Formulation of Novel Liquid Crystal (LC) Formulations with Skin-Permeation-Enhancing Abilities of Plantago lanceolata (PL) Extract and Their Assessment on HaCaT Cells

2323 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34Új gyógysze echnológiai eljá ások Új ípusú Plan ago lanceola a (PL) a almú olyadékk is ályos endsze ek (LC) o mulálása és jellemzése HaCaT sej onalon Kósa Dó a1,3,4, Pe ő Ágo a1,3,4, Feny esi Fe enc1,3, Vá adi Judi 1,3, Vecse nyés Miklós1,3, Gonda Sándo 2, Vasas Gábo 2, Fehé Pálma1,3, Bácskay Ildikó1,3,4, Ujhelyi Zol án1,3* 1 Deb eceni Egye em, Gyógysze ész udományi Ka , Gyógysze echnológiai Tanszék 2 Deb eceni Egye em, Te mésze udományi Ka , Nö ény ani Tanszék 3 Deb eceni Egye em, Gyógysze észe i Tudományok Dok o i Iskola 4 Deb eceni Egye em, Egészségipa i In éze Absz ak A sze eze ünke é ő eak í oxigén gyökök olyan súlyos be egségek ki ál ói lehe nek, min például különböző hipe p oli e a í bő be egségek agy aká a bő dagana os el ál ozása. Néhány gyógynö- ény ki ona széles kö ben el e jed an ioxidáns o áskén öbb készí ményben is meg alálha ó. Az an ioxidáns e ápia sze epe egy e jelen ősebb a különböző gyulladással já ó olyama okban. Különbö- ző inno a í o mulációk lehe ősége biz osí anak a i o a makonok ha ásának nö elésé e. A Plan ago lanceola a bioak í együle einek gyulladáscsökken ő, an ioxidáns és bak e icid ha ása egya án jól isme . Az alábbi kísé le so oza célja egy olyan új ípusú olyadékk is ály endsze o mulálása ol , amely amelle , hogy meg édi a Plan ago lanceola a ki ona o annak hid olí ikus bomlásá ól, nö e- li az ex ac um biohasznosulásá is. Tekin e el a a, hogy a gyógysze készí mények biz onságossága kiemelkedően on os szempon a gyógysze o mulálás so án, az alkalmazo segédanyagoka és ösz- sze é eleke , azok biokompa ibili ásá , különböző in i o módsze ekkel izsgál uk humán ke a inoci a (HaCaT) sej onalon. Az előze es ci o oxici ás izsgála ok alapján a ki álasz o elüle ak í anyagaink a Lab asol, Lau oglycol 90, és Geluci e 44/14 ol ak. A P. lanceola a ki ona kioldódási sebességé F anz di úziós cella segí ségé el ha á oz uk meg. A gyógysze ho dozó endsze ek an ioxidáns ulajdonsága- i MDA (malonaldehid), alamin DPPH (2,2-di enil-1-pik il-hid azil) an ioxidáns esz ekkel izsgál uk. E edményeink alapján a o mulál készí mények a ha óanyag gyo s elszí ódásá biz osí ják azál al, hogy az alkalmazo pene áció okozó segédanyagok e e zibilisen módosí ják a s a um co neum ba ie ulajdonságai . Ezek a segédanyagok nem csak biz onságosan alkalmazha ók és jól ole álha ók, de előnyös ulajdonságaik é én képesek a ha óanyag jobb biohasznosulása ál al ja í ani a készí mények használha óságá . Kulcssza ak: Folyadékk is ályos endsze ek, Plan ago lanceola a, Pene áció okozók, an ioxidáns, DPPH esz , Sej éle képességi izsgála ok, MTT esz , ROS; MDA; RTCA; TEER; HaCaT sej onal Fo mula ion o No el Liquid C ys al (LC) Fo mula ions wi h Skin-Pe mea- ion-Enhancing Abili ies o Plan ago lanceola a (PL) Ex ac and Thei Assess- men on HaCaT Cells Abs ac Exposu e o eac i e oxygen species can easily esul in se ious diseases, such as hype p oli e a i e skin diso de s o skin cance . He bal ex ac s a e widely used as an ioxidan sou ces in di e en com- posi ions. The impo ance o an ioxidan he apy in in lamma o y condi ions has inc eased. Inno a i e * A le elező sze ző elé he ősége: Deb eceni Egye em, Gyógysze ész udományi Ka , Gyógysze echnológiai Tan- szék, 4032 Deb ecen, Nagye dei k . 