Aplicación de sistemas avanzados para la mejora de la calidad de productos marinos refrigerados de interés comercial

Depa ame n A p licació n me j o a de e i ge n o de Química Analí ica, Nu ici ó B oma ología n de sis emas a anzados p la calidad de p oduc os m e ados de in e és come c i Minia San j TESIS DO C ó n y p a a la m a inos i al j uás Rey C TORAL 2012 JORGE BARROS VELÁZQUEZ, Ca ed á ico de Tecnología de Alimen os de la Uni e sidad de San iago y SANTIAGO AUBOURG MARTÍNEZ, P o eso de In es igación del Ins i u o de In es igaciones Ma inas de Vigo INFORMAN Que la p esen e esis doc o al, i ulada “Aplicación de sis emas a anzados pa a la mejo a de la calidad de p oduc os ma inos e ige ados de in e és come cial”, ha sido ealizada po la doc o anda MINIA SANJUÁS REY bajo nues a di ección conjun a. Asimismo, y una ez e minada la pa e expe imen al co espondien e, au o izamos a la doc o anda a que ealice su p esen ación y de ensa pública. San iago de Compos ela, 23 de ab il de 2012 Fdo: Jo ge Ba os Velázquez Fdo: San iago Aubou g Ma ínez Fdo: Minia Sanjuás Rey                 !"#$%&'('!"  )     "    (  (&&*  +  *   &)      ""&* ,          $    *'&*   &)  )  -.      &/)(0* 1 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e O ganiza ion o he Uni ed Na ions g: G amos HL: Hielo líquido HLO: Hielo líquido ozonizado HT: Hielo adicional en escamas Hx: Hipoxan ina IMP: Mono os a o de inosina Ino: Inosina mequi : Miliequi alen e min : Minu os ml: Milili o ABREVIATURAS mM: Milimola nm: Nanóme os OTMA: Óxido de ime ilamina PCA: Pla e coun aga PV: Índice de pe óxidos RTE: Ready o ea TBA: Ácido ioba bi ú ico TMA-N: T ime ilamina ni ogenada UE: Unión Eu opea UFC: Unidades o mado as de colonias VRBD: Viole ed bile aga ÍNDICE I- INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 5 1- ASPECTOS GENERALES DE LAS ESPECIES MARINAS.................................................... 7 1.1- Ex acción y acuicul u a ......................................................................................................... 7 1.2- Valo nu icional ..................................................................................................................... 9 1.3- Suscep ibilidad a la al e ación ............................................................................................. 13 1.4- Alimen os de i ados de las especies ma inas ..................................................................... 15 2- CONSERVACIÓN EN REFRIGERACIÓN DE ESPECIES MARINAS .................................. 16 2.1-La e ige ación como es a egia de conse ación ............................................................... 16 2.2- Vías de al e ación du an e la conse ación en e ige ación ............................................... 19 2.2.1- Au olisis ............................................................................................................................. 19 2.2.2- Ac i idad mic obiana ......................................................................................................... 23 2.2.3- Oxidación de la acción lipídica ....................................................................................... 27 2.3- Re ige ación adicional en hielo en escamas .................................................................... 28 3- APLICACIÓN DE OTROS METODOS O ESTRATEGIAS PARA LA REFRIGERACIÓN DE ESPECIES MARINAS................................................................................................................. 30 3.1- Agua de ma e ige ada ...................................................................................................... 31 3.2- Hielo líquido ......................................................................................................................... 32 3.3- Combinación de hielo líquido con ozono ............................................................................. 35 3.4- Aplicación de conse an es na u ales en pescado esco ................................................... 38 3.5- Aplicación de acei es esenciales en p oduc os ma inos e ige ados ................................. 41 REFERENCIAS ........................................................................................................................... 45 II- PRESENTACIÓN DEL TRABAJO Y OBJETIVOS ...........................................53 III- MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................59 1- SISTEMAS DE PRESERVACIÓN EMPLEADOS .................................................................. 61 1.1- Sis emas de e ige ación .................................................................................................... 61 1.2- Mezcla de ácidos o gánicos na u ales ................................................................................. 62 1.2.1- Fó mula come cial BPS2 .................................................................................................. 62 1.2.2- Elabo ación de hielo incluyendo ácidos na u ales ............................................................ 63 1.3- Cobe u a con acei es esenciales ........................................................................................ 63 2- MATERIA PRIMA DE ESPECIES MARINAS, PROCESAMIENTO Y MUESTREO ............. 64 2.1- T ucha a co i is .................................................................................................................... 64 2.2- Especies bi al as................................................................................................................. 66 2.3- Me luza, gallo y ape ............................................................................................................ 68 2.4- Bacaladilla ............................................................................................................................ 70 2.5- Ju el ..................................................................................................................................... 71 I-INTRODUCCIÓN 8 la me luza y el a enque. Es e descenso de los ecu sos pesque os cues iona la a i mación de que el ma es una uen e inago able de alimen os, lo que pone de mani ies o su limi ada capacidad, sob e odo en lo que espec a a cie as especies. Desde la UE se han di igido polí icas pa a ga an iza la pesca sos enible a la go plazo cuyo obje i o p incipal es la de alcanza un equilib io sos enible en e la ac i idad de la lo a y los ecu sos pesque os disponibles. Sin emba go las ac i idades pesque as se es án iendo educidas debido a o os ac o es como el aumen o del p ecio de los combus ibles, el cambio climá ico, las emisiones de ca bono y el inc emen o gene al del p ecio de odo ipo de ma e iales empleados po el sec o (FAO, 2010). Po úl imo, o o ac o que a ec a a es e sec o , es la p eocupación de los consumido es po los iesgos y bene icios pe cibidos a pa i del consumo de pescado. Es o ha gene ado una demanda o ien ada hacia écnicas menos in ensi as, basadas en medios na u ales de p oducción que ga an icen po un lado la calidad del p oduc o consumido y po o o lado, deben ga an iza la sos enibilidad de los ecu sos ma inos. Todos es os hechos han bene iciado el desa ollo en las úl imas décadas del sec o de la acuicul u a. El in undamen al de los cul i os acuícolas es la p oducción de ma e ia i a en medio ma ino. Es deci , la acuicul u a consis e en la manipulación de bio opos acuá icos na u ales o a i iciales pa a la p oducción de especies ú iles al homb e; po lo an o, incluye odas las ac i idades de c ía o cul i o de o ganismos que i en en dichos bio opos (Ba nabé, 1989). El sec o de la acuicul u a c ece más ápido que cualquie o o sec o de p oducción de alimen os de o igen animal, con un c ecimien o medio anual del 6,6%. Con es os a ances se es á a ando de ayuda a esol e p oblemas de I-INTRODUCCIÓN 9 conse ación de especies, como el caso del cama ón y de algunas especies de pescado blanco que es án en pelig o de ex inción en algunos luga es, e i ando así la sob eexplo ación de sus calade os (Ci uen es y col., 1997). En Eu opa, los p incipales p oduc os de la acuicul u a ma ina son los pescados de al o alo come cial, des acando el salmón, seguido de la do ada, la lubina y el odaballo; en e los moluscos, des acan las especies de mejillón, os a y almeja. A pesa de que la p oducción de mejillón expe imen a b uscas a iaciones debido a los episodios de ma eas ojas que ienen luga en Galicia, su cul i o en las ba eas de las Rías Gallegas (Ilus ación 1), ha si uado a España como segundo p oduc o mundial después de China (Conselle ía de Pesca e asun os ma í imos, 2008). 1.2- Valo nu icional El es udio de los nu ien es y las unciones que desempeñan en el o ganismo nos han pe mi ido conoce muchas de las p opiedades de los alimen os que has a hace ela i amen e pocos años se in uían o o maban pa e de la sabidu ía popula . No se puede elabo a un p oduc o nue o sin sabe la espues a de sus componen es en e al p oceso al que a a se some ido; no se Ilus ación 1: Ba ea de La Ría de Vigo I-INTRODUCCIÓN 10 puede aplica un a amien o sin conoce en qué cuan ía a a disminui la ac i idad de cie os p incipios nu i i os; no se puede a a un alimen o sin conoce qué modi icaciones senso iales an a p oduci se. En la ac ualidad se conside a que es imp escindible conoce con el mayo de alle posible la composición de odas aquellas especies que o man pa e de nues a die a. Los p incipales componen es químicos del músculo de pescado son el agua, las p o eínas y los lípidos. Jun os cons i uyen ap oximadamen e el 98% del músculo. Es os componen es son los que ienen mayo impac o sob e el alo nu i i o, las p opiedades uncionales, las cualidades senso iales y la es abilidad en la conse ación de es os p oduc os. Los o os cons i uyen es (ca bohid a os, i aminas y mine ales), aunque es án p esen es en meno can idad, ambién juegan un papel impo an e en los p ocesos bioquímicos que ienen luga en el músculo pos -mo em. El agua es el p incipal componen e del músculo de pescado; ep esen a en o no al 80% del peso en especies mag as y es meno en aquellas especies que almacenan lípidos en el músculo (Haa d, 1992). Es uno de los componen es que más in luye en la al e abilidad de los alimen os. Con el obje o de medi su p esencia, su gió el concep o de ac i idad de agua (aw), que se de ine como la elación exis en e en e la p esión de apo de un alimen o y la p esión de apo de agua pu a, medidas ambas a la misma empe a u a. Es e pa áme o es una medida del agua disponible pa a el c ecimien o de mic oo ganismos y pa a que se puedan lle a a cabo las di e en es eacciones químicas y enzimá icas elacionadas con la pé dida de calidad. El ni ógeno p o eico es la acción más impo an e del ni ógeno o al, ya que suele supone en la mayo ía de las especies un alo supe io al 85% del I-INTRODUCCIÓN 11 ni ógeno o al (Pé ez-Ma ín, 1986). El po cen aje de p o eína se encuen a en el ango 15-20% en el músculo esco, y no exis en di e encias en e especies mag as y g asas. Conside ando que la ca ne de ce do, co de o y e ne a ienen un 20-21% de p o eínas, se en iende que se haya ca alogado al pescado en el g upo de los alimen os p o eicos. Asimismo, la calidad nu i i a de la p o eína ma ina se asemeja mucho a la de la p o eína del hue o, la leche y p oduc os cá nicos, en el sen ido que con iene igualmen e odos los aminoácidos esenciales. Como esul ado, el alo biológico y el coe icien e de diges ibilidad de las p o eínas ma inas se encuen a en los mismos angos que los alimen os ecién mencionados (Picle , 1987). Lo que ca ac e iza y dis ingue a los alimen os ma inos en e a los de o igen e es e es su composición lipídica al amen e insa u ada. Los lípidos ma inos es án compues os po ácidos g asos de cadena la ga (14-22 á omos de ca bono) con un al o g ado de insa u ación. Los ácidos g asos de los mamí e os a amen e con ienen más de dos dobles enlaces po molécula, mien as que los depósi os g asos de las especies ma inas con ienen muchos ácidos g asos con cinco o seis dobles enlaces. Nume osas in es igaciones ecien es cen an en los ácidos g asos poliinsa u ados de la se ie ω3 el papel posi i o de los lípidos ma inos en la lucha con a de e minadas en e medades. Dos ácidos des acan po su abundancia en es e g upo. Son, el de 22 á omos de ca bono y 6 dobles enlaces (ácido docosahexaenoico, DHA) y el de 20 á omos de ca bono y 5 dobles enlaces (ácido eicosapen aenoico, EPA). Las especies ma inas son ambién in e esan es po su apo e en ácidos g asos esenciales (linoleico, linolénico y a aquidónico), aquellos ácidos g asos que el o ganismo humano necesi a pe o no es capaz de sin e iza . Recien emen e se ha es udiado la elación de con enidos de ácidos ω3 I-INTRODUCCIÓN 12 y ω6; se ha comp obado que en los dos úl imos siglos, el desa ollo ecnológico y el cambio de hábi os ha lle ado a una p opo ción supe io de ω6 de la que se ía la co ec a en una die a equilib ada humana (1/6, ω3/ ω6) (Simopoulos, 1994). Un cons i uyen e mino i a io, pe o de g an impo ancia desde un pun o de is a ecnológico, es el de los compues os ni ogenados no p o eicos. Se a a de un conjun o he e ogéneo de moléculas que con ienen ni ógeno, son de na u aleza no p o eica y son solubles en agua. Los más impo an es a ni el ecnológico son las bases olá iles (amoniaco, ime ilamina, dime ilamina), óxido de ime ilamina, aminoácidos lib es, u ea, nucleó idos, e c. Es os compues os p oceden undamen almen e del sa coplasma y cons i uyen en los eleós eos un 9-18% del ni ógeno o al y un 33-38% en los elasmob anquios (Picle , 1987). Los ca bohid a os ep esen an la uen e de ene gía más ápida de los se es i os. En el caso de las especies ma inas no es un cons i uyen e abundan e, pudiendo llega a un máximo de 1,2 y 4 g/100 g de músculo esco en pescado, c us áceos y moluscos. Se encuen an undamen almen e en la o ma de glucógeno, aunque en algún caso se han aislado pequeñas can idades de glucosa lib e y ibosa. Los alimen os ma inos son una uen e muy ica de componen es mine ales. El con enido o al en músculo oscila en el ango 0,6-1,5% del peso húmedo. Globalmen e, se puede deci que los p oduc os ma inos son in e esan es po su apo e en halógenos (I, F) y ambién en o os elemen os como P, K, Ca, siendo menos impo an e su con ibución en Cl y Na. Desde el pun o de is a ecnológico, esul a impo an e la p esencia de de e minados elemen os de ansición (Cu y Fe, especialmen e) dado que pueden se buenos ca alizado es de una de las ías de al e ación de los p oduc os ma inos (oxidación de la acción g asa). I-INTRODUCCIÓN 13 Las i aminas son compues os o gánicos complejos, que en can idades mínimas y como componen es na u ales de los alimen os son esenciales pa a el cu so no mal de las unciones isiológicas. Uno de los alo es más posi i os de las especies ma inas es su apo e en i aminas del ipo liposoluble (A, D y E, especialmen e), siendo ambién conside able el de algunas p o eínas del ipo hid osoluble como iamina, ibo la ina, B6 y B12. El hígado de las especies mag as esul a una uen e muy buena de las i aminas A y D, mien as que en el caso de las especies g asas es en el músculo donde se pueden encon a can idades mayo es. 1.3- Suscep ibilidad a la al e ación Después de la cap u a de los p oduc os ma inos, se p oduce una se ie de modi icaciones, cuya elocidad e in ensidad dependen de ac o es in ínsecos y de ac o es ex ínsecos al animal. En lo e e en e a ac o es in ínsecos, se puede a i ma que el pescado, y en gene al los p oduc os ma inos es án conside ados en el g upo de los alimen os más ágiles y pe ecede os que exis en. Es o es debido undamen almen e a su g an con enido en de e minados cons i uyen es (agua, aminoácidos lib es, lípidos con al o g ado de insa u ación, compues os ni ogenados no p o eicos, enzimas au olí icas, e c.) que acili an la pues a en ma cha de una se ie de ías de al e ación. Asimismo, es impo an e menciona la pequeña p opo ción de ejido conec i o que se encuen a p esen e en el músculo, lo que los hace más suscep ibles que los animales e es es al a aque mic obiano en el momen o de abandona su hábi a na u al. Po o a pa e, debe des aca se el g an núme o de enzimas au olí icos p esen es en los lisosomas de las células de su ejido muscula . Es as enzimas, I-INTRODUCCIÓN 14 que se ca ac e izan po p esen a su mayo ac i idad a pH ácido y ene un papel egulado en el animal i o, son las esponsables después de la mue e del enómeno conocido como au olisis enzimá ica. Aunque el músculo y los luidos isiológicos del pescado i o o ecién cap u ado sean no malmen e es é iles, hay zonas del cue po del animal como la capa mucosa supe icial, las b anquias y el ac o diges i o, que son icos en di e sas poblaciones bac e ianas, que di ie en según el pez sea de aguas cálidas o ías. Después de la mue e del pez se p oduce la di usión de dicha mic obio a hacia o os ejidos, lo que o igina á el de e io o de la calidad del p oduc o. Asimismo, la elocidad de al e ación se e á in luenciada en g an medida po oda una se ie de ac o es ex ínsecos al p opio animal, en e los que cabe des aca el hábi a (localización geog á ica, empe a u a del agua, es ación del año, e c.), el mé odo de cap u a, el iempo que anscu e desde la cap u a has a que el pescado es some ido a cualquie a de los p ocesos de p ese ación y la manipulación a que se e some ido a bo do. De en e odos ellos, el mé odo de cap u a y su manipulación inmedia amen e pos e io , son las causas deciso ias a la ho a de acele a o no los cambios pos -mo em del pescado. En la Ilus ación 2 se mencionan de o ma esquemá ica las dis in as ías a a és de las cuales las especies ma inas pueden su i al e ación pos -mo em. Ilus ación 2: Vías de al e ación de las especies ma inas Oxidación no enzimá ica de lípidos Pa deamien o enzimá ico Pa deamien o no enzimá ico Acción de enzimas endó g enas Acción mic obiana VÍ AS DE ALTERACI Ó N DE ESPECIES MARINAS I-INTRODUCCIÓN 15 1.4- Alimen os de i ados de las especies ma inas Debido a la acilidad y a la apidez con la que se suceden las dis in as ías de al e ación en los p oduc os ma inos, se han diseñado dis in os ipos de es a egias con el in de inhibi y alen iza los mecanismos po los que se suceden las dis in as ías de al e ación. El obje i o undamen al de es as es a egias es el de o ece al consumido un p oduc o de al a calidad nu icional, senso ial y al mismo iempo segu o. Es as es a egias son aplicadas después de la cap u a. En unción del g ado de ans o mación a la que se some e a la especie ma ina, se pueden dis ingui los siguien es ipos de p ocesos:  De meno g ado de ans o mación: Las ca ac e ís icas o iginales de la especie de pa ida se man ienen, o al menos, se in en an man ene ; es el caso de los p oduc os e ige ados y congelados.  De mayo g ado de ans o mación: Suponen un cambio d ás ico en la composición y el aspec o ex e no del p oduc o; nos e e imos a los p ocesos de secado, salazonado, ahumado, enla ado y p e-cocinados. Po o a pa e, en unción de la p opia es a egia seguida pa a de ene la al e ación, los mé odos aplicados pueden di idi se en es g upos: Aquellos que aplican ío ( e ige ación, congelación), los que aplican calo (cocción, enla ado, ahumado) y los que se basan en la educción de la ac i idad de agua (salado, secado). Ac ualmen e se p es a g an a ención a los denominados alimen os lis os pa a consumi (“ eady- o-ea ”) o p e-cocinados. Son una solución es a égica pa a p omo e el consumo de alimen os al amen e pe ecede os como los ma inos y a I-INTRODUCCIÓN 16 la ez adecua se a la demanda ac ual de los consumido es. An e las nue as necesidades que plan ea el i mo de ida mode no, la indus ia alimen a ia ha eaccionado ápidamen e, ampliando conside ablemen e el su ido de dichos p oduc os: ile es de pescado, hambu guesas, anillas de calama ebozadas, e c. La elabo ación de es os p oduc os implica una se ie de ans o maciones y a amien os, que pueden se aplicados de o ma indi idual o combinada, en e los que se pueden menciona el a amien o é mico, ebozado, en asado en a mós e as p o ec o as, conse ación en ío, e c. Todo ello en ocado a que los p oduc os p epa ados man engan su calidad nu i i a y su calidad senso ial (Gopina h y col., 2007). 2- CONSERVACIÓN EN REFRIGERACIÓN DE ESPECIES MARINAS 2.1- La e ige ación como es a egia de conse ación Al comienzo de es a memo ia se comen ó la impo ancia de los p oduc os ma inos en la alimen ación po se una uen e aliosa de p o eínas y o os nu ien es. Sin emba go, si es os p oduc os no son manipulados y elabo ados co ec amen e, se puede p oduci una impo an e pé dida de sus alo es nu icionales y senso iales, con la posibilidad de deja al consumido expues o al iesgo de su i una in oxicación alimen a ia. Debido a que el de e io o pos mo em posee una ciné ica ele ada, las condiciones de conse ación a bo do eje cen un g an e ec o sob e la calidad del p oduc o (Ashie y col., 1996). Así, an o la manipulación cuidadosa e higiénica como la conse ación adecuada, esul an se pa áme os cla e pa a ga an iza la salub idad del p oduc o, ya que los daños innecesa ios o iginados du an e la I-INTRODUCCIÓN 17 manipulación del p oduc o, ales como co es y he idas, pueden acili a el acceso de bac e ias acele ando la pé dida de calidad. El pescado, as su mue e y pos e io conse ación, pasa po cua o ases de de e io o, independien emen e de la empe a u a de e ige ación a la que se abaje:  P e- igo : en la que el pescado p esen a unas ca ac e ís icas senso iales ex e nas máximas, des acando su ex u a i me y elás ica. Comienzan los p ocesos au olí icos de al e ación.  Rigo mo is: el cue po del pescado pie de lexibilidad, ol iéndose o almen e ígido y du o; es el mejo sín oma de escu a. Con inúan los p ocesos au olí icos del de e io o.  Pos - igo : cuando la ca ne del pescado se encuen a lácida, lige amen e i me pe o con una pé dida cla a de elas icidad. Comienza el de e io o bac e iano.  Al e ación: el de e io o bac e iano es e iden e. El pescado p esen a una ca ne más blanda y olo desag adable (Rod íguez & Pascual, 2002). Las modi icaciones que a su iendo el pescado en su p oceso de al e ación has a con e i se en un p oduc o pú ido son ácilmen e iden i icables. Los cambios a ni el de ap eciación isual pueden desc ibi se de la siguien e mane a:  Su ca ac e ís ico aspec o b illan e se o na pálido y adquie e una onalidad pa da, ama illa, o de aspec o sucio.  