g 1,25 abcde 0,63 abcd 0,63 abc 1,00 abc 0,03 ab 0,07 ab 57 10 C10-2 BC4S1_55(4)5_PL2 0,90 abc 0,89 abc 0,92 ab 0,73 bcd 0,61 abc 1,20 abc 0,02 a 0,03 ab 58 11 C11-12 BC4S1_26(2)9_PL12 0,95 abcde 0,95 abcd 1,02 abcd 0,50 a 0,85 bc 0,59 a 0,06 bcd 0,06 ab 59 12 C12-11 BC5S1_29(7)5_PL11 1,19 abcde ghi 1,20 abcde g 1,23 abcde 0,62 abcd 0,65 abc 0,97 abc 0,03 ab 0,07 ab 60 12 C12-12 BC5S1_29(7)5_PL12 1,32 abcde ghi 1,35 abcde g 1,38 abcde 0,62 abcd 0,62 abc 1,03 abc 0,04 abc 0,10 abcd 61 12 C12-13 BC5S1_29(7)5_PL13 1,17 abcde ghi 1,18 abcde 1,21 abcde 0,55 ab 0,68 abc 0,82 abc 0,03 ab 0,07 ab 62 12 C12-15 BC5S1_29(7)5_PL15 1,18 abcde ghi 1,19 abcde 1,25 abcde 0,67 abcd 0,61 abc 1,08 abc 0,02 a 0,08 abcd 63 12 C12-8 BC5S1_29(7)5_PL8 1,14 abcde ghi 1,14 abcde 1,20 abcde 0,56 abc 0,60 abc 0,94 abc 0,03 ab 0,06 ab 1,22 1,23 1,28 0,65 0,66 1,00 0,04 0,08 0,18 0,21 0,21 0,06 0,07 0,16 0,01 0,04 0,02 0,03 0,03 0,01 0,01 0,02 0,00 0,00 14,71 16,99 16,60 9,97 10,11 16,27 32,56 45,11 Nº CH Código Líneas Índice de la o ma ex e na I Índice de la o ma ex e na II Índice de o ma de u o cu ado Fo mación de bloque p oximal Fo mación de bloque e minal T iángulo de la o ma del u o Elipsoide Ci cula Coe icien e de a iación: Media: Des iación es ánda : E o es ánda : Anexos 54 1 PAR ANS_26_JPTO209 0,48 cd 0,00 a 0,12 abc 0,00 a 1,14 abcde 2 1 C1-1 BC4S1_22(4)9_PL1 0,53 cd 0,00 a 0,07 abc 0,10 a 0,99 abcd 3 1 C1-13 BC4S1_22(4)9_PL13 0,51 cd 0,01 a 0,15 abc 0,00 a 1,22 abcde 4 1 C1-16 BC4S1_22(4)9_PL16 0,51 cd 0,01 a 0,10 abc 0,07 a 1,16 abcde 5 1 C1-4 BC4S1_22(4)9_PL4 0,48 cd 0,01 a 0,14 abc 0,02 a 1,28 abcde 6 2 C2-1 BC4S1_25(2)10_PL1 0,53 cd 0,01 a 0,20 abc 0,00 a 0,97 abc 7 2 C2-15 BC4S1_25(2)10_PL15 0,42 abcd 0,01 a 0,00 a 0,09 a 1,08 abcd 8 2 C2-18 BC4S1_25(2)10_PL18 0,51 cd 0,01 a 0,17 abc 0,00 a 1,36 bcde 9 2 C2-22 BC4S1_25(2)10_PL22 0,50 cd 0,02 a 0,00 a 0,12 a 1,40 bcde 10 2 C2-26 BC4S1_25(2)10_PL26 0,34 ab 0,02 a 0,00 a 0,10 a 1,08 abcd 11 2 C2-5 BC4S1_25(2)10_PL5 0,53 cd 0,01 a 0,25 abc 0,00 a 1,15 abcde 12 2 C2-8 BC4S1_25(2)10_PL8 0,52 cd 0,01 a 0,09 abc 0,05 a 1,24 abcde 13 2 C2-1 (1) BC5S1_25(10)1_PL1 0,53 cd 0,00 a 0,09 abc 0,04 a 1,51 de 14 2 C2-4 BC5S1_25(10)1_PL4 0,55 d 0,00 a 0,00 a 0,12 a 1,17 abcde 15 3 C3-12 BC5S1_31(5)5_PL12 0,51 cd 0,02 a 