98; [email p o ec ed] Új gyógysze echnológiai eljá ások 2424 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34 Be eze és A cuAz embe i bő , min elsődleges édelmi onal számos kö nyeze i ha ás ól, öbbek köz a eak í oxigén gyökök (ROS) ká os kö e kezményei ől édi sze eze ünke .1 Bá a eak í oxigéngyökök pa ogén ha ásának pon os mechanizmusa jelen- leg még nem eljesen isme , sze epük bizonyos súlyos kó képek, min hipe p oli e a í bő be eg- ségek agy bő ák kialakulásában má egyé el- műen bizonyí o .2 Az elmúl é izedekben szá- mos e ő eszí és i ányul a ROS beha ás csökken é- sé e és/ agy semlegesí ésé e.3 A 200-280 nm hul- lámhosszú UV-C sugá zás gyak an e edményezhe i a eak í gyökök kialakulásá .4 Mi el az UV-C olyan ionizáló sugá zás, amely e ős mu agénkén a en emlí e immunmediál be egségeke , agy aká bő áko is okozha . A jellemzően gyako i UV-C expozíció mia a sugá zás csökken ése azonban jelenleg sajnos lehe e lennek űnő elada . Mind- ezek alapján inno a í ejlesz ésű an ioxidáns e á- pia ha ékony megoldásnak bizonyulha . A gyógynö ények a bennük alálha ó hasznos kémiai anyagoknak köszönhe ően alap e ő sze e- pe öl enek be az egészség megő zésében.5 A Plan ago nemze ségbe a ozó közel 275 aj közül az egyik leg on osabb a Plan ago lanceola a (PL), magya ne én lándzsás ú i ű.6 A P. lanceola a bio- ak í komponensei külön éle a makológiai ulaj- donságokkal endelkeznek, beleé e a gyulladás- csökken ő, izele haj ó, an ibak e iális,7 hepa o- p o ek í 8 és an ioxidáns9 ha ásoka . A gyógy- ásza ban napjainkban leginkább légző endsze i be egségek, o ábbá bő sé ülések kezelésé e alkalmazzák.10 A népgyógyásza é századokon ke esz ül használ a sebek, égések kezelésé e, é - zéscsillapí ás a is.11 A P. lanceola a ő ak í komponense a enile anoid- glikozidok közé a ozó e baszkozid (ak eozid).12 Bá közisme en ki áló biz onsági p o illal endel- kezik, a hid olízis e aló hajlamból adódó gyenge kémiai s abili ása ko lá ozza a gyógysze echno- lógiai elhasználha óságá .13 Számos előnyös ha ásának ellené e az ak eozid magas hid o il jel- lege mia limi ál ak a lehe séges alkalmazási módsze ek.14 A en emlí e ko lá ok kiküszöbölé- sének é dekében olyadékk is ály endsze eke o mulál unk, melyek amelle , hogy édik a P. lanceola a ki ona o a hid olízis ől, okozzák annak ha ásai is. A olyadékk is ályok nem ko alens kö éssel kap- csolódó molekulák különböző molekulá is o ien- ációjú ázisokkal (mezo ázis).15 Anizo óp jelle- gükből adódóan észben olyadékok a, észben pedig k is ályok a jellemző ulajdonságoka mu a nak, o ábbá képesek szolubilizálni az olaj- és ízoldha ó együle eke egya án .16 A olyadék- k is ályok ál alában ízből agy ese leg olajból, ille e egy, agy öbb enzidből képződnek meg- ha á ozo koncen áció és hőmé sékle - a o- mányban.17 Mi el a elüle ak í anyagok egy meg- o mula ions can be used o imp o e he e ec s o hese phy opha macons. The bioac i e compounds o Plan ago lanceola a (PL) possess di e en e ec s, such as an i-in lamma o y, an ioxidan , and bac e i- cidal pha macological e ec s. The objec i e o his s udy was o o mula e no el liquid c ys al (LC) com- posi ions o p o ec Plan ago lanceola a ex ac om hyd olysis and o imp o e i s e ec . Since sa e y is an impo an aspec o pha maceu ical o mula ions, he biological p ope ies o applied excipien s and blends we e e alua ed using asso ed in i o me hods on HaCaT cells. Acco ding o he an eceden oxici y sc eening e alua ion, h ee su ac an s we e selec ed (Geluci e 44/14, Lab asol, and Lau ogly- col 90) o he o mula ion. The dissolu ion a e o PL om he PL-LC sys ems was e alua ed using a F anz di usion chambe appa a us. The an ioxidan p ope ies o he PL-LC sys ems we e e alua ed wi h 2,2-diphenyl-1-pic ylhyd azyl (DPPH) and malondialdehyde (MDA) assessmen s. Ou esul s sugges ha hese composi ions use a non adi ional, apid-pe mea ion pa hway o he deli e y o d ugs, as he applied pene a ion enhance s e e sibly al e he ba ie p ope ies o he ou e s a um co neum. These excipien s can be sa e and highly ole able hus, hey could imp o e he pa ien ’s expe ience and p omo e adhe ence. Keywo