Ciclo reproductivo, cultivo en criadero y en el medio natural de la almeja babosa Venerupis pullastra (Montagu, 1803)

        InstitutodeAcuicultura UNIVERSIDADDESANTIAGODECOMPOSTELA     Cicloreproductivo,cultivoencriaderoy enelmedionaturaldelaalmejababosa Venerupispullastra(Montagu,1803)      Memoriapresentadapor:  AnaCerviñoOtero ParaoptaralgradodeDoctoraenBiología ISBN 978-84-9887-828-8 (edición digital PDF)                             DoroteaMartínezPatiño,DoctoraenBiologíaeInvestigadoradelCentrode CultivosMariñosdeRibadeo‐CIMA(XuntadeGalicia)   INFORMA:  Queeltrabajotitulado“Cicloreproductivo,cultivoencriaderoyenelmedio naturaldelaalmejababosaVenerupispullastra(Montagu,1803)”presentadopor AnaCerviñoOteroparaoptaralTítulodeDoctoraenBiología,hasidorealizadobajo midirección.Considerándolofinalizado,autorizosupresentaciónydefensa.   Ribadeo,a2demayode2011    VºB      Fdo:Dra.DoroteaMartínezPatiñoFdo:Dra.MarcelinaAbadCaeiro DirectoradelaTesisDoctoralTutoradelaTesisDoctoral                              Esta tesis ha sido desarrollada en el Centro de Cultivos Mariños de Ribadeo (CIMA) gracias a la beca para la formación de personal en temas de investigación marina, concedida por la Consellería do Mar de la Xunta de Galicia (DOG nº 173 de 08/09/2003), durante el período comprendido entre septiembre de 2003 y agosto de 2007. Desde diciembre de 2007 hasta noviembre de 2009, se finalizaron las experiencias en el marco del proyecto de investigación “ALBA: Mejora en la producción de almeja babosa Venerupis pullastra (Montagu, 1803)” (06RMA50801PR) concedido por la Dirección Xeral de Investigación, Desenvolvemento e Innovación de la Consellería de Economía e Industria de la Xunta de Galicia, en el cual disfruté de un contrato de trabajo. Parte de los resultados de esta tesis se han complementado con los trabajos realizados en el marco del proyecto de Investigación “Desarrollo de la tecnología de producción y cultivo de almejas”, de la Junta Nacional Asesora de Cultivos Marinos (JACUMAR).                        A mi familia      A todos mis compañeros de Ribadeo y en especial, con mucho cariño, a José María         Almejas con patatas (Receta de Cambados) Ingredientes: patatas, almejas, aceite, pimentón y ajo. Se cuecen las patatas. Cuando estén casi cocidas se le quita media cantidad del agua que hayas utilizado para cocer. Se le añaden las almejas por encima y se dejan abrir a fuego lento con la tartera tapada. Tan pronto abran se retira del fuego y se ponen en una bandeja con un fondo de agua de cocción. Se prepara una ajada y se echa por encima. Se sirven acompañadas con un Albariño. Ana Otero Cuando llegué a Ribadeo para realizar esta tesis no sabía lo que me esperaba... yo era siete años más joven e inexperta... y en el mundo todavía iban a suceder muchos acontecimientos. Mientras esta tesis iba cobrando vida, a lo largo de estos años, fui aprendiendo muchas cosas...   Hacerunatesisesundesafíoalaconstancia,alingenio,alaperseverancia...Hacer unatesisespasarhorasyhorasensolitario...Hacerunatesisesdejaraunladomuchos proyectospersonales,losplanesacortoplazo,eltiempodedicadoaunamismayalos demás...Perograciasaestatesis,medicuentaquehabíamuchagentequeconfiabaenmí yqueconsuapoyoyayudaalgúndíalaibaafinalizar.  Aunquelarealizacióndeestatesissehallevadoacabograciasalaayudade muchagente,measaltaunmuyhumanopatriotismoquemellevaaconcentrarlamayor partedelméritoenelaporteprofesionalypersonaldetodasycadaunadelaspersonas queintegranointegraronesteCentro.Trabajarjuntoaellos,hasidoparamíungran honoryvayadeantemanomiagradecimientoatodosellos.  EnprimerlugarlequieroagradeceraDoroteaMartínez,demaneraespecialy sincera,elconstanteapoyoquemehaofrecidoalolargodetodosestosañosyla confianzamostradaenmíentodomomento.Tea,estoyaprendiendomuchodetienel ámbitoprofesional,peromásaúnenlopersonal.Dartelasgraciastambiénportutiempo, tucercanía,tusgrandescualidadeshumanasypornodejardelucharporesteCentroniun solodía.  AJustayaSusana,osagradezcoenormementequeestuvieraisahísiemprequeos necesitéyquemeenseñaraispacientementedesdeelprimerdía...esosí,paralosácidos grasosnecesitaréotrossieteañosmás...comodijealgúndía...soistanexcelentes personascomoprofesionales.AFiznosóloleagradezcolaayudaprestadaconla embriologíaylaestadística,sinoquetambién,todalaayudaquemebrindódesdeque lleguédebecaria...ysiempreconunasonrisa...estoyseguradequellegarásmuylejos.A Conchitaporqueseleyótropecientasvecesestemanuscritoyporquenohubounsólodía enelquenomeanimaraparaqueloacabara...yporqueséquelohacíadecorazón. 3.3.5EVOLUCIÓNDELACOMPOSICIÓNBIOQUÍMICAENRELACIÓNCONELCICLOGAMETOGÉNICO73 3.3.6PARASITOLOGÍADELASPOBLACIONESDEESTUDIO81 ‐3.4DISCUSIÓN89 4.CAPÍTULOII:DESARROLLOEMBRIONARIOYLARVARIO99 ‐4.1INTRODUCCIÓN99 ‐4.2MATERIALYMÉTODOS102 4.2.1OBTENCIÓNDELDESOVEYTOMADEMUESTRAS102 4.2.2PROCESADOPARAELMICROSCOPIOELECTRÓNICODEBARRIDO102 4.2.3PROCESADOPARAELMICROSCOPIOELECTRÓNICODETRANSMISIÓN104 ‐4.3RESULTADOS106 4.3.1DESARROLLOEMBRIONARIOYLARVARIO106 ‐4.4DISCUSIÓN126 5.CAPÍTULOIII:CULTIVOENCRIADERO133 ‐5.1INTRODUCCIÓN133 ‐5.2MATERIALYMÉTODOS143 5.2.1CULTIVODEMICROALGAS143 5.2.2RECOGIDADEREPRODUCTORESYTRASLADO145 5.2.3MANTENIMIENTODELOSREPRODUCTORES147 5.2.4OBTENCIÓNDELAPUESTAYRECOGIDADEHUEVOS148 5.2.5CULTIVOLARVARIO148 5.2.6CULTIVODEPOSTLARVASYSEMILLA149 5.2.7PROCESADODELOSREPRODUCTORES150 5.2.8RECOGIDADEMUESTRASDELARVAS152 5.2.9RECOGIDADEMUESTRASDEPOSTLARVASYSEMILLA153 5.2.10TRATAMIENTOESTADÍSTICODELOSDATOS154 ‐5.3RESULTADOS155 5.3.1ESTABULACIÓNDEREPRODUCTORES155 5.3.2OBTENCIÓNDELAPUESTA156 5.3.3CULTIVOLARVARIO159 5.3.4CULTIVOPOSTLARVARIO162 5.3.5CULTIVODESEMILLA163 5.3.6OPTIMIZACIÓNDELCULTIVO.RELACIÓNDELACALIDADDELASPUESTASCONLOSREPRODUCTORES165 5.3.6.1ÍndicesdeCondicióndelosreproductores165 5.3.6.2Composiciónbioquímicadelosreproductores167 5.3.6.3Estadiogametogénicodelosreproductores170 5.3.6.4Crecimientodelosdesarrolloslarvariosypostlarvarios172 5.3.6.5Supervivenciadelosdesarrolloslarvariosypostlarvarios175 5.3.6.6Relaciónentrelosdesovesyloscultivos178 ‐5.4DISCUSIÓN181 6.CAPÍTULOIV:CULTIVOENELMEDIONATURAL191 ‐6.1INTRODUCCIÓN191 6.1.1SISTEMASDEPREENGORDEENINSTALACIONESENTIERRA193 6.1.2SISTEMASDEPREENGORDEENELMEDIONATURAL195 6.1.2.1Zonasdemarismas195 6.1.2.2Zonasintermareales197 6.1.2.3Preengordeensuspensión199 6.1.3ENGORDE205 ‐6.2MATERIALYMÉTODOS208 6.2.1OBTENCIÓNDELASEMILLA208 6.2.2DESCRIPCIÓNYUBICACIÓNDELOSSISTEMASDEPREENGORDE210 6.2.3PARÁMETROSDEESTUDIO212 6.2.3.1Épocadelañodeiniciodelcultivo212 6.2.3.2Densidad212 6.2.3.3Tallainicial213 6.2.4PARÁMETROSAMBIENTALES214 6.2.5CONTROLDECRECIMIENTOYMORTALIDAD215 6.2.6ESTUDIOHISTOLÓGICODELASEMILLA216 6.2.7CRECIMIENTODIFERENCIAL217 6.2.7.1Seguimientoenbatea217 6.2.7.2Seguimientoencriadero219 6.2.8BIOMETRÍAYCOMPOSICIÓNBIOQUÍMICADELASEMILLA219 6.2.9CULTIVOINTEGRAL:CRIADERO,PREENGORDEYENGORDE221 ‐6.3RESULTADOS223 6.3.1PREENGORDEENBATEAEINTERMAREAL223 6.3.1.1Épocasdecultivo223 6.3.1.2Efectodeladensidadenelcrecimiento228 6.3.1.3Tallainicialdepreengorde230 6.3.2CONTROLPATOLÓGICOYMADURACIÓNREPRODUCTIVADELASEMILLA233 6.3.2.1Controlpatológico233 6.3.2.2Maduraciónreproductiva234 6.3.3CRECIMIENTODIFERENCIAL236 6.3.3.1Seguimientoenbatea238 6.3.3.2Seguimientoencriadero241 6.3.4RELACIONESBIOMÉTRICASYCOMPOSICIÓNBIOQUÍMICADELASEMILLA243 6.3.4.1Relacionesbiométricas243 6.3.4.2Composiciónbioquímica245 6.3.5EXPERIENCIADECULTIVOINTEGRAL:CRIADERO,PREENGORDEYENGORDE247 ‐6.4DISCUSIÓN251 7.CONCLUSIONES265 8.BIBLIOGRAFÍA271                                  ABREVIATURAS            Abreviaturas   abrAbril adCiliosadorales agoAgosto ANOVATestdeAnálisisdeVarianza blasBlastoporo CBCabeza ceCeloma chaCharnela CILCiliados CLCola cmCentímetro COCCCoccidios CONJConjuntivo CVCélulasvesiculares desvDesviaciónestándar dicDiciembre disDisoconcha E0Estadioderepososexual E1Estadiodeiniciodelagametogénesis E2Estadiodegametogénesisavanzada E3Estadiodemadurezypuesta E4Estadioderenovacióngonadal eneEnero EPIEpiteliointestinal ESPCEspermatocito ESPGEspermatogonia ESPZEspermatozoide febFebrero gGramo g.l.Gradosdelibertad GlucgonGlucógenoengónada GlucviscGlucógenoenvíscera GREGGregarina hHora HAPLHaplosporidio HEMHemocitos HvHuevo ICGÍndicedeCondiciónGonadal ICVÍndicedeCondiciónVisceral igcInvaginacióndelaglánduladelaconcha indIndividuo INTECMARInstitutoTecnolóxicoparaoControldoMedioMariño julJulio junJunio kgKilogramo lLitro Abreviaturas  LLongitud LdLarvad LipgonLípidosengónada LipviscLípidosenvíscera lnLogaritmoneperiano MMolar mMetro macrMacrómeros marMarzo mayMayo MEBMicroscopioelectrónicodebarrido METMicroscopioelectrónicodetransmisión METCMetacercarias mgMiligramo micrMicrómeros minMinuto mitMitocondrias mlMililitro mmMilímetro MortMortalidad MUSCMúsculo NNormal n.sNosignificativo NEMNematopsissp. nmNanómetro NONoroeste nºNúmero novNoviembre octOctubre OVCOvocito OVGOvogonia OVPEOvocitopedunculado OVROvocitoresidual pProbabilidad pIProdisoconchaI pIIProdisoconchaII paPenachoapical PARAVParavortexsp. PERPerkinsusolseni periPeriostraco PFParedfolicular PhPesohúmedo PlPostlarva postCiliospostorales ppaPenachopostanal preCiliospreorales Abreviaturas   PrgonProteínasengónada proPrototroca PrviscProteínasenvíscera PvLarvapediveliger R²Coeficientedeajuste RICKColoniasdetiporicketsiano RYNRynchodidasp. segSegundo sepSeptiembre SGSeriegametogénica SOSuroeste SPOEsporoquistedetrematodo STEINSteinhausiasp. SupSupervivencia T1CélulassecretorasT1 T3CélulassecretorasT3 telTelotroca TmToneladas TRITrichodinasp. TUBTúbulosdigestivos URASUrastomasp. vVolumen VACEspaciovacío valValvas velVelo χ2Chicuadrado € Euros µgMicrogramo µlMicrolitro ºCGradocentígrado                               1.INTRODUCCIÓNGENERAL 1.Introduccióngeneral 8  Elsistemanerviosoloformantresparesdeganglios:cerebrales,pedalesy viscerales,unidosentresíporuncordónneuronal.Losganglioscerebralesestán localizadoscercadelabocayactúansobrelaregiónanterior,lospedalesenervanel pieylaparteposteriordelmanto,ylosvisceralesactúansobrelasbranquiasylamasa visceral.  1.4REPRODUCCIÓN  Sereproducensexualmente,esunaespeciedioicasindimorfismosexual.  Lagónadaestáconstituidaporgonoductosyfolículos,yenépocasdemadurez ocupaunagranpartedelamasavisceral.Losgonoductoscarecendecélulas musculares,porloquelaexpulsióndelosgametosserealizagraciasalmovimientode losciliosquetapizanestosconductos.Losfolículossonestructurasdeformaacinosay muyramificada;enellostienelugarlagametogénesis.  Lagametogénesiscomienzacuandolasgonias(célulasgerminalesprimordiales) sediferencianenovogoniasoespermatogonias.Lasovogoniassondiploidesyse dividenrepetidamentepormitosisparaproducirovocitosprimarios.Éstosentranen meiosisdandolugaralosovocitosprevitelogénicos,adheridosalaparedinternadel folículo,loscualesiránaumentandoprogresivamentedetamañodebidoaque acumulansustanciasdereserva.Unavezqueelovocitoalcanzalamadurez,sesepara delapareddelfolículoymigrahaciaellumendondepermanecehastaeldesove.La segundadivisiónmeióticadelovocitotienelugarunavezseproducelafecundación.  Lasespermatogoniasdiploidessedividenrepetidamentepormitosispara originarlosespermatocitosprimariosdemenortamañoquelasespermatogonias. Estosespermatocitossufrenlaprimeradivisiónmeióticadandolugaralos espermatocitossecundarios.Éstos,asuvez,entranrápidamenteenlasegunda divisiónmeióticaformandolasespermátidas.Losespermatozoidesseformanapartir 1.Introduccióngeneral 9  FIGURA1.4:Ciclovitalde V .pullastra. delasespermátidasmedianteunaseriedereorganizacionescelulares,disponiéndose deformaradialhaciaellumendelfolículo.  Lagametogénesisesunprocesoquerequieregrancantidaddeenergía,porlo quelamovilizacióndelosnutrientesdelalimentoingeridohacialagónadaesesencial paraeldesarrollodelosgametos.Enlamayoríadelosbivalvos,estedesarrollono dependedirectamentedelalimentoingerido,sinoquepuedeestarsubordinadoalas reservasalmacenadasoaambosfactores.  1.5CICLOVITAL  Lafecundaciónesexternayeldesarrollodelalarvaesindirecto,pasandopor variasfaseslarvariasdevidaplanctónicahastaquesufrenlametamorfosis,sevan haciaelfondoycomienzanlavidabentónica(Figura1.4).                Losespermatozoidesyovocitossonexpulsadosalexteriorporelsifón exhalante.Elespermatozoidepenetraenelovocito,produciéndosepocodespuésla 1.Introduccióngeneral 10  membranadefertilizaciónqueimpedirálapenetracióndemásespermatozoides.Tras lafertilizacióncomienzaeldesarrolloembrionariohastalaaparicióndelaprimera formalarvaria.Todosloscambiosqueocurrenduranteeldesarrolloembrionariohasta laformacióndelosprimerosestadioslarvarios,tienenlugar,graciasalasreservas almacenadasenelovocito,durantelagametogénesis.  Lasegmentacióndelosovocitosesespiral.Trasvariasdivisionesseformala blástulaciliada,queporepiboliadarálugaralagástrulatambiénciliada.Éstase transformaráenlalarvatrocóforaprovistadeunacoronadeciliosyunpenachoapical. Enestafase,laglánduladelaconchasecretalaprimeraconchalarvariao prodisoconchaIqueacabaráenvolviendolalarvatrocóforaparadarlugaralalarvaD.  LalarvaDesplanctónica,comienzaaalimentarse,tieneelvelototalmente desarrolladoysecaracterizaportenerlacharnelarecta.Duranteestaetapacomienza aproducirseunconsiderableaumentodetamaño,loqueimplicauncrecimientodela concha,laprodisoconchaII,enlacualseobservanlaslíneasdecrecimiento. Posteriormentelacharnelasecurvaporlaformacióndelumbo,dandolugaralalarva umbonada.  Lalarvacomienzaadesarrollarelpiemientrasquepersistetodavíaelvelo,esla larvapediveliger.Enestemomentolalarvasefijaalsubstratopasandodeunavida planctónicaaunmododevidabentónico.  Durantelametamorfosiselvelosereabsorbe,perdiendolafunciónde captacióndealimentoydesplazamiento,comenzandoadesarrollarselosfilamentos branquiales.Estapostlarvacomienzaaadoptarlaformadefinitivadeadulto,crecea partirdelosnutrientesdelmedioydesarrollalaconchaadultaodisoconcha.     1.Introduccióngeneral 11  1.6PRODUCCIÓN  LaLey11/2008,de3dediciembredePescadeGalicia,modificadaporlaLey 6/2009,de11dediciembre,defineensuartículo27elmarisqueocomo«elejercicio delaactividadextractiva,desarrolladaapieodesdeembarcación,enlazonamarítima omarítimo‐terrestredirigidademodoexclusivoyconartesselectivasyespecíficasala capturadeunaovariasespeciesdemoluscos,crustáceos,tunicados,equinodermosy otrosinvertebradosmarinos,confinesdecomercialización».  EnestamismaLeyseclasificanlaszonasdeexplotaciónmarisqueraen:  ‐Zonasdelibremarisqueo Bancosnaturalescuyaexplotaciónnoestásujetaaunaautorizacióno concesiónadministrativa.  ‐Zonasdeautorizaciónmarisquera Bancosnaturalesounaporcióndeelloscuyaexplotaciónseotorgaenuso privativonormalatítuloprecarioparasuexplotaciónenrégimende exclusividad.  ‐Zonasdeconcesiónmarisquera Bancosnaturalesounaporcióndeelloscuyaexplotaciónseotorgaenuso privativoanormalqueimpliqueelderechoaocupación,usoogozoenrégimen temporal.  Laextraccióndemoluscosenlaszonasdelibremarisqueoyenlas autorizacionesmarisquerasesrealizadaporlasagrupacionesdemariscadores.Su facetamássencillayartesanal,quetienecomoobjetivolacapturademoluscosenla playayserealizasinembarcación,esloqueseconocecomomarisqueoapie.Esta actividadtieneunagranimportanciasocialenGalicia,yaquedeelladependenlos ingresosdemásde4.000personas,siendomásde3.500mujeres.Elmarisqueoaflote 1.Introduccióngeneral 12  esdesempeñadoprincipalmenteporhombres,agrupandounas3.500personasycerca de3.000embarcaciones(deCoo,2008).  LasprincipalesespeciesdebivalvosexplotadasporlosmariscadoresenGalicia son:laalmejababosa(Venerupispullastra),laalmejafina(Ruditapesdecussatus),la almejajaponesa(Ruditapesphilippinarum),laalmejarubia(Venerupisrhomboides)yel berberecho(Cerastodermaedule).  Losparquesdecultivo,concesionesadministrativasaentidadesprivadas situadasenlazonamarítimo‐terrestre,estándedicadosprincipalmentealcultivode almejafina,babosayjaponesa.EnGaliciaexisten1.134parquesdecultivo,1.000de ellossituadosenCarril.  Enlaevoluciónanualdelascapturas(Figura1.5),seobservaapartirdelaño 2005undescensoenlaproduccióndealmejababosayalmejafina,yunaumentoenla almejajaponesayrubia.Apartirdeeseañolaalmejababosapasadeserlaprimeraen toneladasdecapturasaserlasegunda,despuésdelaalmejajaponesa.              FIGURA1.5:Evolucióndelascapturas(enTm)dealmejababosa,fina,japonesayrubiaenlos últimos10 años. 0 500 1000 1500 2000 2500 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 Producción(Tm) Años Babosa Fina Rubia Japonesa 1.Introduccióngeneral 13  Enlosúltimoscincoañosseextrajeron5.140toneladasdealmejababosa.La RíaconmayorproducciónfueladeArousaconel59%,seguidadelasRíasdeNoia (15%),Ferrol(12%)yVigo(9%).EntrelasCofradíasconmayorvolumendeextracción destacaAIlladeArousaporhaberregistradoenlosúltimos5añoscercadel17%dela extraccióndetodaGalicia,seguidadelaCofradíadeNoia,conel13,5%.  Elpreciomediodelaalmejababosaduranteestosúltimosañosvarióentre12y 15€/kg,laalmejafinaoscilóentre20y30€/kg,ylasalmejasrubiayjaponesase mantuvieronentre7y10€/kg.  Debidoaladiferenciadepreciodeprimeraventaenlonjaentrelasdistintas almejas,lacotizaciónglobaldelaalmejababosalesigueenimportanciaalaalmeja fina,yaambaslesiguenlasotrasespeciesdealmejas.Durantelosúltimos10añosla cotizaciónanualmediadelaalmejababosafueentornoa15millonesdeeurosyla finade16millonesdeeuros(Figura1.6).Laalmejajaponesasubióprogresivamente de4millonesdeeurosenelaño2001a18millonesenel2008,bajandohasta12 millonesenel2010.Laalmejarubiapasó,enesemismoperíododetiempo,de3a5 millonesdeeuros.             FIGURA1.6:Cotizaciónglobal(enmillonesde€)dealmejababosa,fina,japonesayrubia enlosúltimos10años. 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 Importe(millonesde€) Años Babosa Fina Rubia Japonesa 1.Introduccióngeneral 14  1.7PLANESDEEXPLOTACIÓNYEXTRACCIÓN  ElDecreto423/1993,de17dediciembre,porelqueserefundelanormativa vigenteenmateriademarisqueo,extraccióndealgasycultivosmarinos,modificado porelDecreto237/2002,de11dejulio,establecequelaextraccióndemariscoyla recoleccióndealgasestaránsujetasalPlanGeneraldeExplotaciónMarisquera, aprobadoconcarácteranualporlaConselleríadePesca,MarisqueoeAcuicultura,hoy ConselleríadoMar.  