Estudio de los recursos fitogenéticos del complejo Festuca-Lolium

A Co uña Oc ub e de 2009 UNIVERSIDADE DE SAN T IAGO DE COMPOSTELA ESCOLA POLITÉCNICA SUPERIOR DEPARTAMENTO DE PRODUCIÓN VEXETAL Es udio de los ecu sos i ogené icos del complejo Fes uca – Lolium Tesis Doc o al Julio En ique López Díaz Lugo, 2009 UNIVERSIDADE DE SANTIAGO DE COMPOSTELA ESCOLA POLITÉCNICA SUPERIOR DEPARTAMENTO DE PRODUCIÓN VEXETAL Es udio de los ecu sos i ogené icos del complejo Fes uca – Lolium Tesis Doc o al Julio En ique López Díaz Di ec o : D . Jose Albe o Oli ei a P endes LUGO, 2009 D. Jose Albe o Oli ei a P endes, D . Ingenie o Ag ónomo, P o eso Ti ula del Á ea de P oducción Vege al de la Uni e sidad de O iedo, como di ec o de la Tesis Doc o al: “Es udio de los ecu sos i ogené icos del complejo Fes uca - Lolium ”, con D. An onio Riguei o Rod íguez como u o . Realizada en el Cen o de In es igaciones Ag a ias de Mabegondo (CIAM) - Ins i u o Galego de Calidade Alimen a ia (INGACAL) de la Xun a de Galicia. AUTORIZA: La p esen ación de la ci ada Tesis Doc o al, ealizada po D. Julio En ique López Díaz, dado que conside o que eúne las condiciones necesa ias pa a su de ensa. Y, pa a que así cons e, a los e ec os opo unos, expide el siguien e ce i icado en Mie es a 30 de oc ub e de 2009. Fdo: Jose Albe o Oli ei a P endes El Tu o del Depa amen o de P oducción Vege al An onio Riguei o Rod íguez AGRADECIMIENTOS Deseo exp esa mi ag adecimien o a las ins i uciones y o ganismos que han con ibuido a la ealización de es e abajo apo ando inanciación y medios pa a la elabo ación de es a esis: Al Ins i u o Nacional de Tecnología Ag a ia y Alimen a ia (INIA) po la inanciación de la beca p edoc o al que dio luga a es a esis doc o al. Al Cen o de In es igaciones Ag a ias (CIAM – INGACAL), po habe me p opo cionado los medios écnicos y humanos necesa ios pa a el abajo de campo y de labo a o io. Al Dp o. de P oducción Vege al de la Uni e sidad de San iago de Compos ela (USC), po acoge es e abajo. También deseo exp esa mi ag adecimien o a odas las pe sonas que de dis in as o mas han colabo ado en es e abajo: Al D . Jose Albe o Oli ei a P endes, po habe me iniciado hace años en la In es igación Cien í ica y po su ines imable ayuda e in alo able apoyo en odo momen o en la di ección de es a esis. Al D . An onio Riquei o Rod íguez, po la u o ía de es e abajo A la D a. Rosa Mosque a Losada po acoge es e abajo en el Dp o de P oducción Vege al de la USC. Al D. Juan Cas o Insua, Di ec o del CIAM, po habe me animado con inuamen e a inaliza el abajo, p opo cionándome siemp e medios y iempo. A D. Juan Piñei o Andión, Di ec o del Dp o de Pas os y Cul i os del CIAM, po su apoyo y o ien aciones en el abajo de campo. A odo el pe sonal de campo del CIAM que abajó en la implan ación y man enimien o de los ensayos, así como a odo el pe sonal de labo a o io po la ayuda con los equipos. DEDICATORIA A mi amilia, especialmen e a mi mad e quien an o hubie a dis u ado con es e abajo, y a mis he manas po su apoyo. 16 ABREVIATURAS Y SÍMBOLOS *, **, ***: signi ica i o al ni el 5, 1 y 0,1% espec i amen e A: núme o medio de alelos po locus ACP: análisis de componen es p incipales Acp-1: os a asa ácida AFLP: Ampli ied F agmen Leng h Polymo phism ahb: anchu a de la hoja bande a ain: abundancia de in lo escencias alp: al u a de la plan a al : al e na i idad ANOVA: análisis de a ianza Blq: bloque : es chi-cuad ado CIAM: Cen o de In es igaciones Ag a ias de Mabegondo clu: clús e c e: c ecimien o en espigado c i: c ecimien o de in ie no CRi: con ibución ela i a a la ine cia de pun os c p: c ecimien o de p ima e a c : c ecimien o o al c : c ecimien o de e ano CSIC: Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas CT: colección o al DST: di e sidad gené ica en e subpoblaciones en : ole ancia a en e medades FAO: Food and Ag icul u e O ganiza ion Fec. Rec.: echa de ecolección es: echa de espigado FIS: dé ici ela i o de he e ocigo os en elación con cada sub-población FIT: dé ici de he e ocigo os ela i o en la población o al FST: índice de ijación FV: uen e de a iación GL: g ados de libe ad hc : hábi o de c ecimien o Ho: he e ocigosidad media obse ada Hp: he e ocigosidad media espe ada en panmixia Hs: he e ocigosidad media espe ada IBPGR: In e na ional Boa d o Plan Gene ic Resou ces INGACAL: Ins i u o Galego de Calidade Alimen a ia INIA: Ins i u o Nacional de In es igación y Tecnología Ag a ia y Alimen a ia IPGRI: In e na ional Plan Gene ic Resou ces Ins i u e ISSR: In e Simple Sequence Repea La .: la i ud lhb: longi ud de la hoja bande a Long.: longi ud M1: mé odo 1 M2: mé odo 2 M3: mé odo 3 M4: mé odo 4 M5: mé odo 5 M6: mé odo 6 MAPA: Minis e io de Ag icul u a, Pesca y Alimen ación MBG: Misión Biológica de Galicia ns:no signi ica i o PAC: Polí ica Ag a ia Comuni a ia Pex-1: pe oxidasa Pgi-2: os ogluco-isome asa Pgm-1: os ogluco-mu asa Pobl.: población p ec: p ecocidad es: eespigado Sdh-1: shikima o deshid ogenasa Sig.: signi icación SPR: semipa ial R squa e USC: Uni e sidade de San iago de Compos ela Va . acum.: a ianza acumulada Es udio de los ecu sos i ogené icos del complejo Fes uca – Lolium. Tesis Doc o al. J. E. López Diaz. 17 ESTRUCTURA DE ESTA TESIS DOCTORAL En el p esen e abajo se in es igan cues iones p ác icas de manejo en los bancos de ge moplasma, median e es udios ag onómicos, écnicas es adis icas y ma cado es isoenzimá icos. En el CAPÍTULO I se ealiza una ca ac e ización ag onómica de accesiones de es especies o aje as de g amíneas que se conse an en el Banco de G amíneas p a enses del CIAM – INGACAL. Se a a de un abajo ag onómico desc ip i o sob e un o al de 74 accesiones de aig ás inglés, 42 de aig ás i aliano, y 24 de es uca al a, jun o a di e sos cul i a es come ciales. En el CAPÍTULO II se compa an di e sos p ocedimien os ma emá icos pa a la c eación de colecciones nuclea es ep esen a i as de las colecciones an e io men e es udiadas en el capí ulo an e io , median e écnicas mul i a ian es, mé odos alea o ios e índices de di e sidad. Finalmen e en el CAPÍTULO III se in es iga la conse ación de la di e sidad gené ica median e la c eación de poblaciones he e ogéneas o “pools” po c uzamien o de g upos ag onómicamen e simila es en una selección de poblaciones de aig ás i aliano. 18 Es udio de los ecu sos i ogené icos del complejo Fes uca – Lolium. Tesis Doc o al. J. E. López Diaz. 19 RESUMEN En e los años 1985 y 1997 se lle ó a cabo una ecolección de g amíneas p a enses de las especies de aig ás inglés ( Lolium pe enne L . ), aig ás i aliano ( Lolium mul i lo um Lam . ) y es uca al a ( Fes uca a undinacea Sch eb.) ealizada p incipalmen e en la España húmeda. Se ob u ie on 140 poblaciones iables de un o al de 187 ecolec adas, y que ac ualmen e se conse an en el banco de ge moplasma de especies p a enses del Cen o de In es igaciones Ag a ias de Mabegondo (CIAM – INGACAL). Las 140 en adas ue on e aluadas ag onómicamen e median e 13 desc ip o es ag onómicos y el índice de di e sidad de Shanon-Wea e du an e los años 1998-2000. Se e alua on en o al 74 poblaciones de aig ás ingles, 42 de aig ás i aliano y 24 de es uca al a, jun o con algunos cul i a es come ciales de las es especies. Con los da os ob enidos, sob e las colecciones base se compa a on seis mé odos pa a c ea colecciones nuclea es. También se ealizo un es udio sob e la conse ación de la di e sidad median e la c eación de poblaciones he e ogéneas o pools gené icos espec o a la mul iplicación indi idual de mues as. Pa a ello se mul iplica on en panmixia dos g upos de ca ac e ís icas ag onómicas simila es de L. mul i lo um y se analiza on las descendencias esul an es median e ca ac e es ag onómicos y análisis de isoenzimas median e écnicas de elec o o esis en gel de almidón. Las colecciones de pa ida p esen a on una g an a iabilidad ag omo ológica, y a ias poblaciones u ie on un mejo compo amien o ag onómico que las a iedades come ciales, an o en endimien os como en esis encia a en e medades. Los cul i a es de aig ás inglés c eados a pa i de ma e ial au óc ono de Galicia, supe a on al es o de a iedades. En las colecciones de aig ases, las poblaciones más p oduc i as ue on las más a días, p o enien es de zonas simila es a la localidad de ensayo, mayo i a iamen e gallegas. En es uca al a las más p oduc i as ue on las más p ecoces. 20 Pa a la c eación de colecciones nuclea es, los mé odos mul i a ian es mos a on se más e icaces que los de selección al aza . El mé odo que mejo conse ó la di e sidad en ambas colecciones nuclea es ue el de mayo con ibución a la ine cia de la nube de pun os, conse ando espec i amen e pa a el aig ás inglés y aig ás i aliano un 87% y un 93% de los coe icien es de e ención sob e las colecciones de pa ida. Las poblaciones he e ogéneas c eadas po mul iplicación en panmixia conse a on en gene al la di e sidad ag onómica de las poblaciones o iginales, sin emba go se obse ó la pé dida de algún alelo a o. El ma e ial es udiado se conside a in e esan e an o pa a la p ese ación de la di e sidad au óc ona almacenada, como pa a el uso de es as colecciones en u u os p og amas de mejo a gené ica pa a la c eación de cul i a es adap ados a las localidades de o igen. Lámina o iginal de Fes uca a undinacea Sch eb. según S eble e al ., 1894a. CAPÍTULOI E aluaciónag onómicadelas coleccionesdepa idade aig ás inglés, aig ási alianoy es ucaal a. 22 Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 23 CAPÍTULO I: E aluación ag onómica de las colecciones de pa ida de aig ás inglés, aig ás i aliano y es uca al a 1. INTRODUCCIÓN La exis encia de la ida en la Tie a ue con i mada po Hoashi e al ., (2009), hace 3.460 millones de años, en ocas del C a ón de Pilba a (Aus alia), 800 millones de años an es de lo que se pensaba a p incipios de es e siglo. Desde en onces, los p ocesos de la e olución han o iginado una compleja plu alidad de o mas de ida, que ue on adap ándose a las di e en es condiciones de su medio ambien e. Es a a iabilidad gené ica acumulada se ha ido ex endiendo y equilib ando en el plane a, y cons i uye nues a ac ual di e sidad biológica o biodi e sidad, é mino acuñado po p ime a ez en 1986, du an e el Fo o Nacional sob e Biodi e sidad de Washing on. Los homínidos hicie on su apa ición en un momen o muy ecien e en é minos geológicos, hace unos seis millones de años. Según el egis o ósil, el homb e de Neande al se ex inguió hace unos 25.000 años, con lo que el Homo sapiens sapiens pasó a se la única especie humana, y ya podemos e e i nos a él simplemen e como "el homb e". No supuso una g an in luencia en la e olución del es o de se es i os, pe o cuando hace unos 10.000 años, el homb e descub e la ag icul u a, comienza a con ibui de mane a decisi a en la e olución de las especies que cul i a y del medio ambien e en que i e. El p oceso de colonización humana en la Tie a ex endió la ag icul u a, y muchos genes, geno ipos y poblaciones de plan as cul i adas, se di undie on po los cinco con inen es desde la an igüedad. A pa i de las p imi i as zonas de o igen, los cul i os ue on expandiéndose, y e oluciona on en los dis in os ambien es po la p esión de la selección na u al y po el desa ollo de las p ác icas ag a ias. Más a de las u as 24 come ciales y la di e si icación de las cul u as, o igina on innume ables azas o poblaciones locales que si en como base gené ica de la ag icul u a mode na. La exp esión biodi e sidad ag ícola iene un amplio signi icado, que con iene odos los aspec os de la biodi e sidad ela i os a la alimen ación y la ag icul u a, así como los demás componen es que cons i uyen un ag o- ecosis ema. Es deci , que comp ende las a iedades y la a iabilidad de animales, plan as y mic oo ganismos, que son necesa ios pa a man ene la sos enibilidad de los sis emas ag ícolas. Den o de es e conjun o, los “ ecu sos i ogené icos ” comp enden la di e sidad gené ica co espondien e al mundo ege al que se conside a poseedo a de un alo eal, o po encial, pa a el p esen e o el u u o. La pé dida de es os ecu sos se conside a un p oceso i e e sible que supone una g a e amenaza pa a la segu idad alimen a ia con posibles epe cusiones a escala mundial (Ma ín, 2001). La di e sidad que con ienen los ecu sos i ogené icos suminis a la base pa a adap a los cul i os a ambien es di e en es y a los eque imien os de la ag icul u a mode na. Po eso, los es ue zos de conse ación y mejo a pueden con ibui a hace en e a algunos e os de sos enibilidad ambien al elacionados con la ag icul u a. Pe o has a las úl imas décadas, no se había econocido en los o os in e nacionales el alo in ínseco de al di e sidad biológica y de sus componen es, alo es que comp enden aspec os ecológicos, gené icos, socio- económicos, cien í icos, cul u ales, ec ea i os y es é icos. Po an o se o iginó una p eocupación in e nacional po la conse ación de ales ecu sos como consecuencia de la deg adación que es aban su iendo po las ac i idades an ópicas y sus epe cusiones en el medio ambien e. No obs an e, en los úl imos 200 años la homogeneización de los hábi os alimen icios y la simpli icación de los sis emas ag ícolas han educido el núme o de cul i os y ambién la he e ogeneidad de los mismos, an o que, a inales de siglo XX, se es imó que a ni el mundial el 90% de la alimen ación es aba basada en an solo unas 30 especies ege ales (FAO, 1996). Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 25 La u ilización de un es echo abanico de cul i a es, más p oduc i os y adap ados a las condiciones de come cialización de la sociedad ac ual, ha ido desplazando paula inamen e a muchos cul i a es adicionales, menos p oduc i os, pe o más adap ados a su ambien e y poseedo es de una g an di e sidad gené ica. Como consecuencia, los nue os ma e iales ege ales suminis ados po la ag icul u a mode na, des uyen la p opia uen e de di e sidad gené ica que u ilizan los i omejo ado es (Ma ín, 2001), exis iendo un mayo iesgo de e osión gené ica , de inida como la pé dida de di e sidad, incluyendo la pé dida indi idual de genes, y un mayo iesgo de ulne abilidad gené ica , de inida como la condición de un cul i o cuando es uni o memen e suscep ible a un pa ógeno o plaga (Na ional Resea ch Council, 1972). Según I iondo, (2001), la p incipal causa de e osión gené ica es la sus i ución de las a iedades adicionales po cul i a es mode nos, seguida de la deg adación de los ecosis emas. A pesa de los p og esi os es ue zos de conse ación iniciados du an e los úl imos años, el c ecien e de e io o de los espacios na u ales ha ocasionado que a escala mundial se encuen en ac ualmen e amenazadas el 12,5% de las más de 250.000 especies ege ales conocidas (Wal e y Gille , 1998). En España en la década de los 80, Ba eno e al ., (1984) cons a a on que 1.095 axones de la lo a ascula española es aban amenazados o ex in os. En el año 2000, según da os del Minis e io de Medio Ambien e (Minis e io de Medio Ambien e, 1999; VV.AA., 2000), de las casi 10.000 especies y subespecies in en a iadas, un o al de 1.149 se conside a on amenazadas, más o as 265 que hubie on de deja se den o de la ca ego ía DD (Da os Insu icien es). En 2008 se publicó la Lis a Roja de Especies Amenazadas (Mo eno, 2008), que ampliaba a 1.221 el núme o de especies en pelig o o de in e és especial. En es a lis a Galicia igu aba con 117 axones amenazados. Has a bien en ado el siglo XX no se u o conciencia del es echamien o que es aba su iendo la base gené ica de las especies cul i adas. Fue a pa i de los años sesen a, cuando la comunidad cien í ica econoció que odos los cul i os 32 Lolium mul i lo um Lam. Lolium pe enne L. Lolium igidum Gaud. Lolium emulen um L. Lolium emo um Sc ank. Lolium cana iense S eud. Lolium pe sicum Boiss. & Hohen. ex Boiss. Lolium subula um Vis. O as especies desc i as en los úl imos años den o del géne o son: Lolium g andispicum Fei, desc i a como nue a especie en Hubei (China) po Fei (1999), L. edwa dii Scholz, endémica de las Islas Cana ias (Scholz e al ., 2000), L. loweii Menezes, desc i o en Madei a como A h ocho us loliaceus Lowe. Pa a Te el (1968) es sinónima de L. ıgidum y semejan e a L. subula um y L. g andispicum . Y po úl imo la ecien emen e desc i a Lolium saxa ile Scholz, endémica de Fue e en u a (Islas Cana ias) y semejan e a L. mul i lo um (Scholz y Scholz, 2005). Las ocho especies ci adas po Te el son diploides (2 n = 14). L. mul i lo um , L. pe enne y L. igidum son alógamas au oincompa ibles, el es o son au ógamas. Las especies alógamas son in e é iles en e sí, po lo que Naylo (1960), y pos e io men e Bulinska-Radomska y Les e (1986), p opusie on que debe ían es a ag upadas en una única especie y se conside adas como subespecies, suge encia ambién p opues a po Jauzein (1995). Las especies L. pe enne y L. mul i lo um p esen an una g an a iabilidad de o mas, debido p incipalmen e a que se cul i an en odo el mundo, y a que su dis ibución na u al es p ác icamen e cosmopoli a. El á ea de expansión na u al de L. igidum co esponde a zonas medi e áneas con un la go pe iodo de sequía es i al, y es u ilizada pa a pas o eo in e nal en zonas de clima medi e áneo, y ambién en zonas del su de Aus alia. La dis ibución na u al de L. pe sicum se encuen a es ingida al sudes e asiá ico, L. subula um se localiza en la zona es e del Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 33 Medi e aneo y L. cana iense es exclusi o de algunas islas del A lán ico (Cana ias, Madei a y Cabo Ve de). El hábi a na u al de L. emulen um y L. emo um es más es ingido y únicamen e se suelen encon a como malas hie bas de cul i os de ce eales y de lino. Las especies del géne o Fes uca p esen an un mayo ango de ploidía que los aig ases, apa eciendo en la na u aleza desde especies diploides has a decaploides, siendo la mayo ía de ellas alógamas y pe ennes. Es uno de los mayo es géne os de la amilia Poaceae , con más de 400 especies (Clay on y Ren oice, 1986; Wa son y Dallwi z, 1992). El abajo clásico sob e Fes uca en Eu opa es el de Hackel (1882) en el cual se p esen a ambién una p opues a de clasi icación subgené ica. Ma kg a -Dannembe g (1980), econoció en Eu opa 170 especies y 219 axones. Algunos es udios pos e io es de e e encia en Eu opa se deben a Ke guélen y Plonka (1989), Po al (1999), y Foggi e al ., (2003), en e o os. En España ac ualmen e es á su iendo una p o unda e isión den o del p oyec o “Flo a Ibé ica” (h p://www. lo aibe ica.o g). Según Cebolla y Ri as (2003), se econocen 105 axones y 76 especies pa a oda la Península Ibé ica. Debido a su adap abilidad a dis in os medios es un géne o que ecuen emen e iende a o ma endemismos. En Galicia, Gu ié ez e al ., (1997), ci a on una especie endémica: Fes uca b igan ina subsp. ac iophy a Gu ié ez Villa ías, ca alogada ac ualmen e como ulne able en el Lib o Rojo de Especies Amenazadas (Mo eno, 2008). O o endemismo gallego: F. summilusi anica F anco & R. A onso, ue sepa ada de F. g edensis Fuen e & O uñez, po De la Fuen e y O úñez (2000), quedando incluída en el Ca álogo de Plan as Endémicas y Subendémicas de Galicia (Sil a-Pando, 2008). Exis en muchas simila idades en e los géne os Lolium y Fes uca , que han sido ampliamen e comen adas po muchos au o es (Bo ill, 1976; S ebbins, 1956; Te el, 1966, Momo az e al ., 2004). Es udios inmunoquímicos con i ma on la p oximidad en e el géne o Lolium con F. al issima , F. gigan ea y F. p a ensis (Bu ku e y Kona e , 1980). Di e sos es udios del ADN clo oplás ico (Leh aslaiho 34 e al ., 1987; Da byshi e y Wa wick, 1992) encon a on g andes simila idades en e L. mul i lo um , F. a undinacea y F. p a ensis , es as dos úl imas clasi icadas en el g upo bo inae del géne o Fes uca . Dichos es udios sugie en que ilogené icamen e el g upo alógamo de Lolium es muy p óximo a la sección bo inae del géne o Fes uca , de hecho los híb idos in e especí icos en e L. pe enne L., L. mul i lo um Lam., y Fes uca p a ensis Huds., se encuen an con ela i a acilidad en la na u aleza, y se p oducen ácilmen e siendo indi e en e el pie de plan a pa en al (Jauha , 1976). Bulinska-Radomska y Les e (1986) encon a on es echas elaciones en ambos géne os median e es udios mo ológicos y p o eínicos, y p opusie on que el an eceso común se ía muy ce cano a L. pe enne y F. p a ensis . Den o del géne o Lolium , di e sos es udios han pues o de mani ies o la mayo di e sidad gené ica de L. igidum en e a o as especies (Cha me y Bal ou ie , 1994, Bal ou ie e al ., 1998b), lo cual sugie e que pod ía se el an epasado común del géne o. Dada la p oximidad gené ica en e las especies de ambos géne os, los híb idos en e Fes uca y Lolium ocu en con ela i a ecuencia en la na u aleza en aquellas localidades donde con i en ambos géne os. En el caso de Lolium , el híb ido más ecuen e es Lolium x hyb idum Hausskn. ( L. pe enne x L. mul i lo um ), que eúne ca ac e ís icas in e medias en e ambas especies. Se han desc i o o os híb idos en e Lolium y Fes uca que eciben el nomb e de x Fes ulolium (Asch. & G aebn): x Fes ulolium b aunii (Rich .) Camus. = F. p a ensis x L. mul i lo um. x Fes ulolium loliaceum (Huds.) P. Fou n. = F. p a ensis x L. pe enne. x Fes ulolium holmbe g (Dö l) P. Fou n. = F. a undinacea x L. pe enne. Tales hib idos ienen in e és en el uso ag ícola, ya que combinan las buenas ca ac e is icas nu i i as, de diges ibilidad y de endimien o de los aig ases, con la mayo pe sis encia y habilidad de las es ucas pa a sopo a condiciones ex emas. Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 35 1. 2. FITOSOCIOLOGÍA Fi osociológicamen e las especies L. pe enne y L. mul i lo um y F. a undinacea son ep esen a i as de la clase Molinio-A hena he e ea Tüxen 1937. Su p esencia en Galicia es ex ao dina iamen e abundan e desde la cos a has a la al a mon aña. Po es a misma azón el deslinde en asociaciones al a po es udia en de alle pa a la mayo pa e del e i o io (Izco e al ., 2000). 1.3. UTILIZACIÓN AGRONÓMICA DEL RAIGRÁS ITALIANO, RAIGRÁS INGLÉS Y FESTUCA ALTA Los géne os Lolium y Fes uca ienen una amplia u ilización o aje a en la ag icul u a mode na. El aig ás i aliano y el aig ás inglés son las especies más u ilizadas en las zonas emplado-húmedas de Eu opa y Nue a Zelanda, ap o echadas pa a siega (ensilado y ap o echamien o en e de), en pas o eo y ambién como césped. Las a iedades de es uca al a, además del ap o echamien o o aje o, ambién ienen una amplia u ilización en la implan ación de céspedes, cubie as ege ales, y o as aplicaciones no o aje as. En Galicia, la supe icie de p ados na u ales y pas izales es de 449.161 has, de las cuales 289.081 pe enecen a cul i os de maíz o aje o, p ade as poli i as y aig ás i aliano, (Conselle ía do Medio Ru al, Xun a de Galicia, 2005). De las 6.000 de semillas de g amíneas p a enses consumidas en España cada año, 5.000 co esponden a los aig ases ( aig ás inglés e i aliano) siendo las g amíneas más u ilizadas en el No e de España pa a la implan ación de p ade as a i iciales (Piñei o y Pé ez, 1992). Casi odas las semillas de g amíneas p a enses consumidas en España se impo an, con la excepción del aig ás i aliano, del que se p oduce en España algo más de la mi ad de la semilla que se consume. En los úl imos años la caída de los p ecios de la leche y la subida de los cos es de e ilizan es y ca bu an es, han hecho que muchas explo aciones ag a ias se hayan plan eado una u ilización más e icien e de los ecu sos p opios pa a ga an iza la en abilidad ag a ia. Es o implica la u ilización de ma e ial gené ico 36 bien adap ado a las condiciones locales, po an o los mejo ado es gené icos y los bancos de ge moplasma desen uel en un papel undamen al pa a con ibui a la es abilidad de la en a ag a ia y ga an iza la compe i i idad de las explo aciones. 1.3.1. Raig ás i aliano ( Lolium mu i lo um Lam.) El aig ás i aliano ( Lolium mul i lo um Lam.) es un e ó i o/hemic ip ó i o cuyo cul i o es á ampliamen e dis ibuido en el mundo. Ac ualmen e se dis ibuye en egiones empladas y sub opicales. C ece espon áneamen e en el no e de Á ica, oes e de Asia y su de Eu opa, y ha sido domes icada desde su cul i o inicial, en la an igua egión de Lomba día (I alia), en el s. XIII. En España es la g amínea o aje a más u ilizada. Es una plan a igo osa, anual o bianual, habi ualmen e usada en p ade as, p incipalmen e pa a siega y ambién pa a pas o eo, an o pa a la alimen ación en esco como pa a ensilado. Debido a su g an igo en el pe iodo de es ablecimien o, no se combina bien con o as g amíneas, pe o a bajas densidades de siemb a se combina bien con algunas leguminosas como el ébol iole a, p oduciendo una buena masa de o aje emp ana. Los cul i a es al e na i os de es a especie, denominados de ipo ‘Wes e wold’ o ‘Wes e woldicum’ se selecciona on en Holanda en la egión Wes e wolde (Te el, 1968). Es os cul i a es son de c ecimien o más ápido que los cul i a es no al e na i os, ya sean diploides o e aploides. Al no necesi a pe iodo de e nalización son es ic amen e anuales y lo ecen en el año de su es ablecimien o, pudiéndose combina o acionalmen e con o os cul i os. En Galicia, la alimen ación o aje a de muchas explo aciones in ensi as es á basada en el cul i o o acional del aig ás i aliano al e na i o con o as especies o aje as como maíz, cebada, cen eno y nabos. También se han in es igado algunas o aciones con híb ido so go x pas o del Sudán (Piñei o y Pé ez, 2003). Los cul i a es ipo ‘Wes e wo ld’ semb ados a inales de e ano o incluso an es pueden p opo ciona una buena p oducción de o aje du an e el o oño e in ie no, siemp e y cuando la e ilidad del suelo sea ele ada. Los cul i a es no al e na i os se usan pa a la implan ación de p ade as de más la ga du ación, semb ándose a eces a iedades e aploides. Las a iedades e aploides son más p oduc i as, p esen an una mayo ag esi idad inicial y más esis encia a Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 37 en e medades, pe o po su mayo con enido en agua son más di íciles de ensila que los diploides. Tales a iedades e aploides p esen an ambién un mayo amaño de semilla, son menos pe sis en es en pas o eo en siemb as pu as, p esen an una mayo pala abilidad pa a el ganado y una mayo esis encia a oyas. Pa a alimen ación en esco y pa a heni icación se suelen ecomenda las a iedades e aploides. Pa a ensila , se ecomiendan las a iedades diploides, con meno con enido acuoso, ya que pe mi en el ensilado sin necesidad de adi i os. Debido a su g an igo de es ablecimien o, al aig ás i aliano se le puede conside a un buen he bicida al elimina las malas hie bas espon áneas que eme gen as la siemb a (Piñei o y Pé ez, 1992). No obs an e es e igo de es ablecimien o puede esul a un incon enien e pa a siemb as en mezcla con o as especies, ya que al cabo de dos años és as desapa ece án en su mayo ía, dejando un hueco que ocupa án malas hie bas, al habe eliminado el aig ás i aliano la compe encia de las o as especies de la mezcla (Musle a y Ra e a, 1983). 1.3.2. Raig ás inglés ( Lolium pe enne L.) El aig ás inglés ( Lolium pe enne L.) es una especie pe enne, que o ma densos cepellones, y po su mayo esis encia al piso eo, menos c ecimien o en al u a, y po su g an capacidad de ahijamien o es la g amínea más u ilizada en zonas empladas pa a el es ablecimien o de p ade as de la ga du ación, esul ando ideal pa a u ilización en pas o eo. Es o igina ia de las zonas empladas de Eu opa, Á ica del No e y Asia. Jun o con el aig ás i aliano, es el p incipal cul i o pa a pas o eo y ensilado en las zonas de climas sua es emplado-húmedos de la Eu opa Occiden al. Se cul i an algunos híb idos con aig ás i aliano, los cuales ienen ida más la ga y se u ilizan pa a aumen a los endimien os. También exis en eco ipos medi e áneos de la encia es i al. En el no e de España es una especie muy ap eciada en p ade as, ya que man iene una ida p oduc i a mayo que el aig ás i aliano (cua o o cinco años) y p esen a unos buenos alo es nu i i os de diges ibilidad e inges ibilidad. Sin emba go el p incipal incon enien e del aig ás inglés es su sensibilidad a la sequía. En gene al en el No e de España las empe a u as y el pe íodo es i al seco a ec an a la p oducción de ma e ia seca, 38 a su dis ibución a lo la go del año y a su pe sis encia, po eso no es una especie muy cul i ada en las zonas medi e áneas de la España seca. El desa ollo de a iedades sin é icas e aploides, eniendo una mayo adap ación y ole ancia a esos ac o es limi an es, así como una es ación de c ecimien o amplia, buenos endimien os y alo nu i i o, son obje i os impo an es en la mejo a gené ica de es a especie. En Galicia su u ilización ag onómica es p incipalmen e en p ade as bí i as y poli i as de secano, asociándose ecuen emen e con ébol blanco en las p ade as bí i as (Vidal Galego e al ., 2009). En la na u aleza el aig ás inglés se asocia con hongos endo i os de los géne os Epichloë y Neo yphodium . La elación se conside a mu ualis a, y se ha demos ado que el hongo puede p opo ciona en ajas adap a i as a la plan a in ec ada al ole a és a mejo la sequía y p esen a una mayo esis encia an e insec os y nemá odos (La ch, 1993; Wes e al ., 1993). Sin emba go, como consecuencia de la asociación se pueden sin e iza di e sos me aboli os secunda ios que incluyen algunos alcaloides óxicos como loli eno B y e go alina, que pueden p oduci in oxicaciones en el ganado en pas o eo como la llamada pa álisis del aig ás (Fle che e al ., 1993). Po és as azones en los úl imos años se han ealizado di e sos abajos pa a es udia los e ec os de la asociación del aig ás inglés con hongos endo i os sob e ma e ial au óc ono pa a mejo a el cul i o sin a ec a a la calidad del o aje (Oli ei a e al ., 2002a, 2002b). Además de su u ilización o aje a, los aig ases ingleses ienen una amplia aplicación en el es ablecimien o de céspedes en mezcla con o as g amíneas, p incipalmen e es ucas inas y poas. Es e ipo de a iedades suelen se diploides y p oducen un mayo ahijamien o, más adecuado pa a la o mación de céspedes. Algunas a iedades ambién se u ilizan en o os usos como la ecupe ación de espacios deg adados, aludes, en iñedos, implan ación de cubie as ege ales, e c. 1.3.3. Fes uca al a ( Fes uca a undinacea Sch eb.) La es uca al a es un hemic ip ó i o pe enne de la ga ida, de po e al o, que o ma macollas o es cespi osa cuando es pas o eada. Es o igina ia de Eu asia, ocu e na u almen e en Eu opa, Á ica del No e y en las zonas empladas de Asia. Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 39 Ha sido ampliamen e di undida en o as zonas empladas, jugando un papel impo an e en los pas izales y es epas xe o/meso í icas del mundo. Su cul i o se ha ex endido a o os con inen es como Amé ica y Aus alia. En la Península Ibé ica se puede cul i a p ác icamen e en odo el e i o io. Se puede asocia bien con leguminosas y p oduci pas os de al a calidad, sin emba go po su mayo len i ud y di icul ad de es ablecimien o no se combina bien con o as g amíneas. Po su meno c ecimien o inicial es ulne able a la compe encia de especies más ag esi as, como los aig ases, po ello se ecomienda mezcla lo únicamen e con dac ilo, al al a o ébol blanco. P esen a un g an núme o de eco ipos que se adap an bien a una g an a iedad de suelos. Si bien su es ablecimien o es más len o, es á bien adap ada a la sequía y puede sob e i i en egiones con menos de 400 mm/año de p ecipi ación y p ospe a en suelos secos calcá eos. En e las g amíneas de la ga du ación es la más emp ana en inicia el c ecimien o p ima e al, p oduce en e ano, eb o a en o oño y dila a su ciclo has a bien iniciado el in ie no. En u ilización o aje a p esen a el incon enien e de una meno pala abilidad, ya que el ganado selecciona o as especies más ape ecibles, p oduciéndose un e ec o de echazo que pe judica el eb o e de la p ade a as el pas o eo. A pesa de ole a bien el piso eo del ganado, su manejo pas o al es complicado, dada su endencia a o ma macollas. No se aconseja mezcla la con g amíneas más pala ables si se desea ealiza una explo ación en égimen exclusi o de pas o eo. Debido a su ápido eb o e y a su pé dida de diges ibilidad en el espigado, se ecomiendan ap o echamien os in ensi os y ecuen es que man engan la plan a jo en. Al igual que en el caso del aig ás inglés, se ha encon ado que algunas líneas hospedan hongos endo i os que pueden p opo ciona en ajas adap a i as pe o que ambién pueden p oduci mico oxinas. Algunos de es os e ec os en el ganado incluyen una disminución de la ganancia de peso y p oblemas ep oduc i os. Es e conjun o de sín omas se denomina « es ucosis» po habe se de ec ado p ime o en ganado pas ando plan as de es uca in ec adas po hongos endo i os (Oli ei a e al ., 2002b). Di e sos es udios en poblaciones de es ucas 40 ecolec adas en la Co dille a Can ab ica, mos a on unos po cen ajes de in ección mode ados de en o no al 50% (Oli ei a e al ., 2000). Además de la u ilización o aje a, el segundo p incipal uso de la es uca al a es pa a la o mación de céspedes en combinación con o as especies, ya que su capacidad de ole a la sequía hace que se man enga un césped e de en condiciones híd icas limi an es. Además de es os usos adicionales, los cul i a es de es uca al a, dada su a iabilidad mo ológica y ampli ud del pe iodo de espigado, son poseedo es de una g an di e sidad gené ica que p opo ciona muchas posibilidades pa a o os usos no o aje os u o namen ales como son la ex ensi icación, di e si icación y p o ección del medio ambien e. Algunos de es as aplicaciones son la es abilización de aludes en au opis as, ías é eas, cauces hid áulicos, la implan ación de cubie as ege ales, la cub ición de e ede os y bocas de mina, la e ege ación de espacios na u ales de e io ados, e c. 1.3.4. U ilización ag onómica de híb idos in e especí icos e in e gené icos Los híb idos en e aig ás inglés y aig ás i aliano se encuen an de o ma espon ánea en la na u aleza cuando ambas especies con i en, p esen ando ca ac e ís icas in e medias, a eces no muy bien de inidas, pues dependen de la combinación de los ca ac e es pa en ales. Se han c eado algunas a iedades de aig ás híb ido que eúnen la pe sis encia y densidad del aig ás inglés con los buenos c ecimien os y pala abilidad del aig ás i aliano. Dependiendo del ipo de combinación exis en di e encias a ie ales, encon ándose cul i a es más bianuales y o os más pe ennes, en unción de los e oc uces ealizados. Al igual que en el caso de los aig ases anuales y pe ennes, los hay diploides y e aploides. Su p ecocidad es ambién in e media, con una p oducción de p ime año supe io a la del aig ás inglés, e in e io a la de los aig ases anuales. Los aig ases híb idos ienen un meno endimien o in e nal que el aig ás i aliano, en Galicia, si se siemb an en las echas habi uales, después de ecoge el maíz, y a menos que las condiciones climá icas sean excepcionales pa a el c ecimien o ege a i o, ( empe a u as sua es y Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - In oducción 41 plu iome ía mode ada) no o ece á ap o echamien o has a el mes de ma zo, época en la que puede se ensilado con cie as ga an ías (Vidal Galego e al ., 2009). Los híb idos de Fes uca y Lolium ienen in e és ag ícola al combina las ca ac e is icas de ambos géne os. Los mejo ado es han combinado la mayo pe sis encia y ole ancia de las es ucas con los buenos ca ac e es de pala abilidad, diges ibilidad y apidez de es ablecimen o de los aig ases (Thomas y Humph eys, 1991). En su es ado na u al es os híb idos son es é iles, po lo que los p og amas de mejo a han es ado di igidos a elimina la es e ilidad. Los híb idos más u ilizados son e aploides de i ados de L. mul i lo um (4x) x F. p a ensis (4x), los cuales son pe ennes y p esen an buenos endimien os en mezcla con aig ás i aliano pa a u ilización en p ade as (Kopecký e al ., 2006). O o g upo de híb idos incluyen cul i a es c eados a pa i de L. mul i lo um (2x) x F. a undinacea (6x). La F1 esul an e es e aploide y se e oc uza en p og amas de mejo a con los pa en ales pa a la ob ención de nue as a iedades. En el caso de e oc uces con F. a undinacea el esul ado son plan as semejan es a és a y dan luga a a iedades más p oduc i as y de mejo es ca ac e ís icas de diges ibilidad que la es uca, pudiendo se u ilizados an o en p ade as en mezcla con o as g amíneas o éboles, como en ecupe acion de espacios deg adados, sopo ando muy bien el encha camien o (Buckne e al ., 1977; Foj ík, 1994). Los e oc uces con L. mul i lo um son u ilizados p incipalmen e pa a ensilado po su g an capacidad de eb o e y al os endimien os (Foj ík, 1994). 