El género Odontocerum (Insecta: Trichoptera) en la Península Ibérica: estudio taxonómico, morfológico y molecular

- 1 - GRADO EN BIOLOGÍA FACULTAD DE BIOLOGÍA Trabajo Fin de Grado El género Odontocerum (Insecta: Trichoptera) en la península ibérica: estudio taxonómico, morfológico y molecular Jenifer Brea Iglesias Curso académico: 2017-2018 - 2 - ÍNDICE RESUMEN ................................................................................................................................................. - 3 - 1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................. - 3 - 2. OBJETIVOS .......................................................................................................................................... - 6 - 3. METODOLOGÍA DEL TRABAJO .................................................................................................... - 6 - 3.1. Material estudiado .............................................................................................................................. - 6 - 3.2. Estudio de la genitalia ........................................................................................................................ - 8 - 3.3. Estudio de las alas ............................................................................................................................... - 8 - 3.4. Estudio molecular ............................................................................................................................... - 8 - 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ........................................................................................................... - 9 - 4.1. Estudio taxonómico-morfológico....................................................................................................... - 9 - 4.1.1. Estudio morfológico de las genitalias ............................................................................................. - 9 - 4.1.2. Morfología alar .............................................................................................................................. - 14 - 4.1.3. Estudio biométrico de las alas anteriores .................................................................................... - 16 - 4.2. Estudio molecular ............................................................................................................................. - 17 - 5. CONCLUSIONES ............................................................................................................................... - 18 - 6. BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................................. - 18 - - 3 - RESUMEN El género Odontocerum está representado en la península ibérica por dos especies: Odontocerum albicorne y Odontocerum lusitanicum. La primera es de amplia distribución europea y la segunda es un endemismo estrictamente ibérico, cuya validez ha sido cuestionada. En este trabajo realizamos un estudio taxonómico de las poblaciones ibéricas de ambas especies para determinar si los caracteres morfológicos utilizados para diferenciarlas son verdaderamente fiables, contrastando los resultados del estudio morfológico con la información molecular disponible. Los datos morfológicos y moleculares obtenidos sugieren que la validez de O. lusitanicum es muy dudosa, aunque se requieren nuevos datos moleculares para obtener una conclusión definitiva. 