Nudibranquios de la Comunitat Valenciana

ESCUELA DE DOCTORADO INTERNACIONAL DE LA USC Sara Pérez Polo Tesis doctoral Nudibranquios de la Comunitat Valenciana Santiago de Compostela, 2022 Programa de doctorado en Ciencias Marinas, Tecnología y Gestión TESIS DE DOCTORADO MOLUSCOS NUDIBRANQUIOS DE LA COMUNITAT VALENCIANA Sara Pérez Polo ESCUELA DE DOCTORADO INTERNACIONAL DE LA UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA PROGRAMA DE DOCTORADO EN CIENCIAS MARINAS, TECNOLOGÍA Y GESTIÓN SANTIAGO DE COMPOSTELA 2021 DECLARACIÓN DEL AUTOR DE LA TESIS NUDIBRANQUIOS DE LA COMUNITAT VALENCIANA D./Dña. ......................SARA PÉREZ POLO....................................................................................................... Presento mi tesis, siguiendo el procedimiento adecuado al Reglamento, y declaro que: 1) La tesis abarca los resultados de la elaboración de mi trabajo. 2) En su caso, en la tesis se hace referencia a las colaboraciones que tuvo este trabajo. 3) La tesis es la versión definitiva presentada para su defensa y coincide con la versión enviada en formato electrónico. 4) Confirmo que la tesis no incurre en ningún tipo de plagio de otros autores ni de trabajos presentados por mí para la obtención de otros títulos. En ...Narón......., ..23. de ..diciembre... de 2021.. Fdo. ........... AUTORIZACIÓN DEL DIRECTOR/TUTOR DE LA TESIS D./Dña. Victoriano Urgorri En condición de: Tutor/a y director/a Título de la tesis: Nudibranquios de la Comunitat Valenciana INFORMA: Que la presente tesis, se corresponde con el trabajo realizado por D/Dña Sara Pérez Polo, bajo mi dirección/tutorización, y a utorizo su presentación , considerando que reúne l os r equisitos exigidos en el R eglamento de Estudios de Doctorado de la USC, y que como director/tutor de esta no incurre en las causas de abstención establecidas e n la Ley 40/2015. En Ferrol, 23 de diciembre de 2021 Firma electrónica AUTORIZACIÓN DEL DIRECTOR/TUTOR DE LA TESIS D./Dña. Guillermo Díaz-Agras En condición de: Director/a Título de la tesis: Nudibranquios de la Comunitat Valenciana INFORMA: Que la presente tesis, se corresponde con el trabajo realizado por D/Dña Sara Pérez Polo, bajo mi dirección/tutorización, y a utorizo su presentación , considerando que reúne l os r equisitos exigidos en el R eglamento de Estudios de Doctorado de la USC, y que como director/tutor de esta no incurre en las causas de abstención establecidas e n la Ley 40/2015. En Ferrol, 23 de diciembre de 2021 Firma electrónica AGRADECIMIENTOS .................................................................................................................................................. 3 1. RESUMEN ...................................................................................................................................................... 11 2. INTRODUCCIÓN .............................................................................................................................................. 13 2.1. ORDEN NUDIBRANCHIA CUVIER, 1762 ....................................................................................................... 13 2.1.1. CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES ....................................................................................................... 13 2.1.2. MORFOLOGÍAS BÁSICAS..................................................................................................................... 14 2.1.3. SISTEMAS DE DEFENSA ....................................................................................................................... 14 2.1.4. SISTEMA NERVIOSO ............................................................................................................................ 16 2.1.5. APARATO DIGESTIVO ......................................................................................................................... 17 2.1.6. ALIMENTACIÓN .................................................................................................................................. 18 2.1.7. APARATO REPRODUCTOR .................................................................................................................. 18 2.1.8. CICLO VITAL ...................................................................................................................................... 21 2.1.9. CLASIFICACIÓN .................................................................................................................................. 22 2.2. EL ESTUDIO DE LOS HETEROBRANQUIOS EN EL MEDITERRÁNEO. .............................................................. 23 2.3. EL ESTUDIO DE LOS HETEROBRANQUIOS EN LA PENÍNSULA IBÉRICA ........................................................ 24 2.4. ESTUDIO DE LOS HETEROBRANQUIOS EN EL LEVANTE ESPAÑOL ................................................................ 26 3. OBJETIVOS ..................................................................................................................................................... 29 4. ÁREA DE ESTUDIO ......................................................................................................................................... 31 METODOLOGÍA ....................................................................................................................................................... 31 4.1. ÁREA DE ESTUDIO: EL LEVANTE ESPAÑOL Y PUNTOS DE MUESTREO .......................................................... 31 4.1.1. CASTELLÓ (LÁM. 4.1) ......................................................................................................................... 32 4.2.2. VALÈNCIA (LÁM.4.3) .......................................................................................................................... 33 4.1.3. ALACANT (LÁM. 4.6) .......................................................................................................................... 34 4.2. METODOLOGÍA DE ESTUDIO ....................................................................................................................... 37 4.2.1. MATERIAL RECOLECTADO ................................................................................................................ 37 4.2.2. RECOLECCIÓN DE MUESTRAS Y SEPARACIÓN DE FAUNA .................................................................. 37 4.2.3. ESTUDIO IN VIVO ................................................................................................................................. 38 4.2.4. ANESTESIADO Y FIJACIÓN .................................................................................................................. 39 4.2.5. MICROTOMOGRAFÍA COMPUTERIZADA ............................................................................................ 39 4.2.6. RECONSTRUCCIÓN MEDIANTE AMIRA 5.3.3. ..................................................................................... 42 4.2.7. MONTAJE DE RÁDULAS ...................................................................................................................... 42 5. RESULTADOS FAUNÍSTICOS ............................................................................................................................ 45 5.1. CATÁLOGO FAUNÍSTICO .............................................................................................................................. 45 5.2. ESTUDIO TAXONÓMICO ............................................................................................................................... 47 BERGHIA VERRUCICORNIS (A. COSTA, 1867) .................................................................................................... 49 CALORIA ELEGANS (ALDER & HANCOCK, 1845) ............................................................................................... 56 CRATENA PEREGRINA (GMELIN, 1791) ............................................................................................................. 61 FACELINA AURICULATA (MÜLLER, 1776) .......................................................................................................... 69 FAVORINUS BRANCHIALIS (RATHKE, 1806) ....................................................................................................... 76 8 FAVORINUS GHANENSIS EDMUNDS, 1968 ......................................................................................................... 83 DOTO ACUTA SCHMEKEL & KRESS, 1977 .......................................................................................................... 92 DOTO CORONATA (GMELIN, 1791) .................................................................................................................. 102 DOTO FLORIDICOLA SIMROTH, 1888 ............................................................................................................... 110 DOTO KOENNECKERI LEMCHE, 1976 ............................................................................................................... 117 DOTO ROSEA TRINCHESE, 1881 ....................................................................................................................... 124 CUTHONA CORREAI ORTEA, CABALLER & MORO, 2002 .................................................................................. 131 CUTHONA THOMPSONI GARCIA, LOPEZ-GONZALEZ & GARCIA-GOMEZ, 1991 ............................................... 138 AMPHORINA FARRANI (ALDER & HANCOCK, 1844) ........................................................................................ 144 CAPELLINIA DORIAE TRINCHESE, 1874 ........................................................................................................... 150 EUBRANCHUS VITTATUS (ALDER & HANCOCK, 1842) ..................................................................................... 157 EUBRANCHUS EXIGUUS (ALDER & HANCOCK, 1848) ...................................................................................... 164 EUBRANCHUS SP.1 ........................................................................................................................................... 171 CALMELLA CAVOLINI (VÉRANY, 1846) ............................................................................................................ 179 EDMUNDSELLA PEDATA (MONTAGU, 1815) ..................................................................................................... 185 FLABELLINA AFFINIS (GMELIN, 1791) ............................................................................................................ 191 TERGIPES TERGIPES (FORSSKÅL IN NIEBUHR, 1775) ...................................................................................... 199 TENELLIA ADSPERSA (NORDMANN, 1845) ....................................................................................................... 205 TRINCHESIA CAERULEA (MONTAGU, 1804) ..................................................................................................... 210 TRINCHESIA FOLIATA (FORBES & GOODSIR, 1839) ........................................................................................ 215 TRINCHESIA GENOVAE (O'DONOGHUE, 1929) ................................................................................................ 221 TRINCHESIA RUBRATA EDMUNDS, 1970 .......................................................................................................... 228 TRINCHESIA SP. 1 ............................................................................................................................................ 234 ANTIOPELLA CRISTATA (DELLE CHIAJE, 1841) ............................................................................................... 240 6. CONCLUSIONES ................................................................................................................................................. 247 BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................................................... 250 1. RESUMEN Los moluscos son un grupo faunístico que siempre ha despertado el interés de la sociedad, tanto por su aplicación gastronómica o por el valor coleccionista de sus conchas como por su gran variedad de formas y configuraciones anatómicas. Estas características los han convertido en un grupo ampliamente conocido y estudiado. Tienen un papel importante en muchas comunidades marinas, llegando a dominar en abundancia y diversidad en muchos ecosistemas. Dentro de los moluscos, los heterobranquios son un grupo de gran interés, debido a la pérdida o reducción de la concha, que han sustituido por una amplia variedad de sistemas defensivos, en gran parte de tipo químico, desarrollando una gran cantidad de principios activos que tienen gran interés bioquímico y farmacológico. En la Península Ibérica, a partir de la segunda mitad del siglo XX, se inició una gran producción de trabajos faunísticos sobre moluscos heterobranquios, que se centraban en el estudio de su biodiversidad, siendo Catalunya, Galicia, Canarias y Andalucía las zonas que mayor interés suscitaron. En pocos años este grupo quedó ampliamente descrito a lo largo de las costas ibéricas, a excepción de algunas zonas costeras como la Comunitat Valenciana que, a pesar de ser la primera en la que se publicó un estudio monográfico sobre heterobranquios (DE FEZ, 1974), no volvió a ser objeto de estudio hasta la publicación de una guía de fauna y flora del puerto de València (SÁEZ et al., 2008). Esto convierte el litoral levantino en un área de gran interés científico, debido a la escasez de información existente y a la posibilidad realizar estudios comparativos con los llevados a cabo en 1974 para comprobar, de esta manera, si la biodiversidad de moluscos se ha visto afectada por el aumento de la presión antrópica que ha tenido lugar a lo largo de las últimas décadas en esta zona del litoral peninsular. Este proyecto de tesis se centra, por lo tanto, en el estudio del orden de los nudibranquios dentro del sector central del levante español. Para ello, se pretende caracterizar la biodiversidad de los moluscos nudibranquios de la Comunitat Valenciana mediante un enfoque taxonómico, obteniendo, de esta forma, una visión global de la biodiversidad de la zona menos estudiada del levante ibérico. Así mismo, se ha completado mediante descripciones anatómicas la información sobre aquellas especies de mayor interés taxonómico, ya sea por tratarse de especies nuevas para la ciencia, nuevas citas para la Comunitat Valenciana o por ser especies escasamente citadas en la bibliografía científica existente. Para ello se han realizado diversos muestreos a lo largo de toda la costa de València, Castelló y Alacant mediante buceo con escafandra autónoma y apnea. El material obtenido se ha estudiado in vivo para la caracterización taxonómica y posteriormente se ha fijado para llevar a cabo posteriores estudios anatómicos. Por lo tanto, este proyecto de tesis se divide en cuatro bloques principales: - El primer bloque corresponde a los capítulos dos y tres. En el capítulo dos se introducen las peculiaridades y características principales del phylum Mollusca, centrándose sobre todo en la clase Gastropoda y más concretamente en las características del orden de los nudibranquios. Este capítulo también recoge un breve resumen de la historia del estudio de heterobranquios en el mediterráneo, en la Península Ibérica y en el levante español. El capítulo tres establece los objetivos de este proyecto de tesis. 12 - El segundo bloque corresponde al capítulo cuatro, que detalla el área de estudio, determinando los puntos de muestreo y las características de cada uno de ellos. Este capítulo también describe la metodología empleada para la manipulación y procesado de las muestras obtenidas. - El tercer bloque, correspondiente al capítulo cinco, expone los resultados del estudio morfológico y taxonómico de las especies encontradas. También se incluyen datos sobre la distribución y ecología de dichas especies. - El último bloque, correspondiente al capítulo seis, muestra las conclusiones obtenidas durante la realización del presente estudio. 2. INTRODUCCIÓN 2.1. ORDEN NUDIBRANCHIA CUVIER, 1762 2.1.1. Características principales El orden Nudibranchia es el grupo de moluscos gasterópodos heterobranquios más abundante y variado. Se caracterizan, principalmente, por la pérdida de la concha y opérculo en las primeras fases del desarrollo, por lo que sí están presentes en fases larvarias. La estructura corporal y de los órganos es muy variada dependiendo del grupo (DE FEZ, 1974; THOMPSON & BROWN, 1984; PICTON & MORROW, 1994; BEHRENS et al., 2005; KUITER & DEBELIUS, 2007; BIELECKI, 2011). Son organismos marinos de cuerpos generalmente alargados y muy coloridos. La cavidad del manto desaparece y se pierden los ctenidios, que son sustituidos por unas branquias secundarias expuestas. Estas branquias pueden ser dendríticas o laminares y pueden ser retráctiles, ocupar diferentes posiciones (normalmente en la parte posterior del cuerpo, rodeando al ano) y tener variaciones de tamaño, forma y coloración. Si las branquias son capaces de retraerse en una vaina o en el cuerpo del animal reciben el nombre de criptobranquias. Si por el contrario las branquias no pueden retraerse se denominan fanerobranquias. En algunos casos el intercambio gaseoso se produce a través del tegumento o de los ceratas. El manto es liso o con estructuras verrucosas o dendríticas, incluso algunos muestran largas prolongaciones dorsales. En algunos casos el manto puede hipertrofiarse alrededor de la zona cefálica formando un velo bucal, o incluso se puede desarrollar lateralmente a lo largo del cuerpo formando parapodios. Algunas especies pueden presentar espículas calcáreas en el manto. Las prolongaciones laterales del manto reciben el nombre de ceratas, los cuales tienen tres funciones principales: en primer lugar, están rellenos de líquido y propician el intercambio gaseoso (función respiratoria); en segundo lugar, albergan parte de la glándula digestiva, aumentando la superficie de absorción de nutrientes. Por último, en su extremo, se ubican los cnidosacos que almacenan nematocistos utilizados en la defensa contra predadores. Algunas especies carecen de estos cnidosacos y se desprenden de los ceratas como mecanismo de defensa. La cabeza, bien desarrollada, se sitúa en posición anterior, generalmente con dos pares de tentáculos sensoriales llamados rinóforos y tentáculos orales. Los rinóforos son quimiorreceptores y mecanorreceptores encargados de la detección de sustancias disueltas y de cambios de presión del medio. Los rinóforos pueden ser retráctiles (en vainas rinofóricas o cavidades del manto) y presentan formas, tamaños y coloraciones muy variadas, desde lisos a laminados, arborescentes o con pequeños bultos. En algunos organismos aparecen otocistos localizados en la región cefálica que contienen otolitos calcáreos, seguramente encargados de la detección de cambios gravitatorios e hidrostáticos para la orientación espacial. Tienen dos ojos situados en la parte anterior de la cabeza que se componen generalmente de una capa externa fibrosa, la esclerótida, cebada por delante por la córnea y tapizada por dentro por la coroides y la retina. En su interior se sitúa el cristalino, más o menos esférico o lenticular, y el humor vítreo. En ciertos grupos aparecen tentáculos cefálicos o bucales de función quimiorreceptora o mecanorreceptora. La rádula es muy variable y se trata de una estructura importante para la determinación taxonómica dentro del grupo. El pie, situado en la zona ventral, constituye el 14 órgano de locomoción principal. Es alargado, a veces relativamente ancho y estrechamente unido a la cabeza y a la masa visceral. El aparato excretor en nudibranquios recibe el nombre de cuerpo de Bojanus y consiste en una masa esponjosa y glándulas que comunican con un conducto al exterior. Está situado próximo a la zona pericárdica y excreta ácido úrico y carbonato cálcico principalmente (DE FEZ, 1974). El sistema circulatorio consta de un corazón, y arterias y venas conectadas mediante capilares y senos sanguíneos excavados en los tejidos. El corazón está compuesto por un ventrículo y una aurícula unidos por una válvula auroventricular. Las paredes del ventrículo son de tejido muscular entrecruzado. Se trata de organismos carnívoros muy especialistas, que predan principalmente sobre esponjas, cnidarios, ectoproctos, cirrípedos, tunicados, puestas de otros organismos e incluso crustáceos o pequeños peces. Algunos se alimentan de otros nudibranquios, registrándose incluso comportamientos caníbales (THOMPSON & BROWN, 1984; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997-99; BEHRENS et al., 2005; KUITER & DEBELIUS, 2007). Son exclusivamente marinos, de amplia distribución, abundantes en los rangos batimétricos superficiales y muy asociados al bentos. La mayor riqueza de este grupo la encontramos en las regiones tropicales, concretamente en el Indo-Pacífico (KUITER & DEBELIUS, 2007) aunque también hay representantes de regiones polares. 2.1.2. Morfologías básicas Existen dos tipologías de nudibranquios dependiendo de su morfología general y la disposición de las glándulas digestivas. El primer grupo corresponde a los doridina (lám. 2.1.a) que tienen una glándula digestiva compacta, un penacho de branquias en la parte posterodorsal, rodeando el ano, y una simetría bilateral bastante marcada. Suelen tener pequeñas glándulas o protuberancias en los bordes del manto conocidas como formaciones dérmicas del manto (MDF) y suelen almacenar secreciones químicas que emplean para defenderse. El otro grupo corresponde a los cladobranquios (lám. 2.1.b) que se caracterizan por la ausencia de branquias y la presencia de una glándula digestiva ramificada. El manto tiene unas proyecciones dorsales que reciben el nombre de ceratas y realizan el intercambio gaseoso como unas branquias secundarias. Dentro de los ceratas se encuentran ramificaciones de la glándula digestiva y, en algunas especies, en el ápice de los ceratas hay cnidosacos donde almacenan los nematocistos obtenidos de sus presas, que emplean para defenderse. Ambas morfologías poseen diferencias importantes a nivel evolutivo. Por ejemplo, el sistema de branquías dentro de los doridáceos es primario y se trata de branquias homólogas a las de los Cephalaspidea. En cambio, las branquias de los cladobranquios son secundarias (MINICHEV,1970). Por otro lado, el aparato reproductor de la gran mayoría de doridáceos es triaúlico, mientras que el de los cladobranquios es principalmente diaúlico (MINICHEV,1970). 