La capa iscosa de la supe icie aumen a, especialmen e en las ale as y b anquias I-INTRODUCCIÓN 24 • La descomposición del azu e con enido en los aminoácidos cis eína y me ionina es pa icula men e impo an e en la deg adación, po que causa malos olo es y sabo es debido a la o mación de sul u o de hid ógeno y me ilme cap ano, espec i amen e (He be & Shewan, 1975,1976). • P esencia de OTMA, que ac úa como acep o inal de elec ones en la espi ación anae obia de di e sas bac e ias especí icas de la deg adación. El esul ado de su descomposición es la apa ición de malos olo es y sabo es debido a la o mación de TMA (G am & Huss, 1996). En lo que se e ie e a ac o es ex ínsecos, la población y composición de la mic obio a del pescado es án in luenciadas po el ambien e de la zona de cap u a, la época del año, las condiciones de pesca, la manipulación y el p ocesado (Shewan, 1962). La empe a u a es el ac o ambien al más impo an e de los que in luyen en el núme o inicial y ipo de bac e ias en la supe icie del pescado. Las poblaciones bac e ianas ípicas de los peces de aguas empladas son undamen almen e psic ó ilas que i en en aguas de empe a u as in e io es a 10ºC. Sin emba go, la empe a u a del agua supe icial puede aumen a si se p olonga el iempo cálido, con lo que las especies pelágicas (po ejemplo el ju el, la caballa o el a enque) pueden e aumen ada su ca ga bac e iana supe icial mesó ila (G am y col., 1987). La g an mayo ía de los mic oo ganismos se encuen an en las supe icies ex e nas (piel y b anquias) y en los in es inos de los peces i os. Muchos de es os mic oo ganismos son po enciales agen es de al e ación. Las bac e ias p edominan es en piel y b anquias son ae obias acul a i as, en especial del géne o Vib io, que ambién se han aislado en g an núme o en los peces pelágicos. Las bac e ias anae obias obligadas son poco ecuen es en la I-INTRODUCCIÓN 25 supe icie del pescado pe o se p esen an en g an núme o en el in es ino. Poco después de la mue e del pez, las bac e ias comienzan a in adi los ejidos ya que se pie den los sis emas de de ensa na u ales (Bu gess y col., 1965). Una g an pa e de las bac e ias p esen es en el pescado de e io ado no desempeñan ningún papel en su al e ación (Maka ios-Aham & Lee, 1993). Cada especie posee sus p opias bac e ias especí icas del de e io o. La mic obio a del pescado que se al e a cons a de bacilos psic ó ilos G am nega i os, pe enecien es a los géne os Pseudomonas, Psych obac e (Mo axella), Shewanella y Fla obac e ium (G am y col., 1987; Huss, 1998; Jay, 1971). Dado su ca ác e psic ó ilo, son capaces de c ece en e 0 y +1ºC pe o hay un g an núme o de especies de Pseudomonas que son capaces de al e a el pescado a una empe a u a de -3ºC, aunque la elocidad sea len a (Shaw & Shewan, 1968). Así, los pisc ó ilos son los mic oo ganismos dominan es y los p incipales causan es de la al e ación en los alimen os e ige ados. Aunque los iempos de gene ación de los mic oo ganismos psic ó ilos son bas an e la gos, su me abolismo es ela i amen e ac i o a empe a u as de e ige ación, des acando la p oducción y ac i idad de enzimas hid olí icas (como p o easas y lipasas). El c ecimien o de bac e ias consumido as de oxígeno ocasiona la o mación de nichos anae óbicos o mic oae o ílicos en el pescado. Es o sin emba go, no a o ece necesa iamen e el c ecimien o de bac e ias anae óbicas. Algunas de las bac e ias p esen es en el pescado son capaces de lle a a cabo el p oceso espi a o io en anae obiosis empleando moléculas dis in as al oxígeno como acep o es inales de elec ones, siendo ípico de las bac e ias especí icas del de e io o del pescado emplea el OTMA como acep o de elec ones du an e la espi ación anae óbica. I-INTRODUCCIÓN 26 La educción del OTMA es á asociada a bac e ias ípicas del ambien e ma ino, ales como Shewanella pu e aciens, Ae omonas spp., En e obac e iaceae, P. phospho eum y Vib io spp, ob ienen ene gía median e la educción del OTMA a TMA, gene ándose sabo amoniacal (G am & Dalgaa d, 2002). El componen e educido, la TMA, es uno de los compues os dominan es del pescado de e io ado y el esponsable del desag adable y ípico olo a pescado conse ado en malas condiciones (Boskou & Debe e e, 1998). En muchas especies de pescado el desa ollo de la TMA es pa alelo a la p oducción de hipoxan ina. O o ipo de moléculas elacionadas con la ac i idad mic obiana son las aminas biógenas. Su o mación se lle a a cabo a pa i de aminoácidos lib es, median e ca álisis de enzimas bac e ianas. En e ellas es de des aca la his amina, jun o a pu escina, cada e ina, ip amina, agma ina, e c. El con enido en aminas biógenas es ú il pa a la es imación del g ado de descomposición del pescado, (Mackie, 1997), ya que en los peces ecién cap u ados, la concen ación de es as aminas es muy bajo o p ác icamen e inde ec able. Cabe des aca , po su impo ancia clínica, la his amina ( o mada a pa i de la desca boxilación del aminoácido his idina). El en enenamien o po his amina es una in oxicación de o igen alimen a ia p oducida po el consumo de alimen os con ni eles ele ados de es a amina biógena. Se asocia no malmen e con el consumo de escómb idos (a ún, albaco a, boni o, baco e a, caballa, e c.) conse ados en malas condiciones (Taylo , 1986); de ahí su nomb e “en enenamien o o in oxicación po escómb idos”. Pe o ambién puede se debida al consumo de pescado no pe enecien e al g upo de los escómb idos, como sa dinas, a enques, e c., o I-INTRODUCCIÓN 27 incluso de o os alimen os como quesos, p oduc os cá nicos, ino, e c. (B ink y col., 1990). Finalmen e, nume osos mic oo ganismos al e an es pueden p oduci lipasas ex acelula es que ca alizan la hid ólisis de los és e es de glice ol lle ando a la o mación de ácidos g asos lib es. La p oducción de lipasas de o igen mic obiano puede limi a se o inhibi se si en el medio es án p esen es ca bohid a os, lípidos y p o eínas del ejido muscula (Al o d y col., 1971; K a , 1992). Po ello, es necesa io que se haya ago ado la glucosa de la supe icie muscula con el in de que se p oduzca la ac i idad lipolí ica mic obiana (Gill, 1982). 2.2.3- Oxidación de la acción lipídica La na u aleza esencialmen e insa u ada de los lípidos de las especies ma inas las con ie e en sus ancias especialmen e suscep ibles a su i oxidaciones. La oxidación lipídica iene luga cuando los ácidos g asos insa u ados eaccionan con el oxígeno del ai e du an e la conse ación o p ocesado del pescado. Es as eacciones han acapa ado una g an a ención po ene una g an incidencia sob e la calidad y el alo nu i i o del p oduc o, al o igina se sabo es y olo es desag adables de ipo ancio (F ankel, 1991; Ha is & Tall, 1994). La oxidación lipídica es un p oceso au oca alí ico que anscu e a a és de la o mación de adicales lib es. Una ez p oducido el p ime ácido g aso po ado de un adical lib e, su eac i idad con el oxígeno p o oca su ápida con e sión en adicales de ipo pe óxido. Es os compues os se ans o man en hid ope óxidos (p oduc os p ima ios de oxidación) po in e acción con moléculas de ácidos g asos insa u ados. És os, son ines ables y además de o igina adicales lib es, I-INTRODUCCIÓN 28 pueden su i o o ipo de ans o maciones dando luga a una se ie de p oduc os de oxidación secunda ios (aldehídos, ce onas, alcoholes, e c.). Po úl imo, an o los p oduc os p ima ios como los secunda ios de la oxidación lipídica (de ca ác e elec ó ilo odos ellos), pueden eacciona con componen es ni ogenados (de ca ác e nucleó ilo) del alimen o dando luga a los denominados p oduc os de oxidación e cia ios que son po ado es de p opiedades luo escen es y de pa deamien o. Es a in e acción esul a especialmen e impo an e en el alo nu icional an e la posible pé dida de aminoácidos y ácidos g asos del ipo esencial. Es necesa io menciona que en el p oceso de oxidación lipídica ac úan de o ma conjun a dos ías de al e ación mencionadas en la Ilus ación 2. Dado que la oxidación lipídica es un p oceso a o able e modinámicamen e, pe o no ciné icamen e, es necesa ia la pa icipación de un ca alizado . Es e papel puede se desempeñado po una enzima endógena (lipoxigenasas, pe oxidasas y oxidasas), o bien puede se lle ado a cabo po agen es del ipo me ales (especialmen e de ansición), luz, calo , e c. En el p ime caso nos encon a íamos con la oxidación de ipo enzimá ica, mien as que en el segundo se a a ía de una oxidación no enzimá ica. El desa ollo de ambas se supe pone du an e la al e ación de un p oduc o, lle ando a p oduc os de oxidación muy simila es. 2.3- Re ige ación adicional en hielo en escamas El empleo de hielo en escamas es el mé odo más u ilizado en los países desa ollados como mé odo de e ige ación pa a la conse ación de p oduc os ma inos en es ado esco. Median e su aplicación, se consigue en ia con apidez I-INTRODUCCIÓN 29 el p oduc o, alcanzándose empe a u as lige amen e supe io es a 0ºC (Heen, 1982) y así ex ende su ida ú il. Es e sis ema de e ige ación o ece nume osas en ajas ales como se es inocuo, ácil de anspo a y ela i amen e ba a o. Resul a especialmen e ap opiado pa a la e ige ación del pescado. Con es e mé odo, la ans e encia de calo se p oduce po con ac o di ec o del pescado con el hielo, po conducción en e piezas adyacen es y po el agua de usión que se desliza sob e la supe icie del pescado. El agua de usión ía, abso be el calo del pescado y al lui sob e el hielo se uel e a en ia . Así, la mezcla pescado-hielo, no sólo educe el espeso del es a o de pescado a en ia , sino que, además, a o ece el en iamien o median e con ección en e el agua de usión y el pescado. Tan p on o como se coloca el hielo en escamas sob e el pescado calien e, el calo de és e luye hacia el hielo de i iéndolo. Es e p oceso con inúa mien as exis a una di e encia de empe a u a en e ambos, siemp e que exis a hielo su icien e. Toda usión a pos e io i se debe á al calo p oceden e de o as uen es, po ejemplo, ai e calien e ci cundan e du an e el pos e io pe iodo de conse ación. A pesa de su amplia u ilización, el sis ema e leja una se ie de incon enien es ales como:  El g ado de limpieza puede no se adecuado en odos los casos.  La ansmisión de calo es mejo able, ya que deja espacios de ai e en e el hielo y el p oduc o, de mane a que no lo odea comple amen e.  Es un sis ema di ícil de au oma iza .  Requie e de un espacio de conse ación ela i amen e g ande. I-INTRODUCCIÓN 30  Con ol de o os pa áme os como empe a u a, humedad ela i a y pu i icación y ci culación del ai e de la cáma a. En el caso de empe a u a y humedad, se ha is o que cada especie equie e unas condiciones óp imas de conse ación en e ige ación. Como esul ado, en las úl imas décadas se han buscado nue os mé odos que pe mi an mejo a las ca encias del hielo adicional con el in de mejo a la calidad de los p oduc os de la pesca e ige ados. De es os o os mé odos o es a egias a anzadas se ealiza á una b e e desc ipción en la siguien e sección. 3- APLICACIÓN DE OTROS METODOS O ESTRATEGIAS PARA LA REFRIGERACIÓN DE ESPECIES MARINAS En el momen o de la desca ga en pue o, es posible que la ca ga de pesca conse ada en la bodega lle e a ios días en e ige ación. Es e iempo a bo do se hace especialmen e impo an e en aquellas especies que son cap u adas en al a ma po la denominada lo a de al u a. Además, si a es o le añadimos un p oceso poco o ganizado, posible in e upción de la cadena de ío y una manipulación inadecuada del p oduc o, se acen ua án los signos de de e io o con la consiguien e disminución de su ida ú il. Po ello, g an pa e de la cap u a, sob e odo si p ocede de bancos de peces especialmen e lejanos o si se a a de especies de co a ida, puede que ya no es én en condiciones pa a la en a, lo que se aduce en pé didas económicas pa a el sec o . Tal y como se iene comen ando, los p oduc os ma inos cons i uyen un g upo de alimen os al amen e pe ecede os, y el ni el de su de e io o es á di ec amen e elacionado con las condiciones de conse ación. I-INTRODUCCIÓN 31 Con el in de e a da los daños en el pescado an p on o como sea posible, se han ensayado dis in as es a egias al obje o de mejo a el sis ema básico de conse ación en hielo adicional mencionado en la sección an e io . En e es os mé odos, clásicos y a anzados, se pueden menciona el agua de ma e ige ada, hielo líquido, hielo líquido con ozonización y sis emas de e ige ación que combinan hielo en escamas con a amien os químicos (Toledo-Flo es & Zall, 1992; Ashie y col., 1996). A con inuación se comen an las ca ac e ís icas de cada uno de es os sis emas de e ige ación. 3.1- Agua de ma e ige ada El agua de ma e ige ada (AMR), no ha desplazado al hielo en escamas pe o es u ilizada en algunas pesque ías como medio de en iamien o. Consis e en agua de ma en iada a una empe a u a in e io a 0ºC y en algunos casos se u iliza una salmue a de ap oximadamen e la misma salinidad que el agua de ma . Es e sis ema o ece una se ie de en ajas con espec o al hielo en escamas como:  En iamien o más ápido  Meno p esión eje cida sob e el pescado  Posibilidad de una empe a u a de conse ación más baja  Manipulación más ápida de g andes can idades de pescado con un iempo de demo a co o  En algunos casos, mayo iempo de conse ación. Pe o es e mé odo posee ambién una se ie de incon enien es, como puede se la excesi a abso ción de sal po pa e del p oduc o, la abso ción de agua po I-INTRODUCCIÓN 32 especies de bajo con enido lipídico, la pé dida de p o eínas hid osolubles, inc emen o de la ac i idad de las bac e ias anae obias de pu e acción y la modi icación de ca ac e ís icas senso iales ales como la decolo ación de las b anquias y la opacidad de la piel. Los sis emas AMR han mos ado e icacia en los siguien es casos:  Cuando las des en ajas de la abso ción de sal no son impo an es, pudiendo almacena se así la cap u a du an e pe íodos ela i amen e la gos.  En el en iamien o de las especies de u ilización indus ial, ya que pe mi e lle a a cabo iajes la gos, mejo a la manipulación y educi las pé didas.  En el en iamien o a g anel en emba caciones donde se deben maneja con apidez g andes can idades de pescado.  En el en iamien o del pescado a g anel, an es de su elabo ación, e i ando así el exceso de manipulación. Po odo ello, esul a di ícil gene aliza la con eniencia o no de aplica es e sis ema a escala come cial. Resul a aconsejable ealiza , p e iamen e a su uso, una in es igación de odos los ac o es, eniendo en cuen a la na u aleza de la especie, su a iabilidad es acional y el p oduc o conc e o que se quie e ob ene al inal. 3.2- Hielo líquido El hielo líquido es un mé odo de e ige ación al e na i o al hielo adicional; ep esen a una écnica nue a, que es á a ando de in oduci se en el me cado. Es un sis ema bina io que consis e en una suspensión de c is ales de hielo I-INTRODUCCIÓN 33 Ilus ación 3: Hielo líquido es é icos y mic oscópicos dispe sos inamen e en el seno de una solución an icongelan e, de aspec o simila a un g anizado, como se puede e en la Ilus ación 3. P esen a una al a capacidad de in e cambio é mico (mayo de 60 Kcal/kg), cla amen e supe io a la del agua (1 Kcal/kg). El hielo líquido es p oducido median e un p oceso que emue e con inuamen e el hielo c eado, quedando suspendido en o ma de c is ales mic oscópicos den o de la solución. La p opo ción hielo/agua de abajo es a iable, oscilando en el in e alo 20-40% en unción de la especie ma ina a conse a . El con enido en sal de la disolución de pa ida suele coincidi con el del agua ma ina, aunque la ecnología pe mi e modi ica es e pa áme o. El sis ema de p oducción de hielo líquido consis e en una uen e de en iamien o suscep ible de subs i ui la u ilización de las máquinas con encionales p oduc o as de hielo en eslabones del sec o pesque o ales como conse ación de la pesca en al a ma , manipulación en lonjas y clima ización y conse ación en g andes supe icies de alimen ación. Las en ajas de i adas de la u ilización del hielo líquido en e al hielo adicional en escamas pueden esumi se de la siguien e o ma:  Pe mi e man ene empe a u as in e io es a 0ºC pa a la conse ación en e ige ación del pescado, po encima del pun o inicial de congelación; es o se aduce en un e a do de las eacciones mic obianas, químicas y enzimá icas esponsables de la al e ación del p oduc o. I-INTRODUCCIÓN 40 conduci a un aumen o de la osmola idad y la in e e encia con los p ocesos me abólicos. O a consecuencia nega i a de es e p oceso es que pa a compensa es e aumen o de ca ga eléc ica nega i a, la bac e ia debe aumen a los ni eles de Na+, K+ y/o glu ama o, lo que lle a a un inc emen o de la ue za iónica in acelula y del u go . Es e p oceso p o oca un g an aumen o de la p esión mecánica sob e la pa ed del mic oo ganismo, lo que hace que es alle (Fos e , 1999). El e ec o inhibido elacionado con la o ma no disociada del ácido, no iene luga en el caso de emplea ácidos ino gánicos ue es, debido a que és os se encuen an o almen e disociados en la disolución, y po an o los compues os pola es esul an es no pueden a a esa la memb ana plasmá ica. Po eso la ac i idad inhibi o ia de la o ma no disociada depende de la pola idad y del amaño de las moléculas. En es e sen ido, los ácidos o gánicos lác ico (E-270), cí ico (E-330) y ascó bico (E-300) esul an ap opiados pa a es e in. Alakomi y col. (2000) comp oba on el e ec o inhibido eje cido po el ácido lác ico sob e el c ecimien o de bac e ias G am-nega i as, conocidas po se el g upo esponsable del de e io o del pescado. T a amien os p e ios con ácido lác ico en ile es de pescado (Kim y col., 1995; Me in y col., 2001; E kan & Mol, 2004), pescado ebozado (Gogus y col., 2006) y odajas de pescado (Sallam, 2007), pusie on de mani ies o la e icacia en la conse ación y ex ensión de la ida ú il de los p oduc os ma inos. Además de p opiedades an imic obianas, los ácidos ascó bico y cí ico, así como sus sales, son conocidos po su papel como quelan es, acidulan es en sis emas biológicos y siné gicos de an ioxidan es p ima ios. Su e ec o ha sido p obado en pescado desmenuzado, (Hwang & Regens ein, 1995; S odolnik y col., I-INTRODUCCIÓN 41 1992), ile es de pescado (Badii & Howell, 2002; Kilinc y col., 2009; Pou ashou i y col., 2009) y piezas en e as (Aubou g y col., 2004). Sin emba go, cuando es os ácidos se aplican po encima de cie as concen aciones o du an e iempos p olongados, exis en e idencias de diges ión del pescado, con el consiguien e de e io o senso ial (a aque a piel y ojos, especialmen e) y de las p opiedades ísicas del mismo (Kim y col., 1995; Me in y col., 2001). Es os posibles incon enien es deben se e i ados median e un es udio p e io de op imización de la concen ación empleada de los ácidos conse an es. 3.5- Aplicación de acei es esenciales en p oduc os ma inos e ige ados En la ac ualidad, exis e una demanda c ecien e po pa e del consumido , de p oduc os alimen a ios escos sin adi i os sin é icos. Po lo que, an o in es igado es como la indus ia de la alimen ación, han mos ado un ue e in e és po el uso de conse an es na u ales de amplio espec o como al e na i a a los adi i os químicos sin é icos. Pa a la p ese ación de los p oduc os de la pesca, se han suge ido a ios mé odos de bioconse ación, ales como el uso de bi idobac e ias o ex ac os na u ales de plan as. Es os a amien os no sólo se es án p obando en el pescado esco, sino ambién en alimen os como el pollo (Royo y col., 2010). En la ac ualidad, se es án implemen ando nue os mé odos de aplicación de sus ancias an imic obianas a los alimen os, ya sea median e películas de embalaje o añadidos al ebozado, como es el caso de los langos inos (Ye likaya y col., 2008), con el in de aplica al as concen aciones de conse an es en la supe icie de los alimen os. De es e modo se consigue, po I-INTRODUCCIÓN 42 an o, aumen a el pe iodo de conse ación de los mismos (Gennadios & Ku h, 1997). El de e io o de los p oduc os ma inos elabo ados es muy ápido, sob e odo debido a las e apas de p e-elabo ación en las que el acceso de mic oo ganismos al p oduc o puede e se acili ado. Además, dicha calidad puede e se a ec ada nega i amen e po eacciones químicas y enzimá icas de deg adación. Aunque odos es os p ocesos de de e io o son dependien es de la empe a u a, la conse ación en condiciones óp imas de los mismos no es á ga an izada po un con ol es ic o de la empe a u a de conse ación. Así, plan as como el o égano, omillo, ajo, hoja de lau el, ome o, cla o, e c., o sus ex ac os, conocidos como acei es esenciales, se es án empleando solos o en combinación con o os mé odos de conse ación como EAM o la i adiación, pa a mejo a las ca ac e ís icas senso iales y ala ga la ida ú il de los alimen os (Bu , 2004; Giménez y col., 2004; Mahmoud y col., 2004; Mejholm & Dalgaa d., 2002; Miguel y col., 2004; Va el zis y col., 1997; Wong & Ki s, 2002). Los acei es esenciales son líquidos acei osos, a omá icos y olá iles, que se ob ienen a pa i de ma e ia p ima de o igen ege al. No malmen e se o man en células especializadas o g upos de células de allos y hojas, y se concen an, habi ualmen e, en una egión pa icula como la co eza, las hojas o los u os (Oussalah y col., 2006). His ó icamen e, han se ido como agen es sabo izan es en alimen os y bebidas, y debido a su con enido a iable de compues os an imic obianos, poseen un g an po encial como agen es na u ales pa a la conse ación de alimen os. La ac i idad an imic obiana de los acei es esenciales se asigna a una a iedad de pequeños compues os enólicos y e penoides que, I-INTRODUCCIÓN 43 en su o ma pu a, han demos ado posee ac i idad an imic obiana (Au eli y col., 1992; Hanaa y col., 2009) y an i úngica (Aligiannis y col., 2001; Thompson, 1989). Los acei es esenciales y sus componen es, son conocidos po mos a ac i idad con a una g an a iedad de mic oo ganismos. Los acei es de o égano (O iganum ulga e) y omillo (Thymus ulga is) se encuen an en e los acei es esenciales con una mayo ac i idad an imic obiana (Smi h-Palme y col., 1998; Hamme y col., 1999; Do man & Deans, 2000; Mo ei a y col., 2005; Oussalah y col., 2006; Gu ié ez y col., 2008). Sin emba go, se debe ene en cuen a, que la aplicación de acei es esenciales de plan as pa a el con ol de pa ógenos ansmi idos po alimen os y de bac e ias con aminan es, equie e la e aluación p e ia de su e icacia en p oduc os alimen a ios o en sis emas modelo que simulan la composición de los alimen os (Glass & Johnson, 2004). Ello es debido a que, po lo gene al, la e icacia de muchos agen es an imic obianos de o igen na u al puede e se educida debido a in e acciones con cie os componen es de los alimen os. O o aspec o a ene en cuen a pa a la op imización del uso de acei es esenciales en los alimen os, es el impac o sob e la acep abilidad senso ial. Si son necesa ias concen aciones muy al as de acei es esenciales pa a consegui una ac i idad an imic obiana no able, la calidad o ganolép ica de los alimen os puede e se a ec ada; de es e modo, pueden p oduci se olo es y sabo es inacep ables pa a su consumo (Gu ié ez y col., 2008). Po lo an o, pa a la aplicación exi osa de los acei es esenciales, las in es igaciones deben cen a se en la op imización de las combinaciones de acei es esenciales y sus aplicaciones. El obje i o básico se ía el de ob ene una ac i idad an imic obiana e icaz a concen aciones lo su icien emen e bajas como I-INTRODUCCIÓN 44 pa a que la calidad o ganolép ica de los alimen os no se ea a ec ada nega i amen e. I-INTRODUCCIÓN 45 REFERENCIAS Alakomi, H. L., Sky ä, E., Saa ela, M., Ma ilda-Sandholm, T., La a-Kala, K. & Helande , I. M. 2000. Lac ic Acid Pe meabilizes G am-Nega i e Bac e ia by Dis up ing he Ou e Memb ane. Applied and En i onmen al Mic obiology, 66, 2001- 2005. Al o d, J. A., Smi h, J. L. & Lilly, H. D. 1971. Rela ionship o mic obial ac i i y o changes in lipids in oods. Jou nal o Applied Mic obiology, 34, 133-146. Aligiannis, N., Kalpou zakis, E., Chinou, I. B., Mi akou, S., Gikas, E. & Tsa bopoulos, A. 2001. Composi ion and an imic obial ac i i y o he essen ial oils o W e axa o Side i is om G eece. Jou nal o Ag icul u e and Food Chemis y, 49, 811–815. Ál a ez, V., Feás, X., Ba os-Velázquez, J. & Aubou g, P. S. 2009. Quali y changes o a med blackspo seab eam (Pagellus boga a eo) subjec ed o slaugh e ing and s o age unde low ice and ozonised low ice. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology, 44, 1561-1571. Aoki, T. & Ueno, R. 1998. In ol emen o ca hepsins B and L in he pos -mo em au olysus o macke el muscle. Food Resea ch In e na ional, 30, 585-592. Ashie, I., Smi h, J. & Simpson, B. 1996. Spoilage and shel -li e ex ension o esh ish and shell ish. C i ical Re iews in Food Science and Nu i ion, 36, 87–121. Aubou g, S., Pé ez-Alonso, F. & Galla do, J. 2004. S udies on ancidi y inhibi ion in ozen ho se macke el (T achu us achu us) by ci ic and asco bic acids. Eu opean Jou nal o Lipid Science and Technology, 106, 232–240. Aubou g, P. S., Tes i, S., Sanxuás, M., Gil, C. & Ba os-Velázquez, J. 2009. Imp o ed quali y and shel li e o a med ou (Onco hynchus mykiss) by whole p ocessing in a combined ozonised low ice e ige a ion sys em. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology, 44, 1595-1601. Au eli, P., Cons an ini, A. & Zolea, S. 1992. An imic obial ac i i y o some plan essen ial oils agains Lis e ia monocy ogenes. Jou nal o Food P o ec ion, 55, 344–348. Badii, F. & Howell, N. 2002. E ec o an ioxidan s, ci a e, and c yop o ec an s on p o ein dena u a ion and ex u e o ozen cod (Gadus mo hua). Jou nal o Ag icul u al and Food Chemis y, 50, 2053–2061. Ba nabé, G. 1989. Acuicul u a. Tomos I y II. Edición española. Ed. Omega. Ba celona. I-INTRODUCCIÓN 46 Boskou, G. & Debe e e, J. 1998. In i o s udy o TMAO educ ion by Shewanella pu e aciens isola ed om cod ille s packed in modi ied a mosphe e. Food Addi i es and Con aminan s, 15, 229-236. B ink, B., Damink, C., Joos en, H. M L. J. & Huisin eld, J. H. 1990. Occu ence and o ma ion o biologically ac i e amines in oods. In e na ional Jou nal o Food Mic obiology 11, 73-84. Bu guess, G. H. O., Cu ing, C. L., Lo e n, J. A. & Wa e man, J. J. 1965. Al e ación del pescado. En: El pescado y las indus ias de i adas de la pesca. (Ed.) Ac ibia, Za agoza, pp. 354-364. Bu , S. 2004. Essen ial oils: hei an ibac e ial p ope ies and po en ial applica ions in oods—a e iew. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology, 94, 223-253. Campos, C., Rod íguez, Ó., Losada, V., Aubou g, S. & Ba os-Velázquez, J. 2005. E ec s o s o age in ozonised slu y ice on he senso y and mic obial quali y o sa dine (Sa dina pilcha dus). In e na ional Jou nal o Food Mic obiology, 103, 121-130. Ci uen es Lemos, J. L., To es-Ga cía, M. P. & F ías Mond agón, M.1997. El océano y sus ecu sos. Acuicul u a. Volumen 11. Fondo de cul u a económica. México. Conselle ía de Pesca e Asun os Ma í imos. 2008. O coope a i ismo no ma . Si uación His ó ica e Po encialidades. h p://www.pescagalicia.com/a qui os/a iculos/1720.pd Do man, H. J. D. & Deans, S. G. 2000. An imic obial agen s om plan s: an ibac e ial ac i i y o plan ola ile oils. Jou nal o Applied Mic obiology, 88, 308-316. Eklund, T. 1983. The an imic obial e ec o dissocia ed and unidssocia ed so bic acid a di e en pH le els. Jou nal o Applied Bac e iology, 54, 383-389. E kan, N. & Mol, S. 2004. The e ec o calcium lac a e ea men on he shel li e and quali y o chub macke el (Scombe japonicus). A chi ü Lebensmi elhygiene, 55, 73–96. FAO. 2010. El es ado mundial de la pesca y la acuicul u a. Roma, FAO. 219P . Fos e , J. W. 1999. When p o ons a ack: Mic obial s a egies o acid adap a ion. Cu en Opinion in Mic obiology, 2, 170-174. F ankel, E. 1991. Re iew: Recen ad ances in lipid oxida ion. Jou nal o he Science o Food and Ag icul u e, 54, 495-511. Fukunaga, K., Suzuki, T. & Takama, K. 1991. E ec o ozone exposu e on he composi ions o gill and e y h ocy e memb ane lipids and p o eins o Japanese cha (Sal elinus leucomaenis). Compa a i e Biochemis y and Physiology, 100B, 481-487. I-INTRODUCCIÓN 47 Gennadios, A. & Ku h, L. B. 1997. Applica ion o edible coa ings on mea s, poul y and sea oods: a e iew. Lebensm.