LosPlanesGeneralesdeExplotaciónsonunconjuntodenormasy orientaciones,decarácteranual,destinadasaregularyprogramardichaextraccióny recolecciónquesólopodráserejercidaporpersonasyembarcacionesconpermisode explotación.EstosplanessonaprobadosporordendelaConselleríadoMar,después deconsultarconlasentidadesrepresentativasdelsector.  EnestosPlanesseintegran:  ‐Planesdeexplotaciónparaautorizacionesmarisqueras ElaboradosporsusentidadestitularesypresentadosenlasDelegaciones TerritorialesdelaConselleríadoMarajustándosealsiguienteesquema: númerodemariscadoresyembarcacionespropuesto;períodosyzonasde explotación;númerodedíasprevistodeactividad;normasdecomercialización, vigilanciaytopedecapturasporespecies,pormariscadorypordía.  ‐Normasdeexplotaciónparazonasdelibremarisqueo ElaboradasdeoficioporlaConselleríadoMardespuésdeconsultarconlos representantesdelsectorylasasistenciastécnicas.Enestecaso,puedela DirecciónXeraldeRecursosMariños,modificarlasespecies,períodosyzonas deextracciónestablecidaenlasnormas.   1.Introduccióngeneral 15  ‐Planesespecíficosdeexplotaciónparazonasdelibremarisqueo Elaboradasporlascofradíasoentidadesasociativasdelsectorajustándosealos plazosyesquemadelosPlanesdeExplotación.  Laextraccióndealmejababosaseregulasegúnelartículo114delDecreto 424/93enelcualsedefinenlasartesdecapturademoluscosbivalvos.Entrelos utilizadosactualmenteenGaliciaparalacapturadealmejababosasedistinguendos modalidadesenfuncióndelalocalizacióndelosbancosnaturales(Figura1.7):  a)Apie:Serealizaenbancosnaturalesalosquesetieneaccesoapieenlas bajamares.EnGalicialasartesmásutilizadasparalaextraccióndealmejason:el “sacho”,el“angazo”yel“fouciño”.Sonartessencillasqueprovienendelinterior, siendotradicionalmenteusadasenlaslaboresdecampo.  b)Aflote:Seefectúaenlosbancosqueestánsiempresumergidos,porloquese realizadesdeembarcación.Paralacapturadealmejababosaenlosbancos submarealesseutilizael“rastro”yel“raño”.Sonartesdearrastreutilizadasenaguas pocoprofundas,enlasqueestáprohibidousaraparejosmecánicosparaelarrastre sobreelfondo,nitampocopuedenserremolcadasporlaembarcación,porloquesu usoesestrictamentemanual.   FIGURA1.7:Extraccióndealmejababosa enlaRíadeArousa. A:apie. B:aflotedesdeembarcación. AB                            2. OBJETIVOS 3.Cicloreproductivo 24 expulsadosalmedio.Dentrodeunmismoindividuosepuedendarcasosdeasincronía folicular,coexistiendodentrodelagónadafolículosendistintosestadiosdedesarrollo; Villalbaetal.(1993a)encontraronenlaalmejababosaqueeldesarrollofolicularenlas hembrasnoerasincrónico.  Paraelestudiodelciclogametogénicosehandesarrolladodistintosmétodos quesepuedenclasificarenindirectosydirectos.Losprimerossebasanenestimarla presenciadelarvasenelplanctonoverlaposteriorfijacióndepostlarvasosemillay lossegundosconsistenenestudiosdeltejidogonadaldelosindividuos,siendoestos últimoslosmásfiables.  Dentrodelosmétodosdirectosexistenlosquesimplementesonobservaciones macroscópicasdelagónada(observandolacoloraciónyelaspecto)comoelde GlemarecyBouron(1978)aplicadoaVenéridos,oenlosqueseelaboranÍndicesde Condicióngonadal.Otrosmétodosdirectossebasanenobservacionesmicroscópicas, yaseandefrotisinvivodelagónada,comoelelaboradoporLucas(1965),odelas preparacioneshistológicasdetejidogonadal.  Paradeterminarelgradodedesarrollogametogénicodelosindividuosapartir delaobservacióndepreparacioneshistológicassepuedenutilizarescalascualitativas, quesebasanendescribirlosdistintosmomentosporlosquepasalagónadadurante elciclo.Alolargodelosañossehandesarrolladonumerosasescalashistológicas, diferenciándoseenelnúmeroylacaracterizacióndeestosestadiosgonadales.En bivalvoscabedestacarlasescalasdeHollandyChew(1974)yXieyBurnell(1994) descritasparalaalmejajaponesa,ylasdeLubet(1959)yWilsonySeed(1974) descritasparaelmejillón.  Enlosúltimosañossehandesarrolladootrosmétodosdenaturaleza cuantitativacomoeselestereológico.EnVenéridoslautilizacióndeestemétodo abarcadesdeestudiosdedistribucióndefrecuenciadetalladeovocitosporanálisisde imagen(MorvanyAnsell,1988yXieyBurnell,1994)hastacálculosdelasfraccionesde volumenocupadasporlosdiversostiposcelulares(RodríguezMoscoso,2000). Introducción 25 ElciclogametogénicodelaalmejababosaVenerupispullastrafueestudiado porFigueras(1957)yPérezCamacho(1980),ambosmediantelatécnicadefrotis. MediantehistologíasetieneconocimientodeltrabajorealizadoporVillalbaetal. (1993a)enunapoblacióngallegayeldeMaiaetal.(2006)realizadoenaguas portuguesas.ÁlvarezFariña(2005)yJaraJara(1995),estudiaronelciclogametogénico deestaespeciemedianteestereología;esteúltimoensemilladealmejaenuncultivo realizadoenaguaresidualprocedentedeunapiscifactoríaderodaballo.  EnestecapítulosedefineelciclogametogénicodelaalmejababosaV. pullastraentrespoblacionesgallegas,mediantelaobservacióndepreparaciones histológicasyelempleodeunaescalacualitativaadaptadaaestaespecie.  Losbivalvosmarinospresentanciclosdealmacenamientoydeutilizaciónde energíarelacionadosíntimamenteconelciclogametogénico.Lasvariaciones estacionalesenlasactividadesmetabólicassonfrutodeunaseriedeinteracciones entrealimentodisponible,condicionesambientales,crecimientoyactividad reproductora(Gabbott,1983).Enlatitudesaltaslaproduccióndenutrienteses estacionalylosbivalvosrespondenaestavariabilidaddediferentesmaneras.Asíen algunasespecies,elperíododeproduccióndegametoscoincideconeldemayor disponibilidaddenutrientes,porloquemuestranunaflexibilidadensuestrategia reproductoraasociadaaunestilodevidaoportunista(MacArthuryWilson,1967y Lubet,1986).Enotrasespecies,losnutrientessonalmacenadosendiferentesórganos delcuerpoylaproduccióndegametostienelugardurantelosperíodosdebaja disponibilidaddealimento,sonespeciesdeestilodevidaconservador.  Existentrabajosquehacenreferenciaalasrelacionesqueseestablecenentre elciclogametogénicoylacomposiciónbioquímicaenbivalvosmarinos.Dentrodelos Venéridosseencuentranlossiguientestrabajos:Anselletal.(1964),Adachi(1979), BeningeryLucas(1984),Medhioub(1986),Goulletqueretal.(1988),Gimenoetal. (1990),Robertetal.(1993),Rodríguezetal.(1993),RodríguezMoscosoetal.(1993), JaraJara(1995),RodríguezMoscosoyArnáiz(1998),Delgado(2001),Ojeaetal.(2001) yÁlvarezFariña(2005). 3.Cicloreproductivo 26 Deentreloscomponentesmayoritarios,elglucógenoestáconsideradocomoel principalcomponentedelasreservasenbivalvosmarinos(Giese,1967).Graciasasu hidrosolubilidadsonreservasdeusoinmediatofacilitandosumovilizaciónhacialos tejidos,cubriendonecesidadesenergéticastantodemantenimiento,enépocasde bajadisponibilidaddealimento,comorelacionadasconlosperíodosreproductivos. GabbotyBayne(1973),WilsonySeed(1974)yMann(1979)establecenelpapeldel glucógenocomoconstituyenteenergéticoesencialquesostieneelesfuerzo reproductor.  Loslípidos,generalmentemenosimportantesdesdeelpuntodevistadel aporteenergético(Giese,1966;Ackman,1989yBesnardetal.,1989),presentanuna excelentecapacidaddeseralmacenados.SegúnBeningeryLucas(1984)constituyen partedelasreservasenépocasnutricionalesdeficitarias.Esconocidasuimportancia paralaformacióndegametos(Holland,1978)alconstituirlaprincipalreservade energíadelosovocitosylarvasdebivalvos,hechoquequedademostradoporuna bajadadelosnivelesdeestecompuestoenépocasdepuesta(Gabbott,1975).  Lafunciónprincipalatribuidaalasproteínasesestructural,sindescartarsu papelcomoreservaenergéticaenbivalvosadultosparticularmentedurantela gametogénesis(Holland,1978),ensituacionesdebajosnivelesdeglucógenooseveros desequilibriosmetabólicos(BeningeryLucas,1984).Adachi(1979)encuentraqueel niveldeproteínastienerelaciónconeldesarrollodelagónadaenlaalmejajaponesa, sugiriendoquelaproteínadelmúsculoaductorpuedeserutilizadaparalaproducción degónada.Enotrosentido,JaraJara(1995)sostienequeelaumentodeproteínasen almejaesunexcelenteindicadordecrecimientoyquetienepocarelaciónconlos ciclosquesiguenelglucógenoyloslípidos,sugiriendoqueelpapeldelasproteínasen elmetabolismoenergéticoespocoimportanterespectoalosanteriorescomponentes bioquímicos.   ÁlvarezSeoane(1960)yGonzález(1975),realizaronelestudiodela composiciónbioquímicadelaalmejababosaperosinrelacionarloconelciclo gametogénico.Elprimerodeterminólacomposiciónbioquímicadelapartecomestible Introducción 27 delaalmejaorientandolosresultadosalconsumohumano,yelsegundo relacionándoloconlosparámetrosecológicos.ÁlvarezFariña(2005)describela dinámicareproductoradeestaespecieapoyándoseenestudioshistoquímicos.  Enestetrabajoseestudialavariacióndelacomposiciónbioquímica mayoritariadelaalmejababosa(glucógeno,lípidosyproteínas)entrespoblacionesa lolargodelciclogametogénico,conelfindedescribirlaestrategiareproductorade estaespecieenGalicia.  Unodelosfactoresquepuedenmodificarelcicloreproductivodelosbivalvos eslapresenciadeparásitos,quepuedenafectardirectamentealagónadaobienal estadogeneraldelindividuo.ExistenparásitosenlaalmejadeltipoPerkinsussp.que hansidorelacionadosconmortalidadesdealmejafina,especialmenteenépocas estivalesenlasquelasalmejasestabansometidasacondicionesdeestrés(Villalbaet al.,2005).Casas(2001)detectóqueenunapoblacióngallegadealmejafina,al aumentarlaintensidaddeinfecciónporPerkinsusatlanticus,aumentabaelporcentaje deindividuosenreposogonadalydescendíaelporcentajedeindividuosenestadode gametogénesisymadurez.  Otrosparásitosquetambiénpuedenocasionarunefectonegativoenel potencialreproductorsonlostrematodos.Losbivalvosmarinosactúannormalmente comosushospedadoresprimariosensusfaseslarvariasdeesporoquisteycercaria,o comohospedadorsecundarioenlafasedemetacercarias.Lostrematodosmás importantesqueafectanalosbivalvossonlospertenecientesalafamilia Bucephalidae,suslarvassonprobablementelosparásitosmetazoosmásnocivosque afectanabivalvosmarinos(Iglesias,2006),causandosucastraciónydebilitamiento. Lasmetacercariasnormalmentenocausancastraciónyhansidoconsideradas generalmentecomocausantesdepocooningúndañoenelhospedador.Sinembargo, existenevidenciasdequepuedencausarotrosdaños(Lauckner,1983),entrelos cualesestáundebilitamientogeneral,alteracionesenelcomportamiento,aumentoen elconsumodeoxígenoylatasametabólica.  3.Cicloreproductivo 28 EnGaliciaserealizarontrabajossobrelapatologíadelasalmejas:Figuerasetal. (1992),Villalbaetal.(1993b,1999y2005),López(1995),Ordásetal.(2001),Casas (2001)yCasasetal.(2002).Ningunodeellosrelacionaelefectodelaparasitación gonadalenelcicloreproductivodelaalmejababosa.  Enestetrabajoserealizaelanálisishistopatológicodelosindividuosutilizados paraelestudiodelcicloreproductivo,conelfindeidentificarlosparásitosquepueden incidireneldesarrollogametogénicoy,porlotanto,disminuirlacapacidad reproductoradeestaespecie.  Laalmejababosahabitatantoenbancossubmarealescomoenintermareales. Losprimerosseencuentransiempresumergidosyporlotantoladisponibilidadde alimentoesmásconstantequeenunapoblaciónintermareal.Asuvezlapoblacióndel bancointermarealestásometidaaperíodosdedesecaciónyafactoresambientales comolabajadadesalinidadporlluviasolasubidadelastemperaturasduranteel verano.Eversoleetal.(1980)yWalkeryHefferman(1994)encontrarondiferenciasen eldesarrollogonadalentreejemplaresdeMercenariasp.procedentesdelárea submarealeintermareal.  Enestecapítulosepretendedefinirelcicloreproductivodelaalmejababosa enGalicia.Serealizaelestudiohistológicodelagónadautilizandounaescala cualitativa,ylavariacióndeloscomponentesbioquímicosmayoritariosalolargodel ciclo.  Seescogieronparaellotresbancosnaturales:unodeellossituadoalNoroeste deGalicia(enCamariñas)ylosotrosdosalSuroeste(enOGrove).DentrodeOGrove sehanescogidodosbancos,unointermarealyelotrosubmareal.Seanalizanlas posiblesdiferenciasentreunapoblacióndelNOyotradelSO,ydentrodeunamisma zonaentreunaintermarealdeotrasubmareal.  Seestudiatambiénelefectodelaparasitaciónenlacondicióngonadalyla capacidadreproductoradeestaespecie. Materialymétodos 29 3.2MATERIALYMÉTODOS 3.2.1RECOGIDAYPROCESADODELASMUESTRAS  CadamessemuestreóunlotedeVenerupispullastradetallapróximaala comercialdecadaunadelastreszonasdeestudio(Figura3.1).Seescogierontres bancosnaturales,unodeellosessubmarealyestásituadoenlaRíadeCamariñas(NO deGalicia)ylosotrosdospertenecenalaRíadeArousa(SOdeGalicia).Estosdos bancosselocalizanenlazonasuroestedelaRía,unodeellosessubmarealyestá situadodelantedelpuertodeOGrove(bancode“ACantareira”)yelotroes intermarealyestásituadoentreOGroveyAToxa(bancodela“VíaNorte”).Eneste trabajosehacereferenciaaestaspoblacionesdeestudiocomo:Camariñas,OGrove submarealyOGroveintermareal.                  FIGURA3.1:LocalizacióndelostresbancosnaturalesdeV.pullastrautilizadosenesteestudio. RÍADECAMARIÑAS CAMARIÑAS OGROVE BANCOSUBMAREAL BANCOINTERMAREAL BANCOSUBMAREAL “ACANTAREIRA” “VIANORTE” RÍADEAROUSA 3.Cicloreproductivo 30 Laextracciónlarealizaronmensualmentelasmariscadorasdelaagrupacióno enalgúncasodirectamentelaasistenciatécnicadelapropiacofradía.Ennoviembre de2003serecogieronlasprimerasmuestrasyseconcluyeronenmayode2005; obteniendoasídatosdelciclogametogénicoalolargode19meses.  Lasmuestrasllegabanrefrigeradasyseprocesabandirectamentesin depuraciónprevia;solamentesemanteníanduranteunahoraenaguaparaexpulsar lasarenasdelacavidadpaleal.Estoeradebidoaquesetemíanposiblespérdidasde gametossiseintroducíanlasalmejasdenuevoenelaguadurante24horas;hechoque sepudoconfirmarennuestrolaboratorioalobservardurantetodoelperíodode estudio,quelasalmejassobrantesexpulsabangametos(enmayoromenorcantidad) alserintroducidasenagua. 3.2.2OBTENCIÓNDELOSDATOSAMBIENTALESDELASZONASDEMUESTREO  Losdatosdesalinidad(‰),temperatura(ºC)yclorofilaa(µg/l)delaszonasde muestreohansidocedidosporelInstitutoTecnolóxicoparaoControldoMedio Mariño(INTECMAR).Losdosprimerosfueronrecogidosmedianteperfilesverticales realizadosconunCTDSeabird25ylosdatosdeclorofilafueronobtenidosmediante análisisespectrofluorimétrico.  LosdatoscorrespondientesalapoblacióndeOGrovesubmarealprocedende laestaciónA8denominada“Meloxo”ylosdatosdelapoblaciónintermarealprovienen delaestaciónA7.DelapoblacióndeCamariñasnosehaconseguidoobtenerningún dato.       Materialymétodos 31 3.2.3OBTENCIÓNDELOSDATOSBIOMÉTRICOS,CÁLCULODELPESOSECOEÍNDICESDE CONDICIÓN  Decadamuestreoseprocesóunnúmerodealmejascomprendidoentre30y 50.Sesepararonlosmachosylashembras,utilizandocomomínimo15individuosde cadasexo.  Acadaindividuoseletomaronlassiguientesmedidasutilizandouncalibre digitalMitutoyo(precisión0,01mm)yunabalanzadeprecisiónGramPrecision (precisión0,01g):   Longitudmáximadelejeantero‐posterior  Alturamáximadelejedorso‐ventral  Anchuramáxima  Pesofrescototal  Pesofrescodelaconcha  Pesofrescodelavianda  Pesofrescodelagónada  Acadaindividuoselediseccionólagónadaseparándoladelrestodelavianda, ambaspartessecongelaronpara,posteriormente,realizarlosanálisisbioquímicos.  Elpesosecosecalculóliofilizandounamuestradetejido,congelándola previamente,ymanteniéndoladurante24‐48horasenunliofilizadorrefrigerado. Posteriormentesepesólamuestrapreviopasoporundesecadorduranteunahora. Lasconchassemantuvieronenunaestufaa100ºCdurante24horas.Secalcularonlos siguientespesossecos:   Pesosecodelavianda  Pesosecodelaconcha  Pesosecodelagónada  3.Cicloreproductivo 32 ConlosdatosobtenidosdelpesosecosecalcularonlosÍndicesdeCondición:   ÍndicedeCondiciónvisceral: ICV=(Pesosecodelavianda/Pesosecodelaconcha)x100  ÍndicedeCondicióngonadal: ICG=(Pesosecodelagónada/Pesosecodelaconcha)x100  3.2.4MÉTODOHISTOLÓGICO  Paraelestudiohistológicoeltejidogonadalseintrodujodurante24horasenel líquidofijador.Lasprimerasmuestras(hastamarzo2004)sefijaronconBouin‐ Hollande,posteriormenteseoptóporutilizarelfijadorDavidson,obteniéndose mejoresresultadosdefijación.  Seguidamenteseprocedióadeshidratarlasmuestrasenunprocesadorde tejidosautomáticoHistolabZX‐100,paraluegoincluirlasenparafina.Enelprocesador lasmuestraspasaronporlasiguienteseriedebaños:   etanolal80%(1x1h)  etanolal96%(3x2h)  etanolal100%(2x1h)  1etanolal100%:1xileno(1x1h)  xileno(2x1h)  parafinaa60ºC(2x3h)  Elsiguientepasofuelaformacióndebloquesdeparafinaconcadaunadelas muestras.Serealizóenuncentroformadordebloques,compuestoporun dispensadordeparafinacalienteyunaplacarefrigeradoradondeseenfrían.Se cortaronlosbloquesobtenidosconunmicrotomoMicromHM340E,sehicieron seccionesde5micrasdeespesorqueluegoseextendieronenunbañodeaguaa40ºC, Materialymétodos 33 pararecogerlossobreunportaobjetosconunacapadeglicerinaquefacilitabasu adherencia.Sesecabanenunaestufaa40ºC.  Elúltimopasofuelatinciónconhematoxilina‐eosina,paraellopreviamentese realizabaeldesparafinadoylahidratacióndeloscorteshistológicos,elprocesoera manualyserealizabapasandolaspreparacionesporlasiguienteseriedebaños:   xileno(3x2min)  etanolal100%(1x2min)  etanolal96%(1x2min)  etanolal80%(1x2min)  etanolal70%(1x2min)  etanolal50%(1x2min)  aguadestilada(1x5min)  Elsiguientepasoeralatinciónensí,ycomprendíalossiguientesbaños:   hematoxilinadeHarris(1x5min)  aguacorriendo(1x5min)  eosina(1x10min)  etanolal100%(4x1min)  xileno(3x1min)  LaspreparacionessemontaronconHistomountyseobservaronalmicroscopio óptico.  Análisiscualitativo:  Laescalautilizadaesunaadaptaciónaestaespeciedelasescalascomúnmente utilizadasparaotrosbivalvos.Sebasaenlasescalascualitativasexistentespara bivalvos(Lubet,1959;HollandyChew,1974yWilsonySeed,1974),peroconligeras modificacionesadaptadasaestaespecietraslaobservacióndelaspreparaciones.A 3.Cicloreproductivo 40 3.2.6.3DETERMINACIÓNDELÍPIDOSTOTALES  Paraladeterminacióndelípidostotalesseutilizóelmétodogravimétrico utilizadoporFolchetal.(1957),previaextracciónconcloroformo‐metanol(Figura3.4).  