2.1.3. Sistemas de defensa En nudibranquios se ha producido un gran desarrollo de variedades de sistemas defensivos ya que carecen de concha para pasar inadvertidos, huir del depredador, contratacarle o resultar no apetecible (ROS, 1976). Entre ellos podemos destacar: Cleptoplastia y Cnidoplastia: Incorporación de cloroplastos o nematocistos por parte de los nudibranquios, de manera que los orgánulos se ingieren intactos y pueden ser empleados por el animal de una forma más o menos efectiva. Los nematocistos son transportados a unas estructuras denominadas cnidosacos, donde se almacenan y se pueden emplear a posteriori como método defensivo (MARTIN et al., 2009, 2010). En la 15 cleptoplastia los cloroplastos se distribuyen por el tegumento, otorgando la coloración al animal y en algunas especies se emplean como reservorios de energía o incluso en algunos casos siguen activos y sintetizan compuestos. Un reciente estudio (OBERMANN et al., 2012) prueba la hipótesis de que los nematocistos que se transfieren son inmaduros y luego maduran en los cnidosacos. Coloraciones disruptivas y colores llamativos para resaltar del fondo y dar aspecto venenoso o tóxico. Estas especies en ocasiones se agrupan para que el color sea más aparente y el aprendizaje del depredador más eficaz (ROS, 1976). Glándulas y vacuolas epidérmicas que secretan sustancias tóxicas. Espículas calcáreas: algunos nudibranquios poseen espículas que pueden sintetizar de manera autónoma o pueden de las esponjas de las que se alimentan. Estas espículas las distribuyen sobre el tegumento o las agrupan formando “conchas secundarias” (ROS, 1976). Toxinas venenosas, sustancias ácidas o mal sabor en los tejidos. Además de estas sustancias, otras especies son capaces de secretar sustancias anestésicas o de inmunidad para protegerse de los nematocistos de los que se alimentan. Autotomía de partes del cuerpo. Normalmente los ceratas, autotomizados continúan moviéndose para confundir al depredador. En algunas especies es el borde del manto el que se autotomiza. Defensas crípticas como homocromía, que puede darse con la producción de pigmentos propios o mediante homocromía alimentaria, donde algunas especies incorporan los pigmentos de sus presas para adquirir una coloración similar y poder Lámina 2.1. Anatomías principales en nudibranquios correspondientes a dos grandes grupos: A.Doridina, B. Cladobranquia. 16 camuflarse. Algunas especies también presentan homotípia o imitación de la forma, que suele ir ligada a la homocromía. Reacciones de huida o evitación. Tanatosis: cuando el animal se siente amenazado se contrae y se queda inmóvil durante cierto tiempo. 2.1.4. Sistema nervioso El sistema nervioso (lám. 2.2) central en nudibranquios es eutineuro y forma un anillo ganglionar perisofágico formado por un número par de ganglios unidos por medio de comisuras o algunos ganglios se encuentran soldados parcial o totalmente (DE FEZ, 1974; THOMPSON & BROWN, 1984; BRUSCA& BRUSCA, 2005). Estos pares están simétricamente dispuestos y reciben el nombre de ganglios cerebroides, ganglios paleales o pleurales y ganglios pedios. Fuera de este anillo, pero relativamente próximos a él, se sitúan los ganglios bucales, conectados mediante nervios a los ganglios cerebroides. También existen los ganglios viscerales, que se encuentran a lo largo de los cordones nerviosos longitudinales y varían mucho en número según la especie. Lámina 2.2. Esquema del sistema nervioso general en nudibranquios, donde los ganglios cerebrales y pleurales se encuentran fusionados. cb: comisura bucal, ccp: comisura cerebro-pleural, cp: comisura pedía, gb: ganglios bucales, gcp: ganglio cerebro-pleural, gp: ganglios pedios, gr: ganglios rinofóricos, oj: ojos, ot:otolitos 23 Familia Samlidae Korshunova, Martynov, Bakken, Evertsen, Fletcher, Mudianta, Saito, Lundin, Schröl & Picton, 2017 Familia Tergipedidae Bergh, 1889 Familia Trinchesiidae F. Nordsieck, 1972 Familia Unidentiidae Millen & Hermosillo, 2012 Superfamilia Proctonotoidea Gray, 1853 Familia Curnonidae d’Udekem d’Acoz, 2017 Familia Dironidae Eliot, 1910 Familia Lemindidae Griffiths, 1985 Familia Proctonotidae Gray, 1853 Superfamilia Tritonioidea Lamarck, 1809 Familia Tritoniidae Lamarck, 1809 Suborden Doridina Infraorden Bathydoridoidei Superfamilia Bathydoridoidea Bergh, 1891 Infraorden Doridoidei Superfamilia Doridoidea Rafinesque, 1815 Famlia Actinocyclidae O’Donoghue, 1929 Familia Cadlinidae Bergh, 1891 Familia Chromodorididae Bergh, 1891 Familia Discodorididae Bergh, 1891 Familia Dorididae Rafinesque, 1815 Subfamilia Miamirinae Bergh, 1891 Superfamilia Onchidoridoidea Gray, 1827 Familia Akiodorididea Millen & Martynov, 2005 Familia Calycidorididae Roginskaya, 1972 Familia Corambidae Bergh, 1871 Familia Goniodorididae H. Adams & A. Adams, 1854 Familia Onchidorididae Gray, 1827 Superfamilia Phyllidioidea Rafinesque, 1814 Familia Dendrodorididae O’Donoghue 1924(1864) Familia Mandeliidae Valdés & Gosliner, 1999 Familia Phyllidiidae Rafinesque, 1814 Superfamilia Polyceroidea Alder & Hancock, 1845 Familia Aegiridae P.Fischer, 1883 Familia Hexabranchidae Bergh, 1891 Familia Okadaiidae Baba, 1930 Familia Polyceridae Alder & Hancock, 1845 2.2. EL ESTUDIO DE LOS HETEROBRANQUIOS EN EL MEDITERRÁNEO. Desde el inicio de las grandes investigaciones marinas, el Mediterráneo ha sido una de las áreas más estudiadas debido a su gran biodiversidad y a ser un mar de fácil acceso. El mar Mediterráneo es un punto caliente en lo que a la biodiversidad marina se refiere (BIANCHI & MORRI, 2000), albergando el 10% de especies marinas mundiales cuando solo ocupa el 0.82% de la superficie oceánica (BERGBAUER & HUMBERG, 2002). Esta elevada biodiversidad, en comparación con otras zonas marinas, puede deberse, en parte, a que se trata de una zona muy estudiada, ya que ha captado la atención de naturalistas e investigadores desde hace siglos por su posición estratégica y sus características. Se estima que la fauna mediterránea está compuesta 24 por un 67% de taxones de origen atlántico, un 5% de origen oriental (llamadas especies lessepsianas, introducidas por el Canal de Suez) y un 28% de taxones endémicos (FREDJ et al., 1992; BLONDEL et al., 2010). Así, por ejemplo, se estima que el 87% de la fauna mediterránea actual está presente en el Mediterráneo occidental, el 49% en el Adriático y el 47% en la cuenca oriental (TEMPLADO, 2011). Estas características propiciaron grandes campañas oceanográficas centradas en el estudio del Mar Mediterráneo. De estas grandes campañas que tuvieron lugar en el siglo XIX destaca el trabajo de August David Krohn (1803-1891) y Amandus Philippi (1808-1904), que describieron varios ejemplares de heterobranquios dentro de estudios más amplios para investigar la fauna marina global (GROEBEN, 1996; GOSLINER et al., 2008). Además de estos estudios itinerantes, aparecieron varios centros de investigaciones situados en la costa centrados en el estudio de la fauna marina. Entre los investigadores que estudian heterobranquios dentro de estas instituciones destacan en Nápoles Giuseppe Saverio Poli (1746–1825) y Stephano delle Chiaje (1794–1860) (GOSLINER et al., 2008). Saveiro comenzó un estudio llamado “Testacea utriusque Siciliae eorumque anathome tabulis aeneis” que a su muerte quedó incompleto y fue delle Chiaje quien lo completó. Este trabajo no está centrado en el estudio de heterobranquios, pero hay bastante información sobre ellos. Tras este trabajo aparecieron más investigadores que centraron sus estudios en heterobranquios, como Oronzo Gabriele Costa (1775-1849) y Achille Costa (1823-1867) o Salvatore Trinchese (18361897). Trinchese se convirtió en uno de los opistobranquiólogos más importante del Mediterráneo, con varios trabajos centrados en el sistema nervioso de los moluscos (TRINCHESE, 1863, 1868) y varias descripciones de especies de heterobranquios (TRINCHESE, 1874, 1881). Dentro de sus numerosos trabajos hay que destacar el que realizó en el puerto de Génova sobre nudibranquios aeolidáceos (TRINCHESE, 1874). Con el paso de los años, la mayoría de los investigadores de la estación de Nápoles se centraron en el estudio de heterobranquios. Entre ellos destaca Rudoplh Bergh, que centró sus estudios en sistemática de heterobranquios (BERGH, 1870, 1882). Francia es otro país que cuenta con varios centros de investigación marinos dentro del Mediterráneo. Dentro de los investigadores franceses centrados en el estudio de heterobranquios destacan Antoine Risso (1777-1845) y Albert Vayssière (1854-1942). Risso se centró en taxonomía descriptiva (RISSO, 1818, 1826). Vayssière fue un malacólogo y entomólogo muy reconocido. Realizó multitud de trabajos sobre ecología, biogeografía y estudios comparativos de la fauna atlántica y mediterránea de las costas francesas, pero sobre todo se centró en los heterobranquios, con más interés en los del Golfo de Marsella, estudiando su filogenia y biología general (VAYSSIÈRE, 1903,1919). En el siglo XX, los trabajos sobre heterobranquios en el mediterráneo continuaron y entre los investigadores de esta época destaca Luise R. Schmekel. Su estudio de centra en Sacoglosos y Nudibranquios mediterráneos. Su obra más importante es Opisthobranchia des Mittelmeeres: Nudibranchia und Saccoglossa, junto a Adolf Portmann, donde se describen multitud de especies mediterráneas detallando la anatomía interna, externa y un breve estudio de su ecología (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982). Además, Schmekel fue la mentora de Heike Wägele, una de las científicas más importantes de la actualidad en el estudio de heterobranquios (WÄGELE, 1991; WÄGELE et al., 2003, 2014). 2.3. EL ESTUDIO DE LOS HETEROBRANQUIOS EN LA PENÍNSULA IBÉRICA En la Península Ibérica, el estudio de los heterobranquios no recibió mucha atención de los naturalistas y científicos españoles hasta bien entrada la segunda mitad del siglo XX (BALLESTEROS, 2007). La primera obra exclusiva sobre el estudio de los heterobranquios se 25 produce en el siglo XIX con la obra póstuma de Siro de Fez "Ascoglosos y Nudibranquios de España y Portugal" en 1974 (DE FEZ, 1974) y desencadena una gran producción de trabajos posteriores sobre heterobranquios. Antes del trabajo de Siro de Fez algunos autores ya habían contribuido al estudio de algunas especies de heterobranquios dentro de trabajos más amplios sobre fauna marina (HIDALGO, 1886, 1916; VAYSSIÈRE, 1903,1919, PRUVOT,1901; NOBRE, 1886). A partir de los años 70 aparecen varios investigadores con una gran contribución al estudio de heterobranquios: Joandomenèc Ros (Universidad de Barcelona, 1973), Manuel Ballesteros (Universidad de Barcelona, 1980), Victoriano Urgorri (Universidad de Santiago, 1981) y Jesús Ángel Ortea (Universidad de Oviedo, 1977). Ros centró sus investigaciones en el estudio de los heterobranquios del litoral ibérico, estudiando desde su ecología y comportamiento hasta sus estrategias defensivas (ROS, 1974, 1976, 1978, 1981, 1982; ROS & ALTAMIRA, 1977). También publicó un listado de heterobranquios (ROS, 1975) de la zona del litoral ibérico. Ballesteros realizó la tesis sobre heterobranquios (BALLESTEROS, 1985) y continuó sus estudios sobre heterobranquios centrándose en las costas catalanas y baleares (BALLESTEROS, 1984, 2007). También ha trabajado con ejemplares antárticos (BALLESTEROS & ÁVILA, 2006). Victoriano Urgorri, comenzó sus investigaciones caracterizando la biodiversidad de heterobranquios en gran parte de la costa gallega (URGORRI, 1981). Su labor investigadora continuó centrada, principalmente, en el estudio de heterobranquios (ORTEA & URGORRI, 1981; URGORRI & BESTEIRO, 1983, 1984, 1986; URGORRI et al., 2011), llegando a colaborar con investigadores portugueses (CALADO & URGORRI, 2001). Por último, Ortea se dedicó al estudio de aguas asturianas. Una vez finalizada su tesis (ORTEA, 1977) continuó estudiando heterobranquios (ORTEA & BOUCHET, 1989; ORTEA & URGORRI, 1981), pero ampliando el área geográfica de sus estudios: Islas Canarias, Cabo verde, Cuba y Costa Rica (ORTEA et al., 1997, 2002, 2014). Una década más tarde los estudios sobre heterobranquios continuaron, incluyendo nuevos investigadores como José Templado, Ángel Antonio Luque y José Carlos García-Gómez. Templado centró su estudio en los gasterópodos del sudeste de la Península Ibérica (TEMPLADO, 1982, 1983, 1984; TEMPLADO et al., 1988), Luque se centró en los gasterópodos de Granada y Málaga (LUQUE, 1984) y García-Gómez en el estrecho de Gibraltar (GARCÍA-GÓMEZ, 1984; GARCÍA-GÓMEZ & THOMPSON, 1990; GARCÍA-GÓMEZ et al., 1989; GARCÍA-GÓMEZ, 2000). Más tarde, al final de los años ochenta, Antonio Media (1986), Francisco José García (1987) y Juan Lucas Cervera (1988) también se centraron en el estudio de heterobranquios (TEMPLADO, 2011). Cabe destacar los trabajos de Cervera en la zona andaluza (CERVERA, 1988; CERVERA et al., 1986, 1987; CERVERA & GARCÍA-GÓMEZ, 1989). En la zona de Murcia destaca la figura de Arnaldo Marín (MARÍN, 1988; MARÍN & ROS, 1987, 1991, 2004), que centró sus trabajos en sacoglosos principalmente. En los noventa aparece una nueva oleada de heterobranquiólogos. Eugenia Martínez (MARTÍNEZ, 1996), por ejemplo, se centra en el estudio de los Anaspidea atlánticos. Ángel Valdés (VALDÉS, 2003; VALDÉS & BOUCHET, 1998; VALDÉS et al., 1996) también se centra en el estudio de la zona atlántica, principalmente en el grupo Porostomata. En la Universidad de Barcelona destacan los estudios sobre ecología química llevados a cabo gracias a Conxita Ávila, que continúan actualmente (ÁVILA, 1993; ÁVILA, 2020). En Portugal destacan Gonçalo P. Calado y Manuel Antonio E. Malaquias. Calado (CALADO, 2002) realizó su tesis sobre el género Calma Alder & Hancock, 1855 y luego continuó sus estudios por las costas portuguesas (CALADO & URGORRI, 1999, 2001; CALADO et al., 1999, 2003, 2012). Malaquias centró sus trabajos en taxonomía y ecología (MALAQUIAS, 1996, 2001; MALAQUIAS & CALADO, 1995; MALAQUIAS et al., 1996). 26 Otros investigadores, como Felipe Aguado (AGUADO, 2000) y Francisca GiménezCasalduero (GIMÉNEZ-CASALDUERO, 1997; GIMÉNEZ-CASALDUERO et al., 2001, 2011) realizaron estudios sobre ecología alimentaria y defensiva. Por otro lado, Marta Pola (POLA & GOSLINER, 2010; POLA et al., 2003, 2015, 2019) y Cristina Grande (GRANDE & ZARDOYA, 2004a-b; GRANDE et al., 2004) se centraron en el estudio de la sistemática y la filogenia molecular. Otro investigador relevante es Jesús S. Troncoso, que centro su estudio en heterobranquios antárticos (TRONCOSO et al., 1996, 1998). También destacan Francisco J. García (GARCÍA, 1987) e Inés Martínez-Pita (PITA, 2005). Todos estos trabajos convirtieron a las costas españolas, casi de la noche a la mañana, en las más conocidas de todo el continente europeo en lo que a estos moluscos se refiere. El gran número de tesis doctorales y de artículos científicos publicados en referencia a todas las zonas costeras de la Península Ibérica ha hecho necesaria la actualización del catálogo varias veces, siendo la última en 2004 y citando un total de 523 especies (CERVERA et al., 2004). Desde entonces y hasta la actualidad, los trabajos basados en heterobranquios siguen siendo diversos y abundantes a lo largo de la Península Ibérica. Por ejemplo, SÁNCHEZ-TOCINO en 2003 publicó un estudio de los Doridoidea de la costa granadina o GUTIÉRREZ, en 2008, que centró su tesis doctoral en el estudio de heterobranquios de la Bahía de Santander. En Andalucía también hay actividad importante sobre heterobranquios siendo el trabajo de IBÁÑEZ-YUSTE et al. (2012) una de las aportaciones más recientes. Del mismo modo que sucede a nivel europeo, los estudios actuales se centran más en sistemática y ecología que en estudios taxonómicos propiamente dichos, a pesar de que aún queda mucho trabajo que realizar en esta área. 2.4. ESTUDIO DE LOS HETEROBRANQUIOS EN EL LEVANTE ESPAÑOL En el levante español, más concretamente en la Comunitat Valenciana, la obra pionera en el estudio de heterobranquios fue el ya citado trabajo de SIRO DE FEZ (1974) en el Port de València (lám 2.5). Se trata de una obra póstuma, sacada a la luz gracias a la Institución Alfonso el Magnánimo, del Sr. Ignacio Docavo Alberti, vicepresidente en aquella época de la institución, y de la edición por parte de la Diputació Provincial de València (BALLESTEROS, 2014). Siro de Fez dedicó varios años (1943-1947) a la recolección y estudio de heterobranquios de las aguas del Port de València mediante muestreos muy rudimentarios, basándose sobre todo en la recolección de algas y otros organismos situados a escasos metros de profundidad. Capturó, describió, diseccionó y estudió el desarrollo embrionario y larval de aproximadamente 31 especies de sacoglosos y nudibranquios. La taxonomía y nomenclatura de los resultados obtenidos y publicados es anticuada para la época y no está contrastada con las publicaciones y los especialistas contemporáneos, lo que demuestra lo poco conectado que estaba el autor con los especialistas y estudios de la época. A pesar de ser de las primeras zonas españolas estudiadas, el levante español Lámina 2.5. Portada de la obra póstuma de SIRO DE FEZ (1974). 27 actualmente es una de las más desconocidas. Escasos son los trabajos que han tratado de corroborar, completar o continuar el conocimiento de la diversidad de la costa valenciana (SÁEZ et al., 2008). La costa valenciana tiene un predominio de ecosistemas de playas arenosas en los primeros metros de costa, por lo que no resulta tan atrayente como otras zonas más al norte o sur de la propia comunidad autónoma para el estudio de heterobranquios. Actualmente, los nuevos registros sobre heterobranquios de la Comunitat Valenciana se realizan por parte de grupos de fotógrafos o buceadores recreativos (OPK, 2020; GROC, 2020), pero no son contrastadas ni publicadas por especialistas. Por ello es necesaria la realización de trabajos de recolección, estudio y contraste de información de heterobranquios en esta franja de costa mediterránea, ya que apenas hay estudios sobre su diversidad y se trata de una costa diversa con gran potencial, tanto de ecosistemas naturales. como de ecosistemas artificiales a partir de estructuras antrópicas, como ocurre en el interior de los puertos. 3. OBJETIVOS El objetivo principal de este proyecto de tesis es el estudio de la biodiversidad de heterobranquios nudibranquios a lo largo de la Comunitat Valenciana mediante un enfoque taxonómico morfológico. Para el desarrollo del proyecto se plantean los siguientes objetivos específicos: - Estudio in vivo de la anatomía externa, comportamiento y hábitat de las especies recolectadas durante los muestreos. - Estudio de la anatomía interna mediante el uso de un sistema de microtomografía computerizada de rayos X (Micro-CT), poniendo el foco de interés en la reconstrucción del aparato reproductor, digestivo y nervioso. - Estudio de las rádulas mediante microscopia óptica y en algunos casos electrónica. - Contraste de la información obtenida en este proyecto con los estudios relacionados publicados hasta la fecha. 4. ÁREA DE ESTUDIO METODOLOGÍA 4.1. ÁREA DE ESTUDIO: EL LEVANTE ESPAÑOL Y PUNTOS DE MUESTREO El levante español corresponde a la costa occidental mediterránea comprendida entre la Comunitat Valenciana y la Región de Murcia. Se caracteriza por el predominio de hábitats arenosos, con un hidrodinamismo bajo y algunas áreas rocosas. Este estudio se centra exclusivamente en la Comunitat Valenciana. Los muestreos se realizaron en 28 puntos, siete de ellos pertenecientes a la provincia de Castelló, cuatro a la de València y los diecisiete restantes a la provincia de Alacant. Los factores empleados para la selección de los puntos muestreados corresponden a los siguientes criterios por orden de importancia: - Accesibilidad desde la costa a las zonas a muestrear. - Zonas con ambientes típicamente comunes para heterobranquios. - Variedad de hábitats. A continuación, se enumeran y describen brevemente los puntos seleccionados para la recolección de los ejemplares utilizados en esta tesis (los puntos marcados con (*) corresponden a puntos muestreados donde no se encontró ningún ejemplar): CASTELLÓ SI Serra d’Irta 40° 18’ 53.4’’ - N 0° 21’ 26.1’’ E CM Cala del Moro, Peñíscola 40° 13’ 46.2” N - 0° 16’ 21.5” E CE El enchufado 40° 05’ 05.1” N - 0° 08’ 50.1” E PC Port de Castelló 39° 58’ 26.5” N - 0° 01’ 01.0” E TC Torre de la Cordà 40° 03’ 59.1” N 0° 07’ 33.2” E MS Cala Mundina, Serra d’Irta 40° 15’ 36.1” N - 0° 18’ 15.2” E (*) La Renegà 40° 03' 41.5" N - 0° 07' 03.3" E VALÈNCIA FC Far de Cullera 39° 11' 14.5" N - 0° 13' 05.6" W PV Marina Reial, Port de València 39° 27' 42.6" N - 0° 19' 00.4" W CN Club Naùtic de València 39° 25' 51.8" N - 0° 19' 58.3" W PS Port de Sagunt 39° 39' 07.2" N - 0° 12' 18.7" W ALACANT MX Ca la Mona, Xàbia 38° 47' 58.4" N - 0° 11' 51.0" E IT Illa de Tabarca 38° 09' 40.0" N - 0° 27' 31.7" W IB Illa de Benidorm 38° 30' 07.2" N - 0° 07' 59.4" W PI Tres Pedres, Calp 38° 37' 53.3" N - 0° 04' 32.0" E AC Los Arcos, Calp 38° 37' 51.9" N - 0° 04' 40.9" E PA Port Altea 38° 35' 27.5" N - 0° 03' 18.9" W LH La Higuera 38° 37' 59.0" N - 0° 04' 58.3"E PN Pared negra 38° 44' 43.4" N - 0° 13' 58.8" E CP Cala Portixol 38° 45' 27.0" N - 0° 13' 22.2" E VJ Port Vila Joiosa 38° 30' 30.6" N - 0° 13' 09.0" W (*) Port Alacant 38° 20' 09.8" N - 0° 29' 15.6" W (*) Port Denia 38° 50' 42.1" N - 0° 06' 45.8" E (*) La Granadella 38° 43' 43.7" N - 0° 11' 47.4" E (*) Cala Cuartel (Santa Pola) 38° 12' 36.8" N - 0° 30' 26.1" W (*) Cala la Ermita (Santa Pola) 38° 13' 32.6" N - 0° 30' 35.9" W (*) Torrevieja 37° 58' 45.0" N - 0° 39' 48.9" W (*) Port Santa Pola 38° 11' 19.9" N - 0° 33' 46.5" W 32 Algunos puntos se han muestreado mayor número de veces que otros, debido a la accesibilidad, a las condiciones atmosféricas o por razones logísticas. Por lo tanto, la abundancia de cada punto y su cantidad de especies registrada no es significativa para estudios cuantitativos. 4.1.1. Castelló (lám. 4.1) Serra d’Irta [SI] (40° 18’ 53.4’’ N.