0,15 abc 0,05 a 1,26 abcde 16 3 C3-16 BC5S1_31(5)5_PL16 0,52 cd 0,01 a 0,00 a 0,08 a 1,01 abcd 17 3 C3-5 BC5S1_31(5)5_PL5 0,52 cd 0,01 a 0,14 abc 0,01 a 1,19 abcde 18 3 C3-6 BC5S1_31(5)5_PL6 0,49 cd 0,01 a 0,22 abc 0,00 a 1,20 abcde 19 3 C3-8 BC5S1_31(5)5_PL8 0,51 cd 0,02 a 0,06 abc 0,08 a 1,13 abcde 20 4 C4-14 BC5S1_56(10)3_PL14 0,53 cd 0,01 a 0,07 abc 0,09 a 1,21 abcde 21 4 C4-15 BC5S1_56(10)3_PL15 0,52 cd 0,00 a 0,18 abc 0,00 a 1,42 bcde 22 4 C4-16 BC5S1_56(10)3_PL16 0,34 a 0,04 a 0,15 abc 0,00 a 1,00 abcd 23 4 C4-5 BC5S1_56(10)3_PL5 0,52 cd 0,01 a 0,12 abc 0,06 a 1,19 abcde 24 4 C4-9 BC5S1_56(10)3_PL9 0,50 cd 0,02 a 0,04 abc 0,09 a 1,18 abcde 25 5 C5-2 BC5S1_84(4)12_PL2 0,51 cd 0,00 a 0,16 abc 0,00 a 1,05 abcd 26 5 C5-22 BC5S1_84(4)12_PL22 0,52 cd 0,00 a 0,09 abc 0,06 a 1,16 abcde 27 5 C5-7 BC5S1_84(4)12_PL7 0,54 cd 0,00 a 0,05 abc 0,07 a 0,82 a 28 6 C6-13 BC2S1_60(2)_PL13 0,43 abcd 0,02 a 0,34 c 0,00 a 2,01 g 29 6 C6-15 BC2S1_60(2)_PL15 0,42 abcd 0,00 a 0,32 bc 0,00 a 1,74 30 6 C6-20 BC2S1_60(2)_PL20 0,45 abcd 0,01 a 0,19 abc 0,00 a 1,26 abcde 31 6 C6-7 BC2S1_60(2)_PL7 0,39 abc 0,00 a 0,25 abc 0,00 a 1,63 e 32 6 C6-22 BC2S1_60(7)_PL22 0,49 cd 0,00 a 0,17 abc 0,00 a 1,14 abcde O oboide O oide Índice de la o ma in e na Nº CH Código Líneas Rec angula Al u a de homb os Anexos 55 33 6 C6-4 BC2S1_60(7)_PL4 0,53 cd 0,01 a 0,14 abc 0,01 a 1,07 abcd 34 6 C6-7 (7) BC2S1_60(7)_PL7 0,49 cd 0,02 a 0,00 a 0,16 a 0,98 abcd 35 7 C7-1 BC4S1_76(3)3_PL1 0,53 cd 0,02 a 0,00 a 0,10 a 1,23 abcde 36 7 C7-13 BC4S1_76(9)3_PL13 0,50 cd 0,01 a 0,02 ab 0,16 a 1,11 abcde 37 7 C7-15 BC4S1_76(9)3_PL15 0,53 cd 0,00 a 0,15 abc 0,00 a 1,43 bcde 38 7 C7-2 BC4S1_76(9)3_PL2 0,51 cd 0,01 a 0,05 abc 0,09 a 0,90 ab 39 7 C7-5 BC4S1_76(9)3_PL5 0,54 cd 0,03 a 0,00 a 0,11 a 1,14 abcde 40 7 C7-7 BC4S1_76(9)3_PL7 0,51 cd 0,02 a 0,00 a 0,13 a 1,17 abcde 41 8 C8-11 BC4S1_53(6)5_PL11 0,50 cd 0,003 a 0,18 abc 0,00 a 1,12 abcde 42 8 C8-13 BC4S1_53(6)5_PL13 0,49 cd 0,003 a 0,24 abc 0,00 a 1,48 abcde 43 8 C8-2 BC4S1_53(6)5_PL2 0,50 cd 0,01 a 0,20 abc 0,00 a 1,52 de 44 8 C8-24 BC4S1_53(6)5_PL24 0,50 cd 0,01 a 0,16 abc 0,00 a 1,31 abcde 45 8 C8-25 BC4S1_53(6)5_PL25 0,52 cd 0,03 a 0,19 abc 0,00 a 1,30 abcde 46 8 C8-4 BC4S1_53(6)5_PL4 0,51 cd 0,003 a 0,24 abc 0,00 a 1,23 abcde 47 8 C8-6 