1. INTRODUCCIÓN 1.1. Los tricópteros: breve caracterización morfológica y biológica del grupo Los tricópteros son un grupo de insectos holometábolos, filogenéticamente emparentados con los lepidópteros, con los cuales conforman el superorden Amphiesmenoptera. Ambos comparten un ancestro común del que se diversificaron en el Triásico (Djernæs & Sperling, 2011; Holzenthal et al., 2007). Se conocen más de 14.000 especies en el mundo (Morse, 2018), de las cuales 349 viven en la península ibérica, región cuya fauna se caracteriza por su notable originalidad, pues alberga un importante componente endémico (González & Martínez, 2011; Martínez, 2014; Martín, 2017). Su hábitat principal son los ecosistemas dulceacuícolas, donde viven sus larvas, preferiblemente en las corrientes frías y bien oxigenadas. Son insectos de gran relevancia para el funcionamiento de la cadena trófica y el flujo de energía en los ecosistemas lóticos (Graça, 2001; Resh & Rosenberg, 1984; Wiggins, 2004) pues, sus larvas representan una parte esencial de las comunidades de los macroinvertebrados bentónicos. Son depredadoras, detritívoras, filtradoras, raspadoras o herbívoras, y, debido a la gran sensibilidad que poseen frente a la contaminación, suelen ser utilizadas como bioindicadores de la calidad de las aguas. (Martín, 2017; Resh & Cardé, 2003). Las larvas son de tipo campodeiforme o eruciforme y poseen una cabeza bien diferenciada y esclerotizada, con un par de ojos, antenas cortas y un fuerte aparato masticador. El tórax está formado por tres segmentos, con sus correspondientes pares de patas, y el abdomen se compone de diez segmentos - 4 - membranosos, en los que se disponen las branquias. El último segmento abdominal posee un par de uñas anales, estructuras que son muy características de este grupo y que usan para anclarse al sustrato o al estuche larvario (Martín, 2017). La mayoría de las larvas fabrican habitáculos o estuches larvarios, generalmente de forma alargada y tubular, para lo que emplean seda y otros materiales (piedras, arena, restos vegetales…) (González & Cobo, 2006). La forma del estuche, además de otros caracteres propios de la larva (la estructura de la mandíbula, la morfología de las patas y de las branquias, el grado de esclerotización del tórax, ciertos detalles de la quetotaxia, etc.) proporcionan los caracteres taxonómicos más utilizados para diferenciar las familias y géneros (Holzenthal et al., 2007). Tras completar el desarrollo larvario, se inicia el proceso de pupación, que dura entre dos y cuatro semanas. Así, generalmente en el propio estuche larvario, se empiezan a desarrollar las estructuras propias del imago, hasta que la pupa madura perfora el estuche y migra hacia la superficie del agua para llevar a cabo la muda imaginal y liberar al adulto (González & Cobo, 2006). Los adultos poseen dos pares de alas membranosas que pliegan en forma de tejado cuando están en reposo y están recubiertas por pelos, característica a la que precisamente alude su nombre. Sus coloraciones son discretas, generalmente pardo amarillentas o negruzcas y su tamaño varía entre unos pocos milímetros (e.g. los Hydroptilidae) hasta varios centímetros (e.g. algunos Limnephilidae) (Martín, 2017; Martínez, 2014). Los