ds: liquid c ys als; Plan ago lanceola a; pene a ion enhance s; an ioxidan and an i-in lamma o- y e ec s; DPPH es ; cy o oxici y in es iga ion; MTT es ; ROS; MDA; RTCA; TEER; HaCaT cells 2525 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34Új gyógysze echnológiai eljá ások ha á ozo csopo jának egyé elmű pene áció- okozó ha ása an, ezen segédanyagok kö ül e- kin ő meg álasz ása ellensúlyozha ja az ész e ípusú együle ek ká os ha ásá . A kémiailag indu- kál sej működés meg ál oz a ása előnyös lehe . A pene áció okozó segédanyagok sej éle képes- ség e és cellulá is anszpo a gyako ol ha ása egya án megha á ozha ó in i o kö ülmények közö . A együle ek, sej -sej közö i szo os kap- csola ának kialakí ásában ész e ő junkciós ehé jék e (ZO-1, claudin-1, bé a-ca enin s b.), és ezál al a pa acellulá is in eg i ás nö elésé e gya- ko ol ha ásá má ko ábban leí ák.18 Ha ékony- ságuk mé éke a segédanyagok és össze é elek izikai ulajdonságai ól és kémiai sze keze é ől egya án ügg.19 Hasonló sze keze ek ese én, ha a hid o il eje polie ilén ől p opilén-glikol a cse él- jük, a ci o oxici ás ő megha á ozó ényezője a monoész e a alom és a szénlánc hossza lesz.20 Azonban nem csak a szénlánc hossza be olyásolja a bélből ö énő elszí ódás mé éké , hanem szá- mos más sze keze i pa amé e is, min például az ész e eződés mé éke, a elí e lenség helyze e, agy a szubsz i uensek ípusa, melyek egya án be olyásolha ják a elüle ak í anyagok pene á- ció okozó ha ásá .21 Kísé le so oza unk célja egy olyan biz onságos gyógysze o ma kialakí ása ol , melyből a Plan ago lanceola a ki ona bő ön ke esz ül ö - énő elszí ódása okozo . A bő ön ke esz ül ö - énő gyógysze be i el so án ké ő kihí ással kell szembenéznünk. Tekin e el a a, hogy a helyi gyógysze es e ápiá al szembeni be eg compliance alacsony, a ha óanyag szolubilizációja, alamin a sza u é egen ke esz ül ö énő meg elelő pene - ációja melle kiemel en on os a kezeléssel szem- ben anúsí o be eg adhe encia is. A különböző gyógysze e chnológiai segédanyagok az előző- ekben emlí e kihí ások kiküszöbölésében is segí he nek.22 Ku a ásunk célja PL a almú olyadékk is ály endsze ek o mulálása és izsgála a ol . Az LC endsze ek o mulálásá al a ha óanyag édelmén kí ül nö el ük annak biohasznosulásá is. A p e o mulációs izsgála ok alapján há om külön- böző pene áció okozó segédanyago (Lab asol, Lau oglycol 90, és Geluci e 44/14) a almazó össze é elből álasz o unk ki négye .23 Mi el a gyógysze készí mények biz onságossága elen- gedhe e len szempon , az alkalmazo segédanya- gok és össze é elek biológiai ulajdonságai RTCA (Real-Time Cell Elec ic Sensing), ille e MTT (3-(4,5-dime il iazol-2-il)-2,5-di enil e azolium- b omid) sej éle képességi esz el izsgál uk humán ke a inoci a (HaCaT) sej onalon.24 A sej - onala széles kö ben alkalmazzák helyileg alkal- mazo gyógysze készí mények ci o oxici ásának in i o modellezésé e.25 A hipe p oli e a í bő - be egségek in i o modelljekén IL-1 és TNF-al a indukál ke a inoci áka használ unk.26 A o mulál PL-LC endsze ek ha ásának izsgála ához a ke a inoci a sej ekben UV-C sugá zással indukál oxida í s essz ál o unk ki. A gyógysze ho - dozó endsze ek an ioxidáns ulajdonságai MDA (malonaldehid), alamin DPPH (2,2-di enil-1- pik il-hid azil) an ioxidáns esz ekkel izsgál uk. Kísé le eink e edményei nem csak a különböző pene áció okozó segédanyagoka a almazó o mulációk ha ékonyságbeli különbségé , de azok hipe p oli e a í bő be egségek kezelésében ö énő alkalmazásának előnyei is bizonyí o ák. E edmények Folyadékk is ály endsze ek o mulálása A olyadékk is ályok kialakulásának pa amé e ei pszeudo e ne ázisdiag am segí ségé el ha á oz- uk meg. A Lab asol/Lau oglycol 90 (6:1)/Geluci e 44/14/ íz pszeudo e ne diag am az 1. áb án lá - ha ó. Annak é dekében, hogy a íz