Separtióde200mgdetejidoliofilizadoypulverizado,alacualseleextrajeron loslípidosrealizandolavadossucesivosconcloroformo‐metanol2:1(v:v).Secomenzó conunlavadocon4ml,sonicandolamuestra,centrifugándolayrecogiendoel sobrenadante.Eltejidosedimentadoseresuspendióconotros3mldecloroformo‐ metanolpararealizarelsegundolavado;esteprocesoserepetíatantasvecescomo fueranecesariohastaextraerlatotalidaddeloslípidosdelamuestra.  Elsobrenadanterecogidodespuésdetodosloslavadossetransvasóauna ampolladedecantaciónfiltrándoloatravésdeunembudo.Seañadieron3mlmásde cloroformo‐metanolqueseutilizabanparalavarelpropiotuboyelfiltrodelembudoy clorurosódico0,6N(el25%delvolumendecloroformo‐metanoldelaampolla)para arrastrarlosrestosdemateriaorgánicadelamuestra.Seagitabanysedejaban reposardurante24horas.  Aldíasiguienteserecogíalafraccióninferiordelaampollaqueconteníalos lípidos,alasuperiorselevolvíaahacerotrolavadoconlamismacantidadinicialde cloroformo‐metanolydeclorurosódico.  Seevaporaronloslípidosenpresenciadenitrógenoyseredisolvieronen3ml decloroformo.Deaquíseextrajeron3alícuotasde300µlenunascápsulas previamentetaradas,paraposteriormenteevaporarlasenunaestufaa50ºCdurante doshoras,sepesarondenuevolascápsulasysehallaronasíloslípidostotalespor diferencia.    Material y métodos 41 FIGURA 3.4: Esquema del método empleado para la determinación de lípidos totales. 3.Cicloreproductivo 42 3.2.7TRATAMIENTOESTADÍSTICODELOSDATOS  ElanálisisestadísticoserealizóutilizandoelpaqueteestadísticoSPSS®para Windowsversión15.0.  Lacomparacióndemediasdelosdistintoscomponentesbioquímicosentrelas distintaspoblacionesseanalizómedianteuntestdeanálisisdevarianza(ANOVA).Se utilizóeltestdeKolmogorov‐Smirnovparaelestudiodelanormalidad.La homogeneidaddevarianzassehacomprobadomedianteeltestdeLevene.Las comparacionesmúltiplessehanllevadoacabomedianteeltestdecomparación múltiplederangos(testdeTukey).  Paraelestudiodelsex‐ratioenlaspoblacionesseutilizóuntestChi‐cuadrado.  SerealizóunAnálisisdeComponentesPrincipalesparadiscriminarlas tendenciasdelacomposiciónbioquímica(lípidosgónada,lípidosvíscera,proteínas gónada,proteínasvíscera,glucógenogónadayglucógenovíscera)conrespectoalos estadiosgametogénicos(iniciodelagametogénesis,gametogénesisavanzada, madurezyrenovación)yalosÍndicesdeCondicióngonadalyvisceraldeacuerdocon losejesprincipales.  Enelestudiodeasociaciónentrelacomposiciónbioquímicadelaspoblaciones, losÍndicesdeCondiciónylosestadiosgametogénicos,seutilizóelcoeficientede correlacióndeSpearman(Zar,1996).  LosvaloresdeporcentajesdecadaestadiogametogénicoylosÍndicesde Condicióngonadalyvisceralsetransformaronconlafunciónarcoseno.   Resultados 43 3.3RESULTADOS 3.3.1PARÁMETROSAMBIENTALESDELASZONASDEMUESTREO  Enlasfiguras3.5y3.6sepresentanlosdatosambientalesdelaspoblacionesde OGrovesubmarealyOGroveintermareal,desdenoviembrede2003hastamayode 2005,cedidosporelINTECMAR.  Enambaspoblacioneslatemperaturasigueuncicloestacionalcon temperaturasmínimaseninvierno(12ºC),quesevanincrementandoenprimavera, hastaalcanzarelmáximoenverano(18,5ºC).Lasalinidadoscilaligeramentealolargo delaépocadeestudio,entre34‰y35,5‰.Enrelaciónalaclorofilaa,eninviernose observanlasmínimasconcentracionesyapartirdelaprimaveraseencuentranvarios picosdedistintaintensidad,4enOGrovesubmarealy3enOGroveintermareal,que sesucedenaproximadamentecadadosmeses.                   10 12,5 15 17,5 20 30 31 32 33 34 35 36 Temperatura Temperatura Salinidad Salinidad ºC 0 1 2 3 4 Clorofila Clorofila µg/l O Grove submareal O Grove submareal ‰ 5 nov-03 may-04 ago-04 nov-04 feb-04 feb-05 may-05 a a FIGURA3.5: Gráficaconlosdatosdetemperatura(ºC),salinidad(‰)yclorofilaa(µg/l) enlapoblacióndeOGrovesubmareal. 3.Cicloreproductivo 44  3.3.2DATOSBIOMÉTRICOS,PESOSECOEÍNDICEDECONDICIÓN  3.3.2.1POBLACIÓNDECAMARIÑAS  EnlatablaIII.1semuestranlosparámetrosbiométricosobtenidosduranteel períododeestudiodelaalmejababosaVenerupispullastraenlapoblaciónde Camariñas.Sepresentanlosvaloresmediosmensualesdelongitud,alturayanchura, pesofrescototalypesofrescoysecodelaconcha,viandaygónada.  Lalongitudmediamensualdelosindividuosestudiadosdeestapoblaciónfue de40mm,oscilandoentreunmínimode37,65mmdelmesdediciembrede2003y unmáximode44,53mmdelmesdeenerode2004.   10 12,5 15 17,5 20 30 31 32 33 34 35 36 Temperatura Temperatura Salinidad Salinidad ºC 0 1 2 3 4 Clorofila Clorofila µg/l O Grove intermareal O Grove intermareal ‰ 5 nov-03 may-04 ago-04 nov-04 feb-04 feb-05 may-05 FIGURA3.6:Gráficaconlosdatosdetemperatura(ºC),salinidad(‰)yclorofilaa(µg/l) enlapoblacióndeOGroveintermareal. Resultados 45 TABLAIII.1:DatosbiométricosmediosmensualesdeV.pullastradelapoblacióndeCamariñasdurante losmesesdeestudio.Media±desv.   Enlafigura3.7serepresentalavariacióndelÍndicedeCondicióngonadaly visceraldurantelosmesesdeestudio.Ambosíndicespresentaronunpatrónde evoluciónsimilarconunvalormáximode5,66paraelgonadaly18,81paraelvisceral, enelmesdediciembrede2003.Posteriormenteambosíndicesdescendieron paulatinamentehastaelmesdeabrilde2004dondeseencontraronlosmínimos valorescoincidiendoconunperíododespuésdelapuesta(1,74elgonadaly6,67el visceral).Losíndicesvolvieronaaumentarmanteniéndoseentornoavaloressimilares desdeelmesdeagostohastadiciembre.Apartirdelmesdediciembrede2004ambos índicescomenzaronadescender(aligualqueelañoanterior)encontrándose igualmenteunmínimo(enambosíndices)enelmesdeabrilde2005. MEDIDAS(mm)PESOFRESCO(g)PESOSECO(g) FECHALongitudAlturaAnchuraTotalConchaViandaGónada ConchaViandaGónada 11‐nov‐03 40,12 ±1,78 26,24 ±1,37 17,75 ±1,09 11,50 ±1,64 5,64 ±0,83 3,84 ±0,70 0,58 ±0,21 5,28 ±0,80 0,86 ±0,15 0,18 ±0,06 10‐dic‐03 37,65 ±1,70 25,11 ±1,15 17,75 ±0,83 10,21 ±1,07 5,18 ±0,65 3,51 ±0,04 0,93 ±0,02 4,83 ±0,61 0,91 ±0,11 0,27 ±0,05 15‐ene‐04 44,53 ±2,66 30,14 ±1,67 21,65 ±1,50 19,41 ±3,93 10,45 ±2,34 5,34 ±0,95 1,33 ±0,41 9,78 ±2,26 1,24 ±0,22 0,38 ±0,12 10‐feb‐04 40,30 ±2,23 26,66 ±1,43 18,60 ±1,15 12,45 ±2,00 6,26 ±1,17 3,47 ±0,57 0,96 ±0,26 5,88 ±1,13 0,73 ±0,12 0,25 ±0,07 11‐mar‐04 38,96 ±1,77  25,90 ±1,14  17,82 ±0,86  11,15 ±1,24 5,72 ±0,76 3,09 ±0,47 0,69 ±0,15 5,24 ±0,70 0,61 ±0,08  0,17 ±0,04  16‐abr‐04 42,14 ±1,54  28,89 ±1,06  20,86 ±1,03  16,83 ±1,86 9,33 ±1,24 3,85 ±0,61 0,84 ±0,18 8,72 ±1,19 0,58 ±0,11  0,15 ±0,04  14‐may‐04 43,39 ±2,44  30,29 ±1,68  21,54 ±1,47  19,47 ±3,50 10,41 ±1,93 4,36 ±0,79 1,24 ±0,29 9,71 ±1,88 0,84 ±0,15  0,27 ±0,06  1‐jul‐04 40,60 ±1,58  28,01 ±1,20  20,45 ±1,26  15,01 ±2,28 8,32 ±1,42 4,46 ±0,64 1,22 ±0,27 7,82 ±1,37 0,95 ±0,17  0,31 ±0,07  10‐ago‐04 40,70 ±1,82  28,04 ±1,30  20,42 ±1,02  15,25 ±2,02 8,40 ±1,24 4,96 ±0,67 1,55 ±0,27 7,88 ±1,23 1,16 ±0,16  0,43 ±0,08  14‐sep‐04 40,54 ±1,71  27,84 ±1,14  19,96 ±0,75  14,70 ±1,65 7,73 ±1,63 4,96 ±0,73 1,45 ±0,38 7,53 ±1,12 1,17 ±0,17  0,42 ±0,11  19‐oct‐04 39,81 ±2,19  26,42 ±1,48  18,17 ±1,30  12,78 ±2,29 6,46 ±1,48 4,35 ±0,90 1,09 ±0,55 6,10 ±1,41 0,93 ±0,19  0,31 ±0,16  15‐dic‐04 39,29 ±0,98  25,89 ±0,90  20,75 ±1,96  11,00 ±1,16 5,57 ±0,68 3,72 ±0,42 0,89 ±0,17 5,24 ±0,65 0,82 ±0,09  0,25 ±0,05  27‐ene‐05 38,59 ±2,50  25,80 ±1,88  17,97 ±1,26  11,10 ±2,83 5,87 ±1,47 3,21 ±0,75 0,70 ±0,22 5,53 ±1,40 0,67 ±0,16  0,17 ±0,05  25‐feb‐05 40,72 ±3,39  27,76 ±2,35  19,48 ±3,56  14,82 ±3,81 7,49 ±2,37 3,81 ±0,99 1,00 ±0,42 7,36 ±2,00 0,77 ±0,19  0,25 ±0,10  29‐abr‐05 39,93 ±1,95  25,59 ±0,97  17,70 ±1,00  10,56 ±1,31  5,21 ±0,76  3,27 ±0,6 1 0,63 ±0,21  4,88 ±0,75  0,64 ±0,12  0,15 ±0,05  3.Cicloreproductivo 46  FIGURA3.7:EvolucióndelÍndicedeCondicióngonadal(ICG)yvisceral(ICV)deV.pullastraenla poblacióndeCamariñas.  3.3.2.2POBLACIÓNDEOGROVESUBMAREAL  EnlatablaIII.2semuestranlosdatosdelapoblacióndeOGrove.Sepresentan lamediayladesviaciónestándardelasmedidasbiométricas,lospesosfrescosypesos secosdurantelosmesesdeestudio.  Lalongitudmediadelosindividuosdiseccionadosfueentornoa37mm,entre unmáximode40mmenfebrerode2004yunmínimode31,83mmenseptiembrede esemismoaño.  AmbosÍndicesdeCondiciónpresentantambiénenestapoblaciónuna evoluciónparalela,comoserepresentaenlafigura3.8.Sinembargo,seobservanmás variacionesalolargodelañoqueenlapoblacióndeCamariñas.Ennoviembrede2003 encontramoslosmáximosvalores,4,61paraelÍndicegonadaly17,91paraelvisceral, queposteriormentedescendieronduranteelmesdediciembre.Enenerode2004se observaotrasubida,seguidodeundescensoenelmesdemarzo,dondese encuentranlosmínimosvaloresenambosíndices(2,47elgonadaly10,19elvisceral), aligualqueenCamariñasdebidoaldesove.Enlosmesesdeagosto,septiembrey octubreencontramosvaloresaltosenambosíndices,quedespuésdisminuyeronhasta elmesdefebrero(unmesantesqueenel2004). fecha nov‐03dic‐03ene‐04feb‐04mar‐04abr‐04may‐04jun‐04jul‐04ago‐04sep‐04oct‐04nov‐04dic‐04ene‐05feb‐05mar‐05abr‐05 I.C.Camariñas ICG ICV 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 Resultados 47 TABLAIII.2:DatosbiométricosmediosmensualesdeV.pullastraenlapoblacióndeOGrovesubmareal durantelosmesesdeestudio.Media±desv.                MEDIDAS(mm)PESOFRESCO(g)PESOSECO(g) FECHALongitudAlturaAnchuraTotalConchaViandaGónada ConchaViandaGónada 19‐nov‐0337,96 ±2,51 24,77 ±2,51 17,25 ±1,14 10,26 ±2,10 5,00 ±1,05 3,60 ±0,82 0,72 ±0,24 4,65 ±1,00 0,60 ±0,12 0,22 ±0,02 17‐dic‐0338,03 ±2,18 25,36 ±1,77 17,94 ±1,34 11,45 ±2,50 5,87 ±1,51 2,83 ±0,70 0,54 ±0,22 5,46 ±1,43 0,39 ±0,09 0,13 ±0,05 21‐ene‐0438,11 ±2,25 25,19 ±1,63 17,93 ±1,22 11,16 ±2,17 5,88 ±1,16 3,37 ±0,7 0,74 ±0,28 5,42 ±1,12 0,52 ±0,13 0,19 ±0,07 24‐feb‐0439,99 ±1,55 26,23 ±1,11 18,25 ±0,99 11,89 ±1,06 5,95 ±0,88 3,55 ±0,38 0,63 ±0,11 5,44 ±0,84 0,50 ±0,06 0,15 ±0,03 23‐mar‐0437,89 ±2,23 25,81 ±1,65 18,40 ±1,64 11,96 ±2,59 6,14 ±1,50 2,97 ±0,74 0,62 ±0,32 5,68 ±1,44 0,40 ±0,08 0,15 ±0,07 27‐abr‐0436,45 ±2,61 23,13 ±1,63 16,18 ±1,30 8,47 ±1,97 4,33 ±1,08 2,49 ±0,61 0,45 ±0,19 4,00 ±1,04 0,35 ±0,08 0,11 ±0,05 1‐jun‐0435,87 ±1,93 23,62 ±1,22 16,69 ±0,80 8,63 ±1,14 4,47 ±0,67 3,15 ±0,37 0,71 ±0,13 4,14 ±0,64 0,47 ±0,06 0,18 ±0,03 2‐jul‐0438,92 ±2,84 25,40 ±1,69 17,66 ±1,46 11,23 ±2,45 5,72 ±1,28 3,42 ±0,86 0,71 ±0,13 5,34 ±1,24 0,50 ±0,11 0,17 ±0,06 3‐ago‐0437,00 ±1,98 23,86 ±1,35 17,39 ±1,17 9,75 ±1,65 4,75 ±0,89 3,63 ±0,61 0,77 ±0,23 4,39 ±0,85 0,52 ±0,08 0,18 ±0,07 3‐sep‐0431,83 ±1,98 21,07 ±1,45 15,18 ±1,14 6,39 ±1,46 3,28 ±0,79 2,18 ±0,49 0,48 ±0,23 3,05 ±0,75 0,31 ±0,10 0,13 ±0,06 15‐oct‐0437,82 ±2,54 24,61 ±1,75 17,28 ±1,20 10,08 ±2,07 4,89 ±1,07 3,46 ±0,81 0,69 ±0,24 4,59 ±0,67 0,53 ±0,13 0,19 ±0,07 24‐nov‐0435,42 ±2,40 23,60 ±1,21 16,86 ±1,01 9,11 ±1,36 4,69 ±0,77 3,77 ±0,58 0,57 ±0,20 4,39 ±0,73 0,42 ±0,08 0,17 ±0,06 21‐dic‐0437,52 ±2,17 24,62 ±1,18 17,35 ±0,86 9,80 ±1,38 5,05 ±0,68 3,06 ±0,58 0,60 ±0,18 4,75 ±0,64 0,45 ±0,08 0,10 ±0,07 14‐ene‐0537,30 ±1,35 24,14 ±1,02 17,23 ±0,86 10,04 ±1,23 4,99 ±0,69 2,95 ±0,39 0,59 ±0,13 4,68 ±0,69 0,40 ±0,05 0,15 ±0,03 10‐feb‐0535,70 ±1,05 23,14 ±0,67 16,25 ±0,70 8,63 ±0,70 4,37 ±0,46 2,35 ±0,30 0,44 ±0,13 4,09 ±0,44 0,47 ±0,66 0,10 ±0,03 10‐mar‐0537,78 ±2,45 24,59 ±1,36 17,36 ±1,07 10,70 ±1,07 5,44 ±0,77 3,23 ±0,61 0,72 ±0,21 5,10 ±0,74 0,69 ±0,13 0,19 ±0,05 7‐abr‐0537,46 ±2,33 24,57 ±1,36 17,55 ±0,95 10,22 ±1,60 5,17 ±0,88 3,12 ±0,46 0,66 ±0,18 4,92 ±0,85 0,63 ±0,10 0,16 ±0,04 10‐may‐0537,05 ±1,85 24,09 ±1,02 17,07 ±0,98 9,49 ±1,42 4,89 ±0,74 2,89 ±0,62 0,64 ±0,22 4,67 ±0,72 0,58 ±0,13 0,16 ±0,05 3.Cicloreproductivo 48  FIGURA3.8:EvolucióndelÍndicedeCondicióngonadal(ICG)yvisceral(ICV)deV.pullastraenla poblacióndeOGrovesubmareal.  3.3.2.3POBLACIÓNDEOGROVEINTERMAREAL  SepresentanenlatablaIII.3losparámetrosbiométricoscorrespondientesala poblacióndeOGroveintermareal.  Lalongituddelosindividuosmuestreadosenestapoblaciónfuemenoralas otrasdos,conunamediade35,5mm.Losdatososcilaronentreunmáximode38,54 mm(mesdeoctubrede2004)yunmínimode33,77mm(septiembredeesemismo año).  Enlafigura3.9sepresentanlosdatosdelÍndicedeCondicióngonadalyvisceral deestapoblación.Ennoviembrede2003seencontraronvaloresaltosenambos índices(3,18elgonadaly13,86elvisceral),quecomenzaronadescenderhastaun mínimoanualenelmesdeabrilde2004(conunvalorde1,42elgonadaly8,45el visceral).Duranteelveranolosíndicespresentaronvaloresaltos,disminuyendoa partirdelmesdediciembre,hastallegaralmínimoqueenelaño2005seadelantóa marzo(1,69y9,42elgonadalyvisceral,respectivamente).  fecha I.C.OGrovesubmareal ICG ICV 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 nov‐03dic‐03ene‐04feb‐04mar‐04abr‐04may‐04jun‐04jul‐04ago‐04sep‐04oct‐04nov‐04dic‐04ene‐05feb‐05mar‐05abr‐05may‐05 Resultados 49        TABLAIII.3:Datosbiométricosmediosmensualesde V .pullastra enlapoblacióndeOGrove intermarealdurantelosmesesdeestudio.Media±desv.   MEDIDAS(mm)PESOFRESCO(g)PESOSECO(g) FECHALongitud AlturaAnchura TotalConchaViandaGónada ConchaViandaGónada 25‐nov‐03 35,18 ±1,03 22,84 ±0,63  16,04 ±0,72 8,33 ±0,68 4,13 ±0,42 2,62 ±0,37 0,50 ±0,12 3,82 ±0,40  0,53 ±0,08  0,12 ±0,03 23‐dic‐03 36,45 ±1,34 24,55 ±0,95  17,71 ±0,94 10,26 ±1,35 5,30 ±0,73 3,11 ±0,46 0,73 ±0,16 4,92 ±0,71  0,45 ±0,09  0,13 ±0,04 27‐ene‐04 36,75 ±1,38 24,05 ±0,87  16,84 ±0,66 9,45 ±0,98 4,69 ±0,59 2,66 ±0,30 0,51 ±0,11 4,31 ±0,55  0,47 ±0,06  0,13 ±0,03 25‐feb‐04 37,32 ±1,66 24,81 ±1,18  17,62 ±1,05 10,47 ±1,40 5,33 ±0,80 2,62 ±0,44 0,47 ±0,47 4,90 ±0,77  0,47 ±0,07  0,10 ±0,03 24‐mar‐04 36,30 ±1,68 23,94 ±0,95  17,07 ±0,95 9,39 ±1,30 5,00 ±0,70 2,46 ±0,40 0,42 ±0,16 4,61 ±0,67  0,47 ±0,08  0,10 ±0,04 20‐abr‐04 35,14 ±2,44 23,45 ±1,68  17,12 ±1,25 9,41 ±2,02 4,98 ±1,07 2,10 ±0,36 0,30 ±0,09 4,59 ±1,04  0,39 ±0,07  0,07 ±0,02 2‐jun‐04 33,91 ±1,73 22,37 ±1,19  16,11 ±0,87 7,42 ±1,09 3,87 ±0,62 2,39 ±0,41 0,50 ±0,11 3,54 ±0,39  0,51 ±0,09  0,12 ±0,03 24‐jun‐04 33,87 ±1,64 22,66 ±1,03  16,53 ±0,88 8,00 ±1,20 4,21 ±0,59 2,83 ±0,34 0,61 ±0,12 3,91 ±0,57  0,57 ±0,07  0,13 ±0,02 3‐ago‐04 37,05 ±1,73 24,72 ±1,01  18,04 ±0,99 11,11 ±1,50 5,73 ±0,81 3,48 ±0,66 0,78 ±0,20 5,31 ±0,79  0,70 ±0,12  0,20 ±0,05 3‐sep‐04 33,77 ±1,55 22,60 ±1,14  16,49 ±1,00 8,41 ±1,28 4,30 ±0,75 2,73 ±0,41 0,61 ±0,16 4,05 ±0,73  0,59 ±0,08  0,17 ±0,05 15‐oct‐04 38,54 ±2,14 25,29 ±1,63  17,90 ±1,25 11,19 ±1,90 5,46 ±0,97 3,32 ±0,97 0,64 ±0,26 5,11 ±0,94  0,65 ±0,23  0,16 ±0,09 16‐nov‐04 35,40 ±1,89 23,74 ±1,28  17,15 ±0,83 9,02 ±2,16 4,83 ±0,74 2,79 ±0,47 0,55 ±0,15 4,53 ±0,64  0,61 ±0,10  0,15 ±0,04 14‐dic‐04 35,52 ±1,98 23,46 ±1,14  17,01 ±0,90 8,88 ±1,88 4,68 ±0,79 3,20 ±0,73 0,53 ±0,15 4,40 ±0,75  0,54 ±0,10  0,14 ±0,04 14‐ene‐05 36,17 ±1,81 24,23 ±0,95  17,42 ±1,03 10,04 ±1,47 5,33 ±0,74 2,78 ±0,38 0,59 ±0,17 5,02 ±0,73  0,54 ±0,12  0,15 ±0,05 10‐feb‐05 34,13 ±1,48 22,57 ±1,05  16,45 ±0,82 8,69 ±1,25 4,43 ±0,71 2,08 ±0,37 0,40 ±0,11 4,18 ±0,67  0,40 ±0,07  0,10 ±0,03 10‐mar‐05 34,21 ±1,47 22,80 ±1,10  16,60 ±0,85 8,14 ±1,45 4,22 ±0,61 1,94 ±0,33 0,32 ±0,12 3,97 ±0,59  0,37 ±0,10  0,07 ±0,03 7‐abr‐05 34,07 ±1,49 22,42 ±0,92  16,18 ±0,95 8,17 ±1,09 4,09 ±0,59 2,01 ±0,36 0,38 ±0,10 3,81 ±0,57  0,45 ±0,08  0,13 ±0,03 10‐may‐05 34,35 ±1,65 22,85 ±1,04  16,42 ±0,87 8,56 ±1,07 4,35 ±0,60 2,32 ±0,38 0,43 ±0,12 4,12 ±0,59  0,44 ±0,07  0,10 ±0,03 3.Cicloreproductivo 56 E4.Renovacióngonadal  Losfolículospresentancélulasvesicularesdenuevaformación.Enlosmachos (Figuras3.15.13y3.15.14)losespermatozoidessesitúanenelcentrodelfolículo rodeadosdevariaslíneasdecélulasvesiculares(CV).Seobservangoniasrepoblando losfolículosperonohayniespermatogoniasniespermatocitos.Enlashembras(Figura 3.15.15),quedanovocitosresidualesnoatrésicos(OVC)rodeadosdenuevascélulas vesiculares,noseobservanovocitosprevitelogénicos.Enalgúncaso(Figura3.15.16)se puedeencontraralgunapequeñazonadetejidoconjuntivoorganizándoseenfolículos (CONJ).     1615 14 13 CONJ CV OVC FIGURA3.15:ImágenesdemicroscopíaópticadeV. pullastra enestadio E4derenovacióngonadal. 13:Macho.14:Macho,CV(célulavesicular).15:Hembra,OVC(ovocito).16:Porcióndegónada invadidaportejidoconjuntivo,CONJ.Barrasdeescala100µm.  Resultados 57 EsfrecuentequeduranteelestadioE4seobserveasincroníafoliculardentrode unmismoindividuo,apareciendoprincipalmenteduranteelperíodoverano‐otoño, épocadetransiciónentrelamadurezycomienzodeunnuevociclodegametogénesis. Enestaépocaencontramosfolículosenmadurez,folículosqueempiezanaformar célulasvesiculares,einclusoalgúnfolículoenreabsorción.Enlosindividuosenlosque seobservóestaasincroníasehaoptadoporasignaraquelestadioqueestabapresente enlamayorpartedelagónada.Enlafigura3.16semuestrandosfotografías pertenecientesaunindividuohembradeCamariñasdelmesdeagosto.   Estaasincroníafolicularlepermitealaalmejababosaqueduranteelperíodo detransición,haciaelcomienzodeunanuevagametogénesis,lagónadapresente todavíafolículosconovocitosmadurosnoatrésicos,yporlotanto,concapacidadde serexpulsados.   FIGURA3.16:DosfotografíaspertenecientesalmismoindividuohembradeV. pullastra.Izquierda folículosenmadurezypuesta,derechafolículosenrenovacióngonadal. Barrasdeescala100µm. 3.Cicloreproductivo 58 3.3.3.2POBLACIÓNDECAMARIÑAS  Siguiendolaescaladescritaanteriormente,enlasfiguras3.17y3.18se representaelporcentajedeindividuosqueseencuentranmensualmenteencada estadio.  FIGURA3.17:CiclogametogénicodelapoblacióndeCamariñasdeV.pullastradurantelosmesesde estudio.Individuosmacho.  FIGURA3.18:CiclogametogénicodelapoblacióndeCamariñasdeV.pullastradurantelosmesesde estudio.Individuoshembra. nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 E1 E2 E3 E4 fecha 0% 20% 40% 60% 80% 100% nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 E1 E2 E3 E4 fecha 0% 20% 40% 60% 80% 100% Resultados 59 Enestapoblación,duranteelotoñoencontramoslamayoríadelosindividuos enelestadioE4derenovacióngonadalyenelestadioE1deiniciodela gametogénesis.Amedidaquesevaacercandoelinviernodesaparecenlosindividuos enestadioE4,yaunquetodavíaseobservanindividuosenestadioE1yalgunosyaen estadioE3demadurezypuesta,lamayoríadelosindividuosseencuentranenestadio E2degametogénesisavanzada.  