BC4S1_53(6)5_PL6 0,46 bcd 0,03 0,23 abc 0,00 a 1,38 bcde 48 9 C9-12 BC5S1_6(5)11A_PL12 0,44 abcd 0,004 a 0,21 abc 0,00 a 1,37 bcde 49 9 C9-21 BC5S1_6(5)11A_PL21 0,52 cd 0,01 a 0,13 abc 0,03 a 1,43 bcde 50 9 C9-4 (A) BC5S1_6(5)11A_PL4 0,50 cd 0,01 a 0,19 abc 0,00 a 1,22 abcde 51 9 C9-11 BC5S1_6(5)11B_PL11 0,51 cd 0,00 a 0,21 abc 0,00 a 1,24 abcde 52 9 C9-13 BC5S1_6(5)11B_PL13 0,48 cd 0,01 a 0,18 abc 0,00 a 1,42 bcde 53 9 C9-4 (B) BC5S1_6(5)11B_PL4 0,52 cd 0,00 a 0,11 abc 0,03 a 1,20 abcde 54 9 C9-5 BC5S1_6(5)11B_PL5 0,51 cd 0,00 a 0,15 abc 0,00 a 1,25 abcde 55 10 C10-17 BC4S1_55(4)5_PL17 0,53 cd 0,00 a 0,00 a 0,17 a 1,10 abcde 56 10 C10-18 BC4S1_55(4)5_PL18 0,50 cd 0,00 a 0,17 abc 0,00 a 1,23 abcde 57 10 C10-2 BC4S1_55(4)5_PL2 0,53 cd 0,00 a 0,00 a 0,14 a 0,89 ab 58 11 C11-12 BC4S1_26(2)9_PL12 0,50 cd 0,04 a 0,29 abc 0,00 a 0,96 abc 59 12 C12-11 BC5S1_29(7)5_PL11 0,48 cd 0,002 a 0,15 abc 0,01 a 1,20 abcde 60 12 C12-12 BC5S1_29(7)5_PL12 0,45 abcd 0,003 a 0,11 abc 0,04 a 1,27 abcde 61 12 C12-13 BC5S1_29(7)5_PL13 0,48 cd 0,01 a 0,19 abc 0,00 a 1,18 abcde 62 12 C12-15 BC5S1_29(7)5_PL15 0,44 abcd 0,01 a 0,00 a 0,07 a 1,18 abcde 63 12 C12-8 BC5S1_29(7)5_PL8 0,45 abcd 0,03 a 0,08 abc 0,06 a 1,13 abcde 0,49 0,01 0,13 0,04 1,22 0,04 0,01 0,09 0,05 0,20 0,01 0,00 0,01 0,01 0,03 8,82 108,20 69,58 124,08 16,41 Índice de la o ma in e na Líneas Rec angula Al u a de homb os O oboide O oide Coe icien e de a iación: Media: Des iación es ánda : E o es ánda : Nº CH Código Anexos 56 Anexo 5.- Coe icien e de co elación de Pea son pa a obse a el g ado de elación en e las a iables en la colección de MIILs. ***, **, *, y ns indican signi ica i as a P <0,001; p <0,01, p <0,05 y no signi ica i os espec i amen e, pa a el coe icien e de co elación ( ). Al amen e signi ica i as. No signi ica i as. Peso u o (g ) 0,849*** 0,921*** 0,897*** 0,899*** 0,751*** 0,744*** 0,737*** 0,117ns 0,109ns 0,005ns 0,272* -0,178ns_ 0,265* -0,075ns_ -0,014ns_ 0,213ns 0,011ns -0,133ns_ 0,131ns 0,093ns 0,070ns 0,163ns 0,318** 0,101ns 0,080ns 0,175ns -0,484***_ Pe ime o 0,967*** 0,830*** 0,872*** 0,947*** 0,951*** 0,954*** 0,455*** 0,445*** 0,377** 0,204ns -0,043ns_ 0,156ns 0,242ns 0,341** 0,028ns 0,002ns 0,048ns -0,029ns_ 0,431*** 0,073ns 0,210ns 0,251* 0,094ns 0,125ns 0,147ns -0,3653**_ Á