a alomnak a olyadékk is ályos sze keze e gyako ol ha ásá anulmányozzuk, különböző íz a almú (10% - 90%) min áka készí e ünk. A i álás so án őkén mik oemulziók képződ ek. Amiko a íz a ánya 90% ölé emelkede mak oemulziók alakul ak ki, ügge lenül a Lab asol/Lau oglycol 90 és Geluci e 44/14 elüle ak í anyagok a ányai ól. Ezzel szem- ben olyadékk is ályos endsze ek csak az össze- e ők egy bizonyos, szűkebb a ományában kele kez ek, amiko a ke e ék Lab asol/Lau oglycol 90 enzid pá 10% ala a almazo . A diag am alapján négy különböző össze é el álasz o unk ki a Lab asol/Lau oglycol 90 állandó 6:1 a ányá al o ábbi izsgála ok a. A o mulációk isz ák és s a- bilok ol ak 4,1–9,9%-os Lab asol/Lau oglycol 90, alamin 31,1% – 52%-os Geluci e 44/14 a omá- nyokban. A ki álasz o PL kompozícióka az 1. áb- láza mu a ja. Új gyógysze echnológiai eljá ások 2626 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34 In i o kioldódás izsgála A 2. áb a a szin e ikus cellulóz-ace á memb ánon ke esz ül di undál PL-ki ona százalékos a ányá mu a ja az idő ügg ényében. Az össze é elekből elszabadul ha óanyag mennyisége alapján az alábbi csökkenő so ende állí o uk el: PL-LC 2 > 1 > 4 > 3. E edményeink alapján jobb ha óanyag kioldódás ö én azokból a készí ményekből, melyek a Lab asol/Lau oglycol 90 enzid pá ból öbbe a almaz ak. A legjobb di úzió az I. és II. kompozíció ese ében sike ül elé ni, ahol a elüle - ak í anyagok a ománya 9,9% és 7,8% ol , a di - undál PL-ki ona mennyisége pedig meghalad a az 50% -o . A III. és a IV. kompozíció ese ében, amelyek ke esebb elüle ak í anyago a almaz- ak, osszabb ha óanyag di úzió apasz al unk, a elszabadul gyógysze mennyisége 40% ala ol . HaCaT sej p oli e ációs izsgála A p oli e ációs izsgála oka 104/200 µL sű űség- gel szélesz e HaCaT sej eken égez ük az xCELLigence Real-Time Cell Analyze (RTCA) segí - ségé el. A 3. áb a szemlél e i a izsgál min ák közö apasz al jelen ős különbségeke . A HaCaT sej p oli e áció impedancia mé ésen alapuló meg- ha á ozása azonban a sej index nyil án aló nö e- kedésé mu a a mindegyik ese ben el é ő p oli e ációs kine ika melle . Míg a kezele len HaCaT sej ek hé nap el el é el alakí o ák ki a kon luens monolaye sej é ege , az IL-1-bé a - és a TNF-al a s imulál ke a inoci ák (PSmHaCaT) a gyo s p oli e áció kö e kez ében hama abb elé - ék a pla ó ázis . Ezen elül a PSmHaCaT ke a inoci ák magasabb sej index é ékeke mu a ak ebben a szakaszban. Ennek mege ősí é- 1. áb a. Lab asol/Lau oglycol 90 (6:1)/Geluci e 44/14/ íz endsze pszeudo e ne ázisdiag amja; a sö é kék e üle a olyadék- k is ályok képződésének a ományá jelöli (LC). A ki álasz o Plan ago lanceola a (PL)-LC össze é elek (I–IV) komponenseinek a ánya 1. ábláza : A ki álasz o olyadékk is ályos endsze ek össze é elei a pszeudo e ne ázisdiag amok alapján PL-LC Össze é el Plan ago Ex ac um Geluci e 44/14 Lab asol/ Lau oglycol 90 Víz 11.25 mL (4.95%) 10 mL (39.60%) 2.5 mL (9.90%) 11,5 mL (45.55%) 21.6 mL (4.92%) 10 mL (31.15%) 2.5 mL (7.79%) 18 mL (56.08%) 31.1 mL (5.09%) 11.25 mL (52.08%) 1.25 mL (5.79%) 8 mL (37.04%) 41.5 mL (5.00%) 11.25 mL (37.50%) 1.25 mL (4.17%) 16 mL (53.33%) 2727 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34Új gyógysze echnológiai eljá ások 3. áb a. HaCaT sej p oli e áció impedancia alapú mé éseinek e edménye 4. áb a. T ansepi helialis elek omos ellenállás (TEER) mé és e edményei 2. áb a. A kompozíciók kioldódás p o iljai 0 10 20 30 40 50 60 70 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 Kioldódo PL ex ak um (%) Idő (pe c) PL-LC 1 PL-LC 2 PL-LC 3 PL-LC 4 3. áb a HaCaT sej p oli e áció impedancia alapú mé éseinek e edménye. 