-Wiss. Technology, 30, 337–350. Ghaly, A. E., Da e, D., Budge, S. & B ooks, M. S. 2010. Fish Spoilage Mechanisms and P ese a ion Techniques: Re iew. Ame ican Jou nal o Applied Sciences, 7, 859-877. Gill, C. O. 1982. Mic obial in e ac ion wi h mea s. En: Mea Mic obiology. (Ed.) B own, M. H. Applied Science Publishe L d., Inc. NY. USA, pp. 225-264. Giménez, B., Roncales, P. & Bel an, J. A. 2004. The e ec s o na u al an ioxidan s and ligh ing condi ions on he quali y cha ac e is ics o gil -head sea b eam ille s (Spa us au a a) packaged in a modi ied a mosphe e. Jou nal o Science Food and Ag icul u e, 84, 1053–1060. Glass, K. A. & Johnson, E. A., 2004. An agonis ic e ec o a on he an ibo ulinal ac i i y o ood p ese a i es and a y acids. Food Mic obiology, 21, 675–682. Gogus, U., Bozoglu, F., & Yu dugul, S. 2006. Compa a i e e ec s o lac ic acid, coa ing combined and alone applica ions on some pos mo em quali y c i e ia o e ige a ed Sa dina pilcha dus. Jou nal o Food Quali y, 29, 658-671. Gopina h, S. P., Koche y An hony, M. X., Naga aja ao, R. C., Jagana h, B. & K ishnaswamy, S. G. T. 2007. S anda disa ion o p ocess pa ame es o eady- o-ea squid masala in indigenous polyme -coa ed in- ee s eel cans. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology, 42, 1148–1155. G am, L., T olle, G. & Huss, H. H. 1987. De ec ion o speci ic spoilage bac e ia om ish s o ed al low (0ºC) and high (20ºC) empe a u es. In e na ional Jou nal o Food Micobiology, 4, 65-72. G am, L. 1992. E alua ion o he bac e iological quali y o sea ood. In e na ional Jou nal o Food Micobiology, 16, 121-137. G am, L. & Huss, H. H. 1996. Mic obiological spoilage o ish and ish p oduc s. In e na ional Jou nal o Food Micobiology, 33, 121-37. G am, L. & Dalgaa d, P. 2002. Fish spoilage bac e ia-p oblems and solu ions. Cu en Opinion in Bio echnology, 13, 262-266. Gu ié ez, J., Ba y-Ryan, C. & Bou ke, P. 2008. The an imic obial e icacy o plan essen ial oil combina ions and in e ac ions wi h ood ing edien s. In e na ional Jou nal o Food Mic obiology, 124, 91-97. I-INTRODUCCIÓN 48 Haa d, N. F. 1992. Con ol o chemical composi ion and ood quali y a ibu es o cul u ed ish. Food Resea ch In e na ional, 25, 289-307. Hamme , K. A., Ca son, C. F. & Riley, T. V. 1999. An imic obial ac i i y o essen ial oils and o he plan ex ac s. Jou nal o Applied Mic obiology, 86, 985–990 Hanna, H. Abd El-Baky, Fa ouk, K. El Baz, Gamal, S.E l Ba o y. 2009. E alua ion o Ma ine Alga Ul a lac uca L. as A Sou ce o Na u al P ese a i e Ing edien . Ame ican- Eu asian Jou nal o Ag icul u e and En i onmen Science, 3, 434-444. Ha is, P. & Tall, J. 1994. Rancidi y in ish. En: Rancidi y in oods. (Eds.) J. Allen y R. Hamil on. Chapman y Hall, Lond es (G. B.), pp. 256-272. Heen, E. 1982. De elopmen s in chilling and eezing o ish. In e na ional Jou nal o Re ige a ion, 5, 45-49. He be , R. A. & Shewan, J. M. 1975. P ecu so o ola ile sulphides in spoiling No h Sea Cod (Gadus mo hua). Jou nal o he Science o Food and Ag icul u e, 26, 1195-1202. He be , R. A. & Shewan, J. M. 1976. Roles played by bac e ial and au oly ic enzymes in he p oduc ion o ola ile sulphides in spoiling No h sea cod (Gadus mo hua). Jou nal o he Science o Food and Ag icul u e, 27, 89-94. Hughes, R. B. & Jones, N. R. 1996. Measu emen o hypoxan hine concen a ion in canned he ing as an index o he eshness o he aw ma e ial wi h a commen o la ou ela ions. Jou nal o he Science o Food and Ag icul u e, 17, 434-436. Huss, H. H. 1998. El pescado esco: Su calidad. Documen o écnico de pesca nº348. FAO. Roma. I alia. Hwang, K. & Regens ein, J. 1995. Hyd olysis and oxida ion o macke el (Scombe scomb us) mince lipids wi h NaCl & NaF ea men s. Jou nal o Aqua ic Food P oduc s Technology, 4, 19–30. Jay, J. 1971. Mic obiología mode na de los alimen os. (Ed.) Ac ibia, Za agoza, España, 320 pp. Kilinc, B., Cakli, S., Dince , T. & Tolasa, S. 2009. Mic obiological, chemical, senso y, colo , and ex u al changes o ainbow ou ille s ea ed wi h sodium ace a e, sodium lac a e, sodium ci a e, and s o ed a 4ºC. Jou nal o Aqua ic Food P oduc Technology, 18, 3–17. Kim, C. R., Hea nsbe ge , J. O., Vicke y, A. P., Whi e, C. H. & Ma shall, D.L. 1995. Sodium ace a e and bi idobac e ia inc ease shel li e o e ige a ed ca ish ille s. Jou nal o Food Science, 60, 25–27. I-INTRODUCCIÓN 49 K a , A. A. 1992. Psych o ophic Bac e ia in Foods: Disease and Spoilage, CRC P ess, Inc. Boca Ra on, FL.USA. Lambe , R. J. & S a o d, M. 1999. Weak-acid p ese a i es: modelling mic obial inhibi ion and esponse. Jou nal o Applied Mic obiology, 86, 157-164. Mackie, I. M. 1997. The e ec s o pos -mo em s o age on ish muscle p o eins. En “P occeedings o he Final Mee ing o he Conce ed Ac ion: E alua ion o Fish F eshness”. AIR3CT94 2283. FAIR, EU, pp. 185-189. Mahmoud, B. S. M., Yamazakia, K., Miyashi ab, K., Il-Shick, S., Dong-Sukd, C. & Suzukia, T. 2004. Bac e ial mic o lo a o ca p (Cyp inus ca pio) and i s shel -li e ex ension by essen ial oil compounds. Food Mic obiology, 21, 657-666. Maka ios- Laham, I. & Lee, T. C. 1993. P o ein hyd olysis and quali y de e io a ion o e ige a ed and ozen sea ood due o obliga ely psych ophilic bac e ia. Jou nal o Food Science, 58, 310-313. Mejholm, O. & Dalgaa d, P. 2002. An imic obial e ec o essen ial oils on he sea ood spoilage mic o-o ganism Pho obac e ium phospho eum in liquid media and ish p oduc s. Le e s in Applied Mic obiology, 34, 27-31. Me in, S., E kan, N., Va lik, C. & A an, N. 2001. Ex ension o shel li e o chub macke el (Scombe japonicus Hou uyn 1780) ea ed wi h lac ic acid. Eu opean Food Resea ch and Technology, 213, 174-177. Miguel, G., Simoes, M., Figuei edo, A. C., Ba oso, J. G., Ped o, L. G. & Ca alho, L. 2004. Composi ion and an ioxidan ac i i ies o he essen ial oils o Thymus caespi i ius, Thymus campho a us and Thymus mas ichina. Food Chemis y, 86, 183–188. Mo ei a, M. R., Ponce, A. G., Del Valle, C.E. & Rou a, S. I. 2005. Inhibi o y pa ame e s o essen ial oils o educe a oodbo ne pa hogen. LWT–Food Science and Technology, 38(5), 565–570. Mu amo o, M., Yamamo o, Y. & Seki, N. 1989. Compa ison o calpain o a ious ish miosins in ela ion o hei he mal s abili ies. Bulle in o he Japanese Socie y o Scien i ic Fish, 55, 917-923. Oussalah, M., Caille , S., Saucie , L. & Lac oix, M. 2006. Inhibi o y e ec s o selec ed plan essen ial oils on he g ow h o ou pa hogenic bac e ia: E. coli O157:H7, Salmonella Typhimu ium, S aphylococcus au eus and Lis e ia monocy ogenes. Food Con ol, 18 (5), 414–420. II-PRESENTACIÓN DEL TRABAJO Y OBJETIVOS 56 Es a pa e se co esponde con los capí ulos 1 y 2 de es e abajo, donde se e alúan las en ajas del empleo del hielo líquido ozonizado en especies de acuicul u a. Pa e 2 Su obje i o básico es el de desa olla un sis ema de hielo en escamas a pa i de una disolución come cial (BPS2) de ácidos o gánicos na u ales, e aluando su in luencia a dis in as concen aciones como conse an e en especies come ciales del G an Sol: me luza (Me luccius me luccius), gallo (Lepido hombus whi iagonis) y ape (Lophius pisca o ius). Asimismo, se e alua á el e ec o de la inme sión en la mezcla de ácidos o gánicos del bacaladilla (Mic omesis ius pou assou), especie abundan emen e cap u ada pe o conside ada como desca e, po su ápido de e io o a bo do y po an o de bajo alo come cial en la ac ualidad. Es a pa e se co esponde con los capí ulos 3 y 4, de es e abajo de in es igación, donde se e alúan las en ajas, las concen aciones y el sis ema de aplicación adecuadas del empleo de la solución come cial BPS2, sob e la inhibición de los dis in os mecanismos de al e ación y ex ensión de la ida ú il de especies ma inas ep esen a i as y de g an impo ancia po su alo come cial. Pa e 3 Su obje i o básico es el de e alua el sis ema de hielo en escamas desa ollado a pa i de una disolución de los ácidos cí ico, ascó bico y lác ico II-PRESENTACIÓN DEL TRABAJO Y OBJETIVOS 57 sob e la calidad mic obiológica, bioquímica y senso ial de especies ma inas co espondien es a la denominada pesca de baju a: ju el (T achu us achu us) y caballa (Scombe scomb us). Es a pa e se co esponde a los capí ulos 5 y 6 que comple an la segunda pa e de es e abajo, donde se e alúan las en ajas de la p esencia en el hielo de es os ácidos o gánicos sob e dis in os pa áme os de calidad de las dos especies de baju a e e idas. Pa e 4 Su obje i o básico es e alua el e ec o de un a amien o combinado de acei es esenciales de o égano y omillo y el en asado en a mós e a modi icada sob e la calidad mic obiológica, senso ial y oxidación lipídica en anillas de calama p ecocinadas. Es a pa e co esponde con el capí ulo 7 y úl ima pa e del p esen e es udio. III- MATERIALES Y MÉTODOS III- MATERIALES Y MÉTODOS 61 Ilus ación 5: Ozonizado Ilus ación 4: Gene ado de HL III- MATERIALES Y MÉTODOS 1- SISTEMAS DE PRESERVACIÓN EMPLEADOS 1.1- Sis emas de e ige ación Pa a la p epa ación de hielo adicional en escamas (HT), se empleó un equipo F100 Compac , modelo Icema ic (Cal elmac, Cas el anco, I alia). Pa a ob ene el hielo líquido (HL) se u ilizó un p o o ipo FLO-ICE cedido po Kina ca S.A.U., Vigo, (Ilus ación 4). La mezcla ob enida ue 40% hielo y 60% agua a -1.5ºC, a pa i de agua de ma il ada (salinidad 3,3%). El hielo líquido ozonizado (HLO) se p epa ó a pa i de agua de ma il ada median e el p o o ipo FLO-ICE cedido po Kina ka S.A.U (Vigo) (Ilus ación 5). La composición de hielo líquido ue 40/60 hielo/agua de ma (salinidad 3,3%). El hielo líquido ue es e ilizado median e inyección de ozono. Es a inyección se log ó g acias al sis ema p opo cionado po Cosema Ozono (Mad id). El po encial ue ajus ado a 700 mV (0,2 mg ozono/L) en la ase líquida. III- MATERIALES Y MÉTODOS 62 En el expe imen o de las especies bi al as (capí ulo 2), an o el HT como el HLO ue on en asados al acío en bolsas de polie ileno. El gene ado de acío empleado ue INELVI TV Se ies, model 2000 (INELVI, S a. Coloma de Ce elló, Ba celona). En la Ilus ación 6 se puede e la línea de p oducción de HLO y pos e io en asado al acío pa a los moluscos bi al os. 1.2- Mezcla de ácidos o gánicos na u ales En los capí ulos 3, 4, 5 y 6 se e aluó la e icacia de ácidos o gánicos na u ales (ascó bico, lác ico y cí ico) como sis emas de conse ación in ensi icado es de los mecanismos de p o ección del sis ema de hielo en escamas. Es e apa ado se subdi ide en las dos siguien es pa es: 1.2.1- Fó mula come cial BPS2 La ó mula come cial (BPS2) que incluyó una mezcla de ácidos o gánicos na u ales ue p opo cionada po A lan ic One, S.L (Vigo). Es e p oduc o consis e en un líquido iscoso, soluble en agua, que incluyó ácido ascó bico (AA), ácido cí ico (AC) y ácido lác ico (AL) (1 mequi . ácido/120 mg de p oduc o) en glice ol, Ilus ación 6: Línea de p oducción y en asado de HLO III- MATERIALES Y MÉTODOS 63 eniendo en cuen a la segu idad de su uso en la alimen ación con o me a las adminis aciones ame icana y eu opea (Mad id y col., 1994; Giese y col., 1996). Es a ó mula come cial ue empleada en los es udios co espondien es a los capí ulos 3 y 4. 1.2.2- Elabo ación de hielo incluyendo ácidos na u ales Las disoluciones acuosas p epa adas en nues o labo a o io a pa i de los ácidos o gánicos na u ales pu os, incluye on alo es de concen ación equi a i os de cada uno de los ácidos (ascó bico, lác ico y cí ico), las concen aciones empleadas ue on 0,005% y 0,020% en el caso del ju el y 0,05% en el caso de la caballa. Es as mezclas ue on en asadas en cajas de polie ileno y man enidas en congelación a -20ºC, pa a ob ene un amaño de hielo común en el momen o de su aplicación al ju el (capí ulo 5) y caballa (capí ulo 6). Los ácidos o gánicos empleados en es a in es igación son conside ados segu os pa a uso alimen a io con o me a la adminis ación ame icana y eu opea (Mad id y col., 1994; Giese y col., 1996). 1.3- Cobe u a con acei es esenciales Los acei es esenciales de o égano (O iganum ulga e; AEO) (densidad 0,939 g/l a 25ºC y pun o de ebullición 239ºC) y omillo (Thymus ulga is; AET) (densidad 0,917 g/l a 25ºC y pun o de ebullición 195ºC) ue on adqui idos de Sigma Ald ich, Mad id. La o mulación de la cobe u a consis ió en una mezcla 3:2 de ha ina y agua ía, que pos e io men e se homogeinizó du an e 5 min en Ul a u ax (Janke and Kunkel, Ul a u ax T25). Después de la homogeneización, se añadió a es a III- MATERIALES Y MÉTODOS 64 cobe u a un olumen de acei e esencial seguido de homogenización du an e 1 minu o. Pos e io men e las anillas de calama ue on sume gidas en la cobe u a du an e 2 minu os pa a pos e io men e in oduci se en una eido a (F i au us P o essional 4, Tau us, Ba celona) du an e 20 s y a una empe a u a de 180 ± 2ºC. Después del paso de i u a, las anillas ue on colocadas en bandejas de plás ico (20 cm x12 cm) y en asadas en bolsas e ác iles de plás ico del ipo en mul icapas y coex uido. La mezcla de gases cons i uida po 70% N2, 25% CO2 and 5% O2 ue inyec ada en cada una de las mues as en la elación 1/2 (w/ ) de anillas-a mós e a. Las cajas ue on selladas inmedia amen e pa a ob ene el p oduc o come cial RTE. Cada una de las bandejas es u o cons i uida po 3 anillas de calama , po lo que ue on necesa ias 24 bandejas en el caso del p ime expe imen o con AEO, y 18 bandejas pa a el segundo expe imen o con AET. 2- MATERIA PRIMA DE ESPECIES MARINAS, PROCESAMIENTO Y MUESTREO 2.1- T ucha a co i is La ucha a co i is (Onco hynchus mykiss) se denomina así po las nume osas manchas i isadas en su piel. Es la p incipal especie acuícola de la acuicul u a eu opea, elegida po su al a esis encia y ápido c ecimien o. III- MATERIALES Y MÉTODOS 65 Un o al de 108 ejempla es de ucha a co i is de cul i o p oceden es de Isid o de la Cal (Co uña, España). La longi ud de dichos ejempla es es aba comp endida en e los 25 y 30 cm y su peso osciló en e los 0,23 y 0,33 kg. La mi ad de es os indi iduos ue on sac i icados en la pisci ac o ía median e inme sión du an e 20 minu os en HL y la o a mi ad en HLO. Ambos a amien os ue on empleados como sis emas de e ige ación pa a su aslado al labo a o io du an e 2h, en una p opo ción pescado: hielo 1:1 y a una empe a u a de 0ºC. Una ez allí, los especímenes ue on colocados en una habi ación iso e ma a 1ºC con sus co espondien es sis emas de e ige ación. A día 1, se oma on pa a análisis nue e mues as de cada uno de los lo es y se di idie on en es g upos ( es indi iduos en cada g upo), que se es udia on independien emen e (n=3). En cada día de análisis, se oma on es lo es, con es indi iduos po lo e, pa a cada sis ema de e ige ación. Las omas de mues a se lle a on a cabo en los días 1, 3, 6, 9, 13 y 16 de los días de almacenamien o en e ige ación. Las mezclas de hielo ue on eno adas cuando ue eque ido. Ilus ación 7. Onco hynchus mykiss Nomb e inglés: Fa med T ou Nomb e gallego: T oi a a co da ella III- MATERIALES Y MÉTODOS 72 Ilus ación 16. Scombe scomb us Nomb e inglés: A lan ic macke el Nomb e gallego: Xa da espec i amen e. Una ez en el labo a o io, se sepa a on 9 ejempla es que ue on conside ados como mues a inicial (día 0). Se analiza on es g upos de mane a independien e, con es indi iduos en cada g upo (n=3). Los ejempla es es an es ue on di ididos en es lo es (36 indi iduos en cada uno de los lo es). El p ime lo e ue almacenado en cajas y odeado di ec amen e con el hielo p epa ado median e una solución acuosa de ácidos o gánicos en una concen ación de 0,005% (p/ ) de cada ácido en agua (condición P-1). El segundo lo e ue a ado de igual mane a al an e io pe o la concen ación de la mezcla de ácidos ue 0,020% en agua (p/ ) (condición P-2). El lo e con ol almacenado en cajas, es u o en con ac o solamen e con hielo adicional p epa ado únicamen e a pa i de agua (condición C). Los ejempla es de ju el ue on analizados en los días 4, 7, 11 y 13. En cada pun o de mues eo, se oma on pa a analiza nue e indi iduos de cada lo e, clasi icados en es g upos ( es indi iduos po g upo), siendo analizados de mane a independien e (n=3). Todos los lo es ue on almacenados en una cáma a e mos a izada a 4ºC, y las mezclas de hielo ue on eno adas cuando ue eque ido. 2.6- Caballa Los ejempla es de caballa (Scombe scomb us, 81 indi iduos), ue on cap u ados ce ca de la cos a a lán ica gallega. La longi ud y el peso de los ejempla es de caballa p esen a on un ango comp endido en e 21-25 cm y 175-230 g espec i amen e. III- MATERIALES Y MÉTODOS 73 Una ez en el labo a o io, se sepa a on 9 indi iduos que ue on conside ados como mues as iniciales (día 0). Se analiza on es g upos di e en es de mane a independien e ( es indi iduos po g upo) pa a ealiza el anáisis es adís ico (n=3). El es o de ejempla es se di idie on en dos lo es (36 indi iduos en cada lo e). El p ime lo e ue deposi ado en cajas y odeado con hielo p epa ado median e una disolución acuosa de ácidos o gánicos en una concen ación de 0,050% pa a cada uno de ellos en agua (p/ ) (condición P). El segundo lo e, co espondien e al lo e con ol, ue colocado en cajas y odeado con hielo adicional (condición C). Con el ín de e alua la concen ación de ácidos adecuada pa a se u ilizada en la elabo ación del hielo, se ealiza on ensayos p elimina es con disoluciones p epa adas a pa i de la combinación de los es ácidos. El esul ado ob enido en el análisis isual del pescado pa a el ango de concen aciones comp endidas en e 0,005% y 0,250%, indicó que la concen ación 0,050% e a la más adecuada pa a lle a a cabo la in es igación. En ambos lo es (P y C), la p opo ción empleada pescado-hielo ue 1:1. Todos los lo es ue on almacenados en una cáma a e mos a izada a 4ºC, y las mezclas de hielo ue on eno adas cuando hubo necesidad. Las mues as de caballa de ambos lo es ue on analizadas a días: 3, 6, 10 y 13. En cada día de mues eo, se oma on 9 indi iduos de caballa de cada uno de los lo es pa a su análisis, conside ados en es g upos ( es indi iduos en cada g upo), que ue on analizados de mane a independien e con el in de ealiza el análisis es adís ico (n=3). III- MATERIALES Y MÉTODOS 74 Ilus ación 17. Loligo ulga is Nomb e inglés: Squid Nomb e gallego: Calama 2.7- Anillas de calama Las anillas de calama congeladas ue on suminis adas po una indus ia local especializada en la come cialización de p oduc os del ma del ipo “ eady o ea ”. Las anillas de calama ue on p epa adas a pa i de calama esco y pos e io men e congeladas a -40ºC du an e 1 mes. Los pesos medios de las anillas p esen a on un ango comp endido en e 18-20 g. Se lle a on a cabo dos expe imen os pa a e alua el e ec o de la p esencia de acei e esencial de o égano (AEO) y acei e esencial de omillo (AET). En ambos expe imen os, la descongelación se lle ó a cabo du an e oda la noche en almacenamien o a 4ºC. El p ime expe imen o co espondien e a AEO incluyó 306 anillas de calama , que ue on asignadas de mane a alea o ia a cua o lo es (72 anillas en cada uno). T es de es os lo es ue on p ocesados con la mezcla de cobe u a de AEO en las siguien es concen aciones 0,010% (lo e O-1), 0,025% (lo e O-2) y 0,050% (lo e O-3) (w/w, AEO/calama ). El cua o lo e, designado como lo e con ol (C-O) no con u o o égano. Las anillas es an es (n=18) conside adas como mues as iniciales del expe imen o con o égano, ue on dis ibuidas en es g upos (6 anillas en cada uno) y analizadas independien emen e. El segundo expe imen o co esponde a AET, es e expe imen o incluyó 234 anillas de calama , que ue on asignadas alea o iamen e en 4 lo es (54 anillas en cada lo e). Se p ocedió de igual modo que en el expe imen o an e io , es de los lo es ue on p ocesados con la mezcla de cobe u a de AET en las siguien es III- MATERIALES Y MÉTODOS 75 concen aciones: 0,010% (lo e T-1), 0,025% (lo e T-2) y 0,050% (lo e T-3) (w/w, AET/calama ). El cua o lo e, designado como lo e con ol (C-O) no con u o omillo. Las anillas es an es (n=18) conside adas como mues as iniciales del expe imen o con omillo, ue on dis ibuidas en es g upos (6 anillas en cada uno) y analizadas independien emen e. Los p ocesos de cobe u a, i u a, embalaje y empe a u a de almacenamien o ue on las mismas que en el expe imen o AEO. Las mues as una ez p epa adas, como se indicó en el apa ado 1.4, ue on en asadas bajo a mós e a modi icada y almacenadas en e ige ación a 4º C. Las mues as del expe imen o con AEO ue on omadas pa a análisis en los días: 3, 7, 10 y 14; en el caso del expe imen o con AET, las mues as ue on omadas pa a análisis en días: 5, 8 y 12. Pa a ambos expe imen os, se analiza on 6 bandejas co espondien es a cada uno de los a amien os al mismo iempo de e ige ación. Pa a es e análisis, las bandejas se dis ibuye on en 3 g upos (con dos bandejas po g upo) y cada uno de los g upos ue analizado de mane a independien e. An es de la elección de la concen ación adecuada de AE, se ealiza on ensayos p elimina es con el in de es ablece el máximo de concen ación que se pod ía emplea pa a cada uno de los acei es, sin que es e alo a ec ase al olo del p oduc o. El análisis senso ial de las anillas de calma , lo ealizó un panel de 5 jueces expe os. Las mues as se p esen a on a los panelis as, codi icadas con es dígi os y ue on cali icadas como “a ec ada” “no a ec ada” “dudosa”. Al inaliza es e expe imen o, se llegó a la conclusión que si los acei es esenciales son III- MATERIALES Y MÉTODOS 76 añadidos a concen aciones de 0,075% (p/p) o mayo es, se hace no a la p esencia del acei e esencial en las anillas de calama RTE; po an o, en es e es udio, los alo es de concen ación elegidos, ue on meno es de 0,075%. 3- ANÁLISIS DE PARÁMETROS RELACIONADOS CON LA CALIDAD 3.1- Análisis senso ial La e aluación de la calidad senso ial en los moluscos bi al os, an o en c udo como cocinados, se lle ó a cabo po un panel de cinco jueces expe imen ados, quienes, du an e 10 años, han analizado di e en es clases de p oduc os ma inos. Las mues as de bi al os se cocina on a 100ºC du an e 5 minu os en HLO (lo e HLO) o en agua esca suplemen ada con 3,3% de NaCl (lo e HT). Las mues as de bi al os c udas y cocidas (140 g) se p esen a on de mane a indi idual a los panelis as. La pa e comes ible se e i ó de la concha, de mane a que se consiguió al menos 20 g de pa e comes ible. Las mues as ue on p epa adas en una habi ación y analizadas en una habi ación aislada, bien en ilada y con buena luz. Los panelis as pun ua on olo y apa iencia de las mues as de bi al os, an o c udas como cocidas, de acue do a las indicaciones p esen adas en la Tabla 1 (Anonymous, 1999). Se u ilizó una escala de alo ación de 1-5, siendo la pun uación de 5 co espondien e a la máxima calidad y 1 pa a la peo calidad. En el caso de las mues as cocinadas, los paneli as e alua on además la jugosidad de las mues as usando la escala de pun uación de 1 a 5. III- MATERIALES Y MÉTODOS 77 A ibu o Escala 5 Escala 4 Escala 3 Escala 2 Escala 1 Olo F esco y ca ac e ís ico A ma Sin olo , as coce ag adable Lige o pú ido Pú ido Apa iencia Val as ce adas Val as abie as se cie an al golpea las. Músculo adhe ido a las al as y de aspec o esponjoso Val as semiabie as no cie an al golpea las. Músculo adhe ido a las al as se man iene el colo Val as abie as con lexibilidad. El músculo se suel a ácilmen e. Pé didad lige a de colo Val as abie as. Tendencia a sepa a se Pé dida o al del colo Jugosidad/ Sabo Al a jugosidad Sin pé dida de agua Jugosidad media Sin pé dida de agua Jugosidad media y pé dida de agua Pé dia de agua y de jugosidad Tabla 1: C i e ios de calidad senso ial pa a bi al os La e aluación de calidad senso ial en el pescado, ue ealizada po un panel de cinco jueces expe imen ados, de acue do a las indicaciones p esen adas en la Tabla 2 (Council Regula ion, 1989). Los análisis senso iales se lle a on a cabo con los especímenes de pescado en e os. Se es ablecie on cua o ca ego ías: (E) al a calidad, (A) buena calidad, (B) calidad acep able, (C) calidad inacep able. Las mues as de análisis senso ial ue on a adas en una sala de p epa ación y se analiza on en una habi ación aislada, bien en ilada y con buena iluminación. Se examina on los siguien es a ibu os: piel, ojos, olo ex e no, b anquias, consis encia y olo del músculo. El colo de las mues as se e aluó como un aspec o subjec i o del a ibu o de la piel. En cada día de mues eo, las mues as de pescado ue on codi icadas y p esen adas a los panelis as de mane a ciega, siendo pun uadas indi idualmen e. El papel de expe os compa ió odas las mues as. III- MATERIALES Y MÉTODOS 78 A ibu o Calidad al a (E) Buena Calidad (A) Calidad acep able (B) Rechazable (C) Piel Mucosidad anspa en e; pigmen ación in ensa Mucosidad lechosa; pé didas insigni ican es de pigmen ación Mucosidad débilmen e g is; pigmen ación sin b illo Mucosidad opaco; impo an es pé didas de pigmen ación Olo ex e no Ma cadamen e a algas y c us áceos Débilmen e a algas y c us áceos Incipien emen e ag io y ancio Ma cadamen e ag io o ancio B anquias Colo ojo b illan e; sin olo ; láminas pe ec amen e sepa adas Colo osa; sin olo ; láminas adhe idas en g upos Colo débilmen e pálido; olo incipien emen e pú ido; láminas adhe idas en g upos Colo g is ama illen o; olo pú ido; láminas o almen e adhe idas Consis encia P esencia o apa ación pa cial de igo mo is Fi me y elás ica; los signos de p esión desapa acen inmedia amen e y comple amen e Elas icidad no ablemen e educida; p esencia de signos mecánicos Cambios impo an es en la o ma debido a ac o es mecánicos Olo del músculo Ma cadamen e a algas y c us áceos Débilmen e a algas y c us áceos Incipien emen e ag io o ancio Ma cadamen e ag io o ancio Ojos Con exos; có nea anspa en e; pupila neg a b illan e Con exos y débilmen e hundidos; có nea débilmen e opalescen e; pupila neg a nublada Planos; có nea opalescen e; pupila opaca Cóca os y có nea lechosa; ó ganos in e nos mo idos Tabla 2. C i e ios de calidad senso ial del pescado. Council Regula ion (1989) 3.2- Análisis Mic obiológico 3.2.1- P epa ación de las mues as Pa a ealiza el análisis mic obiológico de las mues as, se ealizó una e apa de p epa ación median e una se ie de equipos, ma e iales y medios de cul i o. Inicialmen e se omó una po ción de mues a en cáma a de lujo lamina y en condiciones asép icas. Es a po ción de mues a se colocó en una bolsa es é il con un olumen (1/9) (p/ ) de agua de pep ona (Me ck, Da ms ad , Ge many). Es a mezcla se homogeneizó en un mas ica o (AES, Combou g, F ance) (Ben-Gigi ey y col., 1998, 1999). En el caso del análisis de la supe icie del pescado, 5 cm2 de III- MATERIALES Y MÉTODOS 79 la supe icie de las mues as ue on o adas con un hisopo. La ca ga mic obiológica del hisopo ue esuspendida en 10 ml de agua de pep ona. Se ealiza on diluciones se iadas de los ex ac os mic obiológicos p epa ados con el agua de pep ona pa a los dos casos an e io es y pos e io men e se lle ó a cabo el análisis mic obiológico cuan i a i o. 3.2.2- Mic obio a ae obia mesó ila Los mic oo ganismos ae obios mesó ilos ue on in es igados en Pla e Coun Aga (PCA, Oxoid L d, London, UK), después de incubación a 30ºC du an e 48 ho as (Ben-Gigi ey y col., 1998, 1999). 