EnCamariñasdurantelaprimaverayverano(desdemarzoaseptiembre),nose observanindividuosengametogénesisylamayoríadelapoblaciónseencuentraen estadioE3demadurezypuesta.Duranteestosmesesseobservanalgunosindividuos delapoblaciónenestadioE4derenovacióngonadal.  Elamplioperíododemadurezypuestaquepresentaestapoblaciónsedebea que,enlosfolículosgonadalesseobservannuevasgoniasquedaránorigen,deforma continuada,anuevosespermatozoidesenelcasodelosmachos,yovocitos previtelogénicosypedunculadosenelcasodelashembras.Duranteesteperíodono seobservancélulasvesicularesenlosfolículos,porloquelaproduccióndenuevos gametossedeberealizaraexpensasdelosnutrientesreciénasimilados,yquedurante laprimaverayveranosonabundantesenelmediomarino.  Amedidaqueempiezanadisminuirelnúmerodeindividuosenmadurez, aumentanlosestadiosderenovacióngonadaleiniciodelagametogénesis.Ambos estadiossecaracterizanporlaabundanciadecélulasvesicularesycomosevereflejada enlacomposiciónbioquímica(semuestraenapartadosposteriores),coincideconlos mayorescontenidosdeglucógenoylípidosengónada.Estosnutrientes,acumulados duranteelveranoyelotoño,proporcionanlaenergíanecesariaparalaformaciónde gametosduranteelinvierno.  Aunqueseharealizadoelestudiogametogénicodemachosyhembras separadamente,seobservaquelaevolucióndelcicloesigualenambossexos.   3.Cicloreproductivo 60 3.3.3.3POBLACIÓNDEOGROVESUBMAREAL  Enlasfigura3.19y3.20semuestranlosdatosobtenidostraslaasignaciónde unestadioacadaunodelosindividuosdelapoblacióndeOGrovesubmareal.  FIGURA3.19:CiclogametogénicodelapoblacióndeOGrovesubmarealdeV.pullastradurantelos mesesdeestudio.Individuosmacho.    FIGURA3.20:CiclogametogénicodelapoblacióndeOGrovesubmarealdeV.pullastradurantelos mesesdeestudio.Individuoshembra.    nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 may‐05 abr‐05 0% 20% 40% 60% 80% 100% E1 E2 E3 E4 fecha nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 may‐05 abr‐05 0% 20% 40% 60% 80% 100% E1 E2 E3 E4 fecha Resultados 61 AdiferenciadelapoblacióndeCamariñas,enlapoblacióndeOGrove submarealseencuentramayorheterogeneidaddeestadiosenunmismomuestreo. MientrasqueenlapoblacióndeCamariñaslagametogénesis(estadioE1yE2)se observabasóloenotoñoeinvierno,enOGrovesubmareal,duranteelveranoya principiosdelaprimavera,encontramosindividuosenestosestadios.  Además,seobservaqueduranteelotoñoyelinviernoseencuentramayor númerodeindividuosenestadioE4(renovacióngonadal)yE3(madurezypuesta)que enlapoblacióndeCamariñas.  Aunqueseobservandiferenciasenlosporcentajesdeindividuosencada estadioalolargodelaño,laevolucióndelcicloessimilaralapoblacióndeCamariñas. Apartirdelveranodisminuyeelnúmerodeindividuosmadurosycomienzaunnuevo ciclodegametogénesis,aumentandoelporcentajedeindividuosenlosestadiosE4y E1.Eldesarrollodelagametogénesisavanzadurantelosmesesdeotoñoeinvierno hastaelmesdeabril,dondeseobservanlamayoríadelosindividuosenmadurez.  Enambossexosseencuentraheterogeneidaddeestadiosalolargodelaño, siendolaevolucióndelciclosimilarenmachosyhembras.  3.3.3.4POBLACIÓNDEOGROVEINTERMAREAL  EnlapoblaciónintermarealdeOGroveseencuentrandiferenciasconrespecto alapoblaciónsubmareal,puestoqueenlaprimeraseencuentramenorproporciónde individuosenmadurezalolargodelaño.  Enlasfiguras3.21y3.22seobservalaevolucióndelosestadiosenlos ejemplaresdeOGroveintermareal.   3.Cicloreproductivo 62  FIGURA3.21:CiclogametogénicodeV.pullastraenlapoblacióndeOGroveintermareal. Individuosmacho.   FIGURA3.22:CiclogametogénicodeV.pullastraenlapoblacióndeOGroveintermareal. Individuoshembra.  DuranteelotoñoyelinviernolamayoríadelapoblaciónintermarealdeO Groveseencuentraengametogénesis(estadiosE1yE2),observandopocosindividuos enE3yE4(madurezyrenovacióngonadal).Durantelaprimaverasecontinúa observandoquelamitaddelapoblaciónsigueengametogénesis,perolaotramitadse encuentrayaenmadurezyrenovacióngonadal. nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 may‐05 abr‐05 0% 20% 40% 60% 80% 100% E1 E2 E3 E4 fecha nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 may‐05 abr‐05 0% 20% 40% 60% 80% 100% E1 E2 E3 E4 fecha Resultados 63 Entrelosmesesdemayoyagostoseobservaelmayorporcentajedeindividuos enmadurezenestapoblación.Apartirdeestemomentolapoblacióncomienzaun nuevociclodegametogénesis.  Enambossexosenlapoblaciónintermarealseobservamayorporcentajede individuosenestadioE1yE2alolargodelañoqueenlapoblacióndeOGrove submareal.TambiéndentrodeOGroveintermareal,duranteelotoñoseencuentra mayorporcentajedeindividuoseniniciodelagametogénesis(E1)enlashembrasque enlosmachos.  3.3.3.5SEX‐RATIO  Enlasiguientetablasemuestraelnúmerodeindividuosmacho,hembrae indiferenciadosencontradosenlastrespoblacionesdurantetodoslosmuestreos.  TABLAIII.4:Númeroyporcentajedeindividuosmacho,hembraeindeterminadosenlastres poblacionesdeV.pullastraestudiadas.  EnlapoblacióndeCamariñasseencontróunaproporciónmachos:hembrasde 1,15:1;nodesviándosesignificativamentedeunaproporción1:1(χ2=2,55;g.l.=1; p>0,05).EnOGrovesubmareallaproporciónfuede1,14:1;nodesviándosetampoco deunaproporción1:1(χ2=2,83;g.l.=1;p>0,05).EnlapoblacióndeOGroveintermareal seencontróunarelaciónmachos:hembrasde1,29:1;desviándosesignificativamente deunaproporción1:1(χ2=11,83;g.l.=1;p=0,001),encontrandomásmachosque hembras.    MachosHembrasIndeterminadosTotal Camariñas258(53,2%)223(46%)4(0,8%)485 OGrovesubmareal333(53,2%)291(46,5%)2(0,3%)626 OGroveintermareal412(55,9%)319(43,3%)6(0,8%)737 3.Cicloreproductivo 64 3.3.4COMPOSICIÓNBIOQUÍMICA  Semuestranacontinuaciónlosdatosobtenidostraselanálisisdelcontenidoen glucógeno,proteínasylípidos(enmg/gpesoseco).Seanalizó(porseparadomachosy hembras)lagónadayelrestodelindividuo,esdecir,laviandamenoslagónada.Enlas gráficasseomitenlosdatosdedesviaciónestándarparahacerlasmáslegibles,yaque enningúncasoladesviaciónsuperael10%delamedia.  3.3.4.1GLUCÓGENO  Enlafigura3.23serepresentalaevolucióndelglucógenoalolargodelaño.En lastrespoblacioneslacantidaddeglucógenoengónadadisminuyeprogresivamentea partirdelosmesesdenoviembreydiciembrede2003.Enelmesdeabrilseencuentra elmínimodeglucógenoenlaspoblacionesdeCamariñasyOGrovesubmareal.EnO Groveintermarealsellegaalmínimoenelmesdeeneroysemantienehastaelmesde abril.  Losvaloresmínimosdeglucógenocoincidenconelmomentoenelqueenlas trespoblacionesseencuentramayorporcentajedeindividuosenmadurezypuesta.A partirdelmesdeabrilcomienzanaaparecerindividuosenestadioE4derenovación gonadal,estadiodeformacióndenuevascélulasvesiculares,coincidiendoconun incrementodeglucógenoengónada.  Losvaloresdelcontenidodeglucógenoengónadaaumentandurantela primaveraparaalcanzarelmáximodurantelosmesesdeoctubreynoviembre.Esen estemomentocuandoseencuentramayornúmerodeindividuosenestadioE4de renovacióngonadalyE1deiniciodelagametogénesis,enambosestadiospredominan lascélulasvesicularesdentrodelosfolículos.Amedidaqueavanzalagametogénesis sevaconsumiendoelglucógenoylacantidaddeglucógenoengónadavuelvea decrecerhastaencontrardenuevolosmínimosvaloresapartirdelmesdemarzo.   Resultados 65  FIGURA3.23:Variacióndelglucógeno(mgglucógeno/gpesoseco)enV.pullastraenlastres poblacionesdeestudio. 0 50 100 150 200 250 300 350 400 nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 mgglucógeno/gpesoseco fecha Camariñas gónadafemenina gónadamasculina viandamenosgónadafemenina viandamenosgónadamasculina 0 50 100 150 200 250 300 350 400 nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 may‐05 mgglucógeno/gpesoseco fecha OGrovesubmareal gónadafemenina gónadamasculina viandamenosgónadafemenina viandamenosgónadamasculina 0 50 100 150 200 250 300 350 400 nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 may‐05 mgglucógeno/gpesoseco fecha OGroveintermareal gónadafemenina gónadamasculina viandamenosgónadafemenina viandamenosgónadamasculina 3.Cicloreproductivo 72 0 50 100 150 200 otoño invierno primavera verano mglípidosenvíscera/gpesoseco Camariñas OGrovesubmareal OGroveintermareal Encuantoalavariacióndeloslípidostotalesenelrestodelindividuo,éstosno presentanningunatendenciaadiferenciadelagónada.Losvaloresoscilanentrelos50 y100mg/gpesoseco,sindiferenciaentresexos.Elcontenidodelípidosengónadaes superioraladelrestodelindividuo,variandoentre70y220mg/gpesoseco.  Enlafigura3.28secomparanestadísticamentelosvaloresagrupadospor estacionesdelacantidaddelípidosengónadayenvísceraenlastrespoblaciones.             0 50 100 150 200 otoño invierno primavera verano mglípidosengónada/gpesoseco Camariñas OGrovesubmareal OGroveintermareal b b a a a a a a a aa b b ab bb aa aa bb bb FIGURA3.28:Cantidaddelípidosengónada(arriba)yenvíscera(abajo)enmg/gpesosecoenlastres poblacionesestudiadasdeV.pullastra.Diferentesletrasrepresentandiferenciassignificativasentre losvaloresenlamismaestación. Resultados 73 Lastrespoblacionesacumulanigualcantidaddelípidosengónadaduranteel veranoyelotoño.Eninvierno,enOGroveintermareal,seacumulasignificativamente menorcantidaddelípidosqueenlasotrasdospoblaciones.Enprimaverahaymayor cantidaddelípidosengónadaenOGrovesubmarealqueenlasotrasdospoblaciones.  Enelrestodelindividuoseacumulasignificativamentemayorcantidadde lípidosenlapoblaciónsubmarealdeOGrovedurantelosmesesdeotoño,inviernoy primaveraconrespectoalasotraspoblaciones.Enveranotambiénacumulamás cantidadquelapoblacióndeCamariñas,aunquenosediferenciasignificativamente conOGroveintermareal. 3.3.5EVOLUCIÓNDELACOMPOSICIÓNBIOQUÍMICAENRELACIÓNCONELCICLO GAMETOGÉNICO  Acontinuaciónsepresentanlosdatosanteriormenteexpuestospero resumidos.Semuestraencadapoblaciónlosdatosconjuntosdelciclogametogénico demachosyhembras;asícomolosdatosdelcontenidobioquímicoengónadaeÍndice deCondicióngonadal.  EnlapoblacióndeCamariñas(Figura3.29),seobservadurantelosmesesde primaveraunadisminucióndrásticaenlacantidaddeglucógenoylípidosengónada, coincidiendoconlaépocaenlacualencontramosunnúmeromáximodeindividuosen estadiodemadurezypuesta,yasuvezelmínimoenelÍndicedeCondicióngonadal. Durantelosmesesdeotoñolosvaloresdeglucógenoylípidosengónadavuelvena aumentarcoincidiendoconlaaparicióndeindividuosenrenovacióngonadalcon formacióndenuevascélulasvesiculares. 3.Cicloreproductivo 74 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jul‐04 ago‐04 sep‐04 oct‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 abr‐05 Proteínas,GlucógenoyLípidos(mg/g) %E4 %E3 %E2 %E1 Glucógeno Lípidos Proteínas   Enlasfiguras3.30y3.31semuestranlasgráficascorrespondientesalas poblacionessubmarealeintermarealdeOGrove.   0 1 2 3 4 5 6 I.C.G I.C.G. 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 may‐05 Proteínas,GlucógenoyLípidos(mg/g) %E4 %E3 %E2 %E1 Glucógeno Lípidos Proteínas 0 1 2 3 4 5 6 I.C.G I.C.G. FIGURA3.29:Representaciónsimplificadadelciclogametogénico,delÍndicedeCondicióngonadal (I.C.G.)en%,ydelacantidaddeglucógeno,proteínasylípidostotalesenmg/gpesoseco. PoblacióndeCamariñas. FIGURA3.30:Representaciónsimplificadadelciclogametogénico,delÍndicedeCondicióngonadal (I.C.G.)en%,ydelacantidaddeglucógeno,proteínasylípidostotalesenmg/gpesoseco. PoblacióndeOGrovesubmareal. Resultados 75 Aunqueenlastrespoblacionessehaobservadounpatróndedesarrollo gonadalmuysimilar,seobservaenlasdospoblacionesdeOGrovemayor heterogeneidaddeestadiosdentrodeunmismomuestreo.Enlapoblaciónde Camariñas,entrelosmesesdeabrilyagosto,latotalidaddelapoblaciónseencuentra enestadioE3(madurezypuesta)yE4(renovacióngonadal),observandolaépocade gametogénesis(E1yE2)enlosmesesdeseptiembreamarzo.Sinembargo,enlasdos poblacionesdeOGrovelaépocadegametogénesis,estadioE1(iniciodela gametogénesis)yE2(gametogénesisavanzada),seprolongadurantemásmesesenel año.Debidoaesto,losvaloresdeglucógeno,lípidosyproteínasengónada,no alcanzanvalorestanaltoscomoenlapoblacióndeCamariñas.  DentrodelasdospoblacionesdeOGrove,enlaintermarealencontramosmás individuosengametogénesisymenosenmadurezypuestaconrespectoalapoblación submareal.   FIGURA3.31:Representaciónsimplificadadelciclogametogénico,delÍndicedeCondicióngonadal (I.C.G.)en%,ydelacantidaddeglucógeno,proteínasylípidostotalesenmg/gpesoseco. PoblacióndeOGroveintermareal.    0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 nov‐03 dic‐03 ene‐04 feb‐04 mar‐04 abr‐04 may‐04 jun‐04 jul‐04 ago‐04 oct‐04 nov‐04 dic‐04 ene‐05 feb‐05 mar‐05 abr‐05 may‐05 Proteínas,GlucógenoyLípidos(mg/g) %E4 %E3 %E2 %E1 Glucógeno Lípidos Proteínas 0 1 2 3 4 5 6 I.C.G I.C.G. 3.Cicloreproductivo 76 FIGURA3.33:AnálisisdeComponentesPrincipalesenlapoblacióndeOGrovesubmareal.ICG: ÍndicedeCondicióngonadal;ICV:ÍndicedeCondiciónvisceral;GlucGon:glucógenoenlagónada; GlucVisc:glucógenoenlavíscera;PrGon:proteínasenlagónada;PrVisc:proteínasenlavíscera; LipGon:lípidosenlagónada;LipVisc:lípidosenlavíscera;E1:iniciodelagametogénesis;E2: gametogénesisavanzada;E3:madurezypuesta;E4:renovacióngonadal.  SerealizóunAnálisisdeComponentesPrincipalesparadiscriminarlas tendenciasdelacomposiciónbioquímicaconrespectoalosestadiosgametogénicosy alosÍndicesdeCondicióngonadalyvisceraldeacuerdoconlosejesprincipales.Enlas figuras3.32,3.33y3.34serepresentanlosresultados.                      FIGURA3.32:AnálisisdeComponentesPrincipalesenlapoblacióndeCamariñas.ICG:Índicede Condicióngonadal;ICV:ÍndicedeCondiciónvisceral;GlucGon:glucógenoenlagónada;GlucVisc: glucógenoenlavíscera;PrGon:proteínasenlagónada;PrVisc:proteínasenlavíscera;LipGon: lípidosenlagónada;LipVisc:lípidosenlavíscera;E1:iniciodelagametogénesis;E2:gametogénesis avanzada;E3:madurezypuesta;E4:renovacióngonadal. Resultados 77  Delanálisisdelosresultadosenlastrespoblacionessededucequeambos ÍndicesdeCondición,lacantidaddeglucógenoengónadayenvíscera,lacantidadde lípidosengónada,elporcentajedeindividuosenestadioE1deiniciodela gametogénesisyelporcentajeenE4derenovacióngonadal,tieneuncomportamiento similarencuantoasuvariacióntemporal,indicandoquesiguenelmismopatrónde evoluciónalolargodelaño.  Porotrolado,lacantidaddeproteínasengónadapresentalamismaevolución temporalqueelporcentajedeindividuosenestadioE3demadurezypuesta, siguiendoambosvaloresunaevolucióntemporalsimilarenlastrespoblaciones.  Lacantidaddeproteínasydelípidosenvísceranotieneuncomportamiento similarencuantoasuvariacióntemporalyaladelrestodecomponentes,loque indicaríaquesuvariaciónnoestaríarelacionadaconlaevolucióndelciclo gametogénico.  FIGURA3.34:AnálisisdeComponentesPrincipales.PoblacióndeOGroveintermareal.ICG:Índice deCondicióngonadal;ICV:ÍndicedeCondiciónvisceral;GlucGon:glucógenoenlagónada;GlucVisc: glucógenoenlavíscera;PrGon:proteínasenlagónada;PrVisc:proteínasenlavíscera;LipGon: lípidosenlagónada;LipVisc:lípidosenlavíscera;E1:iniciodelagametogénesis;E2:gametogénesis avanzada;E3:madurezypuesta;E4:renovacióngonadal. 3.Cicloreproductivo 78 Serealizóunestudiodecorrelaciónentrelosdistintoscomponentes bioquímicosylosestadiosgametogénicosenlastrespoblaciones(TablasIII.5,III.6y III.7).Enlastrespoblacionesseobservaquelacantidaddeglucógenoylípidosen gónadaestápositivamentecorrelacionada,al99%deconfianza,conlaaparicióndelos estadiosE4derenovacióngonadalyE1deiniciodelagametogénesis.Asuvez,el glucógenogonadalestánegativamentecorrelacionado(al99%deconfianza)conla cantidaddeproteínasengónadayconelestadioE3demaduracióngonadal.  Encuantoalcontenidobioquímicoenlavíscera,delostrescomponentes,sólo elglucógenotieneigualcomportamientoqueengónada,porloqueparecequesu evoluciónpodríaestarrelacionadoconelciclogametogénico.Seobservaqueamayor cantidaddeglucógenoenvíscera,haymayorcantidaddeglucógenoylípidos,ymenor cantidaddeproteínasengónada.Asímismo,lacantidaddeglucógenoenvísceraestá relacionadoconelestadiogametogénicoal99%deconfianza,siendomásabundante duranteelestadioE4ymenosduranteelE3.  TABLAIII.5:Coeficientedecorrelaciónentrelosdistintoscomponentesbioquímicosylosestadios gametogénicosenlapoblacióndeCamariñas.ICG:ÍndicedeCondicióngonadal;ICV:ÍndicedeCondición visceral;GlucGon:glucógenoenlagónada;GlucVisc:glucógenoenlavíscera;PrGon:proteínasenla gónada;Prvisc:proteínasenlavíscera;LipGon:lípidosenlagónada;LipVisc:lípidosenlavíscera. Negrita:correlaciónsignificativa,*al95%deconfianza,**al99%deconfianza.  ICGICVGlucGonGlucVisc PrGonPrViscLipGonLipViscE1E2E3E4 ICG‐ 0,801**0,669**0,808** ‐0,437** ‐0,416**0,517**‐0,1110,329**0,041‐0,346**0,259* ICV‐ ‐ 0,757**0,858**‐0,516**‐0,336**0,527**‐0,0850,669**0,227*‐0,650**0,295** GlucGon‐ ‐ ‐ 0,871** ‐0,516** ‐0,247*0,609** ‐0,337**0,607**0,133‐0,611**0,440** GlucVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,547**‐0,326**0,650**‐0,290**0,607**0,042‐0,571**0,498** PrGon‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,004‐0,576**0,272* ‐0,591** ‐0,287**0,586**‐0,172 PrVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,1150,0660,026‐0,298**0,202*0,005 LipGon‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,1040,413**0,337** ‐0,515**0,101 LipVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,303**0,0420,128‐0,085 E1‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,203* ‐0,768**0,342** E2‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,642**‐0,476** E3‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,277* E4‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ Resultados 79 TABLAIII.6:Coeficientedecorrelaciónentrelosdistintoscomponentesbioquímicosylosestadios gametogénicosenlapoblacióndeOGrovesubmareal.ICG:ÍndicedeCondicióngonadal;ICV:Índicede Condiciónvisceral;GlucGon:glucógenoenlagónada;GlucVisc:glucógenoenlavíscera;PrGon: proteínasenlagónada;Prvisc:proteínasenlavíscera;LipGon:lípidosenlagónada;LipVisc:lípidosenla víscera.Negrita:correlaciónsignificativa,*al95%deconfianza,**al99%deconfianza.    TABLAIII.7:Coeficientedecorrelaciónentrelosdistintoscomponentesbioquímicosylosestadios gametogénicosenlapoblacióndeOGroveintermareal.ICG:ÍndicedeCondicióngonadal;ICV:Índicede Condiciónvisceral;GlucGon:glucógenoenlagónada;GlucVisc:glucógenoenlavíscera;PrGon: proteínasenlagónada;Prvisc:proteínasenlavíscera;LipGon:lípidosenlagónada;LipVisc:lípidosenla víscera.Negrita:correlaciónsignificativa,*al95%deconfianza,**al99%deconfianza.  