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00 010 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 Sej index Idő (ó a) HaCaT PSmHaCaT 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 0 6 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 T anszepi heliális elek omos ellenállás (Ωxcm²) Idő (ó a) HaCaT PSmHaCaT Új gyógysze echnológiai eljá ások 2828 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34 sé e a sej ek anszepi helialis elek omos ellenál- lásá (TEER) is mé ük, mely mé ések e edménye összhangban an az RTCA esz ekkel. Amin az a 4. áb án is lá ha ó, magasabb TEER é ékeke igyel- ünk meg a PSmHaCaT sej eknél, min a kezele len ke a inoci ák ese ében. MTT sej éle képesség izsgála A biz onságos alkalmazás biz osí ásának é deké- ben MTT ci o oxici ás izsgála oka égez ünk HaCaT sej onalon. A o mulációk ci o oxici ásá különböző koncen ációkban izsgál uk. Az egyes össze e őke szin én esz el ük külön-külön. Az 5. áb án lá ha ó, hogy a készí e LC endsze ek, ille e azok alka észei sem be olyásol ák jelen ő- sen a sej éle képessége . A sej éle képesség még magasabb koncen ációk ese ében is 50% ele ol a nega í kon ollhoz képes ( osz á -pu e , PBS). Megállapí o uk, hogy az összes kompozíció jól ole álha ó. Nem apasz al unk szigni ikáns különbsége az LC- endsze ekkel, ille e a nega í kon ollkén alkalmazo PBS-sel kezel csopo ok ese ében, bá mind közül a II. össze é el csökken- e e legke ésbé a sej éle képessége . DPPH gyök ogó ak i i ás izsgála A izsgála alapja a DPPH szabadgyök an ioxidáns jelenlé ében ö énő szín ál ozása. A olyadékk is- ály endsze eke Plan ago lanceola a ki ona al, ille e anélkül is izsgál uk. Kon ollkén a meg e- lelő ak o mulációka és 5% Plan ago lanceola a ki ona izes diszpe ziójá (CE) alkalmaz uk. Min az má ko ábban leí uk, a o mulál LC min ák szin én 5 / % PL ki ona o a almaz ak. Az an i- oxidáns ak i i ás százalékos a ányá DPPH esz el mé ük. A DPPH gyök ogó ak i i ás B and- Williams és munka á sai ál al leí módsze alapján mé ük.27 E edményeink alapján szigni ikáns különbségeke apasz al unk a izsgál csopo ok közö , melye a 6. áb án csillaggal jelöl ünk. Az el égze izsgála mege ősí e e, hogy az összes kompozíció képes jelen ősen gá olni a DPPH oxi- dációjá . Megállapí o uk, hogy az I. és a II. össze- é elek a legha ékonyabbak, ezzel szemben a IV. össze é el mu a a a legkisebb ak i i ás, bá an i- oxidáns kapaci ása így is jelen ősen magasabbnak bizonyul , min a kon oll csopo é (CE). Lipidpe oxidáció (MDA) izsgála A o mulációk UV sugá zással szembeni édőha- ásá HaCaT, ille e PSmHaCaT sej eken izsgál uk. Az in i o an ioxidáns ak i i ás mé ések e edmé- nyei a 7. áb a mu a ja be. Az MDA szin jében mé különbségek mege ősí e ék a P. lanceola a ki o- na an ioxidáns ha ékonyságá , és a meg elelően ki álasz o komponensek on osságá egya án . Amelle , hogy az összes o muláció csökken e e az MDA szin e a kon oll csopo okhoz képes , az apasz al uk, hogy az I. össze é el (a legna- 5. áb a. A o mulációk, ille e azok komponenseinek oxici ás izsgála a HaCaT sej onalon. Pozi í kon ollkén T i on-X-100- a ; nega í kon ollkén osz á -pu e (PBS) használ unk 5. áb a A o mulációk, ille e azok komponenseinek oxici ás izsgála a HaCaT sej onalon. Pozi í kon ollkén 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 00,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,65 0,7 0,75 HaCaT sej éle képesség (%) Koncen áció (m/m%) PL-LC I. PL-LC II. PL-LC III. PL-LC IV. Geluci e 44/14 Lab asol Lau oglycol 90 PBS T i on X-100 2929 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34Új gyógysze echnológiai eljá ások gyobb pene áció okozó segédanyag a alom- mal) ese ében jelen ősebb ez a csökkenés. UV-C expozíció HaCaT sej eken Az LC-PL kompozíciók UV-C besugá zás elleni ha ásá HaCaT, ille e s imulál ke a inoci a (PSmHaCaT) sej onalakon izsgál uk. A o mulációk össze é elé annyiban módosí o uk (2. ábláza ), hogy desz illál