Comparación de dos enzimo-inmuno-ensayos para valorar anticuerpos humorales inducidos por virus del Fibroma de Shope y por virus mixomatoso de Sanarelli

T abajos o iginales Compa ación de dos enzimo ·inmuno- ensayos pa a alo a an icue pos humo ales inducidos po i us del Fib o ma de Shope y po i us mixoma oso de Sana elli E. Espuña, M. Noga eda, A. Pagés y P. Casade all (*) In oducción El conocimien o del es ado inmuni a io de una pobl ac ión co n a el i L<S de la mixo- ma osis i ene muchísimas implicaciones pníc i cas y puede se de g an alo pa a es- udia la e icacia de di e sos mé odos. la pe s is encia de la inmunidad y la adopción de med i das p o ilac icas adecuadas. Po ello la de e minación de los ni eles de an icue - pos ci culan es en el sue o es necesa ia pa a l os es udios se o-ep idemiológicos así como pa a inal idades ci ínicas. Va ias écni cas se han ap licado con es a inalidad a l es co mo la Fijación del Com· plemen o (1), la Inmunodi usi ón doble (2) y la Sue oneu alizaci ón í ica (3). Recien emen e se ha u ilizado el enzimo- inmunoensayo (E LISA) indi ec o como mé odo de alo ación de los an icue pos humo ales. Algunos au o es han empleado el i us de Sana elli como subs a o an igé- nico en es a écni ca (4) (5) pa a lle a a ca- bo es udios epidemiológicos en conejos sal- ajes y dilucida as í la incidencia de anima- les po ado es o que hayan es a do en con- ac o con el i us mixoma oso de Sana elli. Noso os adap amos un E LISA pa a a- lo a la inmunogenicidad de acunas h e e- ól ogas I i us del Fib oma de Shope) con- a la Mixoma osis (6) (7). Pa a ello abso - bi mos las mic oplacas con i us del Fib o- ma de Shope en lug a de u iliza i us de Sana elli. Es bi en sabido que exis en eac- ciones de inmunidad c uzada en e és e y el i us de l Fib oma de Shope (8), con i ma- das po una se ie de eacciones se ológicas ales como la aglu inación, la Fijaci ón del Complemen o, la Inmunodi usión Dobl e, e c., con lo cual la u ilización del i us de Shope nos pe mi e alo a an icue pos h u- m o a l es inducidos po el i us de Sana e lli y i ce e sa. En es e abajo compa amos el g ado de co elación exis en e en e dos enzimoin- munoensayos I E LISA S) en uno de los cua- les usamos el i us de l Fib oma de Shope como subs a o an igénico abso bido a las mic oplacas y en el o o el i us de l Mixo- ma de Sana elli. Ambos ELISA S se compa a on en cuan- o a su e icacia p a a a lo a la espues a in- munológica en conejos sin acuna , en co- nejos inoculados con i us acunal a enua- do de Sana elli, en conejos acunado con i us de l Fib oma de Shope y en gazapos p oceden es de mad es inmuni zadas con el i us de l Fib oma de Shope. Ma e ial y mé odos Desc ipción de los ensayos: -ELlSA-S hope: En es e ensayo u il iza- mos i us del F ib oma de Shope (cepa Boe iage) que ue p opaga do en cul i os ce- lula es de R K 13 en monocapa, ob eniéndo- se concen aciones Vl l cas de 105.4 DICTs o/ml. Es e i us se abso bió a los po- cillos de las mic oplacas cons i uyendo el subs a o an igénico. La ejecución de la éc- nica y la lec u a de los esul ados ya ue desc i a an e io men e (6). -ELlSA-Sana ell i: Como al designamos al E. LlSA en el cua l se u i lizó i us del Mi- xoma de Sana e ll i como subs a o an igéni- co. Pa a ello usamos la cepa i ulen a R IN 3 (*) Dl eccló n de l os au o es: Lab o a o lo5 Hip a, S.A. Ame (Gi ona) agos o 1986 I cunicul u a 133 que se ob u o a pa i de célu l as R K 13 in- ec adas a una m.d.i. de 1. El i us abso bi- do en ía un í u lo de 10 • . 