ICGICVGlucGonGlucViscPrGonPrViscLipGonLipViscE1E2E3E4 ICG‐ 0,837**0,462**0,367**‐0,1700,0510,261**0,079 ‐0,067‐0,313**0,0260,471** ICV‐ ‐ 0,586**0,561**‐0,305**0,0100,315**0,020‐0,065‐0,208*‐0,1090,573** GlucGon‐ ‐ ‐ 0,688** ‐0,786**0,392**0486**0,0620,565** ‐0,147* ‐0,624**0,812** GlucVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,543**0,438**0,280**‐0,1290,182‐0,061‐0,342**0,539** PrGon‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,345** ‐0,376**0,104‐0,633**0,0770,623** ‐0,620** PrVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,220*‐0,0080,186*0,040‐0,296**0,230* LipGon‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,318**0,381** ‐0,269** ‐0,372**0,549** LipVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,000‐0,142‐0,1210,349** E1‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,202* ‐0,650**0,473** E2‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,423**‐0,332** E3‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,554** E4‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ICGICVGlucGonGlucViscPrGonPrViscLipGonLipViscE1E2E3E4 ICG‐ 0,821**0,562**0,561** ‐0,357** ‐0,1100,354**0,0780,104‐0,470**0,1170,386** ICV‐ ‐ 0,503**0,537**‐0,353**‐0,0970,228*0,1330,164‐0,610**0,0660,579** GlucGon‐ ‐ ‐ 0,910** ‐0,826** ‐0,285**0,735**‐0,0300,695** ‐0,285** ‐0,564**0,164 GlucVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,705**‐0,269**0,659**0,0210,600**‐0,284**‐0,515**0,256* PrGon‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,353** ‐0,555**0,103‐0,616**0,1870,497**‐0,042 PrVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,0400,027‐0,275**0,320**0,112‐0,194* LipGon‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,1400,410**‐0,001‐0,411**‐0,035 LipVisc‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,267**‐0,1490,238*0,291** E1‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,219* ‐0,768**‐0,144 E2‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐0,303**‐0,671** E3‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,177 E4‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 3.Cicloreproductivo 80 Laevolucióndelasproteínasyloslípidosenlavísceraparecequenoestá relacionadoconelavancedelciclogametogénico,puestoquelastrespoblaciones muestrancomportamientosdistintos,sinrelaciónconlaevolucióndelosmismosen gónada.  EnlatablaIII.8semuestraunamediadelosdatosdecomposiciónbioquímica deV.pullastraalolargodelaño.Engeneral,enlastrespoblacioneselcomponente mayoritariodelagónadasonlasproteínas,encontrándosevaloresentreun25% duranteelotoñoyun45%durantelaprimavera.Elsiguientecomponentemayoritario eselglucógeno,queenépocasdeacumulaciónllegaaconstituirhastael30%dela gónada,mientrasquedespuésdesuutilizaciónparalaformacióndegametostansólo representael5%.Porúltimo,loslípidosensuépocademáximaacumulaciónno superanel15%delcontenidoenpesosecodelagónada.  Enelrestodelindividuolasproteínassontambiénelcomponentemayoritario, representandoentreel40yel55%delpesosecodelavíscera.Loslípidosyel glucógenonosobrepasancadaunoel10%delpesosecodelavíscera.  TABLAIII.8:Componentesmayoritarios(enporcentaje)delagónadaylavísceradeV.pullastra. PROTEÍNAS GLUCÓGENO LÍPIDOS GÓNADA25‐45 5‐30 5‐15 VÍSCERA40‐55 5‐10 5‐10 TOTAL40‐50 5‐20 5‐10       Resultados 81 3.3.6PARASITOLOGÍADELASPOBLACIONESDEESTUDIO  Traslaobservaciónalmicroscopioópticodelaspreparacioneshistológicas realizadasparaelestudioparasitológico,sedetectaronlosparásitosyalteraciones patológicasquesedescribenacontinuación:  BACTERIAS:  Coloniasintracelularesdetiporicketsiano(Figuras3.35.1y3.35.2): Coloniasbasófilasintracelulares,tamaño2‐7µm,aparecenenlascélulas epitelialesdelasbranquiasytúbulosdigestivos.   Quistesbacterianos: Coloniasextracelulares,100‐200µmdetamaño,rodeadasporunacubierta fibrosa,selocalizanenlabasedelepiteliobranquialytejidoconjuntivo.  PROTISTAS:  Ciliados(Figuras3.35.3,3.35.4,3.35.5y3.35.6): Seencuentranprincipalmenteenbranquiasycavidadpaleal,aunquetambién enellumenintestinal.Presentanunmacronúcleoyunmicronúcleo.Dentrodelos ciliadosobservadosseencuentranindividuosdelgéneroTrichodinasp.yRynchodida sp.   Gregarinanoidentificada(Figura3.36.7): Localizadaenelepiteliointestinalyconjuntivoadyacente.   Coccidios(Figura3.36.8): Seencuentranenelriñón,puedenaparecerendiversasfases:microgamontes, macrogamontes,esporoquistes,etc.   MicrosporidiotipoSteinhausia(Figura3.36.9): Seencuentraenformadequistesconesporasdentrodelosovocitos. 3.Cicloreproductivo 88 Seobservarontambiéntrematodosenlafasedecercariasymetacercarias.En elcasodelascercarias,losesporoquistesllegabanaocuparlatotalidaddelagónada provocandolacastración;mientrasquelasmetacercariasaparecíanenquistadasenel pie,mantoopalposlabiales,conunaligerareacciónhemocitaria.Estasdosfases aparecieronconmayorfrecuenciaenCamariñas,enOGrovesubmareallaprevalencia fueligerayocasional.EnlapoblaciónintermarealdeOGrovedestacalaapariciónde metacercariasenquistadasentrelosplieguesdeformacióndelaconchaenelreborde delmanto.  ElturbelarioParavortexsp.fuedetectadoenlastrespoblaciones,mientrasque Urastomasp.sóloaparecióendosdeellas. Discusión 89 3.4DISCUSIÓN  LaalmejababosaVenerupispullastraposeeunperíodomuydilatadode madurezypuesta,abarcandoprincipalmentelosmesesdesdefebreroajulio,y observándoseenlosmesesdeabril‐mayounpicodemáximapuesta.Enestosmeses escuandoempiezaaaumentarlatemperaturadelaguayhaymayordisponibilidadde alimento,porloqueesteperíododepuestapodríaserunaestrategiaparamaximizar elcrecimientodelarvasysemillaenprimavera‐verano(Holland,1978).  Seobservaqueduranteelperíododemadurezypuesta,losfolículosgonadales presentanabundantesgametosmadurosyasuvezespaciosvacíosdegametosya expulsados,peroademás,enlasparedesdelfolículoaparecennuevaslíneas germinalespermitiendoqueesteperíodoseprolonguedurantemesesenestaespecie. EstasimultaneidaddeprocesostambiénlaencontraronRodríguezMoscoso(2000)y Ojeaetal.(2002)enRuditapesdecussatus.  OtradelascaracterísticasdelcicloreproductivodeV.pullastra,adiferenciade otrosvenéridoscomolaalmejafinaR.decussatus(Ojeaetal.,2002)olaalmeja japonesaR.philippinarum(Drummondetal.,2006),esquenoposeeunperíodode reposo;esdecir,cuandolagónadadejadeproducirgametossecomienzanaformar célulasvesicularesparacomenzarunnuevociclodegametogénesis.Desdeeste estadioE4derenovacióngonadal,congametosresidualesycélulasvesiculares,se pasaalestadioE1deiniciodelagametogénesis,donde,ademásdelascélulas vesiculares,seobservannuevaslíneasgerminales.  Lainexistenciadeunestadioderepososeconfirmasitenemosencuentaque delas1.633preparacioneshistológicasexaminadasenesteestudio,sólo12se correspondíanconindividuosindeterminados.Estosindividuospresentabaneltejido foliculartotalmentedesarrolladoyrepletodecélulasvesiculares,perolaausenciade gametosimpidióladiferenciaciónsexualdeestosindividuos.EnestaespecieÁlvarez 3.Cicloreproductivo 90 Fariña(2005),afirmabaqueelestadio0comotaleraescaso,debidoalarápida colonizacióndeltejidodereservaporprotogonias.  EsfrecuentequeduranteelestadioE4derenovacióngonadalseobserve asincroníafolicular,observándosefolículosendiferentesestadiosdentrodeun mismoindividuo.Esteestadioapareceprincipalmenteduranteelperíodoverano‐ otoño,épocadetransiciónentrelamadurezycomienzodeunnuevociclode gametogénesis.Enestaépocaencontramosfolículosenmadurez,folículosque empiezanaformarcélulasvesiculares,einclusoalgúnfolículoenreabsorción.  Enunestudiorealizadoenestamismaespecie,Villalbaetal.(1993a) detectarondesarrollosincrónicoentodoslosfolículosenlosindividuosmacho, mientrasqueenlashembras,engeneral,observaronfolículosendistintoestadio gametogénico.Enelpresenteestudio,losindividuosconasincroníafolicular,se clasificaronsegúnelestadiopredominanteenlagónada.  Esdedestacarqueenlastrespoblacionessehaobservadounpatrónde desarrollogonadalmuysimilar,aunqueenlasdospoblacionesdeOGrovehaymayor heterogeneidaddeestadiosenlosdistintosmuestreos,yaquealolargodelaño encontramosindividuosentodoslosestadios.Porelcontrario,enlapoblaciónde Camariñas,entrelosmesesdeabrilyagosto,latotalidaddelapoblaciónseencuentra enestadioE3(madurezypuesta)yE4(renovacióngonadal),quedandolaépocade gametogénesisactivarestringidaalosmesesdeseptiembreamarzo.ÁlvarezFariña (2005),enunapoblacióndeAIlladeArousa(SOdeGalicia)tambiénencontró heterogeneidaddeestadiosenlosdistintosmuestreos.  Estehechoprobablementeesdebidoaqueseanpoblacionessometidasa distintosfactoresambientales,yaunqueelciclogametogénicoescaracterísticodela especie,lascondicionesambientaleslomodifican;latemperaturayladisponibilidad dealimentodeunapoblaciónsondosfactoresexógenosquecondicionanlosprocesos reproductivos(MacArthuryWilson,1967;Thompsonetal.,1974;Lubet,1986yLe Pennecetal.,1991). Discusión 91 Elamplioperíododemadurezypuesta,laausenciadereposo,laasincronía folicularylaheterogeneidaddeestadiosdentrodeunmismomuestreopermiten,que laalmejababosapresentegametosmadurosdurantetodoelañoconposibilidadde serexpulsadosydegenerarnuevosreclutamientos.  Estapresenciacontinuadadeovocitosmaduros,yafueconfirmadaenel trabajodePérezCamacho(1980)conlatécnicadefrotis,apuntandoqueenesta especieencontrabaalmenosun80%delashembrasconovocitosmadurosdurante todoelaño.Villalbaetal.(1993a),tambiéndetectaronhembrasconfolículosmaduros alolargodetodoelaño.  Alestudiarlaspreparacioneshistológicasdeestetrabajo,seobservaquelas célulasvesicularescomienzanaaparecerduranteelestadioE4derenovacióngonadal, ocupancasilatotalidaddelagónadaenelestadioE1deiniciodelagametogénesis, comienzanadesaparecerenelE2degametogénesisactivaysoninexistentesenel estadioE3demadurezypuesta.Durantelosmesesdeprimaveraseobservauna disminucióndrásticaenlacantidaddeglucógenoylípidosengónada,coincidiendocon laépocaenlacualencontramosunnúmeromáximodeindividuosenestadioE3 (cuandonoseobservancélulasvesiculares).Durantelosmesesdeotoño,losvalores deglucógenoylípidosengónadavuelvenaaumentarcoincidiendoconlaapariciónde individuosengametogénesisy,porlotanto,decélulasvesicularesenlosfolículos gonadales.Conesteestudiosepuedededucirquelascélulasvesiculares, característicasdelaalmejababosa,tienenlacapacidaddeacumularglucógenoy lípidosparaserutilizadosprincipalmenteenlagametogénesis.ÁlvarezFariña(2005) enuntrabajorealizadomediantehistoquímica,observóqueenestaespecielascélulas vesicularestienenlacapacidaddeacumularglucógenoylípidosneutros.  Enlafigura3.38serepresentaunesquemaconlaevolucióngeneraldelciclo gonadaldelaalmejababosaalolargodelaño.     FIGURA3.38: RepresentaciónesquemáticadelciclogametogénicodeV. pullastra alolargodelaño. 3.Cicloreproductivo 92 Discusión 93 Seharealizadoelestudiodelciclogametogénicoseparandoambossexosyen estaespecienoseobservóasincroníatemporalentremachosyhembras.Maiaetal. (2006)enunestudiorealizadoenPortugaltambiénencontraronsincronismode maduraciónentremachosyhembras;sinembargo,Villalbaetal.(1993a),enunbanco deOGrovesíencontraronasincroníaenestamismaespecie.  DentrodelasdospoblacionesdeOGrove,enladelbancointermarealel númerodeindividuosenmadurezdurantetodoelaño,esmenorqueenlapoblación submareal,siendotambiénlosÍndicesdeCondiciónsignificativamenteinferioresenla poblaciónintermareal.Estopuedeserdebidoaqueéstaseencuentrasiempre sumergidayporlotanto,ladisponibilidaddealimentoesmásconstantequeenla poblaciónintermareal.Asuvez,lapoblacióndelbancointermarealestásometidaa períodosdedesecaciónyafactoresambientalescomolabajadadesalinidadpor lluviasolasubidadelastemperaturasduranteelperíododeverano.  WalkeryHefferman(1994),encontrarondiferenciaseneldesarrollogonadal entrealmejas(Mercenariamercenaria)sembradasencuatronivelesmareales distintos,presentandolasdelintermarealmayorporcentajedeindividuos indiferenciadosquelasdelsubmareal.Eversoleetal.(1980)encontraronenM. mercenariamayorÍndicedeCondicióngonadalenlasalmejasprocedentesdelárea submareal.Sinembargo,noestáclarosiestasalmejasrespondenadiferenciasde temperatura,abundanciadefitoplancton,tiempodeexposiciónalalimentooalgún otrofactorfísicocausadoporlaexposiciónalasmareas(Eversole,2001).Enlos trabajosrealizadosporBorrero(1987)yFranz(1996)enelmejillónGeukensiademissa demostraronqueexistíaunretrasotemporalenelciclogametogénicoyuna disminuciónenelcrecimientoenaquellosmejillonessituadosaunnivelintermareal altoencomparaciónconlossituadosenunnivelintermarealbajo.  Lacomposiciónbioquímicadelaalmejababosa,alolargodelciclo gametogénico,varíaprincipalmentedebidoaloscambiosqueseproducenenla gónada.Laevolucióndelacantidaddeproteínasydelípidostotalesenelrestodel individuo,nopresentaningunarelaciónconlaevolucióndelciclogametogénico, 3.Cicloreproductivo 94 manteniéndosemásomenosconstantesalolargodelaño;laevolucióndeestos componentesenlagónadapresentaunavariaciónclaraalolargodelciclo.Encuanto alglucógeno,sepresentaunaevoluciónparalelaenlagónadayenelrestodel individuo.  Enlastrespoblacioneslacantidaddeglucógenoylípidosdisminuye notablementeenaquellosmesesenloscualeslosindividuosestánenlamáxima madurezypuesta.Lavariacióndelasproteínasesinversaaladelrestode componentes,aumentandocuandoéstosdisminuyen.González(1975)enestamisma especie,yaobservabaquehabíaunarelacióninversaentreproteínasyglucógeno, disminuyendolafracciónproteicadesdeunmáximoenprimaveraaunmínimoen otoño,yalcanzandoelglucógenosumáximoenotoñoysumínimoenprimavera.  Estaevolucióndeloscomponentesbioquímicos,enrelaciónconelciclo gametogénico,tambiénsedaenotrasespeciesdebivalvoscomoenlaostraOstrea edulis(Ruiz,1992),laalmejafinaR.decussatus(RodríguezMoscoso,2000)yel longueirónEnsissiliqua(MartínezPatiño,2002).  Enestudiosrealizadosendiferentesmoluscosbivalvossedescribendostipos deestrategias:laoportunistaylaconservadora.Así,enalgunasespecieselperíodode produccióndegametoscoincideconeldemayordisponibilidaddenutrientes,porlo quemuestranunaflexibilidadensuestrategiareproductoraasociadaaunestilode vidaoportunista(MacArthuryWilson,1967yLubet,1986).Enlasespeciesdeestilode vidaconservador,losnutrientessealmacenanendiferentesórganosdelcuerpoyla produccióndegametostienelugardurantelosperíodosdebajaproducciónde nutrientes.Otrasespeciessiguenunaestrategiaintermedia,utilizandolosnutrientes almacenadoscomocomplementodelosrecientementeasimilados,satisfaciéndoseasí losrequerimientosenergéticosdelareproducción(Sastry,1979).  Laalmejababosatienelacapacidaddealmacenarreservasentejidos especializados(célulasvesiculares),queledanciertaindependenciaparaeldesarrollo delagametogénesisconrespectoalascondicionesmedioambientales.Así,acumula Discusión 95 glucógenoylípidosduranteelveranoyotoño(estilodevidaconservador)para comenzarlagametogénesisenelinvierno,permitiéndoleempezaradesovarcuando comienzaaincrementarselatemperaturadelmar.Apartirdelaprimaveraseproduce unaumentoenladisponibilidaddealimentoenelmar,porloqueduranteestaépoca sesiguenproduciendogametos(estilodevidaoportunista).Estolehacetenerventaja competitivafrenteaotrasespecies,siendolainversiónenergéticamáseficienteala horaderepartirelgastoenergéticoentrereproducciónycrecimiento(ÁlvarezFariña, 2005).  EsenlaprimaveradondeseencuentranlosvaloresmásbajosenlosÍndices deCondicióngonadalyvisceralenlastrespoblacionesdeestudio.Estedatocoincide conPérezCamacho(1980),queafirmaqueenesaépocaseobservanmenores contenidosencarneenlaalmejababosa.  Observandolosdatosdelciclogametogénico,lapoblacióndeCamariñas presentabaunamayorsincroníaentrelosindividuos;mientrasqueenlaspoblaciones deOGrovelosestadiosseencuentranmássolapados.Esporelloqueenlaprimera población,laevolucióndeloscomponentesbioquímicosseencuentramásmarcada.Al encontrarmayorproporcióndeindividuosengametogénesisduranteelotoñoen Camariñas,lacantidaddeglucógenoessignificativamentemayorqueenlasotrasdos poblaciones.EnlasdeOGrove,alnohabertantasincroníaentrelosindividuos,la variacióndeloscomponentesbioquímicospresentamásoscilacionesapesardetener lamismaevoluciónqueenCamariñas.  Todoslosparásitosdetectadosenesteestudioyahabíansidodescritosenla almejafina(R.decussatus),babosa(V.pullastra)yrubia(V.rhomboides)deGalicia (Villalbaetal.,1993b;López,1995yOrdásetal.,2001).Sinembargo,nohayestudios sobreelefectoenlareproduccióndeestosparásitosenlaalmejababosadeGalicia.  LosresultadosmuestranqueaexcepcióndePerkinsusolseniylos esporoquistesdetrematodos,elrestodelosparásitosnocausanmayortrastornoen elindividuo,comomuchodesencadenanunareacciónhemocitarialigeraalrededor 3.Cicloreproductivo 96 delparásito.Sinembargo,sehanobservadoinfeccionesgravesporP.olseni,queen algunoscasosllegabaaocuparhastaun50%delagónada.Enelcasodelos esporoquistesconcercariasdetrematodos,éstoslleganainvadirlatotalidaddela gónadaprovocandolacastración.  Estasinfeccionesyasehabíanobservadoenotrasespeciesdebivalvosde Galicia,comoenlaalmejafinaparasitadaporP.olseni(Casas,2001),enlanavajayel berberechoporesporoquistesdetrematodos(Darriba,2001eIglesias,2006).Con relaciónalas3zonasdeestudio,destacalamayorprevalenciadeP.olsenienlazona intermarealdeOGroveconrelaciónalaszonassubmareales,loquepodríaindicaruna influenciadelnivelmarealsobrelapresenciadeesteparásitoenlaalmejababosa.Son necesariosmásestudiosparaconfirmarestosdatos.                              4.CAPÍTULOII: DESARROLLOEMBRIONARIOY LARVARIO 4.Desarrolloembrionarioylarvario 104  4.2.3PROCESADOPARAELMICROSCOPIOELECTRÓNICODETRANSMISIÓN  DesdelaaparicióndelagástrulahastalalarvaDserecogióunamuestracada doshoras,parasuposteriorvisionadoenelmicroscopioelectrónicodetransmisión.  