Estudio de la fracción de esteroles del insaponificable de mantequillas y margarinas de uso frecuente en Granada

DEPARTAMENTO DE NUTRICION y BROMATOLOGIA. FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD DE GRANADA. "ESTUDIO DE LA FRACCION DE ESTERO LES DEL IN SAPONIFICABLE DE MANTEQUILLAS Y MARGARINAS DE USO FRECUENTE EN GRANADA". Molina García, L., Gallego Moreno, C. y García-Villanova, R. RESUMEN Se ha determinado el contenido neto de insaponificable y la composición cualitativa en estero les de diferentes marcas comerciales de mantequillas y margarinas, mediante técnicas analíticas basadas en la cromatografía en fase gaseosa. La finalidad de esta determinación es comprobar si las magarinas decla radas de origen vegetál lo son efectivamente y al mismo tiempo tratar de de tectar posibles fraudes en mantequillas. SUMMARY It's been determined the net contents of unsaponifiable and the qualitive composition in sterols of different comercial names of butters and margari nes, by analytical techniques based in the chromatography in gas phase. The finality of this determination is checking if the stated margarines are indeed from vegetable source and at the same time to try to detect possible frauds in butters. INTRODUCCION . En un trabajo anterior (1) iniciábamos el estudio de la calidad de mante quillas y margarinas mediante la determinación de los ácidos grasos constitu yentes de las mismas. El presente trabajo supone una continuación del anterior. En el mismo se ha determinado la composición de la fracción del insaponificable correspon diente a los esteroles de 21 muestras, de las cuales ocho son mantequillas y treArs Pharmaceulica. Tomo XXVIII. Núm. 3, 1987 418 ARS PHARMACEUTICA ce margarinas, y de éstas, seis declaran en su composición grasa de origen ve getal y en las restantes figura: "grasas y aceites comestibles". PARTE EXPERIMENTAL Material. Balanza analítica Mettler HIlO. Equipo para cromatografía en capa del gada, Desaga. Baño de calefacción Serlabu. Evaporador rotatorio a vacío Bü chi, RIlO. Estufa de desecación Heraeus l-Janau, RT 360. Equipo para cro matografía de gases, Perkin-Elmer, 990 con detector de ionización de llama de hidrógeno y columnas de vidrio con relleno de: -SUicona OV-17 al 130/0 sobre Chromosorb-Q 100/120 mallas. -Silicona OV-101 al 5% sobre Chromosorb-750, 100/120 mallas. Disoluciones empleadas. -Disolución Normal de hidróxido potásico en Etanol de 96°. 70 g de hi dróxido potásico se disuelven en unos mi de agua destilada, se diluye hasta 1.000 mi con alcohol etílico de 96°. -Disolución 0,5 N de hidróxido potásico. 35 g de hidróxido potásico se disuelven en agua destilada hasta 1.000 mI. ./ -Disolución Normal de ácido clorhídrico. 88,3 mi de ácido clorhídrico del 35% de riqueza se diluyen hasta 1.000 mi con agua destilada. -Disolución de colesterol al 1 %. 0,1 g de colesterol se disuelve en cloro formo hasta 10 mI. -Disolución de Rodamina 6 G al 0,001 %.0,001 g de Rodamina 6 G se disuelven en Etanol de 90° hasta 100 mI. -Disolución de Colesterol aI 2%. 2 g de colesterol se disuelven en cloro formo hasta 100 mI. -Disolución de Estigmasterol al 2%. 2 g de Estigmasterol se disuelven en cloroformo hasta 100 mI. METODO ANALITICO Determinación del Insaponificable. De la muestra homogeneizada, se separa la fase grasa por fusión a 50° y filtración. El método elegido es el del éter etílico, Norma UNE 55-004-73 (2) cuya técnica describimos: Se parte de 5 g de materia grasa, se añaden 50 mi de solución normal de hidróxido potásico en etanol de 96° y se calienta sobre baño maría hasta ebu llición suave mantenida durante una hora. La disolución se extrae con 100 mi de agua y 100 mi de éter etílico en am polla de decantación y se recoge la capa acuosa alcohólica para realizar en ella ARS PHARMACEUTICA 419 dos extracciones más con 40 mI de agua y 100 mIde éter; se reunen todas las fracciones etéreas y se lava repetidas veces con agua y solución acuosa 0,5 N de hidróxido potásico de forma alternativa para terminar lavando con agua destilada hasta que las