adultos poseen dos ojos compuestos, junto a los cuales puede haber tres ocelos, y dos antenas filiformes, de tamaño variable, cuyo artejo basal está modificado y asociado a estructuras glandulares en algunos machos (Martín, 2017). Su aparato bucal es de tipo lamedor (aunque apenas se alimentan) y se caracteriza por la existencia de un haustelo, especie de corta probóscide formada mediante la fusión del labio y la hipofaringe. (González & Vieira-Lanero, 2004; Martín, 2017). El tórax, trisegmentado; posee tres pares de patas, cuyas tibias poseen unos espolones, cuyo número y posición conforman la fórmula tibial, de gran interés taxonómico (Baszio & Richter, 2002; González & Vieira-Lanero, 2004). El abdomen está formado por diez segmentos y los dos últimos (o tres, en el caso de las hembras) están modificados, conformando la genitalia, estructura que se utiliza como principal fuente de caracteres taxonómicos para la identificación específica (González & Vieira-Lanero, 2004). En los machos, las genitalias - 5 - son mucho más complejas y poseen diversos apéndices, entre ellos los gonópodos (apéndices inferiores), que flanquean una cavidad membranosa en la que se encuentra el complejo fálico. Las genitalias femeninas son mucho más simples, frecuentemente de forma tubular y no siempre permiten la diferenciación específica (Martín, 2017). 1.2. El género Odontocerum en Europa y en la península ibérica El género Odontocerum Leach, 1815, en el que se centra este trabajo, pertenece a la familia Odontoceridae, que está presente en todas las regiones zoogeográficas, excepto la etiópica, e incluye un número escaso de géneros y especies (Cianficoni, 1985; Morse, 2018). Odontocerum es el único representante europeo de la familia y, hasta 1972, se consideraba que O. albicorne (Scopoli, 1763) era la única especie del género. No obstante, Malicky (1972) describió O. hellenicum Malicky, 1972 ,y, unos años más tarde, el mismo autor (Malicky, 1975) describió O. lusitanicum Malicky, 1975. O. albicorne tiene amplia distribución europea (Graf et al., 2008) y, en la península ibérica, está presente únicamente en la mitad norte de España (González et al., 1992). Las otras dos especies, O. lusitanicum y O. hellenicum, son endemismos de distribución más restringida; la primera vive en la península ibérica (en principio confinada a Portugal) y la segunda en la península balcánica, aunque su área de distribución se solapa parcialmente con la de O. albicorne en el norte de Bosnia y de los Cárpatos (Klima et al., 1987; Ujvárosi, 2002). Figura 1. Área de distribución de: A, O. albicorne; B, O. lusitanicum; C, O. hellenicum. En verde oscuro se indican las áreas en las que está presente la especie; en verde claro, las áreas de presencia dudosa y en gris las áreas para las cuales no hay datos o no está presente la especie (extraído de Museum für naturkunde. 