Aligualqueparaelmicroscopioelectrónicodebarrido,lafijacióndelas muestrasserealizóconglutaraldehídoylapostfijacióncontetraóxidodeosmio. Posteriormentesedeshidrataronconlasiguienteescaladeacetonas:   acetonaal50%(1x10min)  acetatodeuranilo1%enacetonaal70%(1x60min)  acetonaal70%(2x15min)  acetonaal80%(2x15min)  acetonaal90%(2x15min)  acetonaal95%(2x15min)  acetonaal100%(2x15min)  Despuésdequelasmuestrasfuerondeshidratadasseimpregnaronenresina Spurr,enneveraa4ºCyrotor:   1Spurr:3acetona(1x2h)  1Spurr:1acetona(1x2h)  3Spurr:1acetona(1x3‐4h)  Posteriormenteseincluyeronenresinatotalatemperaturaambiente:   resinatotal(1x2‐5h)  resinatotal(1x12h)  resinatotal(1x2h)  FinalmenteseincluyeronenresinaSpurr,a60ºCdurante48h. Materialymétodos 105  Parapoderrealizarcortesdelosbloquesserealizóelpiramidadodelbloque conelpiramidotomoLeicaUltratim.Posteriomenteserealizaronsemifinosquese tiñeronconazuldemetilenoyseobservaronconelmicroscopioóptico,para seleccionarlaszonasdeinterés.Serepiramidóelbloqueyserealizaronloscortes ultrafinos,deaproximadamente70‐90nm,conelultramicrotomoLeicaReichert Ultracut.  Paraelcontrastadodelasmuestrasseimpregnaronlosultrafinoscon disolucionesdemetalespesados;seaplicóunadisoluciónacuosadeacetatodeuranilo 2%durante30minyunadisolucióndecitratodeplomodurante10min.  FinalmentelasmuestrasseobservaronconunmicroscopioDualBeamFocused IonBeam(FIB)FEIHelios600NanolabunFIBFEIHeliosparalasmicrofotografíasdelos embrionescompletosyconelmicroscopioelectrónicodetransmisiónJeolJem1010 paralosdetalles.   4.Desarrolloembrionarioylarvario 106  4.3RESULTADOS  4.3.1DESARROLLOEMBRIONARIOYLARVARIO  EnlatablaIV.1semuestraeltiempodeaparicióndecadaunodelosdistintos estadiosembrionariosylarvariosobservadosyelrangodetallasmedioobtenidoen losdoscultivosestudiados.  TABLAIV.1:EstadiosembrionariosylarvariosdeV.pullastra.Tiemposdeaparicióndesdelafertilización yrangodetallasdecadaestadio.  EstadioTiempodesdefertilizaciónTamaño(µm) Huevosinfecundar0h65‐75 Estadiode2células1h30min80‐90 Estadiode4células2h80‐90 Estadiode8células2h30min80‐90 Estadiode16células3h30min80‐90 Estadiode32‐64células4h80‐90 Blástula5h30min80‐90 Gástrula7‐8h80‐90 Trocófora13‐14h80‐90 LarvaD30‐32h100‐105 LarvaUmbonada8‐9días140‐150 LarvaPediveliger16‐18días220‐240 Postlarva21‐22días250‐270      Resultados 107  Elovocitosinfecundaresesférico,marrónyestárecubiertode microvellosidades(Figuras4.1y4.11).Eldiámetrodelosovocitosesdeentre65y75 µm.Losespermatozoidesposeenunacabezaconunos4µmdelargoyunflagelode unas45µmdelongitud(Figura4.9).Lacabezadelespermatozoidepresentaunaforma cilíndricayenlabaseseobservan4mitocondrias(Figura4.10).Alos30minutostrasla fecundaciónapareceelprimercorpúsculopolar.  Elestadiode2célulassealcanza1hy30mintraslafecundación.Presentael corpúsculopolarenelplanodedivisiónyseobservandosblastómerosdesiguales,uno máspequeño(AB)enelpoloanimalyunomásgrande(CD)enelpolovegetal(Figuras 4.2y4.12).  Despuésde2hpost‐fertilizaciónsealcanzaelestadiode4células,con3 blastómerosiguales(A,B,C)enelpoloanimalyunmacrómero(D)enelpolovegetal (Figuras4.3y4.13).Alas2hy30minseobservaelestadiode8célulascon7 micrómerosdispuestosenelpoloanimalsobreunmacrómerolocalizadoenelpolo vegetal(Figuras4.4y4.14).  Lasdivisionessevansucediendoyalas4hdespuésdelafertilización,la mayoríadelosembrionesestánenestadiode32‐64células(Figuras4.6,4.7y4.15).A medidaquevanaumentandolasdivisionesesdifícilprecisarelnúmeroexactode células,tantoalmicroscopioópticocomoalmicroscopioelectrónicodebarrido.Los micrómerosvanrecubriendoelmacrómerohastaquedartotalmenteenvueltopor ellos,dandolugar5h30minpost‐fertilizaciónalablástula(Figuras4.8y4.16).Esel primerestadioembrionariociliadoymóvil.Lamovilidaddelablástulaesreducida, limitándoseamovimientoscircularessindesplazamientolateral.      4.Desarrolloembrionarioylarvario 108   FIGURA4(1‐8):Microfotografíasalmicroscopioóptico deldesarrolloembrionariodeV.pullastra.1: Ovocitosinfecundar.2:Estadiode2células.3:Estadiode4células.4:Estadiode8células.5:Estadiode 16células.6:Estadiode32células.7: Estadiode64células.8: Blástula. Barrasdeescala:20µm. 1 56 34 2 78 Resultados 109   FIGURA4(9‐16):Microfotografíasalmicroscopioelectrónicodebarridodeldesarrolloembrionariode V.pullastra.9:Espermatozoide.10:Detalledelacabezadelespermatozoide,mitocondria(mit).11: Ovocitosinfecundar.12:Estadiode2células(AB,CD),vistalateral.13:Vistalateraldelestadiode4 células(A,B,C,D).14:Estadiode8célulasmostrandoelmacrómero(macr)ylosmicrómeros(micr), vistalateral.15:Estadiode32a64células.16:Blástula.Barrasdeescalafotos11,12,13,14,15y16:20 µm;foto9:10µm;foto10:2µm.  AB CD AC B Dmacr micr 16 13 15 14 10 1112 9 mit 4.Desarrolloembrionarioylarvario 110  Lagastrulaciónocurreporepibolia,enellalosmicrómerossemultiplican rápidamenteysesitúanrodeandoalosmacrómerosquequedanenunaposición interna.Entrelas7y8horasdespuésdelafecundaciónseobservalagástrula,con ciliosdemayorlongitudquelablástula(Figuras4.17,4.18y4.19)yconmayor movilidadqueésta.  Enesteestadioapareceelblastoporo,comoresultadodeunainvaginación,que inicialmenteseobservaenelpolovegetalyquesegúntranscurrelagastrulación,se desplazahacialaparteventraldelafuturalarva.Tambiénapareceotrahendidura, opuestaalblastoporo,correspondientealaglánduladelaconcha,quetieneuna formamásalargada(Figuras4.20y4.21).  Unaseccióndelembrión,vistaamicroscopíaelectrónicadetransmisión(MET), muestraquelabasedeestahendiduraconstituyelaglánduladelaconcha(Figuras 4.22y4.23).Laglánduladelaconchaestáformadaporunaspocascélulasenlasque lasmicrovellosidadesvandesapareciendoprogresivamente.Estascélulassonlasque vanaelaborarelperiostracoyporelmomentosoncélulasindiferenciadas.               Resultados 111                          FIGURA4(17‐19):GástruladeV.pullastra (7‐8hpost‐fertilización).17: Microfotografíaalmicroscopio óptico.18:Gástrulamostrandoelblastoporo(blas)ylainvaginacióndelaglánduladelaconcha(igc). Microscopioelectrónicodebarrido.19:Secciónsagitalalmicroscopioelectrónicodetransmisióndeuna gástrulamostrandoambasinvaginaciones,elblastoporo(blas)ylainvaginacióndelaglánduladela concha(igc).V:ventral,D:dorsal,A‐P:ejeanteroposterior.Barrasdeescala20µm. 17 18 19 blas igc blas igc DV A P 4.Desarrolloembrionarioylarvario 112                                  FIGURA4(20‐23):Microfotografíasalmicroscopioelectrónicodebarridoydetransmisióndeuna gástrulatardíadeV.pullastra.20:Gástrulatardíamostrandolainvaginacióndelaglánduladelaconcha (igc).Microscopioelectrónicodebarrido.21:Detalledelainvaginacióndelaglánduladelaconcha.22: Seccióntransversaldelagástrulatardíaatravésdelainvaginacióndelaglánduladelaconcha. Microscopioelectrónicodetransmisión.23:Detalledelainvaginaciónmostrandolascélulasdela glánduladelaconcha(asteriscos).Barrasdeescalafotos20y22:20µm;fotos21y23:5µm. 22 20 21 23 igc ** Resultados 113  Entrelas13‐14horaspost‐fertilizaciónlagástrulasetransformaenunatípica larvatrocóforapiriformeciliada,deunas60μmdelongitudapico‐basalyquenada másactivamentequelosestadiosanteriores(Figuras4.24y4.25).Latrocóforaposee unaregiónciliadaamododecoronallamadaprototroca,queladivideendosregiones desiguales.Enlaregiónanterioraparecelametatroca,unacoronadeciliosformada porunmechóndeciliosmáslargosconocidocomopenachoapical(Figuras4.26y 4.27).Enlaregiónposteriorunconjuntodeciliosjuntoalanoformalallamada telotroca.Enestaregiónposteriortambiénseencuentraelblastoporoquedarálugara labocaenlaparteventralylaglánduladelaconchasituadaenlapartedorsal,queen estemomentopresentaunapelículadeaspectomembranosoycontinuo,sinquese puedaobservarlacharnelayelligamento(Figuras4.28,4.29y4.30).  LaglánduladelaconchavasecretandolaprodisoconchaIdeaspecto membranosoynocalcificada(Figuras4.31,4.32y4.33);enlatrocóforatardíala prodisoconchaIseextiendecubriendolossegmentosizquierdoyderechoconectados porunabandamásgruesa,queeslaprimeracharnela,estableciéndoselasimetría bilateral(Figuras4.34y4.35).ConMETsepuedeobservarcomoelperiostracose insertaenelbordedelmanto,dondeseencuentranlascélulassecretoras(T1)(Figuras 4.36y4.37).Lascélulassecretoras(T1)presentanunasmicrovellosidades,mientras queenlasnosecretoras(T3),cubiertasporelperiostraco,éstasnoestánpresentes. Nosehaconseguidoobtenerimágenesdelascélulassecretorasdelligamento(T2).  LaprodisoconchaIseextiendetotalmentehastaqueenvuelvelaspartes visceralesdelalarva,laprototrocavaadarlugaralveloylatelotrocaalmechón postanal(Figuras4.38y4.39).Entrelas30y32horasdespuésdelafertilizaciónse observaelestadiodelarvaDveliger,conuntamañodeentre100y105µmylas valvastodavíanocalcificadasperoyaenvolviendotodaslaspartesblandasdelalarva (Figura4.40).   4.Desarrolloembrionarioylarvario  120                                FIGURA4(41‐44):LarvaDdeV.pullastra 48horasdespuésdelafertilización.41:Microfotografíaal microscopioóptico.42:MicrofotografíasalmicroscopioelectrónicodebarridodelalarvaDconelvelo, vistalateral.Ciliospreorales(pre),adorales(ad)ypostorales(post).43:SecciónlongitudinaldelalarvaD almicroscopioelectrónicodetransmisiónconlasvalvas(val),elvelo(vel)ylacharnela(cha).44:Sección transversaldelaprodisoconchaIdelalarvaD.Seobservaunacapasecundaria,localizadaentreelmanto (M)yelperiostraco(flecha),enlaqueseincluyenlosprimeroscristalesdecalciodelaconcha (asteriscos).Barrasdeescalafotos41,42y43:20 µm;foto44:0,5µm. 42 41 43 vel cha pre ad post val M* * 44 Resultados 121           FIGURA4(45‐47):Microfotografíasalmicroscopioelectrónicodebarridode lalarvaDdeV.pullastra.45: VistadorsaldelalarvaDconlacharnela.46:LarvaDconlacharnelayelvelo.47:Vistaventraldelalarva Dconelvelo(vel)yelpenachopostanal(ppa).Barrasdeescala:20µm. 46 45 47 vel ppa 4.Desarrolloembrionarioylarvario 122                                FIGURA4(48‐50): Larvaumbonadade V.pullastra 8‐9díasdespuésdelafertilización.48: Microfotografíaalmicroscopioópticodelalarvaumbonada.49:Larvaumbonadaalmicroscopio electrónicodebarridomostrandolatransicióndelaprodisoconchaI(pI)alaprodisoconchaII(pII).50: Detalledelatransición(flecha).Barrasdeescalafotos48y49:50µm;foto50:20µm. 49 48 50 pI pII Resultados 123   FIGURA4(51‐53):MicrofotografíasalmicroscopioelectrónicodebarridodelalarvaumbonadadeV. pullastra.51:Larvaumbonadamostrandoelvelo.52:Larvaumbonada,vistaventral.53:Vistadorsalde lalarvaumbonadaconlacharnela.Barrasdeescala:50µm. 52 51 53 4.Desarrolloembrionarioylarvario 124                                55 54 56 FIGURA4(54‐56):Larvapediveligerde16‐18díasdeV.pullastra. 54: Microfotografíasalmicroscopio ópticodeunalarvapediveligermostrandoelpieyelvelo.55:Microfotografíasalmicroscopioelectrónico debarridodeunalarvapediveligerconelpie.56:Detalledelpieciliadodelalarvapediveliger. Barrasdeescalafotos54y55:50µm;foto56:20µm. Resultados  125                        FIGURA4(57‐60):Postlarvade21‐22díasde V.pullastra. 57: Fotografía almicroscopioópticodela postlarva.58:FotografíaalmicroscopioelectrónicodebarridodelapostlarvaconlaprodisoconchaI(pI), laprodisoconchaII(pII)yladisoconcha(dis).59:DetalledelatransicióndelaprodisoconchaIIala disoconcha(flecha).60:Vistadorsaldelapostlarvaconlacharnela.Barrasdeescalafotos57,58y60: 100µm;foto59:50µm. 58 57 60 59 dis pI pII 4.Desarrolloembrionarioylarvario 126  4.4DISCUSIÓN  Aunqueexistenestudiossobreeldesarrolloembrionarioymorfologíalarvaria deotrosbivalvosutilizandomicroscopíaelectrónicadebarrido(HodgsonyBurke, 1988;Bellolioetal.,1993;TardyyDongrad,1993;Grosetal.,1997;Mouëzaetal., 1999y2006;RaleighyKeegan,2007;Cannueletal.,2009;daCostaetal.,2008;da Costa,2009yAranda,2010),ésteeselprimeroqueserealizaenlaalmejababosa Venerupispullastra.  EltamañodelosovocitosdeV.pullastraessimilaraldeotrasespeciesde VenéridosdeinteréscomercialenGalicia,comoRuditapesdecussatus,R. philippinarumyV.rhomboides(MartínezPatiñoetal.,2008y2010).  LacabezadelosespermatozoidesdeV.pullastrapresentaunaforma cilíndrica,yesmáspequeñaqueladeR.decussatus(Aranda,2010),lacualpresenta unaformadetrompeta.Eltamañodelosespermatozoides,incluidalacola,essimilar aldeEnsissiliqua(daCosta,2009)yaldeotrasespeciesdeVenéridos,como AnomalocardiabrasilianayChionecancellata(Mouëzaetal.,1999y2006).  Lasegmentacióndelhuevoes,aligualqueenelrestodelosbivalvos,espiraly conducealaformacióndeunablástuladeltipoesteroblástula,enlaquelos macrómerosrecubrentotalmentelosmicrómeros.LablástulaenV.pullastra,primer estadiociliado,aparece5hy30mindespuésdelafertilización.PérezCamachoy Román(1973)enunestudiorealizadoenestamismaespeciedetectaronlaaparición delosprimerosestadiosmóvilesentre6y7horasdespuésdelafertilización,un tiemposimilaralencontradoenesteestudio.Deentrelasespeciescultivadasen Galicia,eltiempodeaparicióndelablástulaenV.pullastraessimilaraEnsissiliquay R.decussatus,ymásrápidoqueenE.arcuatusyDonaxtrunculus(daCostaetal., 2008;Arandaetal.,2009;daCosta,2009yLouzán,comunicaciónpersonal).  Resultados 127  Aligualqueocurreenotrosbivalvoslagastrulaciónocurreporepibolia.Enella losmicrómerossemultiplicanrápidamente,ysesitúanrodeandoalosmacrómeros, formándoseasíelectodermoyelendodermo.EnV.pullastra,7‐8hdespuésdela fecundación,sedesarrollaunagástrula,tiemposimilaralobtenidopordaCosta (2009)enE.siliquayAranda(2010)enR.decussatus.  ConelmicroscopioelectrónicodebarridoseconfirmaqueenlagástruladeV. pullastra,seobservandosinvaginaciones,elblastoporoylainvaginacióndela glánduladelaconcha.Enotrasespeciesdebivalvos,comoC.cancellata(Mouëzaet al.,2006),A.brasiliana(Mouëzaetal.,1999),R.decussatus(Aranda,2010),E. arcuatusyE.siliqua(daCostaetal.,2008ydaCosta,2009),tambiénseconfirmala presenciadeambasinvaginacionescuandolagástrulapresentaunospocoscilios, antesdeformarselaprototrocacaracterísticadelatrocófora.  LalarvatrocóforaenV.pullastraaparece13‐14hdespuésdelafertilización, siendountiemposimilaraldelaaparicióndelatrocóforaenotrasespeciesde bivalvos,comoenR.decussatus,E.siliquayD.trunculus(Arandaetal.,2009;daCosta, 2009yLouzán,comunicaciónpersonal).Lalarvatrocóforanadaactivamentegraciasa lacoronadeciliosquepresenta,laprototroca.  Lainvaginacióndelaglánduladelaconchaquesedesarrollaenelestadiode gástrula,enlatrocóforaaparecesituadadebajodelaprototroca.Graciasalas observacionesrealizadasconelmicroscopioelectrónicodetransmisión,ambas constituyenunahendiduraabiertaenlapartedorsaldelatrocófora,apartirdela cualsesecretaelperiostraco.Enlatrocóforatardíalasecrecióndelaglánduladela concha,deaspectomembranoso,sevaexpandiendoendireccionesopuestas, quedandolasdosregionesunidasporunabandamásgruesaqueserálafutura charnela.Finalmente,30hdespuésdelafertilización,elperiostracoacaba envolviendolaspartesblandasdelalarvayseformalalarvaD,característicaporla presenciadelveloylacharnelarecta.  4.Desarrolloembrionarioylarvario 128  Laformacióndelaprimeraconchalarvaria,segúnloobservadoenV.pullastra, seajustaconelmodelodescritoporMouëzaetal.(2006)paraelvenéridoC. cancellata,enelcualseproponíaunainterpretacióndistintaalapropuestapor Kniprath(1980)enMytilusgalloprovincialisyCasseetal.(1998)enPectenmaximus, lascualessebasabanenelmodelodescritoparagasterópodos.TantoenV.pullastra comoenC.cancellata,noesnecesarioquelainvaginacióndelaglánduladelaconcha secierreporcompletoparacomenzarlasecrecióndelperiostraco.  ElestudiocomparativorealizadoconMEByMETmuestralosmovimientos morfogénicosquehacenquelaglánduladelaconchaselocaliceenposicióndorsal debajodelafuturaprototroca,enelquesedesarrollanunacapadecélulasciliadasde distintostiposcubriendolaglánduladelaconcha,apartirdelacualseformala prodisoconcha.EneltrabajorealizadoporMouëzaetal.(2006)enlaespecieC. cancellatadescribenlosdistintostiposdecélulas.Elperiostracoeslaprimeraparte visibledelaconchayseformaapartirdecélulassecretotasT1.Enunprimer momento,elperiostracoescontinuoyaquelospolosapicalesdelascélulassecretoras delligamentoT2estánrecubiertasporlascélulassecretotasT1.Ennuestroestudio conV.pullastranosehapodidoobservarlascélulassecretorasdelligamentoT2.Las célulasnosecretorasT3sederivandecélulasmadreT1ynoelaboranelmaterialdel periostraco,sinoqueproducenlacapaorgánicasegundadelaconchayestánligadas conlacalcificacióndelamisma.  Traslaobservaciónalmicroscopioelectrónicodebarridosehapodido confirmarque,aligualqueenR.decussatus(Aranda,2010),enlalarvaDrecién formada,laprodisoconchaIestodavíadeaspectomembranoso,teniendoquepasar 48htraslafecundaciónparaquelasvalvasdelaprodisoconchaesténtotalmente calcificadas.  ElórganomáscaracterísticodelalarvaDeselvelo,quedebidoasunaturaleza ciliada,esutilizadoparalanataciónylacapturadealimento.Apartirdeesteestadio, lalarvacomienzaaalimentarseylaprodisoconchacomienzaacrecer.La Resultados 129  prodisoconchaI,secretadaporlaglánduladelaconcha,presentaunasuperficie punteada,mientrasquelaprodisoconchaII,secretadaporellóbulodelmantocuando lalarvaDcomienzaaalimentarse,presentaunasuperficieestriadaconcéntricamente.  EnV.pullastra,entrelos16y18díasdespuésdelafecundación,aparecela larvapediveligerenlaqueseobservatodavíaelveloyelpie,ambosciliados.Eneste momentolalarvacomienzaabuscarunsubstratoparafijarse,pudiendonadarpor brevesperíodosdetiempoyreptarporelsubstrato.Durantelametamorfosiselvelo sereabsorbe,perdiendolafuncióndecaptacióndealimentoydesplazamiento, comenzandoadesarrollarselosfilamentosbranquiales.  Despuésdelafijaciónymetamorfosis,22díasdespuésdelafecundación,la postlarvacomienzaacreceryelmantoinicialasecrecióndeladisoconcha, observándoseunaslíneasdecrecimientomásmarcadas.Adiferenciadeotros bivalvos,comoE.arcuatusyE.siliqua(daCostaetal.,2008ydaCosta,2009),R. decussatus(Aranda,2010)yD.trunculus(Louzán,comunicaciónpersonal),la disoconchadeV.pullastrapresentamicrovellosidades.Éstaspodríanservircomouna adaptaciónalmedioparamantenerseenterradosyevitareldesplazamientoporlas corrientesenlasprimerasfasespostlarvariastraslafijación.Unestudiosecuencialde lamorfologíadelaconchadepostlarvasysemillapermitiríadeterminardurantequé fasesestánpresentesestasmicrovellosidades.Además,puestoquenosehadescrito lapresenciadeéstasenotrasespeciesdebivalvoscomercialesdeGalicia,podríaser unbuencaráctertaxonómicoparalaidentificacióndepostlarvasdeV.pullastra.  