aguas de lavado no den reacción alcalina. La disolución etérea se evapora en evaporador rotatorio al vacío a 450 hasta reducción a un pequeño volumen; se añaden 6 mI de acetona y se elimi na completamente el disolvente volátil por el mismo sistema anterior. Una vez frío, se pesa el residuo. El porcentaje de insaponificable se determina aplican do la fórmula: Insaponificable OJo Po = peso materia grasa (en g) PI = peso residuo (en g) En la Tabla 1 se reflejan los resultados encontrados correspondientes a la media de cinco determinaciones concordantes practicadas a cada una de las muestras. Aislamiento de la fracción de esteroles. Se ha empleado la cromatografía en capa fina usando como soporte Gel de sílice, Merck, según la pauta detallada en el apartado 4.1., Norma UNE 44019-73 (3). Análisis de la fracción de esferoles. El residuo sólido obtenido se disuelve en cloroformo y se inyecta en el cromatógrafo de gases. La identificación de los diferentes esteroles se ha realizado calculando los tiempos de retención relativos respecto al colesterol tomado como unidad, y algunos de ellos se han reconocido por adición de patrones puros. Los porcentajes relativos de los distintos esteroles se obienen por medio del integrador. Los resultados se reflejan en la Tabla 1. DISCUSION DE LOS RESULTADOS a) De las muestras 1 a 6 correspondientes a margarinas que se declaran procedentes de grasas vegetales exclusivamente, se confirma que en las N. o 2, 3, 4, 5 Y 6 no existe duda de la autenticidad de su grasa ya que los porcentajes de colesterol de las mismas entran dentro de los límites que permiten conside rarlos como tales según BLANCHARD y col. (4). En la muestra N. o 1 la proporción mayor de colesterol pone en duda la existencia de grasa sólo y exclusivamente de origen vegetal. TABLA I .$:o N O Muestras Insapon. Colesterol Campesterol Estigmast. (3-Sit08t. 6,7 -Avenastenol % % % % % % MARGARINAS 100% vegetal 1 0,91 7,66 15,56 12,51 59,11 5,13 2 1,23 1,17 18,27 3,56 74,84 3 1,12 1,191 17,68 3,83 72 ,69 4,59 4 0,70 3,41 16,14 12,87 62,99 4,29 5 0,67 4,05 16,32 9,65 61,26 8,70 6 0,66 4,43 12,81 14,99 66,60 0,79 > MARGARINAS ::c rJJ (Ac. y graso "O :t comestibles) > 7 ' 0,48 71,49 5,65 2,76 20,08 ¡c � 8 0,72 87,95 1,61 3,88 6,54 > 9 0,54 98,77 ,1.,22 n tTl 10 0,52 72 ,38 4,85 3,62 19,13 c:: -l 11 0,44 75,27 4,33 2,16 18,21 ñ 12 0,73 60,28 6,10 12,86 20,73 > 13 0,59 57,32 7,40 2,73 30,03 2,48 MANTEQUILLAS 14 1,35 99,27 0,63 15 0,78 99,56 0,43 16 0,30 100,00 17 0,46 100,00 18 0,32 100,00 19 0,36 100,00 20 0,29 95,30 4,69 21 0,35 100,00 ARS PHARMACEUTICA 421 En la misma muestra, como en la N.o 3, 4, 5 Y 6 se detecta el � 7-avenastenol en proporciones variables, lo que hace suponer que estas mar garinas han sido elaboradas en gran proporción con aceite de girasol. b) En las de margarinas ensayadas y en las que se declara que en su elabo ración se han empleado "aceites y grasas comestibles" se encuentra en todas ellas como elemento mayoritario el colesterol. En la N. o 9 se confirma que só lo existe grasa de origen animal y en la N. o 8 puede existir pequeñas cantida des de grasas vegetales; las N. o 10 y 11 de composición muy parecida, tienen mayor proporción de grasas vegetales y en las muestras N. o 12 y 13 esta pro porción. puede alcanzar un 40-50%. c) En las determinaciones practicadas en mantequillas se confirma que la fracción esterólica del insaponificable está totalmente constituida por coleste rol en las.muestras N. o 16, 17, 18, 19 y 21. En las N. o 14 y 15 sólo se aprecia una pequeña proporción de f3 -sitosterol que alcanza en la N. o 20 una proporción de 4,7 OJo cifras que en tran dentro de los valores normales para mantequillas, por lo que no existe du da de adulteración con grasas de origen vegetal. BIBLIOGRAFIA (1) GONZALEZ GUTIERREZ, F., GALLEGO MORENO, C. y GARCIA-VILLANOVA, R. Ars Pharmaceutica (en prensa). (2) Normas UNE 55-004-73. (3) Normas UNE 55-019-73. (4) BLANCHARD, F., CASTANG, J., DERBESY, M., ESTIENNE, J., OLLE, M. Y SOLE VE, M. (1979) Ann. Falsif. Expert. Chim. 72 (711) 25-37.