3.2.3- Mic obio a anae obia Los mic oo ganismos anae obios ue on in es igados en Pla e Coun Aga (PCA, Oxoid L d, London, UK), después de incubación a 30ºC du an e 48 ho as en el in e io de una ja a de anae obiosis y bajo a mós e a anae obia (Oxoid) (Ben-Gigi ey y col., 1998, 1999). 3.2.4- Mic obio a psic ó ila Los mic oo ganismos psic ó ilos ue on in es igados en Pla e Coun Aga (PCA, Oxoid L d, London, UK), después de incubación a 7-8ºC du an e 7 días) (Ben-Gigi ey y col., 1998, 1999). 3.2.5- En e obac e iaceae En e obac e iaceae ue on in es igados median e aga glucosa ojo iole a bilis (VRBG) (Me ck, Da ms ad , Alemania) después de incubación a 30 ºC du an e 24 h (Me ck Mic obiology Manual, 2002). III- MATERIALES Y MÉTODOS 80 3.2.6- Mic obio a p o eolí ica Los mic oo ganismos que exhiben un eno ipo p o eolí ico ue on in es igados en aga -caseína as su incubación a 30ºC du an e 48h (Ben-Gigi ey y col., 2000; Pha y col., 1994). 3.2.7- Mic obio a lipolí ica Los mic oo ganismos que exhiben un eno ipo lipolí ico ue on in es igados en aga - ibu i ina después de se incubados a 30ºC du an e 48 h (Ben-Gigi ey y col., 2000). 3.3- Análisis Bioquímicos 3.3.1- Valo ación de pH Se u ilizó un pHme o (C ison, Ba celona) p o is o de un elec odo de pene ación de 6 mm de diáme o. Pa a su calib ación se u iliza on soluciones pa ón de pH 4 y 7, siguiendo los mé odos o iciales de análisis. La lec u a del pH se e ec uó median e pene ación del elec odo en el músculo en los pun os de mues eo es ablecidos. 3.3.2- Análisis composicional El con enido en agua ue de e minado po la di e encia de peso de músculo homogeneizado (1-2 g) y el peso después de man ene du an e 24 h a 105ºC. Los esul ados ue on exp esados como g agua/100g músculo. Los lípidos ue on ex aídos y de e minados po el mé odo de Bligh & Dye (1959). Los esul ados se exp esa on en g lípidos/ 100g músculo húmedo. III- MATERIALES Y MÉTODOS 81 3.3.3- Índice de pe óxidos El índice de pe óxidos (PV), medida de la oxidación lipídica p ima ia, ue de e minado espec o o omé icamen e (Beckman Coul e , DU 640, London, UK) en los ex ac os lipídicos median e p e ia educción de una alícuo a con iociana ao é ico (mé odo Chapman & McKay, 1949). Los esul ados se exp esan como mequi . de oxígeno ac i o/ kg lípidos. 3.3.4- Índice de ácido ioba bi ú ico El índice de ácido ioba bi ú ico (TBA-i), indica i o de la oxidación lipídica secunda ia, ue de e minado de acue do con el mé odo Vyncke (1970). Es e mé odo es á basado en la eacción en e el ex ac o del músculo de pescado en iclo oacé ico y el ácido ioba bi ú ico. El con enido en sus ancias eac i as al ácido ioba bi ú ico (TBARS) ue medido espec o o omé icamen e a 532 nm y los esul ados ue on exp esados como mg malondialdehído/ kg músculo. 3.3.5- Fo mación de compues os luo escen es La o mación de compues os luo escen es, medida de la oxidación lipídica e cia ia, ue de e minada median e espec o luo íme ía (Fluo ime o LS 45, Pe kin, Elme España, T es Can os, Mad id), as medidas a 393/463 nm y 327/415 nm (Aubou g y col., 2004). La luo escencia ela i a (RF) ue calculada como sigue: RF= F/Fs , donde F es la luo escencia media a cada máximo de exci ación/emisión y Fs es la in ensidad de la luo escncia de una disolución de sul a o de quinina (1 µg/ml en 0,05M H2SO4) a la co espondien e longi ud de onda. La elación de luo escencia (FR) ue calculada como la elación de los dos alo es ela i os: FR = RF393 ⁄ 463 nm ⁄ RF327 ⁄ 415 nm. El alo de FR ue de e minado Pa e 1 CAPÍTULO 1: Imp o ed quali y and shel li e o a med ou (Onco hynchus mykiss) by whole p ocessing in a combined ozonised low ice e ige a ion sys em. Mejo a de la calidad y de la ida ú il de ucha a co i is (Onco hynchus mykiss) median e conse ación en un sis ema combinado de hielo líquido y ozono. O iginal a icle Imp o ed quali y and shel li e o a med ou (Onco hynchus mykiss) by whole p ocessing in a combined ozonised flow ice e ige a ion sys em San iago P. Aubou g, 1 Sil ia Tes i, 2 Minia Sanxua ´s, 3 Ca olina Gil 1 & Jo ge Ba os-Vela ´zquez 3 * 1 Depa men o Sea ood Chemis y, Ins i u e o Ma ine Resea ch (IIM-CSIC), C ⁄Edua do Cabello 6, E-36208 Vigo, Spain 2 Depa men o Ve e ina y Mo pho-Physiology Sciences and Animal P oduc ion, Uni e si y o Bologna, Bologna, I aly 3 LHICA, Depa men o Analy ical Chemis y, Nu i ion and Food Science, School o Ve e ina y Sciences, Uni e si y o San iago de Compos ela, E-27002 Lugo, Spain (Recei ed 11 Augus 2008; Accep ed in e ised o m 13 No embe 2008) Summa y A combined e ige a ion sys em consis ing o ozone and flow ice was e alua ed o he sac ifice, cooling and chilled s o age o con inen al ou . The ba ch p ocessed in ozonised flow ice exhibi ed significan (P< 0.05) educ ions (0.97 and 1.51 log CFU cm )2 ) in skin ae obes and psych o ophs on days 6 and 9, espec i ely, and significan (P< 0.05) educ ions (0.94 log CFU g )1 and 0.96 log CFU g )1 ) in ae obes, and p o eoly ic bac e ia in muscle on day 13. A significan (P< 0.05) inhibi ion o TMA-N o ma ion a e 9 days was also obse ed, wi h an a e age educ ion o 28.4% along he s o age pe iod, Sligh educ ions in au oly ic b eakdown mechanisms we e also obse ed in he ozonised ba ch, a maximum educ ion o 14.82% being eached on day 13. The mic obial and biochemical changes we e well co ela ed wi h he senso y e alua ion, which e ealed ele an diffe ences be ween he ba ches on day 13 and a shel li e ex ension o he ozonised ba ch up o day 16. Keywo ds Chilled s o age, fish p ocessing, flow ice, ozone, quali y, e ige a ion, shel li e, slaugh e , ou . In oduc ion Flow ice (FI) – also known as slu y ice, fluid ice o liquid ice – is an ad anced e ige a ion me hod o he sub-ze o s o age o fish and o he ood p oduc s. FI consis s o a biphasic ice–wa e suspension ha p o ides a ema kably high chilling a e when compa ed wi h al e na i e and mo e adi ional e ige a ion sys ems such as flake ice o chilled wa e . FI also p e en s he physical damage suffe ed by sea ood p oduc s hanks o he sphe ical geome y o i s mic oscopic pa icles, which a e less ha sh o he p oduc han he acicula e c ys als o con en ional flake ice. FI can also be pumped, hus allowing a mo e hygienic manne o fish p ocessing and p ocess au oma ion ( o a e iew: Pin ˜ei o e al., 2004). In ecen yea s, sound scien ific e idence has confi med he heo e ical ad an ages o FI o he e ige a ion o ma ine fish specimens. Thus, as he pionee wo ks wi h finfish (Chapman, 1990) and albaco e (P ice e al., 1991), o he mo e ecen epo s o u bo (Rod ı´guez e al., 2006), sa dine (Losada e al., 2004; Campos e al., 2005) and ho se macke el (Rod ı´guez e al., 2005), FI sys ems ha e p o ided quali y e en ion and shel li e ex ension in ma ine fish species. The p esen wo k was aimed a gaining scien ific da a a h ee diffe en le els: (i) he sui abili y o no o he applica ion o FI sys ems o con inen al species such as ou , a fish species whose a ming is making i mo e eadily a ailable and be e app ecia ed by Eu opean consume s; (ii) he use ulness o FI sys ems o he whole p ocessing o esh fish ma e ial, his including slaugh e , chilling and e ige a ed s o age; (iii) he benefi s o he combina ion o FI and ozone o he whole p ocessing o a med ou . Ozone has adi ion- ally been used as a disin ec an o esh wa e aquacul u e sys ems, and i s applica ions o imp o ing he senso y quali y and shel li e o fish ha e been desc ibed ecen ly (Ko ¨ e s e al., 1997; Kim e al., 1999, 2000; Campos e al., 2005; Rod ı´guez e al., 2006). The mic obial iden i y o he bac e ia p esen in ou in es ine has been s udied (Spanggaa d e al., 2000), al hough no quan i a i e in o ma ion is cu en ly a ail- able abou mic obial ac i i y in ou muscle as affec ed by diffe en p ese a ion echniques. On compa ing e ige a ion sys ems and o he p ocessing me hods, quali y con ol is manda o y o *Co esponden : Fax: +34 982 252195; e-mail: [email p o ec ed] In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009, 44, 1595–1601 1595 doi:10.1111/j.1365-2621.2008.01889.x 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology elucida e he significance o he diffe ences obse ed ( o a e iew, see A ani oyannis e al., 2005). Thus, chem- ical pa ame e s such as o al ola ile base ni ogen (TVB-N), ime hylamine-ni ogen (TMA-N) and hio- ba bi u ic acid-index (TBA-i) ha e been success ully employed o elucida e he app op ia eness o no o he i adia ion o sea bass (O ¨zden e al., 2007). Likewise, gu ed and ungu ed e ige a ed sea b eam and sea bass ha e been s udied compa a i ely by means o chemical – TVB-N, TMA-N, TBA-i– , mic obiological – ae obic mesophiles and psych ophilic bac e ia – , and senso y analyses (Cakli e al., 2006). Also, mechanical me hods and compu e image analyses ha e been conside ed o complemen senso y analyses in ce ain specific cases, such as he de ec ion o blood esidues in e ige a ed a med u bo (Ro h e al., 2007). In his wo k, we e alua ed an in eg al slaugh e , chilling and s o age e ige a ion sys em – esul ing om he combina ion o ozone and FI – o a med ou . The effec s o FI sys ems on he quali y o ou specimens we e e alua ed by assessing ele an bio- chemical, senso y and mic obial quali y indica o s. Ma e ials and me hods Re ige a ion sys ems Flow ice was p epa ed using a FLO-ICE p o o ype (Kina ca S.A.U., Vigo, Spain). The composi ion o he FI bina y mix u e was 40% ice and 60% wa e , p epa ed om fil e ed seawa e (salini y: 33.0 g kg )1 ). The empe a u e o he FI mix u e was )1.5 C. When equi ed, injec ion o ozone in o he FI mix u e was accomplished wi h a p o o ype p o ided by Cosema Ozono (Mad id, Spain), he edox po en ial being adjus ed o 700 mV (0.20 mg ozone L )1 ). In his ba ch, he ozone concen a ion was cons an ly moni o ed by checking he edox po en ial in he liquid phase. Fish ma e ial and sampling p o ocol Specimens (108 indi iduals) o ainbow ou (On- co hynchus mykiss) (weigh ange: 0.23–0.33 kg; leng h ange: 25–30 cm) we e ob ained om an aquacul u e acili y (Isid o de la Cal, La Co una, Spain) and we e sac ificed a he a m by imme sion o a leas 20 min in ei he FI (54 indi iduals) o ozonised FI (OFI: 54 indi iduals). The fish specimens we e no headed o gu ed. In bo h sys ems, he fish we e su ounded by FI o OFI a a 1:1 fish- o-ice a io and anspo ed o 2 h a 0 C o he labo a o y. Then, he specimens we e main ained in hei co esponding icing medium and placed di ec ly in an iso he mal oom a +1 C. On day 1, nine specimens om each ba ch we e aken o analysis and di ided in o h ee g oups ( h ee indi iduals in each g oup), which we e s udied sepa a ely (n= 3). Once he specimens had been subjec ed o senso y analyses, he whi e muscle was dissec ed ou asep ically and used o mic obial and biochemical analyses. Fish sampling was pe o med on days 1, 3, 6, 9, 13 and 16 o e ige a ed s o age, acco ding o he same sampling design (n= 3). Senso y analyses Senso y analyses we e pe o med wi h whole fish, ollowing official guidelines conce ning esh and e ig- e a ed fish (Council Regula ion, 1989). Fou ca ego ies we e anked: highes quali y (E), good quali y (A), ai quali y (B), and unaccep able quali y (C). The samples o senso y analysis we e handled in a p epa a ion oom and we e analysed in a well- en ila ed isola ed oom p o ided wi h good ligh ing. The ollowing a ibu es we e examined: skin, eyes, ex e nal odou , gills, consis- ency and flesh odou . The colou o he samples was e alua ed as a subjec i e aspec o he ‘skin’ a ibu e. A each sampling ime, coded fish specimens we e p esen ed o panellis s in a ‘blind’ manne , and we e sco ed indi idually. Panel membe s sha ed he samples es ed. The senso y analyses we e conduc ed by a panel consis ing o fi e expe ienced judges who had been in ol ed in he senso y analysis o diffe en fish species o 10 yea s. P io o his s udy, he panellis s we e specially ained wi h chilled ainbow ou by means o he disc imina i e iangle es (ISO s anda d 4120). This me hod can be applied o e eal sligh diffe ences be ween fish samples. The diffe ences conce n all he a ibu es o he samples, he p inciple consis ing o he simul aneous p esen a ion o he panellis s o a se o h ee coded samples, wo o which a e iden ical. The panellis s we e ained in basic aspec s, he mos equen fish aspec and odou , and had o lea n he diffe ence be ween off-fla ou and ain s in ainbow ou . Chemical and mic obial quali y indices we e also de eloped o he s anda d e e ence samples o assis in he s anda disa ion o he judges’ e alua ion o p oduc senso y a ibu es. The judges had o demons a e hei compe ency o e alua e he fish specimens in compliance wi h he s anda ds. Mic obiological analyses Fish skin sec ions o 5 cm 2 we e swabbed wi h 1 g L )1 o s e ile pep one wa e (Oxoid L d., London, UK) and he mic obial load was esuspended in 10 mL o pep one wa e (1 g L )1 ). In pa allel, samples (5 g) o fish muscle we e also dissec ed ou asep ically om skinned chilled specimens, mixed wi h 45 ml o pep one wa e (1 g L )1 ), and homogenised in a s omache (Sewa d Medical, London, UK). In bo h cases, se ial dilu ions om he skin o muscle mic obial ex ac s we e p epa ed in P ese a ion o ou in ozonised flow ice S. P. Aubou g e al.1596 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology pep one wa e (1 g L )1 ). To al ae obic and psych o- ophic bac e ia om su ace and muscle samples we e in es iga ed in Pla e Coun Aga (PCA; Oxoid) a e incuba ion a 30 C o 48 h o a 7–8 C o 10 days, espec i ely, as desc ibed elsewhe e (Ben-Gigi ey e al., 1998; Rod ı´guez e al., 2004). Mic oo ganisms exhibi ing a p o eoly ic pheno ype we e in es iga ed in casein-aga medium, as p e iously desc ibed (Phaff e al., 1994). Chemical analyses Analysis o he au oly ic nucleo ide deg ada ion a e was ca ied ou by HPLC as desc ibed elsewhe e (Ryde , 1985). The K alue was calcula ed acco ding o he ollowing concen a ion a io: K alue = 100 ·(hypo- xan hine + inosine) ⁄(adenosine iphospha e + aden- osine diphospha e + adenosine monophospha e + inosine monophospha e + inosine + hypoxan hine). TVB-N con en s we e measu ed as desc ibed elsewhe e (Aubou g e al., 1997). B iefly, fish muscle (10 g) was ex ac ed wi h 6% pe chlo ic acid and olume was b ough up o 50 mL. A e s eam-dis illa ion o he acid ex ac s ende ed alkaline o pH 13 wi h NaOH (200 g L )1 ), TVB-N con en s we e de e mined by i a- ion o he dis illa e wi h 10 mmHCl. The esul s we e exp essed as mg TVB-N kg )1 muscle. TMA-N alues we e de e mined by he pic a e me hod, as p e iously desc ibed (Tozawa e al., 1971). This in ol es he p epa a ion o a 50 g L )1 ichlo oace ic acid ex ac o fish muscle. The esul s a e exp essed as mg TMA-N kg )1 muscle. The lipid ac ion was ex ac ed using he me hod o Bligh & Dye (1959). Lipid oxida ion was assessed wi h he TBA-i, which was de e mined acco ding o Vyncke (1970). The esul s a e exp essed as mg malondialdehyde kg )1 fish sample. The ee a y acid (FFA) con en was de e mined using he Low y and Tinsley me hod, based on complex o ma ion wi h cup ic ace a e–py idine (Low y & Tinsley, 1976). The esul s a e exp essed as g FFA kg )1 lipids. S a is ical analyses A mul i a ia e analysis was pe o med o s udy he effec o each e ige a ion sys em on he mic obiolog- ical and chemical pa ame e s. One-way analysis o a iance (ano a) was also used o explo e significance o diffe ences among mic obiological and chemical pa ame e s h oughou s o age o each e ige a ion sys em. Mul iple compa isons be ween pa ame e s we e ca ied ou wi h he DMS es . All es s we e ca ied ou using he spss so wa e (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). In all cases, a confidence in e al a he 95% le el (P< 0.05) was conside ed. Resul s and discussion Senso y analyses The esul s o he senso y analyses a e shown in Table 1. I may be obse ed ha he ou specimens p ocessed in he combined sys em o FI and ozone e ained a good quali y (E o A ca ego ies) up o day 13, excep o he gill aspec . Howe e , when FI was used alone, good quali y was only e ained up o day 6 (Table 1). Wi h espec o he in es iga ion o colou , his was included as a pa o he ‘skin’ a ibu e, and his pa ame e affo ded be e sco es o he OFI ba ch on days 6, 9 and 13 o e ige a ed s o age as compa ed o he FI ba ch. I is ema kable ha he limi ing ac o o senso y accep abili y in he FI ba ch was he ex e nal odou , which led o ejec ion o he FI ba ch on day 16. P e ious wo k ca ied ou a ou labo a o y has indica ed ha con inen al ou specimens o simila sizes o hose s udied he e ha e an a e age shel li e o 13 days, his being in ag eemen wi h he esul s ob ained o he FI ba ch. Thus, acco ding o he senso y e alua ion he combined use o FI and ozone may inc ease he shel li e o con inen al ou sligh ly om 13 o 16 days. Table 1 Compa a i e senso y e alua ion o ou s o ed in ba ches S o age ime (days) 1 3 6 9 13 16 FI OFI FI OFI FI OFI FI OFI FI OFI FI OFI Skin E E E E A E B A B A B B Eyes E E E E E E A A B A B B Ex e nal odou E E E E E E A A B A C B Gills E E E E A A B B B B B B Consis ency E E A A A A A A A A B B Flesh odou E E E E E E A A A A A A FI, flow ice; OFI, ozonised flow ice; E, highes quali y; A, good quali y; B, ai quali y; C, unaccep able quali y. P ese a ion o ou in ozonised flow ice S. P. Aubou g e al. 1597 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009 P e ious s udies ha e epo ed ha he applica ion o ozone ex ends he shel li e o ockfish (Sebas es spp.) (Ko ¨ e s e al., 1997), and ca fish (Ic alu us punc a us) fille s (Kim e al., 2000). O he au ho s ha e also epo ed educ ions in he discolo a ion a e o minced ho se macke el as a benefi o washing wi h ozonised wa e (Chen e al., 1997), and a be e main enance o he senso y quali y o scad (T achu us achu us) ea ed on-boa d wi h gaseous ozone (Da Sil a e al., 1998). Likewise, a p e ious s udy pe o med a ou labo a o y epo ed o he fi s ime he moni o ed applica ion o ozone in he liquid phase o a subze o biphasic ice–wa e mix u e o he s o age o a ma ine fish species; namely, u bo (Pse a maxima) (Rod ı´guez e al., 2006). The p esen s udy p o ides e idence o he fi s ime o he use ulness o he combina ion o ozone and FI o he ex ension o shel li e o a con inen al fish species, in his case ou . Mic obiological analyses Mic obial de elopmen in ou muscle among chilled s o age is shown in Table 2. The use o FI alone (FI ba ch) p o ed o be an accu a e p ocessing s a egy o he slaugh e , chilling and e ige a ed s o age o ou . Thus, he esul s depic ed in Table 2 o ha ba ch clea ly indica e a slow mic obial g ow h in ou muscle acco d- ing o he h ee mic obial pa ame e s es ed. I is ema kable ha mic obial numbe s emained below 3 log CFU g )1 e en up o day 9 o s o age, a esul ha is co ela ed well wi h he senso y quali y in es iga ed in pa allel (Table 1). Significan (P< 0.05) inc eases in mic obial numbe s we e obse ed du ing ad anced pe i- ods o s o age (day 13 and onwa ds, Table 2). Howe e , e en a e 16 days o s o age, he mic obial coun s in he FI ba ch did no each concen a ions o 6 log CFU g )1 , his alue being below hose conside ed necessa y o induce fish spoilage (G am & Huss, 1996). These esul s clea ly indica e ha he apid chilling condi ions p o ided by he FI mix u e, oge he wi h i s hygienic aspec , p o ided a good mic obial con ol o e ige a ed ou . Rega ding he assessmen o he whole p ocessing o ou in OFI, his sys em led o lowe mean coun s o ae obic mesophiles and psych o ophic and p o eoly ic bac e ia in ou muscle, when compa ed wi h he FI ba ch (Table 2). Thus, s a is ical analyses e ealed significan (P< 0.05) diffe ences be ween he FI and OFI ba ches o ae obic mesophiles (s o age days 3, 9 and 13), psych o ophs (s o age days 3, 6, 9 and 13) and p o eoly ic bac e ia (s o age days 6, 9 and 13) (Table 2). Mo eo e , mic obial g ow h was slowe in he OFI ba ch han in he FI coun e pa , he numbe s being below 4 log CFU g )1 e en a e 13 days o s o age. Conside ing he whole s o age pe iod o 16 days, he mean diffe ences be ween ba ches we e 0.42 log CFU g )1 , 0.44 log CFU g )1 and 0.46 log CFU g )1 uni s o he ae obes, psych o ophs, and p o eoly ic bac e ia espec i ely. The assessmen o mic obial g ow h on ou skin along chilled s o age is shown in Table 3. Two mic obial g oups we e in es iga ed in his phase: mesophilic and psych o ophic bac e ia. The mic obial popula ions inc eased wi h s o age ime in bo h ba ches bu he coun s emained below 4 log CFU cm )2 e en a e 16 days o s o age. This indica es a e y limi ed mic o- bial g ow h a su ace le el. The su ace washing o ou skin caused by he FI could accoun o he low su ace numbe s de e mined in his con inen al fish species, as has been desc ibed o ma ine fish species (Campos e al., 2005; Rod ı´guez e al., 2005, 2006). Howe e , he combined use o ozone and FI (OFI ba ch) exe ed an addi ional educing effec on mic obial numbe s a e 3 days o s o age (Table 3). Conside ing he whole s o age pe iod o 16 days, he mean diffe - ences be ween ba ches we e 0.20 log CFU cm )2 and 0.26 log CFU cm )2 o he ae obes and psych o ophs espec i ely. Rema kably, s a is ically significan (P< 0.05) diffe ences we e obse ed be ween he ba ches o a leas one o he mic obial g oups in es iga ed on days 6, 9 and 13 o e ige a ed s o age (Table 3). The abili y o ozone o inac i a e ood su aces has been a ma e o deba e. Some au ho s ha e epo ed ha ozone dec eases he su ace mic obial load o fish du ing i s chilled s o age (Dondo e al., 1992; Da Sil a e al., 1998). In con as , o he au ho s ha e sugges ed Table 2 Compa a i e mic obial g ow h in ou muscle s o ed in flow ice (FI) o ozonised flow ice (OFI) S o age ime (days) Ae obic mesophiles (log CFU g -1 ) Psych o ophes (log CFU g -1 ) P o eoly ic bac e ia (log CFU g -1 ) FI OFI FI OFI FI OFI 1 1.62 a (0.33) 1.61 a (0.37) 1.10 a (0.15) 1.00 a (0.00) 2.32 a (0.47) 1.99 a (0.00) 3 2.45 b (0.13) 2.08 a (0.17) 2.19 b (0.37) 1.33 a (0.30) 2.83 a (0.65) 2.64 a (0.66) 6 1.94 a (0.34) 1.83 a (0.04) 2.54 b (0.35) 1.79 a (0.29) 2.48 b (0.32) 1.98 a (0.00) 9 2.67 b (0.26) 1.78 a (0.25) 1.67 b (0.14) 1.10 a (0.15) 2.67 b (0.25) 2.15 a (0.15) 13 4.42 b (0.27) 3.48 a (0.35) 4.24 b (0.15) 3.82 a (0.11) 4.21 b (0.35) 3.25 a (0.32) 16 5.91 a (0.80) 5.76 a (0.60) 5.64 a (0.80) 5.74 a (0.50) 5.87 a (0.13) 5.65 a (0.56) Resul s a e a e age alues and s anda d de ia ions (be ween b acke s). Resul s ollowed by di e en le e s a e s a is ically di e en (P< 0.05). P ese a ion o ou in ozonised flow ice S. P. Aubou g e al.1598 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology ha ozone inac i a es bac e ia less effec i ely when hey a e a ached o solid su aces when compa ed wi h low ozone-demand liquid media (Kim e al., 1999). The esul s ob ained by us he e indica ed a sligh educ ion in he mic obial popula ions p esen on he su ace o ou due o ozone, suppo ing he o me s a emen . The esul s o mic obial analyses o ou s o ed in OFI we e also well co ela ed wi h hose o he senso y analyses, he la e indica ing a sligh ly be e quali y main enance in he OFI ba ch when compa ed wi h he FI ba ch (Table 1). Acco ding o ou esul s, he combined use o FI and ozone o he slaugh e , chilling and s o age o con inen al ou p o ides an addi ional ad an age a mic obial le el, as de e mined by he mic obial numbe s p esen in he fish skin and flesh along 16 days o s o age. Al hough mic obial g ow h was significan ly slowed down in ce ain s o age pe iods in he OFI ba ch, none o he mic obial g oups in es iga ed eached coun s highe han 10 6 CFU g )1 , also indica ing ha mic obial spoilage is no he limi ing ac o o accep abili y o con inen al ou . Chemical analyses The chemical pa ame e s in es iga ed in ou muscle along s o age a e shown in Table 4. Wi h espec o he au oly ic nucleo ide deg ada ion a e, he K alue inc eased o alues abo e 80 a e 9 days o s o age in bo h ba ches. No significan (P> 0.05) diffe ence was obse ed be ween he ozonised and he non-ozonised FI ba ches excep o day 13, on which a lowe K alue was de e mined in he OFI ba ch. The o ma ion o TVB-N was assessed in bo h ba ches, no significan (P> 0.05) diffe ence being obse ed be ween ei he s o age sys ems. Mo eo e , he e