Matthias Ruff

Dr. med.

Phänotypisierung und Apoptoseverhalten gewebsständiger B-Lymphozyten unter

besonderer Berücksichtigung extrafollikulärer B-Zellen

Geboren am 23. März 1963 in Pforzheim

Reifeprüfung am 12. Mai 1982 in Neuenbürg

Studiengang der Fachrichtung Medizin vom WS 1984/85 bis WS 1990/91

Physikum am 11. April 1986 an der Universität Heidelberg

Klinisches Studium in Heidelberg

sehr gutes B-Zell-Unterscheidungsantigen: Zentroblasten der basalen Zone des follikulären

Keimzentrums mit dem serologischen Phänotyp IgD- CD38+ CD77+ sind CD44-. Die Zentro-

zytenpopulation der apikalen Keimzentrumszone (IgD- CD38+ CD77-) ist CD44(+). Mantel-

zonen-B-Lymphozyten (IgD+) und extrafollikuläre B-Zellen (IgD- CD38-) exprimieren CD44

Gereinigte tonsilläre B-Lymphozyten sind durch eine Kombination magnetischer und durch-

flußzytometrischer Separationsmethoden entsprechend ihrer Oberflächenexpression von IgD,

CD44 und CD77 differenziert und nach Kurzzeit-Zellkultur mittels In-Situ-Nick-Translation

und Agarosegelelektrophoreseuntersuchungen genomischer DNA-Fragmentation auf Sensibili-

tät für Spontanapoptose in vitro analysiert worden: 70% der Zentroblasten und Zentrozyten

Keimzentrums-B-Zell-Subpopulationen sowie die extreme Apoptoseresistenz der extrafolliku-

lären B-Lymphozyten in vitro finden ihr Äquivalent im tonsillären Gewebe. Die relative hohe

Apoptoserate der naiven IgD+-B-Zellen in Kultur korreliert jedoch nicht mit der niedrigen

Apoptosenzahl der Mantelzonen-B-Lymphozyten in situ und läßt auf eine Abhängigkeit zu-

mindest einer Mantelzonensubpopulation von Apoptose verhindernden Signalen der natürli-

chen Umgebung im Lymphfollikel schließen. Die Autarkie und Langlebigkeit der extrafollikulä-

ren B-Lymphozyten in vitro und in situ spricht für die Gedächtniszellfunktion, welche dieser B-

Lymphozytenpopulation zugeschrieben wird.

Durch Gegenüberstellung der verschiedenen Erscheinungsformen in peripheren lymphatischen

Organen sind drei Arten von extrafollikulären B-Lymphozyten mit jeweils unterschiedlichem

Adhäsionsrezeptorprofil differenzierbar: eine kleine (lymphoide), eine mittelgroße (zentro-

zytoide) und eine große (monozytoide) Variante. Die lymphoide extrafollikuläre B-Zelle ist

CD11c- und stark CD62L-positiv. Zentrozytoide extrafollikuläre Zellen sind CD11c- und ex-

weist auf eine Stimulation der monozytoiden B-Zelle hin. Daher ist die Hypothese einer akti-

an Venolenendothel bindenden Moleküls CD62L und parallel der Induktion eines alternativen

bol-12-Myristat-13-Azetat (PMA) und zu einem geringeren Ausmaß Aktivierung mit Staphy-

lococcus aureus Cowan I (SAC) und Interleukin-4 überführt sowohl B-Lymphozyten hoher

physikalischer Dichte (Mantelzonenzellen und lymphoide extrafollikuläre B-Lymphozyten) als

auch B-Zellen niedriger Dichte (Zentroblasten und Zentrozyten des Keimzentrums) in das Dif-

ferenzierungsstadium der großen, monozytoiden extrafollikulären B-Zelle. Extrafollikuläre B-

Lymphozyten sind also zytokininduzierter Veränderung in der Morphologie sowie im Adhä-

sionsrezeptorprofil unterworfen. Da PMA ein künstlicher Zellaktivator ist, bleibt die physio-

logische Signalfolge, welche den Phänotyp der großen, monozytoiden extrafollikulären B-Zelle

herbeiführt, unbekannt.

CD95 (APO-1) ist ein Oberflächenrezeptor, der nach Ligation Apoptose vermitteln kann. Die

bereits in vivo durch Aktivierung des CD95-Rezeptors. Die CD95-Expression tonsillärer B-

Lymphozyten wird in vitro durch die Zytokine TNF-α und IFN-γ sowie durch SAC in Kombi-

nation mit Interleukin-2 gesteigert. Im Keimzentrum des Lymphfollikels könnten daher Anti-

genkontakt und Zytokineinfluß die CD95-Expression der Keimzentrums-B-Lymphozyten er-

höhen und die Bindung des CD95-Liganden, exprimiert durch CD4+ T-Zellen, am CD95-Re-

zeptor die Selektion der für Antigen niedrigaffingen B-Lymphozyten durch Apoptose auslösen.

Das CD27-Antigen wird im follikulären Keimzentrum nur durch Zentrozyten exprimiert. Auf-

fallend ist die reziproke Verteilung von CD27 und CD77 im Keimzentrum. CD27 ist daher ne-

ben CD77 ein sehr gutes Unterscheidungsantigen zwischen Zentroblasten (CD77+ CD27-) und

Zentrozyten (CD77- CD27+). Eine Involvierung des Rezeptors bei der B-Zell-Apoptose ist

wegen der fehlenden Expression der Zentroblasten unwahrscheinlich. CD27 könnte aber ko-

stimulierende Signale für CD27+ Zentrozyten vermitteln und dadurch an der B-Zell-Differen-

zierung im Keimzentrum teilhaben. Die in der Literatur beschriebenen Veränderungen der

CD27-Oberfächenexpression auf B-CLL-Zellen durch Zytokine sind in dieser Arbeit auf

führt in vitro zu einer Modulation der CD27-Oberflächendichte, von den eingesetzten