2018. Fauna Europaea: https://faunaeu.org/). De acuerdo con las descripciones originales, la identificación de estas tres especies se basa en caracteres de la coloración, el tamaño (expresado por la longitud del ala anterior), la forma del borde anal del - 6 - ala posterior del macho y algunos detalles de la genitalia masculina, principalmente relativos a la morfología del coxopodito de los gonópodos, y a la forma y desarrollo de los dientes laterales del X segmento (véase Malicky, 2004: 295). Tras la descripción de O. lusitanicum, diversos autores (González et al., 1986) han señalado la dificultad de atribuir numerosos ejemplares españoles de Odontocerum de diversa procedencia (norte y noroeste peninsular) a una de las dos especies ibéricas (O. albicorne u O. lusitanicum), indicando que todos los ejemplares examinados poseían características intermedias entre ambas especies, en los rasgos supuestamente diferenciables, lo que pone en cuestión la validez de O. lusitanicum. 2. OBJETIVOS Considerando lo anteriormente expuesto, el objetivo fundamental de nuestro trabajo es estudiar las poblaciones ibéricas de Odontocerum con objeto de conocer y describir la variabilidad morfológica poblacional, comparando ejemplares de poblaciones del norte y noroeste de España (presuntamente de la especie O. albicorne), con ejemplares portugueses de O. lusitanicum. Pretendemos así averiguar si los caracteres morfológicos utilizados para la diagnosis de O. lusitanicum son verdaderamente fiables y aportar, si los hubiese, nuevos caracteres diagnósticos complementarios. Asimismo, contrastaremos la información morfológica con los datos moleculares obtenidos del análisis del ADN mitocondrial. 3. METODOLOGÍA DEL TRABAJO 3.1. Material estudiado Se han examinado 483 machos y 61 hembras de O. albicorne, capturados por diversos recolectores (Bonada, S. Paulo, M. A. González, J. Menéndez y L. Martín) en las siguientes fechas y localidades: Pirineo catalán (53 ♂♂ y 4 ♀♀): Gerona, Vall de la Casassa, 12/VII/09, 52 ♂♂ y 3 ♀♀; Lérida, Tavescan, 09/07/11, 1 ♂ y 1 ♀ // Pirineo aragonés (26 ♂♂ y 2 ♀♀): Huesca, Yesero, 3/VII/09, 21 ♂♂ y 2 ♀♀; Huesca, Biescas, 5/VII/09, 1 ♂; Huesca, Ansó, 7/VII/09, 4 ♂♂ // Pirineo francés (4 ♂♂) : Arette, La Mouline, 8/VII/09, 4 ♂♂ // Provincia de la Rioja (76 ♂♂ y 30 ♀♀): Villoslada de Cameros, 6/VII/15, 4 ♂♂; Valvavera, 4/VII/15, 39 ♂♂ y 12 ♀♀; Ventrosa, 5/VII/15, 10 ♂♂ y 5 ♀♀; Venta de Viniegra, 4-5/VII/15, 16 ♂♂ y 7 ♀♀; Viniegra de Abajo, 5/VII/15, 1 ♂ y 1 ♀; Viniegra de Arriba, 5/VII/15, 2 ♀♀; San Millán de la - 7 - Cogolla, 3/VII/15, 6 ♂♂ y 2 ♀♀; Ezcaray, 1/VII/15, 1 ♀ // Provincia de Palencia (87 ♂♂ y 18 ♀♀): Herreruela de Castillería, 1 ♂ y 1 ♀; San Felices de Castillería, 20/VII/12, 6 ♂♂ y 1 ♀; Piedrasluengas, 18/VII/12, 6 ♂♂ y 3 ♀♀; Carretera de San Martín de los Herreros a Rebanal, 18-19/VII/12, 33 ♂♂ y 10 ♀♀; Vidrieros, 18-19/VII/12, 1 ♂ y 2 ♀♀; Cardaño de Arriba, 19/VII/12, 31 ♂♂; Triollo, 20/VII/12, 9 ♂♂ y 1 ♀ // Asturias (189 ♂♂ y 3 ♀♀): Cudillero, 13/VIII/09, 2 ♂♂; 20/08/14, 15 ♂♂; Valdés, 10/VIII/09, 1 ♂; Allande, 9-10/VIII/10, 6 ♂♂; Navelgas, 11/VIII/10, 12 ♂♂; Río Castello, 11/VIII/10, 1 ♀; Lavio, Salas, 15/VIII/08, 1 ♂; 15-16-18/VIII/09, 32 ♂♂; Teverga, 6/VIII/09, 6 ♂♂; 18/X/09, 3 ♂♂; Cangas de Narcea, 10/VIII/10, 1 ♂ y 1 ♀; Caunedo, 4/VIII/09, 3 ♂♂; Aguino, Pola de Somiedo, 5/VIII/09, 13 ♂♂; Braña del Peral, 4/VIII/09, 19 ♂♂; Rebollado, Somiedo, 3/VIII/09, 2 ♂♂; Saliencia, Somiedo, 5/VIII/09, 10 ♂♂; Santollano, Somiedo, 3/VIII/09, 1 ♂; Francibín, Somiedo, 3/VIII/09, 17 ♂♂; Vilar de Vildas, Somiedo, 3/VIII/09, 45 ♂♂ y 1 ♀ // Sierra de Ancares, Lugo (24 ♂♂ y 1 ♀): Piornedo, 7/VIII/96, 3 ♂♂; 1/VIII/97, 2 ♂♂; 1-2/VIII/03, 2 ♂♂; Ponte de Bous, 7/VIII/96, 1 ♂; 1/VIII/97, 2 ♂♂; 30/VII/03, 1 ♂; Os Cabaniños, 30/VII/03, 1 ♂; Cabanas