olu ion o TVB-N concen a ions along s o age in ei he o he s o age sys ems es ed did no show any significan a ia ions, in all cases such concen a ions being below 250 mg kg )1 muscle e en a e 16 days o s o age (Table 4). These esul s sugges ha TVB-N, which is a widely used pa ame e o assess he quali y e olu ion o ma ine fish species, is no use ul as a quali y indica o o ou quali y. Thus, e en when senso y analysis indica ed an unaccep able quali y, he le els o TVB-N we e no significan ly (P> 0.05) diffe en om he ini ial ones (Table 4). Unlike TVB-N, he e olu ion o TMA-N con en s in bo h ba ches p o ided significan (P< 0.05) diffe ences be ween ba ches (Table 4). Thus, on day 9 and onwa ds s a is ically significan (P< 0.05) diffe ences in TMA- N con en s we e obse ed be ween he FI and OFI ba ches. Rema kably, on day 13 he TMA-N con en o he FI ba ch was almos double ha de e mined in he OFI ba ch. These esul s sugges ha he inco po a ion o ozone in he OFI ba ch significan ly educes he g ow h o TMA-p oducing bac e ia, his ep esen ing a p ac ical ad an age wi h espec o he use o FI alone. I is also ema kable ha he e olu ion o TMA-N in bo h ba ches was well co ela ed wi h he esul s o he senso y analyses. Ne e heless, i should be s essed ha he TMA-N le els in bo h ou ba ches we e in all cases much lowe han hose desc ibed o o he small and medium-sized ma ine fish species, in which sha p inc eases in TMA-N con en s ha e been no ed a e 9– 12 days o s o age in flake ice (Fe na ´ndez-Salgue o & Mackie, 1987; Pe ´ ez-Villa eal & Pozo, 1990; Ruı´z- Capillas & Mo al, 2001; Baixas-Nogue as e al., 2002). This diffe en kind o beha iou was expec ed, as ou Table 3 Compa a i e mic obial g ow h in ou su ace s o ed in flow ice (FI) o ozonised flow ice (OFI) S o age ime (days) Ae obic mesophiles (log CFU cm -2 ) Psych o ophes (log CFU cm -2 ) FI OFI FI OFI 1 0.10 a (0.01) 0.64 a (0.05) 0.10 a (0.05) 0.55 a (0.10) 3 1.49 a (0.23) 1.44 a (0.16) 0.10 a (0.02) 0.10 a (0.05) 6 1.71 b (0.24) 0.74 a (0.08) 0.30 a (0.20) 0.26 a (0.12) 9 0.71 a (0.16) 0.59 a (0.15) 1.74 b (0.25) 0.23 a (0.10) 13 2.53 b (0.18) 2.15 a (0.14) 3.13 b (0.30) 2.59 a (0.12) 16 3.56 a (0.30) 3.32 a (0.15) 3.87 a (0.40) 3.97 a (0.35) Resul s a e a e age alues and s anda d de ia ions (be ween b acke s). Resul s ollowed by di e en le e s a e s a is ically di e en (P< 0.05). Table 4 Compa a i e e olu ion o biochemical quali y in ou muscle s o ed in flow ice (FI) o ozonised flow ice (OFI) Time (days) K alue TVB-N TMA-N FFA TBA-i FI OFI FI OFI FI OFI FI OFI FI OFI 1 16.76 b (2.81) 24.99 a (6.69) 236.8 a (6.1) 244.3 a (9.5) 0.20 a (0.05) 0.31 a (0.15) 1.8 a (0.4) 1.9 a (0.7) 0.15 a (0.05) 0.24 a (0.06) 3 45.37 a (7.62) 43.96 a (7.06) 230.5 a (18.3) 219.2 a (13.2) 0.36 a (0.03) 0.36 a (0.07) 5.6 a (1.6) 5.9 a (1.6) 0.23 b (0.05) 0.37 a (0.05) 6 70.61 a (3.47) 64.58 a (8.41) 236.1 a (2.2) 238.3 a (6.8) 0.74 a (0.37) 0.51 a (0.13) 5.5 a (1.5) 5.7 a (2.4) 0.34 a (0.14) 0.34 a (0.03) 9 84.08 a (5.37) 81.16 a (1.30) 229.1 a (14.8) 219.5 a (7.0) 0.73 b (0.06) 0.47 a (0.14) 5.5 a (0.1) 6.4 a (0.11) 0.23 a (0.08) 0.15 a (0.05) 13 87.94 b (1.43) 74.91 a (3.19) 232.8 a (26.2) 236.0 a (14.2) 1.42 b (0.36) 0.72 a (0.27) 5.4 a (1.9) 7.1 a (1.2) 0.18 a (0.04) 0.24 a (0.08) 16 87.03 a (3.15) 90.34 a (2.71) 233.3 a (15.3) 221.6 a (9.4) 2.22 b (0.30) 1.69 a (0.29) 6.1 a (0.8) 7.0 a (0.9) 0.20 a (0.02) 0.24 a (0.05) TVB-N, o al ola ile base ni ogen; TMA-N, ime hylamine-ni ogen; FFA, ee a y acid; TBA-i, hioba bi u ic acid-index. Resul s a e a e age alues and s anda d de ia ions (be ween b acke s). Resul s ollowed by di e en le e s a e s a is ically di e en (P< 0.05). P ese a ion o ou in ozonised flow ice S. P. Aubou g e al. 1599 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009 s udy was ocused on a con inen al fish species ( ou ) whose TMAO con en is necessa ily much lowe han hose no mally ound in ma ine fish species. Lipid hyd olysis was de e mined by FFA assessmen . Significan (P< 0.05) inc eases in he o ma ion o FFA along he s o age ime we e obse ed in bo h ba ches du ing he fi s 3 days (Table 4). A e ha ime, only sligh inc eases in his pa ame e we e obse ed, indica ing ha lipid hyd olysis e en s a e o educed impo ance in con inen al ou . Acco dingly, no signi - ican (P> 0.05) effec o ozone on lipid hyd olysis can be in e ed, his indica ing a simila p o ec ion o ou muscle agains lipid hyd olysis in bo h ba ches. Al hough he elease o FFA hemsel es does no imply any significan loss o nu i ional quali y, hei accumu- la ion has been linked o an enhancemen o lipid oxida ion (Miyashi a & Takagi, 1986; Yoshida e al., 1992) and ex u al de e io a ion due o in e ac ions be ween FFA and p o eins (Mackie, 1993; Siko ski & Kolakowska, 1994). In e es ingly, acco ding o he esul s ob ained in ou s udy he combina ion o ozone and FI did no in ol e any significan enhancemen o lipid damage in ou muscle. Lipid oxida ion was ollowed wi h he TBA-i in o de o e alua e whe he he p esence o ozone migh imply any d awback a his le el. As in he case o FFA, s a is ically significan (P< 0.05) inc eases in his index we e obse ed along s o age ime in bo h ba ches up o day 3 (Table 4). A e ha ime, TBA-i le els only inc eased sligh ly, eaching final alues below 0.25 mg kg )1 in bo h ba ches. Rema kably, he p esence o ozone in he OFI ba ch did no significan ly inc ease (P< 0.05) he o ma ion o TBA- eac i e subs ances, his unde sco ing he no ion ha his an imic obial agen may p o ide added alue in he con ol o mic obial spoilage in con inen al ou wi hou causing any significan (P< 0.05) enhancemen o lipid oxida- ion mechanisms. Conclusions The applica ion o OFI o he slaugh e , cooling and e ige a ed s o age o a med ou is ad isable. The combined sys em e alua ed in his s udy p o ided an addi ional con ol o mic obial – ae obic mesophiles, psych o ophs, p o eoly ic bac e ia, TMA-N – and au oly ic – K alue – mechanisms commonly used as spoilage indica o s when compa ed wi h FI alone. Senso y analyses also confi med a sligh ex ension o he shel li e in his ba ch. As his wo k epo s he fi s e alua ion o a FI-based sys em o he in eg al p ocessing o a e ige a ed con inen al fish species, he esul s o his s udy open he way o he indus ial applica ion o his combined p ese a ion sys em o a med ou and o o he con inen al a med fish species. Acknowledgmen s This wo k was suppo ed by a p ojec g an ed by he Di eccio ´n Xe al de I+D om he Galician Go e nmen (Xun a de Galicia, P ojec PGIDT05TAL00701CT). The au ho s also wish o hank KINARCA S.A.U. (Vigo, Spain) o p o iding he flow ice equipmen , and CoseMa Ozono (Mad id, Spain) o p o iding he ozone gene a o . Re e ences A ani oyannis, I.S., Tsi sika, E.V. & Panagio aki, P. (2005). Imple- men a ion o quali y con ol me hods (physicochemical, mic obio- logical and senso y) in conjunc ion wi h mul i a ia e analysis owa ds fish au hen ici y. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology,40, 237–263. Aubou g, S., So elo, C. & Galla do, J. (1997). Quali y assessmen o sa dines du ing s o age by measu emen o fluo escen compounds. Jou nal o Food Science,62, 295–299. Baixas-Nogue as, S., Bo e -Cid, S., Veciana-Nogue ´s, M. & Vidal- Ca ou, M.C. (2002). Chemical and senso y changes in Medi e anean hake (Me luccius me luccius) unde e ige a ion (6–8 C) and s o ed in ice. Jou nal o Ag icul u al and Food Chemis y,50, 6504–6510. Ben-Gigi ey, B., Viei es Bap is a de Sousa, J.M., Villa, T.G. & Ba os- Vela ´zquez, J. (1998). Changes in biogenic amines and mic obiolog- ical analysis in albaco e (Thunnus alalunga) muscle du ing ozen s o age. Jou nal o Food P o ec ion,61, 608–615. Bligh, E. & Dye , W. (1959). A apid me hod o o al ex ac ion and pu ifica ion. Canadian Jou nal o Biochemis y and Physiology,37, 911–917. Cakli, S., Kilinc, B., Cadun, A., Dince , T. & Tolasa, S. (2006). Effec s o gu ing and ungu ing on mic obiological, chemical, and senso y p ope ies o aquacul u ed sea b eam (Spa us au a a) and sea bass (Dicen a chus lab ax) s o ed in ice. C i ical Re iews in Food Science and Nu i ion,46, 519–527. Campos, C., Rod ı´guez, O ´., Losada, V., Aubou g, S. & Ba os- Vela ´zquez, J. (2005). Effec s o s o age in ozonised slu y ice on he senso y and mic obial quali y o sa dine (Sa dina pilcha dus). In e na ional Jou nal o Food Mic obiology,103, 121–130. Chapman, L. (1990). Making he G ade. Ice Slu ies ge op Ma ks o Quali y P oduc s.Aus alian Fishe ies, July, 16–19. Chen, H.H., Chiu, E.M. & Huang, J.R. (1997). Colo and gel o ming p ope ies o ho se macke el (T achu us japonicus) as ela ed o washing condi ions. Jou nal o Food Science,62, 985–991. Council Regula ion. (1989). Ba emo de clasificacion de escu a. In: Dia o Oficial de las Comunidades Eu opeas,L5 ⁄21, Pp. 5–6. B ussels: Eu opean Commission. Da Sil a, M.V., Gibbs, P.A. & Ki by, R.M. (1998). Senso ial and mic obial effec s o gaseous ozone on esh scad (T achu us achu us). Jou nal o Applied Mic obiology,84, 802–810. Dondo, A.C., Nach man, C., Doglione, L., Rosso, A. & Gene i, A. (1992). Foods: hei p ese a ion by combined use o e ige a ion and ozone. Ingenie ia Alimen a ia y Conse e Animale,8, 16–25. Fe na ´ndez-Salgue o, J. & Mackie, I. (1987). Compa a i e a es o spoilage o fille s and whole fish du ing s o age o haddock (Melanog ammus aeglefinus) and he ing (Clupea ha engus)as de e mined by he o ma ion o non- ola ile and ola ile amines. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology,22, 385–390. G am, L. & Huss, H. (1996). Mic obiological spoilage o fish and fish p oduc s. In e na ional Jou nal o Food Mic obiology,33, 121–137. Kim, J., Youse , A. & Da e, S. (1999). Applica ion o ozone o enhancing he mic obiological sa e y and quali y o oods: A e iew. Jou nal o Food P o ec ion,62, 1071–1087. P ese a ion o ou in ozonised flow ice S. P. Aubou g e al.1600 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology Kim, T.J., Sil a, J.L., Chamul, R.S. & Chen, T.C. (2000). Influence o ozone, hyd ogen pe oxide o sal on mic obial p ofile, TBARS and colo o channel ca fish fille s. Jou nal o Food Science,65, 1210– 1213. Ko ¨ e s, J., P adu , A., Sku a, B., Rosen hal, H., Black, E.A. & Rod igues-Lopez, J. (1997). Obse a ions and expe imen s on ex ending shel li e o ockfish (Sebas es spp) p oduc s wi h ozone. Jou nal o Applied Ic hiology,13, 1–8. Losada, V., Ba os-Vela ´zquez, J., Galla do, J. & Aubou g, S. (2004). Effec o ad anced chilling me hods on lipid damage du ing sa dine (Sa dina pilcha dus) s o age. Eu opean Jou nal o Lipid Science and Technology,106, 844–850. Low y, R. & Tinsley, I. (1976). Rapid colo ime ic de e mina ion o ee a y acids. Jou nal o he Ame ican Oil Chemis s’ Socie y,53, 470–472. Mackie, I. (1993). The effec s o eezing on flesh p o eins. Food Re iews In e na ional,9, 575–610. Miyashi a, K. & Takagi, T. (1986). S udy on he oxida i e a e and p ooxidan ac i i y o ee a y acids. Jou nal o he Ame ican Oil Chemis s’ Socie y,63, 1380–1384. O ¨zden, O., Inugu , M. & E kan, N. (2007). Effec o diffe en dose gamma adia ion and e ige a ion on he chemical and senso y p ope ies and mic obiological s a us o aqua cul u ed sea bass (Dicen a chus lab ax). Radia ion Physics and Chemis y,76, 1169– 1178. Pe ´ ez-Villa eal, B. & Pozo, R. (1990). Chemical composi ion and ice spoilage o albaco e (Thunnus alalunga). Jou nal o Food Science,55, 678–682. Phaff, H.J., S a me , W.T., Lachance, M.A. & Gan e , P.F. (1994). Candida caseinoly ica sp. no ., a new species o yeas occu ing in nec o ic issues o Opun ia and S enoce eus species in he Sou h- wes e n Uni ed S a es and Baja Cali o nia, Mexico. In e na ional Jou nal o Sys ema ic Bac e iology,44, 641–645. Pin ˜ei o, C., Ba os-Vela ´zquez, J. & Aubou g, S.P. (2004). Effec s o newe slu y ice sys ems on he quali y o aqua ic ood p oduc s: a compa a i e e iew e sus flake ice chilling me hods. T ends in Food Science and Technology,15, 575–582. P ice, R., Mel in, E. & Bell, J. (1991). Pos mo em changes in chilled ound, bled and d essed albaco e. Jou nal o Food Science,56, 318– 321. Rod ı´guez, O., Losada, V., Aubou g, S. & Ba os-Vela ´zquez, J. (2004). Enhanced shel -li e o chilled Eu opean hake (Me luccius me luc- cius) s o ed in slu y ice as de e mined by senso y analysis and assessmen o mic obiological ac i i y. Food Resea ch In e na ional, 37, 749–757. Rod ı´guez, O ´., Losada, V., Aubou g, S. & Ba os-Vela ´zquez, J. (2005). Senso y, mic obial and chemical effec s o a slu y ice sys em on ho se macke el (T achu us achu us). Jou nal o he Science o Food and Ag icul u e,85, 235–242. Rod ı´guez, O ´., Ba os-Vela ´zquez, J., Pin ˜ei o, C., Galla do, J. & Aubou g, S. (2006). Effec s o s o age in slu y ice on he mic obial, chemical and senso y quali y and on he shel li e o a med u bo (Pse a maxima). Food Chemis y,95, 270–278. Ro h, B., Schel is-Smi , R., S ien, L.H., Foss, A., No ed , R. & Imsland, A. (2007). Exsanguina ion o u bo and he effec on fille quali y measu ed mechanically, by senso y e alua ion, and wi h compu e ision. Jou nal o Food Science,72, E525–E531. Ruı ´z-Capillas, C. & Mo al, A. (2001). Co ela ion be ween biochem- ical and senso y quali y indices in hake s o ed in ice. Food Resea ch In e na ional,34, 441–447. Ryde , J. (1985). De e mina ion o adenosine iphospha e and i s b eakdown p oduc s in fish muscle by high pe o mance liquid ch oma og aphy. Jou nal o Ag icul u al and Food Chemis y,33, 678–680. Siko ski, Z. & Kolakowska, A. (1994). Changes in p o ein in ozen s o ed fish. In: Sea ood P o eins (edi ed by Z. Siko ski, Z.B. Sun Pan & F. Shahidi). Pp. 99–112. New Yo k, USA: Chapman and Hall. Spanggaa d, B., Hube , I., Nielsen, J., Nielsen, T., Appel, K.F. & G am, L. (2000). The mic oflo a o ainbow ou in es ine: a compa ison o adi ional and molecula iden ifica ion. Aquacul u e, 182, 1–15. Tozawa, H., E okiba a, K. & Amano, K. (1971). P oposed modifica- ion o Dye ’s me hod o ime hylamine de e mina ion in codfish. In: Fish Inspec ion and Quali y Con ol (edi ed by R. K euze ). Pp. 187–190. London, UK: Fishing News Books L d. Vyncke, W. (1970). Di ec de e mina ion o he hioba bi u ic acid alue in ichlo oace ic acid ex ac s o fish as a measu e o oxida i e ancidi y. Fe e Sei en Ans ichm,72, 1084–1087. Yoshida, H., Kondo, I. & Kajimo o, G. (1992). Pa icipa ion o ee a y acids in he oxida ion o pu ified soybean oil du ing mic owa e hea ing. Jou nal o he Ame ican Oil Chemis s’ Socie y,69, 1136– 1140. P ese a ion o ou in ozonised flow ice S. P. Aubou g e al. 1601 2009 The Au ho s. Jou nal compila ion 2009 Ins i u e o Food Science and Technology In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2009 IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 104 iniciales en con enido lipídico pa a los lo es HL y HLO ue on 1,8 g/kg y 1,9 g/kg lípido, espec i amen e. Se obse ó a día 3, un inc emen o de es os alo es, alcanzándose los alo es de 5,6 g/kg y 5,9 g/kg en ambos lo es. Después de es e pe iodo, el pa áme o AGL aumen ó lige amen e, lo que indicó la impo ancia educida que la hid ólisis lipídica iene en ucha con inen al. En consecuencia, no se puede deduci que exis a un e ec o signi ica i o del ozono en la hid ólisis lipídica, lo que indica una p o ección simila del músculo de ucha en con a de es a hid ólisis en ambos lo es. Aunque la libe ación de AGL no signi ica es ic amen e pé dida de calidad nu icional, su acumulación puede es a unida a un aumen o de la oxidación lipídica, (Miyashi a & Takagi, 1986; Yoshida y col., 1992) y al de e io o en la ex u a debido a la in e acción en e AGL y las p o eínas (Mackie, 1993; Siko ski & Kolakowska, 1994). Los esul ados ob enidos en es e es udio, indican que la combinación de ozono con hielo líquido no hizo aumen a el daño lipídico en el músculo de ucha. Con el obje i o de e alua si la p esencia de ozono implicaba alguna des en aja en cuan o a oxidación lipídica, se in es igó el pa áme o i-TBA. Igual que en el caso de AGL, se encon a on aumen os signi ica i os (P<0,05) en los es p ime os días de almacenamien o pa a ambos lo es. Después de es e pe iodo, los ni eles de i-TBA aumen an lige amen e alcanzando un alo inal po debajo de 0,25 mg/kg en ambos lo es. La p esencia de ozono en el lo e HLO no hizo aumen a de mane a signi ica i a la o mación de sus ancias eac i as al TBA, lo que pone de mani ies o que, el empleo de es e agen e an imic obiano, p opo ciona un alo adicional en el con ol de de e io o mic obiológico de la ucha con inen al, sin causa ningún aumen o en los mecanismos de oxidación lipídica. Pa e 1 CAPÍTULO 2: Imp o ed mic obial and senso y quali y o clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) by e ige a ion in a slu y ice packaging sys em. Mejo a de la calidad mic obiológica y senso ial de almeja (Vene upis homboideus), os a (Os ea edulis) y mejillón (My ilus gallop o incialis) median e e ige ación en un sis ema de hielo líquido en asado. O iginal a icle Imp o ed mic obial and senso y quali y o clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) by e ige a ion in a slu y ice packaging sys em Minia S. Rey, 1 Jose ´M. Mi anda, 2 San iago Aubou g 2 & Jo ge Ba os-Vela ´zquez 1 * 1 Depa men o Analy ical Chemis y, Nu i ion and Food Science, School o Ve e ina y Sciences, Uni e si y o San iago de Compos ela, E-27002 Lugo, Spain 2 Depa men o Sea ood Science and Technology, Ins i u e o Ma ine Resea ch (IIM-CSIC), C ⁄Edua do Cabello 6, E-36208 Vigo, Spain 1 (Recei ed 13 May 2011; Accep ed in e ised o m 11 No embe 2011) Summa y The aim o his wo k was o e alua e a slu y ice (SI) packaging sys em on h ee bi al e species: clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis). Compa a i e analyses we e pe o med on specimens caugh in au umn and sp ing and compa ed o ba ches s o ed in con en ional flake ice. Mic obiological analysis o au umn specimens s o ed in SI showed significan ly (P< 0.05) educed numbe s o mesophiles and psych o ophs in all h ee species, as well as ewe En e obac e iaceae in clams and oys e s. Sp ing specimens also exhibi ed significan ly (P< 0.05) lowe mic obial loads, wi h SI s o age significan ly (P< 0.05) imp o ing he con ol o mesophiles, psych o ophs and p o eoly ic bac e ia in clams and oys e s. Senso y analysis co ela ed well wi h mic obial analyses, wi h a significan ly (P< 0.05) be e quali y in e ms o odou , as e, juiciness, appea ance and shel li e. The SI packaging sys em e alua ed in his wo k p o ed o be a aluable me hod o main aining quali y o hese bi al e species. Keywo ds Bi al es, clams, cooking, mussels, oys e s, quali y, e ige a ion, shel li e, slu y ice. In oduc ion Ma ine p oduc s cons i u e a pe ishable ood g oup whose de e io a ion o senso y quali y and eshness is because o a a ie y o mic obial and biochemical deg ada ion mechanisms (Piggo & Tucke , 1990; Whi - le e al., 1990; Ola sdo ´ i e al., 1997). Among ma ine p oduc s, bi al es a e shellfish species highly app eci- a ed globally because hey a e an excellen sou ce o p o ein, i amins and mine als (Cabello e al., 2004; Caglak e al., 2008). These o ganisms eed by fil a ion o phy oplank on and o ganic pa icles ound in seawa- e . Bi al es, simila o o he ma ine species, a e widely a ied in composi ion because o endogenous and exogenous effec s (Pea son e al., 1977). The ha es ing season plays a key ole ega ding empe a u e, eeding a ailabili y and o he ex e nal ac o s in diffe en ypes o ma ine species (Sai o e al., 1997; Banda a e al., 2001). Howe e , s udies on he effec o ha es ing season on he loss o quali y du ing e ige a ed s o age (G igo akis e al., 2003; Ro h e al., 2005) and o he echnological ea men s in sea ood a e sca ce (Kol- akowska e al., 1992; Aubou g e al., 2005). In seawa e , bi al es may be exposed o mic oo gan- isms ha lead o spoilage o a e pa hogenic in na u e. The mic oo ganisms can accumula e inside he body o he animal and can be ansmi ed o humans h ough he ood chain (Lees, 2000). Mo eo e , he ac ha some bi al e species a e o en consumed aw o sligh ly cooked (Romalde e al., 1994; Lees, 2000; Mu chie e al., 2005) inc eases he mic obial isks associa ed wi h hei consump ion (F ei e-San os e al., 2000; Oli ei a e al., 2011). Because o he impo ance o bi al es in gas onomy and economics, he imp o emen o hei p ese a ion and he ex ension o hei comme cialisa ion pe iod a e o majo in e es . Con en ional p ese a ion me hods a e based on he use o flake ice (FI) (Nunes e al., 1992) o chilled seawa e (K aus, 1992). In he las wo decades, e ige a ion sys ems based on ice slu ies, pumpable mic oscopic mix u es o ice and wa e con- aining sal s, ha e been success ully used o p ese e he quali y and ex end he shel li e o fish p oduc s. IJFS 2919 BDispa ch: 29.11.11 Jou nal: IJFS CE: K. Ka hik Jou nal Name Manusc ip No. Au ho Recei ed: No. o pages: 9PE: Sa hya Kala *Co esponden : Fax: +34 981 825474; e-mail: [email p o ec ed] In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 1 doi:10.1111/j.1365-2621.2011.02919.x 2011 The Au ho s. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 The sal s in he wa e lowe he eezing poin , and he wa e emains in liquid phase a empe a u es sligh ly below 0 C. This sys em has p e iously been e alua ed o he p ese a ion o fish species such as hake (Rod ı´guez e al., 2004), ho se macke el (Losada e al., 2005) and u bo (Rod ı´guez e al., 2005), among o he s, and o c us acean species such as lobs e (Aubou g e al., 2007). In all cases, a significan (P< 0.05) slowing down o mic obial and biochemical deg ada ion was obse ed. The slu y ice (SI) me hod was also success ully used o e a d spoilage mechanisms and o ex end he shel li e o a med ou (Aubou g e al., 2009), meg im (Aubou g e al., 2006) and blackspo seab eam (Al a ez e al., 2009). Such s udies epo ed significan dec eases in he K index (a widely used indica o o au oly ic deg ada ion based on he le els o ATP me aboli es), lipid damage indica o s and mic obial g ow h in he SI ba ches as compa ed o he FI ba ches. Howe e , despi e he epo ed ad an ages o SI o he p ese a ion o fish species, o he bes o ou knowledge, he use o his sys em o he p ese a ion o bi al es has ecei ed li le a en ion o da e in he scien ific li e a u e. In his case, i was decided ha SI would be packaged o: (i) a oid he supe chilling o specimens, because bi al e species should emain ali e du ing comme cialisa ion; and (ii) allow ha SI could be a ailable a he end o s o age o ehyd a ion and cooking pu poses, hus a oiding he use o home-made sal y wa e . Thus, he aim o he p esen wo k was o e alua e he ad an ages o SI p epa ed om seawa e and packaged unde acuum as compa ed o con en- ional FI packaged in he same way, o he p ese a ion o h ee comme cially ele an bi al e species: mussel (My ilus gallop o incialis), Eu opean oys e (Os ea edulis) and clam (Vene upis homboides). The effec o seasonal a iabili y on bi al e quali y du ing e ige - a ed s o age in bo h chilling sys ems was also e alua ed. Ma e ials and me hods Re ige a ion sys ems Slu y ice (SI) was p epa ed om fil e ed seawa e by means o a FLO-ICE p o o ype (Kina ca S.A.U., Vigo, Spain). The composi ion o he slu y ice was 40% ice and 60% seawa e (salini y: 3.3%). The empe a u e o he slu y ice mix u e was -1.5 C, measu ed by a calib a ed he mome e (Tes o, Lenki ch, Ge many). The SI was s e ilised by ozone injec ion, which was accomplished wi h a sys em p o ided by Cosema Ozono (Mad id, Spain) wi h he edox po en ial adjus ed o 700 mV (0.20 mg ozone L )1 ). Con en ional FI was p epa ed om ap wa e by means o an Icema ic F100 Compac de ice (Cal elmac, Cas el anco, I aly). The empe a u e o he con en ional FI was +0.5 C, measu ed by a calib a ed he mome e (Tes o). The FI and he SI we e in oduced in polye hylene bags, in he la e case di ec ly om he SI gene a o , acuum- packaging being pe o med by means o a INELVI TV Se ies, model 2000 (INELVI, S a. Coloma de Ce ello ´, Ba celona, Spain) de ice. To gua an ee ha bi al e specimens emained ali e, andom checking o he empe a u e was pe o med du ing s o age wi h a iew o ensu e ha his did no each alues below 0 C. In all cases, he empe a u es o bi al e specimens we e in he 0C⁄+2 C ange, ega dless he e ige a ion sys em used. Bi al e specimens, p ocessing and sampling Li e oys e , mussel and clam specimens we e ob ained om local p oduce s o Cambados (Galicia, NW Spain) a e pu ifica ion acco ding o Spanish Regula ion (Real Dec e o 571 ⁄1999). All bi al e specimens came om he Ria de A osa (NW Spain), he na u al es ua y o he Umia Ri e , which is known o be a p olific sou ce o mussels and oys e s wo ldwide. Bo h oys e s and mussels we e a med in hanging opes om ba eas, wooden s uc u es placed in he sea su ace, while wild clams we e collec ed om he sea bo om in he same a ea. The en i onmen al pa ame e s o sp ing speci- mens we e he ollowing: (i) ai empe a u e: 12 C; (ii) ai ela i e humidi y: 76%; (iii) wa e empe a u e: 13.5 C and (i ) salini y: 3.1%, while he en i onmen al pa ame e s o au umn specimens we e he ollowing: (i) ai empe a u e: 16 C; (ii) ai ela i e humidi y: 78%; (iii) wa e empe a u e: 15.0 C and (i ) salini y: 3.1%. The leng h and weigh anges o he bi al e specimens we e he ollowing: 3–5 cm and 30–40 g o clams; 6– 9 cm and 40–80 g o mussels; and 6–10 cm and 40–60 g o oys e s. Fo each season, wo ba ches we e consid- e ed o each bi al e species, one was s o ed in SI and he o he in