Método ¨multirresiduo¨ para la determinación de pesticidas

ARS PHARMACEUTICA Ins i u o "López-Ney a" de Pa asi ología Sección de Fisiología y Bíoquímica del Pa asi ismo 371 METODO "MULTIRRESIDUNO" PARA LA DETERMINACION DE PESTICIDAS po JOSE MARIA ABENZA y MIGUEL MONTE OLIVA INTRODUCCION Una ecien e O den (1) del Minis .e io de Ag icul u a, limi a el lib e uso de los pes icidas do ados' (DDT, lindano, ald ín, e c.) has a el 1 de ene. o de 1977. Desde es a echa sólo pod án emplea se en campañas de ipo o icial. Es a O den que simplemen e o mula la p ohibiciones que ya exis ían en o os países, es consecuencia de los e ec os noci os secunda ios que p esen an es os plaguicidas en azón a sus ·ca ac e ís iC'as de pe sis encia y acumulaCÍlón. El iempo me dio que equie e un pes icida pa a desapa ece del medio ambien e es muy a iado. E71 mala ion necesi a 5 'a 8 días, mien as que el DDT y el d ield in equie 'en de 5 a 30 años pa a desapa ece (2). Aho a bien, p ohibi el uso de es os plaguicidas no elimina las acu mul'aciones ya p oducidas po que es de supone ,que se segui án de ec ando es os plaguicidas po muchos años, con o me se ayan mo ilizando de sus depósi os. Síguen siendo de ac ualidad los mé odos de de e :m nación de pes icidas clo ados y más conc e amen e los de nominados mé odos mul i esiduo, po cuan o que, en a amien os conc, e os donde se conozca la na umleza del pes icida empleado só lo es a de e mina su concen aCÍoón, pe o en análisis de esiduos am bien al,es hay que conjun a la iden i icación con la de e minación. Es as condiciones las eúnen los mé odos c oma og á icos, an o de capa ina (3.-7), la de columna (4) (6-8) o gaseosa (8-16). Mejo iden i ica'C'Íón en mues as desconocidas puede ob ene se c·onjugando dos écnicas: c oma og a ía en columna y gaseosa (4) (7) (8) bien colum- A s Pha macéu ica. Tomo XVII. Núm. 2-3. 1976. 372 ARS PHARMACEUTICA na y capa ina (6). En es e abajo hemos in en ado conjuga el l'ac cionado ·en c oma o@ a ía en columna de io isil con la c oma og a ía gaseosa empleando un de ec o de cap ul'a elec ónica pa a di e en ci a los pes icidas de más ecuen e uso. MA TERIAL Y METO DOS Ins umen ación. Se ha u ilizado un C oma lóg a o de Ca bo E  ba, modelo FTV 2.200 equipado con un de ec o de cap u a de elec ones con Ni63 como uen e adíac i a. La columna de id io de 2 me os y de 3 X 6 de diáme o, 'ellena con Gas' Ch om Pcon el 2% de SE-30 como ase es aciona ia. O as condiciones de empleo son: Tempe a u a de la columna = 18Q.°C; Flujo de ni ógeno = 60 ml./minu o. Tempe a u a del de e'C o 2'10°C. A enuación 100 X 16 en el elec óme o. Tempe a u a del inyec o = 25Q.°C; En el egis ado = 1 mV anchu a de papel,. Velocidad egis o: De e minación de iempos de e ención = 1 cm/m.; o as medidas = 0,1 cm/m. Reac i os. Todos los eac i os empleados son de calidad c oma og á ica. P:es icidias. Los pes iddas u ilizados son mues as pa ones sumi nis adas po casas come ciales. Relleno de la oolumna. Flo isil 60-100 manas, BDH. Mé odo de ex acción. Pa a los ensayos de ecupe ación, se han empleado 100 g. pe as, que p e iamen e mondadas y la adas se les ha añadido 5 mI,. de l'as soluciones de pes icidas a ensaya y a la con cen ación adecuada, y 100 m1. de ace oni ilo. Se i u a y homoge neiza en un Tu mix a la máxima elocidad du an e 2 minu os y des pués se il a a aCÍo empleando papel de ja abes. El aso y el il o se la an a ias eces con 25 mI. de ace oni ilo. Se