Vellas, 9/VIII/96, 1 ♀; 4/VIII/97, 1 ♂; 26/VII/10, 1 ♂; Río da Vara, 9/VIII/96, 2 ♂♂; 4/VIII/97, 2 ♂♂; 13/VIII/11, 3 ♂♂; O Mosteiro, 24/VII/08, 1 ♂; Campo do Crego, 12/VIII/11, 2 ♂♂ // Sierra del Caurel, Lugo (21 ♂♂): Folgoso do Courel, 27-28/VII/10, 14 ♂♂; Seoane do Courel, 10/IX/11, 7 ♂♂ // Sierra de Invernadoiro, Orense (3♂♂ y 2 ♀♀): Cortellos, Ribeira Grande, 22/VII/12, 1 ♂ y 1 ♀; Invernadoiro, 23/VIII/12, 2 ♂♂ y 1 ♀ // Sierra del Barbanza, A Coruña (1 ♀): Fonte do Porto Traveso, 12/X/13, 1 ♀. Se han estudiado 67 machos y 3 hembras de O. lusitanicum, capturados por L.S.W. Terra, en las siguientes fechas y localidades portuguesas: Distrito de Vila Real, Portugal (13 ♂♂): Mulas (S. Alvão), 1/VII/89, 6 ♂♂; Relva, 4/VI/80, 1 ♂; 11/IX/80, 1 ♂; 7/VII/81, 1 ♂; 30/ VI/82, 1 ♂; 5-11/VIII/82, 2 ♂♂; Zebral, 15/VI/73, 1 ♂ // Distrito de Braga (9♂♂ y 1 ♀): Lamas, 26/VI/79, 1 ♂; Seidoes, 17/X/75, 2 ♂♂; 21/VI/77, 2 ♂♂; Travessos, 5/IX/74, 3 ♂♂ y 1 ♀; Anjos, 4/VII/79, 1 ♂ // Distrito de Oporto (14♂ y 1 ♀): Felgueiras, 24/VII/74, 1 ♀; 26/VI/84, 1 ♂; Torno, 5/VII/79, 2 ♂♂; 27/VII/79, 1 ♂; 31/VIII/79, 2 ♂♂; 13/IX/79, 2 ♂♂; 12/IX/80, 1 ♂; 3-14/IX/81, 2 ♂♂; 1118/VI/82, 2 ♂; 24/VII/82, 1 ♂ // Serra da Estrela, distrito de Guarda (21♂♂): Sabugueiro, 3/VII/89, 12 ♂♂; Valezim, 19/VI/80, 2 ♂♂; Fonte Santa, 17-25/VIII/82, 2 ♂♂; Covão da Ametade, 26/VIII/92, 4 ♂♂; - 8 - Zêzere, 2/VII/89, 1 ♂ // Serra da Estrela, distrito de Castelo Branco (6♂♂ y 1 ♀): Unhais da Serra, 1/VIII/74, 1 ♂ y 1♀; 26/VI/79, 5 ♂♂ // Distrito de Coimbra (4 ♂♂): Ponte de Cabaços, 23/VII/73, 1 ♂; 2/VIII/74, 3 ♂♂. Todos los ejemplares estudiados están conservados en etanol al 70% y depositados en la colección de M. A. González (departamento de Zoología, Genética y Antropología Física de la Facultad de Biología de la USC). 3.2. Estudio de la genitalia Se han extraído los dos o tres últimos segmentos abdominales (dependiendo de si se trata de un macho o de una hembra, respectivamente) y se han tratado con KOH al 10% a temperatura ambiente durante 24-48h, dependiendo del ejemplar. Tras esto, se han lavado con agua y se han observado con un estereomicroscopio Olympus SZ60. Una vez seleccionados los ejemplares que serían fotografiados, se han sumergido sus genitalias en unas gotas de resina o glicerina, en un portaobjetos excavado, y han sido observadas con un microscopio Olympus CX40, que disponía de una cámara Cannon 70D acoplada. Para cada genitalia se han realizado entre 60 y 130 planos, que luego han sido apilados (mediante el programa Helicon Focus) para obtener una única fotografía. La nomenclatura adoptada para el estudio morfológico de las genitalitas es la propuesta por Nielsen (1957, 1980). 3.3. Estudio de las alas Para la medida de la longitud de las alas anteriores se ha utilizado un estereomicroscopio Olympus SZ60, con oculares provistos de un micrómetro ocular. Como es usual, la medida se ha realizado en las alas anteriores, desde su base hasta el ápice. En algunos ejemplares se han diseccionado también las alas posteriores para observar el aspecto del borde anal y en su caso fotografiarlo. 