4 DICT50/ml. Es e ensayo se Ilè ó a cabo a l como lo desc ibió Whe he al y col. (41 con l as si- guien es modi i cac i ones. Se u ili zó amp ón P BS pa a abso be el an ígeno en luga de ampón ca bona obica bona o. La abso - ción se hizo a +4° C. du an e oda la no- ch e. As imismo l as mic opl acas no ' ue on a adas con BSA después de l la ado de l an- ígeno es idual. Se u i lizó una dilución sé i ca ún ica al 1/32 pa a odos los es ajes a l como en el E LlSA-Shope y se aplicó el Indice de l(1mu- ni dad Re la i a (I RI pa a hace la lec u a de los esul ados (4 ,61. Valo ac;ón de los sue os. Todas las mues as sé icas ue on co n ge- la das a-35° C. has a el momen o de su a- lo ación. Ambos ELISA se Ile a on a cabo simul aneamen e después de hace l as co- espondi en es diluciones con el ín de e i- a pos ibl es e a es de dilución al compa a ambos ensayos. P og ama de acunac;ón. Pa a comp oba el g ado de co el ac i ón en e los d os ensayos (E LI SA-S hope y E LI - SA-Sana ellil se u iliza on 4 g upos de co- nejos que ue on some idos a di e sos a a- mien os acunal es. Los sue os ob eni dos de los mism os ue on a lo ados med ian e l as dos écni cas an es mencionad as. G upo I: Se u il iz a on 16 conej os que ue on di idid os en 2 g upos de 8 animales cada un o. Un g upo se dejó como con ol y el o o ue ac u na do con 1 dosis acu nal (103,5DICT5o l. de i us del Fib oma de Shope a l como se desc i be en la abla 1. Todos los ani ma l es ue on ob enl dos de g a i jas en l as cuales no se había p ac ic ad o ni ng una ac unación con a la Mixoma o si s. An es del in icio de la p ueb a se comp obó la ause ncia de an icue p os sé i cos co n a es- a en e medad med ian e el ELlSA-Shope, y el ELl SA - Sana elli. Se adminis ó una d os is acunal a l os 8 conejos po ia subcu anea. A los 95 dl as es os ue on in ec ad os con 103 O I CT 5 o de i us i ul en o de Sa na elli cep a RIN-3 ( i- po I-III po ia i n apa lpeb al, co nj u n a- me n e con los 8 con ol es. Las mues as sé- i cas se oma on en l os d las eseñados en la abla 1. G upo 11: Se u i lizó un g upo de 8 cone- jos a l os que se adm inis ó 1 dos is acunal (103 DI C T501 de i us a enuado de San a e- lli. El i us ac unal se adm inis ó po d os í as di s in as a l como se desc ibe en la a- bla 2. Todos l os an i ma l es ue on inmuni zados con 1 dosis acu nal y la in ecci ón expe i- Tabla 1. P o oc olo de acunación con i us he e ólogo del Fib oma de Shape. Co n eJ05 N. o N .o mues as ¡n ec. a dia s Ob ención sue a sé lcas pos - acu- dias pos - ac unación naclón No acunado s 8 36 (*) 95 0, 6,95, 101 Y 105 V acu nad os 8 40 95 0,6,95, 101 Y 105 (*) D os cone jo 5 mu le an po les lón ca d iaca ca u sa da po la e x a cció n de sa ng e en el m omen o de la I n ecclón e xp e i- men al en el d ia 95, po lo cua no pudlm os ab ene la s 4 mues as sé l cas en los d ias 101 y 10 5 . Ta bla 3. P o o colo de a cun ac ión con i us de Sana elli a enuada in ocu/ada po la subc u a nea yen do- eno sa. ia ad ml nis a ción N.o conejos N.o mu es a s I n ec . di as Toma mu es as pos - acuno d ías pos - acuno Subcu an ea 4 27 1*1 54 3 ,10, 13,5 4, End o en osa 4 28 61 ,68y74 (*) Un canejo mu l6 deb l do a las ep e ldas ex acclones de sa ng e, po lo cual el n um e o de mu es as sé l cas ob enldas dl le e IIge amen e del o a l espe ada. 134 agos o 1986 I cunicul u a J~jÚj q an .s'aldaña ELCO-ZUERA VENTA DE G.P. -ELCO (ABUELOSI PARA LA CREACION DE NUEVAS ZONAS EN EXCLUSIVA O icinas: C a. Cas ellón, Km. 4,800. Polígono San Vale o, na e 95 Telé ono (976141 9450 - ZARAGOZA·13 LA CRIA DE LOS CONEJOS MUCHO MAS RENTABLE CON anado MANRESA -GIRONA Fab icades pe PICROSA LA MEJOR TECNICA AL SERVICIO DE LA ALlMENTACION ANIMAL MANRESA: F ancesc Mo ag a s, 22 Te l. 872 72 00 15 lineasl Télex: 51350 GIRONA: C a. 