Inaktivierung von Tumor-Suppressoren bei der Entstehung von Escherkrebs: Neue Mechanismen, Genorte und klinische Anwendungsmöglichkeiten
Marie-Charlotte von Brevern
Dr. Sc. Hum. Inaktivierung von Tumor-Suppressorgenen bei der Entstehung von Verdauungskrebs: Neue Mechanismen, Genorte und klinische Anwendungsmöglichkeiten Geboren am 24.04.1969 in Speyer Reifeprüfung am 21.06.1988 Studiengang der Fachrichtung Biologie (Diplom) von WS 1988/89 bis WS 1994/95 Vordiplom am 15.03.1991 an der Universität Würzburg Diplom am 31.01.1995 an der Universität Würzburg Promotionsfach: Deutsches Krebsforschungszentrum (FZDK) Doktorvater: Prof. Dr. rer. nat. H. Bartsch Zusammenfassung: Die Inaktivierung von Tumor-Suppressoren wurde als wichtiger Schritt bei der Entstehung von Krebszellen angesehen. Die Aufklärung der daran beteiligten Prozesse und die Identifizierung der betroffenen Tumor-Suppressoren sind daher eine Voraussetzung für die Entwicklung von Krebspräventionsstrategien und gezielten Therapien.
Eines der am häufigsten mutierten Gene in menschlichen Tumoren ist die P53.
Seine Funktion als "Guardian of the Genome" hat es in den
Das Ziel ist es, die klinische und grundlegende Forschung zu konzentrieren.
Aspekt zur Klärung der Rolle von p53 als diagnostischer und prognostischer Marker
ist. Der vorliegende Doktorat untersuchte in zwei Hochrisikoregionen in Frankreich und China die Serumantikörper gegen mutierte P53, und untersuchte, inwieweit sie für die Früherkennung von Essenskrebs geeignet sind. Immunhistochemische, mutative und serologische Analysen des P53-Status der Tumoren der Patienten wurden mit der Anti-P53-Immunreaktion verglichen. In 25% der Patienten konnten anti-p53 Autoantibodies nachgewiesen und eine signifikante Korrelation zwischen anti-p53 Seropositivität und tumorspezifischen p53 Genmutationen (P < 0,01) festgestellt werden. Mutationen, die zu einer strukturellen Veränderung von p53 führen, und weniger die Anreicherung des p53-Proteins selbst scheinen für die Produktion von p53-Antikörpern bei Patienten mit Gastrointestinal-Krebs verantwortlich zu sein. Insgesamt scheinen Wirtsfaktoren bei der Auslösung einer antip53-Immunreaktion zu überwiegen.
P53 Mutationsanalysen in Tumoren von Patienten aus Guangzhou wurden im Rahmen der
eine Epidemiologische Pilotstudie ausgewertet, in der Mutationsfrequenz und
Es wurden Muster mit Expositionsdaten verglichen. Neben bekannten Risikofaktoren
Bei Esophagealkrebs wie Zigarettenkonsum zeigte sich eine relativ hohe Mutationsfrequenz.
Bei Nichtraucherinnen und Nichtraucher wird darauf hingewiesen, dass auch ernährungsbedingte Karzinogene
Risikofaktoren für Gastrointestinalkrebs in der chinesischen Provinz Guangzhou
Eine Hotspot-Mutation, die früher bei Patienten aus Guangzhou beschrieben wurde
im Kodon 176 konnte in dieser Arbeit nicht bestätigt werden. Um herauszufinden, ob neben p53 auch andere Tumor-Suppressor-Ergegen zur Auslösung von sporadischem Verdauungskrebs beitragen, wurde in Teil 2 das Tylose-Ösophageal-Krebs-Gen (TOCG) untersucht. Dieses Gen führt bei Trägern der seltenen Erbkrankheit Tylose zur Entwicklung von Verdauungskrebs.
Der häufig beobachtete Allelabbau in der Chromosomalregion des TOC-Gens
fast 70% der untersuchten sporadischen Escharkarzinome (N=35) verstärkt
Der Verdacht, dass dieses Gen auch bei der Auslösung von nichtfamiliären
Es gibt eine Rolle für Verdauungskrebs. Im dritten Teil dieser Arbeit wurde untersucht, ob die Retrotransposition normaler zellulärer Sequenzen in menschlichen Zellen zu einem messbaren Ausmaß stattfindet. Damit sollte die Hypothese getestet werden, ob dieser Prozess in Form von Insertionsmutagenese für die Karzinogenese von Bedeutung sein könnte. Verschiedene in vitro Reporter-Systeme wurden durch die stabile Transfektion von menschlichen Zelllinien mit Reporterplasmiden eingeführt, die zum einen die Retrotranspositionsfrequenz normaler zellulärer Sequenzen und zum anderen die Aktivierbarkeit des Promotors eines aktiven LINE-1 Retrotransposons untersuchten. Erste Ergebnisse der in vitro Retrotransposition-Reporter-Systeme bestätigten, dass solche Ereignisse tatsächlich in HeLa-Zellen stattfinden und, wie erstmals nachgewiesen, auch in MCF-7-Zellen. Die Häufigkeit, mit der solche Ereignisse stattfanden, war bei den einzelnen Zellklonen deutlich unterschiedlich, obwohl in allen eine stabile Ausdrucksweise des Retrotransposition-Reporter-Kassettes nachgewiesen werden konnte. Die Behandlung eines HeLa-Zellklons (HJ #4-5) mit demethylizendem Agens Azacytidin oder durch längere stationäre Wachstumsbedingungen führte zu keinem maßgeblichen Anstieg der
Zur Ausdrucksweise des stabil integrierten
Reporterkonstrukte oder aus endogenen LINE-Elementen, die vermutlich die
In den behandelten Zellen, die sich auf die Retrotransposition auswirken, wurde
Er entwickelte eine Multiplex-RT-PCR, die erste Anzeichen für eine
Erhöhung der Reporterkasset-mRNA nach Azacytidin-Behandlung und nach längerem
Mit dem zweiten etablierten Reporter-System für
Die Aktivität des menschlichen LINE-1.2-Promotors in HeLa-Zellen wurde zu einer
Eine schnelle und einfache, zusätzliche Methode entwickelt, mit der die
LINE-Promotor-aktivierende Faktoren können dann in den etablierten Retrotranspositions-Reportersystemen auf ihre Bedeutung für die Retrotranspositionsfrequenz normaler zellulärer Gene untersucht werden.