48 Código Población Fec. Rec. P o incia La Long Al i ud 53 SANJENJO 01/06/1993 Pon e ed a 42º24´ N 8º48´ O 20 54 VIMIANZO 01/06/1993 A Co uña 43º04´ N 9º02´ O 140 55 ORDENES 01/06/1993 A Co uña 43º03´ N 8º24´ O 260 56 RIAL 01/06/1993 A Co uña 43º01´ N 8º40´ O 220 57 SANTACOMBALM 01/06/1993 A Co uña 43º01´ N 8º48´ O 380 58 ABEGONDO 01/06/1993 A Co uña 43º13´ N 8º18´ O 175 59 LUARCA 01/06/1993 O iedo 43º32´ N 6º32´ O 60 61 PRAVIA1 01/06/1993 O iedo 43º30´ N 6º07´ O 40 62 PRENDES 01/06/1993 O iedo 43º34´ N 5º45´ O 140 63 BAÑUGUES 01/06/1991 O iedo 43º38´ N 5º49´ O 20 65 CANDAS 01/06/1991 O iedo 43º35´ N 5º48´ O 90 66 PADRON1 01/06/1991 A Co uña 42º44´ N 8º40´ O 20 71 FILGUEIRA 01/06/1991 Pon e ed a 42º41´ N 8º08´ O 590 73 CANICOUVA2 01/06/1991 Pon e ed a 42º22´ N 8º37´ O 180 74 BERDUCIDO 01/06/1991 Pon e ed a 42º21´ N 8º25´ O 470 75 PRAVIA2 01/06/1991 O iedo 43º30´ N 6º07´ O 40 85 SILLEDALM 01/06/1986 Pon e ed a 42º42´ N 8º15´ O 500 86 SAUZAL 01/05/1995 S a.C uz Tene i e 28º28´ N 16º26´ O 320 88 LAVEGA 01/05/1995 S a.C uz Tene i e 28º03´ N 17º12´ O 60 90 GODOS 01/06/1990 O iedo 43º20´ N 5º57´ O 280 91 RIGORTIA 01/06/1990 Vizcaya 43º19´ N 2º44´ O 60 Cul i a es come ciales 197 ´Vallicopo ugal´ 198 ´Vi esse´ 199 ´FinulNinak´ 200 ´Exal a´ 201 ´P omenade´ Tabla 3. Da os de pasapo e de las 24 poblaciones e aluadas de F. a undinacea . Fec. Rec.: echa de ecolección; La : la i ud; Long: longi ud. Código Población Fec. Rec. P o incia La Long Al i ud 1 INSUA 01/07/1993 Lugo 43º14´ N 7º43´ O 300 2 TORRE1 01/07/1993 Lugo 43º15´ N 7º43´ O 380 3 TORRE2 01/07/1993 Lugo 43º15´ N 7º43´ O 380 4 GOIRIZ 01/07/1993 Lugo 43º19´ N 7º37´ O 475 5 MONDOÑEDO 01/07/1993 Lugo 43º25´ N 7º22´ O 70 7 BARCIA 01/07/1993 O iedo 43º31´ N 6º30´ O 100 10 INESPAL 01/07/1993 A Co una 43º21´ N 8º25´ O 75 11 MERA 01/07/1993 A Co una 43º22´ N 8º21´ O 75 12 CECEBRE 01/07/1993 A Co una 43º16´ N 8º16´ O 100 14 UNQUERA 01/06/1986 San ande 43º22´ N 4º31´ O 20 15 ORTIGUEIRACFA 01/06/1986 A Co una 43º39´ N 7º52´ O 20 16 AVILES 01/06/1986 O iedo 43º37´ N 5º56´ O 20 18 BOLTAÑA 01/08/1997 Huesca 42º26´ N 0º04´ O 550 19 REGUERAL 01/08/1997 O iedo 43º34´ N 5º47´ O 90 20 QUIROS 01/08/1997 O iedo 43º10´ N 6º06´ O 800 21 MANZANAL 01/08/1997 León 42º35´ N 6º13´ O 1225 22 PEVIDAL 01/08/1997 O iedo 43º35´ N 5º47´ O 60 23 ANTROMERO 01/08/1997 O iedo 43º36´ N 5º48´ O 50 24 SALINES 01/08/1997 O iedo 43º37´ N 5º48´ O 100 25 CAMPADETORRES 01/08/1997 O iedo 43º34´ N 5º42´ O 200 26 PONFERRADA 01/08/1997 León 42º34´ N 6º46´ O 400 27 PIEDELORO 01/08/1997 O iedo 43º33´ N 5º48´ O 150 Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Ma e ial y mé odos 49 Código Población Fec. Rec. P o incia La Long Al i ud 30 NAVA 01/08/1997 O iedo 43º22´ N 5º26´ O 175 31 PERAN 01/08/1997 O iedo 43º35´ N 5º44´ O 20 Cul i a es come ciales 194 ´Tima´ 195 ´Ma iscasba´ 196 ´Fawn´ En la p ima e a del año 1998 comenzó el es ablecimien o del ensayo, ansplan ando al campo 20 plan as aisladas de cada población. Se es ablecie on es campos de ensayo independien es: uno de aig ás inglés, en el que se e alua on 74 poblaciones, o o de aig ás i aliano, en el que se e alua on 42 poblaciones, y un e ce ensayo de es uca al a, en el que se e alua on 24 poblaciones. Como abono se aplica on 800 kg/ha de 8:15:15 y p e iamen e se aplica on 1.500 kg/ha de cal a la supe icie del ensayo (90% CaCO3, 45% CaO). El diseño expe imen al consis ió en bloques comple os al aza con dos epe iciones, ansplan ando 10 plan as po población y bloque con 50 cm de sepa ación en e cada línea y plan a. El con ol p e-eme gen e de malas hie bas se e ec uó con he bicida GOAL al 3% y el desa ollo es acional de malas hie bas se con oló con ROUNDUP al 3%, p o egiendo las plan as indi iduales con cubos pa a e i a el con ac o con el he bicida (Figu a 1) Se ins aló una ba e a ex e na de aig ás inglés ‘B igan ia’ y se ce a on los campos con malla p o ec o a de plás ico pa a e i a la en ada de he bí o os. En odos los ensayos se incluye on cul i a es come ciales como es igos: seis en L. pe enne (‘A ion’, ‘B igan ia’, ‘C oppe ’, ‘Talbo ’, ‘Vigo ’ y la a iedad expe imen al ‘CiamI’), cinco en L. mul i lo um (‘Exal a’, ‘Finul’, ‘P omenade’, ‘Vallico’ y ‘Vi esse’), y es en F. a undinacea (‘Fawn’, ‘Tima’ y ‘Ma iskasba’). Du an e dos años consecu i os se midie on independien emen e en cada ensayo las a iables ag onómicas de alladas en la Tabla 4. Pos e io men e a cada ano ación de c ecimien o ( c i, c p, c e, c ) se hizo un co e con mo osegado a a 5 cm del suelo. En las a iables de c ecimien o se u ilizó una escala de 1 a 5. Pos e io men e a cada ano ación se co a on 30 plan as (seis de cada alo de la escala) y se pesó su ma e ia seca. Con es os da os se calculó una ecuación de eg esión con obje o de sabe el alo cuan i a i o en g de ma e ia seca pa a cada 50 ij n iij PPH 2 1 log    uno de los alo es de la escala. Se aplicó la misma écnica es adís ica pa a la a iable es pe o con ando el núme o de espigas en cada plan a en escala de 1 a 7. En el o oño de 1998 se epusie on aquellas plan as de las dos especies pe ennes ( L. pe enne y F. a undinacea ) que du an e ese año se habían pe dido po di e en es causas, se u iliza on plan as de la misma población pa a cub i los huecos acíos con obje o de que hicie an compe encia a las plan as ecinas y no in e e i así en la e aluación del siguien e año. Es as nue as plan as no ue on enidas en cuen a en las medias ni en los análisis. Tabla 4. Va iables ag onómicas u ilizadas en la ca ac e ización de las colecciones de L. pe enne, L. mul i lo um y F. a undinacea . Los pun os indican las a iables que han sido conside adas en cada especie. es : echa espigado (núme o de días a pa i del uno de ene o); c i , c p , c e , c : c ecimien os en in ie no, p ima e a, en espigado y en e ano (g de ma e ia seca po plan a indi idual); alp : al u a de la plan a en espigado (al u a o al en cm); ain : nº in lo escencias (nº de espigas po plan a indi idual); es : eespigado (0 = no eespiga, 1 = eespiga); lhb y ahb : longi ud y anchu a máximas de la hoja bande a (medidas en cm y en mm, espec i amen e); en : ole ancia a en e medades (medido en escala desde 1 = sensible, has a 5 = ole an e); hc : hábi o de c ecimien o (medido en escala desde 1 = po e as e o, has a 5= po e e ec o); al : al e na i idad (0 = no al e na i a, 1 = al e na i a). Va iable ag onómica es c i c p c e c alp ain es lhb ahb en hc al L. pe enne            L. mul i lo um           F. a undinacea             2.2. ESTUDIO ESTADÍSTICO Pa a cada accesión se calculó la di e sidad como la media del índice H de Shannon-Wea e en cada a iable según la exp esión, (Shannon y Wea e , 1963). donde j es la a iable ag onómica, P ij es la ecuencia de apa ición de cada clase ag onómica i pa a la a iable j . Es e índice ha sido ampliamen e u ilizado en ecología como medida de la di e sidad de comunidades, no obs an e ambién puede se u ilizado pa a es udia la dis ibución de ca ego ías de una a iable Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Ma e ial y mé odos 51 (Pielou, 1969; Jain e al ., 1975). Bowman e al ., (1973) obse a on que es e índice seguía una dis ibución no mal en mues as g andes, y en los úl imos años ha sido cada ez más empleado en el cálculo de la di e sidad de en adas en colecciones de ge moplasma (Jain e al ., 1975; Bekele y Bekele, 1996; Bish e al ., 1999; Polignano e al ., 1999; G enie e al ., 2000a; Van Raamsdonk y Wijnke , 2000; Zeng e al ., 2001), pudiendo se empleado an o pa a a iables eno ípicas como pa a ma cado es gené icos (B own y Wei , 1983). El cómpu o de la di e sidad media de cada en ada se calculó como la media del índice H de las k a iables es udiadas, (Fu man e al ., 1997): k H H k ij   1 Los da os medios de las poblaciones se emplea on en ANOVA y en mé odos es adís icos mul i a ian es (análisis de componen es p incipales, clasi icación ascenden e je á quica), con el in de iden i ica g upos de alo ag onómico simila . Debido al ca ác e anual del aig ás i aliano, el ensayo se epi ió comple amen e en el segundo año, mien as que en aig ás inglés y es uca al a las plan as pe manecie on en el campo du an e los dos años de e aluación. Po es a azón el modelo de análisis de a ianza (ANOVA), siguiendo un modelo de e ec os ijos ue dis in o en cada especie, siendo en el aig ás inglés y es uca al a: Yijkl=  +  i +  j + (  )ij +  k + (  )ik  ijkl y en el aig ás i aliano: Yijkl=  +  i +  ij +  k + (  )ik  ijkl Donde  es la media gene al,  i es el e ec o del año,  j es el e ec o del bloque, (  )ij es la in e acción en e año y bloque, (  )ik es la in e acción en e año y población,  k es el e ec o de la población,  ij es el e ec o del bloque 52 je a quizado a año, y inalmen e  ijkl es el e o . Las a iables cuali a i as en y hc se analiza on median e el es no pa amé ico de K uskal-Wallis (B eslow, 1970). Todos los da os se analiza on median e el paque e es adís ico SAS (SAS Ins i u e, 1999). Los alo es medios de a iables signi ica i as en el ANOVA se u iliza on en un análisis de componen es p incipales (ACP). Con las componen es de au o alo mayo que 1, se ealizó una clasi icación ascenden e je á quica u ilizando el mé odo de ag egación de Wa d (Rome sbu g, 1984). És e mé odo minimiza las a ianzas den o de los conglome ados y las maximiza en e ellos, y ha sido el p ocedimien o de ag egación más u ilizado en colecciones de ge moplasma (Johnson e al ., 1999). Debido a que la zona de ecolección es ela i amen e pequeña, no se u o en cuen a el o igen geog á ico de cada población en la clasi icación. Capí ulo I - E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Resul ados y discusión 53 3. RESULTADOS En conjun o las poblaciones esul a on muy a iables, las a iedades come ciales se compo a on más uni o memen e. Los índices de di e sidad medios ue on muy simila es en las colecciones de aig ás inglés e i aliano (2,25 y 2,24 espec i amen e). La colección de es uca ue la menos di e sa con un alo medio de 2,17. 3.1. RAIGRÁS INGLÉS En la Tabla 5 se mues an los da os medios de ca ac e ización de las a iables es udiadas en los dos años de ensayo. Las poblaciones en conjun o mos a on una mayo a iabilidad ag omo ológica que las a iedades come ciales usadas como es igo. Algunas poblaciones mos a on un mejo compo amien o ag onómico que las a iedades come ciales. El 56% de las poblaciones u ie on mayo es c ecimien os que la media de las a iedades. Las poblaciones en conjun o ue on más p oduc i as que los cul i a es es udiados, y no se di e encia on mucho en cuan o a la al u a media, longi ud y anchu a de la hoja bande a. En gene al las poblaciones ue on más ole an es a en e medades de hoja y u ie on más capacidad de p oducción de espigas. Las más p oduc i as ue on las p o enien es de A Co uña, Pon e ed a, Lugo y As u ias. La a iedad expe imen al ‘CiamI’, c eada a pa i de eco ipos locales, ue el es igo que u o un mejo compo amien o ag onómico, seguido de la a iedad come cial ‘B igan ia’, ambién o iginada a pa i de eco ipos gallegos. Median e la a iable echa de espigado ( es ) se di idie on las poblaciones en dos g upos de p ecocidad: 1) p ecoz ( echa de espigado an e io al 15 de ma zo) y 2) a dío (pos e io al 15 de ma zo). Las medias de cada g upo se mues an en la Tabla 6. Las poblaciones del g upo a dío ue on más p oduc i as que las del g upo p ecoz, no di e enciándose mucho en los ca ac e es mo ológicos es udiados (al u a, longi ud y anchu a de la hoja bande a, hábi o de c ecimien o). Las poblaciones del g upo p ecoz u ie on un mejo compo amien o ag onómico que los cul i a es p ecoces, mien as que en el g upo a dío no hubo p ác icamen e di e encias en e poblaciones y cul i a es. 54 Tabla 5. Medias de los dos años de e aluación de las a iables ag onómicas u ilizadas en la ca ac e ización de la colección de L. pe enne ; c : c ecimien o o al ( c i + c p + c e ). H : índice de di e sidad medio de Shanon-Wea e ; p ec : g upo de p ecocidad asignado en unción de la echa de espigado; clu : g upo de pe enencia después de aplica la clasi icación ascenden e je á quica. El es o de a iables es án explicadas en la Tabla 4. COD es c i c p c e c alp es en lhb ahb ain hc Hp ec clu 93 146,78 14,36 33,58 86,22 134,16 74,84 0,15 3,30 13,07 4,75 140,14 2,33 2,11 2 5 95 136,08 19,56 45,78 157,81 223,15 90,23 0,00 2,36 13,60 4,77 86,38 3,63 2,22 2 2 96 131,43 12,80 25,42 104,65 142,87 87,58 0,30 3,24 14,32 5,03 126,84 3,33 2,29 1 2 97 142,49 16,88 41,88 161,45 220,21 81,09 0,16 3,51 12,83 4,79 133,33 3,33 2,17 2 6 98 147,83 31,19 68,28 216,99 316,47 82,61 0,84 4,59 13,84 5,20 155,61 2,72 2,14 2 9 99 137,22 16,96 63,12 198,03 278,11 89,71 0,50 3,72 15,37 5,13 96,67 2,88 2,49 2 4 100 136,62 16,16 35,01 111,17 162,34 86,38 0,63 3,95 15,57 4,53 166,01 2,91 2,36 2 6 101 150,23 19,14 34,18 127,71 181,02 66,37 0,24 2,86 14,05 4,92 71,39 2,55 1,99 2 8 102 151,30 25,39 56,29 167,87 249,55 74,62 0,10 4,14 11,64 4,30 104,78 2,53 2,23 2 5 103 132,93 17,88 49,20 146,08 213,17 99,65 0,79 4,18 13,56 5,08 124,04 3,58 2,22 1 6 104 134,18 13,35 38,35 156,48 208,18 99,37 0,25 2,55 19,48 6,35 92,85 2,33 1,89 1 3 105 134,86 19,62 34,15 131,21 184,98 84,16 0,25 3,45 13,70 4,66 84,72 2,54 2,38 1 4 106 134,51 12,46 24,92 105,54 142,92 82,43 0,10 3,14 14,51 4,57 78,84 3,27 2,42 1 1 109 141,97 15,23 42,49 139,75 197,47 67,05 0,00 3,20 12,18 4,62 109,58 2,32 2,27 2 5 110 144,31 14,46 44,16 163,83 222,44 78,55 0,05 3,47 13,49 4,92 98,65 2,78 2,24 2 4 111 139,12 14,21 34,54 119,96 168,70 83,66 0,16 3,62 16,79 4,85 110,00 3,43 2,29 2 2 112 131,62 13,30 44,80 124,16 182,26 87,29 0,26 3,49 13,51 4,85 90,25 2,73 2,36 1 2 113 139,46 16,92 39,18 145,90 202,01 81,01 0,24 3,83 10,90 4,13 90,32 2,86 2,20 2 5 114 138,33 12,92 37,04 154,42 204,38 91,51 0,00 2,82 13,43 4,70 90,04 3,18 2,09 2 2 115 138,72 12,17 27,53 96,09 135,79 75,47 0,00 3,08 12,63 4,95 102,28 2,88 2,24 2 1 116 135,99 11,08 44,93 124,21 180,22 83,17 0,00 3,80 11,29 4,19 116,97 3,50 2,10 2 7 117 142,73 12,58 33,89 141,98 188,44 76,88 0,32 2,77 12,36 4,44 100,22 3,38 2,33 2 7 119 140,52 22,77 54,13 142,02 218,92 90,94 0,61 3,26 13,42 5,13 115,73 3,53 2,23 2 6 120 145,22 16,62 42,51 186,14 245,27 78,04 0,07 3,74 15,40 6,08 89,08 2,50 2,22 2 4 121 145,18 23,47 42,66 148,66 214,78 70,94 0,16 3,68 11,05 4,12 88,83 2,53 2,50 2 5 122 142,44 17,81 44,69 120,54 183,03 80,50 0,39 3,40 11,75 4,75 123,80 3,06 2,32 2 7 123 138,47 21,67 38,46 109,32 169,45 93,62 1,00 3,97 16,42 6,41 83,40 3,07 2,27 2 3 124 139,71 18,90 64,43 165,65 248,97 89,06 0,53 3,29 11,67 4,58 125,68 3,29 2,19 2 6 125 140,10 16,91 27,34 106,50 150,75 73,95 0,33 3,29 10,64 4,79 148,61 2,58 2,24 2 5 126 112,87 11,72 34,43 124,92 171,07 82,70 0,21 3,06 14,00 5,92 65,92 2,82 2,29 1 1 127 116,45 8,51 27,09 122,88 158,48 88,84 0,23 3,06 15,31 5,34 69,26 3,64 2,41 1 2 128 144,79 29,64 69,27 196,86 295,78 87,71 0,63 4,26 16,27 5,36 123,00 3,00 2,33 2 9 131 137,64 18,28 36,24 124,14 178,67 87,18 0,60 3,70 12,85 4,80 93,30 2,60 2,26 2 4 132 141,72 16,50 36,31 145,47 198,29 76,93 0,15 3,26 10,76 4,22 126,00 3,50 2,30 2 7 133 140,98 23,49 58,01 192,09 273,58 88,09 0,80 4,15 14,70 5,08 122,32 2,38 2,20 2 9 134 147,82 23,57 81,23 315,96 420,76 84,19 0,00 4,09 13,88 6,11 115,23 2,57 2,15 2 9 135 134,96 13,33 41,98 165,66 220,98 94,43 0,00 3,96 14,06 4,81 90,18 3,07 2,15 1 2 136 133,10 16,64 52,41 157,24 226,30 95,84 0,47 3,20 15,08 5,61 109,90 3,82 2,42 1 2 137 132,96 16,90 62,41 221,70 301,01 105,34 0,41 3,65 16,13 5,67 115,23 3,23 2,36 1 6 139 120,51 16,22 42,63 135,06 193,91 91,53 0,26 3,34 18,81 6,58 100,63 2,46 2,53 1 3 140 118,06 12,92 43,51 106,87 163,30 90,77 0,42 3,25 16,25 5,48 103,08 3,06 2,41 1 2 141 130,48 19,51 51,78 152,24 223,54 100,28 0,63 2,96 14,38 5,11 117,90 2,92 2,18 1 2 142 126,32 15,62 31,40 143,09 190,11 88,25 0,00 3,54 18,65 6,96 117,64 3,00 2,27 1 3 143 127,41 16,91 47,75 129,01 193,68 81,90 0,00 3,00 16,60 5,65 105,20 2,58 2,51 1 3 144 137,70 18,33 50,06 152,63 221,02 87,28 0,37 4,19 12,94 5,00 115,64 3,27 2,22 2 6 147 123,14 20,75 43,42 135,68 199,85 85,08 0,05 3,42 16,57 4,95 72,63 2,50 2,51 1 3 149 132,13 20,93 50,34 150,88 222,15 85,65 0,05 3,75 14,03 5,10 104,87 2,63 2,39 1 4 155 118,23 14,34 41,13 173,42 228,89 89,01 0,00 3,10 16,62 5,55 96,95 2,40 2,07 1 3 157 145,50 18,87 45,97 163,58 228,43 73,50 0,45 3,45 12,09 4,50 110,46 2,56 2,05 2 5 Capí ulo I - E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Resul ados y discusión 55 COD es c i c p c e c alp es en lhb ahb ain hc Hp ec clu 158 131,65 16,49 35,08 180,53 232,10 96,08 0,05 2,96 16,13 5,43 97,97 2,73 2,49 1 3 159 121,58 17,84 42,65 111,49 171,98 91,63 0,35 3,18 15,68 5,31 115,08 2,81 2,49 1 2 162 137,85 23,95 65,47 200,49 289,91 88,97 0,53 3,88 13,51 4,92 134,61 3,36 2,29 2 6 163 141,12 23,34 61,69 188,58 273,61 83,97 0,72 3,98 14,27 5,06 108,30 3,06 2,26 2 9 164 141,67 13,11 42,67 165,74 221,52 90,17 0,05 4,02 14,48 4,82 98,85 3,14 2,09 2 2 165 141,81 17,91 50,35 152,83 221,08 86,68 0,21 3,63 14,49 5,00 88,89 2,64 2,39 2 4 168 132,63 11,40 29,92 166,14 207,47 74,14 0,00 3,63 14,26 4,70 84,76 1,86 1,95 1 8 169 114,63 11,59 22,10 108,71 142,41 76,64 0,08 3,16 13,07 4,72 83,27 3,33 1,92 1 1 170 139,30 17,83 56,35 176,46 250,64 89,66 0,22 3,24 14,71 5,18 105,93 3,15 2,35 2 2 172 144,76 13,22 27,24 150,80 191,27 75,88 0,10 3,60 13,69 5,08 86,94 2,58 2,13 2 4 173 129,35 8,21 25,54 88,32 122,08 82,49 0,06 3,85 12,83 4,32 89,31 3,08 2,11 1 1 174 132,37 7,65 16,91 84,95 109,51 83,33 0,00 3,29 13,53 4,78 98,19 3,56 1,95 1 1 175 146,80 16,22 46,40 193,79 256,41 87,56 0,06 4,23 17,62 5,48 121,18 3,93 2,22 2 6 176 132,49 4,56 13,07 54,30 71,93 65,21 0,00 3,27 12,75 4,50 72,74 3,22 1,97 1 1 177 140,30 19,17 53,34 154,43 226,94 84,08 0,55 3,53 13,76 4,95 123,92 3,78 2,41 2 6 178 126,49 7,55 19,36 65,07 91,99 78,53 0,06 2,95 15,84 5,62 96,56 2,82 2,04 1 1 179 133,62 13,30 37,32 108,52 159,14 96,04 0,19 2,80 14,72 5,52 117,99 3,71 2,19 1 2 180 142,11 13,46 24,65 83,26 121,37 80,12 0,00 3,12 10,05 4,07 95,31 3,31 2,05 2 7 181 141,23 17,97 42,05 135,10 195,12 85,91 0,95 3,61 14,49 6,26 82,08 3,08 2,31 2 3 182 137,99 9,80 24,48 77,96 112,24 65,27 0,00 2,38 12,81 4,55 76,48 2,40 2,27 2 8 183 132,50 11,49 30,00 113,10 154,60 84,53 0,06 3,24 11,55 4,44 91,21 2,65 2,17 1 1 184 132,99 10,30 39,86 147,82 197,98 95,63 0,19 3,13 14,15 4,93 89,19 2,89 2,38 1 2 185 124,94 18,47 42,52 112,56 173,56 89,42 0,16 3,26 16,34 6,22 96,82 3,78 2,52 1 2 186 140,04 5,29 14,55 86,30 106,14 77,00 0,06 2,93 12,49 4,67 108,70 2,50 2,16 2 1 187 132,83 6,39 20,34 70,16 96,90 75,85 0,10 2,32 15,53 5,67 118,35 2,90 2,07 1 1 Va iedades come ciales ´C oppe ´ 129,61 16,61 24,95 106,18 147,74 88,01 0,00 3,33 15,67 5,39 104,71 2,35 1 ´Talbo ´ 147,09 11,61 33,30 124,18 169,09 81,02 0,00 2,59 16,40 5,47 129,90 3,00 2 ´Vigo ´ 169,40 13,22 33,92 126,12 173,26 65,25 0,00 3,26 15,64 5,40 59,38 2,58 2 ´A ion´ 112,31 17,77 30,13 88,06 135,96 80,98 0,00 2,98 14,36 5,09 52,92 2,79 1 ´B igan ia´ 140,13 18,53 48,42 150,89 217,84 91,95 0,32 3,40 13,48 5,17 121,34 2,80 2 ´CiamI´ 147,64 29,25 70,71 218,09 318,05 83,06 0,78 4,05 13,16 4,78 154,73 2,88 2 Media o al 136,28 16,17 41,07 140,76 198,00 84,25 0,25 3,41 14,17 5,09 104,07 2,95 Media (74 Pobl.) 135,89 16,03 41,14 141,18 198,35 84,46 0,26 3,42 14,12 5,08 104,09 2,97 2,25 Media (6 Va ied.) 141,03 17,83 40,24 135,59 193,66 81,71 0,18 3,27 14,79 5,22 103,83 2,73 Tabla 6. Di isión po g upos de p ecocidad de las poblaciones de Lolium pe enne . En e pa én esis se mues a el núme o de poblaciones de cada g upo. P ecocidad GRUPO es c i c p c e c alp en lhb ahb hc ain Poblaciones (32) 128,38 13,98 37,04 127,92 178,94 87,86 3,28 15,26 5,35 2,99 97,30 1 Va iedades (2) 120,49 17,21 27,58 96,63 141,42 84,21 3,14 15,00 5,23 2,58 82,80 Poblaciones (42) 141,72 17,93 45,37 151,38 214,68 82,01 3,56 13,44 4,89 2,99 110,23 2 Va iedades (4) 151,52 17,89 46,08 154,81 218,78 81,14 3,34 14,69 5,21 2,81 125,29 56 Los da os del análisis de a ianza se mues an en la Tabla 7. El ANOVA pa a cada a iable ag onómica mos ó di e encias signi ica i as en odos los casos. El es de K uskal-Wallis ambién mos ó di e encias signi ica i as pa a las dos a iables cuali a i as. El e ec o año ue signi ica i o pa a odas las a iables. Es as di e encias es u ie on p incipalmen e ma cadas po la he e ogeneidad clima ológica en e los años de e aluación 1999 y 2000 en la localidad de ensayo, ya que mien as el año 1999 puede cali ica se como un año de p ecipi aciones in e nales no males (345 mm desde ene o a ma zo), el año 2000 p esen ó una ano mal sequía du an e el mismo pe iodo (106 mm). Tabla 7. Cuad ados medios del análisis de a ianza y es de K uskal-Wallis pa a a iables cuali a i as en Lolium pe enne ; FV : uen e de a iación; GL : g ados de libe