- 0° 21’ 26.1’’ E) Punto situado dentro del parque natural de la Serra d’Irta. Hábitat compuesto por un substrato rocoso entre los que se desarrollan formaciones sedimentarias de cantos, guijarros y arenas. El muestreo realizó mediante apnea entre cero y seis metros de profundidad, sobre sustrato rocoso. Cala del Moro [CM] (40° 13’ 46.2” N - 0° 16’ 21.5” E) La Cala del Moro es una playa arenosa con multitud de rocas, de unos cuarenta metros de longitud y unos diez metros de zona intermareal. Se sitúa dentro de una zona protegida de la Costa Azahar, en Peñiscola. Suele tener oleaje moderado. Los muestreos realizados en esta zona fueron mediante apnea y se centraron en las especies situadas en los parches rocosos dentro de la playa. El enchufado [CE] (40° 05’ 05.1” N - 0° 08’ 50.1” E) Se trata de un tramo de costa rocoso en la localidad de Orpesa del Mar, de unos seis-ocho metros de profundidad en la zona más próxima a la orilla. Se trata de una zona rocosa con multitud de zonas semiesciáfilas, debido a la forma del terreno. Los muestreos se realizaron mediante apnea, centrándose en la zona menos iluminada del fondo. Port de Castelló [PC] (39° 58’ 26.5” N - 0° 01’ 01.0” E) La zona muestreada en el Port de Castelló corresponde a la dársena interior, con un calado máximo de ocho metros, transitado generalmente por embarcaciones deportivas. Se recolectaron muestras de cabos entre dos y tres metros de profundidad y en hidrozoos y otros invertebrados adheridos a los muelles y embarcaciones mediante apnea o sumergiéndose parcialmente en los muelles. Lámina 4.1. Puntos de muestreo situados en la provincia de Castelló. SI: Serra d’Irta TC: Torre de la Cordà MS: Cala Mundina RN: La Renegà CM: Cala del Moro PC: Port Castelló CE: El enchufado 39 órganos sensoriales y de los internos que se pueden observar por transparencia. También se detallaron bien la posición y movilidad de los ceratas, la posición del cuerpo en reposo y en movimiento, las variaciones en la forma de los ceratas cuando son contraídos y relajados, etc. Para mayor precisión y mejor obtención de datos se realizaron fotografías y videos de todo el material estudiado mediante una Lupa Leica M165C con cámara incorporada (lám. 4.10). 4.2.4. Anestesiado y fijación Debido a la delicadeza de los ejemplares fue necesario un meticuloso tratamiento previo a la fijación. Los ejemplares se anestesiaron antes de ser fijados porque los nudibranquios tienen gran facilidad de retracción o de autotomización de algunas partes (principalmente los ceratas) si se estresan o se realiza una fijación directa. Con el anestesiado previo es posible relajar al animal, lo que facilita la correcta fijación, tratando de mantener la posición natural del ejemplar y mejorando la calidad de la muestra tras la conservación. Para la relajación y anestesiado de las muestras se empleó frío y/o cloruro de magnesio (Mg₂Cl) al 7%, dependiendo del ejemplar. La dilución del cloruro se realizó en una proporción 1-1 de agua dulce y agua de mar para que sea más efectiva. La aplicación del anestésico a base de cloruro debe realizarse de manera paulatina y nunca añadiendo grandes cantidades de manera brusca para obtener unos resultados óptimos y evitar una respuesta adversa por parte de los ejemplares. Cuando se observa que el nudibranquio se encuentra relajado se procede a su fijación. Para el fijado de las muestras se ha empleado líquido de BOUIN, un potente fijador tisular, descrito inicialmente por Pol Andre Bouin a finales del siglo XIX. Es muy utilizado en histología ya que es muy útil para tejidos blandos y embriones, y preserva bien el núcleo y el glucógeno. También actúa como mordiente que ayuda a la tinción con determinados colorantes. Su capacidad fijadora se basa en la acción del ácido pícrico, que provoca precipitación de moléculas, y del formaldehído, que forma entrecruzamientos entre proteínas del tejido. El líquido de BOUIN se aplicó mediante goteo para evitar contracciones bruscas de las muestras y evitar la mala fijación. Una vez muerto el animal se pasa al líquido fijador durante unas 24-48 horas y luego se realiza una serie de lavados con etanol para eliminar el exceso de fijador y se conserva en etanol al 70%. 4.2.5. Microtomografía computerizada Para el estudio de la anatomía interna se aplicaron técnicas de microtomografía computerizada (Micro-CT). La microtomografía computerizada es una técnica no destructiva que permite la obtención de imágenes en dos y tres dimensiones, sin comprometer el estado de la muestra ni destruirla durante el proceso. Para la realización de esta técnica es necesario preparar los ejemplares, mediante una deshidratación y tinción previa. En primer lugar, las muestras se deshidratan en baños de etanol sucesivos de 70º-80º-90º-96º grados. Cada baño Lámina 4.10. Lupa Leica M165C con cámara incorporada. 40 tiene una duración de 24 horas. Una vez deshidratadas las muestras se introducen en Iodina al 1% con base de etanol de 96º durante tres días para teñir las partes blandas y mejorar el contraste de las imágenes (lám. 4.11). Una vez está la muestra teñida se realiza un baño en etanol de 96º para eliminar el exceso de Iodina y se introduce en HDMS (Hexametildishilazano) durante dos horas y luego se extrae y se deja secar durante 24-48 horas (ALBA-TERCEDOR & SÁNCHEZTOCINO, 2011; FAULWETTER et al., 2013). Los escaneos se realizaron con el microtomógrafo Skyscan 1172 (lám. 4.12.) usando los siguientes parámetros durante el escaneo: - 55kv - 165 µA - Sin filtro - Diversos tamaños de píxel según la especie (Tabla 4.1, 4.2) - La rotación de las imágenes fue de 360º. Las imágenes se han reconstruido con el software NRecon y una vez reconstruidas se han limpiado con el software CTAnalyzer. Para la correcta visualización de las imágenes se emplearon los softwares Data Viewer y CTVox (lám. 4.13). El estudio de las imágenes se centró principalmente en el tercio anterior de los ejemplares, donde se sitúa el aparato reproductor, el sistema nervioso y gran parte del aparato digestivo. El aparato reproductor de los heterobranquios es esencial para la correcta identificación de las especies, sobre todo en el estudio de la forma y tamaño de las diferentes estructuras (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982). La reconstrucción tridimensional de las diversas estructuras internas se ha llevado a cabo mediante el programa Amira 5.3.3. Especie Tamaño píxel (µm) Doto acuta (1) 1,35 Doto acuta (2) 0,67 Doto acuta (3) 1,28 Doto acuta (4) 1,56 Doto coronata 1,46 Doto floridicola 1,69 Doto koenneckeri 2,24 Doto rosea 1,76 Antiopella cristata 1,15 Lámina 4.12. Microtomógrafo Skyscan 1172. Lámina 4.11. Aeolidáceo en Iodina al 1% durante la preparación para la microtomografía computerizada. Tabla 4.1. Tamaño de píxel (voxel size) de las especies de Dendronotoidea Allman, 1845 y Proctonotoidea Gray, 1853 ordenadas según el orden de aparición en el trabajo. 41 Especie Tamaño píxel (µm) Especie Tamaño píxel (µm) Berghia verrucicornis 1,28 Eubranchus sp. 1 1,49 Caloria elegans 0,95 Tergipes tergipes 0,95 Cratena peregrina 6,78 Tenellia adspersa 0,74 Facelina auriculata 1,28 Trinchesia caerulea 0,95 Favorinus branchialis 1,28 Trinchesia foliata 0,95 Favorinus ghanensis 2,17 Trinchesia genovae 1,49 Cuthona correai 0,95 Trinchesia rubrata 1,49 Cuthona thompsoni 1,69 Trinchesia sp.1 0,95 Amphorina farrani 0,75 Calmella cavolini 1,49 Capellinia doriae 1,28 Flabellina affinis 6,24 Eubranchus vittatus 0,95 Edmundsella pedata 1,08 Eubranchus exiguus 0,95 Lámina 4.13. Imágenes extraídas de la reconstrucción de Doto floridicola Simroth, 1888 con el software CTVox. Tabla 4.2. Tamaño de píxel (voxel size) de las especies de Aeolidioidea ordenadas según el orden de aparición en el trabajo. 42 4.2.6. Reconstrucción mediante Amira 5.3.3. El software Amira 5.3.3. es una herramienta imprescindible para visualizar, analizar y presentar datos complejos en 3D y 4D. Las imágenes obtenidas mediante el microtomógrafo corresponden a unos 2.000-3.000 cortes histológicos del ejemplar. En primer lugar, estas imágenes se analizan visualmente para tener una idea de la situación y anatomía de cada uno de los órganos. Una vez se obtiene esta información previa, mediante el programa Amira 5.3.3. se pinta imagen a imagen los distintos órganos internos. Para cada una de las estructuras se empleó una capa distinta, a la cual se le asigno un color distinto según la estructura. A continuación, se generó una imagen tridimensional de las estructuras, mediante la interpolación de las capas pintadas y se trataron con varios filtros para suavizarlas, eliminar posibles errores debidos a la transformación trimidensional y comprimirlas. 4.2.7. Montaje de rádulas Para la preparación y montaje de las rádulas, se ha utilizado el siguiente procedimiento: en primer lugar, se introduce el ejemplar del que se va a extraer la rádula en potasa (KOH) al 5% y se deja una media hora para que inicie el proceso de digestión de la materia orgánica. El proceso se puede acelerar si calentamos la muestra con un mechero Bunsen. Una vez está empezando a digerir, se lava la muestra con etanol al 70% y se pasa la muestra a Negro de Clorazol para que tiña las partes quitinosas. Se deja durante unos 30 minutos. Una vez terminada la tinción se lava el ejemplar con etanol de 70% y se introduce en potasa (KOH) y se sella el recipiente. Se introduce en una estufa a 40º y se deja digerir entre 12-24 horas. Una vez la materia orgánica ha sido disuelta, se realizan varios lavados con agua y la preparación esta lista para iniciar el montaje tanto para microscopía óptica como para eléctrónica (lám. 4.14.). 4.2.7.1 Montaje para microscopio óptico. En primer lugar, se separa la rádula de las mandíbulas y se introducen todas las partes en etanol de 70º para deshidratar la muestra. Se montan las rádulas y las mandíbulas sobre una placa, se fija con líquido de Hoyer, se añade el cubre y se sella. La preparación se pone en la estufa durante 24-48 horas para terminar de deshidratarlo y fijarlo. 4.2.7.2. Montaje para microscopio electrónico. Se introduce la muestra en un pocillo y se separan las mandíbulas de la rádula. Se introduce en HMDS durante dos horas para deshidratar la muestra. Una vez deshidratado se procede a montar en el soporte para microscopia electrónica. Una vez montado se fija con dimetil hidantoína formaldehido (DMHF) que es soluble en agua para poder revertir el proceso de ser necesario. La DMHF es una resina sintética soluble en agua, incolora, ideal para montaje de genitalias de insectos y rádulas de moluscos. Una vez Lámina.4.14. Rádula digerida, teñida y preparada para el proceso de montaje. 43 montada la rádula en el soporte se le añade un cubreobjetos y se sella con esmalte de uñas transparente para evitar la degradación y que la muestra se estropee. 5. RESULTADOS FAUNÍSTICOS En el presente capítulo se muestran los resultados del estudio anatómico llevado a cabo con los ejemplares encontrados durante los muestreos realizados en la Comunitat Valenciana. Se realiza un inventario faunístico de acuerdo con la propuesta taxonómica de BOUCHET et al. (2017), respaldada por WORMS (2020) y BALLESTEROS et al. (2012-2020) y ordenando las familias, géneros y especies alfabéticamente. Todos los ejemplares estudiados se han identificado a nivel de especie. Dentro de la descripción de cada especie se han organizado los resultados en varios apartados. En el primer apartado denominado “Sinónimos” se cita la combinación original de la especie acompañada de sus posibles sinonimias. El siguiente apartado “Material” enumera los ejemplares recolectados y las localidades donde se hallaron. En “descripción anatomía externa” se detalla cómo es la anatomía externa general de los ejemplares estudiados que coinciden con la especie. En “Aparato reproductor” se describe el aparato reproductor obtenido mediante microtomografía computerizada y reconstruido con el programa Amira. 5.3.3. En al apartado “Sistema nervioso” se detalla el sistema nervioso estudiado mediante microtomografía computerizada y reconstruido con el programa Amira. 5.3.3. En “Aparato digestivo” se detalla el aparato digestivo obtenido mediante microtomografía computerizada y reconstruido con el programa Amira. 5.3.3. En el apartado “Rádula” se realiza una descripción de la rádula obtenida mediante imágenes tomadas por microscopía óptica. En el apartado “Puesta” se realiza una descripción de la puesta de la especie si esta fue encontrada junto a los ejemplares estudiados. En el apartado “Hábitat” se especifica en qué hábitats se encontró cada especie y en que hábitats es común según la bibliografía consultada. En el apartado “Distribución” se citan las localidades en donde fue encontrada la especie de acuerdo con la bibliografía consultada a nivel europeo, en la Península Ibérica y en la Comunitat Valenciana. Por último, en el apartado “Discusión” se debaten las cuestiones taxonómicas más relevantes dentro de cada especie. Asimismo, se incluyen fotografías en la lupa, en el microscopio óptico y reconstrucciones mediante el programa Amira 5.3.3. de las especies estudiadas. 5.1. CATÁLOGO FAUNÍSTICO Orden Nudibranchia Suborden Cladobranchia Superfamilia Aeolidioidea Gray, 1827 Familia Aeolidiidae Gray,1827 Género Berghia Trinchese, 1877 Berghia verrucicornis (A. Costa, 1867) Familia Facelinidae Bergh, 1889 Género Caloria Trinchese, 1888 Caloria elegans (Alder & Hancock, 1845) Género Cratena Bergh, 1864 Cratena peregrina (Gmelin, 1791) Género Facelina Alder & Hancock, 1855 Facellina auriculata (Müller, 1776) Género Favorinus Gray, 1850 Favorinus branchialis (Rathke, 1806) 46 Favorinus ghanensis Edmunds, 1968 Superfamilia Dendronotoidea Allman, 1845 Familia Dotidae Gray, 1853 Género Doto Oken, 1815 Doto acuta Schmekel & Kress, 1977 Doto coronata (Gmelin, 1791) Doto floridicola Simroth, 1888 Doto koenneckeri Lemche, 1976 Doto rosea Trinchese, 1881 Superfamilia Fionoidea Gray, 1857 Familia Cuthonidae Odhner, 1934 Género Cuthona Alder & Hancock, 1855 Cuthona correai Ortea, Caballer & Moro, 2002 Cuthona thompsoni Garcia, Lopez-Gonzalez & GarciaGomez, 1991 Familia Eubranchidae Odhner, 1934 Género Amphorina Quatrefages, 1844 Amphorina farrani (Alder & Hancock, 1844) Género CapelliniaTrinchese, 1873 Capellinia doriae Trinchese, 1874 Género Eubranchus Forbes, 1838 Eubranchus vittatus (Alder & Hancock, 1842) Eubranchus exiguus (Alder & Hancock, 1848) Eubranchus sp.1 Familia Flabellinidae Bergh, 1889 Género Calmella Eliot, 1910 Calmella cavolini (Vérany, 1846) Género Edmundsella Korshunova, Martynov, Bakken, Evertsen, Fletcher, Mudianta, Saito, Lundin, Schrödl & Picton, 2017 Edmundsella pedata (Montagu, 1815) Género Flabellina McMurtrie, 1831 Flabellina affinis (Gmelin, 1791) Familia Tergipedidae Bergh, 1889 Género Tergipes Cuvier, 1805 Tergipes tergipes (Forsskål in Niebuhr, 1775) Familia Trinchesiidae F. Nordsieck, 1972 Género Tenellia A. Costa, 1866 Tenellia adspersa (Nordmann, 1845) Género Trinchesia Ihering, 1879 Trinchesia caerulea (Montagu, 1804) Trinchesia foliata (Forbes & Goodsir, 1839) Trinchesia genovae (O'Donoghue, 1929) Trinchesia rubrata Edmunds, 1970 Trinchesia sp.1 Superfamilia Proctonotoidea Gray, 1853 Familia Janolidae Pruvot-Fol, 1933 Género Antiopella Hoyle, 1902 Antiopella cristata (Delle Chiaje, 1841) 47 5.2. ESTUDIO TAXONÓMICO Orden Nudibranchia Suborden Cladobranchia Willan & Morton, 1984 Se trata de un grupo diverso de alrededor de 1000 especies (GOODHEART et al., 2015). Este suborden ha sufrido la pérdida de la concha. Tienen presente, en la mayoría de las especies, rinóforos, tentáculos orales y tentáculos bucales. Este grupo de nudibranquios tiene la glándula digestiva más o menos ramificada y el ano en posición lateral, en el lado derecho. Según la posición del ano se diferencian en tres grupos (SÁNCHEZ-TOCINO, 2006): 1. Ano en posición pleuroprocta (lám. 5.1.a), localizado lateralmente en el lado derecho a nivel del espacio interhepático. 2. Ano en posición cleioprocta (lám. 5.1.b), rodeado por los ceratas que emanan de la parte anterior del lóbulo izquierdo de la glándula digestiva. 3. Ano en posición acleioprocta (lám. 5.1.c), situado más dorsalmente en el espacio existente entre los ceratas que emergen del costado derecho de la glándula digestiva y los que emergen del izquierdo. Los cladobranquios tienen estrategias defensivas diversas entre las que destacan la captación o síntesis de compuestos bioquímicamente activos (ROS, 1976; PUTZ et al., 2011; GOODHEART et al., 2015), la presencia de coloración aposemática (ROS, 1976; THOMPSON, 1985), la cripsis (ROS, 1976) y el uso de nematocistos captados de los cnidarios de los que se alimentan (ROS, 1976; GREENWOOD, 2009; PUTZ et al., 2011; GOODHEART et al., 2015). Se alimentan, en su gran mayoría, de hidrozoos y antozoos, aunque algunas especies predan sobre briozoos, masas de huevos e incluso se alimentan de otros nudibranquios. BOUCHET et al. (2017) defiende que la filogenia de este suborden está parcialmente sin resolver, ya que hay varias familias que aún no han sido incluidas en estudios moleculares y, por lo tanto, su clasificación es provisional. Actualmente este suborden tiene 9 superfamilias consideradas como válidas: Aeolidioidea Gray, 1827; Arminoidea Iredale & O'Donoghue, 1923 (1841); Dendronotoidea Allman, 1845; Doridoxoidea Bergh, 1899; Fionoidea Gray, 1857; Proctonotoidea Gray, 1853; Tritonioidea Lamarck, 1809 y una superfamilia artificial denominada Cladobranquios no asignados (BOUCHET et al., 2017; BALLESTEROS et al., 2012-2020; WORMS, 2020). Lámina 5.1. Posición del ano en los nudribanquios cladobranquios, situado en la parte derecha del animal. a. Ano pleuroprocto b. Ano cleioprocto c. Ano acleiprocto. 48 Superfamilia Aeolidioidea Gray, 1827 Animales alargados, sin branquias diferenciadas. Cuerpo cubierto de ceratas, que realizan la función respiratoria y defensiva. Los ceratas contienen prolongaciones de la glándula digestiva (SÁNCHEZTOCINO, 2006; CARMONA et al., 2013). Esta superfamilia es interesante ya que sus ejemplares tienen cnidosacos en los ápices de los ceratas, donde se almacenan nematocistos que adquieren de las presas (PUTZ et al.,2010; CARMONA et al., 2013). Otros emplean metabolitos secundarios para su defensa (PUTZ et al.,2010). La rádula suele ser uniseriada, aunque algunos géneros tienen dientes laterales (Flabellina spp., Eubranchus spp., Notaeolidia spp.) (CARMONA et al., 2013). Actualmente comprende las siguientes familias: Aeolidiidae Gray, 1827; Babakinidae Roller, 1973; Facelinidae Bergh, 1889; Flabellinopsidae Korshunova, Martynov, Bakken, Evertsen, Fletcher, Mudianta, Saito, Lundin, Schrödl & Picton, 2017; Glaucidae Gray, 1827; Myrrhinidae Bergh, 1905; Notaeolidiidae Eliot, 1910; Piseinotecidae Edmunds, 1970 y Pleurolidiidae Burn, 1966 (BOUCHET et al., 2017; BALLESTEROS et al., 2012-2020; WORMS, 2020). Familia Aeolidiidae Gray,1827 Ejemplares de cuerpo blando, alargado, ligeramente abombado en la parte posterior y con grupos de ceratas alineados que contienen subdivisiones de la glándula digestiva. Los ceratas son generalmente fusiformes, cilíndricos o aplanados. Tentáculos orales y bucales presentes como apéndices largos, cilíndricos y de gran movilidad. Los rinóforos, normalmente, son tan largos como los tentáculos orales y pueden ser simples o anillados. Las mandíbulas córneas están bien desarrolladas, de borde masticador generalmente corto y liso. La rádula es pectinada, uniseriada, de dientes anchos y curvos con forma de medialuna. Se alimentan de anémonas y de especies del Orden Zoantharia Gray, 1832. Se trata de ejemplares agresivos y de baja movilidad. El ano está situado en posición cleioprocta. El pie es redondeado en la parte anterior, más ancho que el cuerpo y con la parte posterior de final puntiagudo (SÁNCHEZ -TOCINO, 2006; GOFAS et al., 2011; CARMONA et al., 2013; EDMUNDS, 2015). El sistema nervioso central está formado por dos ganglios cerebro-pleurales y otros dos pedios (CARMONA et al., 2013). Otocistos con un solo otolito (DE FEZ, 1974). La mayoría de las especies de esta familia se alimentan de anémonas y algunas especies son capaces de incorporar zooxantelas (CARMONA et al., 2013). La familia Aeolidiidae comprende actualmente los siguientes géneros: Aeolidia Cuvier, 1798; Aeolidiella Bergh, 1867; Anteaeolidiella M. C. Miller, 2001; Baeolidia Bergh, 1888; Berghia Trinchese, 1877; Bulbaeolidia Carmona, Pola, Gosliner & Cervera, 2013; Cerberilla Bergh, 1873; Limenandra Haefelfinger & Stamm, 1958; Spurilla Bergh, 1864 y Zeusia Korshunova, Zimina & Martynov, 2017 (BOUCHET et al., 2017; BALLESTEROS et al., 2012-2020 WORMS, 2020). Género Berghia Trinchese, 1877 Especie tipo: Eolidia coerulescens [actualmente Berghia coerulescens] (Laurillard, 1832), por monotipia y posterior designación por Trinchese (1877). Género caracterizado por ejemplares de cuerpo alargado, con el pie corto y delgado. Presentan rinóforos mazudos, granulados, más cortos que los tentáculos orales. Los tentáculos bucales son angulosos y pequeños, de forma ganchuda, que sobresalen ligeramente del manto. La rádula es uniseriada con dientes en forma de medialuna, alargados, incurvados y bilobulados. Mandíbulas con un proceso masticatorio muy denticulado. Ano latero-dorsal, situado justo 55 La especie se ha encontrado en el levante español, en costas murcianas (TEMPLADO, 1982; MARÍN & ROS, 1991; CERVERA et al., 2004) y en el Port de València (DE FEZ, 1974). Es la primera vez que se observa sobre especies del género Eudendrium, aunque es improbable que se estuviera alimentando de ella. Dentro del Mediterráneo, Berghia verrucicornis puede ser confundida con Berghia marinae Carmona, Pola, Gosliner & Cervera, 2014 y Berghia columbina (Garcia-Gomez & T. E. Thompson, 1990). Se diferencia de Berghia marinae ya que no posee las líneas naranjas en las inserciones ceratales y la coloración de los ceratas es distinta (CARMONA et al.,2014). B. verrucicornis se distingue de B. columbina por el patrón de coloración del cuerpo y de los ceratas, siendo más anaranjado (CARMONA et al.,2014). Familia Facelinidae Bergh, 1889 Se trata de una de las familias más extensas, con un gran número de géneros. Esta familia se caracteriza por ejemplares de cuerpo limaciforme. Los tentáculos orales son cilíndricos, lisos y largos. Los rinóforos son anillados (DE FEZ, 1974; SÁNCHEZ-TOCINO, 2006) o lisos (SÁNCHEZ-TOCINO, 2006). Pie redondeado anteriormente con dos tentáculos bucales alargados, con forma tentacular y la terminación posterior puntiaguda. Ceratas alargados cilíndricos o fusiformes, con cnidosacos en los ápices (DE FEZ, 1974). La inserción de los ceratas se realiza en una base común que puede ser arqueada o formando una fila (GOFAS et al., 2011). Mandíbulas con una serie de dentículos en el borde masticador. Rádula uniseriada, en forma de punta de lanza triangular (DE FEZ, 1974; GOFAS et al., 2011; SCHMEKEL & PORTMANN, 1982). Papila anal y poro genital situados en el lado derecho. Gran variabilidad en la forma del pene dentro de la familia que puede tener o no ganchos quitinosos en su parte apical. Sistema nervioso central constituido por cuatro ganglios rodeando al esófago; dos cerebro-pleurales, unidos entre sí y situados encima del esófago, y dos pedios, situados por debajo de éstos en su cara lateral y que se unen entre sí por una corta comisura pedia. Ostocistos con muchos otolitos (DE FEZ, 1974). Ano cleioprocto (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; SÁNCHEZ-TOCINO, 2006). Habitan desde el intermareal hasta el piso circalitoral. Alimentación diversa entre las distintas especies, desde hidroides, gorgonias, corales, briozoos, huevos de otros heterobranquios, esponjas e incluso aparecen casos de canibalismo (GOFAS et al., 2011) Actualmente la familia Facelinidae comprende 27 géneros (WORMS, 2020): Adfacelina Millen & Hermosillo, 2012; Algarvia Garcia-Gomez & Cervera, 1990; Amanda Macnae, 1954; Anetarca Gosliner, 1991; Antonietta Schmekel, 1966; Austraeolis Burn, 1962; Bajaeolis Gosliner & Behrens, 1986; Burnaia M. C. Miller, 2001; Caloria Trinchese, 1888; Cratena Bergh, 1864; Dicata Schmekel, 1967; Emarcusia Roller, 1972; Facelina Alder & Hancock, 1855; Facelinopsis Pruvot-Fol, 1954; Favorinus Gray, 1850; Herviella Baba, 1949; Jason M. C. Miller, 1974; Learchis Bergh, 1896; Moridilla Bergh, 1888; Myja Bergh, 1896; Noumeaella Risbec, 1937; Palisa Edmunds, 1964; Phidiana Gray, 1850; Pruvotfolia J. Tardy, 1970; Pteraeolidia Bergh, 1875; Sakuraeolis Baba, 1965 y Setoeolis Baba & Hamatani, 1965. Género Caloria Trinchese, 1888 Especie tipo: Caloria maculata Trinchese, 1888. Acad. Scien. Bolonia 9:291-295 aceptada como Caloria elegans (Alder & Hancock, 1845) Tentáculos orales y rinóforos alargados, de tamaño similar y, en principio, lisos. Ceratas cónicos dispuestos en serie y en filas simples, en el lateral del ejemplar. Mandíbula bilobulada con el lóbulo superior más pequeño que el inferior. Rádula uniseriada o triseriada y de dientes cuspidados. Pene desprovisto de ganchos y sin glándulas pituitarias (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982). 