EnrelaciónaotrosbivalvosdeinteréscomercialenGaliciacultivadosenlas mismascondicionesenelCentrodeCultivosMariñosdeRibadeo,lametamorfosisen V.pullastratienelugarmástardequeenE.arcuatus(daCostaetal.,2008),E.siliquay Solenmarginatus(MartínezPatiño,2002)yesmásrápidaqueenR.decussatus (MartínezPatiñoetal.,2001),R.philippinarum(MartínezPatiñoetal.,2008)yD. trunculus(Louzánetal.,2009).  6.Cultivoenelmedionatural 232  TABLAVI.7:Desdobledelosdistintossublotesdelapruebaconmallade1mm.  Lastasasdecrecimientosemantuvieronalpasarlasemillaabolsasdemayor luzdemalla,aunqueentrelasdistintasdensidadesnoseapreciatantadiferenciacomo seobservóenlasemillademenortamaño.  Enlassiguientesfigurassemuestralaevolucióndelcrecimientodelasemilla estabuladaadistintasdensidades.                                  FIGURA6.24:Evolucióndelcrecimientoenmmencadaunadelasdensidades. BATEAMALLA2mm Fechainicio:15/05/06Fechafinal:21/06/06 Densidad kg/m2 Talla (mm) Peso (mg/ind)DíasTalla (mm) Peso (mg/ind)GL30GW30Mort. 0,72<T34,82 13,76 37 11,78 235,98 70,69 224,784,22 1,44<T34,89 14,489,53 120,32 66,06 209,562,81 2,15<T34,61 11,978,48 83,09 63,93 202,881,39 0,89>T35,91 26,443714,05 413,4 59,85 190,421,15 1,79>T35,52 21,1814,06 414,71 63,33 201,483,80 3 5 7 9 11 13 15 mm 0,72<T3 1,44<T3 2,15<T3 0,89>T3 1,79>T3 15/05/06 21/06/06 3 4 5 6 mm 0,72 1,44 2,15 28/04/06 15/05/06 Malla1mm Malla2mm Resultados 233  6.3.2CONTROLPATOLÓGICOYMADURACIÓNREPRODUCTIVADELASEMILLA SerealizóelestudiohistológicodelasemilladeV.pullastraqueseutilizóenlas experienciasdepreengordedelapartado6.3.1.1.  6.3.2.1CONTROLPATOLÓGICO  EnlatablaVI.8semuestranlosresultadosdelestudiopatológicodelasemilla antesdeserintroducidaenelsistemadepreengordeydespuésdefinalizadaestafase.  TABLAVI.8:Prevalencias(%)delosorganismosparásitosycomensalesobservadosencadaunadelas muestras.   Coloniastiporicketsianoendig. Nematopsissp. Ciliadosenbranquia Ciliadosendigestivo Haplosporidio Steinhausiasp. Paravortexsp. Metazooendigestivo Metacercariaenpie  FechaTalla Controlinicial04/11/047,2±0,10041500000 Controlfinal Batea11/04/0516,0±0,2023171033700 Intermareal23/06/0512,2±0,301010000300 Controlinicial21/04/058,4±0,2004000000 Controlfinal Batea26/05/0513,1±0,3003000000 Intermareal21/07/0511,8±0,603487001000 Controlinicial06/07/057,2±0,2000000000 Controlfinal Batea24/08/0514,7±0,20080300130 Int.OGrove03/11/0511,5±0,4323600001303 Int.Vilaxoán03/11/0512,0±0,2373327032700 Controlinicial01/02/067,0±0,2030300300 Controlfinal Batea20/04/0618,1±0,20010000700 Intermareal26/05/0611,8±0,100134501600 Controlinicial27/04/066,8±0,2000000000 ControlfinalBatea05/06/0612,7±0,20160008000  Enloscontrolesinicialesdedosdeloslotesnoseencontróningúnparásito,en otrosdossóloseobservaronciliadosyenotrolote,ademásdeciliados,se encontraronquistesdeNematopsissp.eindividuosdeParavortexsp. 6.Cultivoenelmedionatural 234  Enloscontrolesfinaleslasalmejasestabanafectadasporvariosparásitosy comensales.Enalgunasexperienciasseobservaronindividuosdelagregarina Nematopsissp.,aisladamentesedetectaronplasmodiosdehaplosporidioenelepitelio deldigestivoyquistesdeSteinhausiasp.enovocitos.Enlaexperienciaqueseinicióen veranode2005seobservaronalgunosmetazoosindeterminadosendigestivoy metarcercariasdetrematodoenpie.Encasitodaslasexperienciassedetectaron individuosdeParavortexsp.alfinaldelasexperiencias.Seencontraroncoloniasde tiporicketsianoenbranquiaalfinaldelaexperienciadeveranode2005queenel sistemaintermarealfinalizóennoviembre.Aunquenotieneimportanciapatológica, losciliadosenbranquiapresentaronlasmayoresprevalencias.  Conrelaciónalossistemasdecultivo,lasalmejaspreengordadasenbatea estánmenosparasitadasquelasdelintermareal.Dependiendodelaépocadelañoen queserealiceelpreengordetambiénhaydiferencias,asílasalmejasquese preengordaronenveranoestabanmásparasitadasquelasdeprimavera.Lasalmejas delpreengordedeotoñode2004acabarontambiénmásparasitadasqueen primavera.  Ningunodelosparásitosdetectadosenlasemillatieneimportanciapatológica, puescomomucho,desencadenabanunareacciónhemocitarialigeraalrededordel parásito.  6.3.2.2MADURACIÓNREPRODUCTIVA  EnlatablaVI.9semuestranlastallasmediasenlongituddelaspartidas ensayadasenpreengorderealizadasenparalelotantoenbateacomoenintermareal,y elniveldediferenciaciónsexualencontradaencadaunadeellasmediantetécnica histológica,alinicioyfinaldelpreengorde.     Resultados 235  TABLAVI.9:Porcentaje(%)deindividuosdecadaloteencadaestadio.E1:Iniciodelagametogénesis; E2:Gametogénesisavanzada;E3:MadurezypuestayE4:Renovacióngonadal. I:Indeterminado;H:HembrayM:Macho.  E1E2E3E4%total  FechaTallaIHMHMHMHMIHM Controlinicial04/11/047,2±0,12967400000029674 Control final Batea11/04/0516,0±0,20001000000001000 Intermareal23/06/0512,2±0,30001000000001000 Controlinicial21/04/058,4±0,21853180110000185329 Control final Batea26/05/0513,1±0,300052317100005941 Intermareal21/07/0511,8±0,600000553114006931 Controlinicial06/07/057,2±0,25050000000050500 Control final Batea24/08/0514,7±0,203050132770008020 Int.OGrove03/11/0511,5±0,41010000036710107713 Int.Vilaxoán03/11/0512,0±0,21470003373014833 Controlinicial01/02/067,0±0,2047713137130006733 Control final Batea20/04/0613,1±0,201333047700005050 Intermareal26/05/0611,8±0,10840020640002872 Controlinicial27/04/066,8±0,2432107290000432829 Control finalBatea05/06/0612,7±0,201605220840007624  Lasdiversaspartidasquesecolocarontantoenlabateacomoenintermareal paraprocederalafasedepreengorde,presentaronunciertoniveldediferenciación sexual(Figura6.25),indicandoqueéstaseinicióyaenelcriadero.Lamayoríadelos individuosaliniciarelpreengorde(entre6,8y8,6mm)seencontrabanenestadiode iniciodegametogénesis,aunquetambiénseencontrabanindividuosenestadiode reposo,engametogénesisavanzadayenmadurez.Latallamínimaenlaquese detectóeliniciodelagametogénesisdentrodeestaspartidasfuede4,9mm. AB FIGURA6.25:ImágenesdemicroscopíaópticadesemilladeV.pullastra aliniciodelpreengorde. A:Hembraeniniciodegametogénesis.B:Machoengametogénesisavanzada. Barradeescala100 µ m. 6.Cultivoenelmedionatural  236  Alolargodelafasedepreengordelasemillavaavanzandodentrodesuciclo reproductivo(Figura6.26).Alfinalizarelpreengordeyaseencuentramayorporcentaje deindividuosenmadurezquealinicio,einclusoseobservanalgunosindividuosen renovacióngonadalparacomenzarotrociclodegametogénesis.         6.3.3CRECIMIENTODIFERENCIAL  Alrealizarelestudiohistológicodemaduraciónreproductivadelasemilla utilizadaenlaspruebasdepreengordeenlasdistintasépocasdelaño,seobservóque enlamayoríadelaspartidasestudiadashabíaunelevadoporcentajedehembras.Se presentaenlasiguientetablaelporcentajedesexosqueseobservóencadaunadelas partidasalfinalizarlafasedepreengorde.   TABLAVI.10:Porcentajedeindividuosdecadasexoencontradosenlasdistintaspruebasalfinalizarel preengordeyrelaciónhembras:machos(H:M)encadasubpartida. I:Indeterminado;H:HembrayM:Macho.Diferenciassignificativasennegrita.  IniciopruebaFinalpruebaTalla(mm)%I%H%MH:M Otoño2004 Batea (11/04/05) 16,0±0,2 0100 01:0 ‐ Intermareal (23/06/05) 12,2±0,3 0100 01:0‐ Primavera2005Batea (26/05/05) 13,1±0,3 059 41 1,4:1 (χ2=1,200;g.l.=1;p >0,050)  Intermareal (21/07/05) 11,8±0,6 069 31 2,2:1 (χ2=4,800;g.l.=1;p =0,028)  Verano2005 Batea (24/08/05) 14,7±0,2 080 20 4:1(χ2=10,800;g.l.=1;p= 0,001)  Int.OGrove (03/11/05) 11,5±0,4 10 77 13 5,9:1 (χ2=13,370;g.l.=1;p =0,000)  Int.Vilaxoán (03/11/05) 12,0±0,2 14 83 327,6:1(χ2=21,160;g.l.=1;p =0,000)  Invierno2006 Batea (20/04/06) 13,1±0,2 050 50 1:1(χ2=0,040;g.l.=1;p >0,050)  Intermareal (26/05/06) 11,8±0,1 028 72 1:2,57 (χ2=6,533;g.l.=1;p =0,011)  Primavera2006Batea (05/06/06) 12,7±0,2 076 24 3,16:1 (χ2=6,533;g.l.=1;p =0,011)  AB FIGURA6.26:ImágenesdemicroscopíaópticadesemilladeV.pullastra alfinalizarelpreengorde. A:Hembraengametogénesisavanzadaenbatea.B:Hembraenmadurezenintermareal. Barradeescala100µm.  Resultados 237  Ensietedelasdiezpartidasseobservóquelaproporcióndehembrasera significativamentemayorqueladelosmachosysóloenunadelaspartidasse desviabasignificativamenteenfavordelosmachos,enlapruebadeintermareal iniciadaeninviernode2006.Endosdelaspruebaslarelaciónhembras:machosnose desviabasignificativamentedeunaproporción1:1,laspruebasdebateainiciadasen primaverade2005einviernode2006.  AlanalizarlapartidadeV.pullastra,quehabíainiciadoelprocesode preengordeenotoñode2004,conunatallamediade7,2mm,alfinalizarel preengorde,conunatallafinalde16mmenbateay12,2mmenintermareal, presentabael100%dehembrasyningúnmacho.Lapartidahabíasidosuministrada porelcriaderodeA´Ostreira,S.L.Segúninformaciónproporcionadaporlos responsablesdelcriadero,procedíadelacabezadeunapuestadealmejababosa obtenidaduranteelveranodelaño2004.Enfuncióndeestosresultados,semantuvo ellotepreengordadoenbateahastaelmesdeseptiembre,momentoenelcualla semillateníaunatallamediade28mm,realizandorepetidosanálisishistológicos.De untotalde372individuosanalizadosduranteestosmesesposterioresalpreengorde, solamentesedetectaron4machos.  Unahipótesisquepodríaexplicarlosresultadosanterioresseríaquelas hembraspresentenuncrecimientomayorquelosmachos.Lapresenciademás hembrasenestaspartidas,vendríafavorecidaporlasprácticashabitualesdetamizado yclasificacióndecabezasycolasqueserealizanenloscriaderos,yquesesuponeque eslacausaqueoriginaestaanormalidadfinaldeproporcióndesexosenloslotesde preengorde.Estoslotesdesemillaprocedíandecriaderosindustriales,porloquenose conocelaevolucióndelosmismosdurantelafasedecriadero.Probablemente,a excepcióndelapruebadeinviernode2006,elrestodelaspruebasserealizócon partidasdesemillaquesecorrespondíanconlascabezasdelaspuestas.  Paraconfirmarestahipótesissepusieronenmarchadosexperiencias.Enla primerasecontrolaronlosdesdoblesdeunapuestacompletadurantelafasede criadero,yposteriormentesepreengordarontodosloslotesenbatea.Enlasegunda 6.Cultivoenelmedionatural 238  pruebaseutilizarondospuestas,quesemantuvieronencriaderohastaquelasemilla alcanzóuntamañoadecuadoparaserestudiada.  6.3.3.1SEGUIMIENTOENBATEA  Deformaexhaustivasecontrolaronlosdiversosdesdoblesdeunapuestade almejababosadeldía22/02/2005parasuposteriorpreengordeenbateaapartirdel 26/05/05.  Laprimeraseparaciónserealizóenelcriadero:Cabezas(1,2‐2,1mm)yColas (0,6‐1,2mm).Lasegundaseparaciónfuepreviaalaintroducciónenelsistemade preengordeenbatea:Cabezas+(10,10mm),Cabezas‐(8,79mm),Colas+(5,61mm)y Colas‐(4,29mm).  EnlatablaVI.11seexponenlosresultadosentérminosdeporcentajesde hembrasymachosenlasdiferentessubpartidasoriginadas.  TABLAVI.11:Porcentajesdehembrasymachosenlascuatrosubpartidas:(CB+)másgrandesdela cabeza,(CB‐)máspequeñasdelacabeza,(CL+)másgrandesdelacolay(CL‐)máspequeñasdelacola. Relaciónhembras:machosencadasubpartida.Diferenciassignificativasennegrita.  Subpartida%H%MH:M CB+65,1034,901,94:1(χ2=5,120;g.l.=1;p=0,024) CB‐ 40,9059,101:1,15(χ2=2,000;g.l.=1;p>0,050) CL+82,9017,104,5:1(χ2=20,480;g.l.=1;p=0,000) CL‐ 50,0050,001:1(χ2=0,000;g.l.=1;p>0,050)  Losresultadosparecenindicarque,enlaprimeradivisiónqueserealizóenel criadero(conuntamizde750µm),elposiblecrecimientodiferencialexistenteaesta tallanopermiteunaseparaciónfísica.Sinembargo,lasegundadivisiónpreviaal preengordeenbatea,síoriginaesaseparaciónfísicaentrehembrasymachos.Lasmás grandesdecadaunadelasfraccionesseparadasenelcriadero,másgrandesdelas cabeza(CB+)ymásgrandesdelacola(CL+),yacontienenmayoritariamentehembras, Resultados 239  mientrasqueenlasmuestrascorrespondientesalasmáspequeñasdelacabeza(CB‐) ydelacola(CL‐)contienenmachosyhembras,confirmandoelmayorcrecimientode lashembrasenrelaciónconlosmachosenestafase.  Lacomposiciónsexualdelasdiversasmarcasdeclase:14,5>x>11,5mm;11,5 >x>8,5mmy8,5>x>5,5mmdelacabeza,quesemuestrearonel26/05/2005(Tabla VI.12)apuntanenlamismadirección.  TABLAVI.12:Porcentajesdehembras(%H)ymachos(%M),valoresdepesohúmedoindividual(Ph)y tallamedia(L)decadaclasedetalla.Relaciónhembras:machosencadasubpartida. Diferenciassignificativasennegrita.  Marcadeclase Ph(mg)L(mm) %H%MH:M 14,5>x>11,5147,710,287,512,56,5:1(χ2=16,133;g.l.=1;p=0,000) 11,5>x>8,593,28,885,714,36,5:1(χ2=16,133;g.l.=1;p=0,000) 8,5>x>5,548,07,114,385,7  1:6,5(χ2=16,133;g.l.=1;p=0,000)   EnlatablaVI.13semuestranlosresultadosdecrecimientodelasdiversas subpartidas.  Amedidaquelasemillavacreciendolatasadecrecimientodisminuyey tiendenaigualarseaquellosindividuosquepartierondelmismogrupoenlaprimera división.Así,aliniciodelpreengordeladiferenciaentreCB+yCB‐esde1,31mm,lo querepresentaun13%delatallamientrasquealfinaldelpreengorde,ladiferencia entrelasdosesdetansólo0,76mm,un4%delatallafinal.  Enlosdosgruposdelascolasestadiferenciatodavíaesmásperceptible.Al iniciodelpreengordehabíaun23%dediferenciaentrelasdostallas(1,32mm)yenla fechafinalseredujohastaun15%(2,95mm).  Lashembraspresentan,enteoría,unmayorcrecimientoquelascolocaenlas partidasmásgrandesdelacabezaylacola(CB+yCL+).Sinembargo,lamaduración sexuallesprovocaunaposteriorralentizacióndelcrecimientorespectodelafracción 6.Cultivoenelmedionatural 240  máspequeña(CB‐yCL‐),porloquesidejáramoscrecerlasemilladurantemástiempo posiblementelasdosfraccionessesolaparían(CB+conCB‐yCL+yCL‐).  TABLAVI.13:ParámetrosdelongitudL(mm),pesohúmedoindividualPh(mg)ytasadecrecimiento mensualenlongitudGL30yenpesoGW30delasdiversassubpartidas.  Lastasasdecrecimientoenlosdoslotesdelacolasonmayoresquelosdos lotesdelacabeza,debidoaqueéstasempezaronelpreengordeconmenortallaque lasotras.Sinembargo,aliravanzandoelpreengorde,latasadecrecimientodisminuye yaigualtallaseobservanlasmismastasas.  Enningunodelosloteslamortalidad,durantelafasedelpreengorde,superó al3%.   Fecha26/05/0508/06/0521/06/05 07/07/05 19/07/05 09/08/05 24/08/0507/09/05 CB+    L(mm)10,1012,9816,24 18,65 21,11 21,88   GL30  57,8951,71 25,94 30,98 6,38   Ph(mg)144,73321,78655,34 1.017,47 1.507,21 1.689,11   GW30184,38164,14 82,49 98,24 17,99   CB‐     L(mm)8,7911,7914,58 17,74 19,58 21,12   GL30  67,7649,02 36,78 24,67 11,95   Ph(mg)93,16236,61465,04 867,52 1.187,21 1.509,92   GW30215,10155,93 116,91 78,43 37,97   CL+    L(mm)  5,61 9,39 11,69 16,33 18,0119,34 GL30  96,58 54,77 52,78 19,5815,27 Ph(mg)   22,30 114,75 230,77 667,28 909,991.141,06 GW30  307,16 174,67 167,65 62,0448,49 CL‐     L(mm)  4,29 5,47 7,60 12,32 14,5316,39 GL30  45,56 82,22 76,28 33,0026,25 Ph(mg)   9,55 20,65 58,55 272,46 459,57674,00 GW30  144,60 260,54 242,78 104,5682,06 Resultados 241  6.3.3.2SEGUIMIENTOENCRIADERO  Seharealizadoelseguimientodelasemillaobtenidaendosdesoves controladosenelcriaderoycultivadossegúnloexplicadoenelcapítuloIII.Losdos cultivospartierondelarvasnacidasenfebrerode2008yunañodespués,todoslos individuosdelcultivoseencontrabanenunrangodetallasentre8y18mm.Fueen estemomentocuandoserealizóelestudiohistológicogonadalysecalculóel porcentajedemachosyhembrasenlasemilla.Paraellosehicierontressublotesen cadacultivo:almejaspequeñas(entre8y10mm),almejasmedianas(entre12y14 mm)yalmejasgrandes(entre16y18mm).  Lasupervivenciadelasemilladurantelafasedepreengordequeserealizóen criaderofuediferentecomparandolosdoscultivos.Enelcultivo1,lasupervivencia desdequelasemillapresentabaunatallaconvalorescomprendidosentre2,5y5,5 mmhastaelfinaldelaexperiencia(entre8y18mm)fuedel65%,mientrasqueenel cultivo2fuetansólodel10%.  EnlatablaVI.14sepresentanlosdatosdelestudiodesexosdecadaunodelos cultivos.Encuantoalaproporcióndesexos,enlapuesta1haymayornúmerode individuoshembraenlossublotesgrandeymediano,mientrasqueenelpequeñohay mayorproporcióndemachos.Entodoelcultivoseencontróun55%dehembrasyun 45%demachos.Enlapuesta2seencontrómayornúmerodeindividuoshembraen todoslossublotes,enlatotalidaddelcultivosóloseencontróun19%demachos, frenteal81%dehembras.  Comosevioenlapruebarealizadaenbatea,losmachosparecequetienenun crecimientomenorduranteestafasedepreengorde.Estopodríaexplicarqueenel cultivo2,conunabajasupervivencia(10%),alfinaldelaexperienciaseencontraraun elevadoporcentajedehembras(81%),indicandoquelosmachospodríanhaber quedadoeliminadospormortalidad.   6.Cultivoenelmedionatural 248    ‐Postlarvario.Eneldesarrollopostlarvariohastalaobtencióndesemillapara preengorde,seobtuvounasupervivenciadel30%yalos90díasdelapuestalasemilla alcanzóunatallamediade4,70mm,momentoenelquesesacarondelcriaderopara suestabulaciónenelsistemadepreengorde.Enlasfigura6.31yenlatablaVI.17se muestralaevolucióndeldesoveduranteeldesarrollopostlarvario.              ‐ Preengorde.Afinalesdemayosecomenzólafasedepreengordeen Barallobre.Separtíadeunasemillainicialde4,70mmyen4mesessellegóaunatalla de13,90mm.LaGL30duranteestafasefuede24,27ylasupervivenciafuedel83%.En latablaVI.18semuestranlosdatosyenlafigura6.32laevolucióndelcrecimiento duranteelpreengorde. HuevoLarvaDUmbonada Pediveliger Postlarva Días02813 17 Tamaño73±2,5µm103±5,2 µm 127±11,3 µm 190±22,5 µm 235±29,9µm Supervivencia50% Días172436 41 62 90 Tamaño235±29µm360±77µm 786±76 µm 942±132 µm 2.360±428 µm4.700±711µm Supervivencia30% FIGURA6.31: Evolucióndeldesarrollopostlarvario. TABLAVI.16:Evolucióndeldesarrollolarvarioenelcriadero. TABLAVI.17:Evolucióndeldesarrollopostlarvarioenelcriadero. y=0,0009x 1,9079 R²=0,9933 0 1 2 3 4 5 15 30 45 60 75 90 días Cultivopostlarvario Longitud(mm) Resultados 249  TABLAVI.19:TasadecrecimientoysupervivenciaduranteelengordeenBarallobre.           ‐Engorde.Enlafasedeengorde,lasemillasembradaenelparquedecultivo conunatamañomediode13,90mmalcanzóen15mesesunatallamediade31,55 mm,conunaGL30de5,59yunasupervivenciadel75%.Sehaestimadoeltiempoque tardaríanenllegaralatallacomercial(38mm)enbasealatasadecrecimiento observadaenestafasedeengorde,siendode18meses.  EnlatablaVI.19semuestraelresumendelosdatosobtenidosduranteel engordeyenlafigura6.33laevolucióndurantelafasedeengorde.   