FI. F om each ba ch, h ee samples we e collec ed a each sampling ime. Ba ches consis ed o 40– 45 clams, 30–35 mussels and 30–35 oys e s, espec i ely, and we e s o ed in closed and agged polyspan boxes (80 ·40 ·20 cm) unde SI o FI. All boxes we e kep in a e ige a ed oom a +2 C. Inside each box, he bags con aining SI o FI we e placed wi h bi al e specimens in a 1:1 w ⁄w a io. To de e mine he effec o seasonal a iabili y on he effec i eness o he p ese a ion me hods, sampling was pe o med in au umn (Oc obe ) and sp ing (Ap il). A each sampling ime, h ee specimens om each ba ch we e examined o mic obi- ological, biochemical and senso y analyses. Mic obiological analyses Samples o 5 g we e asep ically dissec ed om oys e s, clams and mussels, placed in a s e ile mas ica o bag wi h an app op ia e olume (1 ⁄9) (w ⁄ ) o 0.1% s e ile pep one wa e (Me ck, Da ms ad , Ge many) and Slu y ice sys em o bi al e species M. S. Rey e al.2 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 homogenised in a mas ica o (AES, Combou g, F ance). In he case o mussels and oys e s, and because o hei size, only one specimen was necessa y. In he case o clams, wo ⁄ h ee specimens we e no mally mixed o ge he equi ed sample size. A e homogenisa ion o he mea (any liquo p esen in he shell was disca ded), mic obial coun s in 10 )1 o 10 )6 dilu ions o he homogena es we e de e mined. To al ae obic mesophiles and psych o ophs we e de e mined by he pou pla e me hod, using Pla e Coun Aga (PCA; Oxoid L d., London, UK) and incuba ing a 30 C o 48 h and a 4C o 7 days, espec i ely. To al En e obac e iaceae le els we e de e mined by pou pla ing on Viole Red Bile Glucose Aga (VRBG; Me ck) and incuba ing a 30 C o 24–48 h. P o eoly ic mic oo ganisms we e in es iga ed by su ace pla ing on casein-aga , as p e i- ously desc ibed by Ben-Gigi ey e al. (2000), and subsequen incuba ion a 30 C o 48 h. In he au umn and he sp ing, samples we e aken a e 1, 2, 4 and 6 days o s o age. Each sampling ime, h ee samples we e analysed om he oys e , clam and mussel ba ches. The esul s we e exp essed as a e age ± s anda d de ia ion (SD). Biochemical analyses Nucleo ide deg ada ion p oduc s analysis was ca ied ou using 6% pe chlo ic acid ex ac s om he edible pa o molluscs acco ding o he me hod o Ryde (1985). Analysis was pe o med by HPLC, using a Beckman de ice p o ided wi h he p og ammable sol en module 126 and he scanning de ec o module 167 connec ed o Sys em Gold so wa e, e sion 8.1 (Beckman Coul e , London, UK). Sepa a ions we e achie ed on a e e se-phase Sphe iso b ODS-2 C18 250 ·4.60 mm column (Wa e s, Mil o d, MA, USA) wi h an in e nal pa icle diame e o 5 lm. S anda d cu es o adenosine 5¢- iphospha e (ATP) and each compound in ol ed in i s deg ada ion pa hway [aden- osine 5¢-diphospha e (ADP), adenosine 5¢-monophos- pha e (AMP), inosine 5¢-monophospha e (IMP), inosine (INO) and hypoxan hine (Hx)] we e con- s uc ed in he 0–1 mm ange. Resul s o each deg ada ion compound we e calcula ed as lmol. The K alue was calcula ed acco ding o he ollowing concen a ion a io: K alue ð%Þ¼100 ðINO þHxÞ=ðATP þADP þAMP þIMP þINO þHxÞðRyde ;1985Þ: To al ola ile base-ni ogen (TVB-N) alues we e measu ed as p e iously epo ed by Aubou g e al., 1997. T ime hylamine-ni ogen (TMA-N) alues we e de e mined by he pic a e me hod, as p e iously desc ibed (Tozawa e al., 1971). This me hod is based on he p epa a ion o a 5% ichlo oace ic acid ex ac o edible pa (10 g ⁄25 mL). Resul s we e exp essed as mg TMA-N ⁄100 g edible pa . Senso y analyses Senso y analyses we e pe o med using aw and cooked bi al es by a ained panel o fi e expe ienced judges, who ha e been in ol ed in he senso y analysis o diffe en kinds o sea ood o 10 yea s. Bi al e speci- mens we e cooked a 100 C o 5 min in SI (SI ba ch) o in esh wa e supplemen ed wi h 3.3% NaCl (FI ba ch). Raw and cooked bi al e samples (140 g) we e p esen ed indi idually o he panellis s, wi h each panellis e alua ing app oxima ely 20 g o bi al e flesh. Fo i , he edible pa was emo ed om he shell. Se e al specimens we e conside ed o each a leas 20 g o edible pa . Samples we e p epa ed in a p epa a ion oom and we e analysed in a well- en ila ed isola ed oom p o ided wi h good ligh ing. Panellis s we e asked o sco e he odou and he appea ance o he aw mussels, oys e s o clams using a 0–5 poin accep abili y scale, wi h fi e co esponding o he highes quali y and 0 co esponding o he lowes quali y (Anonymous, 1999). In he case o cooked samples, he panellis s e alua ed he as e and juiciness o samples using a 0–5 poin accep abili y scale. S a is ical analyses Da a om he h ee diffe en assays we e subjec ed o analysis o a iance (ano a). PASW S a is ics 18 (SPSS, Chicago, IL, USA) was used o explo e he s a is ical significance o he diffe ences be ween ba ches. Diffe - ences we e conside ed significan o a confidence in e al a he 95% le el (P< 0.05) in all cases. Resul s and discussion Compa a i e mic obial analysis in au umn and sp ing bi al e specimens The compa a i e mic obial e olu ion du ing he s o age o clams, oys e s and mussels ha es ed du ing he au umn can be seen in Table 1. S a is ically significan (P< 0.05) lowe mesophiles numbe s we e p esen in clams, oys e s and mussels s o ed in SI o 6 days compa ed wi h FI (Table 1). Likewise, s o age o 6 days unde SI p o ided a significan (P< 0.05) inhibi ion o psych o ophs o all h ee bi al e species caugh in he au umn (Table 1). The s o age o au umn specimens in SI also p o ided be e con ol o En e obac e iaceae, wi h significan (P< 0.05) diffe ences being obse ed (Table 1). No beneficial effec o SI in e ms o En e obac e iaceae coun s was obse ed o mussels caugh in he au umn. Slu y ice sys em o bi al e species M. S. Rey e al. 3 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 Finally, he au umn specimens o oys e also exhibi ed significan ly (P< 0.05) be e con ol o p o eoly ic bac e ia a e 6 days o s o age in SI (Table 1). The numbe s o p o eoly ic bac e ia we e also lowe in clams and mussels s o ed in SI a he end o he s o age pe iod as compa ed wi h FI, al hough o mussels hese diffe ences we e no s a is ically signifi- can (Table 1). The compa a i e mic obial e olu ion du ing he s o age o clams, oys e s and mussels ha es ed du ing he sp ing is p esen ed in Table 2. S a is ically signifi- can (P< 0.05) lowe mesophiles numbe s we e p esen in clams and mussels s o ed in SI o 6 days as compa ed wi h FI (Table 2). Likewise, diffe ences in he mesophiles coun s we e de e mined be ween ba ches o sp ing clams, oys e s and mussels, espec i ely, h oughou s o age. The esul s ob ained o mesophiles in he sp ing specimens e ealed significan ly (P< 0.05) lowe mic obial coun s o oys e s and mussels as compa ed o au umn specimens ega dless o he icing sys em. Acco dingly, he ela i e diffe ences in meso- philes numbe s we e lowe o oys e and mussel sp ing specimens han o au umn specimens, wi h SI exe ing a pa icula ly beneficial p ese a ion effec on he la e . Wi h espec o psych o ophs, s o age o 6 days unde SI p o ided a significan (P< 0.05) inhibi ion o his bac e ial g oup in clams and mussels caugh in he sp ing (Table 2). Rema kably, SI did no p o ide any significan ad an age wi h espec o psych o ophs g ow h in sp ing oys e specimens. Thus, as in he case o mesophiles, oys e and mussel specimens caugh in he sp ing ha bou ed a lowe bac e ial load compa ed o Table 1 Compa a i e mic obial e olu ion in clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) s o ed unde ozonised slu y ice (SI) o flake ice (FI) in he au umn. Resul s a e exp essed as log o he colony- o ming uni s pe g am o issue Bi al e S o age day Mesophiles Psych o ophs En e obac e iaceae P o eoly ic bac e ia FI SI FI SI FI SI FI SI Clams 1 2.60 ± 0.11 2.48 ± 0.06 2.39 ± 0.19 2.46 ± 0.10 0.90 ± 0.00 0.90 ± 0.00 1.90 ± 0.00 1.90 ± 0.00 2 3.13 ± 0.25 2.8 ± 0.43 2.63 ± 0.38 2.76 ± 0.15 1.63 ± 0.15 (a) 1.00 ± 0.00 (b) 2.33 ± 0.58 2.33 ± 0.58 4 3.43 ± 0.68 3.15 ± 0.03 3.15 ± 0.01 (a) 2.98 ± 0.06 (b) 2.18 ± 1.28 (a) 0.97 ± 0.06 (b) 2.50 ± 0.50 2.65 ± 0.05 6 3.92 ± 0.51 (a) 3.20 ± 0.03 (b) 3.59 ± 0.32 (a) 3.14 ± 0.08 (b) 2.15 ± 0.55 (a) 1.10 ± 0.20 (b) 3.31 ± 0.53 (a) 2.39 ± 0.09 (b) Oys e s 1 2.92 ± 0.25 2.81 ± 0.14 2.76 ± 0.21 2.72 ± 0.05 1.24 ± 0.24 (b) 1.63 ± 0.15 (a) 2.81 ± 0.03 2.34 ± 0.44 2 2.91 ± 0.02 (a) 2.51 ± 0.36 (b) 2.84 ± 0.05 (a) 2.54 ± 0.23 (b) 1.19 ± 0.29 (a) 0.90 ± 0.00 (b) 2.24 ± 0.24 2.10 ± 0.20 4 4.32 ± 0.09 (a) 2.46 ± 0.26 (b) 3.81 ± 0.34 (a) 2.44 ± 0.16 (b) 1.30 ± 0.30 (a) 0.90 ± 0.00 (b) 2.42 ± 0.42 2.00 ± 0.00 6 4.47 ± 0.25 (a) 3.59 ± 0.32 (b) 4.73 ± 0.25 (a) 3.90 ± 0.85 (b) 2.39 ± 0.19 (a) 0.90 ± 0.00 (b) 3.43 ± 0.68 (a) 2.53 ± 0.50 (b) Mussels 1 2.12 ± 0.12 (b) 3.10 ± 0.62 (a) 1.52 ± 0.62 (b) 3.09 ± 0.69 (a) 0.90 ± 0.00 (b) 2.38 ± 0.90 (a) 1.90 ± 0.00 (b) 3.33 ± 0.42 (a) 2 2.79 ± 0.53 (a) 2.18 ± 0.23 (b) 2.82 ± 0.59 (a) 1.97 ± 0.07 (b) 1.54 ± 0.64 (a) 0.90 ± 0.00 (b) 2.54 ± 0.64 1.96 ± 0.06 4 4.42 ± 0.02 (a) 2.88 ± 0.46 (b) 4.49 ± 0.09 (a) 2.70 ± 0.50 (b) 0.95 ± 0.05 0.95 ± 0.05 2.00 ± 0.00 1.96 ± 0.06 6 5.40 ± 0.60 (a) 3.93 ± 0.90 (b) 5.93 ± 1.10 (a) 3.96 ± 0.85 (b) 1.19 ± 0.29 1.27 ± 0.35 2.30 ± 0.30 2.06 ± 0.21 The esul s a e exp essed as mean ± ange. Means ollowed by di e en le e s (a–b) a e significan ly di e en (P< 0.05). Table 2 Compa a i e mic obial e olu ion in clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) s o ed unde ozonised slu y ice (SI) o flake ice (FI) in he sp ing. Resul s a e exp essed as log o he colony- o ming uni s pe g am o issue Bi al e S o age day Mesophiles Psych o ophs En e obac e iaceae P o eoly ic bac e ia FI SI FI SI FI SI FI SI Clams 1 3.21 ± 0.57 2.54 ± 0.34 3.00 ± 0.00 (a) 2.77 ± 0.26 (b) 1.30 ± 0.30 1.30 ± 0.30 3.97 ± 0.10 (a) 2.30 ± 0.30 (b) 2 3.24 ± 0.43 (a) 2.34 ± 0.24 (b) 2.98 ± 0.32 2.82 ± 0.29 1.38 ± 0.12 1.32 ± 0.13 3.23 ± 0.15 (a) 2.30 ± 0.30 (b) 4 3.11 ± 0.10 (a) 2.50 ± 0.07 (b) 3.01 ± 0.08 (a) 2.64 ± 0.06 (b) 1.34 ± 0.50 0.99 ± 0.00 2.98 ± 0.54 (a) 2.00 ± 0.01 (b) 6 3.95 ± 0.98 (a) 3.23 ± 0.55 (b) 3.98 ± 0.54 (a) 3.20 ± 0.28 (b) 0.99 ± 0.00 1.24 ± 0.34 3.06 ± 0.08 (a) 2.30 ± 0.43 (b) Oys e s 1 3.33 ± 0.01 (a) 2.87 ± 0.05 (b) 3.05 ± 0.14 (b) 3.74 ± 0.06 (a) 2.54 ± 0.28 (a) 1.59 ± 0.16 (b) 2.90 ± 0.08 2.83 ± 0.18 2 3.83 ± 0.65 (a) 3.03 ± 0.15 (b) 3.36 ± 0.57 3.96 ± 0.25 3.13 ± 0.32 (a) 1.63 ± 0.25 (b) 3.03 ± 0.15 3.20 ± 0.20 4 4.21 ± 0.02 (a) 3.49 ± 0.05 (b) 4.21 ± 0.27 5.06 ± 0.14 3.67 ± 0.07 (a) 1.74 ± 0.07 (b) 3.28 ± 0.03 3.27 ± 0.27 6 4.16 ± 0.22 3.89 ± 1.05 3.68 ± 0.01 3.70 ± 0.70 4.95 ± 0.00 (a) 1.84 ± 1.21 (b) 3.60 ± 0.04 3.11 ± 0.58 Mussels 1 2.88 ± 0.03 (a) 2.68 ± 0.06 (b) 3.82 ± 0.42 (a) 2.87 ± 0.04 (b) 2.16 ± 0.06 (a) 1.15 ± 0.22 (b) 2.39 ± 0.12 (a) 2.00 ± 0.01 (b) 2 2.83 ± 0.65 2.87 ± 0.25 3.05 ± 0.14 3.74 ± 0.06 2.54 ± 0.28 (a) 1.59 ± 0.16 (b) 2.90 ± 0.08 2.83 ± 0.18 4 3.12 ± 0.23 (a) 2.45 ± 0.15 (b) 2.98 ± 0.09 2.80 ± 0.07 1.24 ± 0.34 0.99 ± 0.00 2.93 ± 0.04 (a) 1.99 ± 0.00 (b) 6 3.48 ± 0.12 (a) 2.99 ± 0.13 (b) 3.74 ± 0.22 (a) 2.86 ± 0.11 (b) 1.00 ± 0.01 0.99 ± 0.00 2.50 ± 0.28 (a) 2.00 ± 0.01 (b) The esul s a e exp essed as mean ± ange. Means ollowed by di e en le e s (a–b) a e significan ly di e en (P< 0.05). Slu y ice sys em o bi al e species M. S. Rey e al.4 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 au umn specimens, whe e mic obial g ow h was mo e a ou ed and SI was especially efficien in mesophiles and psych o ophs con ol. The s o age o sp ing specimens in SI p o ided o be e con ol o En e obac e iaceae in oys e s, wi h significan (P< 0.05) diffe ences being de e mined be ween ba ches on he six h day o s o age (Table 2). No beneficial effec s o SI in e ms o En e obac e iaceae coun s we e obse ed o clams caugh in he sp ing. Compa ing he seasonal a iabili y o specimens in e ms o he ad an ages p o ided by SI, his sys em p o ed o be use ul o he con ol o En e obac e iaceae in bo h seasons. Finally, sp ing specimens o clams and mussels exhibi ed significan ly (P< 0.05) be e con ol o p o eoly ic bac e ia a e s o age in SI (Table 2). The numbe s o p o eoly ic bac e ia we e also lowe in oys e s belonging o he SI ba ch a he end o he s o age pe iod as compa ed o FI, al hough hese diffe ences we e no s a is ically significan (Table 2). As in he case o mesophiles and psych o ophs, he use o SI esul ed in a be e con ol o p o eoly ic bac e ia in clams and mussels caugh in he sp ing. In global e ms, oys e s we e he bi al e species ha exhibi ed he mos seasonal a iabili y. Thus, SI was especially use ul o he p ese a ion o au umn oys e s bu no o sp ing oys e s. The ac s ha oys e s usually spawn by la e June and ha small inc eases in wa e empe a u e may a ou spawning may be ela ed o he ema kable mic obiological diffe ences obse ed o his species be ween sp ing and au umn specimens. In con as , he SI sys em wo ked well o clams and mussels in bo h au umn and sp ing, al hough he ad an ages o such a sys em we e especially ema kable in sp ing mussels and au umn clams. Mic obiological s udies ca ied ou in a diffe en clam species han hose used in his s udy (Me cena ia me cena ia) showed a g ea e mic obial accumula ion in au umn and win e mon hs as compa ed o sp ing and summe mon hs, p obably because ha dshelled clams s op fil e eeding a empe a u es below 4 C (Bu kha d e al., 1992). Kaspa & Tamplin (1993) ound ha he highes accumula ion o mic oo ganisms in clams occu ed du ing ce ain pe iods in he sp ing season. In ou s udy, bi al e specimens collec ed in he au umn exhibi ed sligh ly highe mic obial concen a- ions han sp ing ba ches, p obably because he wa e empe a u es a Ap il (13.5 C) we e colde han in Oc obe (15 C) on he A lan ic coas es ua y whe e hese specimens we e collec ed. Howe e , he effec s o SI on he mic obial quali y o he bi al e species s udied we e no ably imp o ed ega dless o he season consid- e ed, especially in he case o clams and mussels. Compa a i e biochemical quali y in au umn and sp ing specimens Mic obial ac i i y was also assessed by ela ed chemical indices, such as TVB-N and TMA-N alues (Tables 3 and 4). The TVB-N con en inc eased in all samples as s o age p og essed, especially in mussels. An inhibi o y effec on mic obial g ow h (P< 0.05) o SI ea men was e iden in all species co esponding o he sp ing season, especially a ad anced s o age pe iods (Table 4), while in he case o au umn samples, he diffe ences we e only significan o clams (Table 3). An inhibi o y effec o SI on TMA-N o ma ion was also obse ed. As in he case o TVB-N, significan diffe ences (P< 0.05) we e mainly obse ed in he sp ing samples (Table 4). Excep o au umn clams, all Table 3 Compa a i e e olu ion o chemical pa ame e s ela ed o quali y loss o clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) s o ed unde ozonised slu y ice (SI) o flake ice (FI) in he au umn Bi al e S o age day K alue TVB-N TMA-N FI SI FI SI FI SI Clams 1 41.50 ± 1.24 37.25 ± 4.85 24.24 ± 1.90 23.91 ± 0.48 2.44 ± 0.37 2.27 ± 0.85 2NDNDND ND ND ND 4 44.07 ± 4.23 39.19 ± 5.18 26.77 ± 1.67 25.08 ± 1.19 2.83 ± 1.13 2.41 ± 0.47 6 44.92 ± 0.21 39.34 ± 1.76 25.42 ± 0.24 (a) 23.90 ± 0.10 (b) 4.34 ± 0.13 (a) 3.71 ± 0.07 (b) Oys e s 1 10.10 ± 0.48 9.12 ± 0.30 13.64 ± 0.71 12.63 ± 0.24 1.74 ± 0.11 (a) 1.17 ± 0.15 (b) 2NDNDND ND ND ND 4 15.68 ± 1.25 12.44 ± 0.42 15.49 ± 0.55 14.81 ± 0.05 1.62 ± 0.40 1.30 ± 0.41 6 16.75 ± 0.35 14.92 ± 0.15 17.51 ± 0.95 17.51 ± 0.35 1.64 ± 0.21 1.24 ± 0.77 Mussels 1 15.27 ± 1.53 14.29 ± 0.21 18.99 ± 3.38 17.47 ± 6.19 0.60 ± 0.13 0.61 ± 0.14 2NDNDND ND ND ND 4 15.84 ± 0.11 14.59 ± 1.89 32.83 ± 4.52 28.62 ± 1.43 1.16 ± 0.04 (a) 0.82 ± 0.14 (b) 6 18.50 ± 0.96 17.29 ± 1.33 31.31 ± 1.43 28.11 ± 3.57 1.19 ± 0.18 1.00 ± 0.29 ND, no de e mined; TMA-N, ime hylamine-ni ogen; TVB-N, o al ola ile base-ni ogen. The esul s a e exp essed as mean ± ange. Means ollowed by di e en le e s (a–b) a e significan ly di e en (P< 0.05). Slu y ice sys em o bi al e species M. S. Rey e al. 5 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 samples showed a p og essi e inc ease in his pa ame e as e ige a ion ime p og essed (Tables 3 and 4). Du ing pos -mo em bi al e muscle s o age, muscle nucleo ides deg ade in a se ies o s ages because o endogenous biochemical changes. The le el o majo adenine nucleo ides and hei ela ed compounds has been u ilised ex ensi ely as an index o eshness (K alue assessmen ) o fish muscle (Howga e, 2006). In he p esen esea ch (Tables 3 and 4), specimens co espond- ing o he h ee species and o bo h icing condi ions showed a p og essi e inc ease in K alue wi h chilling ime. Al hough no significan diffe ences (P> 0.05) we e associa ed wi h he icing sys em employed, highe mean alues we e ob ained in all cases o specimens kep unde adi ional FI condi ions as compa ed wi h hose kep unde SI condi ions. In addi ion, highe K alues we e obse ed o specimens co esponding o he au umn season (Table 3) compa ed o hei coun e pa s caugh in he sp ing (Table 4). This diffe ence was especially ele an in clams. Compa a i e senso y quali y in au umn and sp ing specimens The esul s o he senso y e alua ion in au umn spec- imens om he h ee species unde he diffe en e ig- e a ion condi ions a e p esen ed in Table 5. Clams, oys e s and mussels p esen ed a esh and pleasan Table 4 Compa a i e e olu ion o chemical pa ame e s ela ed o quali y loss o clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) s o ed unde ozonised slu y ice (SI) o flake ice (FI) in he sp ing Bi al e S o age day K alue TVB-N TMA-N FI SI FI SI FI SI Clams 1 12.47 ± 0.44 7.93 ± 1.46 24.24 ± 0.76 24.24 ± 0.95 2.04 ± 0.11 2.19 ± 0.09 2ND ND ND ND ND ND 4 14.64 ± 0.70 14.77 ± 0.13 27.61 ± 0.67 25.27 ± 0.48 3.52 ± 0.19 3.15 ± 0.17 6 18.55 ± 0.80 16.55 ± 0.21 34.58 ± 0.48 (a) 29.590 ± 1.10 (b) 4.23 ± 0.23 (a) 3.14 ± 0.19 (b) Oys e s 1 0.71 ± 0.17 0.51 ± 0.14 12.12 ± 0.07 11.78 ± 0.48 0.48 ± 0.14 0.48 ± 0.07 2ND ND ND ND ND ND 4 5.90 ± 0.53 3.18 ± 0.19 23.57 ± 0.05 17.85 ± 0.48 0.87 ± 0.03 (a) 0.68 ± 0.13 (b) 6 6.89 ± 0.38 4.47 ± 1.71 21.89 ± 2.38 (a) 16.16 ± 0.05 (b) 1.16 ± 0.28 (a) 0.85 ± 0.10 (b) Mussels 1 13.54 ± 1.01 7.71 ± 1.26 19.19 ± 1.43 17.17 ± 1.43 2.29 ± 0.29 (a) 0.60 ± 0.13 (b) 2ND ND ND ND ND ND 4 15.65 ± 2.16 10.75 ± 0.13 35.35 ± 0.48 (a) 27.95 ± 0.48 (b) 3.25 ± 0.15 (a) 1.17 ± 0.21 (b) 6 17.46 ± 1.62 14.94 ± 6.75 35.69 ± 2.09 (a) 25.93 ± 1.43 (b) 3.14 ± 0.19 (a) 1.26 ± 0.10 (b) ND, no de e mined; TMA-N, ime hylamine-ni ogen; TVB-N, o al ola ile base-ni ogen. The esul s a e exp essed as mean ± ange. Means ollowed by di e en le e s (a–b) a e significan ly di e en (P< 0.05). Table 5 Compa a i e senso y quali y o clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) s o ed unde ozonised slu y ice (SI) o flake ice (FI) in he au umn Bi al e S o age day Odou Appea ance Tas e and juiciness FI SI FI SI FI SI Clams 1 5.00 ± 0.00 4.80 ± 0.40 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 2 4.00 ± 0.63 4.20 ± 0.40 3.80 ± 0.45 4.80 ± 0.40 3.20 ± 0.45 3.80 ± 0.45 4 3.00 ± 0.63 3.80 ± 0.40 1.80 ± 0.45 2.40 ± 0.55 1.40 ± 0.55 3.40 ± 0.49 6 2.00 ± 0.89 3.20 ± 0.74 1.00 ± 0.00 (b) 2.80 ± 0.40 (a) 1.20 ± 0.45 (b) 2.80 ± 0.40 (a) Oys e s 1 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 2 4.60 ± 0.55 4.80 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.60 ± 0.55 4 1.80 ± 0.45 3.46 ± 0.71 2.60 ± 0.55 2.80 ± 0.45 2.00 ± 0.71 3.20 ± 0.45 6 1.00 ± 0.00 (b) 2.40 ± 0.55 (a) 1.20 ± 0.45 (b) 2.40 ± 0.55 (a) 1.00 ± 0.00 (b) 2.20 ± 0.40 (a) Mussels 1 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 2 3.20 ± 0.45 4.41 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.80 ± 0.40 4.40 ± 0.55 4.60 ± 0.55 4 2.00 ± 0.89 3.20 ± 0.45 2.40 ± 0.55 3.20 ± 0.45 2.40 ± 0.55 3.20 ± 0.45 6 1.00 ± 0.00 (b) 2.00 ± 0.00 (a) 1.00 ± 0.0 (b) 1.80 ± 0.45 (a) 1.00 ± 0.00 1.40 ± 0.55 The esul s a e exp essed as mean± ange. Means ollowed by di e en le e s (a–b) a e significan ly di e en (P< 0.05). Sco ed on 1–5 poin scale (1: lowes quali y; 5: highes quali y). Slu y ice sys em o bi al e species M. S. Rey e al.6 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 odou and a b illian appea ance on s o age day one in bo h he aw and he cooked specimens. In clams, on day 6, he SI ba ch exhibi ed significan ly (P< 0.05) be e quali y in e ms o juiciness, as e and appea ance compa ed wi h clams s o ed in FI (Table 5). On day 6, clams s o ed in FI p esen ed an unaccep able odou , as e and appea ance compa ed wi h clams s o ed in SI, whose quali y was accep able (Table 5). Senso y anal- ysis o oys e s and mussels om he au umn season on day 4 also showed a highe loss o juiciness in he FI ba ch compa ed o he SI ba ch. The SI ba ch e ained accep able quali y in e ms o odou , as e and appea - ance (Table 5). On day 6, none o he au umn oys e o mussel ba ches was accep able, because he a e age sco es we e below 2.0. The esul s o he senso y e alua ions o he sp ing specimens a e p esen ed in Table 6. Clam specimens s o ed in SI main ained be e (P< 0.05) quali y on day 6 han hei sp ing coun e pa s. The diffe ences be ween he SI and FI ba ches o sp ing clams we e la ge han in he case o au umn ba ches. Oys e s kep in SI also exhibi ed be e quali y on day 6 han sp ing specimens kep in SI, he o me exhibi ing accep able quali y a ha ime. As in he case o clams, he diffe ences be ween SI and FI sp ing oys e ba ches we e significan (P< 0.05) and la ge han be ween au umn ba ches. No ema kable diffe ences ha may be a ib- u ed o seasonal a iabili y we e obse ed in mussels, excep o as e and juiciness and appea ance on day 6. Seasonal s udies ca ied ou on a diffe en species o mussel han hose analysed he e, My ilus edulis (K yzy- nowek & Wiggin, 1979), ound ha mussels ha es ed in he sp ing e ained senso y accep abili y o a longe ime han mussels ha es ed in he all o win e , a esul ha is in ag eemen wi h ou mic obial, biochemical and senso y esul s om he SI ba ches. A possible expla- na ion o hese findings migh be ela ed o, among o he s, (i) he lowe empe a u e o wa e in sp ing (13.5 C) as compa ed o au umn (15.0 C) and o (ii) he weake physiological s a e o shellfish om au umn season, once spawning had been comple ed. These easons could explain he be e mic obial and senso y quali y de e mined o he specimens om sp ing season. O he pa ame e s, such as eeding a ailabili y o p oxima e composi ion o specimens, we e no e alua ed in his s udy. Finally, we mus emphasise ha diffe ences obse ed be ween ba ches s o ed in SI and FI a e because o many causes, he mos ele an being, among o he s: (i) he as e chilling a e o SI, which is a consequence o i s highe hea -exchange capaci y; (ii) he ca. 1.5 C lowe s o age empe a u e p o ided by SI would imply a squa e oo ela ionship be ween ba ches, his p edic ing a 1.3- old inc ease in he shel li es o he SI ba ches as compa ed o he FI ba ches (Dalgaa d, 2009); (iii) he mo e comple e co e age o he bi al e specimens by he packages con aining he SI mix u e, which also affo ded a be e p o ec ion o he specimens wi h espec o oxida ion and dehyd a ion e en s; and (i ) he use o he SI mix u e as ehyd a ion and cooking media, which allowed a be e eco e y o senso y pa ame e s as compa ed o he con ol ba ch. Conclusions Re ige a ed s o age o clams, oys e s and mussels in he p oposed SI sys em was associa ed wi h a be e main enance o mic obial and senso y quali y and ex ended shel li e, which is a esul o p ac ical in e es o comme cialisa ion s a egies. Bi al e specimens Table 6 Compa a i e senso y quali y o clams (Vene upis homboideus), oys e s (Os ea edulis) and mussels (My ilus gallop o incialis) s o ed unde ozonised slu y ice (SI) o flake ice (FI) in he sp ing Bi al e S o age day Odou Appea ance Tas e and juiciness FI SI FI SI FI SI Clams 1 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 2 3.20 ± 0.45 4.20 ± 0.40 4.40 ± 0.55 4.60 ± 0.55 3.40 ± 0.71 4.20 ± 0.40 4 2.20 ± 0.40 3.80 ± 0.40 3.20 ± 0.45 4.20 ± 0.40 2.80 ± 0.45 3.80 ± 0.40 6 1.40 ± 0.55 (b) 3.80 ± 0.40 (a) 2.80 ± 0.45 (b) 3.20 ± 0.45 (a) 1.60 ± 0.89 (b) 2.80 ± 0.40 (a) Oys e s 1 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 2 4.20 ± 0.40 4.40 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.40 ± 0.55 4.60 ± 0.55 4 2.20 ± 0.40 3.40 ± 0.71 2.80 ± 0.40 2.80 ± 0.4 2.80 ± 0.45 3.20 ± 0.45 6 1.80 ± 0.45 (b) 3.80 ± 0.40 (a) 2.80 ± 0.40 (b) 3.20 ± 0.45 (a) 2.40 ± 0.55 (b) 3.00 ± 0.00 (a) Mussels 1 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 5.00 ± 0.00 2 3.20 ± 0.45 4.40 ± 0.55 4.60 ± 0.55 4.80 ± 0.40 4.40 ± 0.55 4.60 ± 0.55 4 2.00 ± 0.00 3.20 ± 0.45 2.80 ± 0.40 3.80 ± 0.40 2.40 ± 0.55 3.20 ± 0.45 6 1.00 ± 0.00 (b) 2.00 ± 0.70 (a) 2.40 ± 0.55 (b) 3.20 ± 0.45 (a) 1.00 ± 0.00 (b) 2.40 ± 0.55 (a) The esul s a e exp essed as mean ± ange. Means ollowed by di e en le e s (a–b) a e significan ly di e en (P< 0.05). Sco ed on 1–5 poin scale (1: lowes quali y; 5: highes quali y). Slu y ice sys em o bi al e species M. S. Rey e al. 7 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 120 en o oño, únicamen e esul a on se signi ica i amen e di e en es en el caso de la almeja. Se obse ó un e ec o inhibido del HLO en la o mación de N-TMA. Así como en el caso de N-BVT, las di e encias signi ica i as (P<0,05) ue on obse adas p incipalmen e en las mues as de p ima e a. Du an e el almacenamien o pos -mo em, el músculo de bi al o se deg ada en una se ie de e apas debidas a cambios bioquímicos