ad; Blq : bloque; Pobl : población; X 2 : alo del es chi-cuad ado; * : signi ica i o al ni el 0,05; ** : signi ica i o al ni el 0,01. No a: en la a iable ain no hubo ano ación du an e el p ime año. FV GL Año 1 Blq 1 Año*Blq 1 Pobl 73 Pobl*Año 73 Cuan i a i as es 82172,79** 78,02 190,98* 1864,56** 193,23** c i 23485,94** 1921,04** 992,08* 857,19** 613,04** c p 46221,98** 3092,51 52,64 5496,46** 2603,07** c e 14998511,85** 32928,88* 24587,77 43513,98** 35935,21** ahb 248,63** 57,14** 33,53** 5,90** 2,60** lhb 4580,57** 110,94** 0,02 55,22** 44,29** ain --- 117,08 --- 2,62** --- alp 379806,14** 755,36 44,64 1696,99** 1076,49** Cuali a i as X2 en 314,63** hc 190,18** Al esul a signi ica i as las 10 a iables, se emplea on odas en un análisis de componen es p incipales (ACP) sob e la colección o al sin conside a los cul i a es come ciales. El ACP explicó un 72% de la a ianza, con es componen es ex aídas de au o alo mayo que 1. En la Tabla 8 se mues an las co elaciones de las a iables con cada una de las componen es ex aídas del ACP. El Fac o 1 se elaciona con odas las a iables de p oducción ( c i , c p y c e ), la echa de espigado y ole ancia a en e medades. El Fac o 2 se puede de ini como un eje mo ológico, Capí ulo I - E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Resul ados y discusión 57 con el que co elacionan las a iables de amaño de la hoja bande a ( ahb y lhb ), al u a de la plan a ( alp ), y ambién la echa de espigado ( es ). El Fac o 3 se elaciona con las a iables hábi o de c ecimien o ( hc ) y núme o de in lo escencias ( ain ). Con la clasi icación ascenden e je á quica basada en las componen es se es ablecie on nue e g upos de poblaciones explicando un 76% de la a ianza (Figu a 3). También se ep esen an las poblaciones en el espacio ac o ial del ACP, ma cadas median e colo es que indican el g upo de la clasi icación je á quica al que pe enecen. Es de des aca el clús e 9, que in eg a las poblaciones más p oduc i as y de mayo ole ancia a en e medades, g an núme o de in lo escencias y buena capacidad de espigado, lo cual esul a in e esan e pa a la esiemb a de la p ade a. Todas las accesiones de es e g upo p o ienen de las p o incias de A Co uña y Pon e ed a. Las poblaciones menos p oduc i as y con meno ole ancia a en e medades queda on ag upadas en el clús e 1, es as poblaciones ambien se ca ac e izan po una mayo p ecocidad y un meno amaño de hoja, y p o ienen en su mayo ía de zonas más medi e áneas (Ou ense, León, Ca aluña y Balea es) Tabla 8. Co elaciones en e las a iables ag onómicas y las componen es ex aídas del análisis de componen es p incipales en L. pe enne. Pa a la desc ipción de a iables e Tabla 4. % a . acum .: % de a ianza acumulada; * : signi ica i o al ni el 0,05; ** : signi ica i o al ni el 0,01. Va iable Componen e del ACP FACTOR 1 FACTOR 2 FACTOR 3 es 0,55(**) -0,59(**) -0,12 c i 0,88(**) 0,03 -0,03 c p 0,90(**) 0,18 0,12 c e 0,85(**) 0,21 -0,06 ahb 0,10 0,87(**) -0,09 lhb 0,03 0,90(**) -0,06 ain 0,48(**) -0,18 0,44(**) alp 0,24(*) 0,66(**) 0,52(**) en 0,72(**) -0,01 0,07 hc -0,09 0,02 0,90(**) Au o alo 3,48 2,48 1,26 % Va . acum. 34,82 59,65 72,26 64 3.3. FESTUCA ALTA Los Da os medios de e aluación se mues an en la Tabla 13. Las poblaciones esul a on se muy a iables. Las echas de espigado ue on en é minos medios más emp anas que las de los aig ases, y además ue la especie que más dila ó el pe íodo de p oducción de lo es, llegando desde p incipios de eb e o has a inales de junio. La di isión en g upos de p ecocidad mos ó dos g upos de 11 poblaciones p ecoces (an e io es al 15 de mayo) y 13 a días (pos e io es al 15 de mayo). El g upo p ecoz ue más p oduc i o, p esen ó un mayo amaño de plan a y más eespigado, pe o una meno ole ancia a en e medades (Tabla 14). Todas las a iables es udiadas mos a on di e encias signi ica i as en el ANOVA, las a iables cuali a i as analizadas median e el es de K uskal-Wallis ambién mos a on di e encias signi ica i as (Tabla 15). Tabla 13. Medias de los dos años de e aluación de las a iables ag onómicas u ilizadas en la ca ac e ización de la colección de F. a undinacea . c : c ecimien o o al ( c i + c p + c e ), p ec : g upo de p ecocidad asignado en unción de la echa de espigado. El es o de a iables es án explicadas en la Tabla 4. COD es c i c e c p c al ain en es alp lhb ahb hc H p ec clu 1 107,76 41,36 226,08 88,25 355,69 1,00 125,69 3,62 0,30 152,61 17,36 8,17 3,42 2,22 2 3 2 112,14 57,23 243,12 102,52 402,87 1,38 125,79 3,67 0,62 156,04 21,49 9,93 2,87 2,25 2 1 3 84,56 34,65 159,83 71,54 266,02 1,00 52,28 2,55 0,60 148,52 20,82 7,94 4,00 2,00 1 2 4 70,14 82,93 292,10 164,58 539,61 1,71 116,92 3,62 0,29 133,85 16,82 7,33 2,62 2,08 1 5 5 96,50 72,69 302,77 143,84 519,3 1,59 98,23 4,44 0,50 156,11 24,95 11,34 3,57 2,06 1 1 7 109,08 45,90 213,09 110,93 369,92 1,13 131,39 3,29 0,33 142,58 17,80 7,36 3,50 2,32 2 3 10 72,43 63,46 186,79 130,77 381,02 1,36 92,63 3,15 0,70 117,22 16,12 6,81 2,15 2,09 1 5 11 121,67 32,57 134,04 71,45 238,06 1,33 105,56 4,00 0,00 104,99 16,09 5,97 3,36 2,17 2 4 12 125,21 18,98 125,77 56,96 201,71 1,00 95,86 3,90 0,00 103,00 14,29 8,29 3,70 1,55 2 4 14 100,52 44,96 154,71 125,93 325,6 1,67 112,32 3,25 0,50 127,56 23,77 9,46 2,50 2,19 1 1 15 114,00 56,74 191,83 136,11 384,68 1,53 110,80 4,14 0,33 130,30 19,45 7,66 3,76 1,97 2 4 16 108,06 61,28 212,70 106,57 380,55 1,00 121,08 3,63 0,25 157,38 18,17 8,55 2,75 2,17 2 3 18 123,79 12,95 140,21 63,46 216,62 1,00 53,80 3,61 0,25 136,46 18,21 8,77 2,51 2,12 2 2 19 106,37 69,65 302,12 154,46 526,23 2,23 141,71 3,35 0,46 155,47 23,24 9,32 2,85 2,41 1 1 20 112,37 23,28 83,43 64,42 171,13 1,00 58,26 2,67 0,50 121,93 15,03 6,31 2,84 2,02 2 2 21 104,85 54,04 132,94 122,13 309,11 1,71 87,10 3,33 0,63 119,79 20,95 9,52 2,94 2,40 1 1 22 121,95 45,26 183,27 91,77 320,3 2,09 96,70 3,84 0,25 135,98 17,08 6,94 3,31 2,19 2 4 23 110,49 50,32 145,38 96,01 291,71 1,17 77,21 2,95 0,20 143,02 21,55 9,17 3,03 2,29 2 2 24 115,22 45,15 222,56 112,27 379,98 1,46 111,35 3,74 0,27 126,42 22,07 8,84 1,98 2,31 2 1 25 102,11 66,07 229,63 141,84 437,54 1,67 134,10 3,69 0,38 146,28 23,46 9,48 2,22 2,17 1 1 26 95,94 51,93 141,99 102,82 296,74 1,22 65,97 3,02 0,60 134,96 19,81 9,36 3,55 2,41 1 2 27 103,37 92,62 282,42 152,53 527,57 1,00 124,65 2,88 0,13 159,78 19,44 7,68 2,94 2,13 1 3 30 106,22 63,48 210,52 97,92 371,92 1,00 127,45 3,50 0,10 151,98 16,05 7,43 3,35 2,12 1 3 Capí ulo I - E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Resul ados y discusión 65 COD es c i c e c p c al ain en es alp lhb ahb hc H p ec clu 31 108,06 43,45 185,41 121,07 349,93 2,06 87,00 3,54 0,57 130,33 22,62 8,68 2,79 2,36 2 1 Va iedades come ciales ´Tima´ 112,66 53,89 232,76 113,05 399,7 1,90 126,01 3,06 0,28 153,98 20,43 8,02 3,86 2 3 ´Ma isc.´ 121,34 32,14 155,66 67,99 255,79 1,00 82,04 3,09 0,18 151,64 17,86 8,02 3,86 2 1 ´Fawn´ 88,66 48,84 221,40 132,66 402,9 1,90 109,16 2,79 0,70 148,58 18,10 8,66 4,08 1 2 Media o al 105,76 50,59 196,76 1,41 102,63 3,42 0,37 138,77 19,37 8,33 3,12 Media (24 Pobl.) 105,53 51,29 195,95 1,39 102,24 3,47 0,37 137,19 19,44 8,34 3,02 2,17 Media (6 a ied.) 107,55 44,96 203,27 1,60 105,74 2,98 0,39 151,40 18,79 8,23 3,93 Tabla 14. Di isión po g upos de p ecocidad ( P ec ) de las poblaciones de Fes uca a undinacea . En e pa én esis se mues a el núme o de accesiones de cada g upo. P ec GRUPO es c i c p c e c al ain en alp lhb ahb hc Poblaciones (11) 94,82 63,32 128,03 217,80 409,15 1,47 104,84 3,50 141,19 20,50 8,70 2,97 1 Va iedades (1) 88,66 48,84 132,66 221,40 402,90 1,90 109,16 2,63 148,57 18,10 8,66 4,08 Poblaciones (13) 114,58 41,11 93,98 177,45 312,55 1,32 100,69 3,69 133,50 18,56 8,05 3,06 2 Va iedades (2) 117,00 43,02 90,52 194,21 327,75 1,45 104,03 2,98 152,81 19,14 8,01 3,85 Tabla 15. Cuad ados medios del análisis de a ianza y es de K uskal-Wallis pa a a iables cuali a i as en Fes uca a undinacea ; FV : uen e de a iación; GL : g ados de libe ad; Blq : bloque; Pobl : población; X 2 : alo del es chi-cuad ado; * : signi ica i o al ni el 0,05; ** : signi ica i o al ni el 0,01. NOTA: en el segundo año no hubo ano ación de la a iable c p , po lo que el é mino de e o u ilizado ue Pobl*Blq. FV GL Año 1 Blq 1 Año*Blq 1 Pobl 23 Pobl*Año 23 Cuan i a i as es 1429,66** 0,19 104,42 4276,45** 150,28 c i 4109,32 10056,28** 11,59 6841,04** 2263,53 c p --- 1276,46 --- 9412,57** --- c e 5780,58 75161,49 29754,14 77658,90** 22414,92 ahb 0,93 0,07 9,11* 31,38** 0,47 lhb 5,74 169,56 61,04 172,40** 4,59 ain 846,04 10622,43 65,95 12704,05** 10174,21 alp 16814,65** 3280,01 9514,24 4526,13** 874,56 Cuali a i as X2 en 92,68** hc 164,21** El ACP sob e la colección o al explicó un 81% de la a ianza con cua o componen es. El Fac o 1 se elaciona con odas las a iables de p oducción, nº de 66 in lo escencias y al u a o al ( c i , c p , c e , ain y alp ). El Fac o 2 se elaciona con las a iables de o ma de hoja ( ahb y lhb ). El Fac o 3 se elaciona con la echa de espigado y ole ancia a en e medades ( es y en ) y inalmen e el Fac o 4 se elaciona con el hábi o de c ecimien o y la al e na i idad ( hc y al ). Las poblaciones de mayo p ecocidad de espigado ue on las más p oduc i as. En la Tabla 16 se mues an las co elaciones en e las a iables y cada una de las componen es. La clasi icación ascenden e je á quica basada en las componen es p incipales es ableció cinco g upos explicando un 67% de la a ianza. (Figu a 5). Los clús e 1, 3 y 5 ag upa on poblaciones más p ecoces y más p oduc i as. En los clús e 2 y 4 se ag upa on las más a días y de meno p oducción. Tabla 16. Co elaciones en e las a iables ag onómicas y las componen es ex aídas del análisis de componen es p incipales en F. a undinacea. % a . acum .: % de a ianza acumulada; * : signi ica i o al ni el 0,05; ** : signi ica i o al ni el 0,01. Va iable Componen e del ACP FACTOR 1 FACTOR 2 FACTOR 3 FACTOR 4 es -0,40 0,02 0,77(**) -0,16 c i 0,90(**) 0,12 -0,25 0,13 c p 0,80(**) 0,23 -0,18 0,44 c e 0,93(**) 0,23 0,05 0,02 al 0,25 0,29 0,21 0,74(**) ain 0,78(**) -0,10 0,35 0,11 en 0,17 0,03 0,87(**) 0,04 alp 0,61(**) 0,45(*) -0,15 -0,48(*) lhb 0,20 0,90(**) -0,06 0,26 ahb 0,12 0,93(**) 0,10 0,03 hc -0,09 -0,03 0,20 -0,69(**) Au o alo 5,32 1,72 1,55 1,34 % Va . acum. 44,34 58,69 71,65 82,85 Capí ulo I - E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca - Resul ados y discusión 67 Figu a 5. Supe io : ep esen ación ac o ial de la clasi icación ascenden e je á quica sob e las es p ime as componen es en 24 accesiones de Fes uca a undinacea . Los colo es ep esen an los conglome ados del análisis clús e . In e io : diag ama de la clasi icación ascenden e je á quica, u ilizando el mé odo de ag egación de Wa d sob e las es p ime as componen es del ACP. S e m i - P a i a l R - S q u a e d0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 Id d 1 7 16 30 27 11 12 15 22 4 10 2 5 19 25 14 31 21 24 3 23 26 18 20 Clus e 1 Clus e 2 Clus e 3 Clus e 4 Clus e 5 68 Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca – Resul ados y discusión 69 4. DISCUSIÓN Si bien es cie o que la mayo pa e de las accesiones es udiadas pe enecen al no e de España, es de des aca el buen compo amien o ag onómico de muchas de las poblaciones gallegas en las es colecciones, siendo las más p oduc i as las pe enecien es a las p o incias de A Co uña, Pon e ed a, As u ias y Can ab ia, ecolec adas mayo i a iamen e en zonas húmedas. Las poblaciones de meno es p oducciones p oceden de localidades de condiciones más medi e áneas. Es os da os co obo an o os abajos an e io es que indican una mayo adap ación local de las poblaciones au óc onas de g amíneas p a enses (Oli ei a y López, 1999). En gene al se puede deci que las poblaciones u ie on un mejo compo amien o ag onómico medio que los cul i a es come ciales empleados como es igo. Es de des aca el caso del aig ás inglés, donde los dos cul i a es c eados a pa i de eco ipos au óc onos gallegos mos a on un mejo esul ado que el es o de cul i a es. Es e mejo compo amien o implica una mayo ole ancia a en e medades y unos mejo es endimien os, que ya había sido obse ado po Oli ei a e al., (1997a, 1997b) en poblaciones locales de g amíneas, lo cual según Piñei o y Pé ez (1986), ecuen emen e es debido a la p esencia de ca ac e ís icas especiales de adap ación a una egión de e minada. Es os esul ados son exac amen e lo que se espe a ía de la in luencia de la selección na u al, es deci , las poblaciones p esen an mejo es esul ados cuando se e alúan en localidades con condiciones ecológicas simila es a sus luga es de o igen (Bal ou ie e al ., 1997, Oli ei a y González, 2000). Los análisis mul i a ian es e ela on una co elación posi i a del p ime ac o ( Fac o 1 ) con odas las a iables de p oducción an o en los aig ases como en es uca. A la misma conclusión llega on Oli ei a y González (2000) en un es udio sob e 152 poblaciones na u ales de aig ás inglés p oceden es de 15 países eu opeos. Se puede deci que cons i uye un eje de c ecimien o. Las a iables mo ológicas y de esis encia a en e medades se co elaciona on más con los 70 siguien es ac o es, epi iéndose en las es colecciones las co elaciones posi i as de las a iables de hoja bande a ( ahb y lhb ) con el Fac o 2 . Las echas de espigado se co elaciona on con el Fac o 1 , excep o en el caso de es uca, que se co elaciona on con el Fac o 3 , es o es debido a que la echa de espigado y los c ecimien os en es uca co elacionan nega i amen e, es deci , las mayo es p oducciones se die on en las poblaciones más p ecoces. En el caso del aig ás i aliano las poblaciones del G upo 2 ue on más p oduc i as que las del G upo 1 , eniendo ambién mayo al u a, longi ud y anchu a de la hoja bande a. No p esen a on di e encias en cuan o a ole ancia a en e medades, ni en hábi o de c ecimien o. Las poblaciones pe enecien es al G upo 1 no p esen a on c ecimien o en e ano, y mayo i a iamen e p oceden de las p o incias de Pon e ed a y As u ias. El in e és de las poblaciones de es e g upo es el hecho de que su p ecocidad les pe mi a su inclusión como cul i o o aje o de in ie no en o ación con el maíz. En el G upo 2 es de des aca el buen compo amien o de las poblaciones de Can ab ia, que supe a on al mejo cul i a come cial (‘Exal a’), seguidas de algunas poblaciones de A Co uña, Lugo y As u ias. Conside ando alo es medios o ales, los cul i a es come ciales e aluados en el ensayo esul a on más p oduc i os que las poblaciones, aunque p esen a on una meno ole ancia a en e medades de hoja, no obs an e hay que ene en cuen a que en las echas de ano ación de los c ecimien os de e ano hay 17 poblaciones de ipo ‘wes e wo ld’ clasi icados en el G upo 1 (p ecoz) que no u ie on c ecimien o alguno, po lo an o in luyen en la media gene al con alo es ce o. Ninguna de las a iedades come ciales de aig ás i aliano p esen ó c ecimien o nulo en e ano y odas se incluye on en el G upo 2 ( a dío). En el caso de Fes uca a undinacea , el hecho de que las poblaciones más p ecoces de espigado uesen las más p oduc i as, es á de acue do con los da os ob enidos po Díaz e al ., (1999) en un es udio ealizado en el no e de España sob e 13 a iedades come ciales, donde las más p ecoces esul a on se algo más p oduc i as. La misma conclusión ue obse ada po Rosso e al. , (2008) en un Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca – Resul ados y discusión 71 es udio de 34 accesiones, sin emba go, Pa edes e al ., (1986) ob u ie on las mayo es p oduc i idades en a iedades a días en una e aluación ealizada en el su de España. De las es a iedades es udiadas en es e abajo ‘Ma isKasba’ (la más a día) ue la de meno p oducción y ‘Tima’ (de espigado in e medio) la de mayo . Según Be ín (1988), la p oducción o al y es acional de o aje de es a especie es di e en e según se conside en ma e iales p o enien es del no e de Eu opa, medi e áneos, o in e medios en e es os dos. Dado que la especie no es á especí icamen e mejo ada pa a zonas húmedas los da os indican que en ales zonas las a iedades ci adas pueden ene un compo amien o ag onómico di e en e del ob enido en el Su de España, pudiendo esul a adecuado el uso de a iedades c eadas a pa i de ge moplasma au óc ono (Piñei o y Pé ez, 1986). Dada la he e ogeneidad climá ica en e los dos años de e aluación, (el p ime año ue muy llu ioso y el segundo ano malmen e seco), el e ec o año ue signi ica i o sob e odo en los aig ases, a los cuales a ec an más los pe iodos secos que a las es ucas. Tal e ec o se obse ó especialmen e en el aig ás i aliano, ya que al implan a comple amen e el ensayo con plan as nue as, la sequía del segundo año a ec ó a la implan ación y c ecimien os iniciales. En las es ucas el e ec o año ue en gene al menos signi ica i o que en los aig ases, lo cual coincide con las obse aciones de nume osos au o es de una mayo ole ancia a la sequía de las es ucas en e a los aig ases una ez es ablecidas las plan as. 72 Capí ulo I – E aluación ag onómica de las colecciones base de Lolium y Fes uca – Conclusión 73 5. CONCLUSIÓN Las es colecciones de g amíneas mos a on una g an di e sidad y a iabilidad ag onómica compa ando con los cul i a es come ciales. En aig ás inglés la media de los endimien os y ole ancia a en e medades de las poblaciones na u ales supe ó a las seis a iedades come ciales, 41 de las 74 u ie on mejo es c ecimien os que la media de las a iedades, p o enien es en su mayo ía de Galicia y As u ias. Los cul i a es c eados a pa i de geno ipos au óc onos ue on los de mejo compo amien o ag onómico de los u ilizados como es igo. En aig ás i aliano seis de las 42 poblaciones u ie on mejo es c ecimien os que la media de las a iedades come ciales, odas ellas p o enien es de zonas húmedas de Can ab ia y Galicia. En é minos globales las a iedades come ciales u ie on mejo es endimien os pe o ue on más sensibles a en e medades. En es uca al a 16 de las 24 poblaciones u ie on mejo es endimien os que la media de las a iedades. En é minos globales an o poblaciones como a iedades u ie on endimien os simila es, pe o és as úl imas ue on más sensibles a en e medades. A di e encia de los aig ases las poblaciones más p oduc i as ue on las más p ecoces. Las a iables ag onómicas es udiadas en las es colecciones p esen a on un pa ón simila en los análisis mul i a ian es, apa eciendo un p ime ac o con el que se elacionan las a iables de p oducción y dos ac o es con los que se elacionan las a iables mo ológicas. El ma e ial es udiado p esen a un al o in e és pa a la c eación de a iedades basadas en ma e ial gené ico au óc ono. Has a aho a las mayo es aplicaciones de 80 colección. De es a mane a no sólo se log a un manejo más ágil del ge moplasma almacenado, sino que ambién se ob iene in o mación adicional que puede ene una g an impo ancia es a égica en los p og amas de mejo a gené ica (B own y Spillane, 1999). No obs an e, hay que ene en cuen a que, aunque la c eación de una colección nuclea aumen e el alo añadido de la colección base, sin emba go no la sus i uye, y no jus i ica el hecho de que se desa ienda la conse ación de la colección o al, simplemen e