Talla Inicial (mm) Talla Final (mm) Peso Inicial (g) Peso Final (g) Días GL30GW30Supervivencia Preengorde4,70±1,1213,90±2,02 0,026 0,455 134 24,27 64,0883%  Talla Inicial (mm) Talla Final (mm) Peso Inicial (g) Peso Final (g) Días GL30GW30Supervivencia Engorde13,90±2,0231,55±2,80 0,455 5,860 440 5,59 17,42 75% FIGURA6.32: Crecimientoenlongituddelasemilladurantelafasedepreengorde. TABLAVI.18: Crecimientoenlongituddelasemilladurantelafasedepreengorde. y=9,8024ln(x)‐ 39,094 R²=0,9822 0 2 4 6 8 10 12 14 90 110 130 150 170 190 210 días Preengorde Longitud(mm) 6.Cultivoenelmedionatural 250                          Enlafigura6.34semuestralaevolucióndeldesovedesdesuetapaencriadero, hastaelpreengordeyengordeenelmedionatural.Laduracióndelcultivointegralde estaespecie,enestascondicionesdecultivo,seríade25meses:3mesesencriadero,4 mesesdepreengordeenmesasenintermarealy18mesesdeengordeenunparque intermareal.      FIGURA6.34: Evolucióndeldesovedesdesuetapaencriadero hastaelpreengordey engordeenelmedionatural. FIGURA6.33:Crecimientoenlongituddurantelafasedeengorde. y=17,928ln(x)‐ 83,342 R²=0,9826 0 4 8 12 16 20 24 28 32 224 324 424 524 624 días Engorde Longitud(mm) y=‐0,0461x 2 +2,6111x‐ 2,4266 R²=0,9965 0 4 8 12 16 20 24 28 32 0 5 10 15 20 25 meses longitud(mm) Cultivointegral Discusión 251  6.4DISCUSIÓN  Losresultadosobtenidosenestetrabajoconfirmanquelaubicaciónmás favorableparaelpreengordedealmejababosaVenerupispullastra,eslabatea.En todaslaspruebasrealizadas,enlasqueseutilizóelsistemadecultivoenminibolsas, lasmayorestasasdecrecimientoseobtuvieronenlossistemasubicadosenlabatea enrelaciónconaquellossistemasubicadosenzonasintermareales.Además,la mortalidadproducidaenlossistemasdeminibolsasenlabateafueprácticamente nula(entre0y3,70%),mientrasqueenintermareallamortalidadregistradafue superior,convaloresentre4,04y31,71%.  Ladiferenciadecrecimientoentrelasdosubicacionessedebeaqueenel intermarealelcultivoestásometidoalrégimenmareal,experimentandoemersionesy comoconsecuenciaparonesdealimentacióndiarios,loquesetraduceenmenores tasasdecrecimientoqueenlabatea.Enésta,laestabilidaddelmedioesmayor,ya quelacontinuainmersióndelsistemadecultivohacequeseproduzcaunamayor disponibilidaddelalimentoyunamayorestabilidaddelascondicionesambientales, loquealfinalsetraduceenunamejoradelcrecimiento.Enelcasodelaalmejababosa estacircunstanciaesimportanteyaquedesarrollasuvidanaturaldeformageneralen completainmersión.  Latemperaturaóptimadecrecimientodelaalmejababosa,estaríaentornoa los20ºC(Albentosaetal.,1994).Enestetrabajoseencontrarontemperaturasde hasta23ºCenelsistemadepreengordeenelintermarealduranteelverano,mientras queenlabatea,enestamismaépoca,nosesobrepasaronlos20ºC.  Elpotencialdecrecimientoenlasdosubicacionesvariódependiendodela épocadecultivo,yaquelatemperaturayelalimentodisponibleejercenunainfluencia directaenelcrecimientoydesarrollogametogénicodelosmoluscosbivalvos(Sastry, 1979yBeningeryLucas,1984).Afinalesdeotoñoyduranteelinviernola temperaturadelaguademaresbajay,asuvez,ladisponibilidaddefitoplancton 6.Cultivoenelmedionatural 252  tambiénesmenor,porloquelatasadecrecimientoseralentizaencualquieradelas dosubicacionesempleadasennuestrocaso.Desdelaprimaverahastaprincipiosdel otoño,latasadecrecimientoaumentacoincidiendoconlasubidadetemperaturayla abundanciadefitoplancton.  Durantelaprimaverayverano,partiendodeunasemilladetallade5a7mm, senecesitan2mesesenbateay4enintermarealparaquelasemillaalcanceunatalla entre12‐14mm,queseconsideraóptimaparaefectuarlassiembrasenlaszonasde engorde.Silaépocadepreengordeserealizaduranteelotoño‐invierno,lasemilla precisaeldobledetiempoqueenlaprimavera‐veranoparaalcanzarlamismatallade siembra.  DeentrelastresespeciescultivadasenGalicia,laalmejababosadebidoasu mayormetabolismo,eslaquemenosparóndecrecimientoexperimentadurantelos mesesdeinviernoylaquemayortasadecrecimientopuedealcanzar.Laalmejafinay japonesapresentanunatasamáximasemejante,diferenciándoseenquelaalmeja japonesaralentizamástardesucrecimientoconlallegadadelinviernoeiniciamás prontoelcrecimientopost‐invernal.Debidoasumayortasadecrecimiento,laalmeja babosademandamenoresdensidadesdecultivoenrelaciónalasotrasespecies (GarcíaFernándezetal.,2003).  Comoseveclaramente,latasadecrecimientoobtenidaduranteelpreengorde, nosólodependedelsistema,laubicaciónylaépocadecultivo,sinoquetambiéndela densidaddecultivoylatallainicial.  Dentrodelosparámetrosdecultivoladensidadesunodelosfactoresquemás influenciatieneenelcrecimientoyenlamortalidad;detalformaque,aunadensidad excesiva,elcrecimientopuedellegaradetenerseyaproduciraltosporcentajesde mortalidad(Martínezetal.,1997).Enestetrabajoseobtuvieronlosmejores resultadosdecrecimientoenlasdensidadesmásbajas(0,89kg/m2),obteniéndose dobletasadecrecimientoqueamayordensidad(3,58kg/m2).  Discusión 253  Noobstante,ladensidadóptimaqueadmiteundeterminadosistemade cultivodependedediversosfactores:laubicación,laestaciónanualylatallainicial delasemilla.  Debidoalasdiferenciasdecrecimientoentreelintermarealylabatea,enel sistemademinibolsasempleadoenestetrabajo,elcrecimientosemostróinclusomás favorableaaltadensidadenbatea(3,58kg/m2),queadensidadmásbajaen intermareal(0,89kg/m2).  Uncultivoadmitedensidadessuperioresenlasépocasdemenorcrecimiento (otoño‐invierno),mientrasqueenlosmesesdemayorcrecimiento(primavera‐verano) ladensidadinicialpuedellegaracuadriplicarseenunmes.Laperiodicidaddelas operacionesdedesdobleylimpiezahandeintensificarseenlasépocasdemayor temperaturaycontallasmáspequeñas.Enlíneasgenerales,conrelaciónalas prácticasdemanejodelasemilla,puededecirsequelosdesdoblesdebenrealizarse cuandolabiomasaestabuladaenlossistemasdecultivoseduplica.  Encuantoalatallainicialdelasemilla,amenortamañoladensidadutilizada debesermenor,yaquealsersemilladepequeñotamaño,elnúmerodeunidadesque puedenintroducirseenelsistemaesmáselevado.  Comohemosvisto,laubicación,laestaciónanualylatallainicialdelasemilla, sonfactoresimportantesalahoradeescogerladensidaddecultivo;aunqueésta siempredependerádeladisponibilidaddeespacio,delsistemaempleadoydela manodeobranecesaria.Enresumen,convienetenerencuentaaquellosaspectosque puedeninfluirdirectamenteenlarentabilidaddelsistemadepreengorde.  Elpreengorderealizadoenlasminibolsasdemalla1mmparaalmejade3,8 mm,iniciadoenlaprimaveraenelsistemademinibolsasenbatea,sehademostrado viable,obteniéndoseunbuencrecimientoynopresentandoproblemasde mortalidad;indicandoqueesunsistemaválidoparaelpreengordedesemillade tamañomuypequeño.Unavezquealcanzanlatallaadecuada,queenépocas 6.Cultivoenelmedionatural 254  favorablesdecrecimientopuedeserdelordende15/20días,puedeestabularseyaen mallasconlucesde2mmyposteriormentede3mm,paraseguirelprocesohastael finaldelaetapadepreengorde,conresultadosexcelentesencuantoacrecimientoy supervivencia.EnunensayorealizadopordeSantiagoetal.(2009)enunsistemade flujoforzadoenCamariñas,lasemilladeV.pullastradeunatallainicialde3,3mm alcanzabaenunperíodode11a13díasunatallaalrededorde5mm.  Losbuenosresultadosdesupervivenciaycrecimientoobtenidosconsemillade menortamañoalhabitual(retenidaentamiz1,5‐2mm)permitensolucionarunode losprincipalesproblemasenelcultivodealmeja,elpasodelcriaderoalmedionatural. Amedidaquelasemillacreceenelcriadero,aumentanlascomplicacionesde cultivarlaencondicionescontroladas.Labiomasasevamultiplicandoenpocotiempo deformaexponencial,loqueimplicaunconsiderableaumentoenlasnecesidadesde espacio,volumendeaguabombeadayproduccióndemicroalgas.Estesistema permitesacardelcriaderoalmejadepequeñotamaño(3‐4mm)paraquesealimente directamentedelmar,aumentandoasílacapacidaddeproduccióndeloscriaderos.  Dadosestosresultadosdecrecimientodesemilladuranteelpreengordeen bateamedianteelsistemademinibolsasenjaulas,yutilizandounaestrategiade entradadediferentespartidasalolargodelaño,esperfectamenteviablequeenun viveroflotantededimensionesnormalesconlainstalacióndeunas30jaulas,pueda llevarseacaboelpreengordedealmejababosadeunacantidadentornoalos30/35 millonesdeunidadesalaño,partiendodeindividuosalrededordelos3ó4mmde tallainicial(Cerviño,2010).  EnlastablasVI.20yVI.21semuestraunarevisiónlosresultadosobtenidospor otrosautoresenlossistemasdepreengordeyengordemáscomúnmenteutilizadosen Galicia.      TABLAVI.20:ComparacióndelosresultadosobtenidosporotrosautoresenlosdiversossistemasdepreengordeensayadosconV.pullastra. L1:Longitudinicial.L2:Longitudfinal.W1:Pesoinicial.W2:Pesofinal.GL30:Tasadecrecimientomensualenlongitud.GW30:Tasadecrecimientomensualenpeso.   L1 (mm) L2 (mm) W1 (g) W2 (g) MesesFechainicio GL30 GW30SistemaLocalizaciónAutor 4,713,90,026 0,45 4,5Mayo2006 24,3 64,1 Sacosintermareal Barallobre Estetrabajo 7,8 15,0 12,1 0,078 0,514 0,258 1,5 3,5 Abril2005 40,5 12,3 117,1 34,2 Minibolsasbatea Minibolsasintermareal Cambados OGrove Estetrabajo 6,30 13,6 10,4 0,047 0,373 0,182 2,6 3,8 Febrero2006 29,6 13,2 79,3 35,4 Minibolsasbatea Minibolsasintermareal Cambados Vilaxoán Estetrabajo ‐ ‐ 86,6 225,32 1Verano2000 ‐102,45 Cestillosenbatea Cambados GarcíaFernándezetal. (2001) 5,015,0 ‐ ‐ 3‐4Abril1998 20,2 ‐Sacosintermareal Vilaxoán Abelláetal. (2001) 5,8 12,9 15,8 0,025 0,269 0,512 4Mayo2007 19,8 24,9 59,4 75,5 ContenedoresconflujoinvertidoCamariñasdeSantiagoetal.(2007) 7,110,60,058 0,186 2,3Febrero2006 17,2 49,9Tamboresdeflujoinvertido enefluentedepiscifactoría(Insuíña) OGroveGuerraetal.(2007) 7,113,30,058 0,316 2,3Febrero2006 26,9 72,7Tamboresdeflujoinvertido ensemillerotradicional(Remagro) OGroveGuerraetal.(2007) 10,424,8 ‐ ‐ 3,3Mayo2006 26,3 ‐Sistemadeplatillosenbatea Moaña PérezCorvachoyPardoVuelta(2007) 5,518,5‐ ‐ 4Mayo200930,7 ‐ SistemadeplatillosenbateaAPobradoCaramiñalJuanManuelPaisal (ProameixaFernández) Comunicaciónpersonal Discusión 255     TABLAVI.21:ComparacióndelosresultadosobtenidosporotrosautoresenlosdiversossistemasdeengordeensayadosconV.pullastra. L1:Longitudinicial.L2:Longitudfinal.W1:Pesoinicial.W2:Pesofinal.GL30:Tasadecrecimientomensualenlongitud.GW30:Tasadecrecimientomensualenpeso.          L1 (mm) L2 (mm) W1 (g) W2 (g)MesesFechainicioGL30GW30 SistemaLocalizaciónAutor 13,9 31,5 0,4505,86014,5Octubre2006 5,6 17,4 ParqueintermarealBarallobre Estetrabajo 12,5 28 ‐ ‐ 8Abril1996 4‐ParqueintermarealVilaxoán deCooetal. (1997) 12,8 35,5 ‐ ‐ 17Abril2007 6,1 ‐ParqueintermarealCarril Santamaríaetal. (2009) 9,2 31,6 0,1206,02412Septiembre2008 10,1 32,3 ParqueintermarealVilaxoán Oteroetal. (2010) 15,0 38,0 ‐ ‐ 13‐16Julio1998 12,5‐17,5 ‐Parquesubmareal Vilaxoán Abelláetal. (2001) 8,0 38,1 ‐ ‐ 11 ‐ 13,8 ‐Cajasconsubstratoenbatea APobradoCaramiñal Parada(2007) 13,2 25,2 0,3602,9277Abril1996 9,4 30,4 Cajassinsubstratoenbatea Noia Rama Villar yReyMéndez(1997) 6.Cultivoenelmedionatural 256 Discusión 257  Esdifícilcompararlosresultadosobtenidosporotrosautoresyaque,lastasas decrecimientoobtenidasencadaunodelossistemas,estaríaninfluenciadasporla tallainicialyfinaldelasemilla,olaépocadeinicioyduracióndelcultivo.  Aúnasí,seobservaquelosdatosobtenidosdelatasadecrecimientoenel preengorderealizadoenelintermareal,tantoenestetrabajocomoeneldeAbelláet al.(2001),soninferioresalosobtenidosenlosdiversossistemasrealizadosen completainmersión:minibolsas(estetrabajo),cestillos(GarcíaFernándezetal.,2001), semillerotradicionalyefluentedepiscifactoría(Guerraetal.,2007),contenedoresde flujoforzado(deSantiagoetal.,2007)ysistemadeplatillos(PérezCorvachoyPardo Vuelta,2007).  Latasadecrecimientoalcanzadaenestetrabajoenlafasedeengordeenun parqueintermarealdeBarallobre,esparecidaalaobtenidaenunparqueenVilaxoán (deCooetal.,1997)yotroenCarril(Santamaríaetal.,2009),ambostambiénen intermareal.Estosresultadosnosindicanqueseobtuvieronmenorestasasde crecimientoquelosobtenidospordiversosautoresensubmareal:Abelláetal.(2001) enunparquesumergido,Parada(2007)encajasconsubstratoyRamaVillaryRey Méndez(1997)encajassinsubstrato,ambosenbatea.Igualmente,parecenconfirmar quelafasedeengorde,aligualqueenelpreengorde,seacortasiserealizaenun sistemapermanentementesumergido.Enunparqueintermarealsenecesitarían alrededorde18mesesdeengorde,mientrasquelatallacomercialenunsistema submarealsealcanzaríaalos12mesesdesdelafinalizacióndelpreengorde.  Enbasealosresultadosobtenidosenestetrabajoyalosdeotrosautores,se estimaqueelcultivointegraldeestaespecie,desdelaobtencióndeldesovehastala tallacomercial,sepodríacompletaren18mesessiserealizaelpreengordeenun sistemaensuspensióndurantelaprimavera‐verano,ysecompletaconelengordeen unsistematambiénsumergido.Sielpreengordeyengordeserealizanensistemas intermareales,eltiempodecultivoaumentaríahastalos26meses.                          7.Conclusiones 265 7.CONCLUSIONES   CicloreproductivodeVenerupispullastraenelmedionatural:  1.‐Lacaracterísticaprincipaleslapresenciadegametosmadurosdurantetodoel año.Estoesdebidoaqueposeeungranperíododemadurezypuesta,abarcando principalmentelosmesesdesdefebreroajulio,alaausenciadeunperíododereposo, alaasincroníafoliculardentrodeunmismoindividuoyalaheterogeneidadde estadiosdentrodeunmismomuestreo.  2.‐Lacantidaddeglucógenoylípidosengónadaaumentaenlosmesesdeverano yotoñocoincidiendoconlagametogénesis,disminuyendoeninviernoyprimavera durantelaépocademáximamadurez.Laevolucióndelasproteínasengónadaes inversaaladelrestodecomponentes.Lacantidaddeproteínasydelípidostotalesen elrestodelindividuo,nopresentaningunarelaciónconlaevolucióndelciclo gametogénico.Encuantoalglucógeno,presentaunaevoluciónparalelaenlagónaday enelrestodelindividuo.  3.‐Lastrespoblacionesestudiadaspresentanunpatróndedesarrollosimilar.Las mayoresdiferenciassedanentrelasdospoblacionesdeOGrove,yaqueenladel bancointermarealelnúmerodeindividuosenmadurezdurantetodoelaño,esmenor queenlasubmareal.DestacatambiénlamayorprevalenciadePerkinsusolsenienla zonaintermarealdeOGroveconrelaciónalaszonassubmareales.  DesarrolloembrionarioylarvariodeV.pullastra:  4.‐Elestudiodeldesarrolloembrionariomediantemicroscopíaelectrónica, permiteobservarquelainvaginacióndelaglánduladelaconchasedesarrollaenel estadiodegástrulayqueenlatrocóforaseobservacomounahendiduraabiertaenla partedorsal,apartirdelacualsesecretaelperiostraco.Treintahorasdespuésdela fertilización,ésteacabaenvolviendolaspartesblandasdelalarvaformandolalarvaD, 7.Conclusiones 266 aunquetendránquepasarcuarentayochohorastraslafecundaciónparaquelas valvasesténtotalmentecalcificadas.  5.‐ Enlapostlarva,ademásdelaprodisoconchaIdeaspectopunteadoyla prodisoconchaIIconanillosconcéntricos,sedistingueladisoconcha,conunaslíneas decrecimientomásmarcadasy,adiferenciadeotrosbivalvos,lapresenciade microvellosidades.  ProtocolodecultivodeV.pullastraencriadero:  6.‐Sepuedenrecogerreproductoresencualquierbanconaturalgallegoyestación delaño.LacalidaddelaspuestasnoestárelacionadaconlosvaloresdelÍndicede Condición,lacomposiciónbioquímicayelíndicedemadurezdelosdistintoslotes usadoscomoreproductores.  7.‐Unmétodoefectivoparalainducciónalapuestaeslaestimulacióncon choquestérmicos,conunatemperaturamínimade12ºCymáximade20ºC.Sepueden mantenerlosreproductoresacondicionadosenelcriadero,duranteunmesomás, paraobtenervariaspuestasdeunmismolote,nomermandolacalidaddelasmismas.  8.‐Elcultivolarvariocomienza48hdespuésdelapuestayfinaliza aproximadamentealos18días,conuncrecimientomediodiarioentre7‐8µm/díay unasupervivenciamediadel56%.Alos25díasdeliniciodelcultivofinalizala metamorfosisylaspostlarvasdeunos40días,conunasupervivenciadel49%desdela fijación,presentanuntallade600‐700µm.Estosresultadosseconsiguenconuna temperaturadecultivode18±1ºCyunadietamixtaabasedediatomeasyflagelados.  CultivodeV.pullastraenelmedionatural:  9.‐Elpreengordeenelmedionaturalsemuestraviableconsemillaapartirde3,5 mmdelongitudretenidaentamizde2mm.Losresultadossondistintossegúnlos sistemasylaubicación;así,seobtuvieronmayorestasasdecrecimientoenelsistema ubicadoenbateaqueenelmismosistemaenlazonaintermareal.Duranteelinvierno 7.Conclusiones 267 latasadecrecimientoseralentiza,necesitandoeldobledetiempoqueenelrestodel añoparaalcanzarlamismatalladesiembra.Enbatealasalmejasfinalizanel preengordemenosparasitadasquelasdelintermareal.  10.‐Lasdiversaspartidasdesemillautilizadasenlafasedepreengorde presentaronunciertoniveldediferenciaciónsexual,indicandoqueéstaseinicióenel criadero.Laalmejababosanacidaencriaderoenelinvierno,madurasexualmente duranteelpreengordeenprimavera,observandoindividuosde6mesesdeedadcon unagónadatotalmentedesarrollada.  11.‐Existeuncrecimientodiferencialenlosprimerosestadiosdevida,alcanzando lashembrasmayoresporcentajesenlascabezasdelaspuestas.Elpuntoenelqueel crecimientodiferencialsemanifiestasueleserapartirdeltamañoT2(3‐4mm)yse mantienehastaquelashembrasreducensutasadecrecimiento,porloquelas diferenciasdetallaypesoentrelascabezas(mayoritariamentehembras)ylascolas (compuestaspormachos)alfinaldelpreengordesevareduciendo.  12.‐Elcultivointegraldeestaespecie,desdelaobtencióndeldesovehastalatalla comercial,realizandoelpreengordeyengordeenunsistemaintermareal,se completaríaen26meses.Encondicionesóptimas,esdecirsisecomienzael preengordeenprimaveraenunsistemaensuspensiónyserealizaelengordetambién ensuspensión,eltiempodecultivoseríade18meses.                                               8.BIBLIOGRAFÍA                       8.Bibliografía 271 8.BIBLIOGRAFÍA  ABELLÁ,E.;MARTÍNEZ,M.;SEBE,M.P.;ALCALDE,A.;MOSQUERA,P.yPARADA,J.M. 2001.Experienciadecultivodealmejababosa(Venerupispullastra): preengordeyengordeenlaRíadeArousa,Galicia.MonografíasdelInstituto CanariodeCienciasMarinas.4:118‐123.  ACKMAN,R.G.1989.Fattyacids.En:Ackman,R.G(ed).Marinebiogeniclipids,fatsand oils.CRCPress,Florida.1:103‐138.  ADACHI,K.1979.Seasonalchangesoftheproteinlevelintheadductormuscleofthe clam,Tapesphilippinarum(AdamsandReeve,1850)withreferencetothe reproductiveseasons.Comp.Biochem.Physiol.64A:85‐89.  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