íz helye azonos é - oga ú DMEM sej kul ú ás médiumo használ unk a íz ká os ha ásainak elke ülése é dekében. A 8. áb a az UV-indukál oxida í s essz kö e ő sej - éle képessége mu a ja. Az első kísé le ben nem alkalmaz unk PL-LC kezelés . Az e edmények alá- ámasz o ák az UV-C sugá zás különböző sej o- nalak a ki ej e ká os ha ásá , o ábbá meg igyel- ük, hogy 6 pe c UV-C expozíció a sej éle képes- ség jelen ős csökkenésé e edményez e. A sugá - zás ál al s imulál p oli e ációs ál ozásoka MTT- esz el izsgál uk az expozíció kö e ő 12., 24. és 48. ó ában. Az apasz al uk, hogy 6 pe c UV-C expozíció obusz us PSmHaCaT sej - p oli e áció e edményeze . Ké nap el el é el az UV-C-s imulál PSmHaCaT sej ek éle képessége meghalad a a kezele len sej ek éle képességé . A 9. áb a PL-LC- el kezel sej ek éle képességé mu a ja 6 pe c UV-C expozíció okoz a oxida í s essz u án. Az e edmények alapján a PL-LC keze- lés észben gá ol a az UV-C sugá zás ká os ha á- sai . A Plan ago ki ona an ioxidáns ha ása melle a Lab asol/Lau oglycol 90 pene áció okozó ha ása is é ényesül , mi el az I. és III. kompozíció- ból, amelyek a enzid pá nagyobb koncen áció- ban a almazzák, időegység ala nagyobb meny- nyiségű ha óanyag ke ül a sej ekbe, nö el e ezzel a sej éle képessége . Az á ogó elemzés kimu- a a, hogy ugyan az LC-PL kezelés nem képes el- jes mé ékben meg édeni a ke a inoci áka , a PSmHaCaT sej ek ese ében meg igyel UV-C expo- zíció okoz a hipe p oli e áció azonban megelőz e. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 MDA (%) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 MDA (%) 7. áb a. Az LC-PL endsze ek HaCaT (a) és PSmHaCaT (b) sej- ek MDA szin jé e gyako ol ha ása 6 pe c UV expozíció kö- e ően. Pozi í kon ollkén PL ki ona o , nega í kon ollkén pedig kezele len sej eke alkalmaz unk b) 6. áb a Az LC-PL össze é elek ál al közömbösí e eak í oxigéngyökök százalékos a ánya. Pozi í kon ollkén 5 LC-PL 1; 41,019 LC-1; 1,652 LC-PL 2 ; 47,398 LC-2; 6,264 LC-PL 3 ; 34,245 LC-3; 5,785 LC-PL 4; 30,057 LC- 4; 1,964 CE (5 / %); 18,547 010 20 30 40 50 1 Az LC-PL endesze ek ál al közömbösí e ROS (%) * * * * * 6. áb a. Az LC-PL össze é elek ál al közömbösí e eak í oxigéngyökök százalékos a ánya. Pozi í kon ollkén 5 / % P. lanceola a ki ona izes diszpe ziójá álasz o uk, nega- í kon ollkén pedig ha óanyag nélküli olyadékk is ály . A szigni ikanciá csillaggal jelöl ük (*). * p < 0,05 a nega í kon - ollhoz iszonyí a 2. ábláza : Módosí o olyadékk is ályos endsze ek össze é elei PL-LC Össze é el Plan ago Ex ac um Geluci e 44/14 Lab asol/ Lau oglycol 90 DMEM 11.25 mL (4.95%) 10 mL (39.60%) 2,5 mL (9.90%) 11,5 mL (45.55%) 21.6 mL (4.92%) 10 mL (31.15%) 2,5 mL (7.79%) 18 mL (56.08%) 31.1 mL (5.09%) 11,25 mL (52.08%) 1,25 mL (5.79%) 8 mL (37.04%) 41.5 mL (5%) 11,25 mL (37.50%) 1,25 mL (4.17%) 16 mL (53.33%) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 MDA (%) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 MDA (%) a) Új gyógysze echnológiai eljá ások 3030 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34 Diszkusszió A i o a makonok an ioxidáns e ápiában be öl ö sze epe olyama osan nö ekszik.28 Annak ellené e azonban, hogy ha ásuk bizonyí o an előnyös, a együle ek ha ékonyságának nö elése különböző gyógysze echnológiai o mulációs módsze ekkel elengedhe e len.29 A olyadékk is ályos endsze- ek helyi e ápiában elé ha ékonyságá má ko ábban leí ák.30 A olyadékk is ályok nem ko alens kö éssel kapcsolódó molekulák külön- böző molekulá is o ien ációjú ázisokkal (mezo ázis).15 Anizo óp jellegükből adódóan ész- ben olyadékok a, észben pedig k is ályok a jel- lemző ulajdonságoka mu a nak, o ábbá képe- sek szolubilizálni az olaj- és ízoldha ó együle e- ke egya án .16 Mindezeken elül a olyadékk is á- lyok képzéséhez olyan elüle