ea 0,889*** 0,911*** 0,903*** 0,901*** 0,892*** 0,330** 0,315** 0,208ns 0,279* -0,091ns_ 0,227ns 0,121ns 0,188ns 0,173ns -0,007**_ -0,031*_ 0,056ns 0,305* 0,058ns 0,203ns 0,278* 0,079ns 0,131ns 0,155ns -0,418***_ Anchu a media al u a 0,990*** 0,651*** 0,652*** 0,662*** -0,089ns_ -0,108ns_ -0,147ns_ 0,306* -0,332**_ 0,378** -0,177ns_ -0,191ns_ 0,205ns 0,051ns -0,261*_ 0,207ns -0,111ns_ 0,095ns 0,266* 0,334** 0,143ns 0,087ns 0,217ns -0,417***_ Anchu a máxima 0,701*** 0,706*** 0,724*** -0,020ns_ -0,027ns_ -0,042ns_ 0,249ns -0,262*_ 0,312* -0,059ns_ -0,089ns_ 0,120ns 0,095ns -0,17ns_ 0,157ns -0,026ns_ 0,119ns 0,248ns 0,286* 0,129ns 0,113ns 0,204ns -0,420***_ Al u a mi ad anchu a 0,999*** 0,976*** 0,689*** 0,676*** 0,540***_ 0,121ns 0,083ns 0,028ns 0,355** 0,517*** 0,027ns -0,095ns_ 0,210ns -0,156ns_ 0,662*** 0,009ns 0,133ns 0,200ns 0,061ns 0,162ns 0,116ns -0,358**_ Al u a máxima 0,981*** 0,688*** 0,675*** 0,555*** 0,103ns 0,087ns 0,016ns 0,378** 0,530*** -0,002ns_ -0,074ns_ 0,222ns -0,169ns_ 0,664*** 0,024ns 0,136ns 0,177ns 0,055ns 0,169ns 0,115ns -0,350**_ Al u a de cu a u a 0,651*** 0,644*** 0,612*** 0,078ns 0,076ns 0,007ns 0,391** 0,569*** -0,114ns_ -0,007ns_ 0,212ns -0,170ns_ 0,646*** 0,040ns 0,111ns 0,145ns 0,087ns 0,171ns 0,107ns -0,340**_ Índice ex e no I 0,990*** 0,856*** -0,106ns_ 0,398*** -0,297*_ 0,609*** 0,859*** -0,151ns_ -0,207ns_ 0,497*** -0,403***_ 0,977*** -0,069ns_ -0,0580ns_ -0,038ns_ -0,035ns_ 0,113ns -0,062ns_ -0,034ns_ Índice ex e no II 0,881*** -0,137ns_ 0,449*** -0,334**_ 0,663*** 0,880*** -0,195ns_ -0,173ns_ 0,536*** -0,398***_ 0,987*** -0,048ns -0,090ns_ -0,065ns_ -0,043ns_ 0,116ns -0,073ns_ -0,027ns_ Índice cu a del u o -0,249*_ 0,407*** -0,376**_ 0,721*** 0,664 *** -0,531***_ 0,034ns 0,517*** -0,407***_ 0,907*** 0,027ns -0,153ns_ -0,199ns_ -0,01ns_ 0,130ns -0,114ns_ 0,045ns Fo ma bloque P ox. -0,3672**_ 0,828*** -0,308*_ -0,208ns_ 0,526*** -0,116ns_ -0,692***_ 0,721*** -0,157ns_ 0,031ns 0,215ns 0,391** -0,013ns_ -0,245ns_ -0,056ns_ 0,039ns Fo ma bloque dis al -0,802***_ 0,579*** 0,470*** 0,050ns -0,030ns_ 0,747*** -0,560***_ 0,454*** -0,125ns_ -0,045ns_ -0,307*_ -0,121ns_ 0,166ns -0,099ns_ 0,162ns T iángulo de la o ma -0,445***_ -0,384**_ 0,270* -0,008ns_ -0,845***_ 0,813*** -0,350**_ 0,134ns 0,155ns 0,396*** 0,039ns -0,255*_ 0,015ns -0,081ns_ Elipsoide 0,774*** -0,324**_ 0,159ns 0,660*** -0,358**_ 0,681*** 0,163ns -0,065ns_ -0,366**_ -0,173ns_ 0,169ns -0,112ns_ 0,043ns Ci cula -0,450***_ -0,023ns_ 0,540*** -0,410***_ 0,899*** 0,040ns -0,112ns_ -0,203ns_ -0,081ns_ 0,106ns -0,123ns_ 0,009ns Rec angula -0,304*_ -0,181ns_ 0,172ns -0,227ns_ -0,131ns_ 0,174ns 0,312* -0,014ns_ 0,005ns 0,144ns 0,011ns Al u a homb o -0,052ns_ 0,117ns -0,137ns_ 0,162ns -0,057ns_ -0,083ns_ -0,187ns_ 0,081ns -0,079ns_ -0,021ns_ Obo oide -0,859***_ 0,546*** -0,043ns_ -0,188ns_ -0,410***_ -0,093ns_ 0,295* 0,066ns -0,001ns_ O oide -0,402***_ 0,072ns 0,192ns 0,263* -0,022ns_ -0,246ns_ -0,182ns_ -0,017ns_ Índice o ma in e na -0,048ns_ -0,125ns_ -0,114ns_ -0,033ns_ 0,159ns -0,086ns_ -0,037ns_ Espinas cáliz -0,047ns_ -0,040ns_ 0,053ns -0,201ns_ 0,223ns -0,028ns_ Colo u o 0,022ns -0,050ns_ 0,027ns 0,000ns -0,021ns_ Fo ma de u o 0,143ns -0,118ns_ 0,151ns -0,069ns_ Nº Pé alos 0,055ns 0,124ns -0,084ns_ Colo lo -0,066ns_ -0,031ns Tamaño lo -0,062ns_ CGA mg/g Fo ma de u o Nº Pé alos Colo lo Tamaño lo CGA mg/g Colo u o Fo ma bloque P ox Fo ma bloque dis al T iángulo Elipsoide Ci cula Rec ang Al u a homb o Obo oid O oide Índ. o ma in e na Espinas cáliz Índice cu a u o Peso (g ) Pe im. Á ea Anchu a media al u a Anchu a máxima Al u a mi ad de anchu a Al u a máxima Al u a cu a u a Índice ex e no I Índice ex e no II 7. BIBLIOGRAFÍA Bibliog a ía 57 7. BIBLIOGRAFÍA: Adeniji, O. & Kusolwa, P., 2012. Gene ic di e si y among accessions o Solanum ae hiopicum L. g oups based on mo pho-ag onomic ai s. Plan Gene ic Resou ces. A ailable a : h p://jou nals.camb idge.o g/abs ac _S1479262112000226 [Accessed May 17, 2016]. Adeniji, O., Kusolwa, P. & Reuben, S., 2013. Mo phological desc ip o s and mic o sa elli e di e si y among sca le eggplan g oups. A ican C op Science Jou nal. A ailable a : h p://www.ajol.in o/index.php/acsj/a icle/ iew/86107 [Accessed May 17, 2016]. Akani apicha , P., Ph aibung, K. & Nuchklang, K., 2010. An ioxidan and hepa op o ec i e ac i i ies o i e eggplan a ie ies. Food and Chemical. A ailable a : h p://www.sciencedi ec .com/science/a icle/pii/S027869151000503X [Accessed May 3, 2016]. A ce José, P ohens Jaime & Hu ado Ma ia, 2008. 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