56 Caloria elegans (Alder & Hancock, 1845) Sinónimos: Eolis elegans Alder & Hancock, 1845 (combinación original) Caloria maculata Trinchese, 1888 Material: Castelló: Port de Castelló (39°58' 26.5" N - 0°01' 01.0" E), un ejemplar de 2 mm recolectado en febrero de 2017 (lám. 5.9). Descripción anatomía externa (lám. 5.10.): animal de cuerpo alargado, esbelto, de tonalidad blanca y translúcido. Tentáculos orales largos, que se estrechan desde la base hasta el ápice, con una línea blanca opaca que recorre todo el palpo oral y llega hasta la zona de la cabeza. Tentáculos bucales situados en la zona anterior del pie, triangulares y prominentes. Rinóforos blancos, más cortos que los tentáculos orales, alargados y ligeramente ahusados en la parte superior, de superficie lisa. La parte anterior del rinóforo tiene multitud de puntos blancos opacos que bajan hasta su base formando una línea. Ojos negros y pequeños, visibles en la base de los rinóforos. Multitud de ceratas digitiformes, delgados, distribuidos en 5 grupos a lo largo de los laterales del cuerpo. Los ceratas van disminuyendo en tamaño conforme se aproximan a la parte posterior del animal. Dentro de cada grupo de ceratas, los más dorsales son más grandes y van disminuyendo en tamaño conforme se aproximan a la zona ventral. Son transparentes y se observa una coloración anaranjada en su interior debido a la glándula digestiva. La intensidad del naranja disminuye al acercarse a la base del cerata. Cada cerata presenta un anillo subapical de color negro, formado por multitud de puntos, seguido de un cnidosaco blanco en la zona apical. Pie delgado y estrecho. El aparato reproductor se abre en el lado derecho, bajo el primer grupo de ceratas. El ano se abre en posición dorsal, en el lado derecho y está rodeado de papilas. Lámina 5.10. Habitus de Caloria elegans: a. Visión dorsal. b. Detalle de los rinóforos. c. Visión dorsal. Lámina 5.9. Distribución de Caloria elegans en la Comunitat Valenciana por provincias en los muestreos realizados. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PC: Port de Castelló. 57 Aparato reproductor (lám. 5.11., lám. 5.12.): el ejemplar recolectado es juvenil por lo que el aparato reproductor no está del todo desarrollado. El gonoducto preampullar es largo y se inserta en la baja de la ampolla, que es alargada y riniforme. De la parte superior de la ampolla, ligeramente en el lateral, surge el gonoducto postampullar que conecta con dos conductos. Por un lado, conecta con el conducto deferente largo y sinuoso que termina en un pene cónico y liso, recubierto de una vaina protectora. Por otro lado, este conducto conecta con una glándula femenina grande de apariencia sacular, de la que surge un ducto alargado que termina en un saco, posiblemente un receptáculo seminal incipiente. Sistema nervioso (lám. 5.11, lám. 5.13.): anillo perisofágico formado por dos ganglios cerebro-pleurales y dos ganglios pedios. Los ganglios cerebro-pleurales son grandes y globosos, semifusionados por un lateral. Los ganglios pedios son ligeramente más pequeños y de la misma forma que los cerebro-pleurales, situados debajo de ellos, y están semifusionados entre sí. También están conectados a los ganglios cerebro-pleurales por dos nervios cortos. Los ganglios bucales están presentes próximos al esófago. Son pequeños, globosos, están ligeramente fusionados entre sí y se conectan a los ganglios cerebro-pleurales por unos nervios muy cortos y estrechos. Los ojos se sitúan a los lados del anillo perisofágico, en los laterales de los ganglios cerebro-pleurales, a media altura. Cada ojo está situado al lado de un otolito. Rádula: a causa del reducido tamaño del ejemplar la rádula fue extraviada durante su manipulación en el montaje. Aparato digestivo (lám. 5.11.; lám. 5.13.): boca ancha conectada con un bulbo bucal ovalado y grande, que continua en un esófago ancho y largo, que se ensancha en un estómago sacular del que surgen dos prolongaciones de la glándula digestiva que atraviesan el ejemplar por los laterales. Cada una de estas glándulas se introduce dentro de cada cerata y forma unas prolongaciones alargadas que terminan en un cnidosaco. El ano se abre en posición dorsal, en el lado derecho y está rodeado de papilas. Lámina 5.11. Cortes transversales de Caloria elegans obtenidos mediante microtomografía computerizada.am: ampolla, e: esófago, gcp: ganglios cerebro-pleurales, gd: glándula digestiva, gp: ganglios pedios, oj: ojos, ot: otolitos, pe: pene, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 58 Lámina 5.12. Aparato reproductor de Caloria elegans. A: esquema simplificado del aparato reproductor de un ejemplar adulto, adaptado de CARMONA et al., 2014. B: aparato reproductor entero de un organismo juvenil, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. C: glándula femenina; D: aparato masculino; E: ampolla. am: ampolla; cd: conducto deferente; gf: glándula femenina; g.post: gonoducto postampullar; g.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; pr: próstata; rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 59 Lámina 5.13. Caloria elegans. A: esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal. B, C, D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B: lateral, C: posterior, D:frontal). E: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal,F,G: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (F) y dorsal (G). an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 60 Puesta: no se han encontrado puestas de esta especie en nuestra toma de muestras. Hábitat: el ejemplar fue encontrado sobre Obelia geniculata (Linnaeus, 1758). En la bibliografía la especie normalmente se encuentra en paredes rocosas con abundancia de algas e hidrozoos del género Eudendrium Ehrenberg, 1834 y Obelia Péron & Lesueur, 1810 (ROS, 1975; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997). También sobre Aglaophenia Lamouroux, 1812; Tubularia Linnaeus, 1758; Campanularia Lamarck, 1816; Halecium Oken, 1815; Plumularia Lamarck, 1816; sobre las especies Nemertesia ramosa (Lamarck, 1816) y sobre ejemplares del género Bougainvillia Lesson, 1830 (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997). Distribución: esta especie se encuentra en Europa (lám. 5.14.), tanto en la vertiente atlántica (Reino Unido y Portugal) como la parte mediterránea (España, Italia) (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; CATTANEO-VIETTI et al. 1990; TRAINITO & DONEDDU, 2015; ZENETOS et al., 2016). También se encuentra en Turquía (ÖZTÜRK et al., 2014). En la Península Ibérica la especie fue citada en Portugal (CALADO & URGORRI, 1999; CALADO et al. 1999, 2003; CERVERA et al., 2004; CALADO & SILVA, 2012), en el estrecho de Gibraltar (GARCÍA-GÓMEZ, 2002; CERVERA et al., 2004; GOFAS et al. 2011), en la parte mediterránea de Andalucía (CERVERA et al., 2004; GOFAS et al. 2011), en Catalunya (ROS, 1975,1978; ROS & ALTAMIRA, 1977; ALTAMIRA et al. 1981; CERVERA et al., 2004; BALLESTEROS, 2007; CAPDEVILA & FOLCH, 2009; BALLESTEROS et al., 2016), en Baleares (DEKKER, 1986; CERVERA et al., 2004), Azores (WIRTZ ,1998; ÁVILA, 2000; MALAQUIAS, 2001; WIRTZ & DEBELIUS, 2003; CERVERA et al., 2004), Madeira (WIRTZ, 1998; CERVERA et al., 2004), Canarias (WIRTZ & DEBELIUS, 2003; CERVERA et al., 2004) y en Cabo de Palos, en Murcia (MARÍN & ROS, 1987; TEMPLADO, 1982, 1983; CERVERA et al., 2004) En la Comunitat Valenciana se ha citado en Alacant (MARÍN & ROS, 1987) y en València (DE FEZ, 1974). Discusión: el ejemplar recolectado es un ejemplar juvenil, por lo que el número de las ceratas y su tamaño en relación con el cuerpo no coinciden con los descritos en los ejemplares adultos, aunque las características definitorias de la especie se observan claramente y coinciden con la descripción original (ALDER & HANCOCK, 1845) y la redescripción llevada a cabo por PICTON (1979) para la especie, además de las descripciones de otros autores, como SCHMEKEL & PORTMANN (1982) o CATTANEO-VIETTI et al.(1990). Al tratarse de un ejemplar juvenil la reconstrucción de la anatomía interna muestra caracteres en algunos órganos que pueden ser incipientes y no estar del todo desarrollados. En al aparato reproductor PICTON (1979) habla de unas pequeñas papilas o espinas semitransparentes rodeando la abertura del conducto deferente que no se han observado en Lámina 5.14. Distribución de Caloria elegans en Europa. El color rojo indica las zonas donde hay datos de la presencia de dicha especie. 61 nuestra muestra. Por lo demás, la estructura principal del aparato reproductor coincide con la descrita por Picton. Es la primera vez que se describe el aparato digestivo (si no tenemos en cuenta la rádula dentro del mismo) y el sistema nervioso para esta especie. Los rinóforos presentan gran variabilidad, siendo lisos, papilados o arrugados, según el grado de contracción y la edad del ejemplar. Los rinóforos diferencian a C.elegans de Caloria quatrefagesi (Vayssière, 1888), que los tiene laminados (FURFARO et al.,2016), mientras que C. elegans los tiene lisos. Género Cratena Bergh, 1864 Especie tipo: Doris peregrina Gmelin, 1791. Opinión 776. Toro. Zool. Nomenclatura 23:93, 1966, aceptada como Cratena peregrina (Gmelin, 1791). Nudibranquios con grupos de ceratas dispuestos en hileras, en forma de herradura los grupos más anteriores y los posteriores ligeramente curvados. Rádula con un dentículo central fuerte y dentículos laterales bien desarrollados. Pene desarmado, con glándulas. Rinóforos lisos (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982) Cratena peregrina (Gmelin, 1791) Sinónimos: Doris peregrina Gmelin, 1971 (Combinación original) Hervia costai Haefelfinger, 1961 Material (lám. 5.15): Castelló: Port de Castelló (39°58'26.5"N - 0°01'01.0"E), 15 ejemplares recolectados y 7 censados visualmente entre 31.01.2017 y 21.03.2017. València: Marina Reial, Port de València (39°27'41.5"N - 0°19'00.0"W), 14 ejemplares recolectados y 20 censados visualmente entre 29.02.2016 y el 11.06.2017. Club Naùtic de València (39°25'51.8"N - 0°19'58.3"W), 23 ejemplares recolectados entre 29.02.2016 y 21.03.2016. Port de Sagunt (39°39'07.2"N - 0°12'18.7"W), 2 ejemplares recolectados el 11.05.2017. Far de Cullera (39°11'14.5"N - 0°13'05.6"W), 7 ejemplares recolectados el 25.05.2017. Alacant: Ca la Mona, Xàbia (39°11'14.5"N - 0°13'05.6"W), 1 ejemplar recolectado el 16.10.2016. Illa de Tabarca (38°09'40.0"N - 0°27'31.7"W), 12 ejemplares censados visualmente el 15.04.2017. Illa de Benidorm (38°30'07.2"N - 0°07'59.4"W), 8 ejemplares censados visualmente el 07.05.2017. Penyal d’Ifach, Tres Pedres, Calp (0°4,560'E - 38º37,911'N), 20 ejemplares censados visualmente el 11.06.2017. Penyal d’Ifach, Los Arcos, Calp (38º37'51.9"N0º04'40.9"E), 9 ejemplares censados visualmente el 16.06.2017. El tamaño de los ejemplares oscila entre 1,5 y 15 mm. Descripción anatomía externa (lám. 5.16.): cuerpo alargado y estrecho, de metapodio puntiagudo Lámina 5.15. Distribución de Cratena peregrina en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PS: Port de Sagunt, PV: Port de València, FC: Far de Cullera, PC: Port de Castelló, MX: Ca la Mona (Xàbia), AC: Los Arcos (Calp), PI: Penyal Ifach (Tres Pedres), IB: Illa Benidorm, IT: Illa Tabarca. 62 Lámina 5.16. Habitus de Cratena peregrina: A. Visión dorsal de un ejemplar adulto. B. Visión dorsal de un ejemplar juvenil. C, D. Visión lateral de un ejemplar juvenil. E. Ejemplar predando sobre Eudendrium sp. F. Puesta de Cratena peregrina sobre Eudendrium sp. G. Detalle de la puesta. H. Detalle de los ceratas. 63 y largo que se estrecha en la zona más anterior y llega a ocupar un tercio del animal. La coloración del cuerpo es blanca hialina, homogénea, con algunas zonas relativamente menos opacas y con dos manchas anaranjadas de forma alargada justo delante de los rinóforos. Se intuyen los órganos internos por transparencia, dando un aspecto más amarillento a la región corporal donde se sitúan. Los rinóforos son cortos, aproximadamente la mitad de los tentáculos orales y una quinta parte de la longitud total del cuerpo. Tienen forma de bastón y su coloración es naranja con el ápice y la base de inserción al cuerpo blanquecinas. Los tentáculos orales son largos, sobrepasando la longitud de los rinóforos, blancos, finos y de ápice puntiagudo. Son menos opacos que el resto del cuerpo y en algunos ejemplares tienen incluso aspecto irisado. Los tentáculos bucales son relativamente cortos, anchos y triangulares con aspecto ganchudo y de coloración homogénea con el resto del cuerpo. A lo largo de los laterales del dorso tienen de 7 a 9 grupos de ceratas con una separación entre grupos más o menos idéntica, a excepción del primer y segundo grupo de ceratas, donde es significativamente mayor. Cada grupo posee entre 2 y 6 ceratas, dispuestos en hileras oblicuas, largos, finos y de color transparente que permiten ver una coloración marrón-rojiza correspondiente a la glándula digestiva del ejemplar. Esta coloración varía entre ejemplars, pero siempre entre tonalidades rojizas, anaranjadas o marrones. En la zona más proximal de los ceratas esta coloración queda enmascarada por una pigmentación azulada en el tegumento. El ápice de los ceratas es de color blanco opaco y contiene el cnidosaco. Dentro de un grupo, los ceratas externos son más pequeños y su tamaño va aumentando conforme se vuelven más internos. El atrio genital se sitúa en la parte anterior del lateral derecho, tras el primer grupo de ceratas. El poro anal se sitúa tras el segundo grupo de ceratas en el lado derecho (posición cleioprocta). El pie es ancho y de color blanco, aunque algo menos opaco que el manto. Los ejemplares más juveniles tienen menor número de ceratas y estos son más globosos. Aparato reproductor (lám. 5.17., lám. 5.18.): ampolla sacular y ancha que se pliega sobre sí misma. El gonoducto postampullar es corto y conecta con el oviducto y el conducto deferente. El oviducto, alargado y ancho, desemboca en una bolsa copulatriz sacular y grande. De la bolsa Lámina 5.17. Cortes transversales de Cratena peregrina obtenidos mediante microtomografía computerizada.am: ampolla, cd: conducto deferente, ce: ceratas, cp: comisura pedia, e: esófago, es: estómago, gcp: ganglios cerebro-pleurales, gd: glándula digestiva, gf: glándula femenina, gp: ganglios pedios, ot: otolitos, pe: pene, rs: receptáculo seminal, sr: bulbo bucal. 64 Lámina 5.18: Cratena peregrina. A: esquema simplificado del aparato reproductor. B: Glándula femenina y aparato femenino; C: aparato femenino; D: ampolla; E: aparato reproductor entero reconstruido en Amira 5.3.; F: aparato masculino. am: ampolla; cd: conducto deferente; gf: glándula femenina; go: gonoducto; G.post: gonoducto postampullar; G.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 71 Lámina 5.24. Cortes transversales de Facelina auriculata obtenidos mediante microtomografía computerizada. ce: ceratas, cn: cnidosacos, e: esófago, es: estómago, gb: ganglios bucales, gcp: ganglios cerebro-pleurales, gf: glándula femenina, gp: ganglios pedios, in: intestino, pe: pene, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. Lámina 5.25. Facelina auriculata. A: esquema simplificado del aparato reproductor de un ejemplar adulto, adaptado de SMCHMEKEL & PORTMANNN,1982. B: aparato reproductor entero de un organismo juvenil, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. am: ampolla; cd: conducto deferente; gf: glándula femenina; go: gonoducto; gpe: glándula del pene; g.post: gonoducto postampullar; g.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; rs: receptáculo seminal; vp: vaina del pene. 72 lado del ejemplar. Primer grupo de ceratas más distanciado del siguiente que el resto. Cuatro o cinco ceratas por grupo, de diversos tamaños, siendo más grandes conforme más dorsales son. Coloración general del cerata naranja, con la base y la zona próxima al ápice de tono rojizo. Ápice transparente, con cierta coloración blanquecina en la zona basal. Se observa una mancha incipiente azul irisada en la parte media de los ceratas más desarrollados. Cola larga, estrecha y de final acusado. Pie alargado, más ancho en la parte anterior y de color blanco translúcido. La abertura genital se encuentra bajo el primer grupo de ceratas y el ano se sitúa bajo el segundo grupo de ceratas, ambos en el lado derecho. Aparato reproductor (lám. 5.24, lám. 5.25.): Aparato reproductor poco desarrollado, ya que se trata de organismos juveniles. El gonoducto postampullar es largo y conecta con un ensanchamiento que dará lugar a la ampolla. El gonoducto postampullar conecta con una masa sacular que formará la parte propiamente femenina y con un alargado y estrecho conducto deferente que se conecta con un pene ancho. Hay una glándula peneal en la abertura de la vaina que rodea al pene. Sistema nervioso (lám. 5.24., lám. 5.26.): anillo perisofágico formado por dos ganglios cerebro-pleurales y dos ganglios pedios. Los ganglios cerebro-pleurales son grandes y globosos, muy próximos entre sí y unidos parcialmente en un lateral. Los ganglios pedios son ligeramente más pequeños y de la misma forma que los cerebro-pleurales, situados debajo de ellos y muy separados entre sí. Están conectados por una larga y estrecha comisura pedia. También están conectados a los ganglios cerebro-pleurales, unidos por su parte superior. Justo encima de los ganglios cerebro-pleurales y coincidiendo con la base de los rinóforos hay un par de ganglios rinofóricos más pequeños, que conectan con los rinóforos mediante dos nervios alargados y con los ganglios cerebro-pleurales mediante nervios estrechos. Los ganglios bucales están presentes detrás y bajo los ganglios pedios. Son pequeños y globosos, están conectados entre sí por un nervio largo y a los ganglios cerebro-pleurales por unos nervios cortos y estrechos. Los ojos se sitúan a los lados del anillo perisofágico, entre los ganglios cerebro-pleurales y los pedios. Cada ojo está situado al lado de un otolito. Rádula (lám. 5.27.): la fórmula radular es 13 x 0.1.0. Diente ancho en forma de lanza, con un dentículo central ancho y prominente, seguido en cada lateral de hasta un máximo de 6 dentículos laterales bien desarrollados y de aspecto puntiagudo. Aparato digestivo (lám. 5.24., lám. 5.26): boca pequeña y ancha que desemboca en un bulbo bucal globoso de tamaño medio conectado con un esófago corto y ancho. Este esófago está conectado con un estómago en forma de saco. Del estómago surgen dos prolongaciones de la glándula digestiva en la parte anterior que se introducen en el primer par de grupos de ceratas y una prolongación de la glándula digestiva en la parte posterior que atraviesa todo el dorso del animal y se va bifurcando de manera simétrica para penetrar en los distintos grupos de ceratas. Esta glándula penetra en los ceratas, ensanchándose, engrosando sus paredes, adaptándose a su forma y terminando en un cnidosaco bien desarrollado. El intestino se sitúa en el lado derecho del estómago, surge de su parte posterior, detrás del primer grupo de ceratas, y recorre el lateral del animal hasta desembocar en el ano, situado justo bajo el segundo grupo de ceratas derecho. Puesta: no se ha encontrado la puesta de la especie. Hábitat: los ejemplares han sido hallados sobre hidrozoos indeterminados entre 0-7 metros de profundidad, en pantalanes de puertos y en fondos naturales rocosos. En la bibliografía se ha citado sobre paredes rocosas poco iluminadas con bastantes hidrozoos y sobre piedras (GOFAS et al., 2011). Normalmente suele alimentarse de especies de 73 Lámina 5.26. Facelina auriculata. A: esquema simplificado del sistema nervioso. B, C, D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B:frontal,C: lateral, D:posterior). E: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. F, G: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (F) y dorsal (G). an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal 74 Podocoryna sp. M. Sars, 1846 (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997); Clava sp. Gmelin, 1788 (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997), Obelia geniculata (Linnaeus, 1758) (URGORRI & BESTEIRO, 1983; PICTON & MORROW, 1994; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997), Tubularia sp. Linnaeus, 1758 (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; PICTON & MORROW, 1994; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997), Dynamena pumila (Linnaeus, 1758) (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997), Cordylophora caspia (Pallas, 1771) (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997) y Laomedea flexuosa Alder, 1857 (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997), aunque puede llegar a predar sobre otros nudibranquios (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997), poliquetos (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997) y algunas medusas del género Lucernaria O. F. Müller, 1776. También se ha visto sobre especies del género Eudendrium Ehrenberg, 1834 (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997) y Clytia Lamouroux, 1812 (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997). Distribución: la distribución de la especie es un poco imprecisa ya que hasta hace poco se confundia con Facelina coronata (Forbes & Goodsir, 1839) que corresponde a varias especies. En Europa (lám. 5. 