Wirkung rekombinantes und urinisches Follikelstimuler Hormon (FSH) auf Hormonsekretion und Ultrastructure menschlicher Granulosa-Lutealzellen sowie synergistische Auswirkungen von Wachstumsfaktoren auf den Signalübertragungsmechanismus.
Suat Parta
Dr. Sc. Hum. Wirkung rekombinantes und urinisches Follikelstimuler Hormon (FSH) auf Hormonsekretion und Ultrastructure menschlicher Granulosa-Lutealzellen sowie synergistische Auswirkungen von Wachstumsfaktoren auf den Signalübertragungsmechanismus. Geboren am 12.12.1961 in Gelibolu (Türkei) Reifeprüfung am 19.05.1982 in Schwetzingen Studiengang der Fachrichtunh Biologie / Diplom vom WS 1983 bis WS 1990 Vordiplom am 13.02.1986 Diplom am 02.04.1990 Promotionsfach: Gynäkologie Doktorvater: Prof. Dr. med. Dr. med. h.c. T. Rabe In der vorliegenden Arbeit wurde ein Zellkultursystem für humane präovulatorische Granulosa-Lutealzellen (hGLC) eingeführt, die bei Follikelpunktionen gewonnen wurden. In diesem Zellmodell, das kurz- und langfristigen Kulturen zugeschnitten ist, wurden sowohl die Auswirkungen von FSH im Urin, also einem FSH-Präparat mit geringer Rest-LH-Aktivität, als auch die Wirkung von reinem rekombinanten FSH auf humane Granulosa-Lutealzellen auf verschiedenen Ebenen untersucht. Als Funktionsparameter dieser Zellen wurden Progesteron und Östradiolsekretion bestimmt. Nach Ermittlung von Grunddaten wie Dosierabhängigkeit, Zelldichte und Zeitkinetik wurde der Einfluss des EGF-Wachstumsfaktors auf die Proliferation von menschlichen Granulosa-Lutealzellen untersucht.
Die von der Follikelphase bekannte kogonadotropische Wirkung von IGF-I
Auf die FSH-Stimulation sollte im Modell der menschlichen Granulosa-Lutealzellen
Die synergetische Wirkung wird auch in der frühen Lutealphase untersucht.
Mit elektronenmikroskopischen Untersuchungen wurde die Wirkung
von HCG, rekombinantem, urinischem FSH und Forskolin, einem unspezifischen
Ein Aktivator der Adenylat-Zyklase, auf die Ultrastruktur der menschlichen Granulose.
Lutealzellen untersucht. HGLC reagierte in diesem Zellkultursystem sowohl auf rekombinantes als auch auf urinisches FSH mit einer Dosisabhängigen Erhöhung der Progesteronsekretion. Zusammen mit In vitro-Proliferationsdaten konnte die luteotrope Wirkung beider FSH-Präparate in vitro demonstriert werden. FSH war jedoch weniger luteotrop aktiv als das Referenzmolekül HCG. Im direkten Vergleich zwischen den beiden Präparaten konnte kein signifikanter Unterschied in der progesterone Sekretion, die durch beide Präparate induziert wurde, festgestellt werden.
Humane Granulosa-Lutealzellen prolifizieren in der langfristigen Kultur, wobei die
Progesteronsekretion nimmt zeitlich deutlich ab.
Progesteronsekretion bei Zusatz von rekombinantem und urinischem FSH
Nach 16 bis 18 Tagen konnten die menschlichen Granulosa-Lutealzellen mit FSH und nach 20 bis 35 Tagen mit HCG nicht mehr stimuliert werden. Mit Forskolin konnten die Zellen jedoch nach > 40 Kulturtagen noch stimuliert werden.