3.4. Estudio molecular Para identificar las relaciones evolutivas entre las especies del género Odontocerum, se han utilizado 10 secuencias únicas del fragmento barcode (cox1-5’) disponibles en bases de datos públicas (GenBank: HMKKT696-10; CZCAD04-10; CZCAD044-10; CZCAD050-10; CZCAD066-10; KKCAD492-09; - 9 - HMKKT033-10; KKCAD493-09; HMKKT736-10; HMTRI114-08). Además, se ha utilizado como grupo externo una secuencia de Marilia sp. (Odontoceridae) (GenBank: KX293745.1). Las secuencias se han alineado en Geneious 10.2 y se ha construido un árbol filogenético siguiendo el método UPGMA, basado en la distancia Jukes-cantor con remuestreo (Bootstrap= 100 réplicas,) para calcular el soporte de las ramas. La procedencia de los ejemplares de los que derivan las secuencias es la siguiente: HMKKT696-10: Serra da Grallheira (Portugal); CZCAD04-10: Yesero, Huesca (España); CZCAD044-10: Navarra (España); CZCAD050-10: Somiedo, Asturias (España); CZCAD066-10: Somiedo, Asturias (España); KKCAD492-09: Soria (España); HMKKT033-10: Kastorias (Grecia); KKCAD493-09: Soria (España); HMKKT736-10: Serron (Grecia); HMTRI114-08: Katarapass (Grecia). 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1. Estudio taxonómico-morfológico 4.1.1. Estudio morfológico de las genitalias Figura 2: genitalias masculinas de Odontocerum. A-B: O. albicorne. C-D: O. lusitanicum. Vistas dorsal (A y C) y lateral (B y D). 1: IX segmento. 2: proceso dorsal. 3: parte oral del esclerito del X segmento (las flechas indican las espinas o dientes laterales de dicho esclerito). 4: proceso medio del X segmento. 5: proceso lateral del X segmento. 6: apéndice superior. 7: coxopodito. 8: proceso distal del coxopodito. 9: harpago. 10: aparato fálico. 6 1 1 2 3 3 4 5 5 6 6 7 7 9 9 10 3 6 3 4 1 1 2 5 5 7 7 9 9 10 1 2 3 5 6 7 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 - 16 - 4.1.3. Estudio biométrico de las alas anteriores A continuación indicamos las medidas obtenidas para ambos sexos, en las diferentes poblaciones estudiadas, especificando en primer lugar el valor medio y a continuación los intervalos (valores mínimo y máximo). Francia: Pirineo francés, comuna de Arette: ♂♂: 12, 8 mm // ♂♂: 12,2 mm – 13,6 mm. España: Pirineo catalán: ♂♂: 13,6 mm; ♀♀: 16,7 mm // ♂♂: 11,7 mm – 14,6 mm; ♀♀: 16,1 mm – 17,1 mm. Pirineo aragonés, provincia de Huesca: ♂♂: 13, 9 mm; ♀♀: 15, 3 mm // ♂♂: 13 mm – 14,9 mm; ♀♀: 13,2 mm – 16,8 mm. Provincia de La Rioja: ♂♂: 13,7 mm; ♀♀: 16,2 mm // ♂♂: 12,5 mm – 14,6 mm; ♀♀: 15 mm – 17,4 mm. Provincia de Palencia: ♂♂: 13,4 mm; ♀♀: 15,7 mm // ♂♂: 12,5 mm – 14,4 mm; ♀♀: 14,3 mm – 16,7 mm. Sierra de Ancares (Lugo): ♂♂: 12,9 mm; ♀:13,2 mm // ♂♂: 12, 3 mm – 14, 2 mm. Sierra del Caurel (Lugo): ♂♂: 13,6 mm // ♂♂: 12, 2 mm – 14,9 mm. Sierra de Invernadoiro (Orense): ♂♂: 13,6 mm; ♀: 16,6 mm // ♂♂: 13,3 mm – 14 mm. Sierra del Barbanza (La Coruña): ♀: 12, 5 mm. Portugal: Distrito de Vila Real: ♂♂: 12, 2 mm // ♂♂: 11, 3 mm – 13 mm. Distrito de Braga: ♂♂: 11,8 mm; ♀: 10 mm; // ♂♂: 11 mm – 12,6 mm. Distrito de Oporto: ♂♂: 12,3 mm; ♀: 11,1 mm // ♂♂: 11, 1 mm – 13, 5 mm. Serra da Estrela, distrito de Guarda: ♂♂: 11,1 mm // ♂♂: 9,1 mm – 11,9 mm. Distrito de Coimbra: ♂♂: 10,6 mm // ♂♂: 10,4 mm – 10,8 mm.