cons i uye una he amien a pa a hace más p ác ico el manejo del ge moplasma y pa a conse a la máxima di e sidad posible con pocas mues as. B own (1989b) sugi ió que una mues a al aza del 10% de la colección o al conse a ía un 70% de la a iación o al (es a egia R). Pe o según el mismo B own (1989a), se ía más e ec i o o ganiza la colección en una es uc u a es a i icada basada en g upos de ca ac e ís icas simila es y oma mues as alea o ias basándose en di e en es c i e ios: una acción cons an e de cada g upo (es a egia C), una p opo ción del g upo (es a egia P), o bien una p opo ción loga í mica del g upo (es a egia L). Pos e io men e, Schoen y B own (1993, 1995) p opusie on dos nue as es a egias de ag upación (H y M) basadas en ma cado es e índices de di e sidad gené ica. Es os mismos au o es e alua on la e ec i idad de las cinco es a egias an e io es concluyendo que la e ención espe ada de alelos, en o den de mayo a meno es: M>H>P>L>C>R. Las es a egias basadas en p ocedimien os mul i a ian es conlle an la ag upación de las en adas en base a desc ip o es de pasapo e, da os ecogeog á icos, geoes adís icos, ma cado es molecula es e isoenzimá icos, y ambién de ca ac e es eno ípicos. Sin emba go, equie en el empleo de in o mación p eexis en e que es in iable en algunas colecciones po el ele ado núme o de en adas que debe ían ca ac e iza se. Pe e s y Ma inelli (1989) compa a on di e en es p ocedimien os de ag upación je á quica mul i a ian e, ob eniendo como esul ado que no sólo e an he amien as muy ú iles pa a ag upa las en adas de colecciones de ge moplasma, sino que además pe mi en Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – In oducción 81 es ima el po encial de seg egación de las en adas en c uzamien os. En los úl imos años se ha compa ado la e ec i idad de los mé odos mul i a ian es en e a los mé odos alea o ios pa a c ea colecciones nuclea es en di e en es cul i os (Basigalup e al ., 1995; Bish e al ., 1999; Spagnole i y Qualse , 1993), y en el desa ollo de colecciones nuclea es de aig ás inglés po di e en es au o es (Bal ou ie e al ., 1999; Casle , 1995). Una e isión puede obse a se en Hamon e al ., (1998) y en O iz e al ., (1998). Casle (1995), encon ó que la p esión de cul i o y las condiciones climá icas pueden in lui en los eco ipos sil es es de las especies cul i adas. A menudo, las p ác icas de cul i o es án delimi adas e i o ialmen e po di isiones adminis a i as, de modo que muchos au o es ienen en cuen a el ac o país o egión como uen e de a iación gené ica en la c eación de colecciones nuclea es. Según Bal ou ie e al ., (1998a, 1999) las es uc u as espaciales iden i icadas po p ocedimien os geoes adís icos en Lolium pe enne L., son el esul ado de una p esión selec i a del ambien e. Mones iez e al ., (1994) encon a on es uc u as espaciales en al menos, seis a iables ag onómicas de L. pe enne en dimensiones de 120-300 km de dis ancia. Casi odos los es udios ci ados se e ie en a colecciones de amaño conside able y, debido a la amplia dis ibución de las poblaciones, suelen ene en cuen a el o igen geog á ico del ge moplasma. Sin emba go, no exis en muchos es udios en colecciones pequeñas de cul i os locales. En el caso de es e es udio, casi odas las mues as que componen ambas colecciones de pa ida ue on ecolec adas p incipalmen e en el no e de España, zona en la que es á ampliamen e ex endido el cul i o de es as dos especies pa a siemb a de p ade as (Mosque a e al ., 1999; Piñei o, 1994). 82 Los obje i os de es e abajo son: 1) Compa a la e icacia de écnicas de c eación de colecciones nuclea es u ilizando como ma e ial de pa ida dos colecciones de aig ás inglés e i aliano ecolec adas p incipalmen e en el no e de España. 2) La c eación de dos colecciones nuclea es, pa a se mul iplicadas y ob ene una su icien e can idad de semilla, con obje o de eno a la máxima di e sidad exis en e en el ma e ial de pa ida del CIAM. Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Ma e ial y mé odos 83 2. MATERIAL Y MÉTODOS Con los da os de ca ac e ización ag onómica es udiados en el Capí ulo I, se u iliza on las colecciones de aig ás inglés y de aig ás i aliano pa a compa a di e sas es a egias de c eación de colecciones nuclea es. No se u ilizó la colección de es uca al a po ene un núme o educido de accesiones. Conside ando sob e odo el obje i o p io i a io de man ene colecciones manejables y dinámicas, en luga de colecciones es á icas (B own, 1989a, 1995), se es imó opo uno ija el núme o más ap opiado de en adas pa a cumpli dicho obje i o sob e ambas colecciones de pa ida. Po an o, se conside ó adecuado es ablece el núme o de poblaciones de la colección nuclea en nue e pa a el aig ás y seis pa a el aig ás i aliano. Con obje o de conside a al menos una población de cada g upo, se es ableció el núme o de g upos de la clasi icación je á quica ambién en nue e y seis, espec i amen e pa a aig ás inglés y aig ás i aliano. Basándose en es e amaño de mues a y pa a cada colección nuclea , se diseña on seis mé odos de selección de poblaciones (Figu a 6). Los mé odos u ilizados ue on: M1) Mues eo al aza : se gene a on 200 mues as independien es de amaños 9 y 6, espec i amen e pa a aig ás inglés y aig ás i aliano, median e un gene ado de núme os alea o ios que sigue una dis ibución uni o me (0-1). Po mues a se en iende cada uno de los g upos de en adas seleccionados alea o iamen e po el gene ado . Cada mues a se conside ó como una colección nuclea independien e de la cual se calculó la media, a ianza e in e alo de a iación en cada una de las a iables. M2) C i e io de máxima di e sidad: se selecciona on las poblaciones con mayo di e sidad in apoblacional en cada colección de pa ida, u ilizando los ca ac e es ag onómicos es udiados en el Capí ulo I. La medida de la di e sidad se 84 ij n iij PPH 2 1 log    calculó como la media del índice H de Shannon-Wea e en cada a iable según la exp esión, (Shannon y Wea e , 1963): donde j es la a iable ag onómica, P ij es la ecuencia de apa ición de cada clase ag onómica i pa a la a iable j . El cómpu o de la di e sidad media de cada en ada se calculó como la media del índice H de las k a iables es udiadas, (Fu man e al ., 1997): k H H k ij   1 M3) Selección al aza den o de cada clús e : se seleccionó una población al aza en cada clús e , y se epi ió el p oceso 200 eces pa a ob ene 200 mues as de las colecciones o ales. La selección se ealizó median e un gene ado de núme os alea o ios que sigue una dis ibución uni o me (0-1) en cada clús e . Pa a cada mues a se calculó la media a ianza e in e alo de a iación de las a iables. Po mues a se en iende en es e caso el conjun o de en adas seleccionadas po an os gene ado es como conglome ados haya en la clasi icación je á quica de las colecciones de pa ida. M4) Mayo simila idad media en el clús e : se calculó la media de cada clús e pa a cada una de las a iables. Los alo es medios así ob enidos se conside an como si ue a una nue a población y se epi e el análisis de componen es p incipales y el análisis clús e . Se selecciona la población que p esen e una mayo p oximidad con espec o a la “población” de alo es medios, de e minada po el alo SPR (semipa ial R-squa e) de la clasi icación ascenden e je á quica median e el mé odo de Wa d. Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Ma e ial y mé odos 85 M5) C i e io de máxima di e sidad den o del clús e : se selecciona la población con mayo di e sidad in apoblacional de en e las posibles den o de cada clús e , u ilizando el índice medio H j del Mé odo 2. M6) Máxima con ibución a la ine cia de la nube de pun os en el espacio ac o ial del ACP: la suma gene alizada de cuad ados de un g upo de N indi iduos en un espacio ac o ial de K a iables es anda izadas (media=0, a ianza=1) e independien es (coe icien e de co elación=0) es igual al p oduc o N x K. La con ibución Pi de cada indi iduo a la ine cia de la nube de pun os es: 2 1ij K j ixP    y la con ibución ela i a CR i de cada indi iduo i a la ine cia de la nube de pun os es á dada po : (Noi o e al ., 1996; Hamon e al ., 1998): NK P CR i i Los indi iduos con mayo CRi son los que más con ibuyen a la ine cia de la nube de pun os. Seleccionando es os indi iduos se ob iene una subcolección con a ianzas ele adas. Los mé odos M2 , M4 , M5 y M6 son de e minís icos, ya que la me odología empleada especi ica qué en adas se an a selecciona según los da os de e aluación ag onómica. Pa a cada mé odo se ob u o la media, a ianza e in e alo de a iación de las a iables ag onómicas medidas pa a compa a cada colección nuclea con la colección de pa ida. Las compa aciones de medias y a ianzas se ealiza on median e el es no pa amé ico de Wilcoxon (Wilcoxon, 1945), median e el p ocedimien o NPAR1WAY del p og ama es adís ico SAS (SAS Ins i u e, 1999). 86 También se ob u o una medida del po cen aje de e ención de los in e alos de a iación de las a iables pa a cada mé odo, según la exp esión: (Diwan e al ., 1995) CBR CNR e encion in n   1 % donde R n CN es el in e alo de a iación de la a iable n en la colección nuclea , R n CB es el in e alo de a iación de la a iable n en la colección o al, y es el núme o de a iables compa adas. La colección nuclea más ep esen a i a de la colección o al se pod ía conside a aquella con medias inal e adas, mayo es a ianzas y mayo es po cen ajes de e ención (Malose i e al ., 2000). Las p opiedades adi i as del índice H de Shannon-Wea e pe mi en hace compa aciones en e dis in os ni eles de ag upación (Toolbe e al ., 1979), de modo que adicionalmen e los seis mé odos ue on compa ados po su capacidad pa a cap u a la di e sidad de las colecciones iniciales. Dicha compa ación se ealizó median e el cálculo del índice H en cada colección nuclea c eada con espec o a la colección o al sob e odas las a iables, ob eniéndose un índice de di e sidad ela i o (HR) calculado de la siguien e o ma (Bal ou ie e al ., 1998a): )( )( CTH CCH HR  Donde )(CCH es la di e sidad media de las poblaciones que componen cada colección nuclea pa a odas las a iables ag onómicas y )(CTH es la di e sidad media de las poblaciones de la colección o al pa a odas las a iables Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Ma e ial y mé odos 87 ag onómicas. Pa a cada mé odo de e minís ico se calculó la di e sidad media de las poblaciones de cada colección nuclea . Pa a los mé odos no de e minís icos se calculó la di e sidad en cada una de las 200 mues as y después se conside ó el mínimo del in e alo de con ianza de la dis ibución del índice (Bal ou ie e al ., 1998a, 1999). 88 Figu a 6. Esquema de las seis es a egias compa adas pa a la c eación de colecciones nuclea es en aig ás inglés y aig ás i aliano. 3 componen es ex aídas - Tes de Wilcoxon pa a compa a medias y a ianzas con la Colección Base. - Cálculo de los coe icien es de e ención de los angos median e: - Tes de Wilcoxon pa a compa a medias y a ianzas con la Colección Base. - Cálculo de los coe icien es de e ención de los angos median e: COLECCIÓNES BASE DEL CIAM M3 Mues eo al aza M3 Mues eo al aza M4 Mayo simila idad M4 Mayo simila idad M5 Mayo di e sidad M5 Mayo di e sidad Mabegondo - A Co uña Medias de 200 mues as alea o ias en cada clus e seleccionadas po un gene ado con dis ibución Uni o me U (0, 1). Medias de 200 mues as alea o ias en cada clus e seleccionadas po un gene ado con dis ibución Uni o me U (0, 1). Selección de la población más pa ecida a la media de cada clús e . Selección de la población más pa ecida a la media de cada clús e . Las poblaciones de mayo di e sidad del clús e , según el índice de Shannon-Wea e : Las poblaciones de mayo di e sidad del clús e , según el índice de Shannon-Wea e : Medias de 200 mues as alea o ias, seleccionadas po un gene ado con dis ibución Uni o me U (0, 1). Medias de 200 mues as alea o ias, seleccionadas po un gene ado con dis ibución Uni o me U (0, 1). Las poblaciones de mayo di e sidad de la Colección Base, según el índice de Shanon-Wea e : Las poblaciones de mayo di e sidad de la Colección Base, según el índice de Shanon-Wea e : Las poblaciones de mayo con ibución ela i a (CRi) a la ine cia de la nube de pun os en el ACP: Las poblaciones de mayo con ibución ela i a (CRi) a la ine cia de la nube de pun os en el ACP: PiLogPH n iij 2 1    NK x CR ij K j i 2 1    PiLogPH n iij 2 1    Medias de a iables ag onómicas Selección del amaño de colección Medias de a iables ag onómicas Selección del amaño de colección 72% a ianza 76% a ianza CBR CNR e encion in n   1 % Ca ac e ización ag onómica du an e 2 años Pi: ecuencia de cada alo en cada a iable. Xij: coo denadas de cada accesión en los ejes p incipales. K: nº de ejes p incipales. N: nº de accesiones. RnCN: ango de la a iable n en la Colección Núcleo. RnCB: ango de la a iable nen la Colección Base. : nº de a iables Accesiones mues eadas en di e sas localidades de España M6 Máxima ine cia M6 Máxima ine cia M2 Máxima di e sidad M2 Máxima di e sidad M1 Mues eo al aza M1 Mues eo al aza Análisis de Componen es P incipales (ACP) Análisis Clús e Mé odo de Wa d Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Resul ados y discusión 89 3. RESULTADOS 3.1. Raig ás inglés Las medias y a ianzas pa a cada mé odo de mues eo se pueden obse a en la Tabla 17. En dicha Tabla se esal an las a ianzas que han esul ado mayo es en las colecciones nuclea es o madas que en la colección de pa ida. Los mé odos basados en selección po di e sidad ( M2 y M5 ), ex aen poblaciones que p esen an una dis ibución más equi a i a de las ecuencias de clase de las a iables ag onómicas, y den o de és as las que p esen an un mayo in e alo de a iación. Debido a es o, las poblaciones ex aídas p esen an a ianzas al as. En consecuencia el conjun o seleccionado iene una a ianza media ambién al a, y gene almen e supe io a la a ianza media de la colección o al, ya que las a ianzas indi iduales de las en adas seleccionadas con ibuyen en mayo p opo ción en la colección nuclea que en la colección o al. El Mé odo seis ( M6 ) ex ae las accesiones que más con ibuyen a la ine cia de la nube de pun os en el ACP, y po eso casi odas las a ianzas son supe io es a la colección o al. Los mé odos basados en ex acción al aza ( M1 y M3 ), y el M4 , ex aen poblaciones con a ianzas muy simila es a la colección de pa ida. El es de compa ación de Wilcoxon (Tabla 18) no e eló di e encias signi ica i as pa a medias y a ianzas en ningún mé odo; sin emba go, el coe icien e de e ención de los in e alos de a iación ue no ablemen e in e io en los mé odos de selección al aza ( M1 y M3 ), que alcanzó sólo el 34 y 23% espec i amen e, y esul ó máximo en el M6 (87%). El es o de mé odos man u ie on coe icien es de e ención acep ables. 96 Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Resul ados y discusión 97 4. DISCUSIÓN Según B own (1989b), la di e sidad de las colecciones de ge moplasma no es á dis ibuida al aza y dicha di e sidad p esen a una es uc u a que puede se ep esen ada po un modelo je á quico, hecho ambién obse ado po Hamon e al ., (1994). Po an o, los mé odos de selección alea o ia no pa ecen se adecuados cuando se conocen da os cuan i a i os de la colección de pa ida, aunque sí pueden u iliza se cuando no se dispone de da os de e aluación/ca ac e ización. La mayo e ec i idad de los mé odos mul i a ian es en la ca ac e ización de colecciones de ge moplasma de aig ás inglés ambién ha sido obse ada po Casle (1995) y po Bal ou ie e al ., (1998a). En nues o caso, aunque las compa aciones de medias y a ianzas no hayan sido signi ica i as pa a ningún mé odo de mues eo, pa ece ob io desca a los mé odos de selección al aza po los bajos coe icien es de e ención obse ados en los in e alos de a iación (Figu as 7 y 8). Las e enciones obse adas en los in e alos son, po é mino medio, in e io es a las obse adas po Malose i e al ., (2000) en un es udio de cebada, debido p obablemen e al meno amaño ela i o de las colecciones nuclea es en e a las colecciones de pa ida (en nues o caso un 12% y un 14%, en e a un 19,5% seleccionado sob e la colección de cebada). En ambas especies el máximo po cen aje de e ención en los in e alos de a iación se p oduce en el M6 (87% y 93%, espec i amen e pa a aig ás inglés e i aliano, Tablas 18 y 20). Según Van Hin um e al ., (2000) la mayo conse ación de los in e alos po es a es a egia es debida a la selección de en adas que p esen an alo es ce canos a los ex emos en alguno de los ca ac e es conside ados. Es a es a egia ha sido u ilizada en el desa ollo de colecciones nuclea es de Vigna adia a L. (Bish e al ., 1998), de caña de azúca (Balak ishnan e al ., 2000), de so go (G enie e al ., 2000a, 2000b), de ca é (Hamon e al ., 1995, 1998), de Abelmoschus esculen us L. (Mahajan e al ., 1996), y de guisan e (Shing e al ., 1991). 98 En las Figu as 9a y 9b se pueden obse a las cu as de dis ibución de ecuencias en las poblaciones seleccionadas po los mé odos de e minís icos pa a algunas a iables. En gene al, se obse a un mejo ajus e de las cu as en la colección de aig ás inglés que en la de aig ás i aliano. El mo i o pa ece se la exis encia en aig ás i aliano de una cla a dis inción de la colección de pa ida en dos g upos de p ecocidad: un g upo p ecoz, ca ac e izado po al as p oducciones concen adas en echas emp anas (clús e 1, 4 y 6 de la Figu a 6 del Capí ulo I), y un g upo a dío, con p oducciones concen adas en echas más a días (clús e 2, 3 y 5). La echa de espigado es c ucial en el desa ollo de las plan as e in luye no ablemen e en los ca ac e es de espigado medidos. La cu a que mejo se ajus a a la colección o al es la del M6 . Tal dis inción no se ap ecia an cla amen e en la colección de aig ás inglés, adop ando odas las cu as una o ma simila . Hamon e al ., (1998) ob u ie on cu as dis in as en colecciones núcleo de cua o cul i os di e en es, mos ando que la complejidad y la o ganización de las es uc u as gené icas en las colecciones de pa ida dependen del p opio cul i o. Pa a ambas colecciones seleccionadas po dicho mé odo, se ap ecia una mayo ep esen ación de los alo es ce canos a los ex emos y una meno ep esen ación de los alo es ce canos a la media, debido a la p esencia de meno es edundancias. G enie e al ., (2000a) ambién obse a on es e e ec o, concluyendo que dicha es a es a egia no solo pe mi e una mayo e ención de la di e sidad de la colección de pa ida, sino que además con ibuye a elimina edundancias en la colección nuclea . Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Resul ados y discusión 99 Figu a 9a. Cu as de dis ibución de ecuencias en las poblaciones seleccionadas po los mé odos de e minís icos pa a las a iables es , c e , ahb . La columna de la izquie da co esponde a la colección de L. pe enne y la de la de echa a L. mul i lo um . CT : colección o al. 