Der EGF stimuliert sowohl das Wachstum als auch die Progesteronsekretion von
Granulosa-Lutealzellen, die im Laufe der Zeit verkleinert und abgerundet werden
der humanen Granulosa-Lutealzellen. Durch die Kostimulation von humanen Granulosa-Lutealzellen mit FSH und IGF-I konnte Progesteron- und Östradiol-Sekretion, im Gegensatz zu HCG-Stimulation, auch in der späten Lutealphase erhöht werden. Durch die synergistische Wirkung von IGF-I waren die menschlichen Granulosa-Lutealzellen in der Lage, nahezu die gleiche Progesteronmenge wie bei der HCG-Stimulation zu trennen. Vor allem bei den niedrigeren Dosen von 0,1 IE/mL zeigte das urine FSH eine geringfügig stärkere Stimulation als das rekombinante FSH.
Die Ultrastructure von HCG, rekombinantem und urinischem FSH und Forskolin
Stimulierte menschliche Granulosa-Lutealzellen zeigten im Vergleich zu
Kontrollzellen wie folgt: Ausdruck der sekretarischen Tätigkeit
Es gibt eine starke Vermehrung der Lipidtropfen.
Ein einzelnes Zellorgan, sowohl eine enge Assoziation zwischen Lipidtropfen und
Mitochondrien, aber auch zwischen endoplasmatischem Reticulum und Mitochondrien
Die beiden FSH-Präparate stimulierten
Lutealzellen zeigten starke Veränderungen im Kernbereich.
Die Kernmembran und die partielle Marginalisierung von Heterochromatin.
Diese Wirkung wurde auch bei der Stimulation mit HCG verringert. Die Wirkung von FSH auf die Ultrastructure von menschlichen Granulosa-Lutealzellen konnte in dieser Arbeit demonstriert werden. Der elektronenmikroskopische Vergleich der FSH-Stimulation mit der Forskolin-Stimulation weist auf eine Beteiligung alternativer Signaltransduktionsmechanismen neben der Adenylatzyklusaktivierung durch FSH hin.
Schlußfolgerung:
FSH ist ein Luteotropin: Es stimuliert die menschliche Progesteronsekretion
Granulosa-Lutealzellen sind somit an der Corpus-Luteum-Funktion beteiligt, und
schließlich zur Entstehung einer Schwangerschaft beiträgt. FSH wird in seiner luteotropen Wirkung von Wachstumsfaktoren unterstützt. Die stimulierende Wirkung von EGF auf Proliferation, Progesteronsekretion und die veränderte Morphologie der menschlichen Granulosa-Lutealzellen nach EGF-Stimulation zeigen eine physiologische Bedeutung von EGF bei der Corpus-Luteum-Funktion. Die luteotrope Wirkung von FSH wird zusätzlich synergistisch durch den kogonadotropen Wachstumsfaktor IGF-I verstärkt.
Die Wirkung von FSH auf die Ultrastructure von Human Granulosa-Lutealzellen wurde untersucht.
Die Vergleiche mit einer Forskolin-Stimulation
Neben der Haupt-Adenylat-Zyklase-Aktivierung gibt es Hinweise
Die Kommission hat die Kommission mit dem Vorschlag für eine Verordnung (EWG) des Rates (EWG) Nr. 1408/71 beschlossen, die für die Anwendung der Verordnung (EWG) Nr. 1408/71 eingesetzten
Ultrastrukturbild der menschlichen Granulosa-Lutealzellen kombiniert
Es ist jedoch nicht möglich, dass die Stimulation von
Schließen Sie die Steroidensynthese und -sekretion durch HCG, FSH und Forskolin ab. Rekombinante und urinale FSH unterscheiden sich nicht in ihrer Wirkung auf Progesteron- und Östradiolsekretion sowie auf die Ultrastructure von Human Granulosa-Lutealzellen. Trotz unterschiedlicher Glykolisierung der beiden FSH-Moleküle und eines Rest-LH-Teils im urinären FSH konnten keine signifikanten Unterschiede in der biologischen Wirkung auf humane Granulosa-Lutealzellen aufgezeigt werden.