ecoge el il ado que se pasa a una ampolla de decan adón, agll"eg.ando 100 mI. de e e de pe óleo agi ando du an e 2 minu os. Después se ag ega 400 mI. de solución de CINA al 2% en agua des ilada, se agi a sua emen e y se deja eposa pa a que sepa e la capa acuosa de la e é ea. Es a úl ima se pasa 'a o a ampolla de decan ación donde se la a dos 'eces con lQ,O mI. de agua des ilada. Po úl imo la capa e e ea se a a con unos 10 ,g. de sul a o sódico anhid o pa a deshid a a la. El ex ac o e é eo se concen a en un Kude na-Danish has a un olumen de 2 ml. ARS PHARMACEUTICA 373 F :acci mado en columna. Se emplea una columna de id io de 10 cm. de al u a y 5 mm. 0 in e io ellena de F10 isil (és e p e iamen e ha sido ac i ado a 65'ÜoC du an e 24 ho as y man enido a 180°C has a el momen o de su uso). Sobi'e la columna de Flo isil, se colo'ca siemp e unos g amos de sul a o sódico anhid o. En p ime luga la columna se la a ·con e e de pe ó eo. Después se in oduce en la co lumna los 2 mI. del ex ac o an e io o bien 2 mI. de soluciones pa ones y pos e io men e se p ocede a la elucÍón de los pes icidas pa sando sucesi 'amen e 100 mI. de las siguien es soluciones. (1) E e de pe óleo/e e sul ú ico (94: 6) (II) E e de pe óleo / e e sul ú ico (85: 15) (III) E e de pe lóleo/e e ·sul ú ico (65: 35) (IV) E e de pe óleole e sul ú ico (50: 50) Pa a los ensayos de . ecupe ación, se ec.ogen jun os los 100. mI. de cada acción, 'que se ·concen an a 2 mI. en el Kude na-Danish, que median e acío se lle an a sequedad y el esíduo se edisuel e en 5 ml. de hexano, del cual se oman 5 mic oli os qu se inyec an en el c oma óg a o. Pa a los ensayos de compo amien o de la columna de Flo isil, los ·elua os .Ee ecogen en acciones de 1'0 ml. de hexano y de es a solución se oman 5 mic oli os que se inyec an en ·el c oma óg a o. PESTICIDAS ESTUDIADOS: Nomb e común Sinonimia Ald in HHDN Clo obencila o Aka DDT Zeidano, Ge asol Diazlnon Neocidol TABLA NUM. 1 Nomb e si s emá ico (BSl) 1, 2, 3, 4, lO, 10-hexaclo o-1, 4, 4a, 5, 8, 8a-hexahid o-exo-1, 4-endo-5, 8-dime. anona aleno. 4,4' .diclo odi enilglicola o de e ilo 1, 1, 1- iclo o-2, 2, -di-(4-clo o enil) e ano. die il 2-isop opil • 6 - me U-4-pi imidinil os o o ona o 374 ARS PHARMACEUTICA (Con inuación de la Tabla núm. 1) Nomb e común. Sinonimia Nomb e sios emá ico (BS1) End in E ion Feni o ion Hep aclo o Lindano Mala ion Me ida ion Me oxiclo o Te adi on DDE TDE Imidan Quino iona o Niala o Foli ion, Sumi ion gamma-BHC, g. HCH gamma-hexano Mala on, ca bo os Sup acide 1, 2, 3, 4, 10, 10-hexaclo o-6, 7-epoxi- 1, 4, 4a, 5, 6, 7, 8, 8a-oc ahid o.exo-1, 4-exo-5, 8-dime anona aleno. e ae il. SS'-me ilen-bis ( os o o iolo iona o). dime il 3.me il-4-ni o enil os o o io na o. 1, 4, 5, 6, 7, 8, 8-hep aclo o-3a, 4, 7, 7a. - e ahid o-4, 7-me ano indeno. 1, 2, 3, 4, 5, 6-hexaclo ociclohexano. S_ 0, l2-dH e oxica bonll)e il) dime il os o o ioJo iona o. S-(2, 3-dihd o-5-mee oxi-2-oxo.1, 3, 4- - iadiazoL3-ile il) dime il os o o iolo io- na o. DMDT, Ma la e 1, 1, 1- iclo o-2, 2-di (4-me oxi eniDe a no. Tedion DDD, Ro ano Fosme E adex, Tioquinox 2, 4, 4', 5- e aclo odi enil sul ona. 1, 1.diclo o-2, 2-di-( 4-clom enil)e eno. 1, 1-diclo o-2, 2-di-(4-clo o en1l) e ano. OO--dime ll alimido.me il os o o iolo iona o. 2- io-1, 3-di iolo-(4, 5-b) quinoxalina. TABLA NUM. II RESPUESTA DEL DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES: Al u a del pico en mm. en unción de