ak í anyagkén használha ó speciális ész e együle ek is alkal- mazha óak melyek pene áció okozó ha ása bizo- nyí o .31 Ezen ulajdonságaik mia az LC endsze- ek nemcsak gyógysze echnológiai szempon já- ból, hanem a biohasznosulás és egész e ápiás é éküke számí a is előnyösek. Kísé le so oza- unkban különböző Plan ago lanceola a ki ona o a almazó készí ményeke o mulál unk majd el égez ük ezek észle es gyógysze cehnológiai jellemzésé is. Kísé le i e edményeink ámu a ak, hogy a elhasználni kí án segédanyagok és elü- le ak í anyagok meg elelő ki álasz ása egya án endkí ül on os ényező. Fo muláció so án a Lab asol/Lau oglycol 90 (6:1)/ Geluci e 44/14 enzideke , alamin ize szá- munk a meg elelő a ányban a almazó össze é- eleke s uk u ál pszeudo e ne ázisdiag am segí ségé el ha á oz uk meg, o ábbá megha á- oz uk a elszabadul ha óanyag mennyiségé is. Az előállí o LC endsze ek biokompa ibili ásá különböző in i o sej kul ú ás izsgála okkal ele- mez ük. Ezekhez a kísé le ekhez humán ke a inoci a HaCaT sej onalon kí ül TNF-al a és IL-1 indukál humán PSmHaCaT sej eke használ- unk. A sej p oli e áció impedancia mé ésen ala- puló megha á ozása minden ese ben a sej index egyé elmű nö ekedésé mu a a. Ezen elül, a p oli e áció kine ikájában is különbsége apasz- al unk: míg a na í HaCaT sej ek a kon luens sej - é ege 7 nap u án é ék el, az IL-1 és TNF-al a s i- mulál ke a inoci ák (PSmHaCaT) gyo sabb p oli e áció kö e kez ében hama abb elé ék a pla ó ázis . Mindezek melle , a PSmHaCaT sej ek magasabb sej index é éke mu a ak ebben a ázisban. Az el égze MTT esz ek mege ősí e - ék, hogy a o mulál LC endsze ek, alamin azok össze e ői sem be olyásol ák jelen ősen a sej éle - képessége . A készí mények ehá biz onságosnak bizonyul ak. A gyök ogó ak i i ás izsgála kimu- a a, hogy a o mulációk jelen ős mé ékben gá ol ák a DPPH oxidációjá . A esz el LC-PL end- sze ek közül az I. és II. bizonyul a legha ékonyabb- nak, míg a IV. össze é el mu a a a legkisebb ak i- i ás . A PL-LC készí mények an ioxidáns ha ásá MDA lipidpe oxidációs izsgála al is ellenő iz ük. A izsgála e edményekén megállapí o uk, hogy 8. áb a MTT ci o oxici ás izsgála e edményei HaCaT, ille e PSmHaCaT sej eken UV expozíció kö e ő 12., 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 012 24 48 Sej éle képesség (%) Idő (ó a) HaCaT PSmHaCaT HaCaT (6 pe c UV expozíció u án) PSmHaCaT (6 pe c UV expozíció u án) * * * * * * 8. áb a. MTT ci o oxici ás izsgála e edményei HaCaT, ille e PSmHaCaT sej eken UV expozíció kö e ő 12., 24., 48. ó ában. A szigni ikanciá csilaggal jelöl ük (*). * p < 0,05 a kezele len sej ek éle képességéhez iszonyí a 9. áb a 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 012 24 48 Sej éle képesség (%) Idő (ó a) HaCaT PL-LC 1 HaCaT PL-LC 2 HaCaT PL-LC 3 HaCaT PL-LC 4 HaCaT PL-LC 1 (6 pe c UV expozíció u án) HaCaT PL-LC 2 (6 pe c UV expozíció u án) HaCaT PL-LC 3 (6 pe c UV expozíció u án) HaCaT PL-LC 4 (6 pe c UV expozíció u án) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 012 24 48 Sej éle képesség (%) Idő (ó a) PSmHaCaT PL-LC 1 PSmHaCaT PL-LC 2 PSmHaCaT PL-LC 3 PSmHaCaT PL-LC 4 PSmHaCaT PL-LC 1 (6 pe c UV expozíció u án) PSmHaCaT PL-LC 2 (6 pe c UV expozíció u án) PSmHaCaT PL-LC 3 (6 pe c UV expozíció u án) PSmHaCaT PL-LC 4 (6 pe c UV expozíció u án) 9. áb a. MTT ci o oxici ás izsgála e edményei HaCaT (a), il- le e PSmHaCaT (b) sej eken 6 pe ccel az UV expozíció kö- e ően a) b) 3131 Egészségügyi Inno ációs Szemle 2022;1(1):23-34Új gyógysze echnológiai eljá ások a kon oll csopo okhoz képes az összes o muláció képes ol csökken eni a malondialdehid (MDA) szin e , o ábbá az lá uk, hogy az I. össze- é el ese ében ez a csökkenés szigni ikáns. E ed- ményeink ehá alá ámasz ják a pene áció okozó segédanyagok sze epé az an ioxidáns