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Se adminis ó una dosis acunal del Vi· us del Fib oma de Shope a 5 conejas ges· an es. Dos gazapos de cada una de es as conejas ue on some i dos a cua o ex ac· ciones de sa ng e desde el día del na cimien· o has a l os 35 d(as de edad. A con inua· ción las mues as sé i cas se a lo a on po ELlSA·Shope y ELlSA·Sana elli. G upo IV: Valo ación de sue os de cone· ¡os no acunados con a la Mixoma osis. Se ob u ie on 140 sue os de conejos p o· ceden es de g an j as en las cua les no se ad· minis aba ninguna acuna. Todos los sue os ue on congelados a -35 0 C. has a el momen o de su a lo ación u ilizando el ELlSA·Shope y el ELlSA· Sa· na elli. Calculados los índices IR de cada sue o pa a cada una de las 2 ELlSAS's, és· os se in oduje on en un o denado . Con un p og ama es ad ís ico pa a el calculo del coe icien e de co elación en e la a iable ELlSA·Shope y la a iable ELl· SA·Sana ell i. Resul a dos G upo I: Conejos con ol y ac un ados con i us del Fib oma de Shope. G upo 11 : Conejos acunados con il us a enuado de l Mixoma de Sana e lli po ía subcu anea yendo enosa. Las g Micas 1 y 2 mues an la ciné i ca de an icue pos humo al es es ados po ELISA· Shope y E LlSA·Sana elli de los co nejos a· cunados po ía subcu anea y po ía endo· enosa. G upo III: Va lo ación de sue os de gaza· pos p oceden es de mad es acunadas con i us del F ib oma de Shope. Los esul ados quedan e lejados en la g Mica 3. G upo IV: Va lo ación de sue os de gaza· pos y conejos adul os no acunados con a la Mixoma osis. De los 140 sue os ensayados, 122 e an o almen e nega i os po las dos écnicas, 12 e an pos i i os po las d os écnicas, 4 e an posi i os po E LlSA·Sho pe y nega i· os po ELISA·Sana elli y 2 e an pos i i os po ELlSA·Sana elli y nega i os po ELl· SA·Shope. Po lo cua l la sensibilid ad del ELISA·Shope con e lación al ELlSA·Sana· Tabla 3. Coe icíen es de co elación ( ) de los sue os de conejos no acunados V acunados con i us del Fib oma de Shope, an es V después de la in ección expe imen al, alo ados po E LlSA·Shope V E LISA· Sana elli. Conejos An es In ecclón Después In ec c l6 n Ne acunades 0.957 In = 24) 0.906 In = 12) I") Vacunades 0.879 In = 24) 0.577 In = 16) C*) n = núme o de mues as ensayadas. T al:lla 4. Coe icien es de co elación de los sue os de conejos acunados con i us a enuada del Mixoma de Sana elli, u ilizando la ia subcu anea V endo enosa, compa ando ELISA-Shape V ELISA-Sana elli an es V después de la in eccíón expe imen al con i us i ulen o. . ia adminis aci6n An es In eccl6n Después In ecc l 6n Subc u anea 0.926 In = 16) 0.686 In = 111 Endo enosa 0.855 In= 171 0.569 In = 11 1 agos o 1986 I cunicul u a 135 I ndice IR (ELI SA) 240 220 200 180 160 140 1 20 100 80 40 -- 20 "'''' ...... -- -- I I INF I I I ¡ -.. I G a lca 1. Respues a hum o al en co- neJos acunados po ia subc u an ea e In ec ados con i us i ulen o. Va l o, es E Ll SA- IR (iTi 4 sue os). ) 10 1) 54 61 6 l. 74 L>Íal5 po s . _ acuneci6n ELISA-Sana elli ELISA·Shape e l I i ue del 85 po cien o y la especi icidad ue de l 96 po cien o. Discusión En es as p uebas comp obamos que e ec- i amen e los an icue pos sé i cos inducidos po el i us de l Fib oma de Shope y po el i us del Mixoma de Sana elli, pueden de- ec a se y a lo a se med ian e el ELISA- Shope y el ELlSA-Sana elli, debido a la ex is encia de an igenos comun es en ambos i us. Po ello, el sue o de cua l qu i e conejo a- cunado con una acuna que con enga i us de Shope o i us a enuado de Sana e lli po- 136 dní a lo a se acilmen e