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 FE S ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 30 60 130 200 325 CR E ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 3456789 AHB ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 FES ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 10 30 60 90 180 CR E ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 345678910111213141516 A H B ecuencia CT M2 M4 M5 M6 Lolium p e enn e Lolium mul i lo u m 100 Figu a 9b. Cu as de dis ibución de ecuencias en las poblaciones seleccionadas po los mé odos de e minís icos pa a las a iables hc , ain , alp . La columna de la izquie da co esponde a la colección de L. pe enne y la de la de echa a L. mul i lo um . CT : colección o al. 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 12345 HC R ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 20 45 70 100 130 170 230 330 AIN ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 15 30 45 60 75 90 105 120 135 150 ALP ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 12345 HC R ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 20 40 60 80 100 120 140 160 AIN ecuencia CT M2 M4 M5 M6 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 20 40 60 80 100 120 140 160 ALP ecuencia CT M2 M4 M5 M6 Lolium p e enn e Lolium mul i lo u m Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Resul ados y discusión 101 Si se ep esen a la con ibución ela i a acumulada de cada accesión a la ine cia de la nube de pun os en el ACP (Figu a 10), se obse a cómo al aumen a el amaño de la colección núcleo se ob ienen dos pa ones dis in os pa a cada especie. En L. pe enne el inc emen o es g adual y se alcanza el 50% de la a ianza o al con un 27% de la colección o al, mien as que en L. mul i lo um el inc emen o es mayo en el o igen, alcanzando con sólo un 19% de la colección de pa ida, la mi ad de la ine cia de la nube de pun os. En o as palab as, la di e sidad de la colección de L. mul i lo um es mayo que en L. pe enne . Es e hecho se puede comp oba obse ando los índices HR calculados pa a la colección o al y pa a cada mé odo de mues eo (Tabla 21). En dicha abla se puede comp oba que el M6 es el que más di e sidad conse a (8 a iables pa a L. mul i lo um y 6 a iables pa a L. pe enne ). Es de des aca que en L. mul i lo um el segundo mé odo más conse a i o ue el M2 con 2 a iables, y en L. pe enne el segundo mé odo más conse a i o ue el M5 con 4 a iables. Ambos mé odos es án basados en el índice de di e sidad de Shannon-Wea e , po lo an o es a es a egia pod ía se enida en cuen a como al e na i a al M6 . Figu a 10. Cu a de con ibución ela i a (CRi) acumulada de las accesiones a la a ianza o al de la nube de pun os en el análisis de componen es p incipales en las colecciones de L. pe enne y L. mul i lo um 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% 0% 20% 40% 60% 80% 100% Tamaño ela i o de la co e collec ion % %acumulado L. mul i lo um L. p e enne 102 Tabla 21. Índices de di e sidad de Shannon-Wea e pa a las colecciones nuclea es c eadas en cada mé odo y en las colecciones de pa ida (CT). En neg i a se esal an los alo es máximos pa a cada mé odo. La desc ipción de a iables se especi ica en la Tabla 4 del Capí ulo I. Lolium mul i lo um METODO es c p c e c ahb lhb ain alp en hc MEDIA HR (%) CT 3,081 2,193 2,234 2,131 2,918 2,354 4,071 3,604 2,221 2,240 2,705 100,00% M1 2,823 2,168 2,186 2,050 2,820 2,254 3,939 3,426 2,192 2,210 2,607 96,38% M2 3,069 2,206 2,255 2,059 3,082 2,413 4,141 3,285 2,166 2,287 2,696 99,69% M3 2,922 2,168 2,199 2,092 2,827 2,219 3,928 3,394 2,229 2,240 2,622 96,94% M4 2,898 2,184 2,186 1,946 2,818 2,188 3,758 3,406 2,255 2,269 2,591 95,80% M5 2,984 2,171 2,212 2,092 2,963 2,237 4,074 3,425 2,202 2,277 2,664 98,49% M6 2,664 2,239 2,286 2,269 3,293 2,552 3,916 3,662 2,214 2,296 2,739 101,28% Lolium pe enne METODO es c p c e c i ahb lhb ain alp en hc MEDIA HR (%) CT 2,289 2,171 2,109 2,199 1,997 3,743 2,547 4,133 2,131 1,947 2,527 100,00% M1 2,189 2,142 2,078 2,171 1,919 3,599 2,495 4,030 2,100 1,891 2,462 97,43% M2 2,249 2,165 2,166 2,212 2,327 3,913 2,393 4,086 2,168 1,979 2,566 101,56% M3 2,165 2,154 2,088 2,180 1,913 3,601 2,479 4,034 2,100 1,921 2,463 97,50% M4 2,259 2,210 2,003 2,192 1,697 3,442 2,521 4,128 2,118 1,867 2,444 96,72% M5 2,015 2,135 2,151 2,182 2,214 3,865 2,444 4,082 2,209 2,098 2,540 100,51% M6 2,420 2,239 2,223 2,264 1,859 3,478 2,566 4,159 2,119 1,896 2,522 99,83% La di e sidad media calculada en la colección de L. mul i lo um (2,705), es mayo que en L. pe enne (2,527). El M4 es el que menos di e sidad ela i a e iene en ambas colecciones (95 y 96%), seguido de los mé odos de selección al aza (96 y 97% en L. mul i lo um , y 97% en L. pe enne ). Las mejo es e enciones se p oducen en los M2 , M5 y M6 . En dichos mé odos se alcanzan e enciones supe io es al 100%, ( M6 en L. mul i lo um y M2 , M5 en L. pe enne ), ello es debido a la selección de en adas con una dis ibución de ecuencias menos concen ada en alo es p óximos a la media, debido a es o la di e sidad ela i a es incluso mayo que en la colección de pa ida. Es e hecho, obse ado po algunos au o es (Bal ou ie e al ., 1998a, 1999; Polignano e al ., 2001), es debido a una nue a o ganización en las ecuencias de clase po la eliminación de las epe iciones p oducidas po geno ipos semejan es. Según F ankel y B own (1984), la colección nuclea debe conse a la máxima di e sidad con un mínimo de edundancias y el meno amaño posible. Consecuen emen e no debe se una copia educida de la colección o al, sino con ene una nue a o ganización que disminuya las edundancias (Hamon e al ., 1998). La con ibución ela i a a la ine cia de la nube de pun os se ep esen a en la Figu a 11, indi idualmen e pa a Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Resul ados y discusión 103 cada población en o den dec ecien e. En ambas colecciones se obse a un pun o de in lexión en la cu a a pa i del cual dicha con ibución ela i a comienza a decae no ablemen e. Balak ishnan e al ., (2000), u iliza on es e pun o como e e encia pa a de e mina el amaño ideal de una colección nuclea en caña de azúca . Dicho pun o coincide con los amaños de mues a seleccionados pa a ambas colecciones en es e abajo. Figu a 11. Con ibución indi idual ela i a (CRi) de cada accesión a la a ianza o al de la nube de pun os en el análisis de componen es p incipales en aig ás inglés (11a) y aig ás i aliano (11b). El pun o señalado delimi a las poblaciones seleccionadas pa a la colección nuclea . Finalmen e se mues a en la Tabla 22 los alo es medios de las a iables ag onómicas y luga de p ocedencia de las poblaciones seleccionadas po el M6 . L. pe enne (11a) 0,0% 0,5% 1,0% 1,5% 2,0% 2,5% 3,0% 3,5% 4,0% 4,5% 5,0% 0 1020304050607080 Núme o de en ada en el ACP C i indi idual L. mul i lo um (11b) 0,0% 2,0% 4,0% 6,0% 8,0% 10,0% 12,0% 14,0% 0 10203040 Núme o de en ada en el ACP C i indi idual 104 En la Figu a 12 se mues a la dis ibución geog á ica de las accesiones seleccionadas en las dos colecciones nuclea es. Tabla 22. Valo es medios de las a iables ag onómicas en las poblaciones seleccionadas po el M6 en L. pe enne y L. mul i lo um . Se mues an los alo es medios de las colecciones de pa ida. Lolium pe enn e P o incia COD es c i c p c e ahb lhb ain alp en hc ASTURIAS 139 120,51 16,22 42,63 135,06 6,58 18,81 100,63 91,53 3,34 2,46 GRANADA 168 132,63 11,40 29,92 166,14 4,70 14,26 84,76 74,14 3,63 1,86 LA CORUNA 134 147,82 23,57 81,23 315,96 6,11 13,88 115,23 84,19 4,09 2,57 LA CORUNA 102 151,30 25,39 56,29 167,87 4,30 11,64 104,78 74,62 4,14 2,53 LEON 176 132,49 4,56 13,07 54,30 4,50 12,75 72,74 65,21 3,27 3,22 LUGO 104 134,18 13,35 38,35 156,48 6,35 19,48 92,85 99,37 2,55 2,33 MURCIA 182 137,99 9,80 24,48 77,96 4,55 12,81 76,48 65,27 2,38 2,40 PONTEVEDRA 128 144,79 29,64 69,27 196,86 5,36 16,27 123,00 87,71 4,26 3,00 PONTEVEDRA 98 147,83 31,19 68,28 216,99 5,20 13,84 155,61 82,61 4,59 2,72 Media 138,84 18,35 47,06 165,29 5,29 14,86 102,90 80,52 3,58 2,57 Colección o al 135,89 16,03 41,14 141,18 5,08 14,12 104,09 84,46 3,42 2,97 Lolium mul i lo um P o incia COD es c p c e c ahb lhb ain alp en hc LUGO 47 134,90 29,65 127,0 33,88 11,2 28,08 71,72 120,8 3,78 3,92 OVIEDO 90 136,90 7,11 50,80 5,05 5,72 14,02 72,02 64,78 3,79 1,81 PONTEVEDRA 50 74,63 7,80 18,99 0,00 7,02 11,81 37,64 55,38 2,79 3,58 STA. CRUZ 86 111,65 9,91 30,42 0,00 8,03 14,39 47,71 77,30 2,11 1,91 SANTANDER 37 133,78 44,81 161,9 55,03 8,57 23,22 128,22 106,4 3,65 2,92 SANTANDER 38 134,03 36,65 137,6 60,69 8,58 22,04 83,33 114,9 3,78 3,74 Media 120,98 22,66 87,82 25,78 8,19 18,93 73,44 89,93 3,32 2,98 Colección o al 112,38 19,30 67,15 17,68 7,97 17,21 71,91 84,37 3,31 3,02 Capí ulo II – Elabo ación de colecciones nuclea es – Resul ados y discusión 105 Figu a 12. Esquema de la dis ibución geog á ica de las accesiones seleccionadas pa a las colecciones nuclea es en L. pe enne y L. mul i lo um . 182 168 176 90 47 139 102 134 50 98 38 37 104 128 86 ISLAS CANARIAS ESPECIE Lolium mul i lo um (6) Lolium pe enne (9) 112 1. INTRODUCCIÓN Los p incipales obje i os de los ecu sos gené icos y las colecciones de ge moplasma son la mejo a gené ica y la conse ación de impo an es, pe o a menudo desconocidas ca ac e ís icas pa a el u u o (Guy e al. , 1989). Sin emba go, el man enimien o de un ele ado núme o de accesiones en ales colecciones plan ea di icul ades de manejo y conse ación, pudiendo se un obs áculo pa a su e aluación y u ilización (Holden, 1984). La mul iplicación de las accesiones indi iduales en colecciones g andes es, a menudo, cos osa y esul a iable sólo con un núme o limi ado de las mismas. De los di e sos pasos implicados en la ope ación de conse ación ( ecolección, mul iplicación y almacenamien o), el ac o más limi an e es siemp e la mul iplicación. En especies au ógamas es ela i amen e ácil el man enimien o de las accesiones indi iduales. En especies alógamas anemó ilas la necesidad de aislamien o es inge el núme o de accesiones que pueden se mul iplicadas en el mismo á ea, mien as que en especies en omó ilas es p ác icamen e imposible el con ol es ic o de la polinización (Guy e al. , 1989). La mul iplicación es uno de los p ocesos más c uciales en el man enimien o de los bancos de ge moplasma, y es un paso en el que las accesiones son pa icula men e ulne ables a la pé dida de di e sidad (B eese, 1989). Pa a e i a los p oblemas inhe en es a la egene ación de en adas en colecciones g andes se ha p opues o que un núme o limi ado y ep esen a i o de accesiones, elegidas po p esen a una al a di e sidad gené ica, pueda se man enido y u ilizado como mues a de la colección comple a. Es e g upo se ía denominado co e collec ion (colección nuclea ), concep o in oducido po F ankel (1984), y ya discu ido en el Capí ulo II de és e abajo). Sin emba go, si el p opósi o es u iliza los ecu sos gené icos di ec amen e en mejo a, el uso de poblaciones he e ogéneas puede se una al e na i a pa a p opo ciona ge moplasma adap ado a los mejo ado es gené icos. Es e abajo, a a de compa a la es a egia de mul iplica indi idualmen e las poblaciones seleccionadas den o de g upos ag onómicamen e simila es, con la Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 113 es a egia de eag upa dichas poblaciones po mul iplicación en panmixia, con el in de cons i ui unos pools con ca ac e ís icas ag onómicas de inidas y ácilmen e u ilizables en un p og ama de selección. Los obje i os de es e abajo ue on: 1) La c eación de dos poblaciones expe imen ales median e c uce en panmixia de dos g upos de accesiones ag onómicamen e simila es. 2) La mul iplicación en panmixia de las accesiones o iginales. 3) La compa ación en e las poblaciones o iginales, las mul iplicadas y las poblaciones expe imen ales median e dos años de ca ac e ización ag onómica y median e es udios isoenzimá icos. 114 Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 115 2. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1. Es udio ag onómico Con el in de e alua posibles cambios en la di e sidad gené ica median e ma cado es ag omo ológicos e isoenzimá icos en a iedades locales de aig ás i aliano anual, en un p ime ciclo de mul iplicación se escogie on cinco poblaciones pe enecien es a dos clases ag onómicas c eadas median e la aplicación de mé odos mul i a iables a una ca ac e ización ag omo ológica ealizada po Oli ei a e al ., (1997b). Se selecciona on las poblaciones 59 (Lua ca), 61 (P a ia) y 62 (P endes) pe enecien es al G upo ag onómico 1 , con una echa de espigado in e media ( inales de ma zo a p incipios de ab il, y ambién se selecciona on las poblaciones 55 (O denes) y 66 (Pad ón), pe enecen al G upo ag onómico 2 , con una echa de espigado a dío (segunda quincena de ab il). Con obje o de ob ene semilla mul iplicada en el o oño de 1999, las cinco poblaciones o iginales se semb a on en condiciones de in e nade o y se ansplan a on al campo en el in ie no de 1998 u ilizando 100 plan as po geno ipo. Se usa on mallas de plás ico neg o pa a e i a malas hie bas (Figu a 13a). Debido a que el aig ás i aliano es una especie alógama y con polinización anemó ila, las pa celas de mul iplicación se aisla on median e un cul i o de igo au óc ono gallego de caña al a, sepa ándolas 20 me os de cualquie uen e de polen con aminan e (o a pa cela de mul iplicación, cul i o, población na u al, e c.). Al inaliza el pe iodo de lo ación, las espigas se ce a on en bolsas de papel pa a ecoge la semilla esul an e (Figu a 13b), y pos e io men e se gua dó en cáma as de conse ación con condiciones con oladas de humedad y empe a u a. La semilla así ecolec ada se e ique ó con los nomb es de las poblaciones o iginales seguidos del su ijo “_M”, (Lua ca_M, P a ia_M, P endes_M, O denes_M y Pad ón_M). Den o de cada población, hay a menudo g andes di e encias en el endimien o en semilla po plan a, po lo que se suele ecomenda ecoge igual can idad de semilla de cada 116 plan a pa a a a de e i a cambios gené icos y posibles pé didas de alelos adap a i os (B eese y Tyle , 1981). Es e mé odo equie e unas necesidades g andes de mano de ob a y debido a las limi aciones en ecu sos no siemp e es el más u ilizado. En gene al, la semilla se ecoge en conjun o en 90-100 plan as po población. De es a mane a, as la mul iplicación, la can idad de semilla disponible po población a ía de 100 a 800 g amos. En nues o caso la semilla se ecogió indi idualmen e en odas las plan as de cada población, ealizándose una mezcla equilib ada, y pesando pos e io men e la misma can idad de semilla po cada plan a pa a que cada geno ipo con ibuye a con igual peso a la mezcla o al. Figu a 13. De alle de los campos de mul iplicación es ablecidos en el CIAM. Supe io (13a): labo es de p epa ación del e eno. In e io (13b): embolsado de las plan as indi iduales pa a la ob ención de semilla una ez madu ada és a. Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 117 Al mismo iempo se es ablecie on dos campos más de mul iplicación aislados pa a c ea dos poblaciones expe imen ales median e c uzamien o de las es poblaciones del G upo ag onómico 1 (34 plan as po población) y las dos poblaciones del G upo ag onómico 2 (51 plan as po población). La semilla esul an e se ecolec ó indi idualmen e en cada una de las plan as mad e y se e ec uó una mezcla equilib ada, pa a c ea los dos pools gené icos, denominados “ Pool 1 ” (mezcla de las poblaciones del G upo ag onómico 1 ) y “ Pool 2 ” (mezcla de las poblaciones del G upo ag onómico 2 ). De es a o ma a inales del año 1999 se ob u ie on un o al de 12 poblaciones pa a el es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica (Tabla 23). Tabla 23. Poblaciones es udiadas en el ensayo de conse ación de di e sidad gené ica median e la c eación de poblaciones expe imen ales o “ pools ” gené icos. COD POBLACIÓN TIPO GRUPO Poblaciones o iginales 55 ORDENES Población o iginal 2 59 LUARCA Población o iginal 1 61 PRAVIA1 Población o iginal 1 62 PRENDES Población o iginal 1 66 PADRON1 Población o iginal 2 Poblaciones mul iplicadas 218 ORDENES_M Población mul iplicada 2 219 LUARCA_M Población mul iplicada 1 220 PRAVIA1_M Población mul iplicada 1 221 PRENDES_M Población mul iplicada 1 222 PADRON1_M Población mul iplicada 2 Pools gené icos 216 POOL1 medio Población expe imen al 1 217 POOL2 a dío Población expe imen al 2 Du an e el in ie no de 1999-00 se semb a on bajo condiciones de in e nade o las cinco poblaciones o iginales, las cinco poblaciones mul iplicadas, los dos pools y la a iedad ‘Vi esse’ como es igo. Las plan as se ansplan a on al campo a los dos meses y se es ableció un diseño en bloques comple os al aza con cinco epe iciones u ilizando 10 plan as po cada población y bloque. De es a mane a, se ins ala on 10 plan as x 5 epe iciones x 12 poblaciones (5 o iginales + 5 mul iplicadas + 2 118 poblaciones expe imen ales) = 600 plan as en un campo de plan as aisladas, más el es igo ‘Vi esse’ con cinco epe iciones. Las plan as indi iduales se ansplan a on a una dis ancia de 0,5 m en e líneas y a 0,5 m en e plan as (Figu a 14). Como abonado de ondo se aplicó 8:15:15 (1000 kg de abono/ha). Debido al ca ác e indi idual de las ano aciones, el con ol de malas hie bas u o que se muy exhaus i o pa a ene una mayo p ecisión en las ano aciones. Se p ac ica on a ias aplicaciones de he bicida, u ilizando G amoxone al 2% y cub iendo las plan as con en ases pa a p o ege las de la posible de i a del he bicida (Figu a 1 del Capí ulo I). El ensayo de campo se ealizó en el Cen o de In es igaciones Ag a ias de Mabegondo (43º 15’ N, 8º 18’ O) en A Co uña, a 100 m de al i ud y ce cano a la cos a. Debido al ca ác e anual del aig ás i aliano, el ensayo se epi ió comple amen e al año siguien e (2001), ansplan ado de nue o las 12 poblaciones. Du an e los años 2000-2001 se obse a on los ca ac e es ag onómicos de allados en la Tabla 4 del Capí ulo I ( es , ain , alp , hc , en , lhb , ahb ) y el c ecimien o o al anual ( c : g de ma e ia seca). Pos e io men e a cada ano ación de c ecimien o se e ec uó un co e con mo osegado a a unos 5 cm del suelo. En la a iable de c ecimien o ( c ) se u ilizó una escala cuali a i a de 1 a 5 y en la echa de espigado ( es ) se u ilizó una escala cuali a i a de 1 a 7. Pos e io men e a cada ano ación se co a on 30 plan as (seis de cada alo de la escala) y se pesó su ma e ia seca. Con es os da os se calculó una ecuación de eg esión con obje o de sabe el alo cuan i a i o en g de ma e ia seca pa a cada uno de los alo es de la escala. Se aplicó la misma écnica es adís ica pa a la a iable es pe o con ando el núme o de espigas en cada plan a. Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 119 Figu a 14. De alle de los campos de ca ac e ización indi idual de las 12 poblaciones y la a iedad ‘Vi esse’ es ablecidos en el CIAM. 2.2. Análisis es adís icos Los da os medios de la e aluación ag onómica se analiza on median e mé odos es adís icos mul i a ian es (análisis de componen es p incipales, clasi icación ascenden e je á quica) pa a iden i ica g upos de alo ag onómico simila . El e ec o mul iplicación se e aluó median e un análisis de a ianza a un ac o ( ac o mul iplicación con dos a amien os: sin mul iplicación y con mul iplicación), y se aplicó de mane a independien e a los da os de cada año pa a cada a iable. El modelo de análisis de a ianza usado pa a los da os ob enidos en las plan as aisladas ue el siguien e: X ijk =  + b i + M j + (b*M) ij + ε ijk Donde: X ijk es el alo eno ípico,  es la media gene al, b i es el e ec o bloque, M j es el e ec o mul iplicación, (b*M) ij es la in e acción bloque x mul iplicación y ε ijk es el e o . El e ec o bloque se conside ó alea o io. Se e aluó la signi icación del ac o 120 mul iplicación espec o a la in e acción bloque x mul iplicación. Las compa aciones e ec uadas ue on en e: a) Las cinco poblaciones o iginales en e a las cinco mul iplicadas (Tabla 28) b) Las poblaciones o iginales con sus espec i os pools (Tablas 29 y 30). Los alo es medios de las a iables ue on seleccionados pa a e ec ua un es de Wilcoxon, que calcula la di e encia en e dos mues as median e el p ocedimien o uni a ia e del paque e in o má ico SAS (SAS Ins i u e, 1999). En es e es se compa a on: a) Las poblaciones o iginales con sus espec i os pools (Tablas 31 y 32). b) Las cinco poblaciones o iginales indi idualmen e en e a las cinco mul iplicadas (Tablas 31 y 32). Con las a iables cuali a i as hc y en se e ec uó un es de K uskal-Wallis (K uskal y Wallis, 1952) pa a de ec a di e encias signi ica i as en las compa aciones an e io es. Todos los análisis es adís icos se e ec ua on con el paque e es adís ico SAS (SAS Ins i u e, 1999). 2.3. Análisis de isoenzimas En gené ica de poblaciones es esencial un es udio de las causas y los e ec os de la a iación gené ica den o y en e las poblaciones, y a pesa de que ya han sido ampliamen e supe ados po o os en oques más in o ma i os basados en el ADN (como la secuenciación di ec a del ADN, polimo ismos de un solo nucleó ido y mic osa éli es), aún es án en e los sis emas de ma cado es más ápidos y más ba a os de desa olla , y son una excelen e elección de pa a p oyec os que sólo necesi an iden i ica bajos ni eles de a iación gené ica (Medina e al ., 2005, Rod íguez e al ., 2009). Vi k e al ., (2000) compa a on expe imen almen e la Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 121 capacidad de disc iminación de cua o es a egias de iden i icación en a iedades de a oz (isoenzimas, AFLP, mic osa éli es e ISSR) conside ando un núme o simila de ma cado es pa a cada una. Ellos epo a on que a excepción de ISSR, las demás écnicas clasi icaban bien las a iedades de a oz, siendo las isoenzimas y los AFLP los más e icien es. Los ma cado es AFLP ienen un al o pode de disc iminación debido a que gene an un conside able núme o de bandas que pueden analiza se en un único gel, sin emba go, son écnicas que incluyen mayo núme o de e apas y la exigencia de un al o ni el de pu eza del ADN que implica un mayo consumo de iempo y mayo es cos os ope a i os (Fe ei a y G a apaglia 1998; Lee y Hen y, 2001). Pa a el es udio de elec o o esis de isoenzimas se u iliza on en e 75 y 150 plan as de cada una de las 10 poblaciones (cinco o iginales y cinco mul iplicadas) y de cada uno de los dos pools gené icos. Se semb a on las 12 poblaciones en bandejas de al éolos y se man u ie on en condiciones de in e nade o. Las plan as se analiza on cuando enían en e es y cua o hojas bien o madas. Se u iliza on las écnicas es ánda de elec o o esis en gel de almidón según Haywa d y McAdam (1977), Os e gaa d e al ., (1985), Oli ei a y Cha me (1988a, 1988b), G eneche e al ., (1991) y Haywa d e al ., (1995). Se u ilizó un ampón his idina/ci a o lo que pe mi ió es udia cinco sis emas enzimá icos: os ogluco-isome asa (PGI-2, E.C. 5.3.1.9.), os ogluco-mu asa (PGM-1, E.C. 2.7.5.1.), os a asa ácida (ACP-1, E.C. 3.1.3.2), shikima o deshid ogenasa (SDH-1, E.C. 1.1.1.25) y pe oxidasa (PEX-1, E.C. 1.11.1.7). La nomencla u a alélica y los p ocedimien os isoenzimá icos ue on los de Haywa d e al ., (1995). En la Tabla 24 se mues an los alelos es udiados pa a cada locus . Las hojas co adas se i u a on en ío en e 0º y 2ºC. Como solución de ex acción se usó T is-HCl 0,7M a pH 7,2 y me cap oe hanol al 1%. El ex ac o esul an e se abso bió con i as de papel Wha man nº 3, y és as se dispusie on en sopo es de ipo Bio-Rad que con enían el gel de almidón. Como ma cado gené ico se usa on 2 líneas de Lolium emulen um , ya que es una especie homocigo a pa a odos los sis emas (líneas 1 y 15, de 30 en o al po gel). Como ampón de mig ación se u ilizó his idina-ci a o. Los geles, p epa ados con 30 líneas de mig ación, se 128 Figu a 15. Diag ama de dispe sión de las dos p ime as componen es p incipales del ACP. En colo es se ep esen an los dos clús e de la clasi icación ascenden e je á quica, los cuales coinciden con la clasi icación ag onómica inicial. Se esal an con un cí culo las dos poblaciones expe imen ales, que ocupan una posición in e media en e ambas nubes de pun os. El diag ama de la clasi icación ascenden e je á quica explicó un 67,05% de la a ianza. En la Figu a 16 se puede e la cla a sepa ación en e los dos g upos ag onómicos. Las poblaciones expe imen ales ocupan posiciones in e medias en ambos g upos Fac o 1 2,00 1,000,00-1,00-2,00 Fac o 2 3,00 2,00 1,00 0,00 -1,00 -2,00 221 P endes_M 220 P a ia1_M 219 Lua ca_M 216 Pool1 medio 62 P endes 61 P a ia1 59 Lua ca 222 Pad on1_M 218 O denes_M 217 Pool2 a dío 66 Pad ón 55 O denes 2 1 Clus e Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 129 Figu a 16. Diag ama de la clasi icación ascenden e je á quica basada en las componen es del análisis de componen es p incipales. El análisis de a ianza de las cinco poblaciones o iginales en e a las cinco mul iplicadas mos ó di e encias signi ica i as solamen e pa a la a iable es du an e el segundo año de e aluación (Tabla 28). El es o de a iables no mos a on di e encias. Las dos a iables cuali a i as en y hc ue on signi ica i as du an e los dos años de e aluación. Compa ando las poblaciones del G upo ag onómico 1 con su espec i o pool, las a iables es y alp ue on signi ica i as, el e ec o bloque ue signi ica i o en casi odas las a iables (Tabla 29). Es e e ec o ue menos acusado en el G upo ag onómico 2 , en es e g upo únicamen e se mos a on di e encias en las a iables es y ain du an e el segundo año (Tabla 30). En ambos g upos el es de K uskal Wallis ue signi ica i o pa a las dos a iables cuali a i as. 130 Tabla 28. Cuad ados medios del análisis de a ianza pa a las a iables ag omo ológicas compa ando las cinco poblaciones o iginales en e a las cinco mul iplicadas. FV : uen e de a iación; GL : g ados de libe ad; *, ** : signi ica i o al ni el 5, y 1% espec i amen e. El es o de a iables se explican en la Tabla 4 del Capí ulo I. AÑO 2000– COMPARACIÓN DE TODAS LAS POBLACIONES FV BLQ MULT BLQ*MULT ERROR GL 4 1 4 (GL) es 397,57 442,52 79,12 210,96 (412) c 3035,93 255,46 1025,03 1420,62 (421) alp 1540,79 5078,31 856,51 596,43 (402) ain 937,11 1488,85 2990,03 1995,71 (404) lhb 150,05 97,91 22,02 40,39 (397) ahb 63,64 76,44 74,05 ** 10,27 (397) Cuali a i as X2 en 67,85 ** (9) hc 57,46 ** (9) AÑO 2001 – COMPARACIÓN DE TODAS LAS POBLACIONES FV BLQ MULT BLQ*MULT ERROR GL 4 1 4 (GL) es 273,94 10666,52 ** 17,83 257,59 (463) c 2970,82 124,98 7445,87 1870,29 (460) alp 727,77 89,41 472,01 375,01 (457) ain 2919,23 12955,41 5530,96 2516,73 (456) lhb 75,70 ** 22,68 26,85 19,11 (440) ahb 2,91 3,92 3,73 2,38 (440) Cuali a i as X2 en 48,23 ** (9) hc 87,04 ** (9) Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 131 Tabla 29. Cuad ados medios del análisis de a ianza pa a las a iables ag omo ológicas compa ando las es poblaciones o iginales del G upo ag onómico 1 en e a la población expe imen al. FV : uen e de a iación; GL : g ados de libe ad; *, ** : signi ica i o al ni el 5, y 1% espec i amen e. El es o de a iables se explican en la Tabla 4 del Capí ulo I. AÑO 2000 – GRUPO AGRONÓMICO 1 FV BLQ MULT BLQ*MULT ERROR GL 4 1 4 (GL) es 93,26 ** 1193,11 * 91,68 ** 13,55 (143) c 977,02** 3935,60 482,36 198,43 (145) alp 115,83 ** 12391,71 ** 108,55 * 32,28 (133) ain 908,62 51,17 905,09 520,55 (138) lhb 28,31 ** 1,35 31,02 ** 3,54 (138) ahb 2,83 ** 1,82 2,84 ** 0,53 (138) Cuali a i as X2 en 75,52 ** (3) hc 60,49 ** (3) AÑO 2001 - GRUPO AGRONÓMICO 1 FV BLQ MULT BLQ*MULT ERROR GL 4 1 4 (GL) es 53,47 792,86 * 48,08 76,65 (184) c 1213,37 * 146,21 667,84 275,04 (184) alp 426,521 ** 147,08 467,69 ** 101,74 (184) ain 4070,87 * 5109,68 1904,76 1497,36 (184) lhb 48,47 ** 46,36 38,56 ** 9,61 (184) ahb 2,58 1,09 3,92 1,56 (184) Cuali a i as X2 en 9,23 * (3) hc 16,92 ** (3) 132 Tabla 30. Cuad ados medios del análisis de a ianza pa a las a iables ag omo ológicas compa ando las dos poblaciones o iginales del G upo ag onómico 2 en e a la población expe imen al. FV : uen e de a iación; GL : g ados de libe ad; *, ** : signi ica i o al ni el 5, y 1% espec i amen e. El es o de a iables se explican en la Tabla 4 del Capí ulo I. AÑO 2000 - GRUPO AGRONÓMICO 2 FV BLQ MULT BLQ*MULT ERROR GL 4 1 4 (GL) es 130,62 25,60 92,72 116,95 (115) c 3306,99 729,93 1152,01 1682,10 (116) alp 603,01 10,71 188,41 373,09 (114) ain 1863,15 641,61 3142,49 2375,59 (108) lhb 80,27 12,79 13,48 52,56 (111) ahb 6,07 1,39 2,44 4,97 (111) Cuali a i as X2 en 3,49 (2) hc 1,05 (2) AÑO 2001 - GRUPO AGRONÓMICO 2 FV BLQ MULT BLQ*MULT ERROR GL 4 1 4 (GL) es 434,55 ** 3041,19 ** 73,87 157,64 (136) c 1347,70 4693,36 3797,99 1748,47 (134) alp 507,61 1683,35 406,18 243,34 (133) ain 1766,28 17528,18 ** 128,41 2602,78 (131) lhb 41,98 153,24 62,10 ** 17,71 (121) ahb 5,65 * 18,81 5,22 2,22 (121) Cuali a i as X2 en 21,29 ** (2) hc 26,34 ** (2) Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 133 El es de Wilcoxon no mos ó di e encias en ninguna de las compa aciones del G upo ag onómico 1 (Tabla 31). Sin emba go en el G upo ag onómico 2 se mos a on di e encias signi ica i as en e las dos poblaciones o iginales y sus espec i as mul iplicadas, pe o no en e su espec i o pool o población expe imen al (Tabla 32). Tabla 31. Tes de Wilcoxon pa a las poblaciones del G upo ag onómico 1 . *, ** : Signi ica i o al ni el 5, y 1% espec i amen e. Tes de Wilcoxon – G upo ag onómico 1 O iginales e sus Pool1 O iginales e sus Mul iplicadas Lua ca e sus Pool 1 Lua ca e sus Lua ca_M Signed Rank: -13 P >= |S| 0.0781 Signed Rank: 5 P >= |S| 0.5469 P a ia e sus Pool 1 P a ia e sus P a ia_M Signed Rank: -6 P >= |S| 0.3750 Signed Rank: 6 P >= |S| 0.4609 P endes e sus Pool 1 P endes e sus P endes_M Signed Rank: -8 P >= |S| 0.3125 Signed Rank: 3 P >= |S| 0.7422 Tabla 32. Tes de Wilcoxon pa a las poblaciones del G upo ag onómico 2 . *, ** : Signi ica i o al ni el 5, y 1% espec i amen e. Tes de Wilcoxon – G upo ag onómico 2 O iginales e sus Pool2 O iginales e sus Mul iplicadas O denes e sus Pool 2 O denes e sus O denes _M Signed Rank: 9 P >= |S| 0.2500 Signed Rank: -18 P >= |S| 0.0078 ** Pad on e sus Pool 2 Pad on e sus Pad on _M Signed Rank: 12 P >= |S| 0.1094 Signed Rank: 16 P >= |S| 0.0234 * 134 3.2. Resul ados del es udio isoenzimá ico Cada uno de los cinco sis emas enzimá icos e eló un locus polimó ico: PGI-2, PGM-1, ACP-1, PRX-1 y SDH-1. El pa ón Lolium emulen um esul ó monomó ico y homocigó ico con los siguien es alelos ijados: PGI-2a, PGM-1a, ACP-1d, PRX-1d y SDH-1b. Las ecuencias alélicas de las poblaciones mul iplicadas di i ie on signi ica i amen e de las ecuencias de las poblaciones o iginales en cua o de 15 loci polimó icos en las poblaciones del G upo ag onómico 1 y en cua o de 10 loci polimó icos en las poblaciones del G upo ag onómico 2 (Tablas 33 y 34). Se p odujo ambién la pé dida de los siguien es alelos a os ( ecuencia < 0,05), según la clasi icación de B own (1978): el alelo “a” del locus PGI-2 de la población Pad ón, el alelo “c*” del locus PGI-2 p esen e en la población P a ia y el alelo “d” del locus SDH-1 p esen e en la población Lua ca y que desapa eció al mul iplica la. En la Figu a 17 se mues an ejemplos de algunas o og a ías digi ales omadas de los sis emas enzimá icos es udiados pa a algunas poblaciones. Las calles núme o 15 y 30 siemp e co esponden a la especie Lolium emulen um u ilizada como ma cado po se homocigo o pa a odos los sis emas. Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 135 Figu a 17. Fo og a ías digi ales de los sis emas enzimá icos es udiados SDH-1 PGI-2 PGM-1 PEX-1 ACP-1 1 15 30 1 15 30 136 Tabla 33. F ecuencias alélicas en cinco loci , pa a las poblaciones del G upo ag onómico 1 (Lua ca, P a ia, P endes) y las mismas poblaciones mul iplicadas (Lua ca_M, P a ia_M y P endes_M). El alo 2 compa a la p opo ción de alelos en las poblaciones o iginales con los de las poblaciones mul iplicadas. *, **, ***: signi ica i o al ni el 5, 1 y 0,1% espec i amen e; N: Núme o de da os. Poblaciones Lua ca Lua ca_M P a ia P a ia_M P endes P endes_M Locus Alelo N N N N N N PGI-2 98 135 111 106 103 109 A 0,000 0,000 0,005 0,005 0,000 0,000 B 0,041 0,026 0,068 0,057 0,024 0,032 C 0,098 0,085 0,072 0,094 0,068 0,087 D 0,827 0,833 0,779 0,802 0,830 0,849 E 0,036 0,056 0,059 0,033 0,078 0,032 A+ 0,000 0,000 0,009 0,009 0,000 0,000 C* 0,000 0,000 0,009 0,000 0,000 0,000 2 7,83 4,44 3,87 PGM-1 99 139 111 105 103 86 A 0,778 0,824 0,752 0,619 0,782 0,756 B 0,222 0,176 0,230 0,333 0,218 0,244 C 0,000 0,000 0,018 0,048 0,000 0,000 2 1,71 12,56** 0,33 ACP-1 99 133 114 106 102 109 A 0,081 0,004 0,039 0,024 0,078 0,060 B 0,667 0,639 0,667 0,627 0,662 0,583 C 0,187 0,293 0,259 0,288 0,230 0,344 D 0,066 0,064 0,035 0,061 0,029 0,014 2 17,89** 3,25 8,49* PEX-1 100 102 113 96 100 113 A 0,060 0,034 0,080 0,083 0,100 0,062 B 0,555 0,500 0,345 0,427 0,570 0,434 C 0,385 0,466 0,527 0,484 0,325 0,491 D 0,000 0,000 0,049 0,005 0,005 0,013 2 3,44 6,00 16,34** SDH-1 96 109 78 78 96 84 A 0,036 0 ,060 0,045 0,077 0,083 0,113 B 0,760 0,821 0,821 0,788 0,703 0,673 C 0,193 0,128 0,119 0,128 0,214 0,214 D 0,010 0,000 0,006 0,006 0,000 0,000 2 4,67 1,93 1,02 Capí ulo III – Es udio de la conse ación de la di e sidad gené ica median e poblaciones expe imen ales 137 Tabla 34. F ecuencias alélicas en cinco loci , pa a las poblaciones del G upo ag onómico 2 (O denes y Pad ón) y la mismas poblaciones mul iplicadas (O denes_M y Pad ón_M). El alo 2 compa a la p opo ción de alelos en las poblaciones o iginales con los de las poblaciones mul iplicadas. *, **, ***: signi ica i o al ni el 5, 1 y 0,1% espec i amen e; N: núme o de da os. Poblaciones O denes O denes_M Pad ón Pad ón_M Locus Alelo N N N N PGI-2 140 140 142 143 a 0,014 0,061 0,039 0,000 b 0,157 0,186 0,190 0,147 c 0,211 0,179 0,127 0,059 d 0,593 0,543 0,609 0,738 e 0,021 0,021 0,032 0,052 a+ 0,000 0,000 0,004 0,003 c* 0,004 0,011 0,000 0,000 2 25,92** 12,31 PGM-1 145 153 142 119 a 0,810 0,876 0,796 0,702 b 0,190 0,124 0,204 0,298 2 4,25* 6,48* ACP-1 111 136 143 123 a 0,072 0,059 0,101 0,098 b 0,649 0,699 0,692 0,691 c 0,239 0,210 0,196 0,195 d 0,041 0,033 0,010 0,016 2 1,53 0,45 PRX-1 107 148 142 147 a 0,042 0,020 0,035 0,075 b 0,379 0,345 0,356 0,367 c 0,579 0,635 0,609 0,558 2 2,95 7,41* SDH-1 112 123 110 113 a 0,125 0,150 0,086 0,080 b 0,683 0,683 0,655 0,633 c 0,192 0,167 0,259 0,288 2 1,02 0,49 El núme o medio de alelos po locus , el po cen aje de loci polimó icos y las he e ocigosidades medias esul a on muy simila es en las di e en es poblaciones (Tabla 35). Las compa aciones en e las he e ocigosidades medias po locus , obse adas y espe adas asumiendo la dis ibución de Ha dy-Weinbe g (Nei, 1973) mos a on lige as di e encias a a o de las he e ocigosidades espe adas (e o es es ánda en e pa én esis). Po es e mo i o, puede habe un lige o dé ici de he e ocigo os en las poblaciones o iginales y mul iplicadas. 144 Re e encias 145 REFERENCIAS ABADIE, T.; MAGALHAES, J.R.; CORDEIRO, C.T.; PARENTONI, S.; DE ANDRADE, R., 1998. A classi ica ion o B azilian maize land aces. Plan Gene ic Resou ces Newsle e , 114, 43-44. ABADIE, T.; MAGALHAES, J.R.; PARENTONI, S.N.; CORDEIRO, C.; ANDRADE, R.V., 1999. The co e collec ion o maize ge mplasm o B azil. Plan Gene ic Resou ces Newsle e , 117, 55-56. ARBONES, E.; OLIVEIRA, J.A., 1995. Relaciones en e ca ac e ís icas ag onómicas y ac o es ecogeog á icos en poblaciones na u ales de aig ás inglés del No e de España. In es igación Ag a ia, P oducción y P o ección Vege ales , 10 (3), 325-340. BALAKRISHNAN, R.; NAIR, N.V.; SREENIVASAN, T.V., 2000. A me hod o es ablishing a co e collec ion o Saccha um o icina um L. ge mplasm based on quan i a i e-mo phological da a. Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 47 (1), 1-9. BALFOURIER, F.; CHARMET, G.; PROSPERI, J.M.; GOULARD, M.; MONESTIEZ, P., 1998a. Compa ison o di e en spa ial s a egies o sampling a co e collec ion o na u al popula ions o odde c ops. Gene ics, Selec ion, E olu ion , 30 (Suppl. 1), 215-235. BALFOURIER, F.; CHARMET, G.; RAVEL, C., 1994. Conse a ion o allelic mul iplici y and geno ypic equency by pooling wild popula ions o pe ennial yeg ass. He edi y , 73, 386-396. BALFOURIER, F.; CHARMET, G.; RAVEL, C., 1998b. Gene ic di e en ia ion wi hin and be ween na u al popula ions o pe ennial and anual yeg ass ( Lolium pe enne and L. igidum ). He edi y , 81, 100-110. BALFOURIER F.; OLIVEIRA J.A.; CHARMET G., ARBONES E., 1997. Fac o ial eg ession analysis o geno ype by en i onmen in e ac ion in yeg ass popula ions, using bo h isozyme and clima ic da a as co a ia es. Euphy ica , 98, 37-46. BALFOURIER, F.; PROSPERI, J.M.; CHARMET, G.; GOULARD, M.; MONESTIEZ, P., 1999. Using spa ial pa e ns o di e si y o de elop co e collec ions. In : Co e Collec ions o Today and Tomo ow, 37-48. R.C. Johnson; T. Hodgkin. IPGRI. (Eds.). Rome (I aly). BARRENO, E.; BRAMWELL, D.; CABEZUDO, B.; CARDONA, M.A; COSTA, M; FERNÁNDEZ CASAS, F.J.; FERNÁNDEZ-GALIANO, E.; FERNÁNDEZ PRIETO, J.A.; GÓMEZ CAMPO, C.; HERNÁNDEZ BERMEJO, E.; HEYWOOD, V.H.; IZCO, J.; LLORENS, L.; MOLERO MESA, J.; MONTSERRAT RECODER, P.; RIVAS- 146 MARTÍNEZ, S.; SÁENZ LAÍN, C.; SANTOS GUERRA, A.; VALDÉS CASTRILLÓN, B.; WILDPRET DE LA TORRE, W., 1984. Lis ado de plan as endémicas, a as o amenazadas de España. In o mación Ambien al , 3, 1-24. BASIGALUP, D.H.; BARNES, D.K.; STUCKER, R.E., 1995. De elopmen o a co e collec ion o pe ennial Medicago in oduc ions. C op Sci. , 35, 1163-1168. BEKELE, F.; BEKELE, I., 1996. A sampling o he phene ic di e si y o cacao in he in e na ional Cocoa Gene Bank o T inidad. C op Sci. , 36, 57-64. BERTÍN, O.D., 1988. Ca ac e ís icas ag onómicas de los p incipales g upos de cul i a es de es uca al a. Es ación Expe imen al Ag opecua ia Pe gamino. Ca pe a sob e o aje as y p oducción bo ina. In . Gene al nº 145. 3 p. BISHT, I.S.; MAHAJAN, R.K.; LOKNATHAN, T.R.; GAUTAM, P.L.; MATHUR, P.N.; HODGKIN, T., 1999. Assessmen o gene ic di e si y, s a i ica ion o ge mplasm accessions in di e si y g oups and sampling s a egies o s ablishing a co e collec ion o indian sesame ( Sesamum indicum L.). Plan Gene ic Resou ces Newsle e , 119, 35-46. BISHT, I.S.; MAHAJAN, R.K.; PATEL, D.P., 1998. The use o cha ac e isa ion da a o es ablish he Indian mungbean co e collec ion and assessmen o gene ic di e si y. Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 45, 127-133. BORRILL, M., 1976. Tempe a e G asses. In: E olu ion o C op Plan s. N.W.SIMMONS (Ed.), 137-142. Longman, London (UK). BOWMAN, K.O.; HUTCHESON, K.; ODUM, E.P.; SCHENTON, L.R., 1973. Commen s on he dis ibu ion o indices o di e si y. S a is ical Ecology , 3, 315-366. BREESE, E.L., 1973. Gene ic a chi ec u e and adap a ion in g asses wi h special e e ence o Lolium . In e na ional Mee ing on Quan i a i e Inhe i ance, Polymo phisms, Selec ion and En i onmen , 73-81. Uni e si y o Bologna, 1972. I alia. BREESE, E. L., 1989. Regene a ion and Mul iplica ion o Ge mplasm Resou ces in Seed Genebanks: he Scien i ic Backg ound. In e na ional Boa d o Plan Gene ic Resou ces, Rome (I aly). BREESE, E.L.; TYLER, B.F., 1981., Regene a ion o ge mplasm collec ions o o age g asses and legumes. In : Seed egene a ion in c oss-pollina ed species, 45- 67. E. Po ceddu, G. Jenquins, A.A. Bulkema (Eds.). Ro e dam (Holanda). BRESLOW, N. E., 1970. A gene alized K uskal-Wallis es o compa ing K samples subjec o unequal pa e n o censo ship. Biome ika , 57, 579-594. BRETTING, P.K.; WIDRLECHNER, M.P., 1995. Gene ic ma ke s and plan gene ic esou ces managemen . Plan B eed Re ., 31, 11-86. BROWN, A.H.D., 1978. Isozymes, plan popula ion gene ic s uc u e and gene ic conse a ion. Theo e ical and Applied Gene ics . 52, 145-157. BROWN, A.H.D., 1989a. Co e collec ions: a p ac ical app oach o gene ic esou ces managemen . Genome , 31, 818-824. Re e encias 147 BROWN, A.H.D., 1989b. The case o co e collec ion. In : The Use O Plan Gene ic Resou ces , 136-156. A.H.D. B own, O.H. F ankel, D.R. Ma shall, J.T.Williams. (Eds.). Camb idge Uni e si y P ess, Camb idge (UK). BROWN, A.H.D., 1995. The co e collec ion a he c oss oads. In : Co e Collec ions o plan Gene ic Resou ces , 3-19. T. Hodgkin, A.H.D. B own, T.J.L. Van Hin um, E. A. V. Mo ales (Eds.). John Wiley & Sons. Chiches e (UK). BROWN, A.H.D.; BRUBAKER, C.L.; GRACE, J.P., 1997. Regene a ion o ge mplasm samples: wild e sus cul i a ed species. C op Sci. , 37, 7-13. BROWN, A.H.D.; SPILLANE, C., 1999. Implemen ing co e collec ions – p inciples, p ocedu es, p og ess, p oblems and p omise. In : Co e Collec ions o Today and Tomo ow , 1-17. R.C. Johnson, T. Hodgkin (Eds.). IPGRI. Rome, (I aly). BROWN, A.H.D.; WEIR, B.S., 1983. Measu ing gene ic a iabili y in plan popula ions. In : Isozymes in Plan Gene ics and B eeding, Pa A, 219-238. A. Tanksley, T.J. O on (Eds.). Else ie , Ams e dam (Ne he lands). BUCKNER, R.C.; BURRUS, P.B.; BUSH, L.P., 1977. Regis a ion o Kenhy all escue. C op Sci. , 17, 672–673. BULINSKA-RADOMSKA, Z.; LESTER, R.N., 1986. In e gene ic ela ionships o Lolium , Fes uca and Vulpia (Poaceae) and hei phylogeny. Plan Sys . E ol. , 159, 217-227. BUTKUTE, B.L.; KONAREV, A.U., 1980. Inmunochemical s udy o Lolium in ela ion o he phylogeny o he genus. Bo . Zhu nal. , 65, 1453-1458. CASLER, M.D., 1995. Pa e ns o a ia ion in a collec ion o Pe ennial Ryeg ass accessions. C op Sci. , 35, 1169-1177. CEBOLLA, C.; RIVAS, M.A., 2003. Ca álogo del géne o Fes uca L. ( Poaceae ) en la Peninsula Ibe ica. Candollea , 58, 189-213. CHARMET, G.; BALFOURIER, F., 1994. Isozyme a ia ion and species ela ionships in he genus Lolium L. ( yeg asses, G aminaceae). Theo e ical and Applied Gene ics , 87, 641-649. CHARMET, G.; BALFOURIER, F.; RAVEL, C., 1993. Isozyme polymo phism and geog aphic di e en ia ion in a collec ion o F ench pe ennial yeg ass popula ions. Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 40, 77-89. CLARK, R.L.; SHANDS, H.L.; BRETTING, P.K.; EBERHART, S.A., 1997. Ge mplasm egene a ion: de elopmen s in popula ion gene ics and hei implica ions. Managing la ge di e se ge mplasm collec ions. C op Sci. , 37 (1), 1-6. CLAYTON, W.D.; RENVOICE, S.A., 1986. Gene a G aminum . G asses o he wo ld. Kew.Bull. Addi . Se ., 13. COMISIÓN EUROPEA, 1999. La si uación de la ag icul u a en la Unión Eu opea. In o me 1998. O icina de Publicaciones O iciales de las Comunidades Eu opeas, B uselas, Luxembu go, 535 pp. 148 CONSELLERÍA DO MEDIO RURAL, XUNTA DE GALICIA (Ed.), 2005. Anua io de Es adís ica Ag a ia. 243 pp. San iago de Compos ela (España). CORDEIRO, C.M.T.; MORALES, E.A.V.; FERREIRA, P.; ROCHA, D.M.S.; COSTA, I.R.S.; VALOIS, A.C.C.; SILVA. S., 1995. Towa ds a B azilian co e collec ion o cassa a. In : Co e collec ions o plan gene ic esou ces. T. Hodking, A.H.D. B own, T.J.L an Hin um, E.A.V. Mo ales, 155-167. John Wiley and sons, New Yo k (EE.UU.). COSTAL ANDRADE, L., GONZÁLEZ ARRÁEZ, E., OLIVEIRA PRENDES, J.A., 2005. Resul ados medios de la ca ac e ización ag onómica de g amíneas p a enses de la Co dille a Can áb ica. P oducciones ag oganade as. Ges ión e icien e y conse ación del medio na u al (Volumen II). XLV Reunión Cien í ica de la Sociedad Española pa a el Es udio de los Pas os (SEEP). Gijón (As u ias), 28 de mayo al 30 de junio 2005, 473-480. CROSSA, J.; DELACY, I.H.; TABA, S., 1995. The use o mul i a ia e me hods in de eloping a Co e Collec ion. In : Co e collec ions o plan gene ic esou ces. 77-89. T. Hodking, A.H.D. B own, T.J.L an Hin um, E.A.V. Mo ales, (Eds.). John Wiley and sons, New Yo k (EE.UU.). CUBERO SALMERÓN, J.I.; NADAL MOYANO, S.; MORENO YANGÜELA, M.T., 2006. Las Colecciones Ac uales. En : Recu sos Fi ogené icos. Minis e io de Ag icul u a Pesca y Alimen ación (Ed.). 143-154. Mad id (España). DAMANIA, A.B.; PECETTI, L.; QUALSET, C.O.; HUMEID, B.O., 1999. Di e si y and geog aphic dis ibu ion o adap i e ai s in T i icum u gidum L. (du um g oup), whea land aces om Tu key . Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 43, 409-422. DARBYSHIRE, S.J.; WARWICK, S.I., 1992. Phylogeny o No h Ame ican Fes uca ( Poaceae ) and ela ed gene a using chlo oplas DNA es ic ion si e a ia ion. Canadian Jou nal o Bo any , 70, 2415-2429. DE LA FUENTE, V.; ORTÚÑEZ E., 2000. Nue a especie de Fes uca L., sección Fes uca ( Poaceae ) en la Península Ibé ica. Laza oa , 21, 3-6. DÍAZ, N.; PIÑEIRO, J.: AYUSO, C., 1999. Valo ag onómico de a iedades come ciales de g amíneas p a enses. CIAM memo ia 1997. Conselle ía Ag icul u a, Gande ía e Polí ica Ag oalimen a ia, 49-60. Xun a De Galicia. San iago de Compos ela (España). DIWAN, N.; McINTOSH, M.S.; BAUCHAN, G.R., 1995. Me hods o de eloping a co e collec ion o annual Medicago species. Theo e ical and Applied Gene ics , 90, 755-761. DOEBLEY, J.F.; GOODMAN, M.M.; STUBER, C.W., 1985. Isozime a ia ion in he aces o maize o Mexico. Ame ican Jou nal o Bo any , 72, 629-39. DUMORTIER B.C.J., 1823. Obse a ions su les g amineès de la Flo e belgique. Tou nay. Re e encias 149 DWIVEDI, S.L.; UPADHYAYA, H D.; HEDGE, D.M., 2005. De eloping o co e collec ion using geog aphic in o ma ion and mo gological desc ip o s in sun lowe ( Ca hamus inc o ius L.). Gene ic Resou ces And C op E olu ion , 52, 821-830. ESQUINAS-ALCÁZAR, J.T., 1993. La di e sidad gené ica como ma e ial básico pa a el desa ollo ag ícola. En : La Ag icul u a del Siglo XX, 3-19. J.I. Cube o, M.T. Mo eno (Coo ds.). Mundip ensa, Mad id (España). F.A.O., 1995. Su ey o exis ing da a on ex si u collec ions o plan gene ic esou ces o ood and ag icul u e. CPGR 6/95/8 Annex o he Six h Session o he FAO Commission on Plan Gene ic Resou ces, 19-30 June 1995. Rome (I aly). F.A.O., 1996. The s a e o he wo ld’s plan gene ic esou ces o ood and ag icul u e. Backg ound documen a ion p epa ed o he In e na ional Technical Con e ence on Plan Gene ic Resou ces, Leipzig, Ge many, 17-23 June, 1996. FAO. Rome (I aly). FEARON, C.H.; HAYWARD, M.D.; LAWRENCE, M.J., 1983. Sel incompa ibili y in yeg ass. V. Gene ic con ol in diploid Lolium mul i lo um . He edi y , 50, 35-45. FEI, Y.J., 1999. A new species o he genus Lolium L. ( Poaceae ) om Hubei (China). Guihaia , 19, 205-206. FERREIRA, M.E.; GRATTAPAGLIA, D., 1998. In oducción al uso de ma cado es molecula es en el análisis gené ico. EMBRAPA–CENARGEN Documen o 20. EMBRAPA–CENARGEN, B asilia (B asil). FLETCHER L.R.; GARTHWAITE I.; TOWERS N.R., 1993. Ryeg ass s agge s in he absence o loli em B. P oceedings o he Second In e na ional Symposium on Ac emonium/G ass In e ac ions, Palme s on No h, New Zealand , 119-121. FOGGI B.; SIGNORINI M.A.; ROSSI G., 2003. The genus Fes uca in I aly. Bocconea , 16 (1), 55-64. FOJTÍK, A., 1994. Me hods o g ass imp o emen used a he plan b eeding s a ion Hladké Li o ice. Gene . Pol. , 35A, 25–31. FRANKEL, O.H., 1984. Gene ic pe spec i es in ge mplasm conse a ion. In : Gene ic Manipula ion: Impac on Man and Socie y, 161-170. W. A be , K. Llimensee, W.J. Peacock, P. S e linge (Eds.). Camb idge Uni e si y P ess. Camb idge (UK). FRANKEL, O.H.; BROWN, A.H.D., 1984. Cu en plan gene ic esou ces – A c i ical app aisal. In : Gene ics: New F on ie s, P oceedings o he 15 h In e na ional Cong ess o Gene ics, Vol 4, 3-13. Ox o d and IBH Publishing (Ed.). Ox o d (UK). FRANKEL, O.H.; BROWN, A.H.D.; BURDON, J.J., 1995. The Conse a ion o cul i a ed plan s. In : The Conse a ion o Plan Biodi e si y , 79-117. Camb idge Uni e si y P ess (Ed.). Camb idge (UK). 150 FURMAN, B.J.; QUALSET, C.O.; SKOVMAND, J.H.; CORKE, H.; WESENBERG, D., 1997. Cha ac e isa ion and analysis o No h Ame ican i icale gene ic esou ces. C op Sci. , 37, 1951-1959. GEPTS, P., 1998. Wha can molecula ma ke s ell us abou he p ocess o domes ica ion in common bean. In : The o igins o c op adap a ion. 198-209. A.B. Damania, J. Valkoun, G. Willcox, C.O. Qualse (Eds.). ICARDA Aleppo Sy ia (Sy ia). GRENECHE, M.; LALLEMAND, J.; MICHAUD, O., 1991. Compa ison o di e en enzyme loci as a means o dis inguishing yeg ass a ie ies by elec opho esis. Seed Science Technology , 19, 147-158. GRENIER, C.; BRAMEL-COX, P.J.; HAMON, S., 2000a. Assesmen o gene ic di e si y in h ee subse s cons i u ed om he ICRISAT so ghum collec ion using andom s non- andom sampling p ocedu es. A. Using mo pho-ag onomical and passpo da a. Theo e ical and Applied Gene ics , 101, 190-96. GRENIER, C.; DEU, M.; KRESOVICH, S.; BRAMEL-COX, P.J.; HAMON, S., 2000b. Assesmen o gene ic di e si y in h ee subse s cons i u ed om he ICRISAT so ghum collec ion using andom s non- andom sampling p ocedu es. B. Using molecula ma ke s . Theo e ical and Applied Gene ics , 101, 197-202. GUTIERREZ, I.; ROMERO, M I.; SONORA, X.; HOMET, J., 1997. A new subspecies o Fes uca b igan ina (Ma kg .-Dann.) Ma kg . Dann. Bo anical Jou nal o he Linnean Socie y , 123 (3), 249-256. GUY, P.; GHESQUIÈRE, M.; CHARMET, G.; PROSPERI, J. M. 1989. Pooling accessions: ad an ages and disad an ages. Repo o a Wo king G oup on Fo ages, ( hi d mee ing), 9-12 Janua y 1989. ECP/GR/IBPGR, Rome, 1989, 35-49. HACKEL, E. 1882. Monog a ía Fes uca um Eu opaea um . Be lin. HAMON, S.; DISSERT, S.; DEU, M.; HAMON, P.; SEGUIN, M.; GLASZMANN, J.C.; GRIVET, L.; CHANTEREAU, J.; CHEVALLIER, M.H.; FLORI, A.; LASHERMES, P.; LEGNATE, H.; NOIROT, M., 1998. E ec s o quan i a i e ans quali a i e p incipal componen sco e s a egies on he s uc u e o co ee, ubbe ee, ice and so ghum co e collec ions. Gene ics, Selec ion, E olu ion , 30 (suppl.I), 237-258. HAMON, S.; HODGKIN, T.; DUSSERT, S.; ANTHONY, F.; NOIROT, M., 1994. Co e collec ion: heo e ical and applied aspec s. In : P oceedings o he Gene ic Resou ces Sec ion Mee ing o Euca pia, 78-82. Clemon -Fe and (F ance). HAMON, S.; NOIROT, M.; ANTHONY, F., 1995. De eloping co e co e collec ion using he p incipal componen sco e s a egy wi h quan i a i e da a. In : Co e Collec ions o Plan Gene ic Resou ces, 173-196. T. Hodgkin, A.H.D. B own, T.J.L. Van Hin um, E.A.V. Mo ales (Eds.). John Wiley & Sons. Chiches e (UK). HARCH, B.D.; BRASFORD, K.E.; DELACY, I.H.; LAWRENCE, P.K.; CRUICKSHANK, A., 1995. Pa e ns o di e si y in a y acid composi ion in he Aus alian Re e encias 151 g oundnu ge mplasm collec ion. Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 42, 243-256 HAYWARD, M. D.; MCADAM, N. J., 1977. Isozyme polymo phism as a measu e o dis inc i eness and s abili y in cul i a s o Lolium pe enne . Z. P lanzenzuch , 79, 59-68. HAYWARD M.D.; DEGENNARS G.H.; BALFOURIER F.; EICKMEYER F.,1995. Isozyme p ocedu es o he cha ac e isa ion o ge mplasm, exempli ied by he collec ion o Lolium pe enne L. Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 42, 327-337. HOASHI, M.; BEVACQUA, D.C.; OTAKE, T.; WATANABE, Y.; HICKMAN, A.H.; UTSUNOMIYA, S.; OHMOTO, H., 2009. P ima y haema i e o ma ion in an oxygena ed sea 3.46 billion yea s ago. Na u e Geoscience , 2, 301-306. HODGKIN, T., 1997. Some cu en issues in he conse a ion and use o plan gene ic esou ces. In : Molecula gene ic echniques o plan gene ic esou ces. Repo o an IPGR Wo kshop 9-11 Oc obe 1995. 3-10. W.G. Ayad, T. Hodgkin, A. Ja ada , V.R. Rao (Eds.). Rome (I aly). HOLDEN, J. H. W.,1984. The second en yea s. In : C op Gene ic Resou ces: Conse a ion and E alua ion. 277-285. J.H.W. Holden, J. Williams (Eds.). London (UK). INDA ARAMENDÍA, L.A., 2005. El géne o Lolium . Cla es dico ómicas. Re . Real Academia Ciencias de Za agoza , 60, 143-155. IRIONDO, J.M., 2001.Conse ación de especies a as y amenazadas. (Re isión). In es igación Ag a ia, P oducción y P o ección ege ales , 16 (1), 5-24. IZCO, J.; AMIGO, J.; GARCÍA-SAN LEÓN, D., 2000. LAZAROA 21: 25-50. 2000. Análisis y clasi icación de la ege ación de Galicia (España), II. La ege ación he bácea. Laza oa , 21, 25-50. JAIN, S.K.; QUALSET, C.O.; BHATT, G.M.; WU, K.K., 1975. Geog aphical pa e ns o pheno ypic di e si y in a Wo ld Collec ion o Du um Whea s. C op Sci. , 15, 700-704. JANA, S.; SINGH, K., 1993. E idence o geog aphical di e gence in Kabuli Chickpea eom ge mlasm e alua ion da a. C op Sci ., 33, 626-632. JAUHAR, P.P., 1976. Ch omosome pai ing in some iploid and ispeci ic hyb ids in Lolium/Fes uca and i s phylogene ic implica ions. Ch omosomes Today , 5, 165-177. JAUZEIN, P., 1995. Flo e des champs cul i és. SOPRA-INRA Edi ions. 898 pp. Pa ís (F ance). JOHNSON, R.C.; JOHNSTON, W.J.; NELSON, M.C.; SIMON, C.J.; GOLOB, C.T., 1999. Co e u iliza ion and de elopmen – an example wi h Poa p a ensis L. In : Co e Collec ions o Today and Tomo ow , 49-60. R.C. Johnson, T. Hodgkin. IPGRI. (Eds.). Rome (I aly). 152 JONES, P.G.; BEEBE, S.E.; TOHME, J.; GALWEY, N.W., 1997. The use o geog aphical in o ma ion Sys ems. Biodi e si y and Conse a ion , 6, 947-958. KERGUÉLEN, M.; PLONKA, F., 1989. Les Fes uca de la lo e de F ance (Co se comp ise). Bull. Soc. Bo . Cen e- Oues , nou elle se ie, 10, 3-368. KOPECKÝ, D.; LOUREIRO, J.; ZWIERZYKOWSKY, Z., 2006. Genome cons i u ion and e olu ion in Lolium x Fes uca I bid cul i a s ( Fes ulolium ). Theo . Appl. Gene ., 113, 731-742. KRUSKAL, W.H.; WALLIS, W.A., 1952. Use o anks in one-c i e ion a iance analysis. Jou nal o he Ame ican S a is ical Associa ion , 47 (260), 583–621. KURLOVICH, B.S.; REPEV, S.I.; PETROVA, M.V.; BURAVTSEVA, T.V.; KARTUZOVA, L.T.; VOLUZNEVA, T.A., 2000. The signi icance o Va ilo ’s scien i ic expedi ions and ideas o de elopmen and use o legume gene ic esou ces. Plan Gene ic Resou ces Newsle e , 124, 23-32. LATCH G.C.M., 1993. Physiological in e ac ions o endophy ic ungi and hei hos s. Bio ic s ess ole ance o endophy e-in ec ed g asses. Ag ic. Ecosys ems En i on. , 44, 143-156. LAWRENCE, M.J.; MARSHALL, D.F.; DAVIES, P., 1995. Gene ics o conse a ion. I. Sample size when collec ing ge mplasm. Euphy ica , 84, 89-99. LEE, L.S.; HENRY, R.J., 2001. Comme cial applica ions o plan geno yping. In : Plan Geno yping: he DNA inge p in ing o plan s. CAB In e na ional. R.J. Hen y (Ed.). 265–273. Walling o d (UK). LEHVASLAIHO, H.; SAURA, A.; LOKKI, J., 1987. Chlo oplas DNA a ia ion in he g ass ibe Fes uceae . Theo e ical an Applied Gene ics , 74, 294-302. LÓPEZ, J.E.; GONZÁLEZ, E.; OLIVEIRA, J.A., 2009. Va iabilidad cianogénica y ag onómica en poblaciones na u ales de ébol blanco ecolec adas en la Co dille a Can áb ica. En : La mul i uncionalidad de los pas os: p oducción ganade a sos enible y ges ión de los ecosis emas. Sociedad Española pa a el Es udio de los Pas os (SEEP), 177-183. R. Reiné, O. Ba an es, A. B oca, C. Fe e , (Eds.). Huesca (España). LÓPEZ, J.E.; OLIVEIRA, J.A., 2000a. Compa ación de p ocedimien os pa a elabo a colecciones núcleo en accesiones españolas de aig ás inglés e i aliano. Pas os , XXX(1), 71-102. LÓPEZ, J.E.; OLIVEIRA, J.A., 2000b. E aluación ag onómica de accesiones de aig ás ingles e i aliano de la Península Ibé ica desp o is as de hongos endo i os. En : Ac as III Reunión Ibé ica de Pas os y Fo ajes , 199-204. Xun a de Galicia. A Co uña (España). LÓPEZ, J.E.; OLIVEIRA, J.A., 2001. Compa ación de p ocedimien os pa a elabo a una colección núcleo en accesiones de aig ás inglés. En : Biodi e sidad en Pas os. XLI Reunión Cien í ica de la S.E.E.P. I Fo o Ibe oame icano de Pas os CIBIO (Ed.), 189-192. Alican e (España). Re e encias 153 MACKAY, M.C., 1995. One co e collec ion o many? In : Co e collec ions o plan gene ic esou ces, 99-210. T. Hodking, A.H.D. B own, T.J.L an Hin um, E.A.V. Mo ales (Eds.). John Wiley and sons, New Yo k (EE.UU.). MAHAJAN, R.K.; BISHT, I.S.; AGRAWAL, R.C.; RANA, R.S., 1996. S udies on Sou h Asian ok a collec ion: me hodology o es ablishing a ep esen a i e co e se using cha ac e iza ion da a. Gene ic Resou ces and C op E olu ion , 43 (3), 249-255. MALOSETTI, M.; ABADIÉ, T.; GERMÁN, S., 2000. Compa ing s a egies o selec ing a co e subse om he U uguayan ba ley collec ion. Plan Gene ics Resou ces Newsle e , 121, 20-26. MARKGRAF-DANNENBERG I., 1980. Gen. Fes uca . In : Flo a Eu opaea. T.G. Tu in e al . (Eds.), 5, 125-153, Camb idge Uni e si y P ess. London (UK). MARSHALL, D.R., 1989. Limi a ions o he use o ge mplasm collec ions. In : The use o Plan Gene ic Resou ces. B own, A.H.D., Ma shall, D.R., F ankel, O.H. and Williams, J.T. (Eds). Camb idge Uni e si y P ess. Camb idge (UK). MARTÍN, I, 2001. Conse ación de ecu sos i ogené icos. Hojas Di ulgado as INIA, 2114 HD. Minis e io de Ag icul u a, Pesca y Alimen ación, Mad id (España). MEDINA, R.D.; FALOCI, M.M.; MARASSI, M.A.; MROGINSKI, L.A., 2005. Iden i icación de a iedades de a oz ( O yza sa i a L.) cul i adas en A gen ina median e ma cado es bioquímicos: su u ilidad po encial pa a el egis o de cul i a es. Plan Gene ic Resou ces Newsle e , 143, 1-7. MINISTERIO DE MEDIO AMBIENTE, 1999. Es a egia Española Pa a la Conse ación y el Uso Sos enible de la Di e sidad Biológica. Minis e io de Medio Ambien e, 160 pp. Mad id (España). MOMOTAZ A.; FORSTER J. W.; YAMADA T., 2004. Iden i ica ion o cul i a s and accessions o Lolium , Fes uca and Fes ulolium . Plan B eeding , 123 (4), 370- 376. MONESTIEZ, P.; GOULARD, M.; CHARMET, G., 1994. Geos a is ics o spa ial gene ic s uc u es: s udy o wild popula ions o pe ennial yeg ass. Theo e ical and Applied Gene ics , 88, 33-41. MORALES, E.A.V;.VALOIS, A.C.; NASS, L.L., 1997. Recu sos Gené icos Vege ales. 78 pp. B asilia: Emb apa - SPI. EMBRAPA, CENARGEN (B asil). MORENO, J.C., (coo d.), 2008. Lis a Roja 2008 de la lo a ascula española. Di ección Gene al de Medio Na u al y Polí ica Fo es al (Minis e io de Medio Ambien e, y Medio Ru al y Ma ino, y Sociedad Española de Biología de la Conse ación de Plan as), 86 pp. Mad id (España). MOSQUERA, M.R.; GONZÁLEZ, A.; RIGUEIRO, A., 1999. Ecología y manejo de p ade as. Minis e io de Ag icul u a, Pesca y Alimen ación. INIA. 213 pp. Mad id (España).