28.) se ha citado en Noruega (EVERTSEN, J. & BAKKEN, 2002, 2005; GOFAS et al., 2011), Reino Unido (THOMPSON & BROWN, 1984; GOFAS et al., 2011), Holanda (PETERSEN et al., 1996; GOFAS et al., 2011), Bélgica (GOFAS et al., 2011), Países Bajos (GITTENBERGER et al., 2011), Francia (BOUCHET & TARDY, 1976; GOFAS et al., 2011), Italia (TRINCHESE, 1881; SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; CATTANEO - VIETTI et al., 1990; GOFAS et al., 2011), el Mar Negro (MARTYNOV et al., 2007) y la Península Ibérica. En la Península Ibérica la especie se ha citado en el Golfo de Vizcaya (ORTEA, 1976; CERVERA et al., 2004), en Galicia (URGORRI & BESTEIRO, 1983; CERVERA et al., 2004), en Portugal (CALADO et al., 1999, 2003; CERVERA et al., 2004; CALADO & SILVA, 2012), en Lámina 5.27. Rádula de Facelina auriculata. a. Esquema de la rádula. b. Imagen obtenida mediante microscopio óptico de la rádula. 75 Andalucía (TEMPLADO et al., 1988; GARCÍA-GÓMEZ et al., 1989; GARCÍAGÓMEZ, 2002; CERVERA et al., 2004; GOFAS et al., 2011), en el Levante (DE FEZ, 1974; TEMPLADO, 1982, 1983, 1984; MARÍN & ROS, 1987; CERVERA et al., 2004), en Catalunya (BALLESTEROS et al., 2016) y en las islas Canarias (MORO et al., 1995; WIRTZ & DEBELIUS, 2003; CERVERA et al., 2004). En la Comunitat Valenciana fue citada por DE FEZ (1974) para el puerto de València. Discusión: El tipo de ejemplar descrito pertenece a los ejemplares juveniles de la especie, ya que solo se han recogido ejemplares en esa fase de desarrollo. En el estadío adulto son considerablemente más grandes, entre 20 y 30 mm (el ejemplar más grande recolectado en este trabajo mide 8 mm), con una tendencia más azulada en la coloración del cuerpo. El esófago tiene una forma más alargada. El laminado de los rinóforos se torna evidente, con unas 8-10 láminas por rinóforo. En los ejemplares más adultos se distinguen hasta tres filas de ceratas en los primeros grupos. Los ceratas están irisados de color azul en la superficie y no se observa tan bien la glándula digestiva anaranjada-rojiza como en los juveniles. En cuanto a la forma radular y su descripción, coincide con la de los estudios llevados a cabo por SCHMEKEL & PORTMANN (1982). Por otro lado, SCHMEKEL & PORTMANN (1982) describen el aparato reproductor con un pene armado con forma de cazo y una glándula peneal disciforme, con un receptáculo seminal que se conecta con un conducto largo y fuertemente curvado. El ejemplar estudiado no tiene aún la parte femenina bien desarrollada pero sí que se observa en el protopene una glándula con las mismas características que la descrita por Schmekel y Portmann. Es la primera vez que se describe el aparato digestivo (sin contar la rádula) y el sistema nervioso en esta especie. Hasta hace algunos años la especie F. coronata estaba separada de F. auriculata y se trataba de un complejo de especies que incluía juveniles de F. auriculata. F. auriculata puede confundirse con Facelina annulicornis (Chamisso & Eysenhardt, 1821) o Edmundsella pedata (Montagu, 1816). F. annulicornis tiene puntitos blancos repartidos por todo el cuerpo que F. auriculata no tiene y E. pedata tiene el cuerpo violeta y no es iridiscente como F. auriculata. Género Favorinus Gray, 1850 Especie tipo Eolis alba Alder & Hancock, 1844 (= Favorinus branchialis Rathke, 1806) (I.C.Z.N., 1966). Rinóforos lisos, ensanchados en forma de 1-3 bulbos cerca del ápice. Tentáculos orales gruesos y largos. Tentáculos bucales largos y desarrollados. Ceratas distribuidos en arcos a cada lado del cuerpo, con prolongaciones de la glándula digestiva en su interior. Mandíbulas córneas, laminares, con varias hileras de dentículos. Rádula monoseriada, con un dentículo central Lámina 5.28. Distribución de Facelina auriculata en Europa. El color rojo indica las zonas donde hay datos de la presencia de dicha especie. 76 grande y saliente, y con pequeños dentículos laterales. Ano en posición cleopróctica, localizado lateralmente en la parte derecha. Sistema nervioso central compuesto de cuatro ganglios principales: dos cerebroides y dos pedios. Gonoducto reproductivo femenino con un receptáculo insertado cerca del conducto hermafrodita. El pene está desarmado y es cónico. Se trata de animales móviles y suelen tener comportamientos agresivos. Favorinus branchialis (Rathke, 1806) Sinónimos: Doris branchialis Rathke, 1806 (Combinación original) Eolidia rusconii Vérany, 1846 Eolis alba Alder & Hancock, 1844 Eolis carnea Alder & Hancock, 1854 Favorinus albidus Iredale & O'Donoghue, 1923 Flabellina versicolor Costa A., 1866 Matharena oxycantha Bergh in Mörch, 1871. Material (lám. 5.29): Castelló: Torre de la Cordà (40° 03' 59.1" N 0° 07' 33.2" E), un ejemplar recolectado en marzo de 2017. València: Port de ValènciaMarina Reial (39° 27' 41.5" N - 0° 19' 00.0" W), dos ejemplares recolectados en marzo de 2016 y febrero de 2017. Alacant: Port d’Altea (38° 35' 27.5" N - 0° 03' 18.9" W), un ejemplar recolectado en febrero de 2017. Cala Portixol, Xàbia (38° 45' 27.0" N 0° 13' 22.2" E), un ejemplar recolectado en abril de 2017. Descripción anatomía externa (lám. 5.30.): cuerpo alargado, estrecho, de color blanco hialino-amarillento, con una mancha blanca más intensa en el centro del dorso, coincidiendo con la zona de las vísceras y formada por finos puntos blancos más opacos. Este patrón blanco opaco se ensancha en la zona de los ceratas y se estrecha en los tramos interceratales. Los rinóforos son lisos, anchos en la zona basal y gruesos con un ligero abombamiento en la zona subapical, muy característico de la especie. Son de color marrón desde la base hasta la globulosidad y se tornan de color crema-amarillento en la parte apical. Las bases de los rinoforos están muy próximas entre sí, casi tocándose. Los tentáculos orales son lisos, transparentes, relativamente gruesos, digitiformes, más largos que los rinóforos y muestran mayor intensidad de coloración en los extremos, llegando a ser blanquecinos. Dos tentáculos bucales largos, triangulares y transparentes que corresponden a una cuarta parte de la longitud del rinóforo. Tiene de tres a seis grupos de ceratas a cada lado del cuerpo, dispuestos en forma de arco, siendo más arqueados los grupos más anteriores. Cada grupo consta de dos a seis ceratas, siendo más pequeños los situados en la zona exterior y aumentando de tamaño conforme son más internos. Son relativamente cortos y se estrechan conforme se aproximan al extremo, están arqueados hacia el interior y tienen una coloración que va desde el rosado al marrón y corresponde a la coloración de la glándula digestiva, que se observan por transparencia. La coloración de la glándula digestiva varía mucho en función de la dieta del animal. Se observa un punteado blanco que tapiza la epidermis. El ápice de los ceratas es Lámina 5.29. Distribución de Favorinus branchialis en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PV: Port de València, TC: Torre de la Cordà (Castelló), PA: Port d’Altea, CP: Portixol. 77 Lámina 5.30. Habitus de Favorinus branchialis: A. Visión dorsal de un ejemplar adulto. B. Visión dorsal de un ejemplar juvenil. C. Detalle de los rinóforos. D. Vista ventral de la cabeza. 78 transparente, con puntos de color blanco más intenso. Al sentir estrés esta especie suele autotomizar los ceratas. El metapodio es ancho y transparente con el final puntiagudo y ensanchado por la base. Ano cleioprocto, situado bajo el segundo grupo de ceratas, en el lado derecho. El atrio genital se sitúa en el lado derecho, bajo el primer par de ceratas. Aparato reproductor (lám. 5.31., lám. 5.32.): ampolla sacular de forma reniforme conectada a un gonoducto postampullar corto, que conecta con el conducto deferente y el receptáculo seminal a través del gonoducto. El conducto deferente es ancho, de tamaño constante, y se une a un pene cónico, liso y desarmado que se abre al exterior en el lado derecho del animal, bajo el primer par de ceratas. El pene está protegido por una vaina. Próxima a la abertura del pene se encuentra la abertura del gonoducto femenino que está comunicado con las glándulas femeninas y que conecta con un receptáculo seminal pequeño. Sistema nervioso (lám. 5.31., lám. 5.33.): anillo perisofágico formado por dos ganglios cerebro-pleurales y dos ganglios pedios. Ambos pares son globosos y están conectados por pequeñas áreas. Los ganglios cerebro-pleurales están unidos entre sí por una pequeña fusión en uno de sus laterales. Los ganglios pedios son más pequeños que los cerebro-pleurales y están más separados entre sí. Se unen por una larga y estrecha comisura pedia. Dos ganglios rinofóricos de tamaño medio se sitúan en la base de los rinóforos, justo encima de los ganglios cerebro-pleurales. Están unidos a ellos mediante un nervio ancho y corto. De la zona superior de cada uno de los ganglios rinofóricos surgen dos nervios que atraviesan todo el rinóforo. Tras los ganglios pedios hay dos ganglios bucales, situados bajo el esófago y unidos entre sí. Además, están conectados mediante un par de nervios alargados y estrechos a los ganglios cerebro-pleurales, justo detrás de donde se sitúan los ojos. Los ojos se sitúan a cada lado del anillo perisofágico, pegados a los ganglios cerebro-pleurales y justo encima de los ganglios pedios. Se trata de un par de ojos esféricos y negros. Junto a los ojos se encuentran los otolitos, con forma discoidal. Lámina 5.31. Cortes transversales de Favorinus branchialis obtenidos mediante microtomografía computerizada. am: ampolla, cd: conducto deferente, ce: ceratas, es: estómago, gb: ganglios bucales, gcp: ganglios cerebro-pleurales, gd: glándula digestiva, gf: glándula femenina, gp: ganglios pedios, oj: ojos, ot: otolitos, pe: pene, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 79 Lámina 5.32. Favorinus branchialis. A: esquema simplificado del aparato reproductor. B: aparato reproductor entero, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. C: glándula y aparato femeninos. D: ampolla. E: aparato masculino. am: ampolla; cd: conducto deferente; gf: glándula femenina; g.post: gonoducto postampullar; g.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 80 Lámina 5.33. Favorinus branchialis. A: esquema del sistema nervioso en visión frontal. B,C,D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (visión frontal (B), posterior(C) y lateral(D)). E: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. F, G: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (F) y en vista dorsal (G). an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 87 Lámina 5.39. Favorinus ghanensis. A: esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal B,C D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (visión frontal(B), posterior (C) y lateral(D)). E: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. F,G: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (F) y en vista dorsal (G). an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 88 Aparato digestivo (lám. 5.39., lám. 5.40.): boca ancha que desemboca en un bulbo bucal redondeado y de tamaño medio. El bulbo bucal está conectado al estómago mediante un esófago ancho y corto. Estómago sacular ancho y globoso del que surgen dos prolongaciones digestivas justo a cada lado en la parte más anterior y que penetran en el primer grupo de ceratas. La glándula digestiva dentro de los ceratas es alargada y digitiforme y en su terminación hay un cnidosaco pequeño y abombado. Por la parte posterior del estómago se observa una prolongación digestiva que atraviesa toda la longitud del animal hasta el último par de ceratas. Esta glándula digestiva se ramifica y se introduce en todos los ceratas del cuerpo, terminando en pequeños cnidosacos. En la parte derecha del estómago se sitúa un intestino alargado que se abre al exterior bajo el segundo grupo de ceratas. Hábitat: los ejemplares de este estudio fueron encontrados remontando en el agua de una muestra de un raspado de sustrato de organismos adheridos a un pantalán a 1 metro de profundidad en una zona portuaria. En la bibliografía, la especie se encuentra entre 0 y 20 metros de profundidad. Se ha citado sobre epibiontes en restos de malla de pesca (ORTEA et al., 1995), sobre colonias del bryozoo Amathia verticillata (delle Chiaje, 1822) (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997; TAMSOURI et al., 2014) y sobre huevos de Hypselodoris capensis (Barnard, 1927) (GOSLINER, 1987; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997). Puesta: No se encontró ninguna puesta asociada a esta especie. Distribución: la especie fue descrita (lám. 5.42.) por primera vez en Ghana (EDMUNDS, 1968). También se ha observado en la costa Atlántica de Marruecos (TAMSOURI et al., 2014), Lámina 5.41. Rádula y Mandíbulas de Favorinus ghanensis. A. Esquema de la rádula. B. Imágenes obtenidas mediante microscopio óptico de la rádula. C. Detalle de la mandíbula a microscopio óptico. D. Detalle de los dentículos del borde masticatorio de la mandíbula. 89 en Túnez (BEN SOUISSI et al. 2004; ANTIT et al., 2011; AMOR et al., 2016) y en las islas Canarias (MORO et al., 1995; ORTEA, 2013). Discusión: los ejemplares estudiados coinciden con la descripción original de la especie (EDMUNS, 1968) y con la de TAMSOURI et al. (2014) en relación con la anatomía externa y con la descripción de la rádula, por lo que podemos concluir que se trata de Favorinus ghanensis. En cuanto al aparato reproductor coincide con la descripción original de la especie. Se observa la pequeña cámara de fertilización que es característica de la especie (EDMUNS, 1968). Es la primera vez que se cita la especie en la Península Ibérica y se trata de la segunda localidad donde se observa dentro del Mediterráneo. Esta especie original de Ghana se considera una de las 756 especies exóticas para el Mar Mediterráneo, de las cuales unas pocas son especies de nudibranquios: Polycera hedgpethi Er. Marcus, 1964; Caloria indica (Bergh, 1896); Cuthona perca (Er. Marcus, 1958), Godiva quadricolor (Barnard, 1927); Polycerella emertoni Verill, 1880 y Favorinus ghanensis Edmunds, 1968. Algunos autores consideran que F. ghanensis fue introducida debido al transporte marítimo (TAMSOURI et al., 2014; ROTHMAN et al., 2017). Los trece ejemplares de la descripción original (EDMUNDS, 1968) fueron recolectados en el puerto de Tema, Ghana. BEN SOUISSI et al. (2004) registraron numerosos ejemplares en el puerto de Rade (Túnez). TAMSOURI et al. (2014) recolectaron 11 ejemplares cerca de puertos. Los ejemplares estudiados aparecieron en el puerto de Castelló. Estas evidencias sugieren que la presencia de F.ghanensis está relacionada con la actividad portuaria o se ve favorecida por ella, pero no necesariamente debe de tratarse de una especie introducida, sino que es una especie poco estudiada. Debido a la falta de estudios sobre la especie dentro del Mediterráneo en este proyecto se considera que la parte mediterránea de la Península Ibérica está dentro de la distribución normal de la especie, que abarcaría aguas mediterráneas en toda su parte occidental y el atlántico africano. En la descripción de EDMUNS (1968) los ejemplares son recolectados sobre briozoos indeterminados incrustados en un barco. Más adelante ORTEA y colaboradores (1995) encuentran la especie sobre epibiontes en restos de mallas de pesca y TAMSOURI et al. en 2014 la citan sobre el bryozoo Amathia verticillata. Los ejemplares estudiadios se encontraban remontando en la muestra por lo que no se ha podido determinar sobre qué especie se encontraban, pero la muestra contenía varias especies de brioozos indeterminados. EDMUNDS (1975) indica que F. ghanensis se alimenta de los pólipos de Amathia verticillata. TAMSOURI et al. (2014), aventuran la hipótesis de que F. ghanensis se alimenta de huevos de Polycerrella emertoni Verrill, 1880, que a su vez preda sobre Amathia verticillata. En la muestra obtenida en este trabajo también aparecieron ejemplares de P. emertoni junto a F. ghanensis, por lo que parece que sí existe una relación entre ambas especies, ya sea por compartir preferencias de Lámina 5.42. Distribución de Favorinus ghanensis en Europa. El color rojo indica las zonas donde hay datos de la presencia de dicha especie. 90 alimentación o porque realmente F. ghanensis preda sobre los huevos de P. emertoni. La mayoría de las especies del género Favorinus predan sobre huevos de otros nudibranquios por lo que esta hipótesis es plausible, aunque no se ha podido comprobar de manera activa. En el Mediterráneo se encuentran las siguientes especies del género Favorinus: Favorinus branchialis (Rathke, 1806); F. vitreus Ortea, 1982 (en Cabo de Palos Templado, 1982) y F. ghanensis Edmunds (1968). F. ghanensis se diferencia de F. branchialis por la presencia de tres bulbos en el rinóforo en lugar de uno y porque tiene más ceratas por grupo y los mueve y autotomiza con más violencia cuando es perturbado. Además, a diferencia de F. branchialis, F.ghanensis posee un estilete en el pene y la parte femenina del aparato reproductor es completamente distinta, ya que F. ghanensis tiene una bolsa copulatriz y F. branchialis carece de ella. Por otro lado, F. ghanensis (a falta de demostrar si preda además sobre huevos de P.emertoni) se alimenta de briozoos, dieta rara en el género Favorinus. Sin embargo, se ha observado que F. branchialis también preda sobre briozoos cuando los huevos de otros heterobranquios son escasos (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; ORTEA, 1982). F. ghanensis se diferencia de F. vitreus por tener los rinóforos marrones y con tres bulbos mientras que F. vitreus los tiene claros y con dos bulbos. F. ghanensis tiene mayor número de ceratas por grupo y las autotomiza y mueve violentamente en su manipulación. Además, en la descripción original de F. vitreus no se observan cnidosacos al final de los ceratas y en F.ghanensis están presentes. Superfamilia Dendronotoidea Allman, 1845 Cuerpo blando limaciforme, con un velo bucal con protuberancias laterales que cubren la boca. Rinóforos retráctiles con vainas grandes. Ceratas simples o ramificados con función respiratoria, en posición dorsal a ambos laterales del cuerpo. Estos ceratas contienen prolongaciones de la glándula digestiva, pero carecen de cnidosacos (exceptuando el género Hancockia Gosse, 1877). Ano situado en posición laterodorsal o dorsal. Su dieta se basa principalmente en cnidarios, actinias, corales o gorgonias. Las mandíbulas suelen estar ausentes y las rádulas muestran una gran variación, desde amplias y multiseriadas (Ranellidae Gray, 1854) hasta uniseriadas (Doto Oken,1815). Algunos géneros como Tethys Linnaeus, 1767 y Melibe Rang, 1829, carecen de mandíbulas y rádulas ya que su alimentación se basa en pequeños crustáceos. La larva veliger es planctotrófica o lecitotrófica (SCHMEKEL & PORTMANN,1982; THOMPSON & BROWN, 1984). La superfamilia Dendronotoidea está compuesta actualmente por ocho familias: Bornellidae Bergh, 1874; Dendronotidae Allman, 1845; Dotidae Gray, 1853; Hancockiidae MacFarland, 1923; Lomanotidae Bergh, 1890; Scyllaeidae Alder & Hancock, 1855; Phylliroidae Menke, 1830 y Tethydidae Rafinesque, 1815 (WORMS, 2020). Familia Dotidae Gray, 1853 Género tipo: Doto Oken, 1815 validado en el dictamen I.C.Z.N. 697 (1964: 97). Cuerpo limaciforme con ceratas situados dorso-lateralmente, dispuestos en una única fila. Los ceratas generalmente son gruesos, robustos y con tubérculos, dispuestos en anillos situados unos sobre otros. Estos ceratas tienen en su interior prolongaciones de la glándula digestiva y carecen de cnidosacos. En algunas especies pueden aparecer pseudobranquias en su cara interna, de morfología relativamente variable. En la cabeza se observa un velo con expansiones laterales, generalmente desarrolladas, y un par de rinóforos retráctiles, digitiformes y lisos, recubiertos por una vaina acampanada y grande, que los cubre aproximadamente hasta su parte media. Los orificios genitales se sitúan en el lado derecho y la papila anal se observa entre el 91 primer y segundo cerata, en posición dorsolateral. La glándula digestiva está muy ramificada, situándose principalmente en el interior de los ceratas. El revestimiento del estómago es liso. No todas las especies poseen mandíbulas, pero cuando aparecen, son muy delgadas y frágiles. La rádula tiene una fórmula radular n x 0.1.0, es uniseriada y posee los dientes en forma de herradura. El pene es liso, generalmente recubierto por una vaina, y el receptáculo seminal se sitúa próximo al atrio genital. La ovotestis es dorsal a los conductos de la glándula digestiva. La larva veliger es plantotrófica. Picton sugiere que los nudibranquios de esta familia emplean los dientes radiculares para perforar el perisarco y succionar el líquido del caosarco (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982; THOMPSON & BROWN, 1984; VALDÉS et al., 2006). Lámina 5.43. Especies de Doto encontradas y descritas en los muestreos para la Comunitat Valenciana. A: Doto acuta Schmekel & Kress, 1977; B: Doto coronata (Gmelin, 1791); C: Doto floridicola Simroth, 1888; D: Doto koenneckeri Lemche, 1976; E. Doto rosea Trinchese, 1881. 