los nano. g amos inyec ados. nanog amos inyec ados Pes icida 25,00 120,00 15,00 10,00 7,50 5,00 3,75 2,50 1,87 1,25 0,63 0,31 Ald in 155 133 111 61 31 Hep aclo o 166 146 124 74 36 > Lindano 180 169 124 105 64 l" en DDE 160 140 1'20 70 37 '"el ¡:: End in 152 131 110 63 33 l" I!: Clo obencila o 49 41 33 25 18 10 > � Diazinon 65 56 45 25 22 15 c:: >'1 ... Me ida ion 109 97 81 67 53 32 a > Me oxiclo o 140 124 100 76 38 18 TDE 145 124 103 59 30 DDT 160 135 110 61 30 Foli ion 157 153 142 134 118 96 65 E ion 134 127 120 114 86 58 37 Te adi on 105 95 84 76 65 51 33 Quino iona o 96 81 65 51 31 18 9 Mala ion 84 77 70 63 51 38 23 Imidan 37 32 28 23 17 6 CA> ...;¡ C11 TABLA NUM. m c.> -:¡ C) LIMITES DE DETECCION EN LAS CONDICIONES ENSAYADAS: nanog amos pa a una al u a de pico de 10 mm. Composición cen esimal Pes icida nano g amos na u aleza C H Cl N N S O Lindano 0,07 o ganoclo ado 24,74 2,08 73,14 Hep aclo o 0,09 32,17 1,35 66,48 :>- Ald in 0,10 39,50 2,21 58,30 " I:/l End in 0,20 37,84 2,12 55,85 4,20 '"d i: :>- DDT 0,42 47,43 2,56 50,01 " a: DDE 0,18 52,83 2,51 46,65 :>- n � TDE 0,44 52,54 3,15 44,31 '" ... Te adi on 0,54 40,48 1,70 39,83 9,01 n 8,99 :>- Me oxiclo o 1,34 55,59 4,37 39,77 9,26 Clo obencila o 3,09 59,09 4,34 21,81 14,76 Foli ion 0,20 o gano os o ado 38,99 4,36 5,05 11,17 11,57 28,85 E ion 0,45 28,11 5,77 16,11 33,36 16,65 Mala ion 0,72 36,35 5,80 9,38 19,41 29,06 Mei ida ion 1,07 23,84 3,64 9,27 10,26 31,78 21,19 Diazinon 2,64 47,36 6,95 9,20 10,18 10,54 15,77 !midan 3,81 41,64 3,78 4,41 9,77 20,18 20,18 Quino iona o 1,46 ioca bona o 45,76 1,69 11,66 40,67 ARS PHARMACEUTICA 377 TABLA NUM. IV FRACCIONADO EN COLUMNA DE FLORISIL y iempos de e ención en minu os y segundas Pes icida T. R. Ca ac e ís ica de elución Máxima al u a pico de la columna den o de la acción F acción I: 10 mI. e e pe óleo/e e sul ú ico 94/6 Lindano 1,24" pico simé ico Diazinon 1'36" pico simé ico di uso Hep aclo o 2'12" pico simé ico Ald in 2'42" lige a cola DDE 4'50" pico simé ico End in 5'1'2" lige a cola Quino iona o 5'48" pico simé ico TDE 6'05" E ion 6'48" DDT 8'00" Me oxiclo o 12'48" F acción II: 100 mI. de e e pe óleo/e e sul ú ico 85/15 Diazinon Foli ion Clo obenclla e Te adi on 1'36" Q'15" 6'05" 13'36" di uso di uso la ga cola la ga cola F acción III: 100 mI. e e pe óleo / e e sul ú ico 65/35 Foli ion Mala ion Me ida ion Clo obenclla e Te adi on F acción IV: Me ida ion Imidan 2'15" di uso 2'36" di uso 3'30" la ga cola 6'05" la ga cola 13'36" la ga cola 100 m!. e e pe óleo/e e sul ú ico 3'30" 10'20" la ga cola co a cola 50/50 F-3 F-7 a F-15 F-4 F-2 F-3 F-4 F-2 F-2 F-3 F-4 F-5 F-7 a F-15 F-17 a F-24 F-16 a F-22 F-17 F-17 a F-24 F-21 a F-28 F-27 F-16 a F-22 F-34 378 ARS PHARMACEUTICA TABLA NUM. V TANTO POR CIENTO DE RECUPERACION (5 ensayos) Pes icida Media SD Pes icida Media Lindano 87,4% 5,4 Quino iona o 77,5 Diazinon 77,1 3,0 TDE 86,5 Hep aclo o 91,1 3,6 Clo obencila o 64,8 FoU ion 89,7 6,7 E ion 89'1 Mala lon 80,2 5,5 DDT 90,3 Ald in 84,6 3,6 Imidan 53,8 Me ida ion 75,7 6,0 Me oxiclo o 83,0 DDE 88,1 4,7 Te adi on 103,9 End in 88,6 4,6 DISCUSION SD 3,8 4,4 6,6 4,6 3,8 3,0 2,8 3.7 El de ec o de cap u a de elec ones especialmen e diseñado pa a la de ección de compues os halogenados (pes icidasl o ganoclo aclos) es capaz de de ec a ambién o os pes icidas que con engan en su molécula oxígeno, azu . e o ós o o aunque su sensibilidad sea meno en es os úl imos. En la abla III