endógenos. El ni el de nucleó idos y sus compues os elacionados han sido u ilizados como índice de escu a (e aluación del alo K) en músculo de pescado (Howga e, 2006). En el p esen e es udio, las mues as co espondien es a las es especies de bi al os y en ambos sis emas de e ige ación, mos a on un aumen o p og esi o en el alo K con el iempo de conse ación. Sin emba go, no se encon a on di e encias (P>0,05) elacionadas con el sis ema de en iamien o empleado, aunque se obse a on alo es K medios al os pa a odas las mues as almacenadas bajo las condiciones de HT en compa ación con las mues as almacenadas bajo las condiciones HLO. Además, se obse a on alo es K al os en las mues as co espondien es a la es ación de o oño al se compa adas con las mues as cap u adas en p ima e a. Es a di e encia ue especialmen e des acable en almeja. Análisis senso ial Pa alelamen e a los análisis mic obiológicos y bioquímicos, se ealiza on análisis compa a i os de la calidad senso ial pa a las es especies de bi al os en o oño y en p ima e a. IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 121 Los esul ados ob enidos de la e aluación senso ial en las mues as de bi al os en o oño, mos a on un a oma esco y ag adable y un aspec o b illan e en el p ime día de almacenamien o an o en las mues as c udas como en las cocinadas. Pa a la almeja, a día 6, el lo e HLO mos ó una calidad signi ica i amen e (P<0,05) mejo en é minos de jugosidad, sabo y apa iencia compa ado con la almeja almacenada en HT. A día 6, la almeja almacenada en HT p esen ó a oma, sabo y apa iencia desag adables en compa ación con la almacenada en HLO, cuya calidad esul ó se acep able. Los análisis senso iales de os a y mejillón en la es ación de o oño, solamen e mos a on a día 4 una mayo pé dida de jugosidad en el lo e HT en compa ación con el lo e HLO. Es e úl imo lo e man u o una calidad acep able en é minos de a oma, sabo y apa iencia. A día 6, ninguno de los lo es de las mues as de os a y mejillón esul ó se acep able, ya que la pun uación media es u o po debajo de 2,0. Los esul ados ob enidos en la e aluación senso ial en p ima e a pa a la almeja, mos a on que pa a el lo e HLO la calidad ue mejo que pa a su homóloga de o oño. Las di e encias en e los lo es HLO y HT de la almeja en p ima e a, esul a on se mayo es que en el caso de los lo es de o oño. La os a almacenada en HLO mos ó ambién mejo calidad a día 6 que las mues as almacenadas en HT, esul ando ene las an e io es una calidad acep able. Al igual que en el caso de la almeja, las di e encias en e los lo es de os a co espondien es a los sis emas HLO y HT ue on signi ica i as (P<0,05) y supe io es que en e los lo es de o oño. No se pudie on a ibui di e encias no ables debido a la a iabilidad es acional en el caso del mejillón, excep o pa a sabo , jugosidad y apa iencia a día 6. IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 122 Es udios senso iales p e ios lle ados a cabo en My ilus edulis (K yzy-Nowek & Wiggin, 1979) encon a on que el mejillón cap u ado en p ima e a e iene la acep abilidad senso ial du an e más iempo que el cap u ado en o oño o in ie no. Es e esul ado es á de acue do con nues os esul ados mic obiológicos, bioquímicos y senso iales ob enidos pa a los lo es HLO. Una posible explicación de es as conclusiones puede es a elacionada, en e o as, con la meno empe a u a del agua en p ima e a (13,5º C) compa ada con la del o oño (15,0º C), así como con el débil es ado isiológico de es as especies desde el o oño has a que el pe iodo de deso e se haya comple ado. Es as azones pueden explica la mejo calidad mic obiológica y senso ial obse ada en las mues as co espondien es a p ima e a. O os pa áme os, como la disponibilidad de alimen o o la p oximidad en composición de las mues as, no se han e aluado en es e es udio. Finalmen e, se debe en a iza que las di e encias obse adas en e los lo es HLO y HT ue on debidas a a ias azones, siendo las más ele an es en e o as: (i) la ápida elocidad de en iamien o de HL, que es una consecuencia de su g an coe icien e de ans e encia de calo , (ii) la di e encia de empe a u a p opo cionada po el lo e HLO (1,5º C meno que el lo e HT), lo que con ie e una di e encia cuad á ica en sus idas ú iles, de mane a que el lo e HLO end á una ida ú il 1,3 eces mayo que el lo e HT (Dalgaa d, 2009); (iii) la mayo cobe u a p opo cionada po los embalajes de la mezcla de HLO a las mues a de bi al os, alcanzándose una mayo p o ección de las mues as con espec o a los enómenos de oxidación y deshid a ación, y (i ) el uso de la mezcla HLO como medio de ehid a ación y cocinado, lo que p opo ciona una mayo ecupe ación de los pa áme os senso iales, en compa ación con el lo e con ol. Pa e 2 CAPÍTULO 3: E ec o a na u al o ganic acid-icing sys em on he mic obiological quali y o comme cially ele an chilled ish species. E ec o de un sis ema de hielo con eniendo ácidos o gánicos na u ales sob e la calidad mic obiológica de especies ma inas e ige adas y de ele ancia come cial. Au ho 's pe sonal copy E ec o a na u al o ganic acid-icing sys em on he mic obiological quali y o comme cially ele an chilled fish species Minia Sanjuás Rey a , Bibiana Ga cía-So o c , José R. Fue es-Gamundi c , San iago Aubou g b , Jo ge Ba os-Velázquez a , * a Depa men o Analy ical Chemis y, Nu i ion and Food Science, School o Ve e ina y Sciences, Uni e si y o San iago de Compos ela, E-27002 Lugo, Spain b Depa men o Sea ood Science and Technology, Ins i u e o Ma ine Resea ch (IIM-CSIC), C/Edua do Cabello 6, E-36208 Vigo, Spain c Coope a i a de A mado es del Pue o de Vigo (ARVI), Muelle del Be bés, Vigo, Spain a icle in o A icle his o y: Recei ed 17 Feb ua y 2011 Recei ed in e ised o m 19 July 2011 Accep ed 5 Oc obe 2011 Keywo ds: Fish S o age O ganic acids Icing sys ems Mic obial quali y Senso y quali y abs ac Na u al p ese a i e o ganic acids (asco bic, ci ic and lac ic acids) we e used o p epa e a no el o ganic acid-flake icing sys em o he chilled p ese a ion o hake (Me luccius me luccius), meg im (Lepido- hombus whi fiagonis) and angle (Lophius pisca o ius). The icing sys em was p epa ed wi h wo di e en concen a ions o a comme cial acid mix u e- o mula con aining he h ee o ganic acids a 800 mg/kg and 400 mg/kg (C-800 and C-400 ba ches, espec i ely). Ae obic mesophiles, psych o ophs, p o eoly ic bac e ia, ime hylamine and pH we e e alua ed and he esul s compa ed wi h senso y analyses. Significan ly (P<0.05) lowe coun s o mesophiles we e ound o hake and meg im in he C-800 and C- 400 ba ches compa ed wi h he con ol ba ch. In he case o angle , significan ly (P<0.05) lowe coun s o mesophiles, psych o ophs and p o eoly ic mic oo ganisms (P<0.05) we e ound o fish s o ed in he C-800 icing condi ions. Bo h C-400 and C-800 meg im ba ches exhibi ed significan ly (P<0.05) lowe pH alues han he con ol ba ch, and his esul was also obse ed in he C-800 angle ba ch. Senso y analysis confi med ha he shel li es o he h ee fish species in he C-800 ba ch we e ex ended. Acco ding o he pa ame e s assessed, s o age o hake, meg im and angle in he p oposed ice sys em be e p o ec s hei mic obial and senso y quali ies. Ó2011 Else ie L d. All igh s ese ed. 1. In oduc ion The quali y and eshness o ma ine species apidly decline pos - mo em due o a a ie y o mic obial and biochemical deg ada ion mechanisms (Pigo & Tucke ,1990; Whi le, Ha dy, & Hoobs,1990). Thus, he senso y quali y and nu i ional alue o chilled fish de e io a e as a esul o di e en deg ada i e pa hways, such as endogenous enzyma ic ac i i y, mic obial de elopmen and lipid oxida ion mechanisms (Ola sdó i e al., 1997; Whi le e al., 1990). To slow he mechanisms in ol ed in quali y loss, he fish spec- imens should be e ige a ed immedia ely a e cap u e. The e o e, fish ha e adi ionally been cooled and s o ed in ei he flake ice (Nunes, Ba is a, & Mo âo de Campos, 1992), e ige a ed sea wa e (K aus, 1992), o ice slu ies (Ba os-Velázquez, Galla do, Calo, & Aubou g, 2008; Rod íguez, Ba os-Velázquez, Piñei o, Galla do, & Aubou g, 2006; Rod íguez, Losada, Aubou g, & Ba os-Velázquez, 2004), o hey ha e been p ese ed by exposu e o chemical agen s (Hwang & Regens ein, 1995). Howe e , he sea ood indus y is always sea ching o new p ese a ion s a egies o ex end he shel li e o fish and p o ide he consume s wi h fish ma e ial wi h he bes quali y, bo h a he senso y and nu i ional le els. Na u al o ganic acids a e p ese a i es ha ha e been ecei ing inc easing a en ion as minimal p ocessing s a egies because hey a e easily a ained, ha e a low comme cial cos and can be used in ood a a wide ange o pe mi ed concen a ions, hese ha ing o be decla ed in he ood labels. These o ganic acids a e soluble in lipids in hei undissocia ed o ms, which allows hem o c oss he mic obial memb ane in o he mic obial cy oplasm, whe e he acids end o dissocia e and deli e hyd ogen ions and a pa icula anion (Boo h, 1985; Boo h & K oll, 1989). As a esul , mic oo ganisms a e o ced o expo he excess hyd ogen ion o main ain a physiolog- ical pH inside he cell, which is an ene gy-deple ing p ocess ha limi s bac e ial g ow h. O he wise, he excess hyd ogen ions in he cy oplasm may cause he pH o dec ease o le els ha a e incom- pa ible wi h bac e ial g ow h (Gould, 1996). Among he na u al o ganic acids, asco bic acid and ci ic acid and hei sal s a e well-known chela o s and acidulan s in biolog- ical sys ems, which a e especially beneficial o fish oil and *Co esponding au ho . Tel.: þ34 600 942264; ax: þ34 981 825474. E-mail add ess: [email p o ec ed] (J. Ba os-Velázquez). Con en s lis s a ailable a SciVe se ScienceDi ec LWT - Food Science and Technology jou nal homepage: www.else ie .com/loca e/lw 0023-6438/$ esee on ma e Ó2011 Else ie L d. All igh s ese ed. doi:10.1016/j.lw .2011.10.003 LWT - Food Science and Technology 46 (2012) 217e223 Au ho 's pe sonal copy emulsions (Kellehe , Sil a, Hul in, & Wilhelm, 1992; Osbo n-Ba nes & Akoh, 2003), minced fish (Hwang & Regens ein, 1995; S odolnik, Blasiak, & B oszedzka, 1992), fish fille s (Badii & Howell, 2002; Pou ashou i, Shabanpou , Aubou g, Rohi, & Shabani, 2009) and whole fish (Aubou g, Pé ez-Alonso, & Galla do, 2004). T ea men wi h lac ic acid has also been epo ed o be e ec i e o ex ending he shel li es o fish fille s (Kim, Hea nsbe ge , & Eun, 1995; Me in, E kan, Va lik, & A an, 2001) and coa ed fish (Gogus, Bozoglu, & Yu dugul, 2006). In e es ingly, he e ec i eness o inhibi ing he g ow h o G am-nega i e bac e ia, which a e esponsible o fish spoilage, has also been epo ed (Alakomi e al., 2000). Howe e , when employed abo e ce ain concen a ions o o ela i ely long exposu e imes, e idence o fish diges ion by he o ganic acids has been obse ed, which may p oduce un a ou able senso y and physical p ope ies o he fish (Kim e al., 1995; Me in e al., 2001). This s udy p o ides a no el s a egy ha employs aqueous solu ions o na u al o ganic acids as biop ese a i es o p epa e flake ice o chilling fish specimens. We ha e p e iously demon- s a ed he biochemical benefi s o employing an o ganic acid-icing sys em, including asco bic acid, ci ic acid and lac ic acid, on comme cially ele an fish species in e ms o lipid oxida ion and hyd olysis (Ga cía-So o, Sanxuás, Ba os-Velázquez, Fue es- Gamundi, & Aubou g, 2011). Howe e , he mic obial e ec s o his sys em ha e no been e alua ed o da e. Acco dingly, his wo k ocused on s udying he e ec s o an o ganic acid-icing sys em on he mic obial de elopmen and shel li es o h ee comme cially ele an fish species (hake, Me luccius me luccius; meg im, Lep- ido hombus whi fiagonis; and angle , Lophius pisca o ius) om he G and Sole No h A lan ic fishing bank du ing e ige a ed s o age. 2. Ma e ials and me hods 2.1. P epa a ion o icing sys ems including o ganic acids A comme cial o mula (BPS2) including an o ganic acid mix u e was p o ided by he company A lan ic One S.L. (Vigo, Spain) o use in he p esen wo k. This p oduc consis ed o a wa e -soluble iscous liquid o asco bic acid, ci ic acid and lac ic acid (1 meq o each acid/120 mg p oduc ) in glyce ol, which is ega ded as sa e (GRAS) o use in oods acco ding o he Eu opean and Ame ican egula o y agencies (Giese, 1996; Mad id, Mad id, & Mad id, 1994). P elimina y ials we e pe o med o op imise he mos con enien p oduc concen a ions o he icing sys em in e ms o senso y quali y. Thus, he e ec s o a wide ange (70e2000 mg/kg) o aqueous concen a ions o he o ganic acid mix u e on he senso y quali ies o fish specimens we e ini ially es ed. F om his analysis, i was concluded ha 800 mg/kg and 400 mg/kg p o ided he mos con enien esul s (da a no shown). The e o e, bo h concen a ions we e selec ed and employed in his s udy as he C- 800 and C-400 ba ches, espec i ely. The o ganic acid-icing mix u e was p epa ed as flake ice wi h wa e con aining he desi ed concen a ions o o ganic acids in an Icema ic F100 Compac de ice (Cas elmac Spa, Cas el anco, I aly). Bo h ba ches we e compa ed o fish kep in adi ional ice p epa ed om wa e (C-0 ba ch). The pH alues o he flake ice sys ems conside ed we e 7.22, 3.96 and 3.62 o he C-0, C-400 and C-800 ba ches, espec i ely. 2.2. Fish ma e ial, p ocessing and sampling Specimens o hake (Me luccius me luccius; 96 indi iduals), meg im (L. whi fiagonis; 78 indi iduals) and angle (L. pisca o ius; 78 indi iduals) we e caugh nea he Galician A lan ic coas (No h- Wes e n Spain) in au umn o 2009 and kep in ice on-boa d. Upon a i al o he labo a o y, he specimens o each species we e ana- lysed by iplica e on day one. The emaining specimens we e di ided in o h ee ba ches and s o ed in di e en ypes o ice (C- 800, C-400 and C-0 condi ions) a a 1:1 fish- o-ice a io. All ba ches we e placed in a e ige a ed oom (4  C). The s o age boxes employed allowed d aining, and ice was enewed when equi ed. Fish samples om di e en ba ches we e collec ed o analysis on days one, fi e, eigh and 12; day 15 only was conside ed o hake. On day ze o, six indi iduals o each fish species we e analysed as ini ial samples ( h ee g oups o wo indi iduals). Fo each fish species and icing condi ion, h ee di e en g oups we e analysed sepa a ely o achie e s a is ically significan esul s (n¼3). 2.3. Mic obiological analyses Samples o 10 g o fish muscle we e dissec ed asep ically om chilled fish specimens, mixed wi h 90 ml o pep one wa e (0.1 g/ 100 g in wa e ) (Me ck, Da ms ad , Ge many), and homogenised in a s omache (AES, Combou g, F ance) as p e iously desc ibed (Ben- Gigi ey, Viei es Bap is a de Sousa, Villa, & Ba os-Velázquez, 1998; Ben-Gigi ey, Viei es Bap is a de Sousa, Villa, & Ba os-Velázquez, 1999). In all cases, se ial dilu ions om he mic obial ex ac s we e p epa ed in pep one wa e . To al ae obes we e in es iga ed by su ace inocula ion in o pla e coun aga (PCA, Oxoid L d., London, UK) a e incuba ion a 30  C o 48 h. Psych o ophs we e also in es iga ed in PCA, bu incuba ion was ca ied ou a 7e8  C o se en days. Mic oo ganisms exhibi ing a p o eoly ic pheno ype we e in es iga ed in casein-aga medium a e incuba ion a 30  C o 48 h, as p e iously desc ibed (Ben-Gigi ey, Viei es Bap is a de Sousa, Villa, & Ba os-Velázquez, 2000). 2.4. TMA-N analysis T ime hylamine-ni ogen (TMA-N) alues we e de e mined by he pic a e me hod as p e iously desc ibed (Tozawa, E okiba a, & Amano, 1971). This echnique in ol es he p epa a ion o a 5 g/ Table 1 Scale employed o e alua ing he senso y quali y o fish ba ches. A ibu e Highes quali y (E) Good quali y (A) Fai quali y (B) Unaccep able quali y (C) Skin Ve y in ense pigmen a ion; anspa en mucus Milky mucus; insignifican pigmen a ion losses Sligh ly g eyish mucus; pigmen a ion wi hou shine Widely opaque mucus; impo an pigmen a ion losses Ex e nal odou Sha ply seaweedy and shellfish Weakly seaweedy and shellfish Incipien ly sou and ancid Sou and ancid Gills B igh ly ed; wi hou odou ; lamina pe ec ly sepa a ed Rose colou ed; wi hou odou ; lamina adhe ed in g oups Sligh ly pale; incipien fishy odou ; lamina adhe ed in g oups G ey-yellowish colou ; in ense ammonia odou ; lamina o ally adhe ed Consis ency P esence o pa ial disappea ance o igo mo is symp oms Fi m and elas ic; p essu e signs disappea immedia ely and comple ely P esence o mechanical signs; elas ici y no ably educed Impo an shape changes due o mechanical ac o s Flesh odou Sha ply seaweedy and shellfish Weakly seaweedy and shellfish Incipien ly sou and ancid Sou and ancid M.S. Rey e al. / LWT - Food Science and Technology 46 (2012) 217e223218 Au ho 's pe sonal copy 100 g ichlo oace ic acid ex ac o fish muscle (10 g/25 ml). The esul s we e exp essed as mg TMA-N/100 g muscle. 2.5. Assessmen o pH alue The e olu ion o pH in hake, meg im and angle du ing he s o age ime was de e mined by means o a pH-me e fi ed wi h a 6-mm diame e inse ion elec ode (C ison, Ba celona, Spain). The pH le el was measu ed h ough pene a ion o he elec ode in o he fish samples. 2.6. Senso y analysis The senso y analysis was conduc ed by a senso y panel o fi e expe ienced judges, h ee male and wo emale wi h an age in he 25e50 y ange, acco ding o he guidelines conce ning esh and e ige a ed fish compiled in Table 1 (Council Regula ion,1990). The panellis s had been in ol ed in senso y analysis o di e en kinds o fish and sea ood p oduc s o he las en yea s. Be o e he p esen expe imen , a special aining was adminis e ed on chilled hake, meg im and angle . Such aining consis ed in he e alua ion o e ige a ed specimens belonging o he h ee species and exhibi ing di e en ini ial quali ies. Special a en ion was paid o he e olu ion o he di e en senso y pa ame e s o each species om he ini ial s a e un il he senso y a ibu es we e no accep able. Fou ca ego ies we e used o ank he samples: highes quali y (E), good quali y (A), ai quali y (B) and unaccep able quali y (C). Senso y assessmen o he fish included he ollowing pa ame e s: gills (odou , colou and mucus de elopmen ), eyes, ex e nal odou (de elopmen o pu id and o he o -odou ), muscle odou ( aw and cooked fish; de elopmen o pu id and o he o -odou ) and as e (cooked fish; de elopmen o pu id and o he o - as e). A each sampling ime, whole fish specimens we e p esen ed o he panellis s in indi idual ays, which we e sco ed indi idually. 2.7. S a is ical analyses Bac e ial coun s we e ans o med in o log CFU/g be o e unde going s a is ical analysis. Da a co esponding o he h ee icing ba ches we e subjec ed o one-way analysis o a iance o assess significan (P<0.05) di e ences be ween ba ches. The PASW S a is ics 18 so wa e o Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) was used o explo e he s a is ical significance o he esul s, including mul i a ia e con as s and mul iple compa isons by Tukey es . A confidence in e al a he 95% le el was used in all cases. 3. Resul s and discussion 3.1. Mic obiological analyses The compa a i e e olu ion o ae obic mesophiles du ing s o age o he h ee fish species can be seen in Figs. 1e3. S a is ically significan ly (P<0.05) lowe mesophile coun s we e ound o hake (Fig. 1) and meg im (Fig. 2) s o ed in he C-800 and C-400 sys ems compa ed wi h he C-0 con ol ba ches. On he o he hand, he angle (Fig. 3A) C-800 ba ch exhibi ed s a is ically significan ly (P<0.05) lowe mesophiles coun s han he C-400 and C-0 ba ches, and he e we e no s a is ically significan di e ences be ween wo la e ba ches. The ae obic mesophile numbe s o hake and meg im C-800 and C-400 ba ches we e below 7 log CFU/g and o angle was below 6 log CFU/g a he end o s o age. These alues ob ained o he fish specimens s o ed in he p oposed o ganic icing sys em we e below hose gene ally conside ed necessa y o induce fish spoilage (G am & Huss,1996). In con as , he mesophile coun s we e as high as 7.15 log CFU/g and 7.26 log CFU/g o he hake and meg im C-0 ba ches, espec i ely. Ou esul s ag eed well wi h o he au ho s ha epo ed he e ec i eness o o ganic acids o inhibi ion o ae obic bac e ia e olu ion in spiny dogfish (Squalus acan hias)(Sengoe , Mol, & Uecok, 2007). In addi ion, o he au ho s ound ha fish p oduc s ea ed wi h ellagic acid in combina ion wi h asco bic acid and sodium asco ba e exhibi ed a significan delay in he p oli e a ion o ae obic mesophiles (Zambuchini, Fio ini, Ve denelli, O pianesi, & Ballini, 2008) Wi h espec o he psych o ophs, s a is ically significan ly (P<0.05) lowe coun s we e de e mined o angle (Fig. 3B) s o ed in he C-800 sys em compa ed wi h he C-400 and C-0 ba ches. Ne e heless, he psych o oph coun s on he las day o s o age (12 days) we e lowe han 7 log CFU/g o any o he ba ches es ed. These esul s also ag ee wi h a p e ious s udy in which o he fish Fig. 1. E olu ion o mesophilic ae obes in hake muscle (Me luccius me luccius) o chilled fish specimens s o ed unde C-0 ($$$: con ol), C-400 (:: 400 mg/kg o ganic acids) and C-800 (-: 800 mg/kg o o ganic acids) condi ions. All analyses we e done by iplica e. Fig. 2. E olu ion o mesophilic ae obes in he muscle o chilled meg im (Lepido- hombus whi fiagonis) specimens s o ed unde C-0 ($$$: con ol), C-400 (:: 400 mg/kg o ganic acids) and C-800 (-: 800 mg/kg o o ganic acids) condi ions. All analyses we e done by iplica e. M.S. Rey e al. / LWT - Food Science and Technology 46 (2012) 217e223 219 Au ho 's pe sonal copy species, such as spiny dogfish, we e ea ed wi h sal s, asco bic acid and ci a e (Sengoe e al., 2007; Yang, Jha e i, & Cons an inides, 1981). No significan di e ences o psych o ophs we e ound o meg im o hake. Finally, he coun s o p o eoly ic mic oo ganisms we e also significan ly (P<0.05) lowe in he angle C-800 ba ch han in he o he wo ba ches (Fig. 3C). The ole o p o eoly ic mic oo ganisms in he deg ada ion o fish muscle has been highligh ed (Rod íguez, Ba os-Velazquez, Ojea, Pinei o, & Aubou g, 2003). Acco dingly, he pa ial inhibi ion o his mic obial g oup by he o ganic acids es ed in his s udy is ano he ema kable esul in e ms o fish quali y. As in he case o he psych o ophs, no significan di e ences o p o eoly ic mic oo ganisms we e ound in meg im o hake. Acco ding o he esul s o he mic obial analysis, he p esence o o ganic acids in he icing sys em significan ly slowed down he g ow h o ce ain mic obes in fish muscles; his esul was espe- cially ele an o angle , and o a lesse ex en , o hake and meg im. O he s udies o flow ice sys ems p epa ed om ma ine wa e indica ed ha when he ice mel s, he sal solu ion may exe a washing e ec o he fish su ace, which educes he su ace mic obial load and hus limi s mic obial di usion in o he muscle h ough he skin (Campos, Rod íguez, Losada, Aubou g, & Ba os- Velázquez, 2005; Rod íguez, Ba os-Velázquez, Piñei o, Galla do & Aubou g, 2006; Rod íguez e al., 2004). Likewise, in his s udy, mel ing o he ice flakes p epa ed wi h o ganic acids may exe a simila washing e ec , which also p e en s he o ma ion o su ace mic obial biofilms ha may induce fish spoilage. No significan inhibi o y e ec o glyce ol, he sol en o he o ganic acid mix u e e alua ed, on mic obial g ow h can be a gued, since he glyce ol concen a ion in he ice mix u e was 0.22 g/100 g, his being qui e below he concen a ion o 5 g/100 g conside ed as neccessa y o exe ing significan mic obial inhibi ion (Roge , Fon y, And e, & Goue , 1992) 3.2. TMA-N e olu ion The e olu ion o TMA-N in fish muscles du ing e ige a ed s o age is p esen ed in Table 2. In he case o hake, he C-800 ba ch exhibi ed lowe le els o TMA-N o ma ion h oughou s o age compa ed wi h he o he wo ba ches, which indica es ha he combina ion o o ganic acids a his p opo ion is beneficial o dec easing he p oduc ion o hese amines by mic obes. In he case o meg im, he inclusion o o ganic acids in he icing sys em did no p oduce any significan imp o emen in e ms o TMA-N o ma- ion. Finally, o he angle , he inco po a ion o ci ic acid, asco bic acid and lac ic acid in he C-800 ba ch p o ided significan p o ec ion agains TMA-N o ma ion compa ed wi h he C-0 ba ch a all sampling imes. Mo eo e , he e ec o he C-400 ba ch, which included in e media e concen a ions o he na u al o ganic acids, was also a ou able compa ed wi h he C-0 ba ch. 3.3. pH analyses Inc eases in he pH o he fish muscle indica e he accumula ion o alkaline compounds, such as ammonia compounds and TMA, which a e p incipally de i ed om mic obes (Heba d, Flick, & Ma in, 1982). In his sense, i has been sugges ed ha pH alues abo e 7 may limi he shel li es o ce ain fish species (Mo al,1987; Ruíz Capillas & Mo al, 2001). In ou s udy, no significan e ec s o he o ganic acids on pH e olu ion o hake muscle we e obse ed. Wi h espec o he muscles o meg im s o ed in he C-800 and C-400 sys ems, he pH alues we e significan ly (P<0.05) lowe compa ed wi h he C- 0 con ol ba ch (Fig. 4A). Thus, he pH di e ences a he end o he s o age pe iod we e mo e han 0.50 pH uni s, which indica es ha he inco po a ion o na u al p ese a i es o he icing sys em, a ei he o he wo concen a ions es ed, significan ly educed he mic obial and endogenous alkalinising mechanisms ha may limi fish shel li e. Likewise, in he case o angle s o ed in he C-800 icing sys em, he pH alue o he muscle was significan ly (P<0.05) lowe compa ed wi h he C-400 and C-0 con ol ba ches (Fig. 3D). These esul s ag ee wi h o he s udies ha epo ed be e pH alue main enance in ca fish fille s ea ed wi h lac ic acid (Kim Fig. 3. E olu ion o mesophilic ae obes (A), psych o ophs (B) and p o eoly ic bac e ia (C) in he muscle o chilled angle (Lophius pisca o ius) specimens s o ed unde C- 0($$$: con ol), C-400 (:: 400 mg/kg o ganic acids) and C-800 (-: 800 mg/kg o o ganic acids) condi ions. All analyses we e done by iplica e. M.S. Rey e al. / LWT - Food Science and Technology 46 (2012) 217e223220 Au ho 's pe sonal copy e al.,1995) and in sole specimens ea ed wi h ellagic acid, asco bic acid and sodium asco ba e (Zambuchini e al., 2008). Howe e , and simila o p e ious analyses, ou s udy includes a no el mix u e o o ganic acids ha has no been es ed be o e o fish p ese a ion pu poses. 