92 Actualmente la familia Dotidae tiene cuatro géneros aceptados: Caecinella Bergh, 1870; Doto Oken, 1815; Kabeiro Shipman & Gosliner, 2015 y Miesea Er. Marcus, 1961. (WORMS, 2020). Género Doto Oken, 1815 Especie tipo: Doto coronata Gmelin, 1791 (validado en el dictamen I.C.Z.N. 697) Este género se caracteriza por tener un pequeño cuerpo limaciforme, ceratas tuberculados, ausencia de cnidosacos y generalmente aparecen pseudo-branquias, situadas en la cara interna de los ceratas, con función respiratoria. Los ceratas son robustos y forman una sola fila a cada lado, con los tubérculos dispuestos en verticilos. El revestimiento del estómago está desarmado. El velo bucal puede tener crestas prerinofóricas. Los rinóforos son lisos, digitiformes y cubiertos por una vaina con forma de copa. La rádula es uniseriada de fórmula n x 0.1.0 y muy similar entre especies. Además, las rádulas varían bastante dentro de la misma especie, por lo que no es muy conveniente emplearla como carácter taxonómico dentro de este género. El diente tiene forma de U, la parte media tiene un gran saliente, mientras que las zonas laterales tienen unos pocos dentículos que se distribuyen de forma asimétrica. La mandíbula es muy delgada y frágil (SCHMEKEL & PORTMANN, 1982). La abertura genital se sitúa en el lado derecho del cuerpo, debajo del primer cerata, y la papila anal se encuentra latero-dorsal, entre el primer y segundo cerata. El pene está desarmado. La ovotestis se encuentra por encima de la glándula digestiva. Las especies de este género se alimentan de hidroides tecados, abriendo el periscopio de los tallos y aspirando el líquido caenosártico (THOMPSON & BROWN, 1984). La larva velíger es planctotrófica. Actualmente el género Doto comprende 90 especies, de las cuales 21 se pueden encontrar en el Mediterráneo (WORMS, 2020; BALLESTEROS et al., 2012-2020). En este trabajo se han recolectado 5 especies distintas pertenecientes a este género (lám. 5.43.): Doto acuta Schmekel & Kress, 1977; Doto coronata (Gmelin, 1791); Doto floridicola Simroth, 1888; Doto koenneckeri Lemche, 1976 y Doto rosea Trinchese, 1881, descritas a continuación. Doto acuta Schmekel & Kress, 1977 Sinónimos: Doto acuta Schmekel & Kress, 1977 (Combinación original). Doto cervicenigra Ortea & Bouchet, 1989. Material (lám. 5.44): Castelló: Port de Castelló (39°58'26.5"N - 0°01'01.0"E), cuatro ejemplares recolectados en marzo de 2017. València: Marina Reial - Port de València (39° 27' 42.6" N - 0° 19' 00.4" W), sesenta y dos ejemplares recolectados entre marzo de 2016 y mayo de 2017. Club Naùtic de València (39°25'51.8"N - 0°19'58.3"W), un ejemplar recolectado en febrero de 2016. Alacant: Port de Vila Joiosa (38° 30' 30.6" N - 0° 13' 09.0" W), cuatro ejemplares recolectados en febrero de 2017. Lámina 5.50. Distribución de Doto acuta en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PV: Port de València; CN: Club Naùtic; PC: Port Castelló; VJ: Port de Vila-Joiosa. 93 Descripción anatomía externa (lám. 5.45., lám.5.46.): especímenes de hasta 9 mm de longitud. Cuerpo alargado y transparente, de coloración amarillenta que varía desde el blanquecino hasta el cadmio. La parte superior del manto y gran parte de los laterales puede Lámina 5.45. Habitus de Doto acuta, y anatomía y detalle de la puesta. A: visión general de la anatomía externa de Doto acuta. B: detalle del atrio genital. C: detalle del cerata con la pigmentación de la cara interna. D: detalle del rinóforo y su patrón básico de coloración. E: detalle del poro anal. F: visión general y detalle de la puesta 94 tener pigmento negro más o menos opaco, sin llegar a cubrir el metapodio ni el epipodio. La cantidad de pigmento varía de un ejemplar a otro y suele ser más intensa en los laterales que en el dorso. Gran mancha de pigmento negro en la zona de la cabeza, abarcando el velo bucal, la parte interna de las vainas rinofóricas y, en algunos ejemplares, llega más allá del espacio interrinofórico pero sin alcanzar la zona pericárdica. Esta mancha puede cubrir completamente la cabeza con una pigmentación intensa o ser más tenue, pero incluso en los ejemplares con el cuerpo sin pigmento o ligeramente pigmentados aparece. El velo bucal se compone de dos alas circulares y una frente sobresaliente que en algunos ejemplares no se diferencia de las alas. La caída del velo es relativamente abrupta, dando apariencia de un morro corto cuando el organismo está estático. En movimiento el morro sobresale más y se observa mejor el velo. Las crestas prerinofóricas son arqueadas y surgen en la parte media, no entran en el velo y tienen puntos blancos a lo largo de toda su extensión. Los ojos se sitúan en la base vertical de los rinóforos, bien visibles en algunos ejemplares. Rinóforos digitiformes, alargados, lisos, de Lámina 5.46. Variabilidad de la anatomía externa de los ejemplares de Doto acuta 95 aproximadamente un cuarto de la longitud total del ejemplar, de color transparente, con puntos blancos concentrados en el ápice. Se observa una pigmentación negra interna, dispuesta en tres anillos espaciados irregulares, siendo el superior el más ancho e intenso y los dos basales más sutiles e incluso incompletos (lám. 5.45c.). El más basal se sitúa a la altura del borde de la vaina. En algunos ejemplares esta pigmentación negra cubre la totalidad del rinóforo, a excepción del ápice. La vaina rinofórica es ajustada y se abre en la zona superior, siendo más larga en la zona anterior, dándole un aspecto lengüeteado. Se observan puntos blancos en el borde de la vaina. La coloración negra del espacio interrinofórico pigmenta el primer tercio de la vaina por la cara interna. Entre 4-6 pares de ceratas tuberculados situados en los laterales del cuerpo. El ápice es mazudo, ancho, con un ligero estrechamiento en la base y con un punto interno de pigmento negro, más grande que los de los tubérculos laterales. Los ceratas tienen de uno a dos anillos completos y uno o dos incompletos de tubérculos sobresalientes, aunque no tanto como el apical. La base del cerata se estrecha en la zona de unión al cuerpo. El interior del cerata es color crema, variando la intensidad según el ejemplar. Esta coloración se debe a la ramificación de la glándula digestiva que se encuentra en el interior de los ceratas. Todo tubérculo tiene en el ápice un punto irregular de color negro, seguido de una concentración de pigmento blanco, a causa de unos salientes glandulares que forman una semicúpula, que parece rodear al punto negro, dándole un aspecto irregular a su borde. Este punto de pigmento negro va disminuyendo en diámetro conforme el anillo de tubérculos es más basal. En los ceratas más grandes se observa una pseudobranquia laminar muy fina y sobresaliente, similar al filo de una cuchilla, situada en una ligera concavidad que observamos en la parte posterior de los ceratas. Esta concavidad se observa en todos los ceratas, tengan pseudobranquia o no. En algunas pseudobranquias se observan sutiles pigmentos de color rojizo o negruzco. El pie es ancho y largo, similar al tamaño del manto y de color crema. Su zona anterior es ancha y la parte posterior tiene un final romo. El atrio genital (lám 5.45b.) se sitúa en el lado derecho tras el primer par de ceratas, con puntos blancos alrededor. El ano (lám 5.45e.) se sitúa relativamente próximo a la apertura genital, pero en una posición más dorsal y con puntos blancos en su ápice. Esta especie tiene una gran variabilidad anatómica. La lámina 5.46. muestra la variabilidad en la coloración del manto y los rinóforos. También se observan las diferentes formas que pueden adoptar los ceratas. Los especímenes a, b y c muestran una cabeza completamente negra con mucho pigmento. Además, los especímenes b y c tienen los rinóforos completamente negros, a excepción del ápice. El resto de las muestras tienen rinóforos con un anillo en la parte superior, más o menos intenso, y en la parte inferior, anillos incompletos de densidad pigmentaria variable. El espécimen d tiene una pigmentación homogénea en el manto y no se observa ninguna concentración de pigmento negro en la cabeza. Por otro lado, el espécimen h tiene una pequeña concentración de pigmento en la región cefálica. En el resto, también los ejemplares más pequeños presentan una mancha negra visible en la cabeza. En las variaciones de forma y coloración de los ceratas algunos muestran ceratas más alargados (g,h,d), con más (g) o menos (h,d) protuberancia de los tubérculos. El resto de los especímenes muestran ceratas más pequeños y globulares. A excepción de los especímenes e y f, que tienen tubérculos en los ceratas despigmentados, todos los demás especímenes (incluidos los más jóvenes) tienen el ápice de los tubérculos pigmentado de negro. 96 Aparato reproductor (lám. 5.47., lám. 5.48.): ampolla alargada, en forma de U, que se ensancha en su parte media. El gonoducto postampullar es largo y estrecho. El conducto deferente conecta con el conducto postampullar y tiene un aspecto estrecho y corto. Se recubre con la próstata ligeramente desplazado hacia un lateral. A medida que la próstata se aproxima hacia el pene se estrecha gradualmente. El pene es cónico y se encuentra en el interior de una vaina. El gonoducto se abre cerca de la abertura de la vaina del pene y es relativamente corto, curvo y termina en un receptáculo seminal relativamente pequeño, de forma ovalada. El receptáculo seminal está separado de la glándula femenina, pero se conecta a ella en su parte Lámina 5. 47. Cortes transversales Doto acuta. am: ampolla, cp: cavidad pericárdica, cd: conducto deferente, e: esófago, gb: ganglios bucales, gcp: ganglios cerebropleurales, gf: glándula femenina, gp: ganglios pedios, gs: glándulas salivales, pe: pene, pr: próstata, rs: receptáculo seminal, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 103 poco desarrolladas, irregulares o bifurcadas y solo están presentes en los ceratas más grandes. Pueden adquirir cierto pigmento rojizo. El pie es igual de ancho que el manto y del mismo color. Papila anal poco prominente, situada dorsalmente entre el primer y segundo cerata de la parte derecha (lám. 5.51 c). Atrio genital situado bajo el primer cerata, en la parte derecha. Aparato reproductor (lám. 5.54., lám. 5.55.): ampolla reniforme, comprimida lateralmente, con un gonoducto postampullar estrecho y corto. El gonoducto postampullar conecta por un lado con un conducto deferente corto que se une, en una posición ligeramente lateral, a una próstata agrandada y enroscada de grosor similar en toda su extensión y se estrecha de nuevo en la zona próxima al pene, que es cónico y estilizado. El pene es liso, desarmado y está en el interior de una vaina. El oviducto se abre próximo al pene, formando un conducto largo y estrecho, que desemboca en un receptáculo seminal ovalado. La apertura del oviducto está ensanchada en relación con el resto del tubo. La otra conexión del gonoducto postampullar corresponde a un oviducto ancho y curvado que forma parte de la glándula femenina, que Lámina 5.53. Habitus de Doto coronata. A: visión general. B: detalle de la parte interna de un cerata donde se muestra la coloración rojiza. C: Detalle del poro anal. D: detalle de la forma de los ceratas. 104 conecta con un sáculo grande dentro de la misma glándula que se une a su vez, mediante pliegues de la glándula femenina, al atrio genital muy próxima a la abertura del gonoducto. La glándula femenina está compuesta por sáculos grandes y compactos. Sistema nervioso (lám. 5.54., lám. 5.56.): anillo perisofágico formado por dos ganglios cerebro-pleurales de forma sacular, conectados entre ellos por una pequeña unión en la parte lateral superior. Estos ganglios conectan con dos ganglios pedios que tienen la misma forma que los cerebro-pleurales, pero de tamaño más reducido. Los ganglios pedios están situados justo debajo de los cerebro-pleurales, ligeramente más posteriores y se fusionan con ellos en una pequeña área. Ambos ganglios pedios están conectados entre sí por una comisura pedia Lámina 5.54. Cortes transversales de Doto coronata. am: ampolla, cap: cavidad pericárdica, e: esófago,es: estómago, gcp: ganglios cerebropleurales, gf: glándula femenina, go: gonoducto, gp: ganglios pedios, gs: glándulas salivales, pe: pene, pr: próstata, ot: otolito, rs: receptáculo seminal, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 105 Lám. 5.55: Doto coronata. A: esquema simplificado del aparato reproductor. B: aparato reproductor entero, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. C: aparato femenino. D: ampolla. E: aparato femenino. F: aparato masculino.am: ampolla; bc: bolsa copulatriz, cd: conducto deferente, gf: glándula femenina; go: gonoducto; g.post: gonoducto postampullar; g.pre:gonoducto preampullar; pe: pene; pr: próstata, rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 106 Lámina 5.56. Doto coronata. A, B, D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B:visión frontal, A:posterior, D:lateral). C: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. E: esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal. F, H: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (H) y en vista dorsal (F). G: detalle de la parte anterior del aparato digestivo.an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebropleurales; gd: glándula digestiva;gor: glándulas orales; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos, in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 107 estrecha. Dos ganglios rinóforicos, situados en las bases de los rinóforos, conectan con los ganglios cerebro-pleurales mediante unos nervios estrechos y alargados que se insertan lateralmente. Por la parte posterior de los ganglios cerebro-pleurales surgen dos nervios muy cortos, que conectan con unos pequeños ganglios bucales. Rádula (lám. 5.57.): fórmula radular 62 x 0.1.0. Diente en forma de herradura, con 4-7 dentículos a cada lado de tamaño irregular. Los dentículos más próximos al centro de cada lateral quedan casi fusionados en el centro del diente. Aparato digestivo (lám. 5.54., lám. 5.56.): boca pequeña que desemboca en un bulbo bucal redondeado de tamaño medio. Dos glándulas orales alargadas y saculares que se conectan con la boca mediante dos conductos estrechos. El esófago conecta el bulbo bucal con el estómago. Se trata de un tubo ancho y largo. El estómago, pequeño y aplanado dorsoventralmente, conecta con la glándula digestiva que forma un tubo ciego ancho que atraviesa todo el largo del animal. De este tubo central surgen tubos laterales, largos y estrechos, que penetran en cada uno de los ceratas. Las bases de las prolongaciones se sitúan de manera alterna. Las prolongaciones que conectan con el primer par de ceratas surgen directamente del estómago. Esta glándula digestiva, al penetrar en los ceratas, se adapta a su forma y se vuelve ancha y globosa. El tubo que conecta con el ano surge del estómago, es largo y estrecho, y desemboca en la parte derecha, tras el primer cerata. Puesta: en las muestras obtenidas no se ha obtenido ninguna puesta de esta especie. Hábitat: los ejemplares se han encontrado en pantalanes situados entre 0-2 metros, en zonas poco iluminadas, sobre el briozoo Crisia denticulata, con numerosas especies epibiontes, entre ellas hidrozoos indeterminados y sobre Eudendrium sp. En la bibliografía esta especie fue citada en multitud de sustratos, ya que se trata de una especie generalista. Se ha observado en hidrozoos tecados como Abietinaria abietina Lámina 5.57. A. Reconstrucción de la rádula de Doto coronata mediante imágenes tomadas por microscopia óptica.B. C. Imágenes de la rádula obtenidas mediante microscopia óptica. 108 (Linnaeus, 1758); Aglophenia pluma (Linnaeus, 1758); Rhizocaulus verticillatus (Linnaeus, 1758); Dynamena pumila (Linnaeus, 1758); Diphasia rosacea (Linnaeus, 1758); Hydralmania falcata (Linnaeus, 1758); Sertularella polyzonias (Linnaeus, 1758); Sertularia cupressina Linnaeus, 1758 especies de Nemertensia Lamouroux, 1812; Dyphasia Agassiz, 1862; Halecium Oken, 1815; Kirchenpaueria Jickeli, 1883; Lafoea Lamouroux, 1812; Laomedea Lamouroux, 1812; Obelia Péron & Lesueur, 1810 como Obelia geniculata (Linnaeus, 1758) y Obelia dichotoma (Linnaeus, 1758) entre otras; Plumularia Lamarck, 1816, Thuiaria Fleming, 1828. También fue citado en hidrozoos atecados como Bougainvillia muscus (Allman, 1863), Clava murticornis (Forsskål, 1775); Coryne muscoides (Linnaeus, 1761), especies de Eudendrium Ehrenberg, 1834 como Eudendrium rameum (Pallas, 1766) y Eudendrium ramosum (Linnaeus, 1758); Hydractinia echinata (Fleming, 1828); Garveia nutans Wright, 1859 e incluso sobre briozoos como Alcyonidium Lamouroux, 1813 o Eucratea loricata (Linnaeus, 1758) aunque tras la separación en varias especies llevada a cabo por LEMCHE (1976) no queda claro cuál es el espectro de sustratos real (MCDONALD & NYBAKKEN, 1997). Distribución: esta especie está ampliamente distribuida. Fue citada en Maine, Estados unidos (TROT, 2004). En las costas Atlánticas (lám. 5.58.), desde Nueva Inglaterra, Nueva Jersey y Long Island en la parte occidental (VERRILL & SMITH, 1874) y desde Islandia y Escandinavia hasta la Península Ibérica pasando por las costas inglesa (MORROW et al., 1992), Países Bajos (GITTENBERGER et al., 2011) y Gales (SHIPMAN & GOSLINER, 2015). En el Mediterráneo se observa en la parte oriental (SCHMEKEL & KRESS, 1977; THOMPSON et al., 1990; MORROW et al., 1992), en Turquía (ÖZTÜRK et al., 2014), en el Mar Negro (MARTYNOV et al., 2007), en el Mar Egeo y el Adriático, en la costa de la antigua Yugoslavia, en Nápoles y en Francia (BOUCHET & TARDY, 1976) En la Península Ibérica se distribuye en el golfo de Vizcaya (ORTEA, 1977; FERNÁNDEZOVIES, 1981; FERNÁNDEZ-OVIES & ORTEA, 1981), en Galicia (ORTEA, 1977; URGORRI & BESTEIRO, 1983), en Portugal (CALADO et al., 1999), la zona del estrecho de Gibraltar (GARCÍAGÓMEZ et al.,1989; GOFAS et al. 2011) y en Catalunya (BALLESTEROS et al., 2016) (CERVERA et al., 2004). En la costa levantina fue citado por TEMPLADO (1982, 1983, 1984) en Cabo de Palos y por MARÍN & ROS (1987) en Cabo de Palos y el Mar Menor. Discusión: la principal problemática sobre la determinación de esta especie reside en que se trata de un conjunto de especies crípticas y es muy difícil designar los límites de cada una de ellas recogidos en la bibliografía. La descripción original de esta especie realizada por GMELIN en 1791 basada únicamente en un registro de Bomme (1769) es escasa y dudosa y hasta ALDER & HANCOCK (1845-1855) esta especie no recibe una descripción más detallada. La especie no estaba registrada anteriormente y LEMCHE (1976) depositó un neotipo para facilitar su determinación, pero al descubrirse posteriormente como un conjunto de especies crípticas ese neotipo pasa a Lámina 5.58. Distribución de Doto coronata en Europa. El color rojo indica las zonas donde hay datos de la presencia de dicha especie. 109 ser dudoso. LEMCHE (1976) hace hincapié en la descripción de Bomme, con mayor número de datos y más completa que la de GMELIN, y la compara con la descripción de ALDER & HANCOCK (1845-1855), coincidiendo en gran parte una con otra, a excepción de pequeños matices que pueden considerarse variación interespecífica. Picton también coincide con esta descripción (PICTON & MORROW, 1994). Este estudio de LEMCHE en 1976, es adicional al ya propuesto por THOMPSON & BROWN (1976), donde ya se describen 5 especies distintas de Doto para las costas británicas. En dicho estudio, Lemche considera la existencia de seis especies distintas nuevas, dentro de las cuales cuatro se habían considerado hasta la fecha Doto coronata y aventura la existencia de más especies dentro del complejo de Doto coronata, por lo que no se adjudicó un neotipo nuevo para la especie. Tanto Lemche, en dicho estudio, como Picton en 1978, consideran la preferencia trófica como específica para cada especie y, por lo tanto, determinaría un carácter taxonómico válido. Por otro lado, a pesar de que el neotipo no tenga pseudobranquias, en ejemplares recolectados en otros estudios sí que se observan (TROT, 2004). Los ejemplares obtenidos en este estudio tienen una descripción anatómica que coincide con la establecida por ALDER & HANCOCK (1845-1855). En cuanto a la puesta descrita por la literatura, LEMCHE (1976) describe una banda gruesa de margen externo redondeado formando una serie de bucles dobles. En cambio, KRESS (1975) la describe como una cinta gelatinosa doblada en zig-zag de huevos blancos, donde las cápsulas del huevo son lisas y solo hay un huevo por cápsula. SCHMEKEL & KRESS (1977) la describen como una banda de 3 mm de ancho, doblada en forma de zigzag, con huevos blancos de pequeño diámetro. Los huevos se encuentran en cápsulas. Nosotros no hemos obtenido ninguna muestra de puestas de Doto coronata por lo que no es posible contrastar dicha información. SCHMEKEL & KRESS (1977) describen la especie como anual, con mayor presencia entre enero y marzo. Los ejemplares de este trabajo se han recolectado entre marzo y mayo, solapando con la época de mayor presencia, aunque no tuvo una presencia muy significativa en los muestreos. En lo que concierne al aparato reproductor, en la descripción original de la especie no aparece. En 1977, SCHMEKEL & KRESS describen la anatomía del aparato reproductor, que coincide con los resultados observados en este estudio. En la literatura, la fórmula radular descrita por THOMPSON et al. (1990) es 51 (57) x 0,1.0. Según SHIPMAN & GOSLINER (2015) cada diente tiene una dentadura subsidiaria robusta y a veces tienen un diente lateral rudimentario en la parte media de la cúspide. Los dentículos laterales son asimétricos y hay entre siete y ocho por lado. En cambio, SCHMEKEL & KRESS (1977) describen entre 4 y 5 dentículos laterales en cada diente. La rádula observada en este trabajo presenta la misma anatomía que las anteriormente detallas, pero con 4-7 dentículos, intermedios a ambas descripciones. Estas variaciones se deben principalmente al desgaste que sufre la rádula debido al uso. Es la primera vez que se describe el aparato digestivo (a excepción de la rádula) y el sistema nervioso en la especie. Es la primera vez que esta especie se cita sobre Crisia denticulata a pesar de ser un animal que fue descrito en numerosos sustratos. En la costa levantina fue citado por TEMPLADO (1982, 1983, 1984) en Cabo de Palos y por MARIN & ROS (1987) en Cabo de Palos y el Mar Menor, pero es la primera vez que esta especie es citada en aguas valencianas y en el Port de València. Se trata de una especie poco abundante en este estudio, ya que han aparecido pocos ejemplares y en un único punto. 