po ambas écni- cas. Hemos posido obse a que el g ado de co elación en e los dos ensayos al a lo a sue os de conejos acunados con el i us del Fib oma de Shope e a muy al o ( = 0.879) al como puede ap eci a se en la abla 3. Sin emba go, después de la in ec- ci ón expe imen al con i us i ulen o de Sana e lli se p oduce un ma cado descenso de la co elac i ón en e l os 2 ensayos ( =· 0.577) aún cua nd o con inúa siendo posi i a. Es e hecho pod ía debe se a una des ia- ción impo an e p oducida po el es ímulo an igénico de l i us i ulen o de in ecci ón agos o 1986 I cunicul u a ¡TECNICOS,INDUSTRIALES , GANADEROS ... ! Todos necesi an es a ob a pa a en ende bien /a in o mación ganade a en ing/és DICCIONARIO AVICOLA-GANADERO INGLES-ESPAÑOL POULTRY & LlVESTOCK DICTIONARY SPANISH-ENGLlSH José A. Cas elló Di ec o de la REAL ESCUELA OFICIAL Y SUPERIOR DE AVICULTURA A enys de Ma (Ba celona) i Mêl s de 3. 000 ocablos y acepciones inglesas aducidas al cas ellano I Con iene: ·· Dicciona io Inglés·Espai' ol - Oicciona io Español·lnglés -15 Tablas de Con e siones y Equi alencias -42 Siglas de O ganizaciones en A icul u a y Ganade i8 D. calle La ob a imp escindible pa a od a aquél que eciba alguna publicaci 6" ¡ ng esa en la ma e ia Pedido5 a: Li b e {a Ag opecua ia Plana del Pa a(so, 14. A enys de Ma (Ba celona) población .................................................................. .... O.P. , ........... . p o incia ............................................ , desea le sea se ido 1 ejem· pla del D ICC IONARIO AV I CO L A·GA NADERO INGLES- ES PA l OL, cuyo impo e de 850 P as. (1) en (a po .. " .............. . ............ ¡paga ;! co n a eembolso (2). a ........... de ....................... de 19 ........ . (II m;a) I) Ex imJe o, en ... 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Va lo es E Ll SA- IR Cm 4 sue os). l , 60 l , _ I ~ 40 20 I I I .. - I , -- -- '. I"F } 10 l J 54 61 68 74 DÍO i ll os - a cun. ELlSA-Sana el l! .... - - --l EL I SA-Shope au men ando l os an icue pos sé i cos co n a el i us de l Mixoma de Sana e ll i, con lo cual al a lo a po ELlSA-Sana elli l os a l o- es se aleja ian p og esi amen e de los ob e- n id os al alo a po ELlSA-Shope. Es a eacción no se p oduce en animal es no acunados, cuyos coe icien es de co el a- ción an es ( = 0.957) y des p ués de la in - ección ( = 0.906) so n muy simila es, de- b id o a que a n es de la in ecc i ón l os anima- les es aban li b es de an icue pos sé i cos y después de la misma el i us i ulen o p ac- i came n e no indujo una espues a humo al an es de la mue e de l os animal es que se p odujo en e l os 6 y l os 10 d i as pos -in ec- ción, con lo c ua l la mayo pa e de l os sue- os es a dos ue on nega i os po los 2 en- sayos. As imismo, en l os 2 g up os de conej os agos o 1986 I cunicul u a in oculados con i us acunal a enuado de . Sana elli po ia subcu anea y end o enosa ( abla 2) y que ue on in ec ados a l os 54 dias, se p odujo un hecho simila , es deci , los coe icien es de co elación ue on muy si gn i ica i os ( = 0.926 ia s.c. y = 0.855 ia e. .) desde la acunaci ón has a el mo- men o de la in ecci ón con i us i ul en o de Sana e lli; sin emba go, es os p esen a on una a iaci ón no able en l os alo es sé i cos después de la misma (g 8 icas 1 y 2) siendo l os í ulos ob eni dos al ' u ili za el ELlSA- Sana el li muy supe i o es a l os que se es a- on po E LI SA-Shope. Es e no able aumen o de l os an icue pos hu mo al es de ec a dos po ELlSA-Sana elli después de la in ección en conejos acuna - dos con un i us mixoma oso a enuado (g 8 icas 1 y 2) se debe p obablemen e a 137