puede obse a se que hay una cie a co elación en e los lími es de de ección de los pes icidas do ados y el an o po den .o de clo o que en a en la molécula. En el g upo de os o ados es más di ícil encon a. es a elación pues o que en la cap ación de elec ones in luyen de o ma di e en e los di e sos elemen os que en an ,en la molécula. Sin emba go la pé  dida de sensibilidad pa a los oI1gano os o ados no es obs áculo pa a u iliza es e de ec o como de ec o gene al dado a que en é  minos de aplicación es mucho más impo an e la iden icaci'Ón de la na u aleza del pes icida (po su dis in a oxicidad) que la cuan i i cación exac a del mismo. P ác icamen e la de e minación cuan i a i a sólo equie e ene la segu idad de que los esiduos encon a dos no supe an los lími es de esi,duos , ecomendados po los O ga nismos Sania ios. Los lími es p ác icos de esiduos en alimen os de la OMS (17) oscilan en e 0,002 ,a 1,0 pa es po millón en alimen os de o igen ege al o animal o sea de 2 a 1.000 mic og amos po kilo {) li o. En análisis di ec o la concen aÓlón lími e mínima es á a ni el de la sensibilidad del mé odo ( a'bla III) pa a los plaguicidas os o- ARS PHARMACEUTICA 379 adas, pe o los mé odos de ex acci!ón no malmen e u ilizados con cen an el pes icida 20 a 100. eces lo que hace ac ible la de e mina ción cuan i a i 'a. De la obse ación de la abla II se deduce que no hay una li nea idad absolu a en la . espues a del de ec o a la concen ación del plaguicida. No es incon enien e pues o que pa a una mayo €xac i ud en las medidas puede dilui se la mues a has a ob ene la concen ación que cae den o de la zona de p opo cionalidad. En la abla IV se exponen los esul ados ob enidos en ·el ac cionamien o de los pes icidas es udiados en columna de Flo isil. Hay una p ime a acción que eluye con 100 mI. de e e de pe óleo/ e e sul ú ico (94/6) que alg upa casi odos los clo ados así como el E adex yel E iou. Su elución de la columna en pequeñas accio nes de 5 Ó 10 mI. da un accionado con picos simé icos y algunas di e encias en el olumen de e ención y que pueden pe mi i su di e enciación en caso de no iden i ka se po los iempos de e en ción. El inc emen o de pola idad del eluyen e aumen ando el po  cen aje de e e sul ú ico pe mi .e elui de la columna o os pes ici das pe o con pé dida de la de inición de los picos en el accionado, yen algunos casos incluso mon an sob e dos acdones gene ales. En conse·cuencia ,cuando se a a de analiza una mezcla desco nocida hay que acciona en .columna de Flo. isil con los cua o elu yen es indicados y una ez concen ados some e cada g upo po sepa ado a la c oma og a ía gaseosa. El alo cuan i a i o o al de cada pes icida s·e obiene sumando los alo es pa ciales co espon dienes a cada a·cción. Los ensayos de ecupe ación se han ealizado empleando lo es de pe as a los que p e iamen e se les ha hecho un análisis en blan co pa a asegu a se de la inexis encia de pes icidas en las mismas. Los lo es así con olados se han adicionado de can idades conocidas de los plaguicidas es udiados y se han some ido a la écnica de ex TaclCión y análisis indicadas en los mé odos. Los esul ados se ex p esan en la abla V. Las ecupe aciones son del o den del 80% o más, sal o en el caso del clo obencila o (64,8%) y del Imidan del que sólo se ecupe a la mi ad. RESUMEN Se ha es udiado un mé odo gene al de iden i icación y de e mi nación de pes icida:s combinando la c oma og a ía gaseosa con el