110 Doto floridicola Simroth, 1888 Sinónimos: Doto floridicola Simroth, 1888 (Combinación original) Doto susanae Fez, 1962 Material (lám. 5.59.): València: Marina Reial - Port de València (39° 27' 42.6" N - 0° 19' 00.4" W), un ejemplar recolectado el 04.03.2016. Descripción anatomía externa (lám. 5.60.): cuerpo alargado, de 7,2 mm de longitud, de color blanco hueso con una franja de color marrón formada por manchas irregulares a lo largo del dorso, sin llegar a la cola, estrechándose en la zona de los rinóforos y subiendo por la cara interna de las vainas rinofóricas, hasta su mitad. En algunos ejemplares dicha tonalidad puede ser más rojiza. El velo tiene una forma característica, ribeteado con dos expansiones laterales, sin coloración. Cresta prerinofórica aparente, sutil. Los rinóforos (lám. 5.58.d) son alargados, de color transparente, de aspecto liso, más anchos en la base y se van estrechando poco a poco. Tienen numerosos puntos blancos que se extienden a lo largo de toda la parte posterior, concentrándose sobre todo en el ápice. La vaina rinofórica es relativamente alta y transparente, con el borde ensanchado, con dos hendiduras laterales marcadas y que le otorga al borde un aspecto ondulado. Tiene cinco pares de ceratas en los laterales del cuerpo. Los ceratas son anchos y tuberculados, de color amarillento-marronáceo. El tubérculo apical es más sobresaliente que el resto de tubérculos que conforman el cerata y tiene una mancha ancha de color amarillento, llegando a ser rojiza en alguno. Esta coloración se debe a la presencia de diversas vesículas hialinas superficiales. El resto de los tubérculos son anchos y poco sobresalientes, dispuestos en tres o cuatro hileras alrededor del cerata y que se contraen sutilmente con los movimientos del animal. Estos tubérculos tienen en sus extremos una mancha de color pardo, con los bordes más pigmentados que el resto. Las pseudobranquias poseen una o dos laminillas, similares a pequeños tubérculos, situadas en el borde interno de los ceratas. El ano, de forma cilíndrica, se sitúa entre el primer y segundo cerata y se encuentra a la derecha del animal. El atrio genital, situado bajo el primer cerata derecho, es de apariencia alargada y sobresaliente y está pigmentado en color parduzco. El pie es ancho y de color blanquecino, redondeado por la zona anterior y con terminación en punta en su zona posterior. Lámina 5.59. Distribución de Doto floridicola en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PV: Port de València. 111 Aparato reproductor (lám. 5.61., lám. 5.62.): ampolla grande, sacular, alargada y globosa de la que surge el gonoducto preampullar que conecta con las gónadas. De la zona superior de la ampolla surge el gonoducto postampullar largo y estrecho. Por un lado, conecta con el conducto deferente que enseguida se recubre de una próstata alargada y gruesa, que se estrecha muy progresivamente, mientras serpentea sobre sí misma hasta que vuelve a ser un conducto deferente estrecho, serpenteante y bastante largo, que desemboca en un pene cónico y relativamente corto, bastante rechoncho. El pene es liso y está protegido dentro de una vaina. La otra conexión del gonoducto postampullar es un conducto grueso, que conecta por el interior de la glándula femenina con un pequeño sáculo. Del sáculo surge otro conducto que va a través Lámina 5.60. Habitus de Doto floridicola. A: visión general de la morfolgía externa de Doto floridicola. B: detalle del cerata. C. detalle de la vaina rinofórica. d: detalle de los rinóforos 112 de la glándula femenina y atraviesa el resto de glándula femenina desembocando en el atrio genital, próximo al gonoducto femenino. El gonoducto femenino tiene su abertura muy próxima a la vaina del pene y consiste en un conducto ancho y bastante largo que termina en un receptáculo seminal alargado y un poco más ancho que el conducto que da a él. La glándula femenina es relativamente pequeña en comparación con el resto de las estructuras y es globosa y sacular. Sistema nervioso (lám. 5.61, lám. 5.63.): un par de ganglios cerebro-pleurales, saculares y aplanados unidos, en la parte superior, entre ellos, y en la parte inferior, a dos ganglios pedios de forma similar, pero ligeramente de menor tamaño, que se fusionan a través de una ancha y corta comisura pedia. Tienen dos ganglios rinofóricos situados en la zona basal de los rinóforos, que conectan con los ganglios cerebro-pleurales mediante dos nervios largos. Los ojos y los Lámina 5.61. Cortes transversales Doto floridicola.am: ampolla, bo: boca, cd: conducto deferente, cpe: cavidad pericárdica, es: estómago, gcp: ganglios cerebropleurales, gd: glándula digestiva, gf: glándula femenina,gor: glándulas orales; pe: pene, pr: próstata, rs: receptáculo seminal, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 119 Aparato reproductor (lám. 5.68, lám.5.69.): ampolla grande y globosa con forma de U, bastante voluminosa. El gonoducto preampullar que la conecta con las gónadas es estrecho y alargado. El gonoducto postampullar que la conecta con el resto del aparato reproductor es más grueso y largo y abre a dos conductos. Uno de esos conductos da lugar a un corto y estrecho conducto deferente que se recubre de una próstata alargada de tamaño constante y gran longitud, que se repliega sobre sí misma. Esta próstata termina a mitad de conducto deferente y este continua, estrecho y de gran longitud, serpenteando hasta desembocar en un pene liso y desarmado, de aspecto cónico, alargado y protegido por una vaina. El otro conducto correspondiente al oviducto que atraviesa la glándula femenina y desemboca en un sáculo, con función de bolsa copulatriz, que conecta con el exterior a través de la glándula femenina, muy próxima al gonoducto. El gonoducto se abre cerca de la abertura del pene y consiste en un tubo Lámina 5.68. Cortes transversales Doto koenneckeri. am: ampolla, an: ano, bo: boca, cd: conducto deferente, cop: comisura pedía, cp: cavidad pericárdica, e: esófago, es: estomago, gcp: ganglios cerebropleurales, gd: glándula digestiva, gf: glándula femenina, go: gonoducto, gor: glándulas orales, gp: ganglio pedio, pe: pene, pr: próstata, rs: receptáculo seminal, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 120 Lámina 5.69: Doto koenneckeri. A: esquema simplificado del aparato reproductor. B: aparato reproductor entero, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. C: aparato masculino.D: glándula femenina. E: ampolla.F: aparato femenino. am: ampolla; bc: bolsa copulatriz, cd: conducto deferente; ch: conducto hermafrodita gf: glándula femenina; go: gonoducto; g.post: gonoducto postampullar; g.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; pr: próstata, rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 121 ancho y alargado que conecta con el receptáculo seminal, que apenas se diferencia del gonoducto, dando la apariencia de un ducto homogéneo y ciego. La glándula femenina es globosa y de tamaño medio. Sistema nervioso (lám. 5.68, lám. 5.70.): dos ganglios cerebro-pleurales apenas fusionados, por lo que se diferencian los ganglios pleurales de los cerebroides. Ganglios cerebroides pequeños y muy unidos a los ganglios pleurales, que son grandes, relativamente abombados y están situados al lado de los cerebroides, semifusionados con éstos. Los ganglios pedios se sitúan justo debajo del conjunto anterior, con un tamaño intermedio entre ambos, unidos entre sí por una pequeña comisura pedia. De los ganglios pleurales surgen dos nervios largos y estrechos que se dirigen a la base de los rinóforos donde están situados los ganglios rinóforicos, pequeños y elipsoides. Cerca de los ganglios pleurales se sitúan dos estructuras esféricas donde encontramos unidos los ojos y los otolitos, que se conectan a los ganglios mediante dos estrechos nervios. Por último, de los ganglios cerebroides, surgen dos nervios gruesos, que pasan entre los ganglios pleurales y pedios y conectan con dos pequeños ganglios bucales situados más anteriormente. Rádula (lám. 5.71.): fórmula rádula 71 x 0.1.0. Dientes con forma de herradura, con varios dentículos laterales asimétricos y de distintos tamaños que oscilan en número entre dos y tres. No se encuentran las mandíbulas Aparato digestivo (lám. 5.68, lám. 5.70.): boca ancha que conecta con un bulbo bucal alargado de tamaño medio. Esófago largo y robusto que desemboca en un estómago ancho, sacular y bien marcado que continúa en la glándula digestiva, que consiste en un tubo que atraviesa todo el cuerpo del ejemplar. La glándula digestiva se ramifica y penetra en cada uno de los ceratas de manera simétrica. Presenta dos glándulas orales que conectan con la boca Lámina 5.71. a. Reconstrucción de la rádula de Doto koenneckeri mediante imágenes tomadas por microscopia óptica. b, c, d. Imágenes de la rádula obtenidas mediante microscopia óptica. 122 Lámina 5.70. Doto koenneckeri. A: esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal B, C, D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B: posterior. C: frontal, D: lateral). E: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal, F, G: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (F) y dorsal (G).an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; gs: glándula salival; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 123 mediante dos conductos estrechos. Las glándulas orales son alargadas y están formadas por pequeños sáculos comunicados entre sí. Puesta (lám. 5.67. e-f.): cordón doblado formando un semicírculo de color blanco. La banda tiene una anchura de siete u ocho huevos y hay más de un huevo de grosor. Los huevos están claramente separados, pero muy pegados entre sí. Hábitat: los ejemplares se han encontrado sobre Agloephenia picardi Svoboda, 1979 y Agloephenia sp. en zonas esciáfilas, poco profundas y de poco dinamismo. En la bibliografía se cita sobre Lytocarpia myriophyllum (Linnaeus, 1758) y especies del género Aglaophenia como Aglaophenia kirchenpaueri (Heller, 1868), Aglaophenia pluma (Linnaeus, 1758), Aglaophenia tubiformis Marktanner-Turneretscher, 1890 (LEMCHE, 1976; MCDONALD & NYBAKKEN, 1997). Distribución: especie ampliamente distribuida (lám. 5.72.) en el Atlántico, desde Escocia hasta España (PICTON & MORROW, 1994). En el Mediterráneo se ha registrado en Francia (PODDUBETSKAIA OSSOKINE, 2006), en la costa de Liguria (BETTI et al., 2015) y en Italia (TRAINITO & DONEDDU, 2015). En la Península Ibérica se han citado ejemplares de esta especie en el Golfo de Vizcaya (ORTEA & URGORRI, 1978; FERNÁNDEZOVIES, 1981), Galicia (ORTEA & URGORRI,1978; FERNÁNDEZ-OVIES, 1981; FERNÁNDEZ-OVIES & ORTEA,1981; URGORRI & BESTEIRO, 1983), Portugal (CALADO et al., 1999, 2003; CALADO & SILVA, 2012), el este de Andalucía (TEMPLADO et al., 1988; GOFAS et al. 2011), Catalunya (BALLESTEROS et al., 2016), Azores (CALADO, 2002; MORO et al., 2016) y en Canarias (MORO et al., 2016). También se encuentra en Ceuta (ORTEA et al., 2010). Discusión: es la primera vez que se cita esta especie en la Comunitat Valenciana y en la zona del levante, a pesar de tratarse de una especie común. La anatomía externa coincide con la descripción original y las de otros autores (LEMCHE, 1976; THOMPSON & BROWN ,1984) La descripción original de Lemche no menciona la rádula, pero THOMPSON & BROWN (1984) describen una rádula con la fórmula 72 x 0.1.0. con un diente central donde se observa en los laterales una serie de hasta tres dentículos asimétricos. Esta descripción coincide con la rádula estudiada, aunque predominan los dientes con dos dentículos laterales. La puesta obtenida en este trabajo consiste en un fragmento por lo que la forma real de la puesta no ha podido ser descrita. Por lo demás, concuerda con la puesta de la descripción original de la especie (LEMCHE, 1976). Es la primera vez que se describe el aparato reproductor, el aparato digestivo (a excepción de la rádula) y el sistema nervioso en Doto koenneckeri. Lámina 5.72. Distribución de Doto koenneckeri en Europa. El color rojo indica las zonas donde hay datos de la presencia de dicha especie. 124 La especie puede ser confundida con Doto dunnei Lemche, 1976, ya que ambas tienen una coloración similar, pero D. dunnei tiene los ceratas más pigmentados y más glonbososo y no tiene la zona apical tan característica de D. koenneckeri. Es la primera vez que se cita la especie en el levante ibérico y en la Comunitat Valenciana. Esta ampliación de la distribución hace que la especie este presente en prácticamente toda la Península Ibérica. Doto rosea Trinchese, 1881 Sinónimos: Doto rosea Trinchese, 1881 (Combinación original) Doto cinerea Trinchese, 1881 Doto aurea Trinchese, 1881 Doto aurita Hesse, 1872 Material (lám. 5.73.): Castelló: Port de Castelló (39° 58' 26.5" N - 0° 01' 01.0" E), un ejemplar recolectado en enero de 2017. València: Port de València – Marina Reial (39° 27' 42.6" N - 0° 19' 00.4" W), un ejemplar recolectado en febrero de 2017. Port de Sagunt (39°39'07.2"N - 0°12'18.7" W), dos ejemplares recolectados entre marzo y mayo de 2017. Far de Cullera (39° 11' 14.5" N - 0° 13' 05.6" W), un ejemplar recolectado en mayo de 2017. Descripción anatomía externa (lám. 5.74.): cuerpo alargado, esbelto, transparente y con una tonalidad amarillenta debido a los órganos internos. Multitud de diminutos puntos de pigmento marronáceo que se concentran sobre todo en el dorso y laterales del manto, también observándose en la cara interna de las vainas rinofóricas. En algunos ejemplares el pigmento es más negruzco y en otros se torna más rojizo. Cabeza poco prominente, de final relativamente plano, con dos aletas pequeñas y redondeadas. Cresta prerinofórica no aparente. Rinóforos en forma de bastón, con la base ligeramente ensanchada. Son transparentes con multitud de pigmentos blancos a lo largo de todo el rinóforo, siendo en el ápice la zona de mayor concentración. Vaina rinofórica transparente, de aproximadamente un tercio de la longitud del rinóforo, con pigmento blanco en el borde. Dicha vaina está pegada al rinóforo y se abre ligeramente en el borde, lengüeteando en la zona anterior en algunos ejemplares. Entre 6 y 7 ceratas a cada lado del cuerpo. Ceratas alargados, en forma de racimo, con tres o cuatro anillos de tubérculos y un tubérculo apical redondeado, ligeramente más ancho y grande que los laterales. Los tubérculos son redondeados, de pigmentación interna blanca, debido a una multitud de tejido glandular. El resto del cerata tiene un color marrón arena debido a la glándula digestiva. Tienen un anillo de pigmento oscuro en la base muy característico. Se trata de ceratas de apariencia compacta con la base estrecha Pseudobranquias desarrolladas (lám. 5.72 c-d.), bi o trilaminadas con pigmentos rojizo-negros muy diminutos y puntos blancos en la zona superior. Pie ancho, del mismo color que el manto, con la parte anterior redondeada y la posterior de final romo, que sobresale ligeramente del Lámina 5.73. Distribución de Doto rosea en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PV: Port de València; PS: Port de Sagunt. FC: Far de Cullera PC: Port de Castelló. 125 manto. Atrio genital bajo el primer cerata derecho. El ano sobresale y está situado entre el primer y segundo par de ceratas derecho. Aparato reproductor (lám. 5.75, lam. 5.76.): ampolla sacular ancha, globosa con forma de U. El gonoducto postampullar es largo y estrecho y conecta con dos conductos. Uno de ellos es un conducto deferente corto que se recubre de una próstata ancha en la mitad de su recorrido y después continua y se dobla sobre sí mismoy conecta con un pene alargado y cónico, que se encuentra dentro de una vaina. La otra conexión se trata de un oviducto que atraviesa por la glándula femenina hasta un receptáculo seminal, sacular y ancho, que se va estrechando y comunica con un gonoducto que serpentea sobre sí mismo y desemboca, Lámina 5.74. Habitus de Doto rosea. A-B: visión general de la anatomía externa de Doto rosea, siendo el ejemplar A de mayor tamaño que el B. C: detalle del cerata, con el anillo basal de color negro y una pseudobranquia bilaminada. D: detalle de un cerata con pseudobranquia trilaminada. 126 Lámina 5.75. Doto rosea. A: esquema simplificado del aparato reproductor. B: aparato reproductor entero, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. C: aparato femenino. D: ampolla. E: glándula femenina. F: aparato masculino. am: ampolla, cd: conducto deferente; ch: conducto hermafrodita gf: glándula femenina; go: gonoducto; g.post: gonoducto postampullar; g.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; pr: próstata, rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 127 ensanchando ligeramente, en una abertura próxima a la vaina del pene. La glándula femenina es grande y sacular que se abre junto a la abertura del gonoducto en el atrio genital. Sistema nervioso (lám. 5.76, lám. 5.77): anillo nervioso perisofágico formado por dos ganglios cerebro-pleurales de forma sacular, conectados entre ellos por una pequeña unión en la parte superior. Estos ganglios conectan con dos ganglios pedios que tienen la misma forma que los cerebro-pleurales, pero de tamaño más reducido. Los ganglios pedios están situados justo debajo de los cerebro-pleurales, ligeramente más posteriores y se fusionan con ellos en una pequeña área. Ambos ganglios pedios están conectados entre sí por una comisura pedia estrecha. Dos ganglios rinofóricos, situados en las bases de los rinóforos, conectan con los Lámina 5.76. Cortes transversales Doto rosea. am: ampolla, cd: conducto deferente, cp: cavidad pericárdica, e: esófago, es: estómago, gb: ganglios bucales, gcp: ganglios cerebropleurales, gf: glándula femenina, gor: glándula oral; gp: ganglio pedio, pe: pene, pr: próstata, rs: receptáculo seminal, sr: bulbo bucal, vp: vaina pene. 128 Lámina 5.77. Doto rosea. A : esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal B, C, D, E: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B: posterior. C: frontal, D, E: lateral). F: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. G, H: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (G) y dorsal (H).an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gor: glándulas orales; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 135 Lámina 5.84. Cuthona correai. A: esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal B, C, D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B: frontal. C: posterior, D: lateral). E: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. F, G: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista dorsal (F) y lateral (G). an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 136 Discusión: los ejemplares encontrados coinciden con la descripción original de la especie Cuthona correai tanto en la anatomía externa como en la rádula, aunque se han observado algunas variaciones. En la descripción original de ORTEA et al. (2002b) se describe un metapodio corto sin sobrepasar los últimos ceratas abatidos. En estos ejemplares el metapodio es más largo y sobrepasa los ceratas. También varía el número del último par de ceratas, que varía entre uno y dos. En cuanto a la rádula, se describe con los primeros dentículos laterales más pequeños que el dentículo central y el resto de los dentículos laterales. Esta característica se ha observado en algunos dientes, pero no en todos, ya sea por el deterioro o porque no están presenten en todos los dientes. Lámina 5.85. Rádula y Mandíbulas de Cuthona correai.A. Imagen de la rádula obtenida mediante microscopio óptico. B. Esquema de la rádula. C. Imágenes de la mandíbula a microscopio óptico. 137 Existen otras especies similares a Cuthona correai, como Cuthona fidenciae (Ortea, Moro & Espinosa, 1999) y Cuthona pallida (Eliot, 1906). Cuthona fidenciae (Ortea, Moro & Espinosa, 1999) se diferencia de Cuthona correai por la presencia de una mancha anal roja iridiscente y una coloración verdosa en la base de los ceratas. Cuthona pallida (Eliot, 1906) tiene una anatomía muy similar, con una coloración clara y los ceratas marronaceos, además de manchas naranjas en los tentáculos orales y rinóforos, pero el dorso es más opaco y blanquecino. Además, la rádula de Cuthona pallida tiene variación entre las cúspides de un diente a otro y puede sobresalir o no de los dientes laterales. En cambio, los dientes de Cuthona pallida son homogéneos y en todos ellos el dentículo central sobresale sobre los dentículos laterales. En la Península Ibérica predominan las especies Cuthona nana (Alder & Hancock, 1842); Cuthona perca (Er. Marcus, 1958); Cuthona thompsoni Garcia, Lopez-Gonzalez & GarciaGomez, 1991 y Cuthona willani Cervera, Garcia-Gomez & Lopez-Gonzalez, 1992. Cuthona nana tiene los tentáculos orales más anchos y desarrollados que Cuthona correai y carecen de coloración naranja. Cuthona nana tiene mayor número de ceratas por grupo y su coloración es más blanquecina. Cuthona perca es una especie introducida que tiene una coloración similar pero los ceratas tienen una forma más alargada. Además, C. perca carece de coloración anaranjada en rinóforos y tentáculos orales. Cuthona thompsoni tiene el cuerpo más estilizado, un patrón de manchas naranjas muy característicos en el dorso y manchas rojizas en la parte apical de los ceratas. Ninguna de estas características está presente en Cuthona correai. Dentro del aparato reproductor, el receptáculo seminal es más pequeño y el gonoducto más corto en Cuthona thompsoni. En Cuhtona correai el receptáculo seminal es de mayor tamaño y el gonoducto que lo conecta con la abertura genital es más largo. Cuthona willani, se diferencia de Cuthona correai en la presencia de unos abombamientos en la parte media de los tentáculos orales y de los rinóforos; un mayor número de ceratas con un abombamiento muy marcado en la parte superior y una coloración muy característica. Además, la rádula tiene una cúspide baja con los dentículos laterales de un tamaño muy similar a la cúspide. En cambio, en Cuthona correai el dentículo central está más desarrollado y es más alargado que los dentículos laterales Es la primera vez que se describe C. correai de la Península Ibérica y la segunda cita en Europa y a nivel mundial. Además, es la primera vez que se observa en el Mediterráneo. Debido a la falta de citas sobre la especie no se puede determinar su distribución. Es la primera vez que se describe el aparato reproductor, el aparato digestivo (a excepción de la rádula) y el sistema nervioso en la especie. 