| Distrito de Castelo Branco, Serra da Estrela: ♂♂: 11,1 mm; ♀: 10,3 mm // ♂♂: 10 mm – 11, 9 mm. El tamaño (expresado por medio de la longitud del ala anterior) se ha considerado un carácter diagnóstico importante para diferenciar las poblaciones de O. lusitanicum y O. albicorne. Según Malicky (1975) la longitud media del ala anterior de los machos de O. albicorne es de 14,5 mm, con un rango de 12,816,0 mm. En cambio, en las hembras es de 17,3 mm, con un rango de 14,0-19,2 mm. Los machos de O. lusitanicum poseen una longitud media de 11, 3 mm, con un rango de 10,0-12,8 mm. No obstante, la única hembra estudiada por Malicky (1975) es muy pequeña y ligeramente braquíptera, con un ala de 10 mm de longitud. De acuerdo con nuestros resultados, el rango de tamaños observado es mayor que el que se había descrito, de forma que los ejemplares portugueses más grandes de O. lusitanicum podrían entrar dentro del rango normal de tamaños de O. albicorne. De este modo, aunque en líneas generales los ejemplares de O. - 17 - albicorne son mayores que los de O. lusitanicum, existen numerosas excepciones. Cabe resaltar además que se han encontrado algunas hembras braquípteras en Asturias y Galicia, una circunstancia que en principio se consideraba propia de los ejemplares portugueses de O. lusitanicum. 4.2. Estudio molecular La divergencia genética media entre O. lusitanicum y O. albicorne es 3,1 +/- 0,15 % (siendo 0,3 +/- 0,12 % la divergencia intraespecífica en O. albicorne). En cambio, la divergencia genética entre O.albicorne y O. hellenicum es de 6,9 +/- 0,49 % y la de O. lusitanicum y O. hellenicum es 7,8 +/- 0,15 %. La divergencia intraespecífica en O. hellenicum es 1,3 +/- 0,57 %. Estos valores se han calculado a partir de los datos de distancias de la tabla 1. El árbol filogenético muestra la separación en clados diferenciados de las tres especies morfológicas. O. lusitanicum y O. albicorne aparecen en él como clados hermanos, si bien hay que ser prudente en la interpretación de este resultado, ya que por el momento sólo se dispone de una secuencia de O. lusitanicum. Por tanto, sería conveniente realizar un análisis filogenético con un número mayor de secuencias, no solo de O. lusitanicum, sino también de todas las especies estudiadas, procurando además que los ejemplares procedan de poblaciones representativas del área de distribución geográfica de la especie. Tabla 1: - 18 - Figura 9: árbol filogenético presuntivo de las tres principales especies europeas. 5. CONCLUSIONES Desde el punto de vista morfológico ninguno de los caracteres estudiados, por sí solo, permite diferenciar en todos los casos las poblaciones de O. albicorne y O. lusitanicum. No obstante, es posible que considerados globalmente, apunten preferentemente a una u otra especie. Así, en general, los ejemplares de O. lusitanicum son de menor tamaño, con los dientes del X segmento de la genitalia masculina más cortos y oblicuos, y las alas posteriores de los machos poseen lóbulos anales poco prominentes o romos. Estas diferencias se agudizan sobre todo cuando comparamos ejemplares de poblaciones ibéricas distantes (pirineos y centro de Portugal). Los escasos datos moleculares disponibles apuntan la posibilidad de que O. albicorne y O. lusitanicum sean la misma especie, pero se requieren nuevos datos moleculares de las distintas poblaciones para obtener una conclusión definitiva. 6. BIBLIOGRAFÍA Baszio, S. & Richter, G. 2002. Ultrastructural characters of adult leg armature in Trichoptera (Insecta) and their potencial for use in phylogenetic analysis. Aquatic Insects, 24: 1-20. - 19 - Cianficconi, F. 1985. Odontocerum albicorne Scop. 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