ha ás elé ésében. Ez a meg igyelés igazol ák az UV-C besugá zás e edményei, mely sze in a sugá zás des uk í an ha o az egyes sej onalak a. Ha pe c UV-C expozíció kö e ően ugyanis jelen ős sej éle képesség csökkenés apasz al unk. A sugá zás kö e ően égze MTT esz alapján jelen ős PSmHaCaT sej p oli e áció lá unk. Ké nap el el é el a besugá zo PSmHaCaT sej ek éle képessége meghalad a a kezele len sej eké . A o mulációkkal ö énő kezelés észben egyé el- műen blokkol a az UV-C suga ak ká os ha ásá . Mindezek melle , a Plan ago ki ona an ioxidáns ha ása, alamin a Lab asol/Lau oglycol 90 pene - áció okozó ha ása is é ényesül , mi el az I. és III. össze é elekből, melyek a ányaiban öbbe a al- maz ak a enzidpá ból, nagyobb mennyiségű ha óanyag ju o a sej ekbe. Meg igyeléseink alap- ján ugyan a PL-LC kezelés nem ud a meg édeni a ke a inoci áka , a PSmHaCaT sej ek UV-C sugá zás okoz a hipe p oli e ációjá képes ol csökken eni. Kísé le so oza unk e edményei ehá igazolják az an ioxidáns e ápia on osságá , különösen gyulla- dással já ó állapo ok ese én. Összességében elmondha ó, hogy ku a ásunk hasznos ada oka szolgál a ha egy inno a í , biz onságos és ha é- kony helyi készí mény ki ejlesz éséhez. Anyagok, módsze ek Anyagok A Plan ago lanceola a ki ona o Vasas Gábo és munka á sai biz osí o ák számunk a. A Geluci e 44/14, Lab asol, ille e Lau oglycol 90 enzidek ked es ajándék ol a Ga e ossé ől (Lyon, F ancia- o szág). A 3-(4,5-dime il- iazol-2-il)-2,5-di enil- e azolium-b omid MTT- es éke , DMEM sej e- nyész ő médiumo , a osz á -pu e (PBS), a ipszin-e ilén-diamin- e aece sa a (EDTA), a hőinak i ál ö ális sza asma ha szé umo (FBS), az L-glu amin , a nem esszenciális aminosa -olda- o és a penicillin–sz ep omicin a Sigma-Ald ich- ől (S . Louis, MO, USA) sze ez ük be. A 96 lyukú pla eke és sej enyész ő laskáka a VWR In e na ional- ől (Deb ecen, Magya o szág) ásá- ol uk. A HaCaT sej onala (humán ke a inoci a sej ek) a Cell Lines Se ice- ől (CLS, Heidelbe g, Néme o szág) sze ez ük be. A TBARS Assay kész- le e a Cayman Chemical- ól (Ann A bo , MI, USA) ásá ol uk. A 2,2-di enil-1-pik il-hid azil (DPPH), az abszolú e anol , az IL-1-e és a TNF-al á a Sigma-Ald ich- ől (S . Louis, MO, USA) sze ez ük be. Szá az Plan ago lanceola a le él me anolos ki o- na a A gyógysze köny i s anda d minőségű P. lanceola a le eleke ke eskedelmi o galomból ásá ol uk. A le eleke leda ál uk, majd inom eloszlású po á edukál uk a o ábbi alkalmazás céljából. A po 30 pe cig issza olya ás közben ex ahál uk me anollal, szű ük, majd o ációs ákuum bepá lóban szá í o uk. A ki ona o hexánnal zsí men esí e ük (3x50 mL). Az eljá ás égén 100 g nö ényi kiindulási anyag 25,2 g Plan ago ki ona o e edményeze . Az ex ak u- mo hi eles s anda dokkal égze kalib álás u án LC-ESI-MS módsze el19 jellemez ük. A ki ona 5,99% ac eozido , 2,34% aucubin , alamin 1,21% ka alpol a almazo , amely 1.51%, 0.59%, ala- min 0.31% szá í o nö ényi d oggal ek i alens. Folyadékk is ályok o mulálása Ahhoz, hogy megha á ozzuk a olyadékk is á- lyok komponenseinek op imális koncen áció a ományá , i álásos módsze segí ségé el pszeudo e ne ázis diag amo sze kesz e ünk.15 A ci o oxici ási izsgála ok alapján a Lab asol , Lau oglycol 90-e és Geluci e 44/14-e álasz o - uk elüle ak í anyagokkén . Első lépésben a szükséges mennyiségű Plan ago lanceola a ex - ak umo (minden össze é el ese ében 5%-nak meg elelő mennyisége ) a elüle ak í anyagok ke e ékében oldo uk. Ez kö e ően olyama os ke e és közben ize ad unk a endsze hez. A íz a alom a különböző össze é elek ese ében 37% és 56% közö ál ozo állandó 6:1 Lab asol/ Lau oglycol 90 a ány melle . A pszeudo e ne diag am alapján munkánka a o ábbiakban négy különböző össze é elű min a izsgála á al oly a uk, melyek össze é elé az 1. ábláza mu a ja.