138 Cuthona thompsoni Garcia, Lopez-Gonzalez & Garcia-Gomez, 1991 Sinónimos: Cuthona thompsoni Garcia, LopezGonzalez & Garcia-Gomez, 1991 (combinación original). Material (lám. 5.86.): València: Port de València, Marina Reial (39° 27' 42.6" N - 0° 19' 00.4" W), un ejemplar recolectado en marzo de 2017. Descripción anatomía externa (lám. 5.87.): ejemplar de 6 mm. Cuerpo alargado y estrecho, de color blanquecino, aunque la zona donde se sitúan los órganos internos, debido a que se observan por transparencia, adquiere una tonalidad más amarillenta. La zona cefálica muestra una pigmentación blanca iridiscente, a excepción de la zona donde se sitúan los ojos, negros, pequeños y visibles justo detrás de los rinóforos. Los rinóforos son alargados y cilíndricos, ligeramente más largos que los tentáculos orales, de color blanco hialino con un pigmento blanco anaranjado que cubre desde su zona media hasta el ápice. En la cabeza se observa una coloración característica de la especie formada por tres parches naranjas, uno alargado situado en la parte anterior de la base de los rinóforos, otro más corto justo en la base de los rinóforos y finalmente uno alargado justo detrás de los rinóforos y ya alcanzando el cuerpo del ejemplar. La parte anterior del animal está ligeramente ensanchada y redondeada, y de sus extremos surgen dos tentáculos orales cilíndricos de ápice truncado y coloración idéntica al cuerpo, con pequeñas manchas blanco hialino cerca de la zona apical. De nueve a diez grupos de ceratas formando hileras oblicuas de 3-4 ceratas por grupo. Son alargados, cilíndricos, estrechándose ligeramente en la base y en el ápice, dándole un aspecto abombado, aunque este aspecto puede variar según si el ejemplar está en reposo o realizando alguna actividad. Los tamaños son variables, siendo más grande cuanto más dorsalmente se sitúan. La coloración Lámina 5.87. Habitus de Cuthona thompsoni: A. Detalle de los ceratas y la cabeza. B. Visión dorsal de un ejemplar adulto. Lámina 5.86. Distribución de Cuthona thompsoni en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. PV: Port de València. 139 general del cerata es marrón oscuro con la zona apical blanco hialino. Entre ambas zonas hay un anillo de color naranja rojizo que rodea la zona próxima al ápice. En algunos ceratas aparece una mancha naranja en la parte media. Atrio genital en la parte baja del primer grupo de ceratas en el lado derecho. Pie ancho y alargado de color blanco hialino, con un ensanchamiento en la zona anterior formando unas prolongaciones redondeadas que se observan en el animal en posición dorsal, sobresaliendo del manto. Metapodio muy largo y estrecho de final puntiagudo. Ano cleioprocto, situado en el lateral derecho, bajo el segundo grupo de ceratas. Aparato reproductor (lám. 5.88., lám. 5.89.): ampolla grande en forma de U que continúa en un gonoducto postampullar alargado y fino que conecta con dos conductos. Uno de los conductos, el oviducto, conecta con el receptáculo seminal atravesando la glándula femenina, de tamaño considerable. El otro se trata del conducto deferente que pronto es rodeado por una próstata curvada que ocupa la mitad del conducto más próximo a la ampolla. El resto del conducto deferente es estrecho y serpentea hasta llegar a un pene estrecho y cónico. Hay una glándula peniana ovalada que se conecta con el pene justo antes de penetrar en una vaina que desemboca en el orificio genital. El receptáculo seminal es pequeño y se une a la glándula femenina cerca del orificio genital por un corto ducto. Sistema nervioso (lám. 5.88., lám. 5.90.): anillo perisofágico formado por dos ganglios cerebro-pleurales y dos ganglios pedios. Ambos pares son globosos y están conectados por pequeñas áreas. Los ganglios cerebro-pleurales están unidos entre sí por una pequeña fusión en uno de sus laterales. Los ganglios pedios son más pequeños que los cerebro-pleurales y están bastante separados entre sí. Se unen por una larga y estrecha comisura pedia. Dos ganglios rinofóricos de tamaño medio se sitúan en la base de los rinóforos, justo encima de los ganglios cerebro-pleurales. Están unidos a ellos mediante un nervio ancho y corto. De la zona superior de cada uno de los ganglios rinofóricos surgen dos nervios que atraviesan el rinóforo. Tras los ganglios pedios hay dos ganglios bucales, situados bajo el esófago y muy próximos entre sí, unidos por un estrecho nervio. Además, están conectados mediante un par de nervios alargados y estrechos a los ganglios cerebro-pleurales. Los ojos se sitúan a cada lado del anillo, pegados a los ganglios cerebro-pleurales y justo encima de los ganglios pedios. Se trata de un par de ojos esféricos y negros. Junto a los ojos se encuentran los otolitos, con forma ovalada. Lámina 5.88. Cortes transversales de Cuthona thompsoni obtenidos mediante microtomografía computerizada. ce: ceratas, e: esófago, gb: ganglios bucales, gcp: ganglios cerebro-pleurales, gd: glándula digestiva, gf: glándula femenina, gp: ganglios pedios,gpe: glándula peneal; ot: otolitos, pe: pene, sr: bulbo bucal. 140 Lámina 5.89. Cuthona thompsoni. A: esquema simplificado del aparato reproductor. B: aparato reproductor entero, reconstruido mediante el programa Amira 5.3.3. C: glándula femenina, D: aparato masculino; E:aparato femenino; F:ampolla.am: ampolla; cd: conducto deferente; gf: glándula femenina; gpe: glándula peneal;g.post: gonoducto postampullar; g.pre: gonoducto preampullar; pe: pene; pr: próstata; rs: receptáculo seminal; vp: vaina pene. 141 Lámina 5.90. Cuthona thompsoni. A: esquema simplificado del sistema nervioso en visión frontal B, C, D: reconstrucción del sistema nervioso mediante el programa Amira 5.3.3 en diferentes planos (B: frontal. C: posterior, D: lateral). E: esquema de los ceratas; F: esquema simplificado del aparato digestivo en visión dorsal. G, H: reconstrucciones del aparato digestivo mediante Amira 5.3.3 en vista lateral (G) y dorsal (H). an: ano; bo: boca; ce: cerata; cn: cnidosaco; cp: comisura pedia; e: esófago; es: estómago; gb: ganglios bucales; gcp: ganglios cerebro-pleurales; gd: glándula digestiva; gp: ganglios pedios; gr: ganglios rinofóricos; in: intestino; oj: ojo; ot: otolito; sr: bulbo bucal. 142 Aparato digestivo (lám. 5.88., lám. 5.90.): boca pequeña que desemboca en un bulbo bucal ovalado de tamaño medio que conecta con un esófago corto y ancho. Este esófago está conectado con un estómago aplanado. Del estómago surgen dos prolongaciones de la glándula digestiva en la parte anterior que se introducen en el primer par de grupos de ceratas de cada lado que se sitúan en forma de herradura. Una prolongación de la glándula digestiva en la parte posterior atraviesa todo el dorso del animal y se va bifurcando de manera ligeramente asimétrica para penetrar en los distintos grupos de ceratas. Esta glándula penetra en los ceratas, adoptando su forma, y termina en un cnidosaco bien desarrollado. El intestino se encuentra en la parte anterior del estómago, tras el primer par de ceratas, y se trata de un ducto alargado que recorre el lado derecho del animal hasta el ano, que se abre bajo el segundo grupo de ceratas. Rádula (lám. 5.91.): fórmula radular 19 x 0.1.0. Diente en forma de herradura, con una cúspide central bien definida y 10-12 dentículos laterales de los cuales los más centrales están bien definidos y son de tamaño grande (4-6 primeros dentículos) y el resto son de menor tamaño y poco visibles. mandíbulas bien desarrolladas con el borde masticador ligeramente denticulado, apenas visible. Puesta: no se encontró ninguna puesta asociada a esta especie. Hábitat: el ejemplar se encontró sobre un ejemplar del género Eudendrium a pocos metros de profundidad, en una zona portuaria. En la bibliografía la especie fue descrita sobre rocas, en el intermareal, en aguas someras (GARCÍA et al., 1991) y en fondo de Lobophora J.Agardh, 1894 (MORO et al., 2016). Distribución: en la Península Ibérica (lám. 5.92.) la especie se encuentra en la costa sur de Portugal (CALADO et al., 2003; CERVERA et al., 2004), en Andalucía (GARCÍA et al., 1991; CERVERA et al., 2004; GOFAS et al., 2011) y en el Levante (WIRTZ & DEBELIUS, 2003; CERVERA et al., 2004). También se ha citado en las Islas Canarias y en Córcega (MORO et al., 2016). MORO et al. (2016) afirma que tiene datos de la especie desde España en el Mediterráneo hasta Córcega. Discusión: Los ejemplares coinciden en la descripción externa, en el aparato reproductor y la rádula descritas en el trabajo original de GARCÍA et al. (1991). En este trabajo se describen el aparato digestivo (a excepción de la rádula) y nervioso por primera vez. De las características de C. thompsoni, su patrón de manchas narajas en la cabeza es una de las más notables para distinguirla de otras especies del mismo género. Dentro de las especies que pueden ser confundidas con C. thompsoni en la zona Macaronesica se encuentra la especie Cuthona mimar Ortea & Moro, 2018. El patrón de inserción y los ceratas son similares, pero la coloración es distinta, ya que C. mimar tiene una línea dorsal roja y otra blanca (ORTEA & MORO, 2018) que no se observa en C. thompsoni. Además, la coloración característica de la Lámina 5.92. Distribución de Cuthona thompsoni en Europa. El color rojo indica las zonas donde hay datos de la presencia de dicha especie. 143 Lámina 5.91. Rádula y Mandíbulas de Cuthona thompsoni. a. Esquema de la rádula. b. Imagen de la rádula obtenida mediante microscopio óptico. c. Imágenes de la mandíbula a microscopio óptico, mostrando el detalle de los dentículos. 144 cabeza y rinóforos de C. thompsoni es distinta en C. mimar, que es más similar a una línea continua. En este trabajo no se ha conseguido recolectar ninguna puesta. MORO et al. (2016) describe la puesta como un cordón enrollado en bucles irregulares, con huevos blancos dispuestos en 24 capas, salvo en los extremos donde solo hay una capa. Género Amphorina Quatrefages, 1844 Especie tipo: Amphorina alberti Quatrefages, 1844. Se trata de un género muy homogéneo morfológicamente, pero con patrones de coloración externa muy variables. Animales con filas de ceratas no ramificados. Hasta seis ceratas por fila en los grupos anteriores, aunque no suelen ser más de cuatro. Ceratas sin tubérculos, normalmente hinchados. Rinóforos lisos. Mandíbulas anchas y dientes centrales con el dentículo central pegado a los dentículos laterales adyacentes. Próstata larga y gruesa. Receptáculo seminal alargado u ovalado, unido a un ducto bastante largo. La glándula del pene conecta con él mediante un ducto estrecho. El pene es cónico, con un estilete corto, curvado y hueco (KORSHUNOVA et al., 2020). Actualmente el género Amphorina consta de cinco especies: A. andra Korshunova, Malmberg, Prkić, Petani, Fletcher, Lundin, Martynov, 2020; A. farrani (Alder & Hancock, 1844); A. linensis (Garcia-Gomez, Cervera & Garcia, 1990); A. pallida (Alder & Hancock, 1842) y A. viriola Korshunova, Malmberg, Prkić, Petani, Fletcher, Lundin, Martynov, 2020 (WORMS, 2020) Amphorina farrani (Alder & Hancock, 1844) Sinónimos: Eolis farrani Alder & Hancock, 1844 (combinación original) Aeolis adelaidae Thompson, 1860 Amphorina alberti Quatrefages, 1844 Eolidia flavescens Risso, 1826 Eolis adelaidae Thompson W., 1859 Eolis andreapolis MacIntosh, 1865 Eolis robertianae MacIntosh, 1865 Galvina flava Trinchese, 1879 Material (lám. 5.93): Alacant: Port de Vila Joiosa (38°30' 30.6" N - 0°13' 09.0" W), un ejemplar recolectado en febrero de 2017. Descripción anatomía externa (lám. 5.94.): cuerpo esbelto y alargado de color blanco hialino. Se observan algunas manchas grandes de color naranja en la cabeza y en la zona dorsal, observándose también en la cola. Rinóforos largos en forma de bastón, con un ligero ensanchamiento en la base. La mitad superior del rinóforo es anaranjada y la zona inferior es blanquecina. Se observan varios puntos blancos en la zona media del rinóforo, en la parte anterior. Los tentáculos orales tienen la misma forma, color y patrón que los rinóforos, aunque miden la mitad. Multitud de ceratas dispuestas en hileras laterales, de tres o cuatro ceratas por grupo. Lámina 5.93. Distribución de Amphorina farrani en la Comunitat Valenciana por provincias. a: Castelló; b: València; c: Alacant. VJ: Vila Joiosa. 6. CONCLUSIONES Gracias a los resultados obtenidos en este proyecto de tesis se pueden obtener las siguientes conclusiones: 1Se cita por primera vez en Europa la especie Trinchesia rubrata. Además, es la primera cita después de la localidad tipo y la descripción original. 2Se citan por primera vez en la Península Ibérica las especies Favorinus ghanensis y Cuthona correai. 3Se citan por primera vez en la Comunitat Valenciana las especies Doto acuta, Doto coronata, Doto koenneckeri, Doto rosea, Amphorina farrani, Eubranchus doriae, Eubranchus exiguus, Tergipes tergipes, Tenellia adspersa, Trinchesia foliata y Trinchesia genovae. 4Se describe por primera vez el aparato reproductor de las especies Doto koenneckeri y Cuhtona correai. 5Es la primera vez que se describe el aparato reproductor maduro de la especie Capellinia dorie, ya que la única descripción existente hasta la fecha corresponde a un ejemplar inmaduro. 6Se describen por primera vez el aparato digestivo (sin tener en cuenta a la rádula) de las especies Caloria elegans, Cratena peregrina, Facelina auriculata, Favorinus branchialis, Favorinus ghanensis, Doto acuta, Doto coronata, Doto koenneckeri, Doto rosea, Cuthona thompsoni, Cuthona correai, Amphorina farrani, Capellinia doriae, Eubranchus exiguus, Calmella cavolini, Edmundsella pedata, Tergipes tergipes, Trinchesia caerulea, Trinchesia foliata, Trinchesia genovae, Trinchesia rubrata y Antiopella cristata. 7Se describe por primera vez el sistema nervioso de las especies Caloria elegans, Cratena peregrina, Facelina auriculata, Favorinus branchialis,Favorinus ghanensis, Doto acuta, Doto coronata, Doto koenneckeri, Doto rosea, Cuthona thompsoni, Cuthona correai, Amphorina farrani, Capelllinia doriae, Eubranchus exiguus, Calmella cavolini,Edmundsella pedata, Tergipes tergipes, Trinchesia caerulea, Trinchesia foliata, Trinchesia genovae, Trinchesia rubrata y Antiopella cristata. 8Es la primera vez que se observa la especie Doto acuta sobre el briozoo Crisia denticulata y se trata de un suceso que se repite en todas las muestras obtenidas. Este hecho lleva a la cuestión de si realmente predan sobre el hidrozoo Obelia geniaculata, ya que en algunas muestras ni siquiera se observa la presencia de este hidrozoo. Es bastante improbable que una especie del género Doto se alimente de un briozoo, por lo que se baraja la posibilidad de que su alimentación consista en ejemplares de hidrozoos que crezcan asociados a este tipo de briozoo, constituyendo el briozoo un refugio para el nudibranquio, que se camufla a la perfección sobre él. 9Se cita por primera vez a la especie Doto coronata sobre un sustrato tapizado por la especie Crisia denticulata. Esta especie estaba tapìzada de hidrozoos, presas potenciales de Doto coronata. 10Se cita por primera vez la especie Eubranchus exiguus sobre Clytia hemispherica y Bugula neritina. 11-. Se cita por primera vez la especie Trinchesia rubrata sobre el hidrozoo Turritopsis sp. 12Se cita por segunda vez la especie Favorinus ghanensis dentro del Mediterráneo, ampliándose su rango de distribución a la parte mediterránea de la Península Ibérica. Se considera como posible distribución normal de la especie el atlántico africano y la parte 248 occidental del mediterráneo, pero es necesario obtener más información sobre la especie para confirmar dicha teoría, ya que se trata de una especie poco estudiada. 13Es la segunda cita existente para la especie Cuthona correai y la primera cita desde la descripción original. La primera cita, en Tenerife, corresponde a su descripción, por lo que esta cita amplía su rango de distribución. Además, es la primera vez que se cita en aguas mediterráneas Los resultados obtenidos en el presente trabajo amplían de forma considerable el conocimiento existente hasta la fecha de nudibranquios en el levante español. Es la primera vez que se realiza un muestreo tan amplio en esta área. Por otra parte, hasta la fecha solo se habían realizado estudios en puertos y es la primera vez que se alternan zonas portuarias y zonas naturales en un mismo estudio. Dentro del área de estudio de este proyecto de tesis solo existen tres trabajos previos que recogen información sobre nudibranquios (DE FEZ, 1974; CERVERA et al. 2004; SÁEZ et al., 2008). El primer estudio es el famoso trabajo de DE FEZ (1974) sobre los Nudibranquios y Sacoglosos del Puerto de Valencia. El segundo, CERVERA et al. (2004), consiste en un listado con los Opistobranquios citados en España y Portugal hasta 2004, donde queda integrada el área de estudio y gran parte de la bibliografía sobre este grupo taxonómico a nivel de la Península Ibérica. El último, SAEZ et al., (2008) es una guía visual de los organismos del Puerto de Valencia. En la tabla 6.1. comparamos los resultados obtenidos en este proyecto de tesis con los resultados previos de nudibranquios para la zona de la Comunitat Valenciana mostrados en estos tres artículos. En el área de estudio, correspondiente al Port de València, DEFEZ (1974) ya citó diez de las veintinueve especies obtenidas. Esto indica una continuidad temporal de estas especies desde que fueron Zona 6 Zona 7 Zona 8 Berghia verrucicornis x x x x Caloria elegans x x x x Cratena peregrina x x x x x Facelina auriculata x x x x Favorinus branchialis x x x x Favorinus ghanensis Doto acuta x Doto coronata x x Doto floridicola x x x x Doto koenneckeri x x Doto rosea x x Cuthona correai Cuthona thompsoni x Amphorina farrani x x x Capellinia doriae Eubranchus vittatus x x Eubranchus exiguus x Eubranchus sp. 1 Calmella cavolini x x x x Flabellina affinis x x x x x Edmundsella pedata x x x x Tergipes tergipes x x x Tenellia adspersa x Trinchesia caerulea x x x Trinchesia foliata x Trinchesia genovae x x x Trinchesia rubrata Trinchesia sp.1 Antiopella cristata x x x Cervera et al., 2004 De Fez, 1974 Especie Saez et al., 2008 Tabla 6.1. Comparación de los resultados obtenidos en el presente trabajo con los trabajos de DEFEZ (1974), CERVERA et al. (2004) y SÁEZ et al. (2008). Zona6: Costas ibéricas del Mar de Alborán (Andalucía oriental), desde Punta de la Chullera hasta el Cabo de Gata. Zona 7: Costas del Levante español, desde el Cabo de Gata hasta el límite con las costas catalanas. Zona 8: Costas de Catalunya, hasta la frontera con Francia 249 citadas por primera vez en 1974. El trabajo de SÁEZ et al. (2008), en cambio, a pesar de ser más reciente muestra muy pocas coincidencias con este estudio, exactamente dos especies. Esto se debe a que se trata de una Guía centrada en especies que pueden reconocerse a simple vista y los nudibranquios estudiados son de pequeño tamaño y es necesario realizar un muestreo más elaborado para obtenerlos que el simple reconocimiento visual. Por lo tanto, los resultados amplían el conocimiento de especies dentro del Puerto de València y confirman que gran parte de las especies estudiadas por DEFEZ (1974) siguen presentes. En relación con los resultados de CERVERA et al. 2004, en la zona correspondiente al levante español (zona 7) veinte de las veintinueve especies están presentes. Estas citas corresponden al trabajo de De Fez o de estudios realizados en Murcia (TEMPLADO, 1982,1983,1984; MARÍN & ROS, 1987) por lo que existe una coherencia faunística con el resto del levante español y en la mayoría de las especies con toda la vertiente mediterránea ibérica (zonas 6 y 8). Se observa un mayor número de ejemplares en zonas portuarias en contraste con las zonas naturales. Esto se debe principalmente a que la Comunitat Valenciana es un área con predominio de hábitats arenosos y las zonas rocosas conforman un porcentaje bajo dentro del global de hábitats. Sería interesante realizar futuros que comprueben si la aparición de estructuras antrópicas fue beneficiosa para el asentamiento y dispersión de nudibranquios en la Comunitat Valenciana. Otro punto para tener en cuenta son las condiciones necesarias para el asentamiento y la reproducción por parte de los nudibranquios. En algunos puertos, como el de Alacant, no se observó apenas vida y no se encontraron nudibranquios debido a la calidad del agua y la visible presencia de hidrocarburos entre sus aguas. Estos requisitos mínimos de calidad del ambiente por parte de los nudibranquios para colonizar ciertas zonas nos ayudan a tener una aproximación inicial del estado de algunos puertos y zonas costeras, según aparezcan ejemplares de este Orden o no. El uso del micro-ct como técnica no destructiva ha resultado ser una herramienta muy útil en este proyecto de tesis. La posibilidad de obtener unos cortes histológicos sin tener que cortar y destruir el ejemplar dentro del estudio de nudibranquios tiene varias ventajas por diversos motivos. En algunas ocasiones, el estudio de alguna de las especies esta basado en un único ejemplar, ya que son especies difíciles de encontrar, debido a su cripsis con el sustrato y su reducido tamaño, y la técnica de micro-ct permite repetir los cortes histológicos en el caso de que salgan movidos o con poco contraste o emplear el ejemplar para otros estudios, en este caso el montaje de las rádulas, que de otro modo no se habría podido llevar a cabo. Además, el reducido tamaño de los ejemplares dificulta mucho el manejo y preparación de las muestras para la realización de cortes histológicos mediante métodos clásicos. La metodología empleada en la preparación de las muestras para el micro-ct minimiza la manipulación y posible extravío, rotura o deterioro del ejemplar. Por otro lado, el programa Amira 5.3.3 es una herramienta informática indispensable para el estudio y reconstrucción de la anatomía interna. Esta herramienta es capaz de proporcionar una reconstrucción tridimensional de cada una de las estructuras internas de manera aislada, para su mejor observación y estudio. Además permite tomar medidas y volúmenes, lo que nos aporta una información valiosa imposible de obtener mediante En conclusión, la Comunitat Valenciana es una localidad con gran potencial para el estudio de heterobranquios, con una riqueza considerable. Existen multitud de posibilidades, tales como realizar estudios cuantitativos, comparar las áreas antrópicas y las naturales o centrarse en las dos reservas de gran interés ambiental de la zona: las islas Columbretes y la Illa de Tabarca. BIBLIOGRAFÍA AERTS, L. A. M. (1994). Seasonal distribution of nudibranchs in the southern Delta area, SW Netherlands. Journal of Molluscan Studies, 60(2), 129-139. AGUADO GIMÉNEZ, F. (2000). Relaciones depredador-presa en organismos marinos, aposematismo en moluscos heterobranquios. Universidad de Murcia. 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