3.4. Senso y analyses The esul s o he senso y e alua ion o he h ee species es ed wi h he di e en icing sys ems a e p esen ed in Table 3. Ini ial specimens o hake exhibi ed he highes quali y (E) while angle and meg im specimens we e one deg ee unde , exhibi ing A quali y, acco ding o he examina ion o gills and ex e nal odou . These di e ences ound inland a e equen since no all species a e caugh a he same ime by he ships ope a ing in he G and Sole fishing bank du ing 15 days. In he case o hake, he C-800 ba ch, which inco po a ed he highes concen a ion o o ganic acids, showed he bes beha iou and e ained an accep able quali y e en a e 12 days o s o age; howe e , his esul was no obse ed o he o he wo ba ches. Fo hake, s o age in he C-800 o ganic acid- icing sys em p o ided be e p ese a ion o all senso y quali y pa ame e s, especially muscle odou and as e. In he case o meg im, simila esul s we e ob ained. Thus, only he C-800 ba ch e ained accep able quali y a e eigh days o s o age, as compa ed wi h he o he wo icing ba ches. As was he case o hake, muscle odou and as e was he senso y pa ame e s o which he C-800 o ganic acids-icing sys em p o ided he bes esul s. Finally, angle specimens exhibi ed a be e beha iou in all ba ches compa ed wi h hake and meg im. Howe e , he C-800 ba ch main ained e y good senso y quali y up un il day eigh , and he o he ba ches we e also conside ed o be accep able a ha ime. Mo eo e , he angle specimens s o ed in he C-800 o ganic acid-icing sys em we e accep able on day 12, which was no obse ed o he o he wo ba ches. The shel li es o angle specimens in he icing sys ems conside ed in his wo k we e longe as compa ed wi h hake and meg im. This esul co ela es well wi h TMA-N o ma ion, which Table 2 T ime hylamine (TMA) assessmen (mg TMA-N/100 g muscle) a in fish kep in di e en kinds o ice. b Chilling ime (days) Hake Meg im Angle C-0 C-400 C-800 C-0 C-400 C-800 C-0 C-400 C-800 1 0.17 (0.05) 0.10 (0.03) 0.15 (0.03) 2.60 (0.35) 2.16 (0.20) 1.62 (0.77) 2.62 b (1.48) 1.08 b (0.57) 0.22 a (0.18) 5 1.00 b (0.49) 0.81 ab (0.19) 0.29 a (0.06) 5.89 (0.21) 5.98 (2.97) 7.48 (2.51) 4.80 (1.57) 6.15 (2.18) 2.72 (2.43) 8 6.18 b (2.46) 3.76 ab (1.17) 1.99 a (0.36) 12.07 (3.85) 10.42 (3.97) 13.70 (0.93) 9.83 c (1.37) 7.25 b (0.91) 5.24 a (1.84) 12 11.12 b (1.50) 11.98 b (1.30) 8.26 a (1.09) 15.66 ab (4.19) 12.04 a (3.79) 18.19 b (1.61) 11.76 b (1.95) 8.48 ab (1.27) 7.58 a (1.73) 15 17.12 b (2.18) 16.79 b (1.56) 12.84 a (1.04) Ini ial TMA alues: 0.11 0.02 (hake), 1.43 0.61 (meg im) and 1.87 1.56 (angle ). All analyses we e done by iplica e. a Mean alues (n¼3) a e indica ed; s anda d de ia ions a e exp essed in pa en heses. b Ice condi ions: C-0, C-400 and C-800 ep esen he con ol and he ba ches con aining 400 mg/kg and 800 mg/kg o o ganic acids, espec i ely. Fig. 4. Changes in he muscle pH o chilled meg im (A) and angle (B) specimens s o ed unde C-0 ($$$: con ol), C-400 (:: 400 mg/kg o ganic acids) and C-800 (-: 800 mg/kg o o ganic acids) condi ions. All analyses we e done by iplica e. Table 3 Senso y accep ance a o hake s o ed unde di e en icing condi ions. b A ibu e Icing sys em Chilling ime (days) Hake Meg im Angle 5 8 12 15 1 5 8 12 1 5 8 12 Gills C-0 B B C C A B C C A B B B C-400 A B B C A A B C A A B B C-800 A B B C A A B C A A A B Eyes C-0 A B C C A A B B A A A B C-400 A B B C A A B B A A A B C-800 A B B C A A B B A A A B Ex e nal odou C-0 A B C C A B B C A A B C C-400 A B B C A B B C A A B C C-800 A B B C A B B C A A A B Muscle odou and as e C-0 ABC C ABCC ABBC C-400 A B C C A A C C A B B C C-800 A A B C A A B C A A A B All analyses we e done by iplica e. a Ini ial specimens we e ca ego y E o all a ibu es conside ed. Fish on day one we e ca ego y A o all a ibu es conside ed. E: excellen quali y; A: good quali y; B: ai quali y and C: unaccep able quali y. b Ice condi ions: C-0, C-400 and C-800 ep esen he con ol and he ba ches con aining 400 mg/kg and 800 mg/kg o o ganic acids, espec i ely. M.S. Rey e al. / LWT - Food Science and Technology 46 (2012) 217e223 221 IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 136 la conside ada necesa ia pa a eje ce una inhibición mic obiológica signi ica i a (Roge y col., 1992). Análisis bioquímico La o mación de N-TMA en músculo de me luza e ige ada en el lo e C-800, mos ó alo es meno es a lo la go del almacenamien o en compa ación con los o os dos lo es. Es o indica que la combinación de ácidos en es a p opo ción es bene iciosa en la alen ización de la mic obio a p oduc o a de aminas olá iles. En el caso del gallo, el hecho de inclui ácidos o gánicos en el sis ema de hielo no p odujo ningún aumen o signi ica i o en é minos de o mación de N-TMA. Po úl imo, en el caso del ape, la inco po ación de ácidos cí ico, ascó bico y lác ico en el lo e C-800, eje ció un e ec o p o ec o en e a la o mación de N-TMA en compa ación con el lo e C-0 pa a odos los iempos de mues eo. Po o a pa e, el e ec o del lo e C-400, que incluyó concen aciones in e medias de los ácidos o gánicos na u ales, ambién ue a o able en compa ación con el lo e C-0. El inc emen o de pH en el músculo de pescado indica la acumulación de compues os alcalinos, p incipalmen e amoniaco y TMA, que son los de i ados p incipales de la ac i idad mic obiana (Heba d, y col., 1982). En es e sen ido, se ha suge ido que alo es supe io es a 7 pueden limi a la ida ú il de cie as especies de pescado (Mo al, 1987; Ruiz Capillas & Mo al, 2001). En nues o es udio, la e olución del pH en el músculo de me luza no esul ó se signi ica i o po la p esencia de ácidos. Con espec o a gallo almacenado en los sis emas C-800 y C-400, los alo es de pH en el músculo esul a on se signi ica i amen e (P<0,05) meno es en compa ación con el lo e con ol. Así, al inal del pe iodo de almacenamien o, las IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 137 di e encias en los alo es de pH ue on mayo es de 0,50 unidades, lo que indica que la inco po ación de los ácidos en el sis ema de hielo, en cualquie a de las dos concen aciones p obadas, edujo signi ica i amen e los mecanismos mic obianos y endógenos de alcalinización, mecanismos que pueden limi a la ida ú il del pescado. De la misma mane a, en el caso del ape almacenado en el sis ema de hielo C-800, el alo de pH esul ó se signi ica i amen e (P<0,05) meno en compa ación con los lo es C-400 y con ol. Es os esul ados es án en consonancia con o os es udios, donde se consiguió man ene buenos alo es de pH en ile es de silu o (Silu us glanis) a ados con ácido lác ico (Kim y col., 1995) y mues as de lenguado a adas con ácido elágico, ácido ascó bico y asco ba o de sodio (Zambuchini y col., 2008). Análisis senso ial En elación al análisis senso ial, los indi iduos de me luza iniciales p esen a on la mayo calidad (E), mien as que los de ape y gallo e leja on un g ado de calidad meno (A), según el examen de las b anquias y olo ex e no. Es as di e encias son ecuen es, ya que no odas las especies son cap u adas al mismo iempo po los buques que ope an en el calade o de G an Sol. En el caso de me luza, el lo e C-800, que posee la concen ación mayo de ácidos, p esen a el mejo compo amien o y man iene una calidad acep able incluso después de 12 días de almacenamien o. Sin emba go, es e esul ado no se obse ó pa a los o os dos lo es. Po lo que el almacenamien o de me luza en el sis ema de hielo ácido C-800 p opo cionó una mejo conse ación en é minos de calidad senso ial, especialmen e olo y sabo . IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 138 En el caso de gallo, se ob u ie on esul ados simila es. Así, solamen e el lo e C-800 man u o una calidad acep able, en lo que espec a a los pa áme os senso iales de olo y sabo , después de 8 días de almacenamien o en compa ación con los o os dos lo es. Pa a inaliza , los ejempla es de ape expe imen a on un compo amien o mejo en odos los lo es, en compa ación con me luza y gallo. Además, el ape almacenado en el sis ema hielo C-800 llegó a se acep able a día 12, esul ado que no ue obse ado en los o os dos lo es. La ida ú il de los indi iduos de ape conside ados en el p esen e abajo ue mayo que en el caso de me luza y gallo. Es os esul ados se co elacionan bien con la o mación de N-TMA, que esul ó se meno en el caso del ape en compa ación con la me luza y el gallo, así como con el pH, cuyos alo es aumen a on le emen e en el caso del ape. Es os esul ados indican cla amen e un impac o más limi ado de los mecanismos alcalinizan es en ape, lo que implica una limi ada o mación de compues os ni ogenados, que a ec an nega i amen e a la calidad senso ial y a la ida ú il del pescado (Rod íguez, y col., 2003). Es os esul ados es án de acue do con es udios p e ios donde se puso de mani ies o la esis encia de ape e ige ado en hielo adicional y en hielo líquido en e a la deg adación química y mic obiana (Ba os-Velázquez, y col., 2008). En gene al y con o me a es os esul ados, no se encon a on bene icios signi ica i os en el uso del sis ema de hielo ácido C-400 compa ado con el sis ema con ol. Po el con a io, la inco po ación de ácidos ascó bico, lác ico y cí ico a la concen ación u ilizada en el lo e C-800 dio como esul ado una mejo a IV- RESULTADOS Y DISCUSIÓN 139 de la calidad y ex ensión de ida ú il en compa ación con los o os dos lo es. Es os esul ados, concue dan con los ecuen os mic obiológicos de e minados en es e es udio, que mos a on un len o c ecimien o mic obiano pa a la me luza, el ape y el gallo como esul ado de la combinación de ácidos en el lo e C-800. En es e es udio, las piezas de pescado almacenadas en hielo en escamas ue on almacenadas en una habi ación iso e ma a 4º C. El e ec o combinado de la e ige ación y los ácidos o gánicos esul a on ene e ec os bene iciosos en é minos de calidad mic obiológica y senso ial pa a las es especies analizadas. Más aún, las en ajas del hielo líquido como sis ema de p e- a amien o pa a educi la empe a u a del pescado, lige amen e po debajo de 0º C p e io almacenamien o en hielo en escamas, han sido es udiadas an e io men e (Piñei o y col., 2005). En es e sen ido, el sis ema de hielo en escamas, incluyendo los ácidos o gánicos p opues os en es e es udio, p opo ciona ía en ajas adicionales si uese combinado con un a amien o p e io de en iamien o con hielo líquido. Pa e 2 CAPÍTULO 4: E ec o a wo-s ep na u al o ganic acid ea men on mic obial ac i i y and lipid damage du ing blue whi ing (Mic omesis ius pou assou) chilling. E ec o de un sis ema de hielo con eniendo ácidos o gánicos na u ales sob e la ac i idad mic obiológica y al e ación lipídica de la bacaladilla (Mic omesis ius pou assou) du an e su almacenamien o en e ige ación. O iginal a icle E ec o a wo-s ep na u al o ganic acid ea men on mic obial ac i i y and lipid damage du ing blue whi ing (Mic omesis ius pou assou) chilling Minia Sanjua ´s-Rey, 1 Bibiana Ga cı ´a-So o, 2 Jo ge Ba os-Vela ´zquez, 1 Jose ´R. Fue es-Gamundi 2 & San iago P. Aubou g 3 * 1 Depa men o Analy ical Chemis y, Nu i ion and Food Science, Escuela de Ciencias Ve e ina ias, Uni e sidad de San iago de Compos ela, Lugo, Spain 2 Coope a i a de A mado es de Pesca del Pue o de Vigo (ARVI), Vigo, Spain 3 Depa men o Food Technology, Ins i u o de In es igaciones Ma inas (CSIC), Vigo, Spain (Recei ed 9 July 2010; Accep ed in e ised o m 11 Janua y 2011) Summa y Quali y loss inhibi ion in chilled blue whi ing (Mic omesis ius pou assou) was in es iga ed. Fo i , a na u al o ganic acid-mix u e including asco bic, ci ic and lac ic acids was applied in a wo-s ep p ocessing s a egy: (i) as an aqueous dipping medium p e ious o chilling s o age and, (ii) included in he flake ice employed as chilling sys em. As a esul o he acid-mix u e addi ion, a pa ial inhibi ion o mic obial and biochemical mechanisms in ol ed in he quali y loss was ob ained. Thus, ae obe and psych o ophe coun s in ea ed fish showed lowe anges (2.07–4.15 and 2.43–4.39 log CFU g )1 , espec i ely) han con ol fish (2.64–5.83 and 2.30–5.30 log CFU g )1 , espec i ely). Senso y analysis e ealed ha ea ed fish was s ill accep able a he end o he expe imen (day 9), while con ol fish was ejec ed a his ime. Lipid hyd olysis ( ee a y acid o ma ion) p o ed o be mo e limi ing o fish quali y han lipid oxida ion (pe oxide and hioba bi u ic acid- eac i e subs ance o ma ion). Keywo ds Asco bic, ci ic, dipping, icing, lac ic, lipid damage, mic obial ac i i y, Mic omesis ius pou assou. In oduc ion The de e io a ion o ma ine species begins immedia ely upon cap u e o ha es , and he deg ee o which i con inues depends di ec ly on s o age condi ions. Flake ice has been he mos employed me hod o cool and s o e fish p oduc s and pa ially inhibi de imen al effec s on he comme cial alue. Howe e , significan de e io a ion o senso y quali y and nu i ional alue has been de ec ed in chilled fish as a esul o diffe en damage pa hways (Whi le e al., 1990; Ola sdo ´ i e al., 1997). To e a d fish damage as long as possible, and acco dingly ex end shel li e, a wide numbe o p ese a i e s a egies o be combined o flake ice chilling ha e been es ed sa is ac o ily such as p e ious chemical and physical ea men s (Toledo-Flo es & Zall, 1992; Ashie e al., 1996) and employmen o p ese a- i e packaging (Ozen & Flo os, 2001; Si e s ik e al., 2002). Among p e ious chemical ea men s o chilling s o age, na u al low molecula weigh o ganic acids and hei sodium sal s ha e shown o ep esen a ele an choice because o hei easy a ailabili y, low comme cial cos and wide ange o pe mi ed concen- a ions o hei use. Thus, asco bic and ci ic acids (AA and CA, espec i ely) a e widely known o hei ole as chela o s, acidulan s in biological sys ems and syne gis s o p ima y an ioxidan s, so ha a p ofi able effec on minced fish (Hwang & Regens ein, 1988; S odolnik e al., 1992), fish fille s (Badii & Howell, 2002; Kilinc e al., 2009; Pou ashou i e al., 2009) and whole fish (Aubou g e al., 2004) has been obse ed. Fu he , lac ic acid (LA) has been epo ed o be effec i e in supp essing G am-nega i e bac e ia, which a e known o be he mos impo an fish spoile g oup; hus, LA p e- ea men has shown o be effec i e in p ese ing and ex ending shel -li e in fish fille s (Kim e al., 1995; Me in e al., 2001; E kan, 2003; E kan & Mol, 2004), coa ed fish (Gogus e al., 2006) and fish slices (Sallam, 2007). Howe e , when employed abo e ce ain concen- a ions o o ela i ely long exposu e imes, some *Co esponden : E-mail: [email p o ec ed] In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011, 46, 1021–1030 1021 doi:10.1111/j.1365-2621.2011.02565.x 2011 The Au ho s. In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology e idence o fish diges ion by such o ganic acids could be obse ed, which lead o de imen al senso y and phys- ical p ope ies o he fish (Kim e al., 1995; Me in e al., 2001). Blue whi ing (Mic omesis ius pou assou) species be- longs o he Gadidae amily and has been ound an abundan fish in he no heas A lan ic leading o g ea cap u e alues in se e al coun ies such as No way, Russian Fede a ion, Iceland and Es onia (FAO, 2007). P e ious esea ch has shown i s p ofi able nu i ional suppo o human die (Dagbja son, 1975; Ma ı´nez- Val e de e al., 2000), being mos effo s ocused o i s employmen in he manu ac u e o es uc u ed p od- uc s (Mon e o e al., 1998; Pe ´ ez-Ma eos e al., 2002). Howe e , since i is also di ec ly consumed, blue whi ing sui abili y o eezing (Huidob o & Tejada, 1995; Aubou g e al., 2007), cold-smoking (Go ´mez-Guille ´n e al., 2009) and canning (Oehlenschla ¨ge e al., 2008) p ocesses has also been es ed. Conce ning i s chilled s o age, p e ious esea ch accoun s o he nucleo ide deg ada ion and ola ile amine o ma ion (Smi h e al., 1980), lipid oxida ion de elopmen (Aubou g e al., 1998) and ime hylamine oxide b eakdown in o o m- aldehyde and dime hylamine (Rey-Mansilla e al., 1999). In he p esen esea ch, a no el app oach is ca ied ou o inhibi quali y loss in chilled blue whi ing. Fo i , a na u al o ganic acid-mix u e including AA, CA and LA was applied in a wo-s ep p ocessing. Fi s , as an aqueous dipping medium p e iously o chilling s o age; hen, p esen in he ice employed as chilling sys em. Mic obial ac i i y and lipid damage de elopmen we e e alua ed h oughou he s o age ime and compa ed o con ol fish. Ma e ials and me hods The na u al o ganic acid-mix u e and p elimina y ials A comme cial o mula (BPS2) including a na u al o ganic acid-mix u e was supplied by A lan ic one,S.L. (Vigo, Spain) o employmen in he p esen esea ch. Such a p oduc consis s o a wa e -soluble iscous liquid includ- ing AA, CA and LA (1 mequi . acid ⁄120 mg p oduc ) in glyce ol, being ega ded as sa e (GRAS) o use in oods acco ding o Eu opean and Ame ican adminis a ions (Mad id e al., 1994; Giese, 1996). P elimina y ials we e ca ied ou in o de o assess he mos con enien p oduc concen a ion o be employed bo h in he dipping medium as well as in he icing sys em. Fo i , he effec on senso y accep ance (appea ance, ex u e, gills, odou and colou ) o a wide concen a ion ange (70–2000 ppm) o he o ganic acid-mix u e was checked. Thus, concen a ion alues included in he 70–500 ppm ange did no p o ide an effec i e quali y enhancemen o he fish, while alues abo e 1000 ppm led o some de e io a ion o he senso y and physical p ope ies o he fish. As a esul , 800 ppm concen a ion showed o p o ide he mos con enien esul s when employed in bo h p ocessing s eps. Acco dingly, his concen a ion was chosen o being employed in he p esen esea ch. Raw fish, p ocessing and sampling F esh blue whi ing (se en y- wo indi iduals) we e caugh nea he Galician A lan ic coas (no hwes e n Spain) in Win e 2010 and anspo ed on ice o he labo a o y. The leng h and weigh o he fish specimens we e included in he ollowing anges: 22–25 cm and 70– 120 g, espec i ely. Upon a i al in he labo a o y, eigh indi idual fishes we e sepa a ed and conside ed as s a ing aw fish (day 0); o i , wo diffe en g oups ( ou indi iduals pe g oup) we e conside ed and analysed independen ly. The emaining fish we e di ided in o wo ba ches ( hi y- wo indi iduals in each ba ch). The fi s ba ch (p ese ed fish; P ba ch) was dipped in an 800 ppm aqueous solu ion o he o ganic acid-mix u e du ing 2 min (ca. 290 g fish L )1 solu ion); a e ha , he fish we e placed in boxes and di ec ly su ounded by ice p epa ed wi h a 800 ppm aqueous solu ion o he o ganic acid-mix u e. Fish co esponding o he second ba ch (con ol fish; C ba ch) was dipped in wa e du ing 2 min (ca. 290 g fish L )1 solu ion) and hen placed in boxes su ounded by adi ional ice p epa ed wi h wa e . In bo h ba ches, he fish indi iduals we e su ounded by ice (wi h o wi hou o ganic acid-mix u e, espec- i ely) a a 1:1 fish- o-ice a io. Bo h ba ches we e placed in a e ige a ed oom (4 C). Boxes employed allowed d aining and ice was enewed when equi ed. Fish samples om he wo diffe en ba ches we e aken o analysis on days 2, 5, 7 and 9. A each sampling poin , eigh indi iduals o each ba ch we e aken o analysis, being conside ed in o wo g oups ( ou indi iduals in each g oup) ha we e s udied independen ly. Mic obial coun ing Samples o 10 g o fish muscle we e dissec ed asep ically om chilled fish specimens, mixed wi h 90 mL o 0.1% pep one wa e (Me ck, Da ms ad , Ge many), and homogenised in a s omache (AES, Combou g, F ance) as p e iously desc ibed (Ben-Gigi ey e al., 1998, 1999). In all cases, se ial dilu ions om he mic obial ex ac s we e p epa ed in 0.1% pep one wa e . To al ae obes we e in es iga ed by su ace inocula ion in pla e coun aga (PCA, Oxoid L d, London, UK), a e incuba ion a 30 C o 48 h. Psych ophiles we e also in es iga ed in PCA bu incuba ion was ca ied ou a Na u al o ganic acid and blue whi ing chilling M. Sanjua ´s-Rey e al.1022 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology 7–8 C o 7 days. En e obac e iaceae we e in es iga ed by pou pla ing on Viole Red Bile Aga (VRBA) (Me ck, Da ms ad , Ge many) a e incuba ion a 37 C o 24 h. Mic oo ganisms exhibi ing a p o eoly ic o lipoly ic pheno ype we e in es iga ed in casein-aga medium o ibu y in-aga , espec i ely, a e incuba- ion a 30 C o 48 h, as p e iously desc ibed (Ben- Gigi ey e al., 2000). In all cases, bac e ial coun s we e ans o med in o log CFU g )1 muscle be o e unde going s a is ical anal- ysis. P oxima e composi ion and pH assessmen Mois u e con en was de e mined by he diffe ence be ween he weigh o esh homogenised whi e muscle (1–2 g) and he weigh eco ded a e 4 h a 105 C. Resul s we e calcula ed as g wa e kg )1 muscle. Lipids we e ex ac ed om he fish whi e muscle by he Bligh & Dye (1959) me hod, by employing a single- phase solubilisa ion o he lipids using a chlo o o m- me hanol (1:1) mix u e. Quan ifica ion esul s we e calcula ed as g lipid kg )1 muscle. The e olu ion o pH alues in fish muscle along s o age ime was de e mined by means o a 6-mm diame e inse ion elec ode (C ison, Ba celona, Spain). Lipid damage assessmen The pe oxide alue (PV) was de e mined spec opho o- me ically (Beckman Coul e , DU 640, London, UK) in he lipid ex ac by p e ious pe oxide educ ion wi h e ic hiocyana e, acco ding o he Chapman & McKay (1949) me hod. Resul s we e exp essed as mequi . ac i e oxygen kg )1 lipids. The hioba bi u ic acid (TBA) index was de e mined acco ding o Vyncke (1970). This me hod is based on he eac ion be ween a ichlo ace ic acid ex ac o he fish muscle and TBA. Con en on hioba bi u ic acid eac- i e subs ances (TBARS) was spec opho ome ically measu ed a 532 nm and esul s we e exp essed as mg malondialdehyde kg )1 muscle. Fo ma ion o fluo escen compounds (Fluo ime e LS 45; Pe kin Elme Espan ˜a, T es Can os, Mad id, Spain) was de e mined by measu emen s a 393 ⁄463 nm and 327 ⁄415 nm as desc ibed by Aubou g e al. (1998). The ela i e fluo escence (RF) was calcula ed as ollows: RF = F⁄F s , whe e Fis he fluo escence measu ed a each exci a ion ⁄emission maximum, and F s is he fluo escence in ensi y o a quinine sulpha e solu ion (1 lgmL )1 in 0.05 mH 2 SO 4 ) a he co esponding wa eleng h. The fluo escence a io (FR) was calcula ed as he a io be ween he wo RF alues: FR = RF 393 ⁄463 nm ⁄RF 327 ⁄415 nm . The FR alue was de e - mined in he aqueous phase esul ing om he lipid ex ac ion o he fish muscle (Bligh & Dye , 1959). F ee a y acid (FFA) con en was de e mined in he lipid ex ac o he fish muscle by he Low y & Tinsley (1976) me hod based on complex o ma ion wi h cup ic ace a e-py idine ollowed by spec opho ome ic (715 nm) assessmen . Resul s we e exp essed as g FFA kg )1 lipids. Senso y analysis Senso y analysis was conduc ed by a senso y panel consis ing o fi e expe ienced judges, acco ding o guidelines conce ning esh and e ige a ed fish (DOCE, 1989). Panellis s had been in ol ed in senso y analysis o diffe en kinds o fish oods du ing he las 10 yea s. P e iously o he p esen expe imen , a special aining was ca ied ou on chilled blue whi ing. Fou ca ego ies we e anked (Table 1): highes quali y (E), good quali y (A), ai quali y (B) and unaccep able quali y (C). Senso y assessmen o he fish included he ollowing pa ame e s: skin and mucus de elopmen , ex e nal odou , gills and gill ca i y, eyes and flesh odou ( aw and cooked fish) and as e (cooked fish). Fish samples we e cooked indi idually in co e ed casse ole dishes and immedia ely p esen ed in hese dishes o he panellis s. A each sampling ime, he fish muscle po ions we e p esen ed o panellis s in indi idual ays and we e sco ed indi idually. The panel membe s sha ed samples es ed. S a is ical analysis Da a ob ained om he diffe en mic obial and chemical analyses we e subjec ed o he ano a me hod (P< 0.05) o explo e diffe ences by wo diffe en ways: p ocessing condi ions effec and chilling ime effec (S a so , S a is ica, e sion 6.0, 2001); compa ison o means was pe o med using a leas -squa es diffe ence (LSD) me hod. Co ela ion analysis among pa ame e s (chilling ime, mic obial indices, lipid damage indices and senso y accep ance) was also ca ied ou ; o senso y alues, he Spea man es was employed. Linea fi ings a e exp essed; o he wise, he kind o fi ing (quad a ic o loga i hmic) is men ioned. Resul s and discussion Mic obial ac i i y assessmen The compa a i e e olu ion o o al ae obes o each ba ch du ing s o age ime can be seen in Fig. 1. In gene al e ms, he con ol ba ch exhibi ed highe mic obial numbe s han he coun e pa ba ch s o ed in he na u al-o ganic acid sys em. Thus, he mos ema kable diffe ences we e obse ed on days 2, 5 and 9, he mean diffe ences be ween ba ches being 0.57, 3.17 and 0.48 log CFU g )1 muscle, espec i ely. Ne e heless, Na u al o ganic acid and blue whi ing chilling M. Sanjua ´s-Rey e al. 1023 2011